Uso de éguas receptoras acíclicas em programas de transferência de embrião / Anovulatory recipient mares in embryo transfer programs

O maior entrave para o êxito de um programa de transferência de embrião (TE) está relacionado às receptoras, tanto a qualidade de características reprodutivas, quanto a sincronização entre doadoras e receptoras. Éguas doadoras, geralmente, apresentam melhor escore corporal e disponibilidade alimentar nos períodos de seca, fazendo com que iniciem o seu ciclo estral precocemente enquanto éguas receptoras se encontram ainda em anestro ou período transicional, o que dificulta a TE. Vários estudos foram realizados com o objetivo de utilizar receptoras acíclicas como receptoras de embrião. Assim, podem ser utilizadas nos programas de TE quando submetidas a protocolos hormonais que mimetizam o ciclo estral natural. Uma diversidade de protocolos é encontrada na literatura, usando diferentes doses, posologias e intervalos do uso de estradiol associado a progestágenos. Portanto, objetivou-se analisar resultados de pesquisas com protocolos hormonais que poderiam ajudar a solucionar a escassez de receptoras cíclicas e maximizar os resultados da biotécnica de transferência de embriões.(AU)

There are obstacles to the success of equine embryo transfer programs, concomitantly there has been an increase in the popularity of the technique. One of the most urgent issues to overcome is related to the recipient mare availability and the donor-recipient synchrony. Usually, the donor mares have a higher body condition score and are fed a higher quality diet than recipient mares during the non-breeding season. Therefore, the donor mares start cycling earlier than recipient mares, which makes embryo transfer challenging. Several studies have been carried on finding hormonal protocols that mimic the natural oestrous cycle to allow the use of noncycling recipient mares for embryo transfer programs. Many protocols can be found in the literature, using different doses and intervals. Among the main difference is the use of progestogens, which can be used alone or in combination with oestradiol. The aim of this review was to analyse results that could help solve the lack of recipient mares and improve the results of the embryo transfer technique.(AU)

Efeito de protocolo hormonal e programa de luz artificial na gestação de éguas receptoras de embrião durante o período de transição de primavera / Effect of hormonal protocol and artificial light program on the pregnancy of embryo recipient mares during spring transition period

O objetivo do estudo foi comparar o efeito das técnicas hormonais e de luz artificial nas éguas receptoras de embrião acíclicas avaliando as taxas de gestação aos 14 e 28 dias durante a fase de transição de primavera. Os 48 animais foram distribuídos aleatoriamente nos grupos: controle (CONT, n=16), éguas cíclicas na fase ovulatória; luz artificial (LUZ, n=16), éguas acíclicas submetidas ao tratamento de luz artificial; e hormônio (HORM, n= 16), éguas acíclicas submetidas ao protocolo hormonal na fase de transição. As éguas do grupo LUZ foram estimuladas por 60 dias com luz artificial durante cinco horas por dia. Nos grupos CONT e LUZ, quando observada a presença de folículo 35 mm de diâmetro e edema uterino grau II, foram administrados 1,5 mg de acetato de deslorelina e 1500 UI de hCG para induzir a ovulação. As éguas do grupo HORM foram tratadas com três doses de 1,5 mg de benzoato de estradiol e seguiram os mesmos protocolos dos Grupos CONT e LUZ. Foi avaliada a taxa de gestação por ultrassonografia aos 14 dias e confirmação aos 28 em todos os grupos experimentais. Foi realizada análise descritiva e teste Qui-quadrado (significância de 5%). Taxas de gestação aos 14 e 28 dias foram semelhantes (p>0,05) entre todos os grupos. Os tratamentos HORM e LUZ durante o período de transição inverno-primavera mostraram-se eficazes para atender ao programa de transferência de embr

The aim of this study was to compare the effect of hormonal and artificial light techniques on acyclic embryo recipient mares by assessing pregnancy rates at 14 and 28 days during the spring transition period. The 48 animals were randomly assigned to the groups: control (CONT, n = 16), cyclic mares in the ovulatory phase; artificial light (LIGHT, n = 16), acyclic mares subjected to artificial light treatment; and hormone (HORM, n = 16), acyclic mares submitted to hormonal protocol in transition phase. In the LIGHT group, mares were stimulated with artificial light for five hours a day, for 60 days. In CONT and LIGHT groups, when a follicle ≥ 35 mm in diameter and uterine edema ≥ grade II were observed, 1.5 mg of deslorelin acetate and 1500 IU hCG were administered to induce ovulation. In the HORM group, mares were treated with three doses of 1.5 mg of estradiol benzoate and followed the same protocols as the CONT and LIGHT groups. Pregnancy rate was assessed by ultrasound at 14 days and confirmation at 28 days in all experimental groups. Descriptive analysis and chi-square test (5% significance) were performed. Pregnancy rates at 14 and 28 days were similar (p> 0.05) among all groups. The HORM and LIGHT treatments during the winter-spring transition period proved to be effective during the embryo transfer programs. As it is a more natural method, the LIGHT protocol has the potential to be one more biotechnological tool in equine reproduction.(AU)

Efeito de protocolo hormonal e programa de luz artificial na gestação de éguas receptoras de embrião durante o período de transição de primavera / Effect of hormonal protocol and artificial light program on the pregnancy of embryo recipient mares during spring transition period

O objetivo do estudo foi comparar o efeito das técnicas hormonais e de luz artificial nas éguas receptoras de embrião acíclicas avaliando as taxas de gestação aos 14 e 28 dias durante a fase de transição de primavera. Os 48 animais foram distribuídos aleatoriamente nos grupos: controle (CONT, n=16), éguas cíclicas na fase ovulatória; luz artificial (LUZ, n=16), éguas acíclicas submetidas ao tratamento de luz artificial; e hormônio (HORM, n= 16), éguas acíclicas submetidas ao protocolo hormonal na fase de transição. As éguas do grupo LUZ foram estimuladas por 60 dias com luz artificial durante cinco horas por dia. Nos grupos CONT e LUZ, quando observada a presença de folículo 35 mm de diâmetro e edema uterino grau II, foram administrados 1,5 mg de acetato de deslorelina e 1500 UI de hCG para induzir a ovulação. As éguas do grupo HORM foram tratadas com três doses de 1,5 mg de benzoato de estradiol e seguiram os mesmos protocolos dos Grupos CONT e LUZ. Foi avaliada a taxa de gestação por ultrassonografia aos 14 dias e confirmação aos 28 em todos os grupos experimentais. Foi realizada análise descritiva e teste Qui-quadrado (significância de 5%). Taxas de gestação aos 14 e 28 dias foram semelhantes (p>0,05) entre todos os grupos. Os tratamentos HORM e LUZ durante o período de transição inverno-primavera mostraram-se eficazes para atender ao programa de transferência de embr

The aim of this study was to compare the effect of hormonal and artificial light techniques on acyclic embryo recipient mares by assessing pregnancy rates at 14 and 28 days during the spring transition period. The 48 animals were randomly assigned to the groups: control (CONT, n = 16), cyclic mares in the ovulatory phase; artificial light (LIGHT, n = 16), acyclic mares subjected to artificial light treatment; and hormone (HORM, n = 16), acyclic mares submitted to hormonal protocol in transition phase. In the LIGHT group, mares were stimulated with artificial light for five hours a day, for 60 days. In CONT and LIGHT groups, when a follicle ≥ 35 mm in diameter and uterine edema ≥ grade II were observed, 1.5 mg of deslorelin acetate and 1500 IU hCG were administered to induce ovulation. In the HORM group, mares were treated with three doses of 1.5 mg of estradiol benzoate and followed the same protocols as the CONT and LIGHT groups. Pregnancy rate was assessed by ultrasound at 14 days and confirmation at 28 days in all experimental groups. Descriptive analysis and chi-square test (5% significance) were performed. Pregnancy rates at 14 and 28 days were similar (p> 0.05) among all groups. The HORM and LIGHT treatments during the winter-spring transition period proved to be effective during the embryo transfer programs. As it is a more natural method, the LIGHT protocol has the potential to be one more biotechnological tool in equine reproduction.

Efeito de protocolo hormonal e programa de luz artificial na gestação de éguas receptoras de embrião durante o período de transição de primavera / Effect of hormonal protocol and artificial light program on the pregnancy of embryo recipient mares during spring transition period

O objetivo do estudo foi comparar o efeito das técnicas hormonais e de luz artificial nas éguas receptoras de embrião acíclicas avaliando as taxas de gestação aos 14 e 28 dias durante a fase de transição de primavera. Os 48 animais foram distribuídos aleatoriamente nos grupos: controle (CONT, n=16), éguas cíclicas na fase ovulatória; luz artificial (LUZ, n=16), éguas acíclicas submetidas ao tratamento de luz artificial; e hormônio (HORM, n= 16), éguas acíclicas submetidas ao protocolo hormonal na fase de transição. As éguas do grupo LUZ foram estimuladas por 60 dias com luz artificial durante cinco horas por dia. Nos grupos CONT e LUZ, quando observada a presença de folículo ≥ 35 mm de diâmetro e edema uterino ≥ grau II, foram administrados 1,5 mg de acetato de deslorelina e 1500 UI de hCG para induzir a ovulação. As éguas do grupo HORM foram tratadas com três doses de 1,5 mg de benzoato de estradiol e seguiram os mesmos protocolos dos Grupos CONT e LUZ. Foi avaliada a taxa de gestação por ultrassonografia aos 14 dias e confirmação aos 28 em todos os grupos experimentais. Foi realizada análise descritiva e teste Qui-quadrado (significância de 5%). Taxas de gestação aos 14 e 28 dias foram semelhantes (p>0,05) entre todos os grupos. Os tratamentos HORM e LUZ durante o período de transição inverno-primavera mostraram-se eficazes para atender ao programa de transferência de embrião. Por ser um método mais natural, o protocolo LUZ tem potencial como mais uma ferramenta biotecnológica na reprodução de equinos.

The aim of this study was to compare the effect of hormonal and artificial light techniques on acyclic embryo recipient mares by assessing pregnancy rates at 14 and 28 days during the spring transition period. The 48 animals were randomly assigned to the groups: control (CONT, n = 16), cyclic mares in the ovulatory phase; artificial light (LIGHT, n = 16), acyclic mares subjected to artificial light treatment; and hormone (HORM, n = 16), acyclic mares submitted to hormonal protocol in transition phase. In the LIGHT group, mares were stimulated with artificial light for five hours a day, for 60 days. In CONT and LIGHT groups, when a follicle ≥ 35 mm in diameter and uterine edema ≥ grade II were observed, 1.5 mg of deslorelin acetate and 1500 IU hCG were administered to induce ovulation. In the HORM group, mares were treated with three doses of 1.5 mg of estradiol benzoate and followed the same protocols as the CONT and LIGHT groups. Pregnancy rate was assessed by ultrasound at 14 days and confirmation at 28 days in all experimental groups. Descriptive analysis and chi-square test (5% significance) were performed. Pregnancy rates at 14 and 28 days were similar (p> 0.05) among all groups. The HORM and LIGHT treatments during the winter-spring transition period proved to be effective during the embryo transfer programs. As it is a more natural method, the LIGHT protocol has the potential to be one more biotechnological tool in equine reproduction.

Atividade reprodutiva em éguas quarto de milha durante o período de transição de primavera na região da Zona da Mata, Rondônia / Evaluation of the ciclicity of mares in the regions of Mata Zone, Rondonia State

O objetivo do presente estudo foi avaliar a ocorrência da ciclicidade, o diâmetro do folículo dominante e do grau de edema uterino de éguas criadas na zona da mata do Estado de Rondônia, durante o período de transição da estacionalidade reprodutiva. Para este propósito, durante os meses de agosto e setembro (transição de primavera), éguas da raça Quarto de Milha (n = 46), hígidas, criadas a campo ou estabuladas, com idades variando de 2 a 12 anos foram submetidas a dois exames ginecológicos com intervalo de 14 dias, a fim de se determinar e/ou monitorar a presença de corpo lúteo, o diâmetro do folículo dominante e o grau de edema uterino. Empregando um modelo de regressão logística, o efeito do sistema de criação (a campo ou estabuladas) e da faixa etária ( 5, de 6 a 9 e 10 anos) foram avaliados sobre a ocorrência da ciclicidade, bem como sobre o diâmetro do folículo dominante e o grau de edema uterino por meio do modelo linear generalizado misto. Uma maior proporção de éguas (p = 0,001) foi considerada acíclica em relação às cíclicas [68,9% (31/45) vs. 31,1% (14/45), respectivamente]. Dentre as éguas acíclicas, houve uma semelhança (p = 0,127) na proporção daquelas com folículo dominante ou com folículos pequenos. O sistema de criação não influenciou (p > 0,05) a ocorrência da ciclicidade, o diâmetro do folículo dominante e o grau de edema uterino. A faixa etária (≤ 5, de 6 a 9 e ≥ 10 anos) determinou influencia (p < 0,05) na ocorrência da ciclicidade [28,6 b; 18,2b e 66,7% a; respectivamente] e no grau de edema uterino (1,0 ± 0,1 b; 2,0 ± 0,1 a e 2,0 ± 0,2 a; respectivamente). Conclui-se que a maioria das éguas criadas na região da zona da mata rondoniense apresentam-se acíclicas no período de transição de primavera. No entanto, a ocorrência da ciclicidade e o grau de edema uterino demonstraram ser influenciados pela faixa etária das éguas avaliadas.(AU)

The objective of this study was to evaluate the occurrence of cyclicity, the diameter of the dominant follicle and the degree of uterine edema in mares from forest area of the Rondonia State, during the transitional period of reproductive season. For this purpose, during the months of August and September (spring transition), healthy mares, Quarter Horse breed (N = 46), field or housed and aged 2 to 12 years were submitted to two examinations gynecological examination with a 14-day interval. The exams were performed to determine and / or monitor the presence of corpus luteum, the diameter of the dominant follicle and the degree of uterine edema. Using a logistic regression model, the effect of the breeding system (field or stabled) and age group (≤ 5, from 6 to 9 and ≥ 10 years) were evaluated on the occurrence of cyclicity as well as on the diameter of the dominant follicle and the degree of uterine edema by generalized linear mixed model. A higher proportion of mares (P = 0.001) was considered acyclical in relation to the cyclical (68.9% (31/45) vs. 31.1% (14/45), respectively]. Among the acyclic mares, there was a similarity (P = 0.127) in proportion to those with dominant follicle or with small follicles. The breeding system did not influence (P > 0.05) the occurrence of cyclicity, the diameter of the dominant follicle and the degree of uterine edema. The age group (≤ 5, from 6 to 9 and ≥ 10 years) determined influence (P < 0.05) on the occurrence of cyclicity (28.6 b; 18.2 b and 66.7% a; respectively) and in the degree of uterine edema (1.0 ± 0.1 b, 2.0 ± 0.1 a and 2.0 ± 0.2 a, respectively). It is concluded that the majority of the mares created in the forest zone of Rondônia region are acyclical in the period of transition of spring. However, the occurrence of cyclicity and the degree of uterine edema were influenced by the age range of the mares evaluated.(AU)

Atividade reprodutiva em éguas quarto de milha durante o período de transição de primavera na região da Zona da Mata, Rondônia / Evaluation of the ciclicity of mares in the regions of Mata Zone, Rondonia State

O objetivo do presente estudo foi avaliar a ocorrência da ciclicidade, o diâmetro do folículo dominante e do grau de edema uterino de éguas criadas na zona da mata do Estado de Rondônia, durante o período de transição da estacionalidade reprodutiva. Para este propósito, durante os meses de agosto e setembro (transição de primavera), éguas da raça Quarto de Milha (n = 46), hígidas, criadas a campo ou estabuladas, com idades variando de 2 a 12 anos foram submetidas a dois exames ginecológicos com intervalo de 14 dias, a fim de se determinar e/ou monitorar a presença de corpo lúteo, o diâmetro do folículo dominante e o grau de edema uterino. Empregando um modelo de regressão logística, o efeito do sistema de criação (a campo ou estabuladas) e da faixa etária ( 5, de 6 a 9 e 10 anos) foram avaliados sobre a ocorrência da ciclicidade, bem como sobre o diâmetro do folículo dominante e o grau de edema uterino por meio do modelo linear generalizado misto. Uma maior proporção de éguas (p = 0,001) foi considerada acíclica em relação às cíclicas [68,9% (31/45) vs. 31,1% (14/45), respectivamente]. Dentre as éguas acíclicas, houve uma semelhança (p = 0,127) na proporção daquelas com folículo dominante ou com folículos pequenos. O sistema de criação não influenciou (p > 0,05) a ocorrência da ciclicidade, o diâmetro do folículo dominante e o grau de edema uterino. A faixa etária (≤ 5, de 6 a 9 e ≥ 10 anos) determinou influencia (p < 0,05) na ocorrência da ciclicidade [28,6 b; 18,2b e 66,7% a; respectivamente] e no grau de edema uterino (1,0 ± 0,1 b; 2,0 ± 0,1 a e 2,0 ± 0,2 a; respectivamente). Conclui-se que a maioria das éguas criadas na região da zona da mata rondoniense apresentam-se acíclicas no período de transição de primavera. No entanto, a ocorrência da ciclicidade e o grau de edema uterino demonstraram ser influenciados pela faixa etária das éguas avaliadas.

The objective of this study was to evaluate the occurrence of cyclicity, the diameter of the dominant follicle and the degree of uterine edema in mares from forest area of the Rondonia State, during the transitional period of reproductive season. For this purpose, during the months of August and September (spring transition), healthy mares, Quarter Horse breed (N = 46), field or housed and aged 2 to 12 years were submitted to two examinations gynecological examination with a 14-day interval. The exams were performed to determine and / or monitor the presence of corpus luteum, the diameter of the dominant follicle and the degree of uterine edema. Using a logistic regression model, the effect of the breeding system (field or stabled) and age group (≤ 5, from 6 to 9 and ≥ 10 years) were evaluated on the occurrence of cyclicity as well as on the diameter of the dominant follicle and the degree of uterine edema by generalized linear mixed model. A higher proportion of mares (P = 0.001) was considered acyclical in relation to the cyclical (68.9% (31/45) vs. 31.1% (14/45), respectively]. Among the acyclic mares, there was a similarity (P = 0.127) in proportion to those with dominant follicle or with small follicles. The breeding system did not influence (P > 0.05) the occurrence of cyclicity, the diameter of the dominant follicle and the degree of uterine edema. The age group (≤ 5, from 6 to 9 and ≥ 10 years) determined influence (P < 0.05) on the occurrence of cyclicity (28.6 b; 18.2 b and 66.7% a; respectively) and in the degree of uterine edema (1.0 ± 0.1 b, 2.0 ± 0.1 a and 2.0 ± 0.2 a, respectively). It is concluded that the majority of the mares created in the forest zone of Rondônia region are acyclical in the period of transition of spring. However, the occurrence of cyclicity and the degree of uterine edema were influenced by the age range of the mares evaluated.

INFLUÊNCIA DO TRATAMENTO COM ESTRÓGENO PREVIAMENTE A PROGESTERONA SOBRE A SOBREVIVÊNCIA E DESENVOLVIMENTO EMBRIONÁRIO EM ÉGUAS RECEPTORAS ACÍCLICAS

A disseminação da transferência de embriões (TE) em equinos nos últimos anos fez aumentar a procura por receptoras, tanto de éguas cíclicas, quanto acíclicas em anestro ou transição. Os primeiros protocolos utilizados em éguas acíclicas, para mimetizar as condições uterinas de éguas cíclicas em diestro, baseavam-se apenas no uso de progesterona (P4); porém estudos posteriores apontaram que a aplicação prévia de estrógeno poderia promover melhoras nas taxas de crescimento e sobrevivência embrionários. No entanto, ainda é incerta a influência de uma maior exposição ao estradiol, previamente a P4, na recuperação e desenvolvimento embrionários em receptoras. Sendo assim, o principal objetivo deste estudo foi determinar o efeito de três protocolos hormonais em éguas acíclicas sobre as taxas de sobrevivência e desenvolvimento embrionários após a TE. Para tal, o grupo estro longo (EL) recebeu 8 mg totais de benzoato de estradiol (BE), em doses crescentes, permanecendo 7 dias exposto ao estrógeno antes da aplicação da P4 de longa ação (P4 LA); o grupo estro curto (EC) recebeu dose única de 2,5 mg de BE dois dias antes da administração de P4 LA; e o grupo sem estro (SE) recebeu apenas 1500 mg de P4 LA. Foi realizada coleta de embriões das doadoras oito dias após a ovulação, os quais foram avaliados e transferidos para as receptoras dos grupos EL, EC e SE no dia 4 após aplicação da P4 LA. Dois dias após a TE, lavados uterinos foram realizados nas receptoras e avaliaram-se as taxas de recuperação, qualidade e taxa de crescimento embrionários. Foi observado que o grupo EL apresentou melhores taxas de recuperação e crescimento embrionário em comparação ao SE. Desta forma, sugere-se que o ambiente uterino é favoravelmente influenciado por uma longa exposição ao estrógeno previamente a P4, embora ainda não tenha sido demonstrada diferença entre a exposição prévia longa ou curta.

The spread of embryo transfer in horses (ET) over the years resulted in an increasing of the demand for recipients, both for cyclic and acyclic mares in anestrus or transition. The first protocol used in acyclic mares had the purpose of mimic the uterine conditions of a cyclic mare in diestrus and was based only on the use of progesterone (P4), although later studies indicate that the previous application of estrogen can promote improvements in growth rates and embryonic survival. However, the influence of this greater exposure to estrogen, previously to P4, on embryo recovery and development in recipients is still uncertain. Therefore, the main objective of this study is to determine the effect of three hormonal protocols in acyclic mares on survival and embryonic development rates after ET. For this, the long estrus (LE) group has received 8 mg total of estradiol benzoate (EB) in increasing doses, remaining 7 days exposed to estrogen before the application of long-acting P4 (LA P4); the short estrous (SE) group received a single dose of 2.5 mg of EB two days before the administration of P4 LA; and the group without estrus (NE) started only 1500 mg of P4 LA. Donor embryos were collected eight days after ovulation, which were evaluated and transferred to recipients in the LE, SE and NE groups on day 4 after P4 LA application. Two days after ET, uterine lavages were performed in the recipients and were evaluated as embryo recovery rates, quality, and growth rate. It was observed that the LE group presented better rates of recovery and embryonic growth compared to the SE group. Consequently, it seems that the uterine environment is favorably influenced by along exposure to estrogen previously to P4, although no difference has been demonstrated between long or short previous exposure.

AVALIAÇÃO DAS TAXAS DE PRENHEZ EM ÉGUAS RECEPTORAS CÍCLICAS SUBMETIDAS A DIFERENTES PROTOCOLOS HORMONAIS

A transferência de embrião (TE) se tornou a biotecnologia mais difundida na reprodução equina, sendo utilizada em larga escala pelos haras e centrais de reprodução para obtenção de mais produtos por ano. A sincronização do ciclo estral entre a receptora e a doadora é um ponto crítico dentro da técnica, tornando necessário a disponibilidade de no mínimo três éguas receptoras para cada doadora, para que pelo menos uma esteja apta a receber o embrião no dia da transferência. A combinação de estrógenos e progestágenos é utilizada em éguas receptoras de embrião acíclicas, em fase de transição ou quando há escassa disponibilidade de éguas receptoras, tornando necessária uma sincronia estreita entre a doadora e a receptora. O objetivo desse estudo foi comparar três protocolos hormonais, utilizando-se 17 beta estradiol e altrenogest, e avaliar as taxas de prenhez em éguas receptoras cíclicas. Foram analisados 24 ciclos de éguas da raça Mangalarga Marchador, divididos em três grupos contendo oito ciclos em cada. No qual, todas as éguas receberam 15 mg de dinoprost trometamina no primeiro dia de tratamento, G1 recebeu 17 beta estradiol no dia 1 (20mg), dia 2 (10mg) e 300 mg de altenogest no dia 3, G2 recebeu 17 beta estradiol no dia 1 (10mg), dia 2 (10mg), dia 3 (20mg), dia 4 (10mg) e 300 mg Altrenogest no dia 5, G3 recebeu 17 beta estradiol dia 1 (10mg), dia 2 (20mg) e 300 mg Altrenogest no dia 3. Quatro dias após o tratamento com Altrenogest, era realizada a transferência de embrião, sendo administradas 1500mg/animal de progesterona longa ação neste dia. Após sete dias da transferência, foi realizado o diagnóstico de gestação e nova aplicação de progesterona na dose 1500mg/animal nas éguas gestantes, sendo esta realizada semanalmente até os 120 dias de gestação. Todos os grupos responderam as aplicações de estrógeno, sendo alcançado alto grau de edema em todas as éguas gestantes. Foi observado maior grau de edema uterino (p<0,05), nas éguas com diagnóstico de gestação negativos, no dia 3 de tratamento no G1 e G3 e no dia 4 no G2. Não houve diferença estatística nas taxas de gestação nos três grupos estudados. Sendo assim, os três protocolos estão aptos a serem utilizados na rotina prática do médico veterinário de reprodução equina

Embryo transfer (ET) has become the most widespread biotechnology in equine reproduction, being used on a large scale by stud farms and breeding centers to obtain more products per year. The synchronization of the estrous cycle between the recipient and the donor is a critical point within the technique, making it necessary to have at least three recipient mares for each donor, so that at least one is able to receive the embryo on the day of transfer. The combination of estrogens and progestogens is used in acyclic embryo recipient mares, in transition or when there is little availability of recipient mares, making a close synchrony between donor and recipient necessary. The aim of this study was to compare three hormonal protocols, using 17 beta estradiol and altrenogest, and to evaluate pregnancy rates in cyclic recipient mares. Twenty-four cycles of Mangalarga Marchador mares were analyzed, divided into three groups containing eight cycles in each. In which, all mares received 15 mg of dinoprost trometamina on the first day of treatment, G1 include 17 beta estradiol on day 1 (20mg), day 2 (10mg) and 300 mg of altenogest on day 3, G2 1 (1omg), day 2 (10mg), day 3 (20mg), day 4 (10mg) and 300 mg Altrenogest on day 5, G3 Introduction 17 beta estradiol day 1 (10mg), day 2 (20mg) and 300 mg Altrenogest on day 3. Four days after treatment with Altrenogest, as recipients were able to receive the embryo, 1500mg / animal of long-acting progesterone was administered on the day the ET was performed. After seven days of ET, a diagnosis of pregnancy and a new application of progesterone in pregnant mares was carried out, which was carried out weekly until the 120 days of pregnancy. All groups registered as estrogen applications, with a high degree of edema being achieved in all pregnant mares. A higher degree of uterine edema (p <0.05) was observed in mares diagnosed with negative pregnancy, on day 3 of treatment in G1 and G3 and on day 4 in G2. There was no statistical difference in pregnancy rates in the three groups studied. Thus, the three protocols are able to be used in the practical routine of the equine breeding veterinarian.

Ultrasonography of the conceptus development from days 15 to 60 of pregnancy in non-cyclic recipient mares / Ultrassonografia do desenvolvimento do concepto entre 15 e 60 dias de gestação em éguas receptoras acíclicas

The present study evaluated the development of equine conceptus transferred to non-cyclic recipient mares treated with altrenogest. Twenty four mares were used as embryo recipients during the ovulatory phase (Control group; n=8) or anestrus/transitional phases (Altrenogest group; n=16) and were evaluated by transrectal ultrasonography, at five day intervals, to monitor the development of embryonic vesicles from 15 to 45 days of pregnancy and embryo proper/fetus from 20 to 60 days. Embryonic vesicle's features such as shape, embryo location within the vesicle and umbilical cord development were similar between cyclic and non-cyclic recipient mares. The embryonic vesicle and embryo proper/fetus growth was significant (P<0.05) between 15 and 60 days of gestation in Altrenogest and Control groups, except for days 20 to 30, where embryonic vesicle growth decrease was observed (P>0.05). The embryonic vesicle and embryo proper/fetus growth was similar (P>0.05) when gestational days were compared between groups. The similarity in conceptus growth between cyclic and non-cyclic recipient mares during early pregnancy indicates that the uterine environment of non-cyclic recipient mares treated with progestins provides similar conditions for the development of transferred embryos.(AU)

O presente trabalho avaliou o desenvolvimento de conceptos equinos transferidos para éguas receptoras acíclicas, tratadas com altrenogest. Vinte e quatro receptoras gestantes por transferência de embrião durante a fase cíclica (grupo Controle; n=8) ou acíclica (grupo Altrenogest; n=16) foram avaliadas por meio de ultrassonografia transretal, a cada cinco dias, para monitorar o desenvolvimento da vesícula embrionária entre 15 e 45 dias de gestação e embrião/feto dos 20 aos 60 dias. As características da vesícula embrionária quanto ao formato, localização do embrião dentro da vesícula e formação do cordão umbilical foram similares em receptoras cíclicas e acíclicas. O crescimento da vesícula embrionária e embrião/feto foi significativo (P<0,05) entre 15 e 60 dias de gestação nos grupos Altrenogest e Controle, com exceção dos dias 20 a 30, em que redução no crescimento da vesícula embrionária foi observada (P>0,05). O crescimento da vesícula embrionária e embrião/feto também foi similar (P>0,05) entre grupos nos diferentes dias de gestação. A similaridade no crescimento do concepto entre éguas receptoras cíclicas e acíclicas durante o início da gestação indica que o ambiente uterino de receptoras acíclicas, mantidas com progestágeno, oferece condições similares para o desenvolvimento de um embrião transferido.(AU)

SINCRONIZAÇÃO DE ÉGUAS RECEPTORAS EM ANESTRO TRATADAS COM ALTRENOGEST INJETÁVEL NO PROGRAMA DE TRANSFERÊNCIA DE EMBRIÕES EQUINOS

Na equinocultura a transferência de embriões (TE) é a biotecnologia da reprodução mais difundida na espécie, onde a disponibilidade de receptoras aptas para esta técnica durante a estação reprodutiva representa um dos principais desafios aos centros reprodutivos. O objetivo do presente estudo foi promover o aproveitamento de receptoras de embrião em anestro através da sincronização com a administração de cipionato de estradiol seguido por altrenogest injetável, propondo assim um novo protocolo de sincronização. Considerou em anestro (acíclicas) as receptoras com folículos de até 15 mm ou ausência destes, assim como ausência de edema uterino e corpo lúteo, e cíclicas aquelas que demonstraram presença de folículo pré-ovulatório e/ou CL. A receptoras em anestro receberam 2mL de Cipionato de Estradiol (5 mg/mL) no primeiro dia e mais 1 mL no dia seguinte por via intramuscular, no terceiro dia após observado edema uterino escala 3 foi realizado a administração de 3mL de altrenogest (75mg/mL) também por via intramuscular, neste grupo a TE foi realizada cinco, seis ou sete dias (D5, D6 ou D7) após o recebimento do altrenogest injetável. Nas receptoras cíclicas a sincronização com as doadoras foi realizada através da indução de ovulação com HCG nas éguas com folículos de diâmetro 40 mm e edema satisfatório (escala 3). Realizou-se a transferência de embriões grau 1, 2 e 3 com seis, sete ou oito dias de desenvolvimento. O diagnóstico de gestação foi realizado aos quinze dias de idade do embrião e feito acompanhamento até trinta dias de gestação. A avaliação estatística foi realizada por meio do teste de Fischer com probabilidade de 5%. Não houve diferença significativa entre as taxas de gestação das éguas tratadas e não tratadas aos quinze e trinta dias de gestação. Ao comparar o dia da realização da TE após o tratamento com altrenogest, também não se observou diferença nos dias cinco, seis e sete. Ao avaliar o dia da coleta dos embriões, aos 15 dias de gestação obteve-se 80% e 92,3 %, para o grupo tratado e não tratado respectivamente, diferindo estatisticamente entre si. As receptoras cíclicas apresentaram taxa de prenhez superior ao grupo tratado (p<0,05%) ao receberem embriões grau 1 nas transferências. Conclui-se que a prenhez foi semelhante entre as receptoras cíclicas e acíclica, porém o protocolo proposto com duas administrações de ciprionato de estradiol associado a uma única dose de altrenogest pode ser uma alternativa para o aproveitamento de éguas receptoras de embrião em anestro.

The equinoculture embryo transfer (ET) is the most widespread reproductive biotechnology in the species, where the availability of receptors suitable for this technique during the breeding season represents one of the main challenges for reproductive centers. The aim of the present study was to promote the utilization of anestrus embryo recipients by synchronization with the administration of estradiol cypionate followed by injectable altrenogest, thus proposing a new synchronization protocol. It considered in anestrous (acyclic) the recipients with follicles up to 15 mm or absence of these, as well as absence of uterine edema and corpus luteum, and cyclic those that showed presence of preovulatory follicle and / or CL. Anestrous recipients received 2mL Estradiol Cypionate (5 mg / mL) on the first day and an additional 1 mL intramuscularly on the following day. On the third day after uterine edema scale 3, 3mL altrenogest (75mg / mL) was administered. mL) also intramuscularly, in this group the ET was performed five, six or seven days (D5, D6 or D7) after receiving the injectable altrenogest. In cyclic recipients, synchronization with donors was performed by induction of ovulation with HCG in mares with follicles 40 mm in diameter and satisfactory edema (scale 3). Grade 1, 2 and 3 embryos were transferred at six, seven or eight days of development. The pregnancy diagnosis was made at fifteen days of the embryo and followed up until thirty days of gestation. Statistical evaluation was performed using the Fischer test with a probability of 5%. There was no significant difference between the gestation rates of treated and untreated mares at 15 and 30 days of gestation. When comparing the day of ET after treatment with altrenogest, no difference was also observed on days five, six and seven. When evaluating the day of embryo collection, at 15 days of gestation, 80% and 92.3% were obtained for the treated and untreated groups, respectively, differing statistically from each other. Cyclic recipients had a higher pregnancy rate than the treated group (p <0.05%) when receiving grade 1 embryos on transfer. It was concluded that pregnancy was similar between cyclic and acyclic recipients, but the proposed protocol with two administrations of estradiol cyprionate associated with a single dose of altrenogest can be an alternative for the use of anestrus embryo receptor mares.

Sincronização de receptoras no diestro para utilização em programa de transferência de embriões em equinos / Synchronization of estrus in the recipient for use in program embryo transfer in horses / La sincronización del estro en el receptor para su uso en la transferencia de embriones programa en caballos

Um dos grandes problemas da técnica de transferência de embriões continua sendo a seleção de éguas aptas para serem utilizadas como receptoras de embrião e aumentar o seu período de utilização é sempre um desafio. A utilização de receptoras acíclicas sincronizadas pela reposição hormonal apresenta taxas de gestação similares a receptoras ciclantes. O objetivo do presente trabalho foi estudar o efeito da utilização do estrógeno e progesterona em receptoras de embrião na fase de diestro. Foram utilizadas 60 éguas dividas em três grupos experimentais, sendo grupo controle, grupo aciclicas preparadas com a administração de 20mg de 17ẞ estradiol e 3g de progesterona natural injetável em veiculo de liberação lenta e o grupo diestro receptoras entre o D8 e D14 do ciclo estral (diestro) preparadas com a administração de 50mg de 17 ẞ estradiol e 3g de progesterona natural injetável em veiculo de liberação lenta. Foi avaliada a porcentagem de prenhez e valor médio e desvio padrão do grau máximo de edema uterino de receptoras que ficaram prenhes ou ficaram vazias nos diferentes grupos, porcentagem de receptoras do grupo diestro que apresentaram grau de edema uterino e taxa de prenhez em relação ao grau de edema, média e desvio padrão do grau de edema uterino e número de animais em relação ao dia do inicio do protocolo e respectiva taxa de prenhez das éguas do grupo diestro. Os dois protocolos de sincronização no grupo controle e grupo acíclicas com 80% de prenhez foram eficazes para a preparação de éguas como receptoras de embrião. O protocolo utilizado no grupo diestro obteve a taxa de gestação de 40% podendo ser uma alternativa estratégica em um programa de TE, desde que a receptora se encontre após o D10 do diestro e apresente grau de edema uterino superior a 2, após a aplicação do 17 ẞ estradiol.

A major problem of the technique of embryo transfer remains the selection of suitable mares to be used as embryo recipients and increase their usage period is always a challenge. Knowing that the use of acyclic receptor synchronized by hormone replacement shows pregnancy rates similar to receiving ciclantes. The aim of this work was to study the effect of the use of estrogen and progesterone receptors in embryo at the stage of estrus. 60 mares were used divided into three experimental groups and control group, acyclic prepared with the administration of 20 mg of 17ẞ estradiol and 3g of natural progesterone injection in vehicle slow release and the group receiving diestrus between D8 and D14 of the estrous cycle (diestrus) prepared by administering 50 mg of estradiol, and 17 ẞ 3g natural progesterone injection in slow release vehicle. Being evaluated pregnancy rate and mean value and standard deviation of the maximum degree of uterine edema of recipients who were pregnant or became empty in the different groups, the percentage of recipients diestrus group that showed uterine edema and pregnancy rate in relation to the degree of edema, mean and standard deviation of the degree of uterine edema and numbers of animals in relation to the day of the beginning of the protocol and rate of pregnancy in mares group diestrus. The two synchronization protocols in the control group and acyclic group with 80% pregnancy were effective for the preparation of mares as embryo recipients. The protocol used in diestrus group obtained pregnancy rate of 40% could be an alternative strategy in a program TE, provided the receptor is found after D10 diestrus and present uterine edema grade greater than 2, after application 17 ẞ estradiol.

Un problema importante de la técnica de transferencia de embriones sigue siendo la selección de yeguas adecuadas para que puedan ser utilizadas como receptoras de embriones y aumentar su periodo de uso es siempre un desafío. Sabiendo que el uso del receptor acíclico sincronizado por reemplazo hormonal muestra las tasas de embarazo similares a recibir ciclantes. El objetivo de este trabajo fue estudiar el efecto de la utilización de los receptores de estrógeno y progesterona en embrión en la fase de estro. 60 yeguas que se dividieron en tres grupos experimentales y el grupo de control, acíclicos preparado con la administración de 20 mg de 17ẞ estradiol y 3 g de inyección de progesterona natural en el vehículo de liberación lenta y el grupo que recibió el diestro entre D8 y D14 del ciclo estral (diestro) preparado por la administración de 50 mg de estradiol y 17 de inyección de progesterona natural 3g ẞ en un vehículo de liberación lenta. Siendo evaluada tasa de embarazo y el valor y la desviación estándar del máximo grado de edema uterino de las receptoras que estaban embarazadas o se convirtieron en vacío en los diferentes grupos de media, el porcentaje de receptoras grupo diestro que mostró edema uterino y la tasa de embarazo en relación con el grado edema, media y desviación estándar del grado de edema uterino y el número de animales en relación con el día del comienzo del protocolo y la velocidad de la gestación en yeguas diestro grupo. Los dos protocolos de sincronización en el grupo control y el grupo acíclico con 80% de embarazo fueron eficaces para la preparación de yeguas como receptoras de embriones. El protocolo utilizado en el grupo diestro obtuvo tasa de embarazo del 40% podría ser una estrategia alternativa en un programa de TE, siempre y cuando la receptora se encuentre después de D10 diestro y presente edema uterino de grado mayor que 2, después de la aplicación 17 ẞ estradiol.

Transferência de embriões equinos: maximizando resultados com a escolha de receptoras / Transfer of equine embryos: maximizing results with the choice of recipient mare

Os expressivos resultados obtidos pela equideocultura nacional tem colocado a atividade em evidência dentro do agronegócio brasileiro. A Transferência de Embriões (TE) é uma importante ferramenta da reprodução equina e vem sendo utilizada rotineiramente em fazendas de criação e centros de reprodução equina por todo o Brasil. A sua utilização permite a otimização de animais geneticamente superiores, aumentando o número de produtos obtidos por égua/ano. Para a correta identificação das etapas que compõe um programa de TE é importante conhecer seus principais componentes: a égua doadora, o garanhão, a técnica e a égua receptora. A seleção e o manejo da égua receptora são os fatores mais importantes para o sucesso de um programa de TE e realizar esse trabalho com perfeição é fundamental para se alcançar bons resultados. A principal característica na seleção da receptora deve ser a ausência de problemas reprodutivos. Os critérios para maximizar o uso das receptoras podem ser divididos em: diminuição de estresse ambiental e controle sanitário, avaliação da idade e controle rígido da saúde de cada égua, utilização do cio do potro, manejo do fotoperíodo e utilização de éguas acíclicas, adequação da sincronia entre doadoras e receptoras e o uso da hormonioterapia no controle dos ciclos das éguas envolvidas. O objetivo desse estudo é demonstrar que é possível maximizar o uso das receptoras através de um rígido sistema de seleção e controle.(AU)

The significant results obtained by the national equine industry has put the activity in evidence in the Brazilian agribusiness. The Embryo Transfer (ET) is a main equine reproduction tool and has been used routinely in breeding farms and equine reproduction centers throughout Brazil. Its use allows the optimization of genetically superior animals, increasing the number of products obtained by mare / year. For the correct identification of the steps that make an ET program is important to know its main components: the donor mare, the stallion, the technician and the recipient mare. The selection and management of the recipient mare are the most important factors for the success of a ET program and do this work to perfection is essential to achieve good results. The main feature selection in the recipient mare should be the lack of reproductive problems. The criteria to maximize the use of the recipient mare can be divided into: reduction of environmental stress and disease control, evaluation of age and strict control of the health of each mare, foal heat utilization, control photoperiod and use of acyclic mares, adequacy of synchrony between donors and recipients and the use of hormone therapy in the control of cycles of mares involved. The aim of this study is to demonstrate that you can maximize the use of the recipient mare through a strict selection and control system.(AU)

Transferência de embriões equinos: maximizando resultados com a escolha de receptoras / Transfer of equine embryos: maximizing results with the choice of recipient mare

Os expressivos resultados obtidos pela equideocultura nacional tem colocado a atividade em evidência dentro do agronegócio brasileiro. A Transferência de Embriões (TE) é uma importante ferramenta da reprodução equina e vem sendo utilizada rotineiramente em fazendas de criação e centros de reprodução equina por todo o Brasil. A sua utilização permite a otimização de animais geneticamente superiores, aumentando o número de produtos obtidos por égua/ano. Para a correta identificação das etapas que compõe um programa de TE é importante conhecer seus principais componentes: a égua doadora, o garanhão, a técnica e a égua receptora. A seleção e o manejo da égua receptora são os fatores mais importantes para o sucesso de um programa de TE e realizar esse trabalho com perfeição é fundamental para se alcançar bons resultados. A principal característica na seleção da receptora deve ser a ausência de problemas reprodutivos. Os critérios para maximizar o uso das receptoras podem ser divididos em: diminuição de estresse ambiental e controle sanitário, avaliação da idade e controle rígido da saúde de cada égua, utilização do cio do potro, manejo do fotoperíodo e utilização de éguas acíclicas, adequação da sincronia entre doadoras e receptoras e o uso da hormonioterapia no controle dos ciclos das éguas envolvidas. O objetivo desse estudo é demonstrar que é possível maximizar o uso das receptoras através de um rígido sistema de seleção e controle.

The significant results obtained by the national equine industry has put the activity in evidence in the Brazilian agribusiness. The Embryo Transfer (ET) is a main equine reproduction tool and has been used routinely in breeding farms and equine reproduction centers throughout Brazil. Its use allows the optimization of genetically superior animals, increasing the number of products obtained by mare / year. For the correct identification of the steps that make an ET program is important to know its main components: the donor mare, the stallion, the technician and the recipient mare. The selection and management of the recipient mare are the most important factors for the success of a ET program and do this work to perfection is essential to achieve good results. The main feature selection in the recipient mare should be the lack of reproductive problems. The criteria to maximize the use of the recipient mare can be divided into: reduction of environmental stress and disease control, evaluation of age and strict control of the health of each mare, foal heat utilization, control photoperiod and use of acyclic mares, adequacy of synchrony between donors and recipients and the use of hormone therapy in the control of cycles of mares involved. The aim of this study is to demonstrate that you can maximize the use of the recipient mare through a strict selection and control system.

Associação de benzoato de estradiol e progesterona na preparação de éguas acíclicas como receptoras

O Brasil é um centro de referência no estudo e na utilização de Biotécnicas aplicadas à Reprodução Equina, como a Inseminação Articial (IA) e a Transferência de Embriões (TE). A utilização da TE tem aumentado bastante, possibilitando a exploração máxima de animais de alto valor genético. Um dos fatores mais importantes para o sucesso da TE em equinos, é a seleção e o manejo das éguas receptoras, já que esta irá reconhecer o embrião e terá que fornecer as condições necessárias ao seu desenvolvimento. Devido às inuências do fotoperíodo, ocorre certa limitação na utiização de éguas receptoras, sendo assim, faz-se necessário o estudo com protocolos hormonais que possibilitem a utilização de receptoras de embrião com ciclo articial.

Efeito da suplementação hormonal com progestágenos em éguas prenhes sobre os hormônios tireoidianos e esteroides dos neonatos

Resumo: O nosso trabalho teve como objetivo avaliar as concentrações dos hormônios tireoidianos e esteroides dos neonatos no pós-parto imediato (d0) de éguas suplementadas com diferentes progestágenos e estabelecer correlação entre a concentração de progesterona da mãe com a do neonato. Para isso foram utilizadas 27 éguas da raça Mangalarga Marchador e seus respectivos potros. Os animais foram divididos em 5 grupos experimentais: grupo 1 (controle, sem suplementação hormonal), grupo 2 (éguas receptoras acíclicas suplementadas até os 120 dias de prenhez com progesterona de longa ação), grupo 3 (éguas suplementadas com progesterona de curta ação a partir do dia 280 de gestação), grupo 4 (éguas suplementadas com progesterona de longa ação a partir do dia 280 de gestação) e grupo 5 ( éguas suplementadas com progestágeno sintético altrenogest a partir do dia 280 de gestação). Foi realizada coleta de sangue dos potros e das éguas imediatamente após o parto para a mensuração hormonal utilizando kits comerciais. Os hormônios mensurados nos neonatos foram T3 total, T4 livre, TSH, progesterona e cortisol. Nas éguas foi mensurada a concentração de progesterona. Os grupos de neonatos não apresentaram diferença na concentração de T3 total, T4 livre, TSH e progesterona no d0. Não foi encontrada diferença na concentração de progesterona das éguas dos diferentes grupos analisados no d0. Os neonatos dos grupos 4 apresentaram maior concentração de cortisol no d0 e os do grupo 5 apresentaram menor concentração de cortisol no d0. Nenhum neonato apresentou alteração clínica. Assim, a suplementação hormonal com progesterona de longa ação a partir dos 280 dias de gestação levou ao aumento na concentração de cortisol do neonato enquanto que a suplementação com altrenogest a partir dos 280 dias de gestação causou a diminuição nos níveis de cortisol no d0.

Abstract: Our essay aimed to evaluate neonatal foals thyroid and steroid hormone levels in the oncoming postpartum (d0) of mares supplemented with different progestogens and to establish a interconnection between the progesterone levels of the mother and the neonate. For this, 27 Mangalarga Marchador mares and their respective foals were surveyed. The animals were shared to 5 experimental groups: group 1 (control, without hormonal supplementation), group 2 (acyclic recipient mares supplemented until 120 days of pregnancy with long-acting progesterone), group 3 (mares supplemented with short-acting progesterone from the 280th day of pregnancy), group 4 (mares supplemented with long-acting progesterone from the 280th day of pregnancy) and group 5 (mares supplemented with synthetic altrenogest progestogen from the 280th day of pregnancy). Blood samples were collected from neonates and mares immediately after calving for hormonal measurement using commercial kits. The hormones measured in the newborns were total T3, free T4, TSH, progesterone and cortisol. In mares was measured the progesterone levels. Newborn groups didnt display any difference among total T3, free T4, TSH and progesterone levels in d0. Any difference was found in progesterone levels of mares of different groups analyzed in d0. Neonates from groups 2 and 4 had higher cortisol levels at d0 and those from group 5 had lower cortisol levels at d0. Neither neonate showed clinical alteration. Thus, long-acting progesterone hormone supplementation up to 120 days of pregnancy and from 280 days of pregnancy led to an increase in the cortisol levels of the newborn, while altrenogest supplementation from 280 days of pregnancy led to a reduction in cortisol levels in d0.

Expressão endometrial de receptores de estradiol e progesterona em éguas cíclicas, gestantes e acíclicas tratadas com hormônios esteroidais / Endometrial expression of estradiol and progesterone receptors in cyclic, pregnant and non-cyclic steroid treated mares

A utilização de éguas receptoras cíclicas e acíclicas nos programas de transferência de embriões (TE) é uma prática consagrada na reprodução equina. Uma alternativa vantajosa para criadores e veterinários é o uso das receptoras acíclicas, uma vez que viabiliza a antecipação da estação de monta e reduz o manejo com as receptoras. Para se estabelecer a gestação nestas receptoras, estrógenos e progestinas são administrados, de forma a simular o ambiente hormonal uterino de éguas que se tornam naturalmente gestantes. A administração de estrógenos previamente às progestinas é baseada nos estudos em éguas cíclicas, que mostram que o estradiol, presente no período de estro, estimula a expressão dos seus próprios receptores e dos receptores para progesterona no endométrio. A progesterona, por sua vez, provoca mudanças uterinas que possibilitam o estabelecimento e manutenção da gestação e leva a redução dos receptores de estradiol e de seus próprios receptores durante o diestro e início da gestação. No entanto, pouco se sabe sobre os receptores endometriais de estradiol e progesterona em éguas acíclicas, principalmente utilizadas em programas de TE. O presente trabalho revisa o padrão de expressão gênica dos receptores endometriais de estradiol e progesterona em éguas durante o ciclo estral, início da gestação e submetidas a tratamentos hormonais com estrógenos e progestinas exógenas. (AU)

The use of cyclic and non cyclic recipient mares in embryo transfer (ET) programs is a well established practice in equine reproduction. An advantageous alternative for horse owners and veterinarians is the use of non-cyclic recipients, since it makes possible the anticipation of the breeding season and reduces handling with the recipients. In order to establish pregnancy in the non-cyclic recipients, estrogens and progestins are administered to allow the induction of similar endometrial changes to those which occur in naturally pregnant mares. Administration of estradiol prior to progestins is based on cyclic mares researches, where estradiol produced during estrous stimulates the expression of estrogen and progesterone receptors in the endometrium. On the other hand, progesterone causes uterine changes that allow pregnancy establishment and maintenance. In addition, progesterone leads to reduction of estrogen and progesterone receptors during diestrous in cyclic mares. However, little is known about estrogen and progesterone endometrial receptors in non-cyclic mares, especially used in ET programs. The current study revises the gene expression pattern of estradiol and progesterone endometrial receptors in mares during estrous cycle, early pregnancy and submitted to estrogens and progestins hormonal treatments. (AU)

Expressão endometrial de receptores de estradiol e progesterona em éguas cíclicas, gestantes e acíclicas tratadas com hormônios esteroidais / Endometrial expression of estradiol and progesterone receptors in cyclic, pregnant and non-cyclic steroid treated mares

A utilização de éguas receptoras cíclicas e acíclicas nos programas de transferência de embriões (TE) é uma prática consagrada na reprodução equina. Uma alternativa vantajosa para criadores e veterinários é o uso das receptoras acíclicas, uma vez que viabiliza a antecipação da estação de monta e reduz o manejo com as receptoras. Para se estabelecer a gestação nestas receptoras, estrógenos e progestinas são administrados, de forma a simular o ambiente hormonal uterino de éguas que se tornam naturalmente gestantes. A administração de estrógenos previamente às progestinas é baseada nos estudos em éguas cíclicas, que mostram que o estradiol, presente no período de estro, estimula a expressão dos seus próprios receptores e dos receptores para progesterona no endométrio. A progesterona, por sua vez, provoca mudanças uterinas que possibilitam o estabelecimento e manutenção da gestação e leva a redução dos receptores de estradiol e de seus próprios receptores durante o diestro e início da gestação. No entanto, pouco se sabe sobre os receptores endometriais de estradiol e progesterona em éguas acíclicas, principalmente utilizadas em programas de TE. O presente trabalho revisa o padrão de expressão gênica dos receptores endometriais de estradiol e progesterona em éguas durante o ciclo estral, início da gestação e submetidas a tratamentos hormonais com estrógenos e progestinas exógenas.

The use of cyclic and non cyclic recipient mares in embryo transfer (ET) programs is a well established practice in equine reproduction. An advantageous alternative for horse owners and veterinarians is the use of non-cyclic recipients, since it makes possible the anticipation of the breeding season and reduces handling with the recipients. In order to establish pregnancy in the non-cyclic recipients, estrogens and progestins are administered to allow the induction of similar endometrial changes to those which occur in naturally pregnant mares. Administration of estradiol prior to progestins is based on cyclic mares’ researches, where estradiol produced during estrous stimulates the expression of estrogen and progesterone receptors in the endometrium. On the other hand, progesterone causes uterine changes that allow pregnancy establishment and maintenance. In addition, progesterone leads to reduction of estrogen and progesterone receptors during diestrous in cyclic mares. However, little is known about estrogen and progesterone endometrial receptors in non-cyclic mares, especially used in ET programs. The current study revises the gene expression pattern of estradiol and progesterone endometrial receptors in mares during estrous cycle, early pregnancy and submitted to estrogens and progestins hormonal treatments.

Utilização de diferentes períodos de fotoestimulação em éguas acíclicas para o controle da sazonalidade reprodutiva / Use of different periods of photostimulation in acyclic mares for reproductive seasonal control / Utilización de diferentes periodos de fotoestimulación en yeguas acíclicas para el control de la estacionalidad reproductiva

As éguas apresentam um período de atividade reprodutiva durante o verão e, no inverno, pouca atividade folicular (anestro). A fim de antecipar a fase reprodutiva, este estudo teve como objetivo avaliar o efeito de diferentes períodos de fotoestimulação sobre a ocorrência da primeira ovulação da estação de monta em éguas em anestro sazonal. O experimento foi conduzido durante as estações reprodutivas de 2009 e 2010, do dia 1 de junho ao dia 1 de agosto, para isso foram utilizadas 45 éguas mestiças, em anestro, entre quatro e 12 anos, em São Simão - SP, Brasil. Na ausência de corpo lúteo e folículos maiores de 20 mm, as éguas foram aleatoriamente separadas nos seguintes grupos: G1 - controle, sem estímulo com luz artificial (G1; n=15), G2 - estimulação com luz artificial por 35 dias (G2; n=15) e G3 -estimulação com luz artificial por 60 dias (G3; n=15). Utilizou-se o teste de Fisher para comparar a proporção de éguas que ovularam até os primeiros 60 dias do experimento entre os grupos de estudo. O método de Bonferroni foi usado para ajustar o nível a para comparações múltiplas. Curvas de sobrevivência e modelos de risco proporcional de Cox foram usados para comparar a taxa de ovulação entre os grupos de estudo (expressa estimando a razão dos riscos). Significância estatística foi definida como P<0,05 ou P<0,02 para o teste de Fisher com comparações múltiplas. A proporção de éguas que ovularam até 60 dias após o início do tratamento foi significantemente maior (84,6%) no grupo tratado com luz artificial por 60 dias, quando comparado ao grupo controle (15,4%, P=0,001). Houve diferença estatística entre o grupo controle e o grupo tratado com luz artificial por 35 dias (61,5%, P=0,041), porém não houve diferença entre os grupos tratados por 35 e 60 dias (P=0,378). O tempo mediano de ovulação no grupo tratado com luz artificial por 60 dias foi 53 dias, enquanto éguas no grupo tratado com luz artificial por 35 ou éguas no grupo controle ovularam aos 56 e 125 dias, respectivamente. Conclui-se que a redução do tratamento com luz artificial para 35 dias não foi tão eficaz quanto o protocolo convencional de 60 dias.

The mares have a period of reproductive activity during the summer and in winter, poor follicular activity (anestrous). In order to anticipate the reproductive phase, this study aimed to evaluate the effect of different periods of photic stimulation on the occurrence of first ovulation of the breeding season in mares in seasonal anestrous. The experiment was conducted during the breeding seasons of 2009 and 2010, from 1 July to 1 August, were used 45 mares crossbred in anestrous between four and 12 years in São Simão - SP, Brazil. In the absence of the corpus luteum and follicles larger than 20 mm, mares were randomly separated into the following groups: G1 - control, without stimulation with artificial light (G1, n=15), G2 - stimulation with artificial light for 35 days (G2; n=15) and G3 - stimulation with artificial light for 60 days (G3, n=15). We used the Fisher exact test for analysis of ovulation rate to the first 60 days of the experiment and ANOVA followed by Tukey test to analyze the average number of days to first ovulation, all statistics were considered significant when P<0.05. The Fisher test was used to compare the mare proportion that ovulated until the first 60 days of experiment between the study groups. The Bonferroni method was used to adjust the a level for multiple comparisons. Survival curves and Cox proportional hazards model were used to compare the ovulation rate between the study groups (estimating the expression of hazard ratio. Statistical significance was defined as P<0.05 or P<0.02 for the Fisher test with multiple comparisons. The proportion of mares that ovulated until 60 days after the beginning of the treatment was significantly larger (84.6%) in the group treated with artificial light by 60 days, when compared to the control group (15.4%, P=0.001). There was statistical difference between the control group and the group treated with artificial light by 35 days (61.5%, P=0.041), however was not statistical difference between the groups treated by 35 and 60 days (P=0.378). The average ovulation time in the group treated with artificial light by 60 days was 53 days, while mares in the group treated with artificial light by 35 or mares in the control group ovulated at the 56 and 125 days, respectively. It concluded that the reduction of treatment with artificial light for 35 days was not as effective as the conventional protocol of 60 days.

Las yeguas presentan el período de actividad reproductiva durante el verano y poca actividad folicular (anestro) durante el invierno. Con la intención de anticipar la temporada de monta, este estudio tuvo como objetivo evaluar el efecto de diferentes períodos de fotoestimulación en la presentación de la primera ovulación de la temporada reproductiva. El experimento se llevó a cabo durante las temporadas reproductivas de 2009 y 2010, del 1 día del mes de junio al 1 de agosto, se utilizaron 45 yeguas mestizas, en anestro, de cuatro a 12 años, en São Simão/SP, Brasil. En la ausencia de cuerpo lúteo y de folículos mayores de 20 mm, las yeguas fueron separadas al azar en los siguientes grupos: Grupo 1- testigo, sin estímulo con luz artificial (G1, n=15), Grupo 2 - estimulación con luz artificial por 35 días (G2; n=15), y Grupo 3 - estimulación con luz artificial por 60 días (G3; n=15). Se utilizó el teste exacto de Fischer para la análisis del porcentaje de ovulación hasta los primeros 60 días del experimento y el ANOVA seguido del teste de Tukey para el análisis del número medio de días hasta la ovulación, todas las estadísticas se consideraron significativas cuando P<0,05. Se utilizó la prueba de Fisher para comparar la proporción de yeguas que ovularon hasta los primeros 60 días del experimento entre los grupos de estudio. El método de Bonferroni fue utilizado para ajustar el nivel o para múltiples comparaciones. Las curvas de sobrevivencia y los modelos de riesgo proporcional de Cox fueron usados para comparar la tasa de ovulación entre los grupos de estudio (expresa la relación entre los riesgos estimados). La significancia estadística se definió como P<0,05 o P<0,02 para la prueba de Fisher con comparaciones múltiples. La proporción de yeguas que ovularon hasta 60 días después del inicio del tratamiento fue significativamente mayor (84,6%) en el grupo tratado con la luz artificial por 60 días, cuando son comparados con el grupo control (15,4%, P=0,001). Diferencia estadística entre los grupos control y el grupo tratado con la luz artificial por 35 días (61,5%, P=0,041), pero no hubo diferencia entre los grupos tratados por 35 y 60 días (P=0,378). El tiempo medio de la ovulación en el grupo tratado con luz artificial durante 60 días fue de 53 días, mientras que las yeguas en el grupo tratado con luz artificial por 35 o las yeguas en el grupo de control ovularon a los 56 y 125 días, respectivamente. Se concluye que la reducción del tratamiento con luz artificial para 35 días no fue tan eficiente cuanto el protocolo convencional de 60 días.

EFICIÊNCIA DE LUZ ARTIFICIAL E SUPLEMENTAÇÃO HORMONAL NA MANUTENÇÃO DA GESTAÇÃO DE ÉGUAS NO PERÍODO DA TRANSIÇÃO DE PRIMAVERA

Como alternativa para aumentar a produtividade das doadoras no decorrer da estação reprodutiva, a proposta geral do trabalho foi comparar a taxa de prenhez aos 14 e 30 dias de gestação em éguas receptoras de embriões cíclicas e acíclicas na fase de transição de primavera sobre o efeito de luz artificial e hormônios exógenos. Foram utilizadas como receptoras de embrião 48 éguas mestiças entre quatro e 12 anos em Weatherford TX, EUA. Os animais foram distribuídos, aleatoriamente em G1 (controle, n=16) éguas cíclicas na fase ovulatória, G2 (luz artificial, n=16) éguas acíclicas, tratamento de luz artificial por 60 dias na fase de transição e G3 (acíclico, n=16) éguas acíclicas na fase de transição, tratamento hormonal. Foi aplicado análise descritiva em percentual, seguida do teste de contingência Qui-quadrado, ao nível de significância de 5% (p<0,05). A porcentagem de prenhez foi de 81,25% (13/16), 87,5% (14/16) e 81,25 (13/16) para G1, G2 e G3, respectivamente aos 30 dias. Não se observou diferença significativa (p>0,05) entre os grupos G1 e G2; G1 e G3; G2 e G3. Dessa forma, a utilização de receptoras em anestro estacional, submetidas a tratamento hormonal ou estimuladas por luz artificial, mostraram-se eficazes para atender ao programa de transferência de embrião, no período de transição de primavera.

As an alternative to increase donor productivity during the reproductive season, the general proposal of the study was to compare the pregnancy rate at 14 and 30 days gestation in recipient mares of cyclic and acyclic in the spring transition phase on the effect of artificial light and exogenous hormones. 48 crossbred mares between four and 12 years old were used as embryo recipients in Weatherford - TX, USA. The animals were randomly assigned to G1 (control, n = 16) cyclic mares in the ovulatory phase, G2 (artificial light, n = 16) acyclic mares, artificial light treatment for 60 days in the transition phase and G3 (acyclic, n = 16) acyclic mares in the transition phase, hormonal treatment. A descriptive analysis was applied in percentage, followed by the chi-square contingency test, at a significance level of 5% (p <0.05). The percentage of pregnancy was 81.25% (13/16), 87.5% (14/16) and 81.25 (13/16) for G1, G2 and G3, respectively at 30 days. There was no significant difference (p> 0.05) between groups G1 and G2; G1 and G3; G2 and G3. Thus, the use of recipients in seasonal anoestrus, submitted to hormonal treatment or stimulated by artificial light, were shown to be effective for the embryo transfer program during the spring transition period.

A Mula (Equus mulus) como Receptora de Embriões Equinos (Equus caballus): Aspectos Reprodutivos, Hormonais e Ultrassonográficos da Gestação

O Brasil é um dos países com o maior número de transferências de embriões de equinos do mundo, mas as éguas receptoras são escassas e caras. Uma alternativa é usar mulas acíclicas como receptoras de embriões equinos. O objetivo deste estudo foi comparar pela primeira vez o desenvolvimento embrionário e fetal precoce em mulas e éguas receptoras do 10º ao 60º dia de gestação. Este estudo foi realizado na Fazenda Experimental Gralha Azul da Pontifícia Universidade Católica do Paraná. Cinco éguas de doadores de embriões com idades entre 4 e 10 anos foram utilizadas. Foram utilizados dois grupos de receptores: 10 éguas cíclicas com idades entre 4 e 15 anos (grupo controle) e 7 mulas acíclicas com idades entre 6 e 12 anos. Os animais foram mantidos em piquetes e/ou estábulos e tiveram acesso a água e sal mineral ad libitum, bem como a uma fonte de volumoso e concentrado. As éguas doadoras foram monitoradas diariamente por ultrassonografia transretal (transdutor linear de 5 MHz, A6V Sonoscape, China) após o início do estro. As éguas foram inseminadas artificialmente usando sêmen fresco de um garanhão com fertilidade comprovada. A coleta de embriões das éguas foi realizada 8 dias após a ovulação. Antes da transferência do embrião, as éguas receptoras cíclicas eram examinadas diariamente por ultrassonografia para usar a melhor sincronia com a ovulação da doadora. As mulas acíclicas foram preparadas antes da transferência do embrião com a administração de 17 beta-estradiol (10 mg/mL, 1 mL, im) no dia da ovulação da doadora, e após 2 dias quando a presença de edema uterino foi confirmada, com a administração de Altrenogest (60 mg/mL, 5 mL, im). O diagnóstico de gestação foi realizado por ultrassonografia, 10 dias após a ovulação da doadora. Quando o diagnóstico foi confirmado, a avaliação ultrassonográfica foi realizada diariamente até o 60º dia de gestação. O primeiro dia de detecção da vesícula embrionária foi o Dia 10 por ultrassonografia em ambas as espécies e Dia 20,9 ± 1,3 (Média ± DP) e 21,9 ± 0,9 por palpação transretal em mulas e éguas respectivamente. A fixação da vesícula ocorreu em média no dia 15,7 ± 1,1 em mulas e 16,6 ± 1,7 em éguas. O embrião propriamente dito foi detectado pela primeira vez em mulas (no dia 19,9 ± 1,1) em comparação com as éguas (20,4 ± 1,3). O batimento cardíaco foi observado posteriormente em muares (23,4 ± 1,4) do que em éguas (22,6 ± 0,8). O saco alantóide foi detectado pela primeira vez entre os dias 23 e 26 (25,3 ± 1,1 e 24,6 ± 1,0 em mulas e éguas, respectivamente) e o cordão umbilical foi detectado pela primeira vez no dia 39 (39,7 ± 2,1 x 39,6 ± 1,5 em mulas e éguas, respectivamente). Os diâmetros ovarianos para os ovários esquerdo e direito foram semelhantes para as mulas (21,4 ± 0,4 vs. 21,8 ± 0,4 mm) e para as éguas (45,1 ± 0,4 vs 46,0 ± 0,4). Entretanto, o diâmetro ovariano das éguas (45,5 ± 0,3 mm) foi duas vezes maior (P <0,0001) que as mulas (21,6 ± 0,3 mm). Apenas duas mulas apresentaram o CL acessório que foi observado pela primeira vez nos dias 49 e 51. Dentro dos grupos não houve diferenças entre os cornos esquerdo e direito, gravídicos e não-gravídicos. A média geral não foi diferente entre as mulas (24,6 ± 3,1 mm) e as éguas (25,4 ± 0,1 mm). Como conclusão, de acordo com o nosso conhecimento, este é o primeiro estudo comparativo sobre desenvolvimento embrionário e fetal precoce entre mulas acíclicas e éguas receptoras de embriões equinos. Numerosas semelhanças foram encontradas nos aspectos estudados. Tais achados, associados ao fato de que potros vivos e sadios foram produzidos, sugerem que o uso de mulas acíclicas pode ser considerado como uma alternativa para aumentar a disponibilidade de receptoras em programas equinos de TE.

Brazil is one of the countries with the largest number of equine embryo transfers in the world, but recipients mares are scarce and expensive. One alternative is to use acyclic mules as recipients for equine embryos. The aim of this study was to compare for the first time the embryonic and early fetal development in recipient mules and mares from day 10 to 60 of pregnancy. This study was conducted at the Experimental Farm Gralha Azul of the Pontifical Catholic University of Paraná. Five embryo donor mares aged 4 to 10 years were used. Two groups of recipients were used: 10 cyclic mares aged 4 to 15 years (control group), and 7 acyclic mules aged 6 to 12 years. Animals were kept in paddocks and/or stables and had access to water and mineral salt ad libitum, as well as to a source of roughage and concentrate. Donor mares were monitored daily by transrectal ultrasonography (5-MHz linear transducer, A6V Sonoscape, China) after the beginning of estrus. The mares were artificially inseminated using fresh semen from a stallion with proven fertility. Embryo collection from the mares was performed 8 days after ovulation. Before embryo transfer, cyclic recipient mares were examined daily by ultrasonography to use the most synchronous with the donor's ovulation and have not received any hormonal treatment. The acyclic mules were prepared before the embryo transfer with the administration of 17 beta-estradiol (10 mg/mL, 1 mL, i.m.) on the day of the donor's ovulation, and after 2 days when the presence of uterine edema was confirmed, with the administration of Altrenogest (60 mg/mL, 5 mL, i.m.). The pregnancy diagnosis was carried out by ultrasonography 10 days after ovulation in the donor. When the diagnosis was confirmed, ultrasonographic assessment was carried out daily until day 60 of pregnancy. The first day of detection of an embryonic vesicle was Day 10 by ultrasound in both species and day 20.9 ± 1.3 (Mean ±SD), and 21.9 ± 0.9 by transrectal palpation in mules and mares respectively. Fixation of the vesicle occurred on mean day 15.7 ± 1.1 in mules and 16.6 ± 1.7 in mares. The embryo proper was first detected in mules (on day 19.9 ± 1.1) compared to mares (20.4 ± 1.3) The heart beat was observed later in mules (23.4 ± 1.4) than in mares (22.6 ± 0.8). The allantoic sac was first detected between days 23 and 26 (25.3 ± 1.1 and 24.6 ± 1.0 in mules and mares, respectively) and the umbilical cord was first detected on day 39 (39.7 ± 2.1 x 39.6 ± 1.5 in mules and mares, respectively). The ovarian diameters for left and right ovaries were similar for mules (21.4 ± 0.4 vs. 21.8 ± 0.4 mm) and for mares (45.1 ± 0.4 vs. 46.0 ± 0.4). However, the ovarian diameter of the mares (45.5 ± 0.3 mm) was two times larger (P<0.0001) than the mules (21.6 ± 0.3 mm). Within groups there were no differences between left and right and gravid and non-gravid horns. Data were combined for comparison of the endometrial diameter between mules and mares. The overall mean was not different between mules (24.6 3.1 ± 0.1 mm) and mares (25.4 ± 0.1 mm). However, day (P<0.003) and group-by-day (P<0.0001) effects were detected. Only two mules presented accessory CL that was observed for the first time on days 49 e 51. In conclusion, to the best of our knowledge, this is the first comparative study on embryo and early fetal development between noncycling mules and mares used as ET recipients of horse-horse embryos. Numerous similarities in embryo and early fetal development, and endocrinology aspects were seen. The findings of this study in mules, associated with the fact that alive and healthy offspring were produced, the use of mules may be considered as an alternative to increase the availability of recipients in equine ET programs.