Chromosome analysis in Saccodon wagneri (Characiformes) and insights into the karyotype evolution of Parodontidae

Parodontidae is a relatively small group of Neotropical characiform fishes consisting of three genera (Apareiodon, Parodon, and Saccodon) with 32 valid species. A vast cytogenetic literature is available on Apareiodon and Parodon, but to date, there is no cytogenetic data about Saccodon, a genus that contains only three species with a trans-Andean distribution. In the present study the karyotype of S. wagneri was described, based on both conventional (Giemsa staining, Ag-NOR, C-bands) and molecular (repetitive DNA mapping by fluorescent in situ hybridization) methods. A diploid chromosome number of 2n = 54 was observed in both sexes, and the presence of heteromorphic sex chromosomes of the ZZ/ZW type was detected. The W chromosome has a terminal heterochromatin band that occupies approximately half of the long arm, being this band approximately half the size of the Z chromosome. The FISH assay showed a synteny of the 18S-rDNA and 5S-rDNA genes in the chromosome pair 14, and the absence of interstitial telomeric sites. Our data reinforce the hypothesis of a conservative karyotype structure in Parodontidae and suggest an ancient origin of the sex chromosomes in the fishes of this family.(AU)

Parodontidae é um grupo relativamente pequeno de peixes caraciformes neotropicais que consiste em três gêneros (Apareiodon, Parodon e Saccodon) com 32 espécies válidas. Uma vasta literatura citogenética está disponível sobre Apareiodon e Parodon, mas até o momento não há dados citogenéticos sobre Saccodon, um gênero que contém apenas três espécies com distribuição transandina. No presente estudo foi descrito o cariótipo de S. wagneri, baseado em métodos convencionais (coloração de Giemsa, Ag-NOR, bandas C) e moleculares (mapeamento de DNA repetitivo por hibridização fluorescente in situ). Um número cromossômico diplóide de 2n = 54 foi observado, e a presença de cromossomos sexuais heteromórficos do tipo ZZ/ZW foi revelada. O cromossomo W possui uma banda terminal heterocromática que ocupa aproximadamente metade do braço longo, sendo esta banda aproximadamente a metade do tamanho do cromossomo Z. O ensaio FISH mostrou uma sintenia dos genes 18S-rDNA e 5S-rDNA no par de cromossomos 14, e a ausência de sítios teloméricos intersticiais. Nossos dados reforçam a hipótese de uma estrutura cariotípica conservadora em Parodontidae e sugerem uma origem ancestral dos cromossomos sexuais nos peixes desta família.(AU)

Chromosome analysis in Saccodon wagneri (Characiformes) and insights into the karyotype evolution of Parodontidae

Parodontidae is a relatively small group of Neotropical characiform fishes consisting of three genera (Apareiodon, Parodon, and Saccodon) with 32 valid species. A vast cytogenetic literature is available on Apareiodon and Parodon, but to date, there is no cytogenetic data about Saccodon, a genus that contains only three species with a trans-Andean distribution. In the present study the karyotype of S. wagneri was described, based on both conventional (Giemsa staining, Ag-NOR, C-bands) and molecular (repetitive DNA mapping by fluorescent in situ hybridization) methods. A diploid chromosome number of 2n = 54 was observed in both sexes, and the presence of heteromorphic sex chromosomes of the ZZ/ZW type was detected. The W chromosome has a terminal heterochromatin band that occupies approximately half of the long arm, being this band approximately half the size of the Z chromosome. The FISH assay showed a synteny of the 18S-rDNA and 5S-rDNA genes in the chromosome pair 14, and the absence of interstitial telomeric sites. Our data reinforce the hypothesis of a conservative karyotype structure in Parodontidae and suggest an ancient origin of the sex chromosomes in the fishes of this family.(AU)

Parodontidae é um grupo relativamente pequeno de peixes caraciformes neotropicais que consiste em três gêneros (Apareiodon, Parodon e Saccodon) com 32 espécies válidas. Uma vasta literatura citogenética está disponível sobre Apareiodon e Parodon, mas até o momento não há dados citogenéticos sobre Saccodon, um gênero que contém apenas três espécies com distribuição transandina. No presente estudo foi descrito o cariótipo de S. wagneri, baseado em métodos convencionais (coloração de Giemsa, Ag-NOR, bandas C) e moleculares (mapeamento de DNA repetitivo por hibridização fluorescente in situ). Um número cromossômico diplóide de 2n = 54 foi observado, e a presença de cromossomos sexuais heteromórficos do tipo ZZ/ZW foi revelada. O cromossomo W possui uma banda terminal heterocromática que ocupa aproximadamente metade do braço longo, sendo esta banda aproximadamente a metade do tamanho do cromossomo Z. O ensaio FISH mostrou uma sintenia dos genes 18S-rDNA e 5S-rDNA no par de cromossomos 14, e a ausência de sítios teloméricos intersticiais. Nossos dados reforçam a hipótese de uma estrutura cariotípica conservadora em Parodontidae e sugerem uma origem ancestral dos cromossomos sexuais nos peixes desta família.(AU)

Endophytic fungi from Brachiaria grasses in Brazil and preliminary screening of Sclerotinia sclerotiorum antagonists

Fungal endophytes of Brachiaria, a nonhost of Sclerotinia sclerotiorum, may harbor species with antagonistic effects against this plant pathogen. The objective of this work was to investigate the diversity of endophytic fungi associated with different Brachiaria species and hybrids and evaluate their potential to inhibit the plant pathogen S. sclerotiorum. Stem samples from 39 Brachiaria spp. plants were collected in pasture fields and experimental areas of three states of Brazil resulting in 74 endophytes isolated. Twenty-eight species were identified by sequences of the Internal Transcribed Spacer (ITS) and 18S rDNA regions. Paraconiothyrium sp. was the most abundant endophyte, accounting for 24 % (14 isolates) of total, and it was isolated from B. ruziziensis, B. decumbens, B. humidicola, and B. brizantha. Phoma sorghina was the second most abundant taxon, followed by Sarocladium strictum, and Plenodomus sp. In vitro analyses showed that Paraconiothyrium sp., Sarocladium kiliense, Acremonium curvulum, Setophoma terrestris, Dissoconium sp., and Cladosporium flabelliforme exhibited antagonistic activity against S. sclerotiorum, with percentages of growth inhibition ranging from 25 to 60 (p < 0.05). Paraconiothyrium sp. BBXE1 (60 %), BBPB4.1 (60 %), BCMT4.1 (54 %), and S. kiliense (54 %) showed the highest values of Antagonism Percentages (AP). Therefore, fungi with inhibitory activity against S. sclerotiorum such as Paraconiothyrium sp. are naturally endophytic in Brachiaria grasses.

Endophytic fungi from Brachiaria grasses in Brazil and preliminary screening of Sclerotinia sclerotiorum antagonists

Fungal endophytes of Brachiaria, a nonhost of Sclerotinia sclerotiorum, may harbor species with antagonistic effects against this plant pathogen. The objective of this work was to investigate the diversity of endophytic fungi associated with different Brachiaria species and hybrids and evaluate their potential to inhibit the plant pathogen S. sclerotiorum. Stem samples from 39 Brachiaria spp. plants were collected in pasture fields and experimental areas of three states of Brazil resulting in 74 endophytes isolated. Twenty-eight species were identified by sequences of the Internal Transcribed Spacer (ITS) and 18S rDNA regions. Paraconiothyrium sp. was the most abundant endophyte, accounting for 24 % (14 isolates) of total, and it was isolated from B. ruziziensis, B. decumbens, B. humidicola, and B. brizantha. Phoma sorghina was the second most abundant taxon, followed by Sarocladium strictum, and Plenodomus sp. In vitro analyses showed that Paraconiothyrium sp., Sarocladium kiliense, Acremonium curvulum, Setophoma terrestris, Dissoconium sp., and Cladosporium flabelliforme exhibited antagonistic activity against S. sclerotiorum, with percentages of growth inhibition ranging from 25 to 60 (p < 0.05). Paraconiothyrium sp. BBXE1 (60 %), BBPB4.1 (60 %), BCMT4.1 (54 %), and S. kiliense (54 %) showed the highest values of Antagonism Percentages (AP). Therefore, fungi with inhibitory activity against S. sclerotiorum such as Paraconiothyrium sp. are naturally endophytic in Brachiaria grasses.(AU)

First chromosome data on Steindachneridion doceanum (Siluriformes: Pimelodidae): a critically endangered catfish endemic of the Doce River basin, Brazil

The present report represents the first cytogenetic description of Steindachneridion doceanum, great catfish which is currently at high extinction risk and it is listed as threatened on the red list of the Brazilian Ministry of the Environment, also are suggested karyotype relationships with other species of the same genus endemic from other river basins. The results revealed a diploid number of 2n = 56 and the karyotype composed of 18 metacentric, 20 submetacentric, 10 subtelocentric and 8 acrocentric chromosomes (NF = 104). The AgNORs and CMA3 signals were coincident in location occupying the short arm of an acrocentric chromosome pair (25th), in a secondary constriction. The 5S rDNA genes were localized on the short arms of one subtelocentric pair. C-banding revealed terminal blocks on the short arms on many chromosomes as well as terminal positive bands at the both ends of a submetacentric pair. C banding also revealed a large heterochromatic block in the secondary constriction (25th) region that was coincident with the AgNORs sites and CMA3+ bright bands. In spite S. doceanum represent an endemic taxon, in spite their geographic isolation their cytogenetic characteristics show similarities with other species of the genus.(AU)

O presente trabalho apresenta a primeira descrição citogenética de Steindachneridion doceanum, grande bagre que se encontra atualmente em alto risco de extinção e listado como ameaçado na lista vermelha do Ministério do Meio Ambiente, também sugere relações cariotípicas com outras espécies do mesmo gênero, endêmicas de outras bacias hidrográficas. Os resultados revelaram um número diplóide de 56 cromossomos e o cariótipo composto por 18 elementos metacêntricos, 20 submetacêntricos, 10 subtelocêntricos e 8 acrocêntricos (NF = 104). As marcações AgNORs e CMA3 foram coincidentes ocupando o braço curto de um par de cromossomos acrocêntricos (par 25), em uma constrição secundária. Os genes 5S rDNA foram detectados nos braços curtos de um par subtelocêntrico. A banda C revelou blocos terminais nos braços curtos em vários cromossomos, bem como blocos terminais nas duas extremidades de um par submetacêntrico. A banda C também evidenciou um grande bloco heterocromático na constrição secundária (par 25) coincidente com os sítios AgNORs e as bandas CMA3 positivas. Apesar de S. doceanum representar um táxon endêmico, suas características citogenéticas mostram semelhanças com outras espécies do gênero das quais se encontra geograficamente isolado.(AU)

First chromosome data on Steindachneridion doceanum (Siluriformes: Pimelodidae): a critically endangered catfish endemic of the Doce River basin, Brazil

The present report represents the first cytogenetic description of Steindachneridion doceanum, great catfish which is currently at high extinction risk and it is listed as threatened on the red list of the Brazilian Ministry of the Environment, also are suggested karyotype relationships with other species of the same genus endemic from other river basins. The results revealed a diploid number of 2n = 56 and the karyotype composed of 18 metacentric, 20 submetacentric, 10 subtelocentric and 8 acrocentric chromosomes (NF = 104). The AgNORs and CMA3 signals were coincident in location occupying the short arm of an acrocentric chromosome pair (25th), in a secondary constriction. The 5S rDNA genes were localized on the short arms of one subtelocentric pair. C-banding revealed terminal blocks on the short arms on many chromosomes as well as terminal positive bands at the both ends of a submetacentric pair. C banding also revealed a large heterochromatic block in the secondary constriction (25th) region that was coincident with the AgNORs sites and CMA3+ bright bands. In spite S. doceanum represent an endemic taxon, in spite their geographic isolation their cytogenetic characteristics show similarities with other species of the genus.(AU)

O presente trabalho apresenta a primeira descrição citogenética de Steindachneridion doceanum, grande bagre que se encontra atualmente em alto risco de extinção e listado como ameaçado na lista vermelha do Ministério do Meio Ambiente, também sugere relações cariotípicas com outras espécies do mesmo gênero, endêmicas de outras bacias hidrográficas. Os resultados revelaram um número diplóide de 56 cromossomos e o cariótipo composto por 18 elementos metacêntricos, 20 submetacêntricos, 10 subtelocêntricos e 8 acrocêntricos (NF = 104). As marcações AgNORs e CMA3 foram coincidentes ocupando o braço curto de um par de cromossomos acrocêntricos (par 25), em uma constrição secundária. Os genes 5S rDNA foram detectados nos braços curtos de um par subtelocêntrico. A banda C revelou blocos terminais nos braços curtos em vários cromossomos, bem como blocos terminais nas duas extremidades de um par submetacêntrico. A banda C também evidenciou um grande bloco heterocromático na constrição secundária (par 25) coincidente com os sítios AgNORs e as bandas CMA3 positivas. Apesar de S. doceanum representar um táxon endêmico, suas características citogenéticas mostram semelhanças com outras espécies do gênero das quais se encontra geograficamente isolado.(AU)

Caracterização molecular de novas linhagens de Trypanosoma em aves no Parque Nacional do Itatiaia (RJ/MG) e na Zona da Mata Mineira (MG), Brasil

A Mata Atlântica é considerada um dos 34 hotspots de biodiversidade do planeta devido à alta riqueza de espécies e endemismo, entretanto as ações antrópicas que ocorrem nesse bioma vêm contribuindo para o declínio faunístico e particularmente, infecções por hemoparasitas podem ser mais uma ameaça para as aves desse ecossistema. Desta forma, compreender a diversidade, os padrões de distribuição e os aspectos evolutivos desses parasitos nos hospedeiros aviários é importante para projetar ações em programas de conservação. Neste estudo, amostras de sangue de 188 aves silvestres foram submetidas a análise genética com PCR convencional através da sequência 18S rDNA para identificação de Trypanosoma spp, resultando no total de 15 amostras positivas; sete espécimes provenientes do Parque Nacional de Itatiaia (RJ/MG), sendo duas em Turdus. flavipes e cinco em T. albicollis, assim como nas áreas de captura pertencentes a Zona da Mata Mineira para seis indivíduos da espécie Tachyphonus coronatus, uma espécie de Thamnophilus caerulescens e uma de Synallaxis spixi. Foram submetidos ao sequenciamento 5 clones de cada reação de PCR, totalizando 15 sequências de cada espécime de ave avaliada. Todas as 15 sequências obtidas de T. albicollis e de T. flavipes foram idênticas entre si. Nos seis espécimes de T. coronatus foram observadas 5 sequências distintas. Todas as sequências de T. caerulescens e S. spixi foram idênticas entre si. Utilizando a estratégia de clonagem de reações de PCR diferentes, foi possível observar em um dos espécimes de T. coronatus duas sequências de Trypanosoma distintas, o que evidencia uma provável co-infecção. A reconstrução filogenética mostrou o agrupamento das sete novas linhagens com parasitos do gênero Trypanosoma. As novas linhagens agruparam-se em dois clados. As linhagens JB03, JB04, JB05, ITA01 e ITA02 agruparam-se junto à espécie Trypanosoma bennetti. As linhagens JB01 e JB02 agruparam-se externamente aos clados das espécies T. avium, T. cullicavium e T. corvi. As novas linhagens de trypanosoma encontradas neste estudo agruparam-se com linhagens com ocorrência registrada na Europa, Ásia e África. De acordo com os dados de distância evolutiva obtidos no presente estudo podemos observar que uma mesma linhagem genética de Trypanosoma sp. é capaz de infectar diferentes espécies de aves, assim como uma mesma espécie de ave pode ser infectada por mais de uma linhagem de Trypanosoma sp. O presente estudo, de modo inédito, é o primeiro a acessar a diversidade molecular de parasitos do gênero Trypanosoma em aves no Brasil. Até então, todos os estudos relacionados a tripanosomas aviários basearam-se principalmente em relatos de ocorrência em esfregaços sanguíneos de aves em estudos voltados a hemoparasitos em geral. Para o Brasil este estudo pioneiro fornece métodos possíveis para investigar a diversidade de tripanosomas aviários e mostra o grande potencial que existe para ser explorado neste grupo de parasitos. Pelos resultados deste estudo acreditamos que o Brasil, pelas grandes dimensões territoriais e a grande biodiversidade de aves hospedeiras e insetos vetores, possa ser um dos mais ricos em espécies de tripanosomas aviários no mundo.

The Atlantic Forest is considered one of the 34 biodiversity hotspots on the planet due to its high species richness and endemism, however the anthropic actions that occur in this biome have contributing to the faunal decline and particularly, hemoparasite infections may be further threat to the birds of this ecosystem. Thus, understanding the diversity, distribution patterns and evolutionary aspects of these parasites in wild bird hosts is important to design actions in conservation programs. In this study, blood samples from 188 wild birds were subjected to conventional PCR genetic analysis using 18S rDNA sequence to identify Trypanosoma spp resulting in a total of 15 positive samples; seven specimens from the Itatiaia National Park (RJ / MG), two in Turdus flavipes and five in T. albicollis, as well as in the capture areas belonging to Zona da Mata Mineira for six individuals of the species Tachyphonus coronatus, one species of Thamnophilus caerulescens and one of Synallaxis spixi. Five clones from each PCR reaction were submitted to sequencing, totaling 15 sequences from each bird specimen evaluated. All 15 sequences obtained from T. albicollis and T. flavipes were identical to each other. In the six specimens of T. coronatus, 5 distinct sequences were observed. All strings of T.caerulescens and S. spixi were identical to each other. Using a strategy of cloning different PCR sequences, it was possible to observe one of the examples of T. coronatus two sequences of different trypanosomatics, or with probable evidence of co-infection. Phylogenetic reconstruction showed the grouping of the seven new strains with parasites of the genus Trypanosoma. The new strains were grouped into two clades. The lines JB03, JB04, JB05, ITA01 and ITA02 are grouped together with the species Trypanosoma bennetti. As the lines JB01 and JB02 are grouped externally to the groups of species T. avium, T. cullicavium and T. corvi. As the new trypanosome lines found in this study are grouped with occurrence lines recorded in Europe, Asia and Africa. According to the evolutionary distance data selected in the present study, we can observe the same genetic strain of Trypanosoma sp. is capable of infecting different species of birds, just as the same bird species can be infected by another strain of Trypanosoma sp. This study, in an unprecedented way, is the first to access a molecular diversity of parasites of the genus Trypanosoma in birds in Brazil. Until then, all studies related to avian trypanosomes were based mainly on reports of occurrence in blood smears of birds in studies aimed at hemoparasites in general. For Brazil, this pioneering study selected possible methods to research a diversity of avian trypanosomes and shows the great potential that exists to be explored in this group of parasites. Due to the results of this study accredited in Brazil, due to its large territorial dimensions and the great biodiversity of hosted birds and insect vectors, it may be one of the richest species of avian trypanosomes in the world.

Caracterização molecular de Sarcocystis spp. em aves silvestres de diversas classes taxonômicas: relações entre Sarcocystis falcatula, Sarcocystis neurona e organismos correlacionados prevalentes no Brasil

Sarcocystis são parasitos coccidios intracelulares caracterizados por um ciclo de vida obrigatório em dois hospedeiros. Multiplicação assexuada do parasito ocorre em hospedeiros intermediários, geralmente onívoros, com formação de cistos na musculatura. A fase sexual, com formação de oocistos/esporocistos, ocorre no intestino delgado de hospedeiros definitivos, geralmente carnívoros. Mais de 30 espécies de Sarcocystis são reconhecidas em aves e algumas delas, como S. falcatula e S. calchasi, podem ser patogênicas para hospedeiros aberrantes. Em aves que atuam como hospedeiros intermediários, a infecção ocorre pela ingestão de alimentos ou água contaminados com esporocistos. Aves que atuam como hospedeiros definitivos se infectam pelo consumo de tecidos contendo cistos. Poucos estudos em sarcocistose aviária têm sido realizados na América do Sul. No presente estudo, investigamos a presença de coccidios formadores de cistos na musculatura de aves silvestres coletadas pela Divisão Técnica de Medicina Veterinária e Gestão da Fauna Selvagem (DEPAVE-3) no estado de São Paulo, Brasil. Amostras de músculo peitoral de 400 aves pertencentes a 103 espécies foram submetidas a extração e amplificação de DNA pela nPCR-ITS1 direcionada à sequência do primeiro espaço transcrito interno do DNA ribossômico para triagem das amostras. Estes primers permitem a detecção de uma ampla diversidade de organismos pertencentes a família Sarcocystidae, pois hibridizam em regiões conservadas dos genes codificadores de DNA ribossômico 18S e 5.8S. Em amostras positivas na nPCR-ITS1, outros fragmentos gênicos foram amplificados por PCR. Amostras relacionadas com S. falcatula foram caracterizadas com sequências gênicas codificadoras de antígenos de superfície (SAGs) e nas demais amostras, genes mais conservados como citocromo c oxidase subunidade I (COX1) e a fração do gene do DNA ribossômico (18S rDNA) foram amplificados. Os produtos amplificados foram sequenciados, em todos os casos. Com esta metodologia, 36 amostras positivas na nPCR-ITS1, foram relacionadas com S. falcatula, das quais 28 foram identificadas como S. falcatula (10 Piciformes, 8 Psittaciformes, 5 Columbiformes, 2 Accipitriformes, 1 Anseriformes, 1 Passeriformes, 1 Strigiformes), 7 como Sarcocystis sp. ex Cacicus haemorrhous (6 Passeriformes, 1 Piciformes), e uma como Sarcocystis sp. ex Guira guira (1 Cuculiforme). As duas últimas espécies são inéditas. Dez amostras de outros Sarcocystídeos também foram amplificadas na nPCR-ITS1, das quais uma foi identificada como S. halieti (1 Accipitriformes), seis como Toxoplasma gondii (3 Pelecaniformes, 2 Falconiformes, 1 Columbiformes), uma como Sarcocystis sp. ex Coragyps atratus (1 Cathartiformes) e uma como Atoxoplasma sp. ex Icterus jamacaii (1 Passeriformes). As duas últimas espécies são inéditas. Este estudo é a primeira pesquisa extensiva em aves silvestres no Brasil para espécies de Sarcocistídeos, relatando pela primeira vez infecção natural com S. falcatula em 14 espécies incluindo a Ordem Piciformes e mostrando a ampla diversidade de hospedeiros intermediários da América do Sul para Sarcocystis spp.

Sarcocystis are intracellular coccidial parasites characterized by an obligatory life cycle in two hosts. Asexual multiplication of the parasite occurs in intermediate hosts, usually omnivores, with formation of cysts in the musculature. The sexual phase, with formation of oocysts / sporocysts, occurs in the small intestine of definitive hosts, usually carnivores. More than 30 species of Sarcocystis are recognized in birds and some of them, such as S. falcatula and S. calchasi, may be pathogenic for aberrant hosts. In birds that act as intermediate hosts, infection occurs by ingesting food or water contaminated with sporocysts. Birds that act as definitive hosts become infected by consuming tissue containing cysts. Few studies on avian sarcocystosis have been conducted in South America. Herein, we investigated the presence of cyst-forming coccidia in wild bird musculature collected by the Technical Division of Veterinary Medicine and Management of Wild Fauna (DEPAVE-3) in the state of São Paulo Brazil. Pectoral muscle samples from 400 birds belonging to 103 species were subjected to DNA extraction, and amplification by nPCR-ITS1 directed to the sequence of the first internal transcribed ribosomal DNA space for sample screening. These primers allow the detection of a wide diversity of organisms belonging to the Sarcocystidae family, as they hybridize in conserved regions of 18S and 5.8S ribosomal DNA coding genes. In nPCR-ITS1 positive samples, other gene fragments were amplified by PCR. S. falcatula-related samples were characterized with surface antigen coding gene sequences (SAGs), and in the other samples, more conserved genes such as cytochrome c oxidase subunit I (COX1) and the ribosomal DNA gene fraction (18S rDNA) were amplified. Amplified products were sequenced in all cases. With this methodology, 36 nPCR-ITS1 positive samples were related to S. falcatula, of which 28 were identified as S. falcatula (10 Piciformes, 8 Psittaciformes, 5 Columbiformes, 2 Accipitriformes, 1 Anseriformes, 1 Passeriformes, 1 Strigiformes), 7 as Sarcocystis sp. ex Cacicus haemorrhous (6 Passeriformes, 1 Piciformes), and one as Sarcocystis sp. ex Guira guira (1 Cuculiformes). The last two species are unpublished. Ten samples of other Sarcocystids were also amplified in nPCR-ITS1, one of which was identified as S. halieti (1 Accipitriformes), six as Toxoplasma gondii (3 Pelecaniformes, 2 Falconiformes, 1 Columbiformes), one as Sarcocystis sp. ex Coragyps atratus (1 Cathartiformes) and one as Atoxoplasma sp. ex Icterus jamacaii (1 Passeriformes). The last two species are unpublished. This study is the first extensive survey of wild birds in Brazil for Sarcocistydae species, reporting for the first-time natural S. falcatula infection in 14 species including the Order Piciformes and showing the wide diversity of South American intermediate hosts for Sarcocystis spp.

Molecular characterization of a Xylanase-producing fungus isolated from fouled soil

Xylanase (EC 3. 2. 1. 8), hydrolyzes xylo-oligosaccharides into D-xylose and required for complete hydrolysis of native cellulose and biomass conversion. It has broad range of applications in the pulp and paper, pharmaceutical and Agri-food industries. Fifty fungal species were isolated from the fouled soil around an oil refinery and screened for the production of xylanase enzyme by enrichment culture techniques. The isolated fungal strain was identified as Hypocrea lixii SS1 based on the results of biochemical tests and 18s rRNA sequencing. The phylogenetic tree was constructed using the MEGA 5 software. Further, Hypocrea lixii SS1 was tested for the ability to utilize the sunflower oil sludge (waste from the oil industry) as the sole carbon source for xylanase production. The growth characteristics of Hypocrea lixii SS1 were also studied and maximum growth was found on the 7th day of incubation. The fungus showed a remarkable xylanase production of 38.9 U/mL. Xylanase was purified using a combination of 0-50% NH4SO2 precipitation, DEAE-sepharose and Sephacryl S-200 chromatography. Single peak obtained in RP-HPLC confirms the purity of xylanase. Further the enzyme produced was affirmed as xylanase with its molecular weight (29 kDa) using SDS-PAGE.

Morphology and 18S rDNA gene sequence of Spirostomum minus and Spirostomum teres (Ciliophora: Heterotrichea) from Rio de Janeiro, Brazil

Species of Spirostomum Ehrenberg, 1838 are widely used as model organisms in ecological studies of environmental impacts and symbioses between ciliates and human pathogenic bacteria. However, the taxonomy of this genus is confused by the superficiality of the morphological descriptions of its included species, and the use of only a few characters for their differentiation. The present study provides details of total infraciliature, nuclear apparatus, morphometric data and 18S rDNA gene sequences of Spirostomum teres Claparède & Lachmann, 1858 and Spirostomum minus Roux, 1901, isolated from a sewage treatment plant and a freshwater lake in the city of Rio de Janeiro, Brazil, respectively. For the morphological descriptions of S. teres and S. minus, living cells were observed using bright-field and differential interference contrast (DIC) microscopy, the total infraciliature and nuclear apparatus were revealed by staining with protargol, and ciliary patterns were observed also with scanning electron microscopy (SEM). The complete sequences of the 18S rDNA of S. teres and S. minus were obtained using eukaryotic universal primers, and then compared with sequences of other species and populations of Spirostomum deposited in the GenBank database. Living S. minus measured 400-800 µm in length and 55-115 µm in width, with the following characteristics: adoral zone of membranelles approximately 112 µm long; inconspicuous paroral kinety; 30-40 kineties in somatic ciliature; moniliform macronucleus with 9-25 nodes, approximately 12 micronuclei; single and posterior contractile vacuole; and yellow-brown cytoplasm. Living and fully extended S. teres measured approximately 250 µm in length and 65 ìm in width, with the following characteristics: adoral zone of membranelles approximately 92 µm long; approximately 30 somatic kineties; compact macronucleus, approximately five micronuclei; macronuclear groove present; single and posterior contractile vacuole; and colorless cytoplasm. Evidence from 18S rDNA sequences confirms the identification of S. teres and suggests the existence of cryptic species closely related to S. minus. The use of silver impregnation technique (protargol) allowed the observation and description of a greater number of characters in S. minus and S. teres, thus assisting the research that require identification of these species.

Morphology and 18S rDNA gene sequence of Spirostomum minus and Spirostomum teres (Ciliophora: Heterotrichea) from Rio de Janeiro, Brazil

Species of Spirostomum Ehrenberg, 1838 are widely used as model organisms in ecological studies of environmental impacts and symbioses between ciliates and human pathogenic bacteria. However, the taxonomy of this genus is confused by the superficiality of the morphological descriptions of its included species, and the use of only a few characters for their differentiation. The present study provides details of total infraciliature, nuclear apparatus, morphometric data and 18S rDNA gene sequences of Spirostomum teres Claparède & Lachmann, 1858 and Spirostomum minus Roux, 1901, isolated from a sewage treatment plant and a freshwater lake in the city of Rio de Janeiro, Brazil, respectively. For the morphological descriptions of S. teres and S. minus, living cells were observed using bright-field and differential interference contrast (DIC) microscopy, the total infraciliature and nuclear apparatus were revealed by staining with protargol, and ciliary patterns were observed also with scanning electron microscopy (SEM). The complete sequences of the 18S rDNA of S. teres and S. minus were obtained using eukaryotic universal primers, and then compared with sequences of other species and populations of Spirostomum deposited in the GenBank database. Living S. minus measured 400-800 µm in length and 55-115 µm in width, with the following characteristics: adoral zone of membranelles approximately 112 µm long; inconspicuous paroral kinety; 30-40 kineties in somatic ciliature; moniliform macronucleus with 9-25 nodes, approximately 12 micronuclei; single and posterior contractile vacuole; and yellow-brown cytoplasm. Living and fully extended S. teres measured approximately 250 µm in length and 65 ìm in width, with the following characteristics: adoral zone of membranelles approximately 92 µm long; approximately 30 somatic kineties; compact macronucleus, approximately five micronuclei; macronuclear groove present; single and posterior contractile vacuole; and colorless cytoplasm. Evidence from 18S rDNA sequences confirms the identification of S. teres and suggests the existence of cryptic species closely related to S. minus. The use of silver impregnation technique (protargol) allowed the observation and description of a greater number of characters in S. minus and S. teres, thus assisting the research that require identification of these species.

Morphology and 18S rDNA gene sequence of Spirostomum minus and Spirostomum teres (Ciliophora: Heterotrichea) from Rio de Janeiro, Brazil

Species of Spirostomum Ehrenberg, 1838 are widely used as model organisms in ecological studies of environmental impacts and symbioses between ciliates and human pathogenic bacteria. However, the taxonomy of this genus is confused by the superficiality of the morphological descriptions of its included species, and the use of only a few characters for their differentiation. The present study provides details of total infraciliature, nuclear apparatus, morphometric data and 18S rDNA gene sequences of Spirostomum teres Claparède & Lachmann, 1858 and Spirostomum minus Roux, 1901, isolated from a sewage treatment plant and a freshwater lake in the city of Rio de Janeiro, Brazil, respectively. For the morphological descriptions of S. teres and S. minus, living cells were observed using bright-field and differential interference contrast (DIC) microscopy, the total infraciliature and nuclear apparatus were revealed by staining with protargol, and ciliary patterns were observed also with scanning electron microscopy (SEM). The complete sequences of the 18S rDNA of S. teres and S. minus were obtained using eukaryotic universal primers, and then compared with sequences of other species and populations of Spirostomum deposited in the GenBank database. Living S. minus measured 400-800 µm in length and 55-115 µm in width, with the following characteristics: adoral zone of membranelles approximately 112 µm long; inconspicuous paroral kinety; 30-40 kineties in somatic ciliature; moniliform macronucleus with 9-25 nodes, approximately 12 micronuclei; single and posterior contractile vacuole; and yellow-brown cytoplasm. Living and fully extended S. teres measured approximately 250 µm in length and 65 ìm in width, with the following characteristics: adoral zone of membranelles approximately 92 µm long; approximately 30 somatic kineties; compact macronucleus, approximately five micronuclei; macronuclear groove present; single and posterior contractile vacuole; and colorless cytoplasm. Evidence from 18S rDNA sequences confirms the identification of S. teres and suggests the existence of cryptic species closely related to S. minus. The use of silver impregnation technique (protargol) allowed the observation and description of a greater number of characters in S. minus and S. teres, thus assisting the research that require identification of these species.(AU)

Detection and molecular characterization of Sarcocystis spp. in tissue of sheep slaughtered in southern Brazil

Sarcocystis spp. são coccídeos, intracelulares obrigatórios, de ciclo heteróxeno, que são capazes de infectar uma gama grande de hospedeiros. Dentre as espécies de Sarcocystis, existem algumas diferenças em relação ao ciclo e patogenicidade, porém a formação de cistos teciduais é uma característica comum dentro do gênero. Em ovinos, as espécies de Sarcocystis que comumente estabelecem infecção são: Sarcocystis tenella e Sarcocystis arieticanis que apresentam a característica de formar cistos microscópicos e podem causar doença clínica ou infecção subclínica nesses animais, e Sarcocystis gigantea e Sarcocystis medusiformis formam cistos macroscópicos e apesar de não apresentarem potencial patogênico, podem acarretar relevantes perdas econômicas relacionadas a condenações de órgãos e carcaças em frigoríficos. As duas primeiras espécies apresentam canídeos como hospedeiros definitivos, enquanto as duas últimas tem como hospedeiros definitivos os felídeos. A sarcocistose é uma infecção disseminada por todo o mundo, apresentando altas taxas de ocorrência principalmente em países em desenvolvimento. No Brasil apesar de alguns estudos já demostrarem a presenças de Sarcocystis nos ovinos, os dados ainda são escassos e a epidemiologia da doença ainda é pouco conhecida. Tendo em vista a importância da infecção por Sarcocystis spp. nos ovinos, e a fim de preencher as lacunas existentes sobre essa questão este trabalho foi desenvolvido com intuito de pesquisar a ocorrência de Sarcocystis spp. em ovinos abatidos em Santa Maria e em Santiago, bem como, verificar a presença de DNA de Sarcocystis spp. nas amostras avaliadas, e identificar as espécies de Sarcocystis spp. nas amostras através da técnica de sequenciamento genético. Para a realização da reação de PCR foi selecionado o gene 18S rDNA, seguido de sequenciamento de amostras para identificar as diferentes espécies de Sarcocystis spp. Das 130 amostras analisadas, 10 foram positivas para presença de cistos macroscópicos, onde através da PCR se constatou S. gigantea, e este resultado foi confirmado pelo sequenciamento genético. Enquanto, cistos microscópicos foram encontrados em 125 animais, onde a PCR identificou a presença de S. tenella. Destas 125 amostras, 10 foram submetidas ao sequenciamento genético que confirmou a presença de S. tenella. A frequência de cistos microscópicos foi alta, embora esse não seja um dado surpreendente. Os cistos macroscópicos foram encontrados apenas no esôfago. Este trabalho traz a primeira confirmação molecular da presença de S. gigantea no Brasil.

Sarcocystis spp. are intracellular protozoan parasites with an intermediate-definitive host life cycle and can infect a wide range of animals. There are some differences among the Sarcocystis species related to the life cycle and pathogenicity, but the formation of tissue cysts is a common characteristic within the genus. In sheep, Sarcocystis species that commonly cause infection are Sarcocystis tenella, Sarcocystis arieticanis, Sarcocystis gigantea and Sarcocystis medusiformis. S tenella and S. arieticanis present canids as definitive hosts, form microscopic cysts and can cause clinical disease or subclinical infection. On the other hand, S. gigantea and S. medusiformis which have felids as definitive hosts form macroscopic cysts and, although these Sarocystis species do not have pathogenic potential in sheep, the presence of macrocysts cause condemnation of sheep meat and organs. Sarcocystosis is a widespread infection, with high occurrence rates mainly in developing countries. Although some studies have already demonstrated the presence of Sarcocystis species in sheep breeding in Brazil, more knowledge about sheep Sarcocystosis epidemiology is essential. Therefore, the aims of this study were to investigate the occurrence of Sarcocystis spp. in sheep slaughtered in Santa Maria and Santiago, as well as to check the presence of Sarcocystis spp. DNA in the evaluated samples and to identificate the Sarcocystis species through genetic sequencing. A part of the18S rDNA gene was selected for PCR amplification, followed by genetic sequencing aiming Sarcocystis species identification. Ten of the 130 sheep had macrocysts and all of these macrocysts were confirmed as S. gigantea. Micro cysts were found in 125 animals. All microcysts were of the Sarcocystis genus as shown by PCR amplification. Ten of these samples, randomly selected for gene sequencing, were confirmed as S. tenella. The frequency of microscopic cysts was high, although this is not surprising. Macroscopic cysts were found only in the esophagus. This study presents the first molecular confirmation of the presence of S. gigantea in Brazil

Karyotype differentiation and cytotaxonomic considerations in species of Serrasalmidae (Characiformes) from the Amazon basin

Six species of Serrasalmidae from the central Amazon, representatives of the genera Serrasalmus (S. elongatus, S. maculatus, S. cf. rhombeus, and S. rhombeus), Pygocentrus (P. nattereri), and Colossoma (C. macropomum), were analyzed regarding the distribution of the Ag-NORs, C-positive heterochromatin and 18S and 5S rRNA genes on the chromosomes. All specimens had 2n = 60 chromosomes, except S. cf. rhombeus, with 2n = 58, and C. macropomum with 2n = 54 chromosomes. The Ag-NORs were multiple and located on the short arms of subtelo-acrocentric chromosomes in all Serrasalmus species and in P. nattereri, but were found on metacentric chromosomes in C. macropomum. The 18S rDNA sites were usually coincident with Ag-NORs, although some species had a higher number and/or a distinct localization of these sites. C-positive heterochromatin was preferentially situated in centromeric regions, remarkably on metacentric pair number 7 in all Serrasalmus species and number 3 in P. nattereri, which beared a conspicuous proximal C-band on the long arms. The 5S rDNA sites were detected in a single chromosomal pair in all species. In Serrasalmus and P. nattereri, this pair was the number 7 and 3, respectively, thereby revealing its co-localization with the conspicuous heterochromatic band. However, in C. macropomum, only one homologue (probably belonging to pair number 12) exhibited 5S rDNA sites on the short arms, close to the centromere. The present data revealed reliable cytotaxonomic markers, enabling the evaluation of karyotype differentiation and interrelationships among Serrasalmidae, as well as the probable occurrence of a species complex in S. rhombeus.(AU)

Seis espécies de Serrasalmidae da Amazônia central, representantes dos gêneros Serrasalmus (S. elongatus, S. maculatus, S. cf. rhombeus e S. rhombeus ), Pygocentrus (P. nattereri) e Colossoma (C. macropomum), foram analisadas quanto à distribuição das Ag-RONs, heterocromatina C-positiva e dos genes de RNAr 18S e 5S nos cromossomos. Todos os espécimes apresentaram 2n = 60 cromossomos, exceto S. cf. rhombeus, com 2n = 58, e C. macropomum com 2n = 54 cromossomos. As Ag-RONs foram múltiplas e localizadas nos braços curtos de cromossomos subtelo-acrocêntricos em todas as espécies de Serrasalmus e em P. nattereri, mas foram encontrados em cromossomos metacêntricos em C. macropomum. Os sítios de DNAr 18S, foram geralmente coincidentes com as Ag-RONs, embora algumas espécies tenham apresentado um maior número e/ou uma localização distinta desses sítios. A heterocromatina C-positiva foi preferencialmente encontrada como uma conspícua banda proximal no par metacêntrico número 7 em todas as espécies de Serrasalmus e número 3 em P. nattereri. Os sítios de DNAr 5S foram detectados em um único par cromossômico nas seis espécies sendo que nas espécies de Serrasalmus, este par foi o de número 7 e em P. nattereri o de número 3, colocalizados com bandas heterocromáticas conspícuas. No entanto, em C. macropomum, apenas um homólogo (provavelmente pertencente ao par número 12) apresentou sítios de DNAr 5S nos braços curtos, próximos ao centrômero. Os dados apresentados revelaram confiáveis marcadores citotaxonômicos, permitindo a avaliação da diferenciação cariotípica, e as inter-relações entre Serrasalmidae, bem como a provável ocorrência de um complexo de espécies em S. rhombeus.(AU)

Pesquisa de coccídios da família Sarcocystidae em pinguins-de-magalhães (Spheniscus magellanicus) encalhados na costa brasileira

O gênero Sarcocystis é constituído por várias espécies que se diferenciam pelas características morfológicas, biológicas e moleculares. Foram relatadas mais de 196 espécies encontradas em mamíferos, aves e répteis e somente 26 dessas espécies possuem o ciclo completo conhecido. Toxoplasma gondii é um parasito intracelular obrigatório, com distribuição geográfica cosmopolita, capaz de infectar uma ampla variedade de mamíferos e aves, inclusive o homem, caracterizando seu potencial zoonótico. Nas últimas décadas, a quantidade de pinguins vindos da Patagônia argentina e chilena, região de nascimento dessas aves, para o litoral brasileiro, onde muitos encalham e são resgatados, tem aumentado significativamente. Pouco se sabe sobre as doenças causadas por protozoários nessas aves. O presente estudo teve como objetivo conhecer aspectos epidemiológicos da infecção por coccídios da família Sarcocystidae em pinguins-de-magalhães (Spheniscus magellanicus), através de análises moleculares e sorológicas. Foram realizadas duas campanhas, uma em 2014 e outra em 2015, com a finalidade de obter amostras de sangue e tecidos dos pinguins que vieram a óbito durante reabilitação no Instituto de Pesquisa e Reabilitação de Animais Marinhos (IPRAM) localizada em Cariacica, Espírito Santo. Foram colhidas 514 amostras de tecidos (músculo=342, coração=86, cérebro=86) de 310 indivíduos. Dos tecidos de 54 pinguins foi realizado o bioensaio em camundongos para o isolamento de T. gondii, mas nenhum isolado foi obtido. Amostras de 310 indivíduos tiveram o DNA extraído para a pesquisa de coccídios da família Sarcocystidae utilizando-se os marcadores 18S rDNA, espaçador interno transcrito 1 (ITS1), codificador de proteínas de superfície (SAG)2, SAG3 e SAG4, subunidade beta da RNA polimerase (RPOB) e citocromo B (CytB). Destas, 16 (3.0%) amostras de músculo peitoral foram positivas para o gênero Sarcocystis spp., quando analisadas pelo marcador 18S, e todas com resultados idênticos. Com o ITS1, RPOB e Ctv. foram confirmadas as espécies de Sarcocystis em 12 amostras, todas idênticas a S. falcatula-like. Com os marcadores SAGs foi possível observar que as sequências não tinham variabilidade genética. Das 145 amostras de soro avaliadas para a presença de anticorpos anti-T. gondii, pelo Teste de Aglutinação Modificado (MAT 20), 18 aves foram positivas com títulos de: 20 (7 aves), 40 (9 aves) e 80 (2 aves). Este é o primeiro relato de S. falcatula-like e de anticorpos anti - T. gondii em pinguins-de-magalhães de vida livre.

The genus Sarcocystis is composed of several species that are differentiated by the morphological, biological and molecular characteristics. More than 196 species found in mammals, birds and reptiles have been reported, and only 26 of these species have the complete known cycle. Toxoplasma gondii is an obligate intracellular parasite with cosmopolitan geographic distribution, capable of infecting a wide variety of mammals and birds, including man, characterizing its zoonotic potential. In recent decades, the number of penguins that have come from Argentine and Chilean Patagonia, the region of birth of these birds, to the Brazilian coast, where many of them are stranded and rescued, has increased significantly. Little is known about the diseases caused by protozoa in these birds. The present study had as objective to study epidemiological aspects of coccidia infection of the family Sarcocystidae in Magellanic Penguins (Spheniscus magellanicus), through molecular and serological analyzes. Two campaigns were carried out, one in 2014 and another in 2015, in order to obtain blood and tissue samples from penguins who died during rehabilitation at the Institute of Research and Rehabilitation of Marine Animals (IPRAM) in the municipality of Cariacica, Espírito Santo. Tissue samples (total = 514: muscle = 342, heart = 86, brain = 86) were collected from 310 birds. From the tissues of 54 penguins the mouse bioassay was performed for the isolation of T. gondii, but no isolates were obtained. Samples of 310 individuals had DNA extracted for coccidia from the Sarcocystidae family using the 18S rDNA, Transcribed internal spacer 1(ITS1), surface protein encoder (SAG)2, SAG3, SAG4, beta subunit of RNA polymerase (RPOB) and citocrome B (CytB) markers. Of these, 16 (3.0%) samples, of pectoral muscle, were positive and all were identical to Sarcocystis spp. when analyzed by the 18S marker. With ITS1, RPOB and CytB the Sarcocystis species were confirmed in 12 samples, all identical to S. falcatula-like. With the SAGs it was possible to observe that the sequences had no genetic variability. Of the 145 serum samples evaluated for the presence of anti-T. gondii antibodies by Modified Agglutination Test (MAT 20), 18 were positive with titers of: 20 (7 birds), 40 (9 birds) and 80 (2 birds). This is the first report of S. falcatula-like and the presence of antibodies to T. gondii in free-living magellanic penguins.

DETECÇÃO DA INFECÇÃO POR Neospora spp. EM EQUÍDEOS

Em equídeos, a neosporose é causada pelos coccídeos Neospora caninum e N. hughesi. O primeiro está associado a abortamentos e doença neonatal, e N. hughesi, a ocorrência da Mieloencefalite Protozoária Equina (MPE) em muares e equinos, sendo identificada apenas nestas espécies animais. A diferenciação sorológica entre N. caninum e N. hughesi ainda não é possível devido à reatividade cruzada entre anticorpos contra esses parasitos. Apesar de já relatada a exposição de asininos a Neospora spp., o seu papel como possível hospedeiro não foi elucidado. Objetivou-se no estudo corrente determinar a frequência de infecção, por reatividade sorológica e detecção molecular, de Neospora spp. em equídeos e isolar in vitro cepa(s) de Neospora spp. a partir de tecido de equinos e asininos soropositivos. A reação de imunofluorescência indireta para Neospora spp. foi realizada em 142 amostras sorológicas de equinos e 150 soros de asininos, com ponto de corte de 1:50. Amostras de cérebro de equinos e asininos foram testadas por meio da reação de polimerase em cadeia (PCR) nested específica para o Espaço Transcrito Interno 1 (ITS1) do DNA ribossômico da subfamília Toxoplasmatinae, com os primers JS4/CT2b e CT1/CT2. Realizou-se ainda a partir destas amostras, a tentativa de isolamento in vivo e in vitro de Neospora spp. Verificou-se a presença de anticorpos anti-Neospora spp. em 4,9% (7/142) dos equinos e 12,0% (18/150) dos asininos, com títulos que variaram entre 1:50 e 1:200. Não foi verificada a presença de DNA de coccídeos da subfamília Toxoplasmatinae nos tecidos analisados por PCR. Dos oito bioensaios realizados (três a partir de tecidos de equinos e cinco a partir de tecido de asininos), não foi obtido êxito.

In equids, neosporosis is caused by the protozoan coccidia Neospora caninum and N. hughesi.The former is associated with abortions and neonatal disease, and N. hughesi causes Equine Protozoal Myeloencephalitis (EPM) in mules and horses, which was identified only in these species. The serological differentiation between N. caninum and N. hughesi is not possible due to cross-reactivity between antibodies against these parasites. The exposure of donkeys to Neospora spp. was already related, but its role as a possible host has not been elucitaded. The objective of this study was to determine the serological and molecular frequencies of Neospora spp. in equids and to in vitro isolate Neospora spp. from seropositive equines and donkeys tissues. Serology for Neospora spp. was performed on serum samples from 142 horses and 150 donkeys by Indirect Immunofluorescence, with a 1:50 cutoff. Brain tissues from horses and donkeys were tested by a nested polymerase chain reaction (nested PCR), specific for the Toxoplasmatinae Internal Transcribed Spacer 1 (ITS1) of the ribosomal DNA (rDNA), with primers JS4/CT2b and CT1/CT2. Was carried out from these samples, the attempt to isolate in vivo and in vitro Neospora spp. Antibodies to Neospora spp. were found in 4.9% (7/142) of horses and 12.0% (18/150) of donkeys, with titles ranging from 1:50 to 1: 200. Molecular analysis of nervous tissue samples were negative. For the isolation of Neospora spp. eight experiments were performed in immunosuppressed mice (three tissue from horses and five tissue donkeys), but was not successful.

Taxonomia, filogenia e interação parasita-hospedeiro na infecção de mixosporídeos em piapara(Leporinus obtusidens) e dourado (Salminus brasiliensis) oriundos do rio Mogi Guaçu, São Paulo, Brasil / Taxonomy, phylogeny and host parasite-interaction in the infection of myxosporean in piapara (Leporinus obtusidens) and dourado (Salminus brasiliensis), from the Mogi-Guaçu river, São Paulo, Brazil

Os organismos do filo Myxozoa são endoparasitas obrigatórios que infectam principalmente peixes em diversas regiões do mundo, estando entre os mais importantes patógenos de peixes, com mais de 2180 espécies descritas porém, pouco se conhece deste parasita em peixes do Brasil. Neste estudo foram realizadas coletas entre abril de 2011 a agosto de 2012, onde foram coletados oito exemplares de piapara (Leporinus obtusidens) e dezessete exemplares de dourado (Salminus brasiliensis), oriundos do rio Mogi-Guaçu, próximo a Cachoeira de Emas, localizada no município de Pirassununga, estado de São Paulo. As análises morfológicas (microscopia de luz, histologia e a análise ultraestrutural), técnicas de biologia molecular (PCR e sequenciamento) foram utilizadas na identificação de duas novas espécies de Henneguya e análise filogenética do gene 18S rDNA foi realizada para avaliar a relação filogenética desta duas novas espécies com outras espécies de mixosporídeos. Duas novas espécies foram encontradas neste estudo. Uma delas foi encontrada infectando a nadadeira de L. obtusidens e é descrita neste estudo como Henneguya sp. 1 e uma outra espécie encontrada infectando a membrana do arco da branquial e na membrana entre os raios da nadadeira de S. brasiliensis, a qual foi aqui descrita como Henneguya sp. 2. A análise histopatológica revelou que Henneguya sp. 1 ocasionou uma leve compressão no tecido adjacente. A análise ultra-estrutural permitiu a compreensão da interface parasita-hospedeiro e o processo de esporogênese das duas espécies descritas; além disso, foi observado a presença de vesículas esbranquiçadas para Henneguya sp. 2, com função ainda desconhecida. Nos estudos filogenéticos, utilizando os métodos máxima parcimônia e máxima verossimilhança para ambas as espécies, foi avaliado no estudo 1 que Henneguya sp. 1, parasita de peixe characiforme, aparece isolado dando origem a um clado irmão de Henneguya spp., parasitas de siluriformes, characifomes e esociformes; já no estudo 2, a análise filogenética da espécie Henneguya sp. 2, também parasita de peixe characiforme, foi observado a formação de um clado com 3 espécies parasitas de characiformes, sendo duas espécies de Henneguya descritas neste estudo e o Myxobolus oliveirai.

The parasites of Myxozoa are endoparasites that infect mainly fishes in several parts of the world, being this group considered one of the most important pathogens of fishes, with more than 2180 species described. However little is known about this group of parasite in Brazil. During this study, eight piapara (Leporinus obtusidens) and seventeen dourado (Salminus brasiliensis) were caught in Mogi-Guaçu river in a period from April 2011 to August 2012, near waterfall Cachoeira de Emas located at Pirassununga city, state of São Paulo, Brazil. Morphological analyses (light microscopy, histology and ultrastructure) and molecular biology techniques (PCR and sequencing) where done to identify two new species of Henneguya and phylogenetic analyses using the 18S rDNA gene were performed to evaluate the phylogenetic relationship of this two new species among others myxosporeans available on GenBank. Henneguya sp. 1 has been described infecting the fin of L. obtusidens and Henneguya sp. 2 has been described infecting the gill arch membrane and the fin membrane of S. brasiliensis. The histopathological analyses revealed that Henneguya sp. 1 occasioned a small compression of adjacent tissue of the host. Ultraestructural analyses showed the host-parasite/'s interface and the sporogenesis of the two Henneguya spp. furthermore Henneguya sp. 2 showed several whitish vesicles with an unknown function. Phylogenetic studies using the maximum parsimony and maximum likelihood methods, showed in the first study Henneguya sp .1 appearing alone as a basal branch of a sister clade composed by Henneguya parasites of siluriforms, characiforms and esociforms fishes, and the second study showed Henneguya sp. 2 grouped with Hennegua sp. 1 and Myxobolus oliveirai, both parasites of characiforms fishes.

Taxonomia, filogenia e interação parasita-hospedeiro na infecção de mixosporídeos em piapara(Leporinus obtusidens) e dourado (Salminus brasiliensis) oriundos do rio Mogi Guaçu, São Paulo, Brasil / Taxonomy, phylogeny and host parasite-interaction in the infection of myxosporean in piapara (Leporinus obtusidens) and dourado (Salminus brasiliensis), from the Mogi-Guaçu river, São Paulo, Brazil

Os organismos do filo Myxozoa são endoparasitas obrigatórios que infectam principalmente peixes em diversas regiões do mundo, estando entre os mais importantes patógenos de peixes, com mais de 2180 espécies descritas porém, pouco se conhece deste parasita em peixes do Brasil. Neste estudo foram realizadas coletas entre abril de 2011 a agosto de 2012, onde foram coletados oito exemplares de piapara (Leporinus obtusidens) e dezessete exemplares de dourado (Salminus brasiliensis), oriundos do rio Mogi-Guaçu, próximo a Cachoeira de Emas, localizada no município de Pirassununga, estado de São Paulo. As análises morfológicas (microscopia de luz, histologia e a análise ultraestrutural), técnicas de biologia molecular (PCR e sequenciamento) foram utilizadas na identificação de duas novas espécies de Henneguya e análise filogenética do gene 18S rDNA foi realizada para avaliar a relação filogenética desta duas novas espécies com outras espécies de mixosporídeos. Duas novas espécies foram encontradas neste estudo. Uma delas foi encontrada infectando a nadadeira de L. obtusidens e é descrita neste estudo como Henneguya sp. 1 e uma outra espécie encontrada infectando a membrana do arco da branquial e na membrana entre os raios da nadadeira de S. brasiliensis, a qual foi aqui descrita como Henneguya sp. 2. A análise histopatológica revelou que Henneguya sp. 1 ocasionou uma leve compressão no tecido adjacente. A análise ultra-estrutural permitiu a compreensão da interface parasita-hospedeiro e o processo de esporogênese das duas espécies descritas; além disso, foi observado a presença de vesículas esbranquiçadas para Henneguya sp. 2, com função ainda desconhecida. Nos estudos filogenéticos, utilizando os métodos máxima parcimônia e máxima verossimilhança para ambas as espécies, foi avaliado no estudo 1 que Henneguya sp. 1, parasita de peixe characiforme, aparece isolado dando origem a um clado irmão de Henneguya spp., parasitas de siluriformes, characifomes e esociformes; já no estudo 2, a análise filogenética da espécie Henneguya sp. 2, também parasita de peixe characiforme, foi observado a formação de um clado com 3 espécies parasitas de characiformes, sendo duas espécies de Henneguya descritas neste estudo e o Myxobolus oliveirai. (AU)

The parasites of Myxozoa are endoparasites that infect mainly fishes in several parts of the world, being this group considered one of the most important pathogens of fishes, with more than 2180 species described. However little is known about this group of parasite in Brazil. During this study, eight piapara (Leporinus obtusidens) and seventeen dourado (Salminus brasiliensis) were caught in Mogi-Guaçu river in a period from April 2011 to August 2012, near waterfall Cachoeira de Emas located at Pirassununga city, state of São Paulo, Brazil. Morphological analyses (light microscopy, histology and ultrastructure) and molecular biology techniques (PCR and sequencing) where done to identify two new species of Henneguya and phylogenetic analyses using the 18S rDNA gene were performed to evaluate the phylogenetic relationship of this two new species among others myxosporeans available on GenBank. Henneguya sp. 1 has been described infecting the fin of L. obtusidens and Henneguya sp. 2 has been described infecting the gill arch membrane and the fin membrane of S. brasiliensis. The histopathological analyses revealed that Henneguya sp. 1 occasioned a small compression of adjacent tissue of the host. Ultraestructural analyses showed the host-parasite\'s interface and the sporogenesis of the two Henneguya spp. furthermore Henneguya sp. 2 showed several whitish vesicles with an unknown function. Phylogenetic studies using the maximum parsimony and maximum likelihood methods, showed in the first study Henneguya sp .1 appearing alone as a basal branch of a sister clade composed by Henneguya parasites of siluriforms, characiforms and esociforms fishes, and the second study showed Henneguya sp. 2 grouped with Hennegua sp. 1 and Myxobolus oliveirai, both parasites of characiforms fishes. (AU)

Cytogenetic analyses of two Curimatidae species (Pisces; Characiformes) from the Paranapanema and Tietê Rivers

Cytogenetic analyses were performed in two Curimatidae species (Steindachnerina insculpta and Cyphocharax modesta) from the Paranapanema and Tietê Rivers (São Paulo State, Brazil), showing a karyotype composed of 54 meta-submetacentric chromosomes in both species. Silver- and chromomycyn-staining and fluorescent in situ hybridization (FISH) using a 18S rDNA probe indicated that the nucleolar organizer regions (NORs) of both species are localized in the terminal region of the long arm of two metacentric chromosomes. Although a single NOR system was evidenced in both analyzed species, S. insculpta and C. modesta presented the nucleolar organizer regions in distinct chromosome pairs, indicating that these cistrons can be considered cytogenetic markers. Variation on the amount and distribution of the constitutive heterochromatin (C-bands) could also be detected between the two species - while S. insculpta presented few heterochromatic blocks, intensely stained C-bands were evidenced in C. modesta specially in the terminal region of the long arm of the NOR-bearing chromosomes. Although most Curimatidae species have been characterized by homogeneous karyotypes, isolated populations could be established under different environmental conditions leading to karyotype micro-structure variations specially related to the NORs localization and C-banding distribution. The obtained data were useful for the cytogenetic characterization and differentiation of S. insculpta and C. modesta and could be used in evolutionary inferences in the Curimatidae group.

Análises citogenéticas foram realizadas em duas espécies de Curimatidae (Steindachnerina insculpta e Cyphocharax modestus) provenientes dos rios Paranapanema e Tietê (Estado de São Paulo, Brasil), evidenciando um cariótipo composto por 54 cromossomos meta-submetacêntricos em ambas as espécies. Coloração com nitrato de prata e cromomicina e hibridação in situ fluorescente (FISH), utilizando uma sonda de DNAr 18S, mostraram que as regiões organizadoras de nucléolos (RONs) de ambas as espécies estão localizadas na região terminal do braço longo de dois cromossomos metacêntricos. Embora as espécies analisadas tenham apresentado um sistema de RONs simples, S. insculpta e C. modesta apresentaram as regiões organizadoras de nucléolos em distintos pares de cromossomos, indicando que estes cístrons podem ser considerados marcadores citogenéticos. Variação na quantidade e distribuição de heterocromatina constitutiva (bandas C) também pôde ser detectada entre as duas espécies - enquanto S. insculpta apresentou poucos blocos heterocromáticos, bandas C intensamente coradas foram evidenciadas em C. modesta especialmente na região terminal do braço longo dos cromossomos portadores de RONs. Embora a maioria das espécies de Curimatidae seja caracterizada por cariótipos homogêneos, populações isoladas podem ter se estabelecido sob condições ambientais distintas, levando à ocorrência de variações na micro-estrutura cariotípica especialmente relacionadas à localização das RONs e à distribuição das bandas C. Os dados obtidos mostraram-se úteis para caracterização e diferenciação citogenética de S. insculpta e C. modesta e podem ser utilizados em inferências evolutivas no grupo Curimatidae.

Taxonomia e filogenia molecular de Myxozoa parasitas de peixes de água doce oriundos de ambiente natural e de sistema de criação / Taxonomy and molecular phylogeny of Myxozoa parasites of freshwater fish from natural environment and fish farm

O filo Myxozoa possui uma grande diversidade, sendo conhecidas cerca de 2300 espécies, as quais infectam principalmente peixes, mas também anfíbios répteis e aves. Para este estudo, coletas dos peixes de água doce foram realizadas no Pantanal Mato-grossense (estados de Mato Grosso e do Matogrosso do sul) e no Rio Mogi Guaçu e piscicultura do CEPTA/ICMBio (estado de São Paulo), visando estudos moleculares e morfológicos de mixosporídeos parasitas de 6 espécies de peixes. Os resultados das análises moleculares (amplificação e sequenciamento do gene 18S rDNA) e morfológicas revelaram a ocorrência de 11 espécies de mixosporídeos, sendo cinco parasitas comuns a Pseudoplatystoma corruscans e Pseudplatystoma fasciatum, três parasitas de Salminus brasiliensis, uma espécie parasita de Brycon hilarii, uma de Zungaru jahu e outra de Piaractus mesopotamicus. Das onze espécies, cinco ainda não são descritas pela literatura. A análise filogenética, utilizando o método de Neighbor-Joining, mostrou que o agrupamento das espécies ocorre principalmente de acordo com a proximidade filogenética de seus hospedeiros e que todas as espécies da América do Sul agruparam em um clado monofilético. Foi observado, em alguns pontos da árvore filogenética, que o tropismo de tecido e/ou órgão de infecção caracteriza um importante fator de seleção evolutiva. Com menor frequência também foi observado alguns agrupamentos resultantes de parasitas cuja maior relação aparente era a sua localização geográfica, porém, novos estudos ainda são necessários para determinar o verdadeiro papel deste fator na evolução dos mixosporídeos

The phylum Myxozoa has a great diversity, with about 2300 known species, which infect mainly fishes, but also amphibians, reptiles and birds. In this study, freshwater fishes were caught in the Brazilian Pantanal wetland (Mato Grosso and Mato Grosso do Sul states) and in the Mogi Guaçu River and CEPTA/ICMBio\'s fishfarm (São Paulo state) aiming the molecular and morphological studies of myxosporeans parasites of 6 fish species. The results of molecular (amplification and sequencing of the 18S rDNA gene) and morphological analysis revealed the occurrence of 11 species of myxosporeans, five of them infecting both Pseudoplatystoma corruscans and Pseudoplatystoma fasciatum, three parasites of Salminus brasiliensis, one specie infecting Brycon hilarii, one infecting Zungaro jahu and another infecting Piaractus mesopotamicus. Of these eleven species, five are not yet described by literature. The phylogenetic analysis, using the Neighbor-joining method, showed that the species clustered mainly according to the phylogenetic distance of their hosts and that all species of South America were grouped in a monophyletic clade. In some positions of the phylogenetic tree was observed that tissue tropism and/or organ of infection characterized an important factor in evolutionary selection. Less frequently was also observed some groups containing species which the major apparent relation is its geographical position, however, new studies are still needed to determine the true role of this factor in the evolution of myxosporeans