Isolation and characterization of synthetic pyrethroids-degrading bacterial strains from agricultural soil / Isolamento e caracterização de cepas bacterianas degradadoras de piretróides sintéticos de solo agrícola

Pyrethroid pesticides are commonly used for pest control in agriculture setup, veterinary and home garden. They are now posing increased risks to non-targeted organisms associated to human beings due to their considerable use. The present work deals with the isolation of bacteria with tolerance to high concentrations of bifenthrin and cypermethrin from contaminated soil. Enrichment culture technique (bifenthrin concentration = 50-800 mg/L) was used for bacterial isolation. Bacteria that showed growth on minimal media with bifenthrin were also sub-cultured on minimal media with cypermethrin. Bacteria showing luxurious growth on both the pyrethroid, were screened out based on their morphological, biochemical parameters and by API 20NE Kit. Phylogenetic studies revealed that, one bacterial isolate (MG04) belonging to Acinetobacter lwoffii and other five bacterial isolates (MG06, MG05, MG01, MG03 and MG02) cluster with Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas putida respectively. Isolated members of genera Pseudomonas and Acinetobacter could be used for further detailed degradation studies by using FTIR, HPLC-MS or GC-MS analysis.

Os pesticidas piretróides são comumente usados ​​para controle de pragas na agricultura, veterinária e hortas domésticas. Atualmente eles apresentam riscos aumentados para organismos não-alvo associados a seres humanos devido ao seu uso considerável. O presente trabalho analisou o isolamento de bactérias com tolerância a altas concentrações de bifentrina e cipermetrina de solo contaminado. A técnica de cultura de enriquecimento (concentração de bifentrina = 50-800 mg/L) foi utilizada para o isolamento bacteriano. Bactérias que apresentaram crescimento em meio mínimo com bifentrina também foram subcultivadas em meio mínimo com cipermetrina. Bactérias apresentando crescimento luxuoso em ambos os piretróides foram triadas com base em seus parâmetros morfológicos, bioquímicos e pelo Kit API 20NE. Estudos filogenéticos revelaram que, um isolado bacteriano (MG04) pertencente a Acinetobacter lwoffii e outros cinco isolados bacterianos (MG06, MG05, MG01, MG03 e MG02) agrupam-se com Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas putida respectivamente. Membros isolados dos gêneros Pseudomonas e Acinetobacter podem ser usados ​​para estudos de degradação mais detalhados usando análises de FTIR, HPLC-MS ou GC-MS.

Resistance determinants of emerging pathogens isolated from an intensive care unit as a parameter of population health conditions of the Legal Amazon microregion / Determinantes de resistência a patógenos emergentes isolados de uma unidade de terapia intensiva como parâmetro das condições de saúde da população da microrregião da Amazônia Legal

Bacteria responsible for causing infections are common in hospital environments, water, soil, and food products. The infection risk is intensified by the absence of public sanitation, poor quality of life, and food scarcity. These external factors promote the dissemination of pathogens by direct contamination or biofilm formation. In this work, we identified bacterial isolates obtained from intensive care units in the southern region of Tocantins, Brazil. We compared matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) techniques and 16S ribosomal ribonucleic acid (rRNA) molecular analysis; we also performed phenotypic characterization. Fifty-six isolates characterized using morphotinctorial tests were classified as gram-positive (80.4%; n = 45) and gram-negative (19.6%; n = 11) and were resistant to several antibiotic classes; notably, we identified the blaOXA-23 resistance gene in the ILH10 isolate. Microbial identification using MALDI-TOF MS resulted in the identification of Sphingomonas paucimobilis and Bacillus circulans. 16S rRNA sequencing revealed four isolates belonging to the genera Bacillus and Acinetobacter. The similarity was superior to 99% for Acinetobacter schindleri in the Basic Local Alignment Search Tool (BLAST), grouped in the clade superior to 90%. Several strains isolated from intensive care units (ICU) were resistant to various antibiotic classes. These techniques allowed for the identification of several microorganisms of importance in public health, enabling improvements in human infection control and proving the quality of inputs, food, and water.

As bactérias responsáveis por causar infecções são comuns em ambientes hospitalares, água, solo e produtos alimentícios. O risco de infecção é intensificado pela ausência de saneamento público, má qualidade de vida e escassez de alimentos. Esses fatores externos promovem a disseminação de patógenos por contaminação direta ou formação de biofilme. Neste trabalho, identificamos isolados bacterianos obtidos de unidades de terapia intensiva na região sul do Tocantins, Brasil. Comparamos técnicas de espectrometria de massa de tempo de voo com ionização por dessorção a laser assistida por matriz (MALDI-TOF MS) e análise molecular de ácido ribonucleico ribossômico 16S (rRNA); também realizamos caracterização fenotípica. Cinquenta e seis isolados caracterizados por testes morfotintoriais foram classificados como gram-positivos (80,3%; n = 45) e gram-negativos (19,6%; n = 11) e foram resistentes a várias classes de antibióticos; notavelmente, identificamos o gene de resistência blaOXA-23 no isolado de ILH10. A identificação microbiana usando MALDI-TOF MS resultou na identificação de Sphingomonas paucimobilis e Bacillus circulans. O sequenciamento do 16S rRNA revelou quatro isolados pertencentes aos gêneros Bacillus e Acinetobacter. A similaridade foi superior a 99% para Acinetobacter schindleri no BLAST, agrupado no clado superior a 90%. Várias cepas isoladas de ICU foram resistentes a várias classes de antibióticos. Essas técnicas permitiram a identificação de diversos microrganismos de importância em saúde pública, possibilitando melhorias no controle de infecções humanas e comprovando a qualidade dos insumos, alimentos e água.

Acinetobacter calcoaceticus-Acinetobacter baumannii complex in animals: identification and antimicrobial resistance profile / Complexo Acinetobacter calcoaceticus-Acinetobacter baumannii em animais: identificação e perfil de resistência antimicrobiana

Acinetobacter spp. is emerging as an important human and veterinary pathogen, mostly due to intrinsic and acquired resistance to antimicrobials. Despite its public health relevance, little is known about the prevalence, role of different Acinetobacter species and antimicrobial resistance profile of animal-origin isolates. Traditional phenotypic tests may fail to discriminate Acinetobacter species, therefore molecular analyses are often required as a complementary approach. The objectives of this study were to evaluate the occurrence of strains of the Acinetobacter calcoaceticus-Acinetobacter baumannii (Acb) complex isolated from animal infections including urinary tract infections, otitis, piodermitis and pododermatitis, and its resistance profile against different antimicrobial classes, including carbapenems. All Gram-negative coccobacilli isolates were characterized by MALDI-TOF and multiplex PCR, and the disk diffusion test was used to investigate multi-drug resistance (MDR) and carbapenem resistance genes by PCR as preconized by the standard guidelines. MALDI-TOF technique identified 21 strains belonging to the Acb complex (10 A. pittii, 8 A. baumannii, 3 A. nosocomialis, 1 A. ursingii, and 1 A. venetianus). Multiplex PCR confirmed the results of MALDI-TOF for 20 strains. Eight strains (34.78%) were classified as MDR, being 50% (4/8) A. baumannii, 37.5% (3/8) A. pittii, and 12.5% (1/8) A. nosocomialis. None of the isolates presented phenotypic carbapenemase production. Considering the carbapenem resistance genes, 26.09% (6/23) of the isolates presented one or more carbapenemase genes. From these, 50% (3/6) presented only bla VIM, 33.33% (2/6) presented only blaIMP, and 16.67% (1/6) presented blaIMP e blaVIM, simultaneously. These genes were detected among A. pittii isolates mostly (66.67%, 4/6). This study provides further insights into the occurrence and resistance profile of Acinetobacter of animal origin.

Acinetobacter spp. está emergindo como um importante patógeno humano e veterinário, principalmente devido à resistência intrínseca e adquirida aos antimicrobianos. Apesar de sua relevância para a saúde pública, pouco se sabe sobre a prevalência, o papel das diferentes espécies de Acinetobacter e o perfil de resistência antimicrobiana de isolados de origem animal. Testes fenotípicos tradicionais podem falhar em discriminar espécies de Acinetobacter, portanto, análises moleculares são frequentemente necessárias como uma abordagem complementar. Os objetivos deste estudo foram avaliar a ocorrência de cepas do complexo Acinetobacter calcoaceticus-Acinetobacter baumannii (Acb) isolados de infecções de animais, incluindo infecções do trato urinário, otite, piodermite e pododermatite, e seu perfil de resistência a diferentes classes de antimicrobianos, incluindo os carbapenêmicos. Todas as cepas cocobacilos Gram-negativas foram caracterizados por MALDI-TOF e PCR multiplex, e o teste de difusão em disco foi usado para investigar genes de resistência a múltiplas drogas (MDR) e resistência a carbapenêmicos por PCR conforme preconizado pelas diretrizes padrão. A técnica MALDI-TOF identificou 21 cepas pertencentes ao complexo Acb (10 A. pittii, 8 A. baumannii, 3 A. nosocomialis, 1 A. ursingii e 1 A. venetianus). Multiplex PCR confirmou os resultados de MALDI-TOF para 20 cepas. Oito cepas (34.78%) foram classificadas como MDR, sendo 50% (4/8) A. baumannii, 37.5% (3/8) A. pittii e 12.5% (1/8) A. nosocomialis. Nenhum dos isolados apresentou produção fenotípica de carbapenemases. Considerando os genes de resistência a carbapenemas, 26.09% (6/23) dos isolados apresentaram um ou mais genes de carbapenemases. Destes, 50% (3/6) apresentaram apenas bla VIM, 33.33% (2/6) apresentaram apenas bla IMP e 16.67% (1/6) apresentaram bla IMP e bla VIM, simultaneamente. Esses genes foram detectados principalmente entre os isolados de A. pittii (66.67%, 4/6). Este estudo fornece mais informações sobre a ocorrência e perfil de resistência de Acinetobacter de origem animal.

The occurrence of rhizobacteria from Paspalum genotypes and their effects on plant growth

ABSTRACT This work aimed to isolate and characterize plant growth promoting rhizobacteria (PGPR) from 10 Paspalum genotypes and evaluate the effect of their inoculation on P. regnellii, P. atratum, and P. malacophyllum genotypes. The bacterial population ranged from undetectable to 107 bacterial cells per gram of fresh matter in the Paspalum genotypes. Initially, we isolated 164 bacteria from rhizospheric soil and roots of the Paspalum genotypes using media N-free LG agar plate, semi-solid NFb, and LGI. The isolates were characterized genetically and physiologically. The sequencing of 16S rRNA showed the presence of many genera, and some are new in association with Paspalum. The most common was Bacillus followed by Rhizobium, Paraburkholderia, Enterobacter, Cupriavidus, Pseudomonas, Dyadobacter and Acinetobacter. Thirty-eight per cent of isolates produced siderophores, 25 % produced solubilized phosphate, and only 9 % produced indolic compounds. Three greenhouse experiments were performed in randomized blocks with six replicates using representative bacterial strains isolated from P. regnellii, P. malacophyllum and P. atratum cv. Pojuca. We also included strain Sp245 (Azospirillum baldaniorum), uninoculated control, and nitrogen control (150 kg N ha1). There was an increase of up to 53 % in shoot dry matter in P. regnellii inoculated with strain Sp245 and the shoots accumulated more N. In contrast, only small effects were observed for the other Paspalum genotypes inoculated with PGPR from the host genotypes. This study shows a high diversity of diazotrophic rhizosphere bacteria and suggests no strain specificity between the bacterial isolates and the Paspalum genotypes.

Phytochemical characterization and biological activities of Plectranthus barbatus Andrews

Abstract Plectranthus barbatus Andrews (Lamiaceae) is widely distributed in the world and has a range of popular therapeutic indications. This work aimed to evaluate the phytochemical characterization of two leaf extracts of P. barbatus, and their antimicrobial, antineoplastic and immunomodulatory potential. After collection, herborization and obtainment of the P. barbatus aqueous extract (PBA) and acetone:water 7:3 P. barbatus organic extract (PBO), the phytochemical characterization was performed by high-performance liquid chromatography (HPLC). The antimicrobial activity was performed to determine the minimum inhibitory concentration (MIC) against eight bacterial strains using the microdilution test and the fungus Trichophyton rubrum by disc diffusion assay and microdilution test. Cytotoxicity was assessed by MTT and trypan blue methods in normal peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) at concentrations ranged between 0.1 to 100 µg.mL-1 and in neoplastic cell lines Toledo, K562, DU-145 and PANC-1 at 1, 10 and 100 µg.mL-1 . Immunomodulatory activity, was evaluated by sandwich ELISA of proinflammatory cytokines at BALB/c mice splenocytes cultures supernatant. Both extracts presented flavonoids, cinnamic derivatives, steroids and ellagic acid. PBO showed bacteriostatic activity against Acinetobacter baumannii (MIC = 250 µg.mL-1) clinical isolate and PBA fungistatic activity against Trichophyton rubrum (MIC = 800 µg.mL-1). The extracts did not exhibit toxicity to PBMCs and neoplastic cells (IC50 > 100 µg.mL-1). Additionally, PBO at 100 µg.mL-1 significantly inhibited IFN- and IL-17A cytokines (p = 0.03). Plectranthus barbatus is a potential candidate for therapeutic use due to its low toxicity in healthy human cells and exhibits biological activities of medical interest as bacteriostatic, fungistatic and immunomodulatory.

Resumo Plectranthus barbatus Andrews (Lamiaceae) é amplamente distribuída no mundo e com uma série de indicações terapêuticas populares. Este trabalho teve como objetivo avaliar a caracterização fitoquímica de dois extratos da folha de P. barbatus e seu potencial antimicrobiano, antineoplásico e imunomodulador. Após coleta, herborização e obtenção do extrato aquoso (PBA) e acetona: água 7: 3 (orgânico) (PBO) de P. barbatus, a caracterização fitoquímica foi realizada por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). A atividade antimicrobiana foi realizada para determinar a concentração inibitória mínima (CIM) contra oito cepas bacterianas usando o teste de microdiluição e o fungo Trichophyton rubrum por ensaio de difusão em disco e teste de microdiluição. A citotoxicidade foi avaliada por métodos MTT e azul de tripan em células normais mononucleares do sangue periférico (CMSP) em concentrações variadas entre 0,1 a 100 µg.mL-1 e nas linhagens celulares neoplásicas Toledo, K562, DU-145 e PANC-1 em 1, 10 e 100 µg.mL-1 . A atividade imunomoduladora foi avaliada por ELISA sanduíche de citocinas pró-inflamatórias em sobrenadante de culturas de esplenócitos de camundongos BALB/c. Ambos os extratos apresentaram flavonoides, derivados cinâmicos, esteróides e ácido elágico. O PBO mostrou atividade bacteriostática contra Acinetobacter baumannii (CIM = 250 µg.mL-1) e atividade fungistática do PBA contra Trichophyton rubrum (CIM = 800 µg.mL-1). Os extratos não apresentaram toxicidade para CMSP e células neoplásicas (IC50 > 100 µg.mL-1). Além disso, o PBO a 100 µg.mL-1 inibiu significativamente as citocinas IFN- e IL-17A (p = 0,03). Plectranthus barbatus é um candidato potencial para uso terapêutico devido à sua baixa toxicidade em células humanas saudáveis e exibe atividade de interesse médico como bacteriostática, fungistática e imunomoduladora.

Evaluation of fecal smear methods for research on Cryptosporidium spp. oocysts in the feces of dairy calves / Avaliação dos métodos de esfregaço fecal para a pesquisa de oocistos de Cryptosporidium spp. nas fezes de bezerros da bovinocultura de leite

The objective of this study is to compare the direct fecal smear (DFS) and centrifugal sedimentation (CS) methods in the detection of Cryptosporidium spp. oocysts in fecal samples of dairy calves. One hundred and fourteen fecal samples were collected from calves aged up to six months from 10 dairy farms located in Palotina and Francisco Alves, Paraná, Brazil. The microscopic analysis revealed the presence of Cryptosporidium spp. oocysts in 51.75% (59/114) of the samples in both methods. In CS, 48.25% (55/114) of the samples were positive, while in DFS slides, only 6.14% (7/114) were positive. Only 4 samples were positive exclusively in DFS. To ensure that there were no false-negative results in the microscopic analysis, the 55 samples that were negative in both DFS and CS were selected for molecular analysis using the nested PCR (nPCR). Of these 55 samples, 24% (13/55) were positive and forwarded for sequencing part of the genome, which made it possible to identify C. parvum, C. bovis and C. ryanae. Besides the characterization of the Cryptosporidium species, it was possible to identify bacteria of the genus Acinetobacter interfering directly in the analyzed samples. The microscopic analysis also revealed higher sensitivity when CS was used to make the fecal smears. However, some samples that were negative in this technique had positive PCR results. Thus, molecular analysis is indicated to confirm cases of Cryptosporidium spp. Further studies are necessary to prove the specificities of the used primers since the results obtained in nPCR were positive for the protozoan but, when genetic sequencing was performed, Acinetobacter spp. was identified.(AU)

O objetivo deste trabalho foi comparar os métodos de esfregaço fecal direto (DFS) e centrífugo sedimentação (CS) para a pesquisa de oocistos de Cryptosporidium spp. em amostras fecais de bezerros leiteiros. Foram coletadas 114 amostras fecais de bezerros com até seis meses de idade, provenientes de dez propriedades leiteiras localizadas nos municípios de Palotina e Francisco Alves, Paraná. Por meio da análise microscópica, foi possível observar oocistos de Cryptosporidium spp. em 51,75% (59/114) das amostras. Pelo método da CS foi identificada positividade em 48,25% (55/114) das amostras, enquanto nas lâminas pelo método do esfregaço fecal direto (DFS), apenas 6,14% (7/114) foram positivas. Somente 4 amostras foram positivas exclusivamente no método do DFS. Para assegurar que na análise microscópica não houvesse resultados falso-negativos, as 55 amostras negativas para os dois métodos de confecção de lâminas (DFS e CS) foram selecionadas para análise molecular por meio da técnica de Nested PCR. Das 55 amostras submetidas a nPCR, 24% (13/55) apresentaram-se positivas e foram encaminhadas para o sequenciamento genético de uma porção do genoma, o qual possibilitou identificar as espécies de C. parvum, C. bovis e C. ryanae. Além da caracterização das espécies de Cryptosporidium, foi possível identificar a presença de bactérias do gênero Acinetobacter interferindo diretamente nas amostras analisadas. A análise microscópica revelou maior sensibilidade quando o método de CS foi usado para a confecção dos esfregaços fecais, entretanto, amostras negativas por meio dessa metodologia apresentaram resultados positivos na nPCR. Desta forma, para a confirmação dos casos de Cryptosporidium spp., é indicado a realização da análise molecular. Novos estudos são necessários para se comprovar a especificidade dos primers utilizados, uma vez que na nPCR o resultado obtido foi positivo, porém ao realizar o sequenciamento genético houve a identificação de Acinetobacter spp.(AU)

Phytochemical characterization and biological activities of Plectranthus barbatus Andrews / Caracterização fitoquímica e atividades biológicas de Plectranthus barbatus Andrews

Plectranthus barbatus Andrews (Lamiaceae) is widely distributed in the world and has a range of popular therapeutic indications. This work aimed to evaluate the phytochemical characterization of two leaf extracts of P. barbatus, and their antimicrobial, antineoplastic and immunomodulatory potential. After collection, herborization and obtainment of the P. barbatus aqueous extract (PBA) and acetone:water 7:3 P. barbatus organic extract (PBO), the phytochemical characterization was performed by high-performance liquid chromatography (HPLC). The antimicrobial activity was performed to determine the minimum inhibitory concentration (MIC) against eight bacterial strains using the microdilution test and the fungus Trichophyton rubrum by disc diffusion assay and microdilution test. Cytotoxicity was assessed by MTT and trypan blue methods in normal peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) at concentrations ranged between 0.1 to 100 µg.mL-¹ and in neoplastic cell lines Toledo, K562, DU-145 and PANC-1 at 1, 10 and 100 µg.mL-¹ . Immunomodulatory activity, was evaluated by sandwich ELISA of proinflammatory cytokines at BALB/c mice splenocytes cultures supernatant. Both extracts presented flavonoids, cinnamic derivatives, steroids and ellagic acid. PBO showed bacteriostatic activity against Acinetobacter baumannii (MIC = 250 µg.mL-¹) clinical isolate and PBA fungistatic activity against Trichophyton rubrum (MIC = 800 µg.mL-¹). The extracts did not exhibit toxicity to PBMCs and neoplastic cells (IC50 > 100 µg.mL-¹). Additionally, PBO at 100 µg.mL-1 significantly inhibited IFN-γ and IL-17A cytokines (p = 0.03). Plectranthus barbatus is a potential candidate for therapeutic use due to its low toxicity in healthy human cells and exhibits biological activities of medical interest as bacteriostatic, fungistatic and immunomodulatory.

Plectranthus barbatus Andrews (Lamiaceae) é amplamente distribuída no mundo e com uma série de indicações terapêuticas populares. Este trabalho teve como objetivo avaliar a caracterização fitoquímica de dois extratos da folha de P. barbatus e seu potencial antimicrobiano, antineoplásico e imunomodulador. Após coleta, herborização e obtenção do extrato aquoso (PBA) e acetona: água 7: 3 (orgânico) (PBO) de P. barbatus, a caracterização fitoquímica foi realizada por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). A atividade antimicrobiana foi realizada para determinar a concentração inibitória mínima (CIM) contra oito cepas bacterianas usando o teste de microdiluição e o fungo Trichophyton rubrum por ensaio de difusão em disco e teste de microdiluição. A citotoxicidade foi avaliada por métodos MTT e azul de tripan em células normais mononucleares do sangue periférico (CMSP) em concentrações variadas entre 0,1 a 100 µg.mL-¹ e nas linhagens celulares neoplásicas Toledo, K562, DU-145 e PANC-¹ em 1, 10 e 100 µg.mL-¹ . A atividade imunomoduladora foi avaliada por ELISA sanduíche de citocinas pró-inflamatórias em sobrenadante de culturas de esplenócitos de camundongos BALB/c. Ambos os extratos apresentaram flavonoides, derivados cinâmicos, esteróides e ácido elágico. O PBO mostrou atividade bacteriostática contra Acinetobacter baumannii (CIM = 250 µg.mL-¹) e atividade fungistática do PBA contra Trichophyton rubrum (CIM = 800 µg.mL-¹). Os extratos não apresentaram toxicidade para CMSP e células neoplásicas (IC50 > 100 µg.mL-¹). Além disso, o PBO a 100 µg.mL-¹ inibiu significativamente as citocinas IFN-γ e IL-17A (p = 0,03). Plectranthus barbatus é um candidato potencial para uso terapêutico devido à sua baixa toxicidade em células humanas saudáveis e exibe atividade de interesse médico como bacteriostática, fungistática e imunomoduladora.

Phytochemical characterization and biological activities of Plectranthus barbatus Andrews / Caracterização fitoquímica e atividades biológicas de Plectranthus barbatus Andrews

Plectranthus barbatus Andrews (Lamiaceae) is widely distributed in the world and has a range of popular therapeutic indications. This work aimed to evaluate the phytochemical characterization of two leaf extracts of P. barbatus, and their antimicrobial, antineoplastic and immunomodulatory potential. After collection, herborization and obtainment of the P. barbatus aqueous extract (PBA) and acetone:water 7:3 P. barbatus organic extract (PBO), the phytochemical characterization was performed by high-performance liquid chromatography (HPLC). The antimicrobial activity was performed to determine the minimum inhibitory concentration (MIC) against eight bacterial strains using the microdilution test and the fungus Trichophyton rubrum by disc diffusion assay and microdilution test. Cytotoxicity was assessed by MTT and trypan blue methods in normal peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) at concentrations ranged between 0.1 to 100 µg.mL-¹ and in neoplastic cell lines Toledo, K562, DU-145 and PANC-1 at 1, 10 and 100 µg.mL-¹ . Immunomodulatory activity, was evaluated by sandwich ELISA of proinflammatory cytokines at BALB/c mice splenocytes cultures supernatant. Both extracts presented flavonoids, cinnamic derivatives, steroids and ellagic acid. PBO showed bacteriostatic activity against Acinetobacter baumannii (MIC = 250 µg.mL-¹) clinical isolate and PBA fungistatic activity against Trichophyton rubrum (MIC = 800 µg.mL-¹). The extracts did not exhibit toxicity to PBMCs and neoplastic cells (IC50 > 100 µg.mL-¹). Additionally, PBO at 100 µg.mL-1 significantly inhibited IFN-γ and IL-17A cytokines (p = 0.03). Plectranthus barbatus is a potential candidate for therapeutic use due to its low toxicity in healthy human cells and exhibits biological activities of medical interest as bacteriostatic, fungistatic and immunomodulatory.(AU)

Plectranthus barbatus Andrews (Lamiaceae) é amplamente distribuída no mundo e com uma série de indicações terapêuticas populares. Este trabalho teve como objetivo avaliar a caracterização fitoquímica de dois extratos da folha de P. barbatus e seu potencial antimicrobiano, antineoplásico e imunomodulador. Após coleta, herborização e obtenção do extrato aquoso (PBA) e acetona: água 7: 3 (orgânico) (PBO) de P. barbatus, a caracterização fitoquímica foi realizada por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). A atividade antimicrobiana foi realizada para determinar a concentração inibitória mínima (CIM) contra oito cepas bacterianas usando o teste de microdiluição e o fungo Trichophyton rubrum por ensaio de difusão em disco e teste de microdiluição. A citotoxicidade foi avaliada por métodos MTT e azul de tripan em células normais mononucleares do sangue periférico (CMSP) em concentrações variadas entre 0,1 a 100 µg.mL-¹ e nas linhagens celulares neoplásicas Toledo, K562, DU-145 e PANC-¹ em 1, 10 e 100 µg.mL-¹ . A atividade imunomoduladora foi avaliada por ELISA sanduíche de citocinas pró-inflamatórias em sobrenadante de culturas de esplenócitos de camundongos BALB/c. Ambos os extratos apresentaram flavonoides, derivados cinâmicos, esteróides e ácido elágico. O PBO mostrou atividade bacteriostática contra Acinetobacter baumannii (CIM = 250 µg.mL-¹) e atividade fungistática do PBA contra Trichophyton rubrum (CIM = 800 µg.mL-¹). Os extratos não apresentaram toxicidade para CMSP e células neoplásicas (IC50 > 100 µg.mL-¹). Além disso, o PBO a 100 µg.mL-¹ inibiu significativamente as citocinas IFN-γ e IL-17A (p = 0,03). Plectranthus barbatus é um candidato potencial para uso terapêutico devido à sua baixa toxicidade em células humanas saudáveis e exibe atividade de interesse médico como bacteriostática, fungistática e imunomoduladora.(AU)

The occurrence of rhizobacteria from Paspalum genotypes and their effects on plant growth

This work aimed to isolate and characterize plant growth promoting rhizobacteria (PGPR) from 10 Paspalum genotypes and evaluate the effect of their inoculation on P. regnellii, P. atratum, and P. malacophyllum genotypes. The bacterial population ranged from undetectable to 107 bacterial cells per gram of fresh matter in the Paspalum genotypes. Initially, we isolated 164 bacteria from rhizospheric soil and roots of the Paspalum genotypes using media N-free LG agar plate, semi-solid NFb, and LGI. The isolates were characterized genetically and physiologically. The sequencing of 16S rRNA showed the presence of many genera, and some are new in association with Paspalum. The most common was Bacillus followed by Rhizobium, Paraburkholderia, Enterobacter, Cupriavidus, Pseudomonas, Dyadobacter and Acinetobacter. Thirty-eight per cent of isolates produced siderophores, 25 % produced solubilized phosphate, and only 9 % produced indolic compounds. Three greenhouse experiments were performed in randomized blocks with six replicates using representative bacterial strains isolated from P. regnellii, P. malacophyllum and P. atratum cv. Pojuca. We also included strain Sp245 (Azospirillum baldaniorum), uninoculated control, and nitrogen control (150 kg N ha−1). There was an increase of up to 53 % in shoot dry matter in P. regnellii inoculated with strain Sp245 and the shoots accumulated more N. In contrast, only small effects were observed for the other Paspalum genotypes inoculated with PGPR from the host genotypes. This study shows a high diversity of diazotrophic rhizosphere bacteria and suggests no strain specificity between the bacterial isolates and the Paspalum genotypes.

The occurrence of rhizobacteria from Paspalum genotypes and their effects on plant growth

This work aimed to isolate and characterize plant growth promoting rhizobacteria (PGPR) from 10 Paspalum genotypes and evaluate the effect of their inoculation on P. regnellii, P. atratum, and P. malacophyllum genotypes. The bacterial population ranged from undetectable to 107 bacterial cells per gram of fresh matter in the Paspalum genotypes. Initially, we isolated 164 bacteria from rhizospheric soil and roots of the Paspalum genotypes using media N-free LG agar plate, semi-solid NFb, and LGI. The isolates were characterized genetically and physiologically. The sequencing of 16S rRNA showed the presence of many genera, and some are new in association with Paspalum. The most common was Bacillus followed by Rhizobium, Paraburkholderia, Enterobacter, Cupriavidus, Pseudomonas, Dyadobacter and Acinetobacter. Thirty-eight per cent of isolates produced siderophores, 25 % produced solubilized phosphate, and only 9 % produced indolic compounds. Three greenhouse experiments were performed in randomized blocks with six replicates using representative bacterial strains isolated from P. regnellii, P. malacophyllum and P. atratum cv. Pojuca. We also included strain Sp245 (Azospirillum baldaniorum), uninoculated control, and nitrogen control (150 kg N ha–1). There was an increase of up to 53 % in shoot dry matter in P. regnellii inoculated with strain Sp245 and the shoots accumulated more N. In contrast, only small effects were observed for the other Paspalum genotypes inoculated with PGPR from the host genotypes. This study shows a high diversity of diazotrophic rhizosphere bacteria and suggests no strain specificity between the bacterial isolates and the Paspalum genotypes.

Microbiological profile of raw refrigerated and processed bovine milk at dairy industries from Vale do Taquari, Rio Grande do Sul, Brazil

Milk is an essential food, widely consumed by the population. Brazil is one of the world's largest producers of milk. Milk quality is influenced by several factors in all its stages of production. The aim of this study was to determine the microbiological profile of refrigerated and processed raw bovine milk from industries in Vale do Taquari, state of Rio Grande do Sul, Brazil, using metagenomic analysis. A total of six samples were collected, one of refrigerated raw milk from the tanker truck, one of pasteurized milk and one of milk sterilized by the ultra-high temperature (UHT) process, in each of the industries. The identification of the milk microbiota was performed by sequencing the 16S rRNA gene. The results show that refrigerated raw milk has a greater number of microorganisms, followed by pasteurized milk and sterilized milk, successively. Processed milk showed the presence of beneficial microorganisms such as Streptococcus thermophilus and Streptococcus macedonicus. Nevertheless, even UHT milk showed the presence of microorganisms considered harmful, such as the Bacillus cereus group, Aeromonas dhakensis, Enterobacter bacterium and Acinetobacter haemolyticus. Metagenomics is a valuable tool for the thorough evaluation of the milk microbiota in order to implement the processing stages in industries.

Phytochemical characterization and biological activities of Plectranthus barbatus Andrews / Caracterização fitoquímica e atividades biológicas de Plectranthus barbatus Andrews

Plectranthus barbatus Andrews (Lamiaceae) is widely distributed in the world and has a range of popular therapeutic indications. This work aimed to evaluate the phytochemical characterization of two leaf extracts of P. barbatus, and their antimicrobial, antineoplastic and immunomodulatory potential. After collection, herborization and obtainment of the P. barbatus aqueous extract (PBA) and acetone:water 7:3 P. barbatus organic extract (PBO), the phytochemical characterization was performed by high-performance liquid chromatography (HPLC). The antimicrobial activity was performed to determine the minimum inhibitory concentration (MIC) against eight bacterial strains using the microdilution test and the fungus Trichophyton rubrum by disc diffusion assay and microdilution test. Cytotoxicity was assessed by MTT and trypan blue methods in normal peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) at concentrations ranged between 0.1 to 100 µg.mL-1 and in neoplastic cell lines Toledo, K562, DU-145 and PANC-1 at 1, 10 and 100 µg.mL-1 . Immunomodulatory activity, was evaluated by sandwich ELISA of proinflammatory cytokines at BALB/c mice splenocytes cultures supernatant. Both extracts presented flavonoids, cinnamic derivatives, steroids and ellagic acid. PBO showed bacteriostatic activity against Acinetobacter baumannii (MIC = 250 µg.mL-1) clinical isolate and PBA fungistatic activity against Trichophyton rubrum (MIC = 800 µg.mL-1). The extracts did not exhibit toxicity to PBMCs and neoplastic cells (IC50 > 100 µg.mL-1). Additionally, PBO at 100 µg.mL-1 significantly inhibited IFN-γ and IL-17A cytokines (p = 0.03). Plectranthus barbatus is a potential candidate for therapeutic use due to its low toxicity in healthy human cells and exhibits biological activities of medical interest as bacteriostatic, fungistatic and immunomodulatory.

Plectranthus barbatus Andrews (Lamiaceae) é amplamente distribuída no mundo e com uma série de indicações terapêuticas populares. Este trabalho teve como objetivo avaliar a caracterização fitoquímica de dois extratos da folha de P. barbatus e seu potencial antimicrobiano, antineoplásico e imunomodulador. Após coleta, herborização e obtenção do extrato aquoso (PBA) e acetona: água 7: 3 (orgânico) (PBO) de P. barbatus, a caracterização fitoquímica foi realizada por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). A atividade antimicrobiana foi realizada para determinar a concentração inibitória mínima (CIM) contra oito cepas bacterianas usando o teste de microdiluição e o fungo Trichophyton rubrum por ensaio de difusão em disco e teste de microdiluição. A citotoxicidade foi avaliada por métodos MTT e azul de tripan em células normais mononucleares do sangue periférico (CMSP) em concentrações variadas entre 0,1 a 100 µg.mL-1 e nas linhagens celulares neoplásicas Toledo, K562, DU-145 e PANC-1 em 1, 10 e 100 µg.mL-1 . A atividade imunomoduladora foi avaliada por ELISA sanduíche de citocinas pró-inflamatórias em sobrenadante de culturas de esplenócitos de camundongos BALB/c. Ambos os extratos apresentaram flavonoides, derivados cinâmicos, esteróides e ácido elágico. O PBO mostrou atividade bacteriostática contra Acinetobacter baumannii (CIM = 250 µg.mL-1) e atividade fungistática do PBA contra Trichophyton rubrum (CIM = 800 µg.mL-1). Os extratos não apresentaram toxicidade para CMSP e células neoplásicas (IC50 > 100 µg.mL-1). Além disso, o PBO a 100 µg.mL-1 inibiu significativamente as citocinas IFN-γ e IL-17A (p = 0,03). Plectranthus barbatus é um candidato potencial para uso terapêutico devido à sua baixa toxicidade em células humanas saudáveis e exibe atividade de interesse médico como bacteriostática, fungistática e imunomoduladora.

Investigação metagenômica em queijos tipo coloniais, produzidos com leite pasteurizado e comercializados no estado do Rio Grande do Sul, Brasil / Metagenomic investigation in colonial cheese produced with pasteurized milk and sold in the state of Rio Grande do Sul, Brazil / Investigación metagenómica en quesos de tipo colonial, producidos con leche pasteurizada y comercialziados en el estado de Río Grande do Sul, Brasil

Leite e derivados são alimentos muito susceptíveis a ataques de micro-organismos. Sua fiscalização no Brasil está a cargo das Inspeções Municipais, Estaduais ou Federais, sendo a verificação da qualidade higiênico-sanitária dos alimentos uma atividade de extrema importância. Este estudo utilizou a análise metagenômica para investigar sequencias genéticas microbianas em 12 marcas de queijo tipo colonial produzidos sob diferentes regimes de fiscalização pública, e comercializados no estado do Rio Grande do Sul em dois municípios distintos. Foi identificado DNA de micro-organismos pertencentes a quatro filos microbianos: Acinetobacteria, Bacteroidetes, Firmicutes e Proteobacteria. Dentre os resultados mais relevantes, sequências genéticas de micro-organismos patogênicos ou prejudiciais à tecnologia do leite foram evidenciados, com os gêneros Acinetobacter, Bacillus e Pseudomonas ocorrrendo em 100% das amostras avaliadas. Outras bactérias de importância em saúde pública, como as pertencentes à Família Enterobacteriaceae e o gênero Staphylococcus foram detectados e são discutidos. À comparação das medianas de detecção nos 3 níveis de fiscalização, quando da avaliação por pares, evidenciou-se diferença estatística entre as esferas municipal e federal (PT= 0,03), com maior mediana registrada em nível municipal. À avaliação entre os municípios, não foi evidenciada diferença significativa (PMW= 0,81). Sugere-se melhor qualidade microbiológica do queijo, e/ou leite utilizado como matéria-prima, pertencentes à produção submetida à Inspeção Federal em relação à Municipal.

Milk and dairy products are very susceptible foods to microorganism attacks. Its control in Brazil is submitted to Municipal, State or Federal Inspections, and verification of the hygienic-sanitary quality of food is an extremely important activity. This study used metagenomic analysis to investigate microbial genetic sequences in 12 brands of colonial cheese produced under different Public Inspection regimes and selled in two different municipalities in the state of Rio Grande do Sul. DNA from microorganisms belonging to four microbial Phyla have been identified: Acinetobacteria, Bacteroidetes, Firmicutes and Proteobacteria. Among the most relevant results, genetic sequences of pathogenic microorganisms or harmful to milk technology were evidenced, with Acinetobacter, Bacillus and Pseudomona sbacterias occurring in 100% of the evaluated samples. Other public health important bacterias, such as those belonging to the Enterobacteriaceae and Staphylococcus spp. were detected and discussed. Comparing the detection medians in the 3 levels of inspection by peer evaluation, a statistical difference was highlighted between the Municipal and Federal levels (PT= 0,03), with the highest median recorded at Municipal level. It is suggested better microbiological quality of cheese, and / or milk used as raw material, when they belong to the production submitted to the Federal Inspection in relation to Municipal one.

La leche y los derivados son alimentos muy susceptibles a los ataques de microorganismos. Su fiscalización en Brasil es responsabilidad de las inspecciones municipales, estatales o federales, y la verificación de la calidad higiénico-sanitaria de los alimentos es una actividad extremadamente importante. Este estudio utilizó el análisis metagenómico para investigar secuencias genéticas microbianas en 12 marcas de queso colonial com produción sometida a diferentes regímenes de inspección pública, y comercializadas en el estado de Rio Grande do Sul en dos municipios diferentes. Se han identificado ADN de microorganismos pertenecientes a cuatro filamentos microbianos: Acinetobacteria, Bacteroidetes, Firmicutes y Proteobacteria. Entre los resultados más relevantes, se evidenciaron secuencias genéticas de microorganismos patógenos o nocivos para la tecnología de la leche,com detección de los géneros Acinetobacter, Bacillus y Pseudomonas en el 100% de las muestras evaluadas. Se detectaron y discutieron otras bacterias de importancia para la salud pública, como las que pertenecen a la familia Enterobacteriaceae y el género Staphylococcus. La comparación de las medianas de detección en los 3 niveles de inspección, cuando la evaluación por pares, mostró una diferencia estadística entre los niveles municipales y federales (PT= 0,03), con la mediana más alta registrada a nivel municipal. En la evaluación entre los municipios, no se evidenciaron diferencias significativas (PMW= 0.81). Se sugiere una mejor calidad microbiológica del queso, y / o leche utilizada como materia prima, perteneciente a la producción sometida a la Inspección Federal en relación con el Municipal.

Investigação metagenômica em queijos tipo coloniais, produzidos com leite pasteurizado e comercializados no estado do Rio Grande do Sul, Brasil / Metagenomic investigation in colonial cheese produced with pasteurized milk and sold in the state of Rio Grande do Sul, Brazil / Investigación metagenómica en quesos de tipo colonial, producidos con leche pasteurizada y comercialziados en el estado de Río Grande do Sul, Brasil

Leite e derivados são alimentos muito susceptíveis a ataques de micro-organismos. Sua fiscalização no Brasil está a cargo das Inspeções Municipais, Estaduais ou Federais, sendo a verificação da qualidade higiênico-sanitária dos alimentos uma atividade de extrema importância. Este estudo utilizou a análise metagenômica para investigar sequencias genéticas microbianas em 12 marcas de queijo tipo colonial produzidos sob diferentes regimes de fiscalização pública, e comercializados no estado do Rio Grande do Sul em dois municípios distintos. Foi identificado DNA de micro-organismos pertencentes a quatro filos microbianos: Acinetobacteria, Bacteroidetes, Firmicutes e Proteobacteria. Dentre os resultados mais relevantes, sequências genéticas de micro-organismos patogênicos ou prejudiciais à tecnologia do leite foram evidenciados, com os gêneros Acinetobacter, Bacillus e Pseudomonas ocorrrendo em 100% das amostras avaliadas. Outras bactérias de importância em saúde pública, como as pertencentes à Família Enterobacteriaceae e o gênero Staphylococcus foram detectados e são discutidos. À comparação das medianas de detecção nos 3 níveis de fiscalização, quando da avaliação por pares, evidenciou-se diferença estatística entre as esferas municipal e federal (PT= 0,03), com maior mediana registrada em nível municipal. À avaliação entre os municípios, não foi evidenciada diferença significativa (PMW= 0,81). Sugere-se melhor qualidade microbiológica do queijo, e/ou leite utilizado como matéria-prima, pertencentes à produção submetida à Inspeção Federal em relação à Municipal.(AU)

Milk and dairy products are very susceptible foods to microorganism attacks. Its control in Brazil is submitted to Municipal, State or Federal Inspections, and verification of the hygienic-sanitary quality of food is an extremely important activity. This study used metagenomic analysis to investigate microbial genetic sequences in 12 brands of colonial cheese produced under different Public Inspection regimes and selled in two different municipalities in the state of Rio Grande do Sul. DNA from microorganisms belonging to four microbial Phyla have been identified: Acinetobacteria, Bacteroidetes, Firmicutes and Proteobacteria. Among the most relevant results, genetic sequences of pathogenic microorganisms or harmful to milk technology were evidenced, with Acinetobacter, Bacillus and Pseudomona sbacterias occurring in 100% of the evaluated samples. Other public health important bacterias, such as those belonging to the Enterobacteriaceae and Staphylococcus spp. were detected and discussed. Comparing the detection medians in the 3 levels of inspection by peer evaluation, a statistical difference was highlighted between the Municipal and Federal levels (PT= 0,03), with the highest median recorded at Municipal level. It is suggested better microbiological quality of cheese, and / or milk used as raw material, when they belong to the production submitted to the Federal Inspection in relation to Municipal one.(AU)

La leche y los derivados son alimentos muy susceptibles a los ataques de microorganismos. Su fiscalización en Brasil es responsabilidad de las inspecciones municipales, estatales o federales, y la verificación de la calidad higiénico-sanitaria de los alimentos es una actividad extremadamente importante. Este estudio utilizó el análisis metagenómico para investigar secuencias genéticas microbianas en 12 marcas de queso colonial com produción sometida a diferentes regímenes de inspección pública, y comercializadas en el estado de Rio Grande do Sul en dos municipios diferentes. Se han identificado ADN de microorganismos pertenecientes a cuatro filamentos microbianos: Acinetobacteria, Bacteroidetes, Firmicutes y Proteobacteria. Entre los resultados más relevantes, se evidenciaron secuencias genéticas de microorganismos patógenos o nocivos para la tecnología de la leche,com detección de los géneros Acinetobacter, Bacillus y Pseudomonas en el 100% de las muestras evaluadas. Se detectaron y discutieron otras bacterias de importancia para la salud pública, como las que pertenecen a la familia Enterobacteriaceae y el género Staphylococcus. La comparación de las medianas de detección en los 3 niveles de inspección, cuando la evaluación por pares, mostró una diferencia estadística entre los niveles municipales y federales (PT= 0,03), con la mediana más alta registrada a nivel municipal. En la evaluación entre los municipios, no se evidenciaron diferencias significativas (PMW= 0.81). Se sugiere una mejor calidad microbiológica del queso, y / o leche utilizada como materia prima, perteneciente a la producción sometida a la Inspección Federal en relación con el Municipal.(AU)

Characterization of Acinetobacter spp. from raw goat Milk / Caracterização de Acinetobacter spp. isolados de leite caprino cru

Goats milk has been suggested as an alternative to cows milk, being a better digestible and hypoallergenic option. However, the presence of contaminating bacteria may significantly affect the safety of the product. In this research, we reported the isolation and characterization of Acinetobacter spp. isolates from raw goat milk samples purchased in the state of Rio de Janeiro, Brazil. Twenty-one samples were analyzed and ten isolates of Acinetobacter spp. were obtained. Six were identified as A. guillouiae, three as A. ursingii, and one as A. bereziniae. These isolates were characterized and eight showed proteolytic activity, seven showed lipolytic activity, and five isolates were able to produce both enzymes. None of the isolates was biofilm producer. However, when the production of antibiotic resistance enzymes KPC and ESBL were investigated, all isolates presented ESBL-positive phenotype, while eight (80%) were KPC-positive. This research, therefore, demonstrated that raw goats milk can also be a source of Acinetobacter spp., which can produce important thermostable deteriorating enzymes and may play a role of reservoirs of antibiotic resistance genes.(AU)

O leite de cabra tem sido sugerido como alternativa ao leite de vaca, sendo uma opção com melhor digestibilidade e menor alergenicidade. No entanto, a presença de bactérias contaminantes pode afetar significativamente a segurança do produto. Neste trabalho, relatamos o isolamento e caracterização de Acinetobacter spp. isolados de amostras de leite cru de cabra adquiridas no Estado do Rio de Janeiro, Brasil. Vinte e uma amostras foram analisadas e dez isolados de Acinetobacter spp. foram obtidos, sendo seis identificados como A. guillouiae, três como A. ursingii e um como A. bereziniae. Estes isolados foram caracterizados e oito apresentaram atividade proteolítica, sete mostraram atividade lipolítica e cinco foram capazes de produzir ambas as enzimas. Nenhum dos isolados foi produtor de biofilme. No entanto, todos os isolados apresentaram fenótipo ESBL-positivo, enquanto oito (80%) foram positivos para KPC. Este trabalho demonstra, portanto, que o leite de cabra cru também pode ser uma fonte de Acinetobacter spp., que podem produzir enzimas deteriorantes termoestáveis e desempenhar, também, um papel de reservatórios de genes de resistência a antibióticos.(AU)

Pseudomonas spp. and other psychrotrophic microorganisms in inspected and non-inspected Brazilian Minas Frescal cheese: proteolytic, lipolytic and AprX production potential

ABSTRACT: The most consumed cheese in Brazil, Minas Frescal cheese (MFC) is highly susceptible to microbial contamination and clandestine production and commercialization can pose a risk to consumer health. The storage of this fresh product under refrigeration, although more appropriate, may favor the growth of spoilage psychrotrophic bacteria. The objective of this study was to quantify and compare Pseudomonas spp. and other psychrotrophic bacteria in inspected and non-inspected MFC samples, evaluate their lipolytic and proteolytic activities and their metalloprotease production potentials. Twenty MFC samples were evaluated: 10 inspected and 10 non-inspected. Counts of psychrotrophic bacteria and Pseudomonas spp., evaluation of the proteolytic and lipolytic potential of the isolates, and identification of potential producers of alkaline metalloprotease (AprX) were assessed. The mean total psychrotrophic counts were 1.07 (±2.18) × 109CFU/g in the inspected samples and 4.5 (±5.86) × 108CFU/g in the non-inspected, with no significant difference (p=0.37). The average score of Pseudomonas spp. was 6.86 (±18.6) × 105 and 2.08 (±3.65) × 106 CFU/g for the inspected and non-inspected MFC samples, respectively, with no significant difference (p=0.1). Pseudomonas spp. represented 0.06% and 0.004% of psychrotrophic bacteria found in inspected and non-inspected MFC samples, respectively. Collectively, 694 psychrotrophic strains and 47Pseudomonas spp. were isolated, of which 59.9% and 68.1% were simultaneously proteolytic and lipolytic, respectively. Of the 470 psychrotrophs isolated from inspected and 224 from non-inspected cheese samples, 5.74% and 2.23% contained aprX, respectively, while 100 and 86.96% of the Pseudomonas spp. isolates in inspected and non-inspected cheese samples contained the gene. The production potential of AprX did not, however, determine the proteolytic activity on plates of these isolates under the conditions evaluated in this study. Of total, 65.63% of the psychrotrophs that contained aprX gene were confirmed as Pseudomonas spp., using genus-specific PCR. Phylogenetic analysis of the 16S rRNA gene of the other psychrotrophs that were potential producers of AprX identified them as Serratia spp. (n=7), Raoultella ornithinolytica (n=1), and Acinetobacter schindleri (n=1) in the inspected samples and Psychrobacter sanguinis (n=1) and Leuconostoc mesenteroides (n=1) in the non-inspected samples. The production conditions of Brazilian MFC of these samples, while meeting the legal determinations, are not sufficient to control Pseudomonas and other spoilage-related psychrotrophs. Thus, stricter hygienic measures are required during the formal production of this type of cheese.

RESUMO: O mais consumido no Brasil, o queijo Minas Frescal (QMF) é altamente suscetível à contaminação microbiana e a produção e comercialização clandestina podem representar um risco para a saúde do consumidor. O armazenamento deste produto fresco sob refrigeração, embora mais apropriado, pode favorecer a multiplicação de bactérias psicrotróficas deteriorantes. O objetivo deste estudo foi quantificar e comparar Pseudomonas spp. e outras bactérias psicrotróficas em amostras de QMF inspecionadas e não inspecionadas, avaliar o potencial lipolítico, proteolítico e de produção de metaloprotease alcalina. Vinte amostras de QMF foram avaliadas: 10 inspecionadas e 10 não inspecionadas. Foram avaliadas as contagens de bactérias psicrotróficas e Pseudomonas spp., o potencial proteolítico e lipolítico dos isolados e a identificação de potenciais produtores de metaloprotease alcalina (AprX). A média total das contagens de bactérias psicrotróficas foi de 1,07 (±2,18) × 109UFC/g nas amostras inspecionadas e 4,5 (±5,86) × 108UFC/g nas não inspecionadas, sem diferença significativa (p=0,37). A média de Pseudomonasspp. foi de 6,86 (±18,6) × 105 e 2,08 (±3,65) × 106UFC/g para as amostras QMF inspecionadas e não-inspecionadas, respectivamente, sem diferença significativa (p=0,1). Pseudomonas spp. representaram 0,06% e 0,004% de bactérias psicrotróficas encontradas em amostras QMF inspecionadas e não-inspecionadas, respectivamente. Das amostras inspecionadas e não inspecionadas, foram isoladas 694 colônias psicrotróficas e 47 Pseudomonasspp., dos quais 59,9% e 68,1% foram simultaneamente proteolíticos e lipolíticos, respectivamente. Dos 470 isolados de psicrotróficos das amostras de queijo inspecionados e dos 224 isolados das não inspecionadas, 5,74% e 2,23% continham o gene aprX, respectivamente, enquanto 100 e 86,96% das Pseudomonasspp. isoladas em amostras de queijo inspecionadas e não inspecionadas continham o potencial de expressão de AprX. Esse potencial, no entanto, não determinou a atividade proteolítica em placas desses isolados nas condições avaliadas neste estudo. Do total, 65,63% dos psicrotróficos que continham o gene aprX foram confirmados como Pseudomonasspp., utilizando PCR gênero-específico. A análise filogenética do gene 16S rRNA dos outros psicrotróficos que foram produtores potenciais de AprX os identificou como Serratia spp. (n=7), Raoultella ornithinolytica (n=1) e Acinetobacter schindleri (n=1) nas amostras inspecionadas e Psychrobacter sanguinis (n=1) e Leuconostoc mesenteroides (n=1) nas amostras não inspecionadas. As condições de produção do QMF dessas amostras, atendendo às determinações legais, não são suficientes para controlar a Pseudomonas e outros psicrotróficos relacionados à deterioração. Assim, medidas higiênicas mais rígidas são necessárias durante a produção formal deste tipo de queijo.

Pseudomonas spp. and other psychrotrophic microorganisms in inspected and non-inspected Brazilian Minas Frescal cheese: proteolytic, lipolytic and AprX production potential / Pseudomonas spp. e outros micro-organismos psicrotróficos em queijos Minas Frescal inspecionados e não inspecionados: potencial proteolítico, lipolítico e produção de AprX

The most consumed cheese in Brazil, Minas Frescal cheese (MFC) is highly susceptible to microbial contamination and clandestine production and commercialization can pose a risk to consumer health. The storage of this fresh product under refrigeration, although more appropriate, may favor the growth of spoilage psychrotrophic bacteria. The objective of this study was to quantify and compare Pseudomonas spp. and other psychrotrophic bacteria in inspected and non-inspected MFC samples, evaluate their lipolytic and proteolytic activities and their metalloprotease production potentials. Twenty MFC samples were evaluated: 10 inspected and 10 non-inspected. Counts of psychrotrophic bacteria and Pseudomonas spp., evaluation of the proteolytic and lipolytic potential of the isolates, and identification of potential producers of alkaline metalloprotease (AprX) were assessed. The mean total psychrotrophic counts were 1.07 (±2.18) × 109CFU/g in the inspected samples and 4.5 (±5.86) × 108CFU/g in the non-inspected, with no significant difference (p=0.37). The average score of Pseudomonas spp. was 6.86 (±18.6) × 105 and 2.08 (±3.65) × 106 CFU/g for the inspected and non-inspected MFC samples, respectively, with no significant difference (p=0.1). Pseudomonas spp. represented 0.06% and 0.004% of psychrotrophic bacteria found in inspected and non-inspected MFC samples, respectively. Collectively, 694 psychrotrophic strains and 47Pseudomonas spp. were isolated, of which 59.9% and 68.1% were simultaneously proteolytic and lipolytic, respectively. Of the 470 psychrotrophs isolated from inspected and 224 from non-inspected cheese samples, 5.74% and 2.23% contained aprX, respectively, while 100 and 86.96% of the Pseudomonas spp. isolates in inspected and non-inspected cheese samples contained the gene. The production potential of AprX did not, however, determine the proteolytic activity on plates of these isolates under the conditions evaluated in this study. Of total, 65.63% of the psychrotrophs that contained aprX gene were confirmed as Pseudomonas spp., using genus-specific PCR. Phylogenetic analysis of the 16S rRNA gene of the other psychrotrophs that were potential producers of AprX identified them as Serratia spp. (n=7), Raoultella ornithinolytica (n=1), and Acinetobacter schindleri (n=1) in the inspected samples and Psychrobacter sanguinis (n=1) and Leuconostoc mesenteroides (n=1) in the non-inspected samples. The production conditions of Brazilian MFC of these samples, while meeting the legal determinations, are not sufficient to control Pseudomonas and other spoilage-related psychrotrophs. Thus, stricter hygienic measures are required during the formal production of this type of cheese.(AU)

O mais consumido no Brasil, o queijo Minas Frescal (QMF) é altamente suscetível à contaminação microbiana e a produção e comercialização clandestina podem representar um risco para a saúde do consumidor. O armazenamento deste produto fresco sob refrigeração, embora mais apropriado, pode favorecer a multiplicação de bactérias psicrotróficas deteriorantes. O objetivo deste estudo foi quantificar e comparar Pseudomonas spp. e outras bactérias psicrotróficas em amostras de QMF inspecionadas e não inspecionadas, avaliar o potencial lipolítico, proteolítico e de produção de metaloprotease alcalina. Vinte amostras de QMF foram avaliadas: 10 inspecionadas e 10 não inspecionadas. Foram avaliadas as contagens de bactérias psicrotróficas e Pseudomonas spp., o potencial proteolítico e lipolítico dos isolados e a identificação de potenciais produtores de metaloprotease alcalina (AprX). A média total das contagens de bactérias psicrotróficas foi de 1,07 (±2,18) × 109UFC/g nas amostras inspecionadas e 4,5 (±5,86) × 108UFC/g nas não inspecionadas, sem diferença significativa (p=0,37). A média de Pseudomonasspp. foi de 6,86 (±18,6) × 105 e 2,08 (±3,65) × 106UFC/g para as amostras QMF inspecionadas e não-inspecionadas, respectivamente, sem diferença significativa (p=0,1). Pseudomonas spp. representaram 0,06% e 0,004% de bactérias psicrotróficas encontradas em amostras QMF inspecionadas e não-inspecionadas, respectivamente. Das amostras inspecionadas e não inspecionadas, foram isoladas 694 colônias psicrotróficas e 47 Pseudomonasspp., dos quais 59,9% e 68,1% foram simultaneamente proteolíticos e lipolíticos, respectivamente. Dos 470 isolados de psicrotróficos das amostras de queijo inspecionados e dos 224 isolados das não inspecionadas, 5,74% e 2,23% continham o gene aprX, respectivamente, enquanto 100 e 86,96% das Pseudomonasspp. isoladas em amostras de queijo inspecionadas e não inspecionadas continham o potencial de expressão de AprX. Esse potencial, no entanto, não determinou a atividade proteolítica em placas desses isolados nas condições avaliadas neste estudo. Do total, 65,63% dos psicrotróficos que continham o gene aprX foram confirmados como Pseudomonasspp., utilizando PCR gênero-específico. A análise filogenética do gene 16S rRNA dos outros psicrotróficos que foram produtores potenciais de AprX os identificou como Serratia spp. (n=7), Raoultella ornithinolytica (n=1) e Acinetobacter schindleri (n=1) nas amostras inspecionadas e Psychrobacter sanguinis (n=1) e Leuconostoc mesenteroides (n=1) nas amostras não inspecionadas. As condições de produção do QMF dessas amostras, atendendo às determinações legais, não são suficientes para controlar a Pseudomonas e outros psicrotróficos relacionados à deterioração. Assim, medidas higiênicas mais rígidas são necessárias durante a produção formal deste tipo de queijo.(AU)

Bacteremia and meningitis caused by OXA-23-producing Acinetobacter baumannii molecular characterization and susceptibility testing for alternative antibiotics

Abstract Background: Carbapenem-resistant Acinetobacter baumannii infection is a concern in developing countries due to high incidence, few therapeutic options, and increasing costs. Objective: Characterize and analyze the antibiotic susceptibility patterns of carbapenem-resistant A. baumannii isolates and evaluate clinical data of meningitis and bacteremia caused by this microorganism. Methods: Twenty-six A. baumannii isolates from 23 patients were identified by MALDI-TOF and automated methods and genotyped using pulsed field genotyping electrophoresis. Clinical data and outcomes were evaluated. Susceptibility of isolates to colistin, tigecycline, meropenem, imipenem, and doxycycline was determined. Results: Mortality due to A. baumannii infections was 73.91%; all patients with meningitis and 7/8 patients with ventilator-associated pneumonia died. All isolates were susceptibility to polymyxin (100%; MIC50, MIC90: 1 µg/mL, 1 µg/mL) and colistin (100%; MIC50, MIC90: 2 µg/mL, 2 µg/mL), and 92% were susceptible to tigecycline (MIC50, MIC90: 1 µg/mL, 1 µg/mL) and doxycycline (MIC50, MIC90: 2 µg/mL, 2 µg/mL). bla OXA-23 was identified in 24 isolates. Molecular typing showed 8 different patterns: 13 isolates belonged to pattern A (50%). Conclusion: Carbapenem-resistant A. baumannii infections mortality is high. Alternative antimicrobial therapy (doxycycline) for selected patients with carbapenem-resistant A. baumannii infection should be considered.

Bacteremia and meningitis caused by OXA-23-producing Acinetobacter baumannii molecular characterization and susceptibility testing for alternative antibiotics

Background:Carbapenem-resistant Acinetobacter baumannii infection is a concern in developing countries due to high incidence, few therapeutic options, and increasing costs.Objective:Characterize and analyze the antibiotic susceptibility patterns of carbapenem-resistant A. baumannii isolates and evaluate clinical data of meningitis and bacteremia caused by this microorganism.Methods:Twenty-six A. baumannii isolates from 23 patients were identified by MALDI-TOF and automated methods and genotyped using pulsed field genotyping electrophoresis. Clinical data and outcomes were evaluated. Susceptibility of isolates to colistin, tigecycline, meropenem, imipenem, and doxycycline was determined.Results:Mortality due to A. baumannii infections was 73.91%; all patients with meningitis and 7/8 patients with ventilator-associated pneumonia died. All isolates were susceptibility to polymyxin (100%; MIC50, MIC90: 1 µg/mL, 1 µg/mL) and colistin (100%; MIC50, MIC90: 2 µg/mL, 2 µg/mL), and 92% were susceptible to tigecycline (MIC50, MIC90: 1 µg/mL, 1 µg/mL) and doxycycline (MIC50, MIC90: 2 µg/mL, 2 µg/mL). bla OXA-23 was identified in 24 isolates. Molecular typing showed 8 different patterns: 13 isolates belonged to pattern A (50%).Conclusion:Carbapenem-resistant A. baumannii infections mortality is high. Alternative antimicrobial therapy (doxycycline) for selected patients with carbapenem-resistant A. baumannii infection should be considered.(AU)

Antagonistic endophytic bacteria associated with nodules of soybean (Glycine max L.) and plant growth-promoting properties

Abstract A total of 276 endophytic bacteria were isolated from the root nodules of soybean (Glycine max L.) grown in 14 sites in Henan Province, China. The inhibitory activity of these bacteria against pathogenic fungus Phytophthora sojae 01 was screened in vitro. Six strains with more than 63% inhibitory activities were further characterized through optical epifluorescence microscopic observation, sequencing, and phylogenetic analysis of 16S rRNA gene, potential plant growth-promoting properties analysis, and plant inoculation assay. On the basis of the phylogeny of 16S rRNA genes, the six endophytic antagonists were identified as belonging to five genera: Enterobacter, Acinetobacter, Pseudomonas, Ochrobactrum, and Bacillus. The strain Acinetobacter calcoaceticus DD161 had the strongest inhibitory activity (71.14%) against the P. sojae 01, which caused morphological abnormal changes of fungal mycelia; such changes include fracture, lysis, formation of a protoplast ball at the end of hyphae, and split ends. Except for Ochrobactrum haematophilum DD234, other antagonistic strains showed the capacity to produce siderophore, indole acetic acid, and nitrogen fixation activity. Regression analysis suggested a significant positive correlation between siderophore production and inhibition ratio against P. sojae 01. This study demonstrated that nodule endophytic bacteria are important resources for searching for inhibitors specific to the fungi and for promoting effects for soybean seedlings.