Espermiogênese alterada em um touro doador de sêmen: relato de caso / Altered spermiogenesis in a semen donor bull: case report

A espermiogênese é o processo final da espermatogênese no qual a espermátide se transforma em espermatozoide. Durante esse processo podem ocorrer alterações espermáticas, especialmente no acrossoma, na morfologia da cabeça, na condensação da cromatina e na formação dos vacúolos nucleares. A diferenciação entre os quadros clínicos é feita com repetições dos exames andrológicos. A avaliação morfológica indica a situação da espermiogênese nas 4 semanas anteriores a coleta do sêmen. Com os resultados do exame andrológico é possível identificar a qualidade seminal naquele período. O presente artigo é o relato de caso de um touro jovem doador de sêmen com 26 meses de idade, no início do regime de coletas de sêmen em um Centro de Coleta e Processamento de Sêmen no Sul do Brasil. A produção espermática deste animal foi avaliada durante 12 meses de coleta, apresentando sempre morfologia espermática muito alterada e motilidade média de 54% no exame imediato. Em 13 coletas seminais, o ejaculado deste animal apresentou em média 86% de defeitos maiores, 10% de defeitos menores e 96% de defeitos totais. Os defeitos maiores, que são os que possuem maior efeito na fertilidade, estão diretamente ligados a espermiogênese e os defeitos menores, que possuem menor efeito na fertilidade, são ocasionados principalmente durante o trânsito pelo epidídimo. O quadro clínico desse animal demonstrou a importância do exame morfológico para avaliar a espermatogênese e principalmente o processo de diferenciação final da espermátide em espermatozoide. Casos como este devem ser descritos como espermiogênese alterada e o reprodutor deve ser afastado da reprodução, após descartar alterações morfológicas devido a degeneração testicular grave.(AU)

Spermiogenesis is the final process of spermatogenesis in which the spermatid transforms into sperm. During this process, sperm alterations may occur, especially in the acrosome, head morphology, chromatin condensation and formation of nuclear vacuoles. Differentiation between clinical conditions is made with repetitions of andrological exams. The morphological evaluation indicates the status of spermiogenesis in the 4 weeks prior to semen collection. With the results of the breeding soundness examination, it is possible to identify the seminal quality in that period. The present article is a case report of a young 26-month-old semen donor bull, that started semen collection routines at a Semen Collection and Processing Center in southern Brazil. The sperm production of this animal was evaluated during 12 months of collection, always showing very altered sperm morphology and average motility of 54% in the immediate examination. In 13 seminal collections, the ejaculate of this animal presented an average of 86% of major defects, 10% of minor defects and 96% of total defects. Major defects, which have the greatest impact on fertility, are directly linked to spermiogenesis and minor defects, which have less effect on fertility, are mainly caused during transit through the epididymis. The clinical conditions of this animal demonstrated the importance of the morphological examination to evaluate spermatogenesis and especially the process of final differentiation of the spermatid into spermatozoa. Cases like this should be described as altered spermiogenesis and the bull should be withdrawn from breeding, after ruling out morphological changes due to severe testicular degeneration.(AU)

Uso de placa aquecedora visando a incubação do espermatozoide ovino após criopreservação / Use of heating plate aiming at the ovine sperm incubation after cryopreservation

Objetivou-se avaliar a utilização da placa aquecedora, em substituição ao banho-maria, no teste de termorresistência (TTR) de espermatozoides de carneiros após a criopreservação. Foram coletados 10 ejaculados de três carneiros adultos (n=30), por meio de vagina artificial para ovinos. Em seguida, foram diluídos em TrisGema de ovo, a uma concentração final de 200 x106 sptz/mL, e submetidos á curva de resfriamento, para posterior criopreservação em palhetas em nitrogênio líquido. Após descongelação, as amostras foram analisadas quanto à integridade de membrana, de acrossoma e atividade mitocondrial. O sêmen então foi dividido em dois tubos e submetido ao TTR, um em banho-maria e outro em placa aquecedora, e, ainda, avaliado a cada 30 minutos, do tempo zero (pós-descongelação) até 90 minutos de incubação, a 37 °C, quanto à motilidade espermática e à motilidade progressiva. As variáveis foram submetidas à análise de variância e as médias comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. Após o processo de congelação/descongelação, os espermatozoides apresentaram baixo percentual de integridade de membrana e elevado percentual de atividade mitocondrial e integridade do acrossoma. Não foi observada diferença na motilidade espermática nem na motilidade progressiva ao longo do TTR, quando comparados os espermatozoides que foram incubados em banho-maria aos incubados em placa aquecedora durante o período de 90 minutos. A placa aquecedora pode ser utilizada como meio de incubação dos espermatozoides de carneiros em substituição ao banho-maria.

The objective was to evaluate the use of the hot plate to replace the water bath in the thermo resistance test of ovine sperm after cryopreservation. Ten ejaculates were also collected from three adult sheep (n=30), by means of artificial sheep vagina. The collected samples were diluted in Tris-Egg Yolk, at a final concentration of 200 x106 sptz/mL and subjected to a cooling curve for subsequent cryopreservation in liquid nitrogen straws. Immediately after thawing, the samples were analyzed for membrane and acrosome integrity, and mitochondrial activity. The semen was then divided into two tubes and submitted to TTR, one in a water bath and the other in a hot plate, and evaluated every 30 minutes, from time zero (post-thaw) until 90 minutes of incubation at 37 °C, for sperm motility and progressive motility. The variables were subjected to analysis of variance and the means were compared using the Tukey test at 5% probability. After the freeze/thawing process, sperm showed a low percentage of membrane integrity, high percentage of mitochondrial activity, in addition to maintaining the integrity of acrossome. No difference was observed in sperm motility nor progressive motility, along the TTR, when comparing the sperm that were incubated in a water bath in relation to those incubated in a hot plate during the period of 90 minutes. The heating plate can be used as a means of incubating sheep sperm in replacement of the water bath.

Effects of chelating calcium in cryopreservation extender on frozen-thawed dog semen / [Efeitos da quelação de cálcio no meio de criopreservação no sêmen descongelado de cão]

We evaluated the effect of reducing free calcium in the cryopreservation medium, using the calcium chelator ethylene diamine tetracetic acid (EDTA) at 0.3% and 0.5% concentrations. Three male mixed breed dogs were subjected to semen collection by digital manipulation (n=16). Each ejaculate was divided in three aliquots, and each one was diluted in TRIS-glucose-egg yolk extender with 6% glycerol and 0.5% Equex STM Paste® (TGE, control); and added with 0.3% EDTA (EDTA 0.3) or 0.5% EDTA (EDTA 0.5). Calcium concentration reduced in EDTA 0.3 and all the calcium ions were chelated in EDTA 0.5. The EDTA addition did not affect sperm morphology or plasma membrane integrity; however, by removing all free calcium (EDTA 0.5), the sperm motility reduced (64.7% in TGE and 45% in EDTA 0.5; p<0.05). Acrosome integrity and sperm binding ability were not improved by calcium chelation. The failure to prevent the premature AR may explain why sperm longevity was not affected by calcium removal. Thus, the partial or complete calcium removal, through EDTA addition, is not able to prevent acrosomal damage or premature acrosomal reaction, and therefore does not improve the dog sperm binding ability.(AU)

Avaliou-se o efeito da redução do cálcio livre no meio de congelamento, usando-se o quelante de cálcio etilenodiaminotetracético (EDTA) a 0,3% e 0,5%. Três cães machos sem raça definida foram submetidos à coleta de sêmen por manipulação digital (n=16). Cada ejaculado foi diluído em diluidor controle com TRIS-glicose - gema de ovo (TGE, controle), ou em diluidor TGE enriquecido com 0,3% (EDTA 0,3) ou 0,5% de EDTA (EDTA 0,5). A concentração de cálcio reduziu no meio EDTA 0,3, e todos os íons de cálcio foram quelados no meio EDTA 0,5. A adição do EDTA e a consequente quelação do cálcio não afetaram a morfologia espermática ou a integridade da membrana plasmática, no entanto, ao remover todo o cálcio do meio (EDTA 0,5), a motilidade espermática se reduziu (64,7% no TGE e 45% no EDTA 0,5; P<0,05). A integridade do acrossoma e a capacidade de ligação do espermatozoide não melhoraram com a quelação do cálcio. Apesar da influência da concentração de cálcio sobre a motilidade espermática após o descongelamento, a falha em prever a reação acrossomal prematura pode explicar por que a longevidade espermática não foi afetada pela remoção do cálcio no meio. Dessa forma, a remoção parcial ou total do cálcio, por meio da adição de EDTA, não é capaz de prevenir o dano no acrossoma ou a reação acrossomal prematura e, portanto, não aumenta a capacidade do espermatozoide de se ligar ao oócito.(AU)

Ultraestrutura e criopreservação de sêmen de jundiá amazônico (Leiarius marmoratus) em cativeiro / Ultrastructure and sperm cryopreservation of the amazon catfish (Leiarius marmoratus) in captivity

Os objetivos do presente estudo foram analisar a ultraestrutura do espermatozoide do jundiá amazônico e avaliar a sua criopreservação com três agentes crioprotetores (metanol 10%, DMSO 10% e etilenoglicol 10%) e duas soluções ativadoras (NaCl 0,29% e NaHCO3 1%). Como diluente, foi utilizada uma solução de glicose a 5%, sendo o sêmen envasado em palhetas de 0,25mL e congelado em vapor de nitrogênio (botijão dry shipper). No sêmen fresco, o espermatozoide apresentou comprimento de 25,46±2,54µm, cabeça esférica (1,51±0,18µm), ausência de acrossoma, peça intermediária com formato cônico (0,93±0,17µm), ligeiramente assimétrica, com presença de vesículas, e flagelo único (21,48±2,45µm). O sêmen descongelado apresentou valores mais altos (P<0,05) para duração, vigor e taxa de motilidade espermática com os crioprotetores metanol 10% e DMSO 10%. A duração da motilidade espermática foi maior (P<0,05) com o ativador NaHCO3 1% (21-96 s). O sêmen de Leiarius marmoratus criopreservado com DMSO e metanol apresentou, respectivamente, 7,32±4,21% e 8,94±6,69% de taxa de motilidade. No entanto, os resultados não foram satisfatórios para estabelecer um protocolo para a espécie.(AU)

The aims of this study were to describe the spermatozoon ultrastructure and to evaluate the sperm cryopreservation of the amazon catfish with three cryoprotectant agents (10% methanol, 10% DMSO, and 10% ethylene glycol) and two activator agents (0.29% NaCl and 1% NaHCO3). Glucose 5% extender was used as a diluent solution and sperm loaded in 0.25 straws was frozen in nitrogen vapor (dry shipper). Fresh spermatozoon was 25.46±2.54µm long, the head was spherical (1.51±0.18µm) with no acrosome, the midpiece was cone shaped (0.93±0.17µm) with presence of vesicles, slightly asymmetric, and the flagellum was single (21.48±2.45µm). Post-thawed semen presented higher values (P< 0.05) for duration, vigor and sperm motility rate with cryoprotectants 10% methanol and 10% DMSO. The duration of sperm motility was longer (P< 0,05) when triggered in 1% NaHCO3 (96-21 s). Leiarius marmoratus semen cryopreserved with DMSO and methanol, presented respectively 7.32±4.21% and 8.94±6.69% of motility. However, the results were not satisfactory to establish a protocol for the specie.(AU)

Ultraestrutura e criopreservação de sêmen de jundiá amazônico (Leiarius marmoratus) em cativeiro / Ultrastructure and sperm cryopreservation of the amazon catfish (Leiarius marmoratus) in captivity

Os objetivos do presente estudo foram analisar a ultraestrutura do espermatozoide do jundiá amazônico e avaliar a sua criopreservação com três agentes crioprotetores (metanol 10%, DMSO 10% e etilenoglicol 10%) e duas soluções ativadoras (NaCl 0,29% e NaHCO3 1%). Como diluente, foi utilizada uma solução de glicose a 5%, sendo o sêmen envasado em palhetas de 0,25mL e congelado em vapor de nitrogênio (botijão dry shipper). No sêmen fresco, o espermatozoide apresentou comprimento de 25,46±2,54µm, cabeça esférica (1,51±0,18µm), ausência de acrossoma, peça intermediária com formato cônico (0,93±0,17µm), ligeiramente assimétrica, com presença de vesículas, e flagelo único (21,48±2,45µm). O sêmen descongelado apresentou valores mais altos (P<0,05) para duração, vigor e taxa de motilidade espermática com os crioprotetores metanol 10% e DMSO 10%. A duração da motilidade espermática foi maior (P<0,05) com o ativador NaHCO3 1% (21-96 s). O sêmen de Leiarius marmoratus criopreservado com DMSO e metanol apresentou, respectivamente, 7,32±4,21% e 8,94±6,69% de taxa de motilidade. No entanto, os resultados não foram satisfatórios para estabelecer um protocolo para a espécie.(AU)

The aims of this study were to describe the spermatozoon ultrastructure and to evaluate the sperm cryopreservation of the amazon catfish with three cryoprotectant agents (10% methanol, 10% DMSO, and 10% ethylene glycol) and two activator agents (0.29% NaCl and 1% NaHCO3). Glucose 5% extender was used as a diluent solution and sperm loaded in 0.25 straws was frozen in nitrogen vapor (dry shipper). Fresh spermatozoon was 25.46±2.54µm long, the head was spherical (1.51±0.18µm) with no acrosome, the midpiece was cone shaped (0.93±0.17µm) with presence of vesicles, slightly asymmetric, and the flagellum was single (21.48±2.45µm). Post-thawed semen presented higher values (P< 0.05) for duration, vigor and sperm motility rate with cryoprotectants 10% methanol and 10% DMSO. The duration of sperm motility was longer (P< 0,05) when triggered in 1% NaHCO3 (96-21 s). Leiarius marmoratus semen cryopreserved with DMSO and methanol, presented respectively 7.32±4.21% and 8.94±6.69% of motility. However, the results were not satisfactory to establish a protocol for the specie.(AU)

Análises da membrana plasmática, acrossoma e mitocôndrica de espermatozoide ovino após criopreservação com adição de Ácido Fólico no meio tris-gema / Plasma membrane, acrosome and mitochondria analysis of sheep sperm after cryopreservation with addition of folic acid in the tris-yolk medium

Folic acid is closely linked to cobalamin, which is a carrier of hydroxymethyl and ant groups. The objective of this work was to evaluate the effect of adding folic acid to the TRIS-yolk diluter and possible effect on the membrane, mitochondria and acrosome of sheep sperm after thawing the semen. There were six sheep and seven collections of each animal in sessions between 48 and 72 hours. After collection and analysis, the semen samples were mixed and submitted to the formation of a pool. Diluted in TRIS-yolk medium, and divided into 3 groups; Group control; Group 2: 10,000 µM of folic acid and in Group 3: 5000 µM of folic acid. Subsequently, the semen samples were packaged in 0.25 mL straws and processed in a semen freezing machine. After a few days, the semen was thawed and evaluated: plasma membrane integrity, acrosome function and integrity. They were analyzed using an analysis of variance (ANOVA) followed by the Newman-Keuls test, using SAS. The additionof a micronutrient with potential antioxidant action in the semen indicates that it can reduce the action of free radicals that alter the plasma membrane and sperm DNA. The evaluation of the plasma membrane integrity, mitochondrial activity and the acrosome integrity of post-thawed sperm were not significantly different between the groups evaluated. Thus, it is concluded that the addition of folic acid in concentrations of 5000 µM and 10000 µM to the TRIS-yolk seminal diluter does not significantly influence the variables evaluated in this experiment.

Does supplementation of vitamin C, reduced glutathione or their association in semen extender reduce oxidative stress in bovine frozen semen? / A suplementação de vitamina C, glutationa reduzida ou sua associação no diluidor de sêmen reduz o estresse oxidativo no sêmen congelado bovino?

The aim of this study was to evaluate the addition of vitamin C, reduced glutathione and the association thereof to the bovine semen cryopreservation extender. The ejaculate from nine bulls were divided into four fractions, each corresponding to a treatment, namely: control group-semen diluted with Tris-yolk extender; vitamin C group-semen diluted in Tris-yolk extender supplemented with vitamin C (2.5mmol/mL); glutathione group-semen diluted in Tris-yolk extender supplemented with reduced glutathione (2.5mmol/mL) and associated group-semen diluted in Tris-yolk extender supplemented with vitamin C (1.25mmol/mL) and reduced glutathione (1.25mmol/mL). Afterwards, the semen was packed into French straws and submitted to cryopreservation using automated equipment. After cryopreservation, the semen was thawed and evaluated considering sperm motility, morphology, plasma membrane, acrosome, mitochondrial potential and oxidative stress, as well as the thermo resistance test. Extender's supplementation with the association of vitamin C and reduced glutathione showed benefic effects on sperm motility and preservation of plasma and acrosomal membranes during semen cryopreservation, being also the group that showed higher values of reactive oxygen species. Thus, the association of both antioxidants contributed to the preservation of sperm cells in every analyzed characteristic, suggesting its use on bovine semen cryopreservation.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar a adição de vitamina C, glutationa reduzida e sua associação ao diluidor de criopreservação de sêmen bovino. O ejaculado de nove touros foi dividido em quatro frações, cada uma correspondendo a um tratamento, a saber: grupo controle - sêmen diluído em Tris-gema; grupo vitamina C - sêmen diluído em Tris-gema, suplementado com vitamina C (2,5mmol/mL); grupo glutationa - sêmen diluído em Tris-gema, suplementado com glutationa reduzida (2,5mmol/mL) e grupo sêmen associado - diluído em Tris-gema, suplementado com vitamina C (1,25mmol/mL) e glutationa reduzida (1,25mmol/mL ). Posteriormente, o sêmen foi envasado em palhetas francesas e submetido à criopreservação por meio de equipamento automatizado. Após a criopreservação, o sêmen foi descongelado e avaliado quanto à motilidade espermática, à morfologia, à membrana plasmática, ao acrossoma, ao potencial mitocondrial e ao estresse oxidativo, bem como pelo teste de resistência térmica. A suplementação de extensor com a associação de vitamina C e glutationa reduzida mostrou efeitos benéficos sobre a motilidade espermática e a preservação das membranas plasmática e acrossomal durante a criopreservação de sêmen, sendo também o grupo que apresentou maiores valores de espécies reativas de oxigênio. Assim, a associação de ambos os antioxidantes contribuiu para a preservação dos espermatozóides em todas as características analisadas, sugerindo sua utilização na criopreservação de sêmen bovino.(AU)

Antioxidant effect on viability of boar semen cooled to 15°C / Influência de antioxidantes na viabilidade do sêmen suíno resfriado a 15°C

This study aimed to evaluate the addition of Vitamin C, reduced Glutathione and trolox on sperm characteristics of pork refrigerated semen. Six pigs were collected through the technique of gloved hand (10 ejaculates/animals). The semen was diluted in MR-A®. After the previous evaluations, the treatments were added: Control group: diluent only; Vitamin C Group: 200µM/mL Vitamin C; Trolox Group: 200µM/mL Trolox; Glutathione group: 2.5mM/ml Reduced glutathione. The semen was stored in thermal boxes and placed inside the refrigerator at 15oC and evaluated at D0, 12, 48, 72 hours. After 30 hours of incubation, each treatment was divided into two equal fractions and the same concentration of antioxidants was added in one of the parts. The results show that reduced glutathione supplementation preserves sperm motility after 24 hours but also has a higher percentage of acrosome intact in the presence of this antioxidant. There was no effect of adding a second dose of the antioxidants. In conclusion, the addition of reduced Glutathione to the swine semen diluent is a promising alternative for better preservation of sperm characteristics and the addition of the second dose of antioxidants during storage is detrimental to semen.(AU)

Este estudo tem como objetivo avaliar a adição da vitamina C, da glutationa reduzida e do trolox sobre características espermáticas do sêmen refrigerado de suínos. Seis cachaços foram coletados pela técnica de mão enluvada (10 coletas/animal). O sêmen foi diluído em MR-A®. Após as avaliações prévias, os tratamentos foram adicionados: grupo controle: apenas diluidor; grupo vitamina C: 200µM/mL de vitamina C; grupo trolox: 200µM/mL de trolox; grupo glutationa: 2.5mM/mL de glutationa reduzida. O sêmen foi armazenado em caixas térmicas e alocado dentro do refrigerador a 15oC e avaliado nos tempos zero, 12, 48 e 72 horas . Após 30 horas de incubação, cada tratamento foi dividido em duas frações iguais e adicionou-se a mesma concentração de antioxidantes em uma das partes. Os resultados demonstram que a suplementação de glutationa reduzida preserva a motilidade espermática após 24 horas, bem como tem maior percentual de acrossoma intacto na presença desse antioxidante. Não houve efeito ao se adicionar uma segunda dose dos antioxidantes. Em conclusão, o acréscimo da glutationa reduzida ao diluidor de sêmen suíno é uma alternativa promissora para melhor preservação das características espermáticas, e a adição da segunda dose dos antioxidantes durante o armazenamento é prejudicial ao sêmen.(AU)

Eficiência de duas técnicas de recuperação de espermatozoides epididimários de cães e avaliação seminal pós-criopreservação / [Efficiency of two techniques for recovering epididymal spermatozoids from dogs and seminal evaluation post cryopreservation]

O objetivo deste trabalho foi avaliar a recuperação de espermatozoides epididimários de cães castrados, utilizando as técnicas de fluxo retrógrado (FR) e flutuação (FL) em diluidor Tris-gema, antes e após a criopreservação. Foram coletados 30 complexos testículo-epididímos (CTE), sendo 15 para FR e 15 para FL, e, logo após a recuperação dos espermatozoides, foram analisadas as alterações morfológicas nessas células espermáticas. Após a adição do diluidor, foram avaliados os parâmetros de motilidade total (MOT) e vigor (V) espermáticos. O sêmen pós-criopreservado foi submetido ao teste de termorresistência nos tempos T0, T30, T60 e T90 minutos, além da avaliação das membranas plasmática e acrossomal por sondas fluorescentes. Não houve diferença estatística entre as técnicas quanto à MOT e ao vigor no sêmen diluído (FR-MOT: 82,3% e V: 3,4; FL-MOT: 79,6% e V: 3,2) e pós-criopreservado (FR-MOT: 34% e V: 2,8; FL-MOT: 30% e V: 2,7). A partir do T30, houve diferença significativa quanto à MOT e ao vigor nas técnicas utilizadas, e o tempo também prejudicou o acrossoma espermático a partir do T30. Conclui-se que as técnicas de recuperação de espermatozoides epididimários de cães castrados, testadas neste trabalho, podem ser utilizadas para refrigeração e criopreservação de sêmen.(AU)

The objective of this work was to evaluate the recovery of epididymal spermatozoa from castrated dogs using retrograde flow (FL) and flotation (FL) techniques in Tris-egg yolk diluent, before and after cryopreservation. Thirty testicle-epididymal complexes (CTE) were collected, 15 for FR and 15 for FL and soon after spermatozoid recovery, morphological changes in these spermatic cells were analyzed. After addition of the diluent, the parameters of total motility (MOT) and vigor (V) were evaluated. The post-cryopreserved semen was submitted to thermoresistance (TTR) test at T0, T30, T60 and T90 minutes, as well as the plasma and acrosomal membrane evaluation by fluorescent probes. There was no statistically significant difference between techniques tested for MOT and vigor in the diluted semen (FR-MOT: 82.3% and V: 3.4, FL-MOT: 79.6% and V: 3.2) and post-cryopreserved (FR-MOT: 34% and V: 2.8, FL-MOT: 30% and V: 2.7). From the T30 there was a significant difference regarding MOT and vigor in the used techniques, and the time also damaged the spermatic acrosome from the T30. It is concluded that the epididymal spermatozoa recovering techniques from castrated dogs, tested in this study, can be used for semen refrigeration and cryopreservation.(AU)

Does supplementation of vitamin C, reduced glutathione or their association in semen extender reduce oxidative stress in bovine frozen semen? / A suplementação de vitamina C, glutationa reduzida ou sua associação no diluidor de sêmen reduz o estresse oxidativo no sêmen congelado bovino?

The aim of this study was to evaluate the addition of vitamin C, reduced glutathione and the association thereof to the bovine semen cryopreservation extender. The ejaculate from nine bulls were divided into four fractions, each corresponding to a treatment, namely: control group-semen diluted with Tris-yolk extender; vitamin C group-semen diluted in Tris-yolk extender supplemented with vitamin C (2.5mmol/mL); glutathione group-semen diluted in Tris-yolk extender supplemented with reduced glutathione (2.5mmol/mL) and associated group-semen diluted in Tris-yolk extender supplemented with vitamin C (1.25mmol/mL) and reduced glutathione (1.25mmol/mL). Afterwards, the semen was packed into French straws and submitted to cryopreservation using automated equipment. After cryopreservation, the semen was thawed and evaluated considering sperm motility, morphology, plasma membrane, acrosome, mitochondrial potential and oxidative stress, as well as the thermo resistance test. Extender's supplementation with the association of vitamin C and reduced glutathione showed benefic effects on sperm motility and preservation of plasma and acrosomal membranes during semen cryopreservation, being also the group that showed higher values of reactive oxygen species. Thus, the association of both antioxidants contributed to the preservation of sperm cells in every analyzed characteristic, suggesting its use on bovine semen cryopreservation.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar a adição de vitamina C, glutationa reduzida e sua associação ao diluidor de criopreservação de sêmen bovino. O ejaculado de nove touros foi dividido em quatro frações, cada uma correspondendo a um tratamento, a saber: grupo controle - sêmen diluído em Tris-gema; grupo vitamina C - sêmen diluído em Tris-gema, suplementado com vitamina C (2,5mmol/mL); grupo glutationa - sêmen diluído em Tris-gema, suplementado com glutationa reduzida (2,5mmol/mL) e grupo sêmen associado - diluído em Tris-gema, suplementado com vitamina C (1,25mmol/mL) e glutationa reduzida (1,25mmol/mL ). Posteriormente, o sêmen foi envasado em palhetas francesas e submetido à criopreservação por meio de equipamento automatizado. Após a criopreservação, o sêmen foi descongelado e avaliado quanto à motilidade espermática, à morfologia, à membrana plasmática, ao acrossoma, ao potencial mitocondrial e ao estresse oxidativo, bem como pelo teste de resistência térmica. A suplementação de extensor com a associação de vitamina C e glutationa reduzida mostrou efeitos benéficos sobre a motilidade espermática e a preservação das membranas plasmática e acrossomal durante a criopreservação de sêmen, sendo também o grupo que apresentou maiores valores de espécies reativas de oxigênio. Assim, a associação de ambos os antioxidantes contribuiu para a preservação dos espermatozóides em todas as características analisadas, sugerindo sua utilização na criopreservação de sêmen bovino.(AU)

Antioxidant effect on viability of boar semen cooled to 15°C / Influência de antioxidantes na viabilidade do sêmen suíno resfriado a 15°C

This study aimed to evaluate the addition of Vitamin C, reduced Glutathione and trolox on sperm characteristics of pork refrigerated semen. Six pigs were collected through the technique of gloved hand (10 ejaculates/animals). The semen was diluted in MR-A®. After the previous evaluations, the treatments were added: Control group: diluent only; Vitamin C Group: 200µM/mL Vitamin C; Trolox Group: 200µM/mL Trolox; Glutathione group: 2.5mM/ml Reduced glutathione. The semen was stored in thermal boxes and placed inside the refrigerator at 15oC and evaluated at D0, 12, 48, 72 hours. After 30 hours of incubation, each treatment was divided into two equal fractions and the same concentration of antioxidants was added in one of the parts. The results show that reduced glutathione supplementation preserves sperm motility after 24 hours but also has a higher percentage of acrosome intact in the presence of this antioxidant. There was no effect of adding a second dose of the antioxidants. In conclusion, the addition of reduced Glutathione to the swine semen diluent is a promising alternative for better preservation of sperm characteristics and the addition of the second dose of antioxidants during storage is detrimental to semen.(AU)

Este estudo tem como objetivo avaliar a adição da vitamina C, da glutationa reduzida e do trolox sobre características espermáticas do sêmen refrigerado de suínos. Seis cachaços foram coletados pela técnica de mão enluvada (10 coletas/animal). O sêmen foi diluído em MR-A®. Após as avaliações prévias, os tratamentos foram adicionados: grupo controle: apenas diluidor; grupo vitamina C: 200µM/mL de vitamina C; grupo trolox: 200µM/mL de trolox; grupo glutationa: 2.5mM/mL de glutationa reduzida. O sêmen foi armazenado em caixas térmicas e alocado dentro do refrigerador a 15oC e avaliado nos tempos zero, 12, 48 e 72 horas . Após 30 horas de incubação, cada tratamento foi dividido em duas frações iguais e adicionou-se a mesma concentração de antioxidantes em uma das partes. Os resultados demonstram que a suplementação de glutationa reduzida preserva a motilidade espermática após 24 horas, bem como tem maior percentual de acrossoma intacto na presença desse antioxidante. Não houve efeito ao se adicionar uma segunda dose dos antioxidantes. Em conclusão, o acréscimo da glutationa reduzida ao diluidor de sêmen suíno é uma alternativa promissora para melhor preservação das características espermáticas, e a adição da segunda dose dos antioxidantes durante o armazenamento é prejudicial ao sêmen.(AU)

Análises da membrana plasmática, acrossoma e mitocôndrica de espermatozoide ovino após criopreservação com adição de Ácido Fólico no meio tris-gema / Plasma membrane, acrosome and mitochondria analysis of sheep sperm after cryopreservation with addition of folic acid in the tris-yolk medium

Folic acid is closely linked to cobalamin, which is a carrier of hydroxymethyl and ant groups. The objective of this work was to evaluate the effect of adding folic acid to the TRIS-yolk diluter and possible effect on the membrane, mitochondria and acrosome of sheep sperm after thawing the semen. There were six sheep and seven collections of each animal in sessions between 48 and 72 hours. After collection and analysis, the semen samples were mixed and submitted to the formation of a pool. Diluted in TRIS-yolk medium, and divided into 3 groups; Group control; Group 2: 10,000 µM of folic acid and in Group 3: 5000 µM of folic acid. Subsequently, the semen samples were packaged in 0.25 mL straws and processed in a semen freezing machine. After a few days, the semen was thawed and evaluated: plasma membrane integrity, acrosome function and integrity. They were analyzed using an analysis of variance (ANOVA) followed by the Newman-Keuls test, using SAS. The additionof a micronutrient with potential antioxidant action in the semen indicates that it can reduce the action of free radicals that alter the plasma membrane and sperm DNA. The evaluation of the plasma membrane integrity, mitochondrial activity and the acrosome integrity of post-thawed sperm were not significantly different between the groups evaluated. Thus, it is concluded that the addition of folic acid in concentrations of 5000 µM and 10000 µM to the TRIS-yolk seminal diluter does not significantly influence the variables evaluated in this experiment.(AU)

Análises de membrana plasmática, acrossoma e mitocôndria de espermatozoides ovino após criopreservação com adição do ácido fólico no meio Tris-gema / Plasma membrane, acrosome and mitochondria analysis of sheep sperm after cryopreservation with addition of folic acid in the tris-yolk medium

Folic acid is closely linked to cobalamin, which is a carrier of hydroxymethyl and ant groups. The objective of this work was to evaluate the effect of adding folic acid to the TRIS-yolk diluter and possible effect on the membrane, mitochondria and acrosome of sheep sperm after thawing the semen. There were six sheep and seven collections of each animal in sessions between 48 and 72 hours. After collection and analysis, the semen samples were mixed and submitted to the formation of a pool. Diluted in TRIS-yolk medium and divided into 3 groups; Group control; Group 2: 10,000µM of folic acid and in Group 3: 5000µM of folic acid. Subsequently, the semen samples were packaged in 0.25mL straws and processed in a semen freezing machine. After a few days, the semen was thawed and evaluated: plasma membrane integrity, acrosome function and integrity. They were analyzed using an analysis of variance (ANOVA) followed by the Newman-Keuls test, using SAS. The additionof a micronutrient with potential antioxidant action in the semen indicates that it can reduce the action of free radicals that alter the plasma membrane and sperm DNA. The evaluation of the plasma membrane integrity, mitochondrial activity and the acrosome integrity of post-thawed sperm were not significantly different between the groups evaluated. Thus, it is concluded that the addition of folic acid in concentrations of 5000µM and 10000µM to the TRIS-yolk seminal diluter does not significantly influence the variables evaluated in this experiment.

Análises de membrana plasmática, acrossoma e mitocôndria de espermatozoides ovino após criopreservação com adição do ácido fólico no meio Tris-gema / Plasma membrane, acrosome and mitochondria analysis of sheep sperm after cryopreservation with addition of folic acid in the tris-yolk medium

Folic acid is closely linked to cobalamin, which is a carrier of hydroxymethyl and ant groups. The objective of this work was to evaluate the effect of adding folic acid to the TRIS-yolk diluter and possible effect on the membrane, mitochondria and acrosome of sheep sperm after thawing the semen. There were six sheep and seven collections of each animal in sessions between 48 and 72 hours. After collection and analysis, the semen samples were mixed and submitted to the formation of a pool. Diluted in TRIS-yolk medium and divided into 3 groups; Group control; Group 2: 10,000µM of folic acid and in Group 3: 5000µM of folic acid. Subsequently, the semen samples were packaged in 0.25mL straws and processed in a semen freezing machine. After a few days, the semen was thawed and evaluated: plasma membrane integrity, acrosome function and integrity. They were analyzed using an analysis of variance (ANOVA) followed by the Newman-Keuls test, using SAS. The additionof a micronutrient with potential antioxidant action in the semen indicates that it can reduce the action of free radicals that alter the plasma membrane and sperm DNA. The evaluation of the plasma membrane integrity, mitochondrial activity and the acrosome integrity of post-thawed sperm were not significantly different between the groups evaluated. Thus, it is concluded that the addition of folic acid in concentrations of 5000µM and 10000µM to the TRIS-yolk seminal diluter does not significantly influence the variables evaluated in this experiment.(AU)

Uso do extrato de Aloe vera na criopreservação do sêmen suíno / Use of Aloe vera extract in swine semen criopreservation

A gema de ovo é utilizada como agente crioprotetor em diluentes de congelação de sêmen visando à proteção contra o choque térmico, apesar de apresentar uma possibilidade de contaminação microbiológica. Autores buscam no Aloe vera, um meio alternativo para a conservação do sêmen. O objetivo foi avaliar o uso do crioprotetor Aloe vera na criopreservação do sêmen de suíno. Foram utilizados 25 ejaculados, coletados através da técnica da mão enluvada. As amostras foram diluídas no diluente de refrigeração (gema de ovo 10,0%, Aloe vera 10, 20 e 30%) a 17 °C, diluente de congelação (diluente de refrigeração + glicerol 6,0%) 5 °C e armazenados em palhetas. As palhetas foram avaliadas quanto ao vigor, motilidade, funcionalidade da membrana, vitalidade, integridade de acrossoma e na análise de sêmen assistida (CASA). Os dados foram avaliados quanto à normalidade, em seguida analisados utilizando ANOVA e comparações múltiplas, as análises foram realizadas com nível significância de 5,0%, utilizando o programa R3.4.0. Utilizou-se estatística descritiva para dados de vigor, motilidade e CASA. Na avaliação do sêmen descongelado para a funcionalidade da membrana, vitalidade e integridade de acrossoma, os maiores valores foram encontrados para as amostras com a gema de ovo (p0,05). Os dados de vigor, motilidade e CASA, das amostras utilizando o Aloe vera, apresentaram valores de 0,0. Os resultados mostraram que as diferentes concentrações de Aloe vera não exerceram o efeito crioprotetor desejado sobre a célula espermática, sendo assim, entende-se que são necessários maiores estudos sobre a sua ação na conservação de sêmen, bem como uma possível interação com os espermatozoides suínos...

Egg yolk is used as a cryoprotective agent in semen freezing diluents for protection against thermal shock, despite the possibility of microbiological contamination. Authors search for Aloe vera, an alternative medium for the conservation of semen. The objective was to evaluate the use of the cryoprotectant Aloe vera in the cryopreservation of swine semen. We used 25 ejaculates, collected through the gloved hand technique. The samples were diluted in the coolant diluent (10.0% egg yolk, Aloe vera 10, 20 and 30%) at 17 °C, freezing diluent (refrigerant diluent + glycerol 6.0%) at 5 °C and stored in vales. The vanes were evaluated for vigor, motility, membrane functionality, vitality, acrosome integrity and assisted semen analysis (CASA). The data were evaluated for normality, then analyzed using ANOVA and multiple comparisons, the analyzes were performed with a significance level of 5.0%, using the program R3.4.0. Descriptive statistics were used for data on vigor, motility and CASA. In the evaluation of thawed semen for membrane functionality, acrosome integrity and vitality, the highest values were found for the egg yolk samples (p0.05). The data of vigor, motility and CASA, of the samples using Aloe vera presented values of 0.0. The results showed that the different concentrations of Aloe vera did not exert the desired cryoprotective effect on the sperm cell, so it is understood that further studies are needed on its action on semen conservation, as well as a possible interaction with swine spermatozoa. On the other hand, it is believed that additional studies on the cooling curve of the porcine semen are still necessary, aiming at its cryopreservation.

Uso do extrato de Aloe vera na criopreservação do sêmen suíno / Use of Aloe vera extract in swine semen criopreservation

A gema de ovo é utilizada como agente crioprotetor em diluentes de congelação de sêmen visando à proteção contra o choque térmico, apesar de apresentar uma possibilidade de contaminação microbiológica. Autores buscam no Aloe vera, um meio alternativo para a conservação do sêmen. O objetivo foi avaliar o uso do crioprotetor Aloe vera na criopreservação do sêmen de suíno. Foram utilizados 25 ejaculados, coletados através da técnica da mão enluvada. As amostras foram diluídas no diluente de refrigeração (gema de ovo 10,0%, Aloe vera 10, 20 e 30%) a 17 °C, diluente de congelação (diluente de refrigeração + glicerol 6,0%) 5 °C e armazenados em palhetas. As palhetas foram avaliadas quanto ao vigor, motilidade, funcionalidade da membrana, vitalidade, integridade de acrossoma e na análise de sêmen assistida (CASA). Os dados foram avaliados quanto à normalidade, em seguida analisados utilizando ANOVA e comparações múltiplas, as análises foram realizadas com nível significância de 5,0%, utilizando o programa R3.4.0. Utilizou-se estatística descritiva para dados de vigor, motilidade e CASA. Na avaliação do sêmen descongelado para a funcionalidade da membrana, vitalidade e integridade de acrossoma, os maiores valores foram encontrados para as amostras com a gema de ovo (p<0,05), e entre as amostras que utilizaram o Aloe vera, não foram encontradas diferenças significativas entre as diferentes concentrações testadas (p>0,05). Os dados de vigor, motilidade e CASA, das amostras utilizando o Aloe vera, apresentaram valores de 0,0. Os resultados mostraram que as diferentes concentrações de Aloe vera não exerceram o efeito crioprotetor desejado sobre a célula espermática, sendo assim, entende-se que são necessários maiores estudos sobre a sua ação na conservação de sêmen, bem como uma possível interação com os espermatozoides suínos...(AU)

Egg yolk is used as a cryoprotective agent in semen freezing diluents for protection against thermal shock, despite the possibility of microbiological contamination. Authors search for Aloe vera, an alternative medium for the conservation of semen. The objective was to evaluate the use of the cryoprotectant Aloe vera in the cryopreservation of swine semen. We used 25 ejaculates, collected through the gloved hand technique. The samples were diluted in the coolant diluent (10.0% egg yolk, Aloe vera 10, 20 and 30%) at 17 °C, freezing diluent (refrigerant diluent + glycerol 6.0%) at 5 °C and stored in vales. The vanes were evaluated for vigor, motility, membrane functionality, vitality, acrosome integrity and assisted semen analysis (CASA). The data were evaluated for normality, then analyzed using ANOVA and multiple comparisons, the analyzes were performed with a significance level of 5.0%, using the program R3.4.0. Descriptive statistics were used for data on vigor, motility and CASA. In the evaluation of thawed semen for membrane functionality, acrosome integrity and vitality, the highest values were found for the egg yolk samples (p<0.05), and among the samples that used Aloe vera, found significant differences between the different concentrations tested (p>0.05). The data of vigor, motility and CASA, of the samples using Aloe vera presented values of 0.0. The results showed that the different concentrations of Aloe vera did not exert the desired cryoprotective effect on the sperm cell, so it is understood that further studies are needed on its action on semen conservation, as well as a possible interaction with swine spermatozoa. On the other hand, it is believed that additional studies on the cooling curve of the porcine semen are still necessary, aiming at its cryopreservation.(AU)

Use of testicular tone and echogenicity in identifying boars with low sperm quality / Uso de tônus e ecogenicidade testiculares na identificação de reprodutores suínos com baixa qualidade espermática

This study aimed to evaluate the use of some testicular traits to identify boars with low sperm morphological quality. The consistency (scores from 1 to 5), tone with tonometry (mm), parenchyma echogenicity and heterogeneity with ultrasound (pixel) were assessed in 402 mature boars (18.5 months on average). Sperm abnormality thresholds (≤ 25% of total sperm abnormalities, ≤ 5% of heads, acrosome, neck or midpiece defects, ≤ 10% tail defects, and 15% cytoplasmic droplets) were used to classify boars as approved or disapproved. Three classes of testicular traits were formed (extremely low and high values, approximately 15% each, were kept in separated classes). When the traits were individually evaluated, fewer boars were approved if the echogenicity or heterogeneity were high, or if the tone was rigid. When evaluated in combination, the interaction between heterogeneity and tone, and between heterogeneity and echogenicity were significant. The high heterogeneity combined with soft tone or with hypo-echogenicity resulted in lower approval of boars. Tonometry and ultrasonography have a moderate potential to be included in breeding soundness examination of boars. When combined, they provide more reliable information about the impact of testicular parenchymal alterations on morphology of sperm cells.(AU)

O estudo objetivou avaliar o uso de características testiculares para identificar reprodutores com baixa qualidade de morfologia espermática. A consistência (escore de 1 a 5), o tônus por tonometria (mm), a ecogenicidade e a heterogeneidade do parênquima testicular por ultrassonografia (pixel) foram avaliados em 402 machos suínos maduros (18,5 meses, em média). Limiares máximos de anormalidades espermáticas (≤ 25% de defeitos totais, ≤ 5% de defeitos de cabeça, acrossoma, colo e peça intermediária, ≤ 10% de defeitos de cauda e 15% de gota citoplasmática) foram utilizados para classificar os machos como aprovados ou reprovados. Três classes de características testiculares foram formadas (valores extremamente baixos e altos, aproximadamente 15% em cada, foram mantidos em classes separadas). Quando as características testiculares foram avaliadas individualmente, menos machos foram aprovados se a ecogenicidade ou a heterogeneidade foram altas, ou se o tônus era rígido. Quando avaliadas em combinação, a interação entre heterogeneidade e tônus e a interação entre heterogeneidade e ecogenicidade foram significativas. A alta heterogeneidade combinada com testículos flácidos ou com testículos hipoecogênicos resultou em menor aprovação de cachaços. A tonometria e a ultrassonografia possuem potencial moderado para serem incluídas no exame andrológico de cachaços. Quando combinadas, as técnicas fornecem uma informação mais consistente do impacto das alterações do parênquima testicular na morfologia das células espermáticas.(AU)

Effect of sheep diets with macadamia by-product and protected fat on the quality of fresh and frozen semen / Efeito de dietas de ovinos com coproduto de macadâmia e gordura protegida na qualidade de sêmen fresco e congelado

The ruminant diet is characterized by low lipid concentration, resulting from traditional diets composed by forage species. The use of agro industrial byproducts in animal feed may be interesting, once it reduces production costs and reduces environmental contamination. Among them, macadamia is known for interesting protein and carbohydrate contents; however, it is the amount of lipids that make it different. Fat supplementation can raise concentrations of blood cholesterol, a precursor metabolite of steroid hormones, which constitute biological membranes and possess specific and essential biological activities. The semen characteristics should be taken into account in the selection of the breeding herds, and the semen analysis makes it possible to evaluate the fertility of the sheep and allows obtaining important conclusions based on its results. The objective was to evaluate the seminal quality of Morada Nova sheep breed consuming diets supplemented with macadamia residue and protected fat. The experiment was carried out with 24 rams aged 18 or 30 months, distributed in four treatment groups: control (C), 50 g (MAC50) or 150 g (MAC150) of macadamia industrial byproduct; and 50 g of protected fat (Megalac®), added to the concentrate. Semen was collected at four intervals: before supplementation (day 0), 30, 60 and 75 days after the beginning of supplementation, and it was taken the measurements of volume, appearance, motility, vigour, turbulence, concentration and morphology. At days 60 and 75, semen was frozen for determination of plasma membrane integrity, acrosome integrity and mitochondrial activity after thawing. Analysis of variance was performed and the means were compared by the SNK test. In the analysis of fresh semen, a significant effect (p0.05). The inclusion of 50 or 150 g of macadamia residue or 50 g of Megalac in the...

A dieta dos ruminantes é caracterizada por baixa concentração de lipídeos, resultante de dietas tradicionais compostas por espécies forrageiras. A utilização de coprodutos agroindustriais na alimentação animal pode ser interessante, pois além de reduzir custos na produção, reduz a contaminação ambiental. Dentre eles a macadâmia é conhecida por teores interessantes de proteína e de carboidratos; entretanto é a quantidade de lipídeos que a torna diferenciada. A suplementação de gordura pode elevar as concentrações de colesterol sanguíneo, metabólito precursor dos hormônios esteroides, que constituem membranas biológicas e possuem atividades biológicas específicas e essenciais. As características seminais devem ser levadas em consideração na seleção dos reprodutores, sendo que a análise do sêmen possibilita avaliar a fertilidade do carneiro e permite obter importantes conclusões a partir dos seus resultados. O objetivo foi avaliar a qualidade seminal de carneiros Morada Nova consumindo dietas suplementadas com resíduo de macadâmia e gordura protegida. O experimento foi conduzido com 24 carneiros, com idade entre 18 e 30 meses, distribuídos em quatro grupos de tratamento: controle (C), 50 g (MAC50) ou 150 g (MAC150) de subproduto industrial da macadâmia; e 50 g de gordura protegida (Megalac®), adicionados ao concentrado. O sêmen foi coletado em quatro intervalos: antes da suplementação (dia 0), 30, 60 e 75 dias após o início da suplementação. O sêmen foi coletado para avaliação do volume, aparência, motilidade, vigor, turbilhonamento, concentração e morfologia. Nos dias 60 e 75, o sêmen foi congelado para determinação da integridade da membrana plasmática, integridade do acrossoma e atividade mitocondrial após o descongelamento. A análise de variância foi realizada e as médias comparadas pelo teste SNK. Na análise do sêmen fresco, foi observado efeito significativo (p<0,05) dos tratamentos na motilidade. Para...

Efeito da adição de plasma seminal oriundo de animais de alta e baixa fertilidade na criopreservação de espermatozoides da cauda do epidídimo e do ejaculado de garanhões subférteis / Effect of seminal plasma addition from high and low fertility animals on the cryopreservation of epididymal tail and ejaculated sperm from subfertile stallions

O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da adição de plasma seminal de garanhões de alta e baixa fertilidade sobre a congelabilidade e a viabilidade de espermatozoides do ejaculado (EJ) e do epidídimo (EP) de garanhões subférteis. Foram utilizados seis garanhões com histórico de subfertilidade. Após coleta, espermatozoides do ejaculado foram divididos em três alíquotas: BotuSêmen® (EJ-CT); plasma seminal de alta qualidade espermática (EJ-PS1); e plasma seminal de baixa qualidade espermática (EJ-PS2). O mesmo protocolo foi realizado com espermatozoides da cauda do epidídimo após orquiectomia (EP-CT; EP-PS1; EP-PS2). Foram realizadas avaliações da cinética espermática pelo CASA e análises de integridade de membrana, acrossoma, fragmentação de DNA, capacitação espermática e peroxidação espermática por citometria de fluxo. Não foram observadas diferenças na cinética espermática entre EJ e EP, logo após a descongelação. Porém, foi observada maior (P<0,05) porcentagem de células com membranas plasmática e acrossomal íntegras nos grupos EP (EP-CT:31,7±7,5b; EP-PS1:35,2±7,0b; EP-PS2:33,9±7,2b) em comparação aos grupos EJ (EJ-CT:15,1±4,9a; EJ-PS1:11,7±4,5a; EJ-PS2:13,1±5,2a). Adicionalmente, foram observadas diferenças no índice de fragmentação de DNA (EJ-CT:2,6±0,6a; EJ-PS1:2,4±0,8a; EJ-PS2:3,0±0,8a; EP-CT:1,4±0,4b; EP-PS1:1,2±0,3b; EP-PS2:1,3±0,2b). Concluiu-se que a adição de 20% de plasma seminal, oriundo de animais férteis ou subférteis, previamente à congelação de espermatozoides epidídimários de animais subférteis não interfere na qualidade espermática.(AU)

The aim of this study was to compare the effect of the addition of seminal plasma from high and low fertility stallions on sperm viability of frozen-thawed sperm cells from ejaculate and from epididymal tail of subfertile stallions. Six stallions with a history of subfertility were used. After collection, ejaculate spermatozoa were divided into three aliquots: Botu-Semen® (EJ-CT); High-quality seminal plasma (EJ-PS1); Low-quality seminal plasma (EJ-PS2). The same was done with sperm cells from epididymis tail after orchiectomy (EP-CT; EP-PS1; EP-PS2). Evaluations of sperm kinetics were assessed by CASA and membrane and acrosome integrity, DNA fragmentation, sperm capacitation and sperm peroxidation were assessed by flow cytometry. After thawing, no differences were observed between ejaculated sperm (EJ) and epididymal sperm (EP) in any CASA evaluations. However, higher (P< 0.05) percentage of cells with intact plasma and acrossomal membranes was observed in EP groups (EP-CT:31.7±7.5b; EP-PS1:35.2±7.0b; EP-PS2:33.9±7.2b) compared to EJ groups (EJ-CT:15.1±4.9a, EJ-PS1:11.7±4.5a, EJ-PS2:13.1±5,2a). In addition, differences in DNA fragmentation index were observed (EJ-CT:2.6±0.6a; EJ-PS1:2.4±0.8a; EJ-PS2:3.0±0.8a; CT:1.4±0.4b; EP-PS1:1.2±0.3b; EP-PS2:1.3±0.2b). It was concluded that the addition of 20% seminal plasma from fertile or subfertile animals prior to the freezing of epididymal spermatozoa from subfertile animals does not interfere in sperm quality.(AU)

Efeito da adição de plasma seminal oriundo de animais de alta e baixa fertilidade na criopreservação de espermatozoides da cauda do epidídimo e do ejaculado de garanhões subférteis / Effect of seminal plasma addition from high and low fertility animals on the cryopreservation of epididymal tail and ejaculated sperm from subfertile stallions

O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da adição de plasma seminal de garanhões de alta e baixa fertilidade sobre a congelabilidade e a viabilidade de espermatozoides do ejaculado (EJ) e do epidídimo (EP) de garanhões subférteis. Foram utilizados seis garanhões com histórico de subfertilidade. Após coleta, espermatozoides do ejaculado foram divididos em três alíquotas: BotuSêmen® (EJ-CT); plasma seminal de alta qualidade espermática (EJ-PS1); e plasma seminal de baixa qualidade espermática (EJ-PS2). O mesmo protocolo foi realizado com espermatozoides da cauda do epidídimo após orquiectomia (EP-CT; EP-PS1; EP-PS2). Foram realizadas avaliações da cinética espermática pelo CASA e análises de integridade de membrana, acrossoma, fragmentação de DNA, capacitação espermática e peroxidação espermática por citometria de fluxo. Não foram observadas diferenças na cinética espermática entre EJ e EP, logo após a descongelação. Porém, foi observada maior (P<0,05) porcentagem de células com membranas plasmática e acrossomal íntegras nos grupos EP (EP-CT:31,7±7,5b; EP-PS1:35,2±7,0b; EP-PS2:33,9±7,2b) em comparação aos grupos EJ (EJ-CT:15,1±4,9a; EJ-PS1:11,7±4,5a; EJ-PS2:13,1±5,2a). Adicionalmente, foram observadas diferenças no índice de fragmentação de DNA (EJ-CT:2,6±0,6a; EJ-PS1:2,4±0,8a; EJ-PS2:3,0±0,8a; EP-CT:1,4±0,4b; EP-PS1:1,2±0,3b; EP-PS2:1,3±0,2b). Concluiu-se que a adição de 20% de plasma seminal, oriundo de animais férteis ou subférteis, previamente à congelação de espermatozoides epidídimários de animais subférteis não interfere na qualidade espermática.(AU)

The aim of this study was to compare the effect of the addition of seminal plasma from high and low fertility stallions on sperm viability of frozen-thawed sperm cells from ejaculate and from epididymal tail of subfertile stallions. Six stallions with a history of subfertility were used. After collection, ejaculate spermatozoa were divided into three aliquots: Botu-Semen® (EJ-CT); High-quality seminal plasma (EJ-PS1); Low-quality seminal plasma (EJ-PS2). The same was done with sperm cells from epididymis tail after orchiectomy (EP-CT; EP-PS1; EP-PS2). Evaluations of sperm kinetics were assessed by CASA and membrane and acrosome integrity, DNA fragmentation, sperm capacitation and sperm peroxidation were assessed by flow cytometry. After thawing, no differences were observed between ejaculated sperm (EJ) and epididymal sperm (EP) in any CASA evaluations. However, higher (P< 0.05) percentage of cells with intact plasma and acrossomal membranes was observed in EP groups (EP-CT:31.7±7.5b; EP-PS1:35.2±7.0b; EP-PS2:33.9±7.2b) compared to EJ groups (EJ-CT:15.1±4.9a, EJ-PS1:11.7±4.5a, EJ-PS2:13.1±5,2a). In addition, differences in DNA fragmentation index were observed (EJ-CT:2.6±0.6a; EJ-PS1:2.4±0.8a; EJ-PS2:3.0±0.8a; CT:1.4±0.4b; EP-PS1:1.2±0.3b; EP-PS2:1.3±0.2b). It was concluded that the addition of 20% seminal plasma from fertile or subfertile animals prior to the freezing of epididymal spermatozoa from subfertile animals does not interfere in sperm quality.(AU)