Aeromonas from farmed tambaqui from North Brazil: molecular identification and pathogenic potential / Aeromonas de tambaqui de cultivo do norte do Brasil: identificação molecular e potencial patogênico

The aim of this study was to molecularly identify different species of Aeromonas isolated from farmed tambaqui (Colossoma macropomum) from North Brazil, and evaluate their pathogenic potential by the presence of virulence genes. From the extraction of bacterial DNA, PCR (polymerase chain reaction) of the primers 16S rDNA, aerA (cytolytic enterotoxin), ast (cytotoxic enterotoxin) and act (cytotoxic enterotoxin) were performed. Of 24 isolates evaluated, eight amplified the ast gene, one amplified the act gene, but the areA gene was not amplified in any isolate. Sequencing of the 16S rRNA primer revealed a predominance of Aeromonas jandaei specie (92%). Aeromonas taiwanensis (4%), for the first time isolated from fish in Brazil, and Aeromonas hydrophila (4%) each appeared as just one isolate. Results showed that 32% of Aeromonas isolated from farmed tambaqui have considerable pathogenic potential for systemic damage, since the selected PCR primers are encoding the most common virulence genes in Aeromonas with high pathogenic intensity.

O objetivo deste estudo foi identificar molecularmente diferentes espécies de Aeromonas isoladas de tambaqui (Colossoma macropomum) de cultivo do norte do Brasil e avaliar seu potencial patogênico pela presença de genes de virulência. A partir da extração do DNA bacteriano, foi realizada a PCR (reação em cadeia da polimerase) dos primers 16S rDNA, aerA (enterotoxina citolítica), ast (enterotoxina citotóxica) e act (enterotoxina citotóxica). Dos 24 isolados avaliados, oito amplificaram o gene ast, um amplificou o gene act, mas o gene areA não foi amplificado em nenhum isolado. O sequenciamento do primer 16S rRNA revelou uma predominância da espécie Aeromonas jandaei (92%). Aeromonas taiwanensis (4%), pela primeira vez isolada em peixes no Brasil, e Aeromonas hydrophila (4%) apareceram cada uma como apenas um isolado. Os resultados mostram que 32% das Aeromonas isoladas de tambaqui de cultivo apresentam considerável potencial patogênico para danos sistêmicos, uma vez que os primers de PCR selecionados estão codificando os genes de virulência mais comuns em Aeromonas com alta intensidade patogênica.

Aeromonas from farmed tambaqui from North Brazil: molecular identification and pathogenic potential / Aeromonas de tambaqui de cultivo do norte do Brasil: identificação molecular e potencial patogênico

ABSTRACT: The aim of this study was to molecularly identify different species of Aeromonas isolated from farmed tambaqui (Colossoma macropomum) from North Brazil, and evaluate their pathogenic potential by the presence of virulence genes. From the extraction of bacterial DNA, PCR (polymerase chain reaction) of the primers 16S rDNA, aerA (cytolytic enterotoxin), ast (cytotoxic enterotoxin) and act (cytotoxic enterotoxin) were performed. Of 24 isolates evaluated, eight amplified the ast gene, one amplified the act gene, but the areA gene was not amplified in any isolate. Sequencing of the 16S rRNA primer revealed a predominance of Aeromonas jandaei specie (92%). Aeromonas taiwanensis (4%), for the first time isolated from fish in Brazil, and Aeromonas hydrophila (4%) each appeared as just one isolate. Results showed that 32% of Aeromonas isolated from farmed tambaqui have considerable pathogenic potential for systemic damage, since the selected PCR primers are encoding the most common virulence genes in Aeromonas with high pathogenic intensity.

RESUMO: O objetivo deste estudo foi identificar molecularmente diferentes espécies de Aeromonas isoladas de tambaqui (Colossoma macropomum) de cultivo do norte do Brasil e avaliar seu potencial patogênico pela presença de genes de virulência. A partir da extração do DNA bacteriano, foi realizada a PCR (reação em cadeia da polimerase) dos primers 16S rDNA, aerA (enterotoxina citolítica), ast (enterotoxina citotóxica) e act (enterotoxina citotóxica). Dos 24 isolados avaliados, oito amplificaram o gene ast, um amplificou o gene act, mas o gene areA não foi amplificado em nenhum isolado. O sequenciamento do primer 16S rRNA revelou uma predominância da espécie Aeromonas jandaei (92%). Aeromonas taiwanensis (4%), pela primeira vez isolada em peixes no Brasil, e Aeromonas hydrophila (4%) apareceram cada uma como apenas um isolado. Os resultados mostram que 32% das Aeromonas isoladas de tambaqui de cultivo apresentam considerável potencial patogênico para danos sistêmicos, uma vez que os primers de PCR selecionados estão codificando os genes de virulência mais comuns em Aeromonas com alta intensidade patogênica.

Evaluation of three alum-precipitated Aeromonas hydrophila vaccines administered to Labeo rohita, Cirrhinus mrigala and Ctenopharyngodon idella: immunokinetics, immersion challenge and histopathology / Avaliação de três vacinas de Aeromonas hydrophila precipitadas com alúmen administradas a Labeo rohita, Cirrhinus mrigala e Ctenopharyngodon idella: imunocinética, desafio de imersão e histopatologia

Aeromonas hydrophila is a cause of infectious disease outbreaks in carp species cultured in South Asian countries including Pakistan. This bacterium has gained resistance to a wide range of antibiotics and robust preventive measures are necessary to control its spread. No prior use of fish vaccines has been reported in Pakistan. The present study aims to develop and evaluate inactivated vaccines against local strain of A. hydrophila in Pakistan with alum-precipitate as adjuvant. The immunogenic potential of vaccine was evaluated in two Indian major carps (Rohu: Labeo rohita, Mori: Cirrhinus mrigala) and a Chinese carp (Grass carp: Ctenopharyngodon idella). Fish were vaccinated intraperitoneally followed by a challenge through immersion. Fish with an average age of 4-5 months were randomly distributed in three vaccinated groups with three vaccine concentrations of 108, 109 and 1010 colony forming unit (CFU)/ml and a control group. Fixed dose of 0.1ml was applied to each fish on 1st day and a booster dose at 15 days post-vaccination (DPV). Blood samples were collected on 14, 28, 35, 48 and 60 DPV to determine antibody titers in blood serum using compliment fixation test (CFT). Fish were challenged at 60 DPV with infectious A. hydrophila with 108 CFU/ml through immersion. Significantly higher levels of antibody titers were observed from 28 DPV in all vaccinated groups as compared to those in the control group. In challenge experiment the average RPS (relative percent survivability) was 71% for groups vaccinated with 109 and 1010 CFU/ml and 86% for 108 CFU/ml. Vaccine with 108 CFU/ml induced highest immune response followed by 109 and 1010 CFU/ml. The immune response of L. rohita and C. idella was better than that of C. mrigala. In general, normal histopathology was [...].

Aeromonas hydrophila é uma causa de surtos de doenças infecciosas em espécies de carpas cultivadas em países do sul da Ásia, incluindo o Paquistão. Essa bactéria ganhou resistência a uma ampla gama de antibióticos, e medidas preventivas robustas são necessárias para controlar sua disseminação. Nenhum uso anterior de vacinas para peixes foi relatado no Paquistão. O presente estudo tem como objetivo desenvolver e avaliar vacinas inativadas contra cepa local de A. hydrophila no Paquistão com precipitado de alúmen como adjuvante. O potencial imunogênico da vacina foi avaliado em duas carpas principais indianas (Rohu: Labeo rohita, Mori: Cirrhinus mrigala) e uma carpa chinesa (Grass Carp: Ctenopharyngodon idella). Os peixes foram vacinados por via intraperitoneal, seguido de um desafio por imersão. Peixes com idade média de 4-5 meses foram distribuídos aleatoriamente em três grupos vacinados com três concentrações de vacina de 108, 109 e 1010 unidades formadoras de colônias (UFC) / ml e um grupo de controle. Foi aplicada dose fixa de 0,1ml em cada peixe no 1º dia e dose de reforço 15 dias pós-vacinação (DPV). Amostras de sangue foram coletadas em 14, 28, 35, 48 e 60 DPV para determinar os títulos de anticorpos no soro sanguíneo usando o teste de fixação de elogio (CFT). Os peixes foram desafiados a 60 DPV com infecciosa A. hydrophila com 108 CFU / ml por imersão. Níveis significativamente mais elevados de títulos de anticorpos foram observados em 28 DPV em todos os grupos vacinados, em comparação com aqueles no grupo de controle. Na experiência de desafio, o RPS médio (sobrevivência percentual relativa) foi de 71% para os grupos vacinados com 109 e 1010 CFU / ml e 86% para 108 CFU / ml. A vacina com 108 UFC / ml induziu a maior resposta imune seguida por 109 e 1010 UFC / ml. A resposta imune de L. rohita e C. idella foi melhor do que a de C. mrigala. Em geral, histopatologia normal foi observada em diferentes [...].

Evaluation of three alum-precipitated Aeromonas hydrophila vaccines administered to Labeo rohita, Cirrhinus mrigala and Ctenopharyngodon idella: immunokinetics, immersion challenge and histopathology / Avaliação de três vacinas de Aeromonas hydrophila precipitadas com alúmen administradas a Labeo rohita, Cirrhinus mrigala e Ctenopharyngodon idella: imunocinética, desafio de imersão e histopatologia

Aeromonas hydrophila is a cause of infectious disease outbreaks in carp species cultured in South Asian countries including Pakistan. This bacterium has gained resistance to a wide range of antibiotics and robust preventive measures are necessary to control its spread. No prior use of fish vaccines has been reported in Pakistan. The present study aims to develop and evaluate inactivated vaccines against local strain of A. hydrophila in Pakistan with alum-precipitate as adjuvant. The immunogenic potential of vaccine was evaluated in two Indian major carps (Rohu: Labeo rohita, Mori: Cirrhinus mrigala) and a Chinese carp (Grass carp: Ctenopharyngodon idella). Fish were vaccinated intraperitoneally followed by a challenge through immersion. Fish with an average age of 4-5 months were randomly distributed in three vaccinated groups with three vaccine concentrations of 108, 109 and 1010 colony forming unit (CFU)/ml and a control group. Fixed dose of 0.1ml was applied to each fish on 1st day and a booster dose at 15 days post-vaccination (DPV). Blood samples were collected on 14, 28, 35, 48 and 60 DPV to determine antibody titers in blood serum using compliment fixation test (CFT). Fish were challenged at 60 DPV with infectious A. hydrophila with 108 CFU/ml through immersion. Significantly higher levels of antibody titers were observed from 28 DPV in all vaccinated groups as compared to those in the control group. In challenge experiment the average RPS (relative percent survivability) was 71% for groups vaccinated with 109 and 1010 CFU/ml and 86% for 108 CFU/ml. Vaccine with 108 CFU/ml induced highest immune response followed by 109 and 1010 CFU/ml. The immune response of L. rohita and C. idella was better than that of C. mrigala. In general, normal histopathology was [...].(AU)

Aeromonas hydrophila é uma causa de surtos de doenças infecciosas em espécies de carpas cultivadas em países do sul da Ásia, incluindo o Paquistão. Essa bactéria ganhou resistência a uma ampla gama de antibióticos, e medidas preventivas robustas são necessárias para controlar sua disseminação. Nenhum uso anterior de vacinas para peixes foi relatado no Paquistão. O presente estudo tem como objetivo desenvolver e avaliar vacinas inativadas contra cepa local de A. hydrophila no Paquistão com precipitado de alúmen como adjuvante. O potencial imunogênico da vacina foi avaliado em duas carpas principais indianas (Rohu: Labeo rohita, Mori: Cirrhinus mrigala) e uma carpa chinesa (Grass Carp: Ctenopharyngodon idella). Os peixes foram vacinados por via intraperitoneal, seguido de um desafio por imersão. Peixes com idade média de 4-5 meses foram distribuídos aleatoriamente em três grupos vacinados com três concentrações de vacina de 108, 109 e 1010 unidades formadoras de colônias (UFC) / ml e um grupo de controle. Foi aplicada dose fixa de 0,1ml em cada peixe no 1º dia e dose de reforço 15 dias pós-vacinação (DPV). Amostras de sangue foram coletadas em 14, 28, 35, 48 e 60 DPV para determinar os títulos de anticorpos no soro sanguíneo usando o teste de fixação de elogio (CFT). Os peixes foram desafiados a 60 DPV com infecciosa A. hydrophila com 108 CFU / ml por imersão. Níveis significativamente mais elevados de títulos de anticorpos foram observados em 28 DPV em todos os grupos vacinados, em comparação com aqueles no grupo de controle. Na experiência de desafio, o RPS médio (sobrevivência percentual relativa) foi de 71% para os grupos vacinados com 109 e 1010 CFU / ml e 86% para 108 CFU / ml. A vacina com 108 UFC / ml induziu a maior resposta imune seguida por 109 e 1010 UFC / ml. A resposta imune de L. rohita e C. idella foi melhor do que a de C. mrigala. Em geral, histopatologia normal foi observada em diferentes [...].(AU)

Mansoa alliacea extract improves the growth performance and innate immune response of Arapaima gigas challenged with Aeromonas hydrophila and handling stress / Extrato de Mansoa alliacea melhora o desempenho de crescimento e resposta imunológica de Arapaima gigas desafiado com Aeromonas hydrophila e estresse de manejo

This study investigated the effects of dietary supplementation with Mansoa alliacea hydroalcoholic extracts on growth, blood and immune parameters of Arapaima gigas. Fish were fed for 30 days with diets enriched with 0, 4, 8, and 12 g kg-1 of M. alliacea hydroalcoholic extract and subjected to infection with Aeromonas hydrophila and handling stress. Fish fed with 8 g kg-1 of extract showed significant increase in final weight, specific growth rate and feed efficiency when compared to the other groups. Glucose, triglycerides, total proteins, and globulins increased significantly in fish fed with 8 g kg-1 of extract, whereas albumin decreased. The number of thrombocytes increased significantly with the dietary supplementation of 8 and 12 g kg-1 of extract. After the challenge with A. hydrophila and handling stress, fish fed with 8 g kg-1 of extract had significantly higher levels of glucose, globulins, and albumins, and fish fed with 8 and 12 g kg-1 of extract showed an increment of respiratory burst. Triglyceride levels dropped significantly in fish fed with 4, 8, and 12 g kg-1 of extract, whereas the number of neutrophils increased, and total thrombocytes, leukocytes and lymphocytes were higher in fish fed with 12 g kg-1 of extract. Dietary supplementation with M. alliacea extract at 8 g kg-1 was efficient in improving the growth and innate immunity of A. gigas, being potentially useful in fish farming to control the development of A. hydrophila infections.(AU)

Investigou-se os efeitos da suplementação com extrato hidroalcólico de Mansoa alliacea sobre o crescimento e parâmetros sanguíneos e imunológicos de Arapaima gigas. Os peixes foram alimentados por 30 dias com dietas enriquecidas com 0, 4, 8 e 12 g kg-1 de extrato hidroalcoólico de M. alliacea e submetidos à infecção por Aeromonas hydrophila e estresse de manejo. Os peixes alimentados com 8 g kg-1 de extrato apresentaram aumento significativo no peso final, taxa de crescimento específico e eficiência alimentar quando comparados aos demais grupos. Glicose, triglicerídeos, proteínas totais e globulinas aumentaram significativamente nos peixes alimentados com 8 g kg-1 de extrato, enquanto a albumina diminuiu. O número de trombócitos aumentou significativamente com a suplementação dietética de 8 e 12 g kg-1 de extrato. Após infecção com A. hydrophila e estresse de manejo, os peixes alimentados com 8 g kg-1 de extrato apresentaram níveis significativamente mais altos de glicose, globulinas e albuminas, e os peixes alimentados com 8 e 12 g kg-1 de extrato apresentaram incremento de explosão respiratória. Os níveis de triglicerídeos decresceram nos peixes alimentados com 4, 8 e 12 g kg-1 de extrato, enquanto o número de neutrófilos aumentou, e o número total de trombócitos, leucócitos e linfócitos foi maior nos peixes alimentados com 12 g kg-1 de extrato. A suplementação com a 8 g kg-1 de extrato de M. alliacea foi eficiente em melhorar o crescimento e a imunidade inata de A. gigas, sendo potencialmente útil na piscicultura para controlar o desenvolvimento de infecções por A. hydrophila.(AU)

Aeromonassp. in freshwater fish and antimicrobial resistance: emerging pathogen / Quantificação deAeromonassp. em peixes de água doce e resistência a antimicrobianos: patógeno emergente

ABSTRACT: The bacteria Aeromonassp. are naturally reported in aquatic ecosystems and possess pathogenic potential, being considered as emerging pathogens in humans and animals. They also cause considerable losses in fish farming and, through water, can contaminate numerous foods. This study quantified and analyzed the antimicrobial resistance profile of Aeromonassp. in fish. A total of 72 samples of two fish varieties (leather fish, Pseudoplatystomafasciatumx Leiariusmarmoratusand round fish, Colossomamacropomumx Piaractusmesopotamicusand Colossomamacropomumx Piaractusbrachypomus) were purchased from two types of sources (fresh and frozen) and three commercial establishments (supermarket, market, and fishmonger). The 55 isolated Aeromonascultures were evaluated for their antimicrobial resistance profile by the disc diffusion method. Upon quantification, the count of Aeromonassp. ranged from 4.22 to 6.00 Log CFU/g; ten different species, including A. eucrenophila, A. hydrophila, A. caviae, A. media, A. jandaei, A. veroniibv. sobria, A. trota, A. schubertii, A. veroniibv. veronii, and A. shigelloides, were identified. Among the 55 isolates, 64.45% showed resistance to Ampicillin-sulbactam, and 75% were sensitive to gentamicin and ciprofloxacin. It was concluded that 100% of the evaluated samples were contaminated by Aeromonassp., which may present a risk to consumer health since bacteria can be etiological agents of Foodborne Diseases. The antimicrobial resistance profile showed resistance to ampicillin and multi-resistance to different classes of antimicrobials, demonstrating problems with choosing an antimicrobial for treatment of any disease.

RESUMO: Aeromonas sp. são bactérias presentes naturalmente no ecossistema aquático e apresentam potencial patogênico, sendo considerados patógenos emergentes em humanos e animais. Ainda, causam perdas consideráveis em piscicultura e, através da água, podem também contaminar inúmeros alimentos. Diante disso o objetivo do trabalho foi quantificar e analisar o perfil de resistência aos antimicrobianos de bactérias do gênero Aeromonas sp. em peixes. Um total de 72 amostras foram adquiridas, sendo duas variedades de peixes (peixe de couro Pseudoplatystoma fasciatum x Leiarius marmoratus e os peixes redondos Colossoma macropomum x Piaractus mesopotamicus e Colossoma macropomum x Piaractus brachypomus), dois tipos (fresco e congelado) e de três estabelecimentos comerciais (supermercado, feira e peixaria). As 55 culturas isoladas de Aeromonas foram avaliadas quanto ao perfil de resistência aos antimicrobianos pelo método de difusão em disco. Os valores encontrados na quantificação de Aeromonas sp. variaram de 4,22 a 6,00 Log UFC/g, e foram identificadas dez espécies diferentes, sendo A. eucrenophila, A. hydrophila, A. caviae, A. media, A. jandaei, A. veronii bv. sobria, A. trota, A. schubertii, A. veronii bv. veronii e A. shigelloides. Entre os 55 isolados, 64,45% apresentaram resistência a Ampicilina-sulbactam, 75% foram sensíveis à gentamicina e ciprofloxacina. Concluiu-se que 100% das amostras avaliadas estavam contaminadas por Aeromonas sp. podendo apresentar risco à saúde do consumidor visto que estas podem ser agentes etiológicos de Doenças Transmitidas por Alimentos (DTAs). O perfil de resistência aos antimicrobianos comprovou a resistência a ampicilina e apresentou multirresistência a diferentes classes de antimicrobianos, demonstrando um problema relacionado à opção de antimicrobiano para tratamento no caso do desenvolvimento de alguma doença.

Effects of supplementation with vitamins C and E on the acute inflammatory response in Piaractus mesopotamicus / Efeitos da suplementação com vitaminas C e E na resposta inflamatória aguda em Piaractus mesopotamicus

Vitamins C and E are potent antioxidants that reduces the harmful effects of stress in several species including fish. In this study, it was evaluated the effect of vitamins C, E and their combination in the acute aerocystitis induced by inactivated Aeromonas hydrophila in pacu. 288 fish were distributed into 4 groups supplemented for 90 days: G1-control; G2- supplemented with 500 mg of Vitamin C; G3-supplemented with 500 mg of Vitamin E; G4-supplemented with 500 mg of Vitamin C + 500 mg of Vitamin E. The fish were divided in three groups, the first was not inoculated; second were inoculated in the swim bladder with 3 x 109 CFU of inactivated A. hydrophila and the last one with saline. The inflammatory exudate was collected from the swim bladder for assessment of cellular component and cytochemistry. The results showed higher accumulation of leukocytes in fish inoculated with bacteria. Cytochemistry was effective identifying thrombocytes, lymphocytes, macrophages and, granulocytes present in the exudate. It was also observed fish that received supplementation with vitamins presented higher accumulation of total cells in the exudate with a predominance of lymphocytes and thrombocytes. These results suggested that supplementation with vitamins improved the immunological responses.

As vitaminas C e E são potentes antioxidantes que reduzem os efeitos nocivos do estresse em várias espécies, incluindo peixes. Neste estudo, avaliou-se o efeito das vitaminas C, E e sua combinação na aerocistite aguda induzida por Aeromonas hydrophila inativada em pacu. 288 peixes foram distribuídos em 4 grupos suplementados por 90 dias: G1-controle; G2- suplementado com 500 mg de Vitamina C; G3-suplementado com 500 mg de Vitamina E; G4-suplementado com 500 mg de Vitamina C + 500 mg de Vitamina E. Os peixes foram divididos em três grupos, o primeiro não foi inoculado; o segundo foi inoculado na bexiga natatória com 3 x 109 UFC de A. hydrophila inativada e a última com soro fisiológico. O exsudato inflamatório foi coletado da bexiga natatória para avaliação do componente celular e citoquímica. Os resultados mostraram maior acúmulo de leucócitos nos peixes inoculados com a bactéria. A citoquímica foi eficaz na identificação de trombócitos, linfócitos, macrófagos e granulócitos presentes no exsudato. Também foi observado que os peixes que receberam suplementação com vitaminas apresentaram maior acúmulo de células totais no exsudato com predominância de linfócitos e trombócitos. Esses resultados sugeriram que a suplementação com vitaminas melhorou as respostas imunológicas.

Evaluation of three alum-precipitated Aeromonas hydrophila vaccines administered to Labeo rohita, Cirrhinus mrigala and Ctenopharyngodon idella: immunokinetics, immersion challenge and histopathology

Abstract Aeromonas hydrophila is a cause of infectious disease outbreaks in carp species cultured in South Asian countries including Pakistan. This bacterium has gained resistance to a wide range of antibiotics and robust preventive measures are necessary to control its spread. No prior use of fish vaccines has been reported in Pakistan. The present study aims to develop and evaluate inactivated vaccines against local strain of A. hydrophila in Pakistan with alum-precipitate as adjuvant. The immunogenic potential of vaccine was evaluated in two Indian major carps (Rohu: Labeo rohita, Mori: Cirrhinus mrigala) and a Chinese carp (Grass carp: Ctenopharyngodon idella). Fish were vaccinated intraperitoneally followed by a challenge through immersion. Fish with an average age of 4-5 months were randomly distributed in three vaccinated groups with three vaccine concentrations of 108, 109 and 1010 colony forming unit (CFU)/ml and a control group. Fixed dose of 0.1ml was applied to each fish on 1st day and a booster dose at 15 days post-vaccination (DPV). Blood samples were collected on 14, 28, 35, 48 and 60 DPV to determine antibody titers in blood serum using compliment fixation test (CFT). Fish were challenged at 60 DPV with infectious A. hydrophila with 108 CFU/ml through immersion. Significantly higher levels of antibody titers were observed from 28 DPV in all vaccinated groups as compared to those in the control group. In challenge experiment the average RPS (relative percent survivability) was 71% for groups vaccinated with 109 and 1010 CFU/ml and 86% for 108 CFU/ml. Vaccine with 108 CFU/ml induced highest immune response followed by 109 and 1010 CFU/ml. The immune response of L. rohita and C. idella was better than that of C. mrigala. In general, normal histopathology was observed in different organs of vaccinated fish whereas minor deteriorative changes were found in fish vaccinated with higher concentrations of the vaccine.

Resumo Aeromonas hydrophila é uma causa de surtos de doenças infecciosas em espécies de carpas cultivadas em países do sul da Ásia, incluindo o Paquistão. Essa bactéria ganhou resistência a uma ampla gama de antibióticos, e medidas preventivas robustas são necessárias para controlar sua disseminação. Nenhum uso anterior de vacinas para peixes foi relatado no Paquistão. O presente estudo tem como objetivo desenvolver e avaliar vacinas inativadas contra cepa local de A. hydrophila no Paquistão com precipitado de alúmen como adjuvante. O potencial imunogênico da vacina foi avaliado em duas carpas principais indianas (Rohu: Labeo rohita, Mori: Cirrhinus mrigala) e uma carpa chinesa (Grass Carp: Ctenopharyngodon idella). Os peixes foram vacinados por via intraperitoneal, seguido de um desafio por imersão. Peixes com idade média de 4-5 meses foram distribuídos aleatoriamente em três grupos vacinados com três concentrações de vacina de 108, 109 e 1010 unidades formadoras de colônias (UFC) / ml e um grupo de controle. Foi aplicada dose fixa de 0,1ml em cada peixe no 1º dia e dose de reforço 15 dias pós-vacinação (DPV). Amostras de sangue foram coletadas em 14, 28, 35, 48 e 60 DPV para determinar os títulos de anticorpos no soro sanguíneo usando o teste de fixação de elogio (CFT). Os peixes foram desafiados a 60 DPV com infecciosa A. hydrophila com 108 CFU / ml por imersão. Níveis significativamente mais elevados de títulos de anticorpos foram observados em 28 DPV em todos os grupos vacinados, em comparação com aqueles no grupo de controle. Na experiência de desafio, o RPS médio (sobrevivência percentual relativa) foi de 71% para os grupos vacinados com 109 e 1010 CFU / ml e 86% para 108 CFU / ml. A vacina com 108 UFC / ml induziu a maior resposta imune seguida por 109 e 1010 UFC / ml. A resposta imune de L. rohita e C. idella foi melhor do que a de C. mrigala. Em geral, histopatologia normal foi observada em diferentes órgãos de peixes vacinados, enquanto pequenas alterações deteriorantes foram encontradas no grupo de controle e nos peixes vacinados com concentrações mais altas da vacina.

Evaluation of three alum-precipitated Aeromonas hydrophila vaccines administered to Labeo rohita, Cirrhinus mrigala and Ctenopharyngodon idella: immunokinetics, immersion challenge and histopathology / Avaliação de três vacinas de Aeromonas hydrophila precipitadas com alúmen administradas a Labeo rohita, Cirrhinus mrigala e Ctenopharyngodon idella: imunocinética, desafio de imersão e histopatologia

Abstract Aeromonas hydrophila is a cause of infectious disease outbreaks in carp species cultured in South Asian countries including Pakistan. This bacterium has gained resistance to a wide range of antibiotics and robust preventive measures are necessary to control its spread. No prior use of fish vaccines has been reported in Pakistan. The present study aims to develop and evaluate inactivated vaccines against local strain of A. hydrophila in Pakistan with alum-precipitate as adjuvant. The immunogenic potential of vaccine was evaluated in two Indian major carps (Rohu: Labeo rohita, Mori: Cirrhinus mrigala) and a Chinese carp (Grass carp: Ctenopharyngodon idella). Fish were vaccinated intraperitoneally followed by a challenge through immersion. Fish with an average age of 4-5 months were randomly distributed in three vaccinated groups with three vaccine concentrations of 108, 109 and 1010 colony forming unit (CFU)/ml and a control group. Fixed dose of 0.1ml was applied to each fish on 1st day and a booster dose at 15 days post-vaccination (DPV). Blood samples were collected on 14, 28, 35, 48 and 60 DPV to determine antibody titers in blood serum using compliment fixation test (CFT). Fish were challenged at 60 DPV with infectious A. hydrophila with 108 CFU/ml through immersion. Significantly higher levels of antibody titers were observed from 28 DPV in all vaccinated groups as compared to those in the control group. In challenge experiment the average RPS (relative percent survivability) was 71% for groups vaccinated with 109 and 1010 CFU/ml and 86% for 108 CFU/ml. Vaccine with 108 CFU/ml induced highest immune response followed by 109 and 1010 CFU/ml. The immune response of L. rohita and C. idella was better than that of C. mrigala. In general, normal histopathology was observed in different organs of vaccinated fish whereas minor deteriorative changes were found in fish vaccinated with higher concentrations of the vaccine.

Resumo Aeromonas hydrophila é uma causa de surtos de doenças infecciosas em espécies de carpas cultivadas em países do sul da Ásia, incluindo o Paquistão. Essa bactéria ganhou resistência a uma ampla gama de antibióticos, e medidas preventivas robustas são necessárias para controlar sua disseminação. Nenhum uso anterior de vacinas para peixes foi relatado no Paquistão. O presente estudo tem como objetivo desenvolver e avaliar vacinas inativadas contra cepa local de A. hydrophila no Paquistão com precipitado de alúmen como adjuvante. O potencial imunogênico da vacina foi avaliado em duas carpas principais indianas (Rohu: Labeo rohita, Mori: Cirrhinus mrigala) e uma carpa chinesa (Grass Carp: Ctenopharyngodon idella). Os peixes foram vacinados por via intraperitoneal, seguido de um desafio por imersão. Peixes com idade média de 4-5 meses foram distribuídos aleatoriamente em três grupos vacinados com três concentrações de vacina de 108, 109 e 1010 unidades formadoras de colônias (UFC) / ml e um grupo de controle. Foi aplicada dose fixa de 0,1ml em cada peixe no 1º dia e dose de reforço 15 dias pós-vacinação (DPV). Amostras de sangue foram coletadas em 14, 28, 35, 48 e 60 DPV para determinar os títulos de anticorpos no soro sanguíneo usando o teste de fixação de elogio (CFT). Os peixes foram desafiados a 60 DPV com infecciosa A. hydrophila com 108 CFU / ml por imersão. Níveis significativamente mais elevados de títulos de anticorpos foram observados em 28 DPV em todos os grupos vacinados, em comparação com aqueles no grupo de controle. Na experiência de desafio, o RPS médio (sobrevivência percentual relativa) foi de 71% para os grupos vacinados com 109 e 1010 CFU / ml e 86% para 108 CFU / ml. A vacina com 108 UFC / ml induziu a maior resposta imune seguida por 109 e 1010 UFC / ml. A resposta imune de L. rohita e C. idella foi melhor do que a de C. mrigala. Em geral, histopatologia normal foi observada em diferentes órgãos de peixes vacinados, enquanto pequenas alterações deteriorantes foram encontradas no grupo de controle e nos peixes vacinados com concentrações mais altas da vacina.

A comparative study to evaluate the effects of antibiotics, plant extracts and fluoride-based toothpaste on the oral pathogens isolated from patients with gum diseases in Pakistan

Abstract Oral diseases caused by various microorganisms are common around the world. Scientific research has now been focusing on novel medicines to overcome bacterial resistance and antibiotics side effects; therefore, the current study was designed to assess the efficacy of certain antibiotics, toothpaste, and medicinal plant extracts (Ajuga bracteosa and Curcuma longa) versus the bacterial pathogens isolated from the human oral cavity. A total of 130 samples were collected from Khyber Teaching Hospital Peshawar, Pakistan, among those 27 species isolated, and eight bacterial species were identified from the samples. Among all the bacterial species, Staphylococcus aureus (29.62%) and Proteus mirabilis (22.2%) were found to be more prevalent oral pathogens. In comparison, the least pervasive microbes were Proteus vulgaris, Shigella sonnei, Escherichia coli and Aeromonas hydrophila. The study also suggested that dental problems were more prevalent in males (41-50 years of age) than females. Among the eight antibiotics used in the study, the most promising results were shown by Foxicillin against A. hydrophila. The survey of TP1 revealed that it showed more potent antagonist activity against Proteus vulgaris as compared TP2 and TP3 that might be due to the high content of fluoride. The Curcuma longa showed more significant activity than Ajuga bracteosa (Stem, leaves and root) extracts. The data obtained through this study revealed that antibiotics were more effective for oral bacterial pathogens than toothpaste and plant extracts which showed moderate and low activity, respectively. Therefore, it is suggested that the active compounds in individual medicinal plants like Curcuma longa and Ajuga bracteosa could replace the antibiotics when used in daily routine as tooth cleansers or mouth rinses.

Resumo As doenças bucais causadas por vários microrganismos são comuns em todo o mundo. A pesquisa científica agora tem se concentrado em novos medicamentos para superar a resistência bacteriana e os efeitos colaterais dos antibióticos; portanto, o presente estudo foi desenhado para avaliar a eficácia de certos antibióticos, pasta de dente e extratos de plantas medicinais (Ajuga bracteosa e Curcuma longa) contra os patógenos bacterianos isolados da cavidade oral humana. No total, 130 amostras foram coletadas do Khyber Teaching Hospital Peshawar, Paquistão, entre essas, 27 espécies foram isoladas e oito espécies bacterianas foram identificadas a partir das amostras. Entre todas as espécies bacterianas, Staphylococcus aureus (29.62%) e Proteus mirabilis (22.2%) foram os patógenos orais mais prevalentes. Em comparação, os micróbios menos difundidos foram Proteus vulgaris, Shigella sonnei, Escherichia coli e Aeromonas hydrophila. O estudo também sugeriu que os problemas dentários eram mais prevalentes em homens (41-50 anos de idade) do que em mulheres. Entre os oito antibióticos usados no estudo, os resultados mais promissores foram mostrados pelo Foxicillin contra A. hydrophila. A pesquisa de TP1 revelou que ele mostrou atividade antagonista mais potente contra Proteus vulgaris em comparação a TP2 e TP3, o que pode ser devido ao alto teor de flúor. A Curcuma longa apresentou atividade mais significativa em relação aos extratos de Ajuga bracteosa (caule, folhas e raiz). Os dados obtidos neste estudo revelaram que os antibióticos foram mais eficazes para os patógenos bacterianos orais do que os dentifrícios e os extratos vegetais que apresentaram atividade moderada e baixa, respectivamente. Portanto, sugere-se que os compostos ativos em plantas medicinais individuais como Curcuma longa e Ajuga bracteosa possam substituir os antibióticos quando usados na rotina diária como limpadores de dentes ou enxaguatórios bucais.

Bacterial communities in artisanal raw bovine milk cheeses from the southern region of Brazil / Comunidades bacterianas em queijos artesanais de leite bovino cru da região sul do Brasil

The production of artisanal cheeses made with raw bovine milk has grown in the southern region of Brazil. It is important to obtain information about the risks of this practice, especially concerning food safety. In this study, next-generation sequencing was used to identify and characterize the bacterial communities of artisanal raw milk cheeses. We analyzed one pool of five raw milk samples (control group M1) from different dairy farms and nine pools (M2-M10) of 45 artisanal raw milk cheeses.The characterization of the bacterial communities included 199 species distributed across 59 different genera dispersed among the samples. Among the genera observed, 11 were classified as beneficial to the aroma, flavour, colour, and texture of the cheese. Thirty-one genera were classified as harmful to these characteristics. Another 17 were classified as potential pathogens for animals and humans, including Aeromonas, Bacillus, Cronobacter, Salmonella, Staphylococcus, and bacteria of the coliform group, including E. coli and Klebsiella. There was a significant difference (P < 0.05) in the number of bacterial communities identified between the control group (M1) and the two pools of artisanal raw milk cheeses (M2 and M8). This study demonstrated that next-generation sequencing provides in-depth information on the composition of the microbiota in artisanal raw milk cheeses, characterizing bacterial communities, identifying the wide microbial diversity, and identifying microbial benefits and risks.

Devido ao aumento da produção de queijos artesanais com leite bovino cru na região sul do Brasil, é importante obter informações sobre os riscos desta prática, principalmente no que se refere à segurança do alimento. Neste estudo foi utilizada a técnica de Next Generation Sequencing (NGS) para identificar e caracterizar comunidades bacterianas de queijos artesanais de leite cru. Foram analisados um pool de cinco amostras de leite cru como grupo controle (M1) de diferentes propriedades leiteiras localizadas na região norte do estado do Rio Grande do Sul, e nove pools (M2-M10) de 45 queijos artesanais de leite cru. A caracterização das comunidades bacterianas incluiu 199 espécies distribuídas em 59 gêneros diferentes dispersos entre as amostras. Dentre os gêneros observados, 11 foram classificados como benéficos ao aroma, sabor, cor e textura do queijo, enquanto 31 gêneros foram classificados como prejudiciais a essas características. Outros 17 foram classificados como potenciais patogênicos para animais e humanos, incluindo Aeromonas, Bacillus, Cronobacter, Salmonella, Staphylococcus, bactérias do grupo coliforme como Escherichia coli e Klebsiella. Houve diferença significativa (P < 0,05) entre o número de comunidades bacterianas identificadas no grupo controle (M1) e dois pools de queijos artesanais de leite cru (M2 e M8). Este estudo demonstra que o NGS fornece informações detalhadas sobre a composição da microbiota em queijos artesanais de leite cru, caracterizando comunidades bacterianas, identificando a ampla diversidade microbiana, os benefícios e riscos microbianos.

A comparative study to evaluate the effects of antibiotics, plant extracts and fluoride-based toothpaste on the oral pathogens isolated from patients with gum diseases in Pakistan / Um estudo comparativo para avaliar os efeitos de antibióticos, extratos vegetais e creme dental à base de flúor sobre os patógenos orais isolados de pacientes com doenças gengivais no Paquistão

Oral diseases caused by various microorganisms are common around the world. Scientific research has now been focusing on novel medicines to overcome bacterial resistance and antibiotics side effects; therefore, the current study was designed to assess the efficacy of certain antibiotics, toothpaste, and medicinal plant extracts (Ajuga bracteosa and Curcuma longa) versus the bacterial pathogens isolated from the human oral cavity. A total of 130 samples were collected from Khyber Teaching Hospital Peshawar, Pakistan, among those 27 species isolated, and eight bacterial species were identified from the samples. Among all the bacterial species, Staphylococcus aureus (29.62%) and Proteus mirabilis (22.2%) were found to be more prevalent oral pathogens. In comparison, the least pervasive microbes were Proteus vulgaris, Shigella sonnei, Escherichia coli and Aeromonas hydrophila. The study also suggested that dental problems were more prevalent in males (41-50 years of age) than females. Among the eight antibiotics used in the study, the most promising results were shown by Foxicillin against A. hydrophila. The survey of TP1 revealed that it showed more potent antagonist activity against Proteus vulgaris as compared TP2 and TP3 that might be due to the high content of fluoride. The Curcuma longa showed more significant activity than Ajuga bracteosa (Stem, leaves and root) extracts. The data obtained through this study revealed that antibiotics were more effective for oral bacterial pathogens than toothpaste and plant extracts which showed moderate and low activity, respectively. Therefore, it is suggested that the active compounds in individual medicinal plants like Curcuma longa and Ajuga bracteosa could replace the antibiotics when used in daily routine as tooth cleansers or mouth rinses.

As doenças bucais causadas por vários microrganismos são comuns em todo o mundo. A pesquisa científica agora tem se concentrado em novos medicamentos para superar a resistência bacteriana e os efeitos colaterais dos antibióticos; portanto, o presente estudo foi desenhado para avaliar a eficácia de certos antibióticos, pasta de dente e extratos de plantas medicinais (Ajuga bracteosa e Curcuma longa) contra os patógenos bacterianos isolados da cavidade oral humana. No total, 130 amostras foram coletadas do Khyber Teaching Hospital Peshawar, Paquistão, entre essas, 27 espécies foram isoladas e oito espécies bacterianas foram identificadas a partir das amostras. Entre todas as espécies bacterianas, Staphylococcus aureus (29.62%) e Proteus mirabilis (22.2%) foram os patógenos orais mais prevalentes. Em comparação, os micróbios menos difundidos foram Proteus vulgaris, Shigella sonnei, Escherichia coli e Aeromonas hydrophila. O estudo também sugeriu que os problemas dentários eram mais prevalentes em homens (41-50 anos de idade) do que em mulheres. Entre os oito antibióticos usados no estudo, os resultados mais promissores foram mostrados pelo Foxicillin contra A. hydrophila. A pesquisa de TP1 revelou que ele mostrou atividade antagonista mais potente contra Proteus vulgaris em comparação a TP2 e TP3, o que pode ser devido ao alto teor de flúor. A Curcuma longa apresentou atividade mais significativa em relação aos extratos de Ajuga bracteosa (caule, folhas e raiz). Os dados obtidos neste estudo revelaram que os antibióticos foram mais eficazes para os patógenos bacterianos orais do que os dentifrícios e os extratos vegetais que apresentaram atividade moderada e baixa, respectivamente. Portanto, sugere-se que os compostos ativos em plantas medicinais individuais como Curcuma longa e Ajuga bracteosa possam substituir os antibióticos quando usados na rotina diária como limpadores de dentes ou enxaguatórios bucais.

A comparative study to evaluate the effects of antibiotics, plant extracts and fluoride-based toothpaste on the oral pathogens isolated from patients with gum diseases in Pakistan / Um estudo comparativo para avaliar os efeitos de antibióticos, extratos vegetais e creme dental à base de flúor sobre os patógenos orais isolados de pacientes com doenças gengivais no Paquistão

Abstract Oral diseases caused by various microorganisms are common around the world. Scientific research has now been focusing on novel medicines to overcome bacterial resistance and antibiotics side effects; therefore, the current study was designed to assess the efficacy of certain antibiotics, toothpaste, and medicinal plant extracts (Ajuga bracteosa and Curcuma longa) versus the bacterial pathogens isolated from the human oral cavity. A total of 130 samples were collected from Khyber Teaching Hospital Peshawar, Pakistan, among those 27 species isolated, and eight bacterial species were identified from the samples. Among all the bacterial species, Staphylococcus aureus (29.62%) and Proteus mirabilis (22.2%) were found to be more prevalent oral pathogens. In comparison, the least pervasive microbes were Proteus vulgaris, Shigella sonnei, Escherichia coli and Aeromonas hydrophila. The study also suggested that dental problems were more prevalent in males (41-50 years of age) than females. Among the eight antibiotics used in the study, the most promising results were shown by Foxicillin against A. hydrophila. The survey of TP1 revealed that it showed more potent antagonist activity against Proteus vulgaris as compared TP2 and TP3 that might be due to the high content of fluoride. The Curcuma longa showed more significant activity than Ajuga bracteosa (Stem, leaves and root) extracts. The data obtained through this study revealed that antibiotics were more effective for oral bacterial pathogens than toothpaste and plant extracts which showed moderate and low activity, respectively. Therefore, it is suggested that the active compounds in individual medicinal plants like Curcuma longa and Ajuga bracteosa could replace the antibiotics when used in daily routine as tooth cleansers or mouth rinses.

Resumo As doenças bucais causadas por vários microrganismos são comuns em todo o mundo. A pesquisa científica agora tem se concentrado em novos medicamentos para superar a resistência bacteriana e os efeitos colaterais dos antibióticos; portanto, o presente estudo foi desenhado para avaliar a eficácia de certos antibióticos, pasta de dente e extratos de plantas medicinais (Ajuga bracteosa e Curcuma longa) contra os patógenos bacterianos isolados da cavidade oral humana. No total, 130 amostras foram coletadas do Khyber Teaching Hospital Peshawar, Paquistão, entre essas, 27 espécies foram isoladas e oito espécies bacterianas foram identificadas a partir das amostras. Entre todas as espécies bacterianas, Staphylococcus aureus (29.62%) e Proteus mirabilis (22.2%) foram os patógenos orais mais prevalentes. Em comparação, os micróbios menos difundidos foram Proteus vulgaris, Shigella sonnei, Escherichia coli e Aeromonas hydrophila. O estudo também sugeriu que os problemas dentários eram mais prevalentes em homens (41-50 anos de idade) do que em mulheres. Entre os oito antibióticos usados ​​no estudo, os resultados mais promissores foram mostrados pelo Foxicillin contra A. hydrophila. A pesquisa de TP1 revelou que ele mostrou atividade antagonista mais potente contra Proteus vulgaris em comparação a TP2 e TP3, o que pode ser devido ao alto teor de flúor. A Curcuma longa apresentou atividade mais significativa em relação aos extratos de Ajuga bracteosa (caule, folhas e raiz). Os dados obtidos neste estudo revelaram que os antibióticos foram mais eficazes para os patógenos bacterianos orais do que os dentifrícios e os extratos vegetais que apresentaram atividade moderada e baixa, respectivamente. Portanto, sugere-se que os compostos ativos em plantas medicinais individuais como Curcuma longa e Ajuga bracteosa possam substituir os antibióticos quando usados ​​na rotina diária como limpadores de dentes ou enxaguatórios bucais.

A comparative study to evaluate the effects of antibiotics, plant extracts and fluoride-based toothpaste on the oral pathogens isolated from patients with gum diseases in Pakistan / Um estudo comparativo para avaliar os efeitos de antibióticos, extratos vegetais e creme dental à base de flúor sobre os patógenos orais isolados de pacientes com doenças gengivais no Paquistão

Oral diseases caused by various microorganisms are common around the world. Scientific research has now been focusing on novel medicines to overcome bacterial resistance and antibiotics side effects; therefore, the current study was designed to assess the efficacy of certain antibiotics, toothpaste, and medicinal plant extracts (Ajuga bracteosa and Curcuma longa) versus the bacterial pathogens isolated from the human oral cavity. A total of 130 samples were collected from Khyber Teaching Hospital Peshawar, Pakistan, among those 27 species isolated, and eight bacterial species were identified from the samples. Among all the bacterial species, Staphylococcus aureus (29.62%) and Proteus mirabilis (22.2%) were found to be more prevalent oral pathogens. In comparison, the least pervasive microbes were Proteus vulgaris, Shigella sonnei, Escherichia coli and Aeromonas hydrophila. The study also suggested that dental problems were more prevalent in males (41-50 years of age) than females. Among the eight antibiotics used in the study, the most promising results were shown by Foxicillin against A. hydrophila. The survey of TP1 revealed that it showed more potent antagonist activity against Proteus vulgaris as compared TP2 and TP3 that might be due to the high content of fluoride. The Curcuma longa showed more significant activity than Ajuga bracteosa (Stem, leaves and root) extracts. The data obtained through this study revealed that antibiotics were more effective for oral bacterial pathogens than toothpaste and plant extracts which showed moderate and low activity, respectively. Therefore, it is suggested that the active compounds in individual medicinal plants like Curcuma longa and Ajuga bracteosa could replace the antibiotics when used in daily routine as tooth cleansers or mouth rinses.(AU)

As doenças bucais causadas por vários microrganismos são comuns em todo o mundo. A pesquisa científica agora tem se concentrado em novos medicamentos para superar a resistência bacteriana e os efeitos colaterais dos antibióticos; portanto, o presente estudo foi desenhado para avaliar a eficácia de certos antibióticos, pasta de dente e extratos de plantas medicinais (Ajuga bracteosa e Curcuma longa) contra os patógenos bacterianos isolados da cavidade oral humana. No total, 130 amostras foram coletadas do Khyber Teaching Hospital Peshawar, Paquistão, entre essas, 27 espécies foram isoladas e oito espécies bacterianas foram identificadas a partir das amostras. Entre todas as espécies bacterianas, Staphylococcus aureus (29.62%) e Proteus mirabilis (22.2%) foram os patógenos orais mais prevalentes. Em comparação, os micróbios menos difundidos foram Proteus vulgaris, Shigella sonnei, Escherichia coli e Aeromonas hydrophila. O estudo também sugeriu que os problemas dentários eram mais prevalentes em homens (41-50 anos de idade) do que em mulheres. Entre os oito antibióticos usados no estudo, os resultados mais promissores foram mostrados pelo Foxicillin contra A. hydrophila. A pesquisa de TP1 revelou que ele mostrou atividade antagonista mais potente contra Proteus vulgaris em comparação a TP2 e TP3, o que pode ser devido ao alto teor de flúor. A Curcuma longa apresentou atividade mais significativa em relação aos extratos de Ajuga bracteosa (caule, folhas e raiz). Os dados obtidos neste estudo revelaram que os antibióticos foram mais eficazes para os patógenos bacterianos orais do que os dentifrícios e os extratos vegetais que apresentaram atividade moderada e baixa, respectivamente. Portanto, sugere-se que os compostos ativos em plantas medicinais individuais como Curcuma longa e Ajuga bracteosa possam substituir os antibióticos quando usados na rotina diária como limpadores de dentes ou enxaguatórios bucais.(AU)

Antimicrobial resistance profile of Aeromonas spp. isolated from asymptomatic Colossoma macropomum cultured in the Amazonas State, Brazil / Perfil de resistência antimicrobiana de Aeromonas spp. isoladas de Colossoma macropomum assintomáticos no Estado do Amazonas, Brasil

Bacterial diseases are important factors that limit productivity in aquaculture. To reduce negative economic impacts, fish farmers use antimicrobials, often indiscriminately, and this action has led to bacterial resistance to drugs. The objectives of this study were to isolate and identify the main putative pathogenic bacterial species in tambaqui (Colossoma macropomum), establish the profile of resistance to antimicrobials by the methods of disc diffusion, and determine the minimum inhibitory concentration (MIC) values. Two hundred and ninety asymptomatic fish were collected between March and November 2015 from ten fish farms in the Amazonas state (Brazil). Of the total strains recovered from tambaqui, seven were identified as Aeromonas spp. by sequencing the 16S rRNA gene. These seven isolates showed resistance to ampicillin, 28% to erythromycin, and 28% to sulfonamide. Additionally, the seven isolates showed a MIC higher than the range evaluated for amoxicillin, penicillin, novobiocin, tylosin tartrate, and clindamycin, and 85% showed resistance to erythromycin. The results of this study indicate the need to increase the awareness of fish farmers and, most importantly, the government, about the lack of drug regulations for use in aquaculture, and good management practices, so the indiscriminate prophylactic and systemic use of antimicrobials be inhibited.

As doenças bacterianas são fatores importantes que limitam a produtividade na aquicultura. Para reduzir os impactos econômicos negativos, os piscicultores utilizam antimicrobianos, muitas vezes de forma indiscriminada, e essa ação tem levado à resistência bacteriana aos medicamentos. Os objetivos deste estudo foram isolar e identificar as principais bactérias com potencial putativo para o tambaqui (Colossoma macropomum), e estabelecer o perfil de resistência a antimicrobianos pelos métodos de difusão em disco e valores de concentração inibitória mínima (CIM). Duzentos e noventa peixes assintomáticos foram coletados entre março e novembro de 2015, em dez pisciculturas do estado do Amazonas (Brasil). Do total de cepas recuperadas de tambaqui, sete foram identificadas como Aeromonas spp. pelo sequenciamento do gene 16S rRNA. Esses sete isolados apresentaram resistência à ampicilina, 28% à eritromicina e 28% à sulfonamida. Além disso, os sete isolados apresentaram CIM superior à faixa avaliada para amoxicilina, penicilina, novobiocina, tartarato de tilosina e clindamicina, e 85% apresentaram resistência à eritromicina. Os resultados deste estudo indicam a necessidade de aumentar a conscientização dos piscicultores e, principalmente, do poder público, a falta de regulamentação de medicamentos para uso na aquicultura e sobre as boas práticas de manejo, para que o uso profilático e sistêmico de antimicrobianos de forma indiscriminada seja inibido.

Detection of Fur, AmoA and pvcAB genes in Aeromonas hydrophila isolated from aquatic organisms and impact on bacterial growth under different iron concentrations / Detecção dos genes Fur, AmoA e pvcAB em Aeromonas hydrophila isoladas de organismos aquáticos e o impacto da presença desses genes sobre o crescimento bacteriano com diferentes concentrações de ferro

Infection caused by Aeromonas brings great harm to fish farming. Among the factors associated with bacterial pathogenesis, iron uptake can contribute to the survival and virulence of bacteria within hosts. The aim of this study was to check the presence of genes related to iron uptake in Aeromonas hydrophila deriving from aquatic organisms in the São Francisco Valley and associate the presence of these genes with the ability to grow in media containing different concentrations of iron. The DNAs of 41 isolates were extracted and used in PCRs to verify the presence of the Fur, AmoA and pvcAB genes related to iron uptake. The growth of the isolates belonging to different genetic profiles was verified in culture media containing different iron concentrations. Two isolates were positive for the presence of the Fur gene, seven for the AmoA gene and two for the pvcAB gene. The growth test showed that the low availability of iron did not interfere in the growth of the isolates, nor in the isolate that did not contain any of the genes evaluated in this study, suggesting that the iron uptake's mechanisms of the tested isolates may be related to other genes and proteins.

Infecções causadas por Aeromonas trazem grandes prejuízos à piscicultura. Entre os fatores associados à patogênese bacteriana, a captação de ferro pode contribuir para a sobrevivência e a virulência das bactérias dentro dos hospedeiros. O objetivo deste estudo foi verificar a presença de genes relacionados à captação de ferro em Aeromonas hydrophila provenientes de organismos aquáticos do Vale do São Francisco e associar a presença desses genes com a capacidade de as bactérias crescerem em meios contendo diferentes concentrações de ferro. Os DNAs de 41 isolados foram extraídos e utilizados em PCRs para verificar a presença dos genes Fur, AmoA e pvcAB relacionados à captação de ferro. O crescimento dos isolados pertencentes a diferentes perfis genéticos foi verificado em meios de cultura contendo diferentes concentrações de ferro. Dois isolados foram positivos para a presença do gene Fur, sete para a do gene AmoA e dois para a do gene pvcAB. O teste de crescimento mostrou que a baixa disponibilidade de ferro não interferiu no crescimento dos isolados nem no isolado que não continha nenhum dos genes avaliados neste estudo, sugerindo que os mecanismos de captação de ferro dos isolados testados podem estar relacionados a outros genes e proteínas.

Dieta prática com substituição total da farinha de peixe por farelo de soja para tilápia-do-nilo: desempenho de crescimento e efeitos na saúde / Practical diet with total replacement of fishmeal by soybean meal for Nile tilapia: growth performance and health effects

This study aimed to evaluate the growth performance and animal health in juveniles of Nile tilapia (Oreochromis niloticus) fed a practical diet with total replacement of fishmeal (FM) by soybean meal, as well the effect on survival, following pathogenic challenge with Aeromonas hydrophila. Two hundred juveniles of Nile tilapia were stored in 8 tanks (800 L). The experiment consisted of two treatments: a commercial diet formulated with FM (control) and a practical diet with total replacement of FM by soybean meal (SM). The variables of water quality, zootechnical and hematological parameters were measured. In addition, at the end of the experiment, the fish were submitted to a challenge with A. hydrophila. Higher cost per kg of fish was obtained in the control treatment (with FM). N retention was higher in fish fed a diet without FM, while hematological, immunological parameters and survival after the experimental challenge did not differ between treatments. It is possible to reduce dietary costs by replacing FM with SM without affecting growth performance or animal health, in addition to benefiting the environment by reducing the excretion of N in water.

O objetivo deste estudo foi avaliar o desempenho de crescimento e saúde em juvenis de tilápia-do-nilo (Oreochromis niloticus) alimentados com dieta prática com substituição total da farinha de peixe (FP) por farelo de soja (FS), bem como o efeito na sobrevivência, após desafio patogênico com Aeromonas hydrophila. Duzentos juvenis de tilápia-do-nilo foram alojados em 8 tanques (800 L). O experimento consistiu de dois tratamentos: dieta comercial formulada com FP (controle) e dieta prática com substituição total do FP pelo FS. Foram mensuradas as variáveis de qualidade da água, parâmetros zootécnicos e hematológicos. Além disso, ao final do experimento, os peixes foram submetidos a um desafio com A. hydrophila. Maior custo por kg de peixe foi obtido no tratamento controle (com FP). A retenção de N foi maior nos peixes alimentados com dieta sem FP, enquanto os parâmetros hematológicos, imunológicos e a sobrevivência após o desafio experimental não diferiram entre os tratamentos. É possível reduzir os custos dietéticos substituindo a FP pelo FS sem afetar o desempenho do crescimento e a saúde do animal, além de beneficiar o meio ambiente ao reduzir a excreção de N na água.

Clinical safety of treatment with Zileuton, 5-Lox inhibitor, during acute inflammatory reaction in Nile Tilapia (Oreochromis niloticus) / Segurança clínica do tratamento com Zileuton, inibidor 5-Lox, durante reação inflamatória aguda em Tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus)

Zileuton is an inhibitor of the 5-lipoxygenase enzyme that transforms essential fatty acid (EFA) substrates into leukotrienes (LTB4, LTC4, LTD4 and LTE4), but little is known about the use of this drug in teleost fish. Therefore, the objective of this study was to evaluate the clinical safety of treatments with 2,25 mg and 4,50 mg of zileuton/Kg-1 (bodyweight), administered orally in the diet, through biochemical and hematological analysis during the acute inflammatory reaction in Nile tilapia (Oreochromis niloticus), induced by Aeromonas hydrophila bacterins. The study used eighty tilapias, conditioned in 20 tanks (n=4), constituting the following treatments: T0 (control), T1 (2,25 mg zileuton) and T2 (4,50 mg zileuton), being sampled eight animals per treatment in three periods: 6, 24 and 48 hours post-inoculation, and a 10th group consisting of fish without any type of stimulus to obtain the reference values. In order to evaluate and determine the blood count and serum biochemical, it was necessary to collect blood samples. The hematology results of the tilapia treated with zileuton did not reveal alterations between tilapia subjected to different treatments and control fish (T0). The liver cytotoxicity analysis of tilapias treated with zileuton did not reveal significant (p≥0,05) alterations in AST and ALT serum enzymatic activity. The study of tilapia blood total protein showed decrease in the T1 group at 48 HPI. As the treatment time progressed, the results indicated decrease in the serum albumin levels for T2 group at 24 HPI. The determination of serum biochemichal of creatinine, cholesterol, triglycerides, and glucose did not differ statistically between treatments. The results observed in the hematological and biochemical analyzes allows to conclude that zileuton administered orally, at doses of 2,25 and 4,50 mg/Kg-1 (body weight) demonstrated to be clinically safe.(AU)

In vitro bacterial probiotic selection from Nannostomus beckfordi, an Amazon ornamental fish / [Seleção in vitro de bactérias probióticas do peixe ornamental Amazônico Nannostomus beckfordi]

This study aimed to isolate and select in vitro bacteria with probiotic potential for the Amazon ornamental fish Nannostomus beckfordi. For isolate, twelve fish underwent surgery procedure to remove their intestinal tract, macerate and then inoculate in the plate petri containing de Man Rugosa Sharped Agar (MRS). After bacterial growth (48 hours at 35ºC), selected strains were inoculated in MRS broth and submitted to resistance test with NaCl (0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5 and 3.0%), pH (4, 5, 6, 8 and 9) and bile salts (5% w/v). Inhibition test against pathogenic bacteria Aeromonas hydrophila, Pseudomonas aeroginosa, Streptococcus agalactiae and Aeromonas Jandaei was also performed. Within the isolated strains group (23 strains), only six (S1, S2, S3, S4, S5 and S6) showed probiotic potential. Strains S1 and S6 showed the greater resistance for NaCl (0.5% and 1%) and pH (5 and 6), but only S1 obtained better results to resist the bile salts. Even against pathogenic bacteria, the S1 showed the best results with inhibition halos greater than 9 mm. In the end, this bacterial strain (S1) was identified as Enterococcus faecium 11037CHB. Thus, this is the first report regarding isolated autochthonous bacterium E. faecium with probiotic potential of N. beckfordi.

O objetivo deste estudo foi isolar e selecionar in vitro bactérias com potencial probiótico do peixe ornamental Amazônico Nannostomus beckfordi. Para o isolamento, retirou-se o intestino de 12 espécimes, que foram macerados, homogeneizados e semeados em placa de petri contento Ágar Man Rogosa e Sharpe (MRS). Posteriormente ao crescimento bacteriano (48 horas a 35ºC), as cepas selecionadas foram mantidas em caldo MRS e submetidas a testes de resistência a NaCl (0,5, 1,0, 1,5, 2,0 e 2,5 e 3,0%), pH (4, 5, 6, 8 e 9) e sais biliares (5% p/v). O antagonismo foi realizado frente as bactérias patogênicas Aeromonas hydrophila, Pseudomonas aeroginosa, Streptococcus agalactiae e Aeromonas jandaei. Das cepas isoladas (23 cepas), apenas seis (C1, C2, C3, C4, C5 e C6) apresentaram potencial probiótico. As cepas C1 e C6 tiveram maior resistência (p<0,05) para o NaCl (0,5 e 1%) e pH (5 a 6), na presença de sais biliares somente a C1 teve a melhor resistência de crescimento. Para o antagonismo frente as bactérias patogênicas, a C1 apresentou halo de inibição maior que 9 mm. Sendo esta cepa bactéria (C1) identificada como Enterococcus faecium 11037 CHB. Portanto, este é o primeiro relato do isolamento da bactéria autóctone E. faecium em N. beckfordi com potencial probiótico.

In vitro selection of autochthonous bacterium with probiotic potential for the neotropical fish piauçu Megaleporinus microcephalus / [Seleção in vitro de bactéria autóctone com potencial probiótico para o peixe neotropical piauçu Megaleporinus macrocephalus]

The study aimed to isolate, identify, and apply in vitro tests on bacteria with autochthonous probiotic potential isolated from fifteen healthy specimens of Megaleporinus macrocephalus. The strains were selected from the intestinal tract of fish and inoculated in the Petri plate containing Sharp Man Rogosa Agar (MRS) for (48 hours at 35ºC). They were isolated based on a test of catalase, Gram stain, tolerance to different gradients NaCl (1, 2 and 3%), pH (4, 5, 6, 8 and 9) values and bile salts (2.5 and 5%), in addition to the inhibition zone against pathogens. Of the 42 strains isolated, ST1 and ST9 had higher values (p<0.05) for total viable cells (31.80±0.07 and 32.51±0.05 CFU/mL × 108) respectively. In the resistance tests, strains ST1 and ST9 presented the best results, with emphasis on ST9 in the gradients of pH, high values of bile salts and larger inhibition zones against Aeromonas hydrophila and Aeromonas jandaei. The strains with the best results in the tests, ST1 and ST9, were identified by the MALDI-TOF-MS method as Enterococcus faecium. Thus, the isolated E. faecium bacteria, may be recommended as for probiotic use in farming the M. macrocephalus.

O presente estudo visou isolar, identificar e aplicar testes in vitro em bactérias com potencial probiótico, autóctones, isoladas de 15 espécimes saudáveis de Megaleporinus macrocephalus. As cepas foram selecionadas do trato intestinal dos peixes e inoculadas em placas de Petri contendo Man Rogosa Sharped Agar (MRS), por 48 horas, a 35ºC. Foram isoladas com base em teste de catalase, coloração de Gram, tolerância a diferentes gradientes de NaCl (1, 2 e 3%), valores de pH (4, 5, 6, 8 e 9) e sais biliares (2,5 e 5%), além do halo de inibição contra patógenos. Das 42 cepas isoladas, ST1 e ST9 apresentaram maiores valores (P<0,05) para células viáveis totais (31,80±0,07 e 32,51±0,05 UFC/mL × 108), respectivamente. Nos testes de resistência, as cepas ST1 e ST9 apresentaram os melhores resultados, com destaque para ST9 nos gradientes de pH, altos valores de sais biliares e maiores halos de inibição contra Aeromonas hydrophila e Aeromonas jandaei. As cepas com melhores resultados nos testes, ST1 e ST9, foram identificadas pelo método de MALDI-TOF-MS como Enterococcus faecium. Assim, a bactéria isolada Enterococcus faecium, pode ser recomendada para uso probiótico na criação do M. macrocephalus.