Chromosome analysis in Saccodon wagneri (Characiformes) and insights into the karyotype evolution of Parodontidae

Parodontidae is a relatively small group of Neotropical characiform fishes consisting of three genera (Apareiodon, Parodon, and Saccodon) with 32 valid species. A vast cytogenetic literature is available on Apareiodon and Parodon, but to date, there is no cytogenetic data about Saccodon, a genus that contains only three species with a trans-Andean distribution. In the present study the karyotype of S. wagneri was described, based on both conventional (Giemsa staining, Ag-NOR, C-bands) and molecular (repetitive DNA mapping by fluorescent in situ hybridization) methods. A diploid chromosome number of 2n = 54 was observed in both sexes, and the presence of heteromorphic sex chromosomes of the ZZ/ZW type was detected. The W chromosome has a terminal heterochromatin band that occupies approximately half of the long arm, being this band approximately half the size of the Z chromosome. The FISH assay showed a synteny of the 18S-rDNA and 5S-rDNA genes in the chromosome pair 14, and the absence of interstitial telomeric sites. Our data reinforce the hypothesis of a conservative karyotype structure in Parodontidae and suggest an ancient origin of the sex chromosomes in the fishes of this family.(AU)

Parodontidae é um grupo relativamente pequeno de peixes caraciformes neotropicais que consiste em três gêneros (Apareiodon, Parodon e Saccodon) com 32 espécies válidas. Uma vasta literatura citogenética está disponível sobre Apareiodon e Parodon, mas até o momento não há dados citogenéticos sobre Saccodon, um gênero que contém apenas três espécies com distribuição transandina. No presente estudo foi descrito o cariótipo de S. wagneri, baseado em métodos convencionais (coloração de Giemsa, Ag-NOR, bandas C) e moleculares (mapeamento de DNA repetitivo por hibridização fluorescente in situ). Um número cromossômico diplóide de 2n = 54 foi observado, e a presença de cromossomos sexuais heteromórficos do tipo ZZ/ZW foi revelada. O cromossomo W possui uma banda terminal heterocromática que ocupa aproximadamente metade do braço longo, sendo esta banda aproximadamente a metade do tamanho do cromossomo Z. O ensaio FISH mostrou uma sintenia dos genes 18S-rDNA e 5S-rDNA no par de cromossomos 14, e a ausência de sítios teloméricos intersticiais. Nossos dados reforçam a hipótese de uma estrutura cariotípica conservadora em Parodontidae e sugerem uma origem ancestral dos cromossomos sexuais nos peixes desta família.(AU)

Chromosome analysis in Saccodon wagneri (Characiformes) and insights into the karyotype evolution of Parodontidae

Parodontidae is a relatively small group of Neotropical characiform fishes consisting of three genera (Apareiodon, Parodon, and Saccodon) with 32 valid species. A vast cytogenetic literature is available on Apareiodon and Parodon, but to date, there is no cytogenetic data about Saccodon, a genus that contains only three species with a trans-Andean distribution. In the present study the karyotype of S. wagneri was described, based on both conventional (Giemsa staining, Ag-NOR, C-bands) and molecular (repetitive DNA mapping by fluorescent in situ hybridization) methods. A diploid chromosome number of 2n = 54 was observed in both sexes, and the presence of heteromorphic sex chromosomes of the ZZ/ZW type was detected. The W chromosome has a terminal heterochromatin band that occupies approximately half of the long arm, being this band approximately half the size of the Z chromosome. The FISH assay showed a synteny of the 18S-rDNA and 5S-rDNA genes in the chromosome pair 14, and the absence of interstitial telomeric sites. Our data reinforce the hypothesis of a conservative karyotype structure in Parodontidae and suggest an ancient origin of the sex chromosomes in the fishes of this family.(AU)

Parodontidae é um grupo relativamente pequeno de peixes caraciformes neotropicais que consiste em três gêneros (Apareiodon, Parodon e Saccodon) com 32 espécies válidas. Uma vasta literatura citogenética está disponível sobre Apareiodon e Parodon, mas até o momento não há dados citogenéticos sobre Saccodon, um gênero que contém apenas três espécies com distribuição transandina. No presente estudo foi descrito o cariótipo de S. wagneri, baseado em métodos convencionais (coloração de Giemsa, Ag-NOR, bandas C) e moleculares (mapeamento de DNA repetitivo por hibridização fluorescente in situ). Um número cromossômico diplóide de 2n = 54 foi observado, e a presença de cromossomos sexuais heteromórficos do tipo ZZ/ZW foi revelada. O cromossomo W possui uma banda terminal heterocromática que ocupa aproximadamente metade do braço longo, sendo esta banda aproximadamente a metade do tamanho do cromossomo Z. O ensaio FISH mostrou uma sintenia dos genes 18S-rDNA e 5S-rDNA no par de cromossomos 14, e a ausência de sítios teloméricos intersticiais. Nossos dados reforçam a hipótese de uma estrutura cariotípica conservadora em Parodontidae e sugerem uma origem ancestral dos cromossomos sexuais nos peixes desta família.(AU)

Occurrence of euchromatic B chromosomes in natural populations of Moenkhausia bonita and M. forestii (Pisces: Characidae)

Moenkhausia is a highly specious genus among the Characidae, composed of 96 valid species. Only twelve species have a known karyotype. Thus, here are presented the first cytogenetic data of two allopatric populations of Moenkhausia bonita and one of M. forestii, both belonging to the upper Paraná River basin (PR) with discussion on the evolutionary and cytotaxonomic aspects of the genus. The two species presented 2n = 50 chromosomes but different karyotype formulas and occurrence of 1-2 B chromosomes. These elements are small metacentrics in M. bonita and small acrocentrics in M. forestii. In both species, B chromosomes were euchromatic. Ag-NOR sites were found in pair 3 (metacentric), coinciding with fluorescent in situ hybridization (FISH) by the 18S rDNA probe in both species. However, the species differed in terms of the number and position of 5S rDNA sites. Heterochromatic blocks, mapped in M. bonita showed the least amount of heterochromatin in the terminal and pericentromeric regions, while the M. forestii karyotype revealed a greater amount of interstitial heterochromatic blocks. The karyotype distinctions between the two species, including the morphology of B chromosomes, may contribute as a reference in the taxonomic studies in this group.(AU)

Moenkhausia é um gênero altamente especioso dentre os Characidae, composto por 96 espécies válidas, mas apenas doze espécies têm seus cariótipos conhecidos. Portanto, são apresentados aqui os primeiros dados citogenéticos de duas populações alopátricas de Moenkhausia bonita e uma de M. forestii, ambas pertencentes à bacia do alto rio Paraná (PR), com uma ampla discussão sobre os aspectos evolutivos e citotaxonômicos do gênero. As duas espécies apresentaram 2n = 50 cromossomos, mas diferentes fórmulas cariotípicas e ocorrência de 1-2 cromossomos B. Esses elementos são pequenos metacêntricos em M. bonita e acrocêntricos pequenos em M. forestii. Em ambas as espécies, os cromossomos B apresentaram-se eucromáticos. Sítios Ag-NOR foram encontrados no par 3 (metacêntrico), coincidindo com a hibridização fluorescente in situ (FISH) pela sonda 18S rDNA em ambas as espécies. No entanto, as espécies diferiram em termos de número e posição dos sítios de 5S rDNA. Blocos heterocromáticos mapeados em M. bonita revelaram pequena quantidade de heterocromatina nas regiões terminal e pericentromérica, enquanto o cariótipo de M. forestii revelou uma maior quantidade de blocos heterocromáticos intersticiais. As distinções cariotípicas entre as duas espécies, incluindo a morfologia dos cromossomos B, podem contribuir como uma referência em estudos taxonômicos neste grupo.(AU)

Occurrence of euchromatic B chromosomes in natural populations of Moenkhausia bonita and M. forestii (Pisces: Characidae)

Moenkhausia is a highly specious genus among the Characidae, composed of 96 valid species. Only twelve species have a known karyotype. Thus, here are presented the first cytogenetic data of two allopatric populations of Moenkhausia bonita and one of M. forestii, both belonging to the upper Paraná River basin (PR) with discussion on the evolutionary and cytotaxonomic aspects of the genus. The two species presented 2n = 50 chromosomes but different karyotype formulas and occurrence of 1-2 B chromosomes. These elements are small metacentrics in M. bonita and small acrocentrics in M. forestii. In both species, B chromosomes were euchromatic. Ag-NOR sites were found in pair 3 (metacentric), coinciding with fluorescent in situ hybridization (FISH) by the 18S rDNA probe in both species. However, the species differed in terms of the number and position of 5S rDNA sites. Heterochromatic blocks, mapped in M. bonita showed the least amount of heterochromatin in the terminal and pericentromeric regions, while the M. forestii karyotype revealed a greater amount of interstitial heterochromatic blocks. The karyotype distinctions between the two species, including the morphology of B chromosomes, may contribute as a reference in the taxonomic studies in this group.(AU)

Moenkhausia é um gênero altamente especioso dentre os Characidae, composto por 96 espécies válidas, mas apenas doze espécies têm seus cariótipos conhecidos. Portanto, são apresentados aqui os primeiros dados citogenéticos de duas populações alopátricas de Moenkhausia bonita e uma de M. forestii, ambas pertencentes à bacia do alto rio Paraná (PR), com uma ampla discussão sobre os aspectos evolutivos e citotaxonômicos do gênero. As duas espécies apresentaram 2n = 50 cromossomos, mas diferentes fórmulas cariotípicas e ocorrência de 1-2 cromossomos B. Esses elementos são pequenos metacêntricos em M. bonita e acrocêntricos pequenos em M. forestii. Em ambas as espécies, os cromossomos B apresentaram-se eucromáticos. Sítios Ag-NOR foram encontrados no par 3 (metacêntrico), coincidindo com a hibridização fluorescente in situ (FISH) pela sonda 18S rDNA em ambas as espécies. No entanto, as espécies diferiram em termos de número e posição dos sítios de 5S rDNA. Blocos heterocromáticos mapeados em M. bonita revelaram pequena quantidade de heterocromatina nas regiões terminal e pericentromérica, enquanto o cariótipo de M. forestii revelou uma maior quantidade de blocos heterocromáticos intersticiais. As distinções cariotípicas entre as duas espécies, incluindo a morfologia dos cromossomos B, podem contribuir como uma referência em estudos taxonômicos neste grupo.(AU)

Integrative taxonomy reveals disjunct distribution and first record of Hoplias misionera (Characiformes: Erythrinidae) in the Amazon River basin: morphological, DNA barcoding and cytogenetic considerations

The Hoplias malabaricus group encompasses six valid species and still is believed to harbors cryptic diversity. In this work, an integrative approach including morphological, DNA barcoding, and cytogenetic considerations was conducted to characterize a population of H. malabaricus from the Amazon basin that was recently allocated in the same mitochondrial lineage with H. misionera, a species originally described from La Plata basin. The DNA barcoding analysis revealed that the Amazon population nested together with H. misionera specimens from the La Plata basin (BIN AAB1732) in the same cluster. The intragroup distance (0.5%) was 12 times lower than the nearest neighbor (6%) distance. The morphometric analysis demonstrated slightly variation between Amazon and La Plata populations, being the former composed by larger specimens. Further morphological data supported the molecular evidence of H. misionera inhabiting Amazon basin. The karyotype characterization of H. misionera in the Amazon population showed 2n=40 and karyotypic formulae 20m+20sm, that added to C-banding, Ag-NOR and 18S results are suggestive of the similarity to karyomorph C of H. malabaricus. This work reveals the first record of H. misionera outside of La Plata basin and expands the species distribution for 2500 km northward until the Marajó Island, estuary of Amazonas River.(AU)

O grupo Hoplias malabaricus compreende seis espécies válidas e ainda acredita-se que abriga diversidade críptica. Neste trabalho, uma abordagem integrativa incluindo considerações morfológicas, de DNA barcoding e de citogenética foi conduzida para caracterizar uma população de H. malabaricus da bacia amazônica que foi recentemente alocada na mesma linhagem mitocondrial de H. misionera, uma espécie originalmente descrita para a bacia La Plata. A análise molecular por DNA barcoding revelou que essa população amazônica forma um clado monofilético com espécimes de H. misionera provenientes da bacia La Plata (BIN AAB1732). A distância genética intragrupo (0,5%) é 12 vezes menor do que para o vizinho mais próximo (6%). A comparação morfométrica demonstrou pequena variação entre as populações amazônica e La Plata, sendo os primeiros ligeiramente maiores. Entretanto, os dados morfológicos corroboram com evidência molecular e confirmam a ocorrência de H. misionera na bacia amazônica. A caracterização cariotípica de H. misionera na população amazônica apresentou 2n=40 e fórmula cariotípica 20m+20sm, que aliada aos resultados de banda C, Ag-NOR e 18S sugerem que seja similar ao cariomorfo C de H. malabaricus. Esse trabalho revela o primeiro registro de H. misionera fora da bacia La Plata e estende a distribuição da espécie por mais de 2500 km ao Norte, até a Ilha do Marajó, estuário do rio Amazonas.(AU)

Integrative taxonomy reveals disjunct distribution and first record of Hoplias misionera (Characiformes: Erythrinidae) in the Amazon River basin: morphological, DNA barcoding and cytogenetic considerations

The Hoplias malabaricus group encompasses six valid species and still is believed to harbors cryptic diversity. In this work, an integrative approach including morphological, DNA barcoding, and cytogenetic considerations was conducted to characterize a population of H. malabaricus from the Amazon basin that was recently allocated in the same mitochondrial lineage with H. misionera, a species originally described from La Plata basin. The DNA barcoding analysis revealed that the Amazon population nested together with H. misionera specimens from the La Plata basin (BIN AAB1732) in the same cluster. The intragroup distance (0.5%) was 12 times lower than the nearest neighbor (6%) distance. The morphometric analysis demonstrated slightly variation between Amazon and La Plata populations, being the former composed by larger specimens. Further morphological data supported the molecular evidence of H. misionera inhabiting Amazon basin. The karyotype characterization of H. misionera in the Amazon population showed 2n=40 and karyotypic formulae 20m+20sm, that added to C-banding, Ag-NOR and 18S results are suggestive of the similarity to karyomorph C of H. malabaricus. This work reveals the first record of H. misionera outside of La Plata basin and expands the species distribution for 2500 km northward until the Marajó Island, estuary of Amazonas River.(AU)

O grupo Hoplias malabaricus compreende seis espécies válidas e ainda acredita-se que abriga diversidade críptica. Neste trabalho, uma abordagem integrativa incluindo considerações morfológicas, de DNA barcoding e de citogenética foi conduzida para caracterizar uma população de H. malabaricus da bacia amazônica que foi recentemente alocada na mesma linhagem mitocondrial de H. misionera, uma espécie originalmente descrita para a bacia La Plata. A análise molecular por DNA barcoding revelou que essa população amazônica forma um clado monofilético com espécimes de H. misionera provenientes da bacia La Plata (BIN AAB1732). A distância genética intragrupo (0,5%) é 12 vezes menor do que para o vizinho mais próximo (6%). A comparação morfométrica demonstrou pequena variação entre as populações amazônica e La Plata, sendo os primeiros ligeiramente maiores. Entretanto, os dados morfológicos corroboram com evidência molecular e confirmam a ocorrência de H. misionera na bacia amazônica. A caracterização cariotípica de H. misionera na população amazônica apresentou 2n=40 e fórmula cariotípica 20m+20sm, que aliada aos resultados de banda C, Ag-NOR e 18S sugerem que seja similar ao cariomorfo C de H. malabaricus. Esse trabalho revela o primeiro registro de H. misionera fora da bacia La Plata e estende a distribuição da espécie por mais de 2500 km ao Norte, até a Ilha do Marajó, estuário do rio Amazonas.(AU)

Cutaneous squamous cell carcinoma with mucinous metaplasia in dogs

Background: Squamous cell carcinoma (SCC) is one of the most common malignant skin tumors in domestic animals. Histologically, they are characterized by a proliferation of neoplastic keratinocytes with varied keratin production. Some SCCs have peculiar histological characteristics that permit them to be classified into uncommon to rare histological subtypes, reported in animals and humans. However, according to the authors' knowledge, the mucin-producing subtype described in humans has not yet been reported in animals. In this study, we report the occurrence of two mucin-producing SCCs in dogs, a histological presentation similar to that seen in cutaneous SCCs with mucinous metaplasia in humans. Cases: Two dogs, a 5-year-old Yorkshire female and a 17-year-old Dachshund male, had a skin nodule near the tail and on the right eyelid. The nodules varied from 1 to 5 cm in diameter, were firm and covered with skin and hair. The cut surface was firm and white. Histological findings were compatible with squamous cell carcinoma, characterized by a neoplastic proliferation of keratinocytes originating in the epidermis and infiltrating the dermis. The keratinocytes were arranged in islands and occasional anastomosed cords, supported by a fibrous stroma. The formation of pearls varied from moderate to sparse. The nuclear and cellular pleomorphism was accentuated in case two and moderate in case one. Mitosis figures ranged from two to five in a high magnification field. Within the neoplasm, there were large vacuolated neoplastic cells with slightly fibrillar intracytoplasmic basophilic content. This content has been rarely observed in an extracellular medium. The presence of mucin was confirmed by positive Alcian Blue (AB) staining. In immunohistochemistry (IHC), tumor cells showed strong immunostaining for pancitokeratin, and in areas with marked mucin deposition, immunostaining was predominantly moderate to weak. No tumor cells were immunostained for CD34 and Bcl-2 antibodies. Compared to AB and Harris' hematoxylin, it was possible to demonstrate the presence of mucin in the cytoplasm of neoplastic keratinocytes using IHC. No vascular or lymphatic invasion by neoplastic cells was observed. The average cell proliferation index assessed by counting the nucleolar argyrophilic organizing regions (AgNOR) was 3.4 in case 1 and 4.5 in case 2. Discussion: Although the SCC routinely does not present a diagnostic challenge in veterinary practice, the histological presentation of the reported cases does not fit the current classification available in veterinary medicine. The histological presentation observed in these two dogs is similar to that described for cutaneous SCCs with mucinous metaplasia in humans, and so far not described in animals. The observation of intracytoplasmic mucin in humans is an essential finding for the diagnosis of SCC with mucin metaplasia. In the present cases, we observed a slightly basophilic amorphous substance in the cytoplasm of proliferated neoplastic keratinocytes, which stained strongly in blue when applied the Alcian Blue (AB) histochemical technique. This observation became more evident when using IHC counterstained with AB and Harris hematoxylin. In the histological analysis, the absence of an adenoid growth pattern or glandular formation amid neoplastic proliferation ruled out the possibility of a mucinous adenocarcinoma or a mucoepidermoid carcinoma. In addition, we could rule out a follicular neoplasia, including keratinizing infundibular acanthoma due to the absence of a central pore and the absence of immunostaining for CD34 and Bcl-2. These immunohistochemical findings, together with histological findings, reinforce the diagnosis of SCC with mucinous metaplasia in our dogs.(AU)

Transmissible venereal tumor: cell proliferation (AgNOR) and response to chemotherapy correlated with cytomorphological classification / Tumor venéreo transmissível (tvt): proliferação celular (AgNOR) e resposta à quimioterapia correlacionada à classificação citomorfológica

Transmissible venereal tumor (TVT) is a contagious neoplasm of round cells that occurs naturally and that affects mostly the genitalia. The TVT has been classified according to the predominant cell type as follows: linfocytoid, plasmacytoid and mixed. Various degrees of aggressiveness with wide range of biological behavior have been described based on this cell morphology. The present study aimed to evaluate the rate of cell proliferation, by cytochemical AgNOR method, and response to chemotherapy correlated with the cytomorphological classification of TVT. The results of the 22 cases showed that TVT was identified more frequently in female, adults and mixed-breed dogs. Plasmocytoid-classified tumors required a greater number of vincristine sulfate sessions, have higher cell proliferation and were the most resistant to chemotherapy, requiring additional treatment with doxorubicin. Based on these results, we can infer that the plasmacytoid pattern might have a more aggressive behavior compared to other cell types.

O tumor venéreo transmissível (TVT) é uma neoplasia contagiosa de células redondas que ocorre naturalmente e afeta principalmente a genitália. O TVT é classificado de acordo com o tipo celular predominante da seguinte forma: linfocitóide, plasmocitóide e misto. Vários graus de agressividade com ampla gama de comportamento biológico foram descritos com base nessa morfologia celular. O presente estudo teve como objetivo avaliar a taxa de proliferação celular, pelo método AgNOR citoquímico, e a resposta à quimioterapia correlacionada com a classificação citomorfológica do TVT. Os resultados dos 22 casos mostraram que o TVT foi identificado com maior frequência em cães do sexo feminino, adultos e mestiços. Os tumores classificados como plasmocitóides necessitaram de um maior número de sessões de sulfato de vincristina, apresentaram maior proliferação celular e foram os mais resistentes à quimioterapia, necessitando de tratamento adicional com doxorrubicina. Com base nesses resultados, podemos inferir que o padrão plasmocitoide pode ter um comportamento mais agressivo comparado a outros tipos de células.

Transmissible venereal tumor: cell proliferation (AgNOR) and response to chemotherapy correlated with cytomorphological classification / Tumor venéreo transmissível (tvt): proliferação celular (AgNOR) e resposta à quimioterapia correlacionada à classificação citomorfológica

Transmissible venereal tumor (TVT) is a contagious neoplasm of round cells that occurs naturally and that affects mostly the genitalia. The TVT has been classified according to the predominant cell type as follows: linfocytoid, plasmacytoid and mixed. Various degrees of aggressiveness with wide range of biological behavior have been described based on this cell morphology. The present study aimed to evaluate the rate of cell proliferation, by cytochemical AgNOR method, and response to chemotherapy correlated with the cytomorphological classification of TVT. The results of the 22 cases showed that TVT was identified more frequently in female, adults and mixed-breed dogs. Plasmocytoid-classified tumors required a greater number of vincristine sulfate sessions, have higher cell proliferation and were the most resistant to chemotherapy, requiring additional treatment with doxorubicin. Based on these results, we can infer that the plasmacytoid pattern might have a more aggressive behavior compared to other cell types.(AU)

O tumor venéreo transmissível (TVT) é uma neoplasia contagiosa de células redondas que ocorre naturalmente e afeta principalmente a genitália. O TVT é classificado de acordo com o tipo celular predominante da seguinte forma: linfocitóide, plasmocitóide e misto. Vários graus de agressividade com ampla gama de comportamento biológico foram descritos com base nessa morfologia celular. O presente estudo teve como objetivo avaliar a taxa de proliferação celular, pelo método AgNOR citoquímico, e a resposta à quimioterapia correlacionada com a classificação citomorfológica do TVT. Os resultados dos 22 casos mostraram que o TVT foi identificado com maior frequência em cães do sexo feminino, adultos e mestiços. Os tumores classificados como plasmocitóides necessitaram de um maior número de sessões de sulfato de vincristina, apresentaram maior proliferação celular e foram os mais resistentes à quimioterapia, necessitando de tratamento adicional com doxorrubicina. Com base nesses resultados, podemos inferir que o padrão plasmocitoide pode ter um comportamento mais agressivo comparado a outros tipos de células.(AU)

Use of different fixation times and application of two immunohistochemical methods for detection of KIT and Ki67 proteins in canine cutaneous mast cell tumors / Utilização de diferentes tempos de fixação e métodos imuno-histoquímicos na detecção das proteínas KIT e Ki67 em mastocitomas cutâneos caninos

Due to the high prevalence of mast cell tumors (MCTs) in the diagnostic routine, several factors, especially prognostic, have been sought to determine the biological behavior of these neoplasms. Immunohistochemistry (IHC) is one of the main tools utilized to biologically differentiate more aggressive tumors from less aggressive ones. However, some immunostainings are influenced by formalin fixation, interfering with the results. This is both a retrospective and prospective study of MCTs diagnosed in laboratory routine. A total of 25 samples, without knowledge about fixation time, were analyzed in the retrospective study, whereas 12 samples, with known fixation times, were assessed in the prospective study. Two histologic grading systems (Patnaik and Kiupel), special staining of toluidine blue, and IHC for KIT and Ki67 proteins were applied in both studies. Additionally, two amplification systems (biotinylated and non-biotinylated) for Ki67 protein and counting of the argyrophilic nucleolar organizing regions (AgNOR method) were tested in the prospective study. In the retrospective study, greater agreement between the evaluating pathologists was observed when the Kiupel system was used. IHC staining for KIT protein was effective in both studies, regardless of fixation time. IHC staining for Ki67 protein was highly sensitive to formaldehyde, and staining failure was observed in 56% of the cases in the retrospective study. In the prospective study, samples fixed for longer than 24 hours showed a reduction in the number of stained cells (altering the determination of the cell growth fraction) or showed absence of IHC staining in both amplification systems. The use of the AgNOR method to evaluate the rate of cell proliferation may be an alternative when the fixation time of the neoplasm is unknown or longer than 24 hours.(AU)

Devido a alta prevalência dos mastocitomas cutâneos caninos (MCCs) na rotina diagnóstica, vários fatores, especialmente fatores prognósticos, têm sido buscados para auxiliar na determinação do comportamento biológico desse neoplasma. A imuno-histoquímica é uma das principais ferramentas empregadas para diferenciar tumores biologicamente mais agressivos de tumores menos agressivos. Entretanto, algumas imunomarcações sofrem influência pela fixação em formol, interferindo nos resultados. Este estudo compreendeu avaliar através de uma etapa retrospectiva e uma etapa prospectiva casos de MCCs diagnosticados na rotina laboratorial. Um total de 25 amostras, sem conhecimento do tempo de fixação, foi analisado no estudo retrospectivo e 12 amostras, com tempos de fixação conhecidos, no estudo prospectivo. Foram aplicados nos dois estudos, dois sistemas de graduação histológica (Patnaik e Kiupel), a coloração especial de azul de toluidina e a imuno-histoquímica para as proteínas KIT e Ki67. Adicionalmente, no estudo prospectivo, foram testados dois sistemas de amplificação (biotinilado e não biotinilado) para a proteína Ki67 e a técnica de AgNOR (contagem das regiões organizadoras nucleolares argirofílicas). Na etapa retrospectiva, observou-se uma maior concordância entre os patologistas avaliadores quando o sistema Kiupel foi utilizado. A imunomarcação para KIT se manteve eficaz em ambos os estudos, independentemente do tempo de fixação. A imunomarcação para o Ki67 mostrou-se altamente sensível ao tempo de fixação em formol, sendo observada falha na imunomarcação em 56% dos casos do estudo retrospectivo. No estudo prospectivo, constatou-se que amostras fixadas por mais de 24 horas em formol apresentaram redução na quantidade de células imunomarcadas (alterando a determinação da fração de crescimento celular) ou apresentaram ausência de imunomarcação em ambos os sistemas de amplificação. A utilização do método AgNOR, para avaliar a taxa de proliferação celular, pode ser uma alternativa quando o tempo de fixação do neoplasma for desconhecido ou superior a 24 horas.(AU)

Use of different fixation times and application of two immunohistochemical methods for detection of KIT and Ki67 proteins in canine cutaneous mast cell tumors / Utilização de diferentes tempos de fixação e métodos imuno-histoquímicos na detecção das proteínas KIT e Ki67 em mastocitomas cutâneos caninos

Due to the high prevalence of mast cell tumors (MCTs) in the diagnostic routine, several factors, especially prognostic, have been sought to determine the biological behavior of these neoplasms. Immunohistochemistry (IHC) is one of the main tools utilized to biologically differentiate more aggressive tumors from less aggressive ones. However, some immunostainings are influenced by formalin fixation, interfering with the results. This is both a retrospective and prospective study of MCTs diagnosed in laboratory routine. A total of 25 samples, without knowledge about fixation time, were analyzed in the retrospective study, whereas 12 samples, with known fixation times, were assessed in the prospective study. Two histologic grading systems (Patnaik and Kiupel), special staining of toluidine blue, and IHC for KIT and Ki67 proteins were applied in both studies. Additionally, two amplification systems (biotinylated and non-biotinylated) for Ki67 protein and counting of the argyrophilic nucleolar organizing regions (AgNOR method) were tested in the prospective study. In the retrospective study, greater agreement between the evaluating pathologists was observed when the Kiupel system was used. IHC staining for KIT protein was effective in both studies, regardless of fixation time. IHC staining for Ki67 protein was highly sensitive to formaldehyde, and staining failure was observed in 56% of the cases in the retrospective study. In the prospective study, samples fixed for longer than 24 hours showed a reduction in the number of stained cells (altering the determination of the cell growth fraction) or showed absence of IHC staining in both amplification systems. The use of the AgNOR method to evaluate the rate of cell proliferation may be an alternative when the fixation time of the neoplasm is unknown or longer than 24 hours.(AU)

Devido a alta prevalência dos mastocitomas cutâneos caninos (MCCs) na rotina diagnóstica, vários fatores, especialmente fatores prognósticos, têm sido buscados para auxiliar na determinação do comportamento biológico desse neoplasma. A imuno-histoquímica é uma das principais ferramentas empregadas para diferenciar tumores biologicamente mais agressivos de tumores menos agressivos. Entretanto, algumas imunomarcações sofrem influência pela fixação em formol, interferindo nos resultados. Este estudo compreendeu avaliar através de uma etapa retrospectiva e uma etapa prospectiva casos de MCCs diagnosticados na rotina laboratorial. Um total de 25 amostras, sem conhecimento do tempo de fixação, foi analisado no estudo retrospectivo e 12 amostras, com tempos de fixação conhecidos, no estudo prospectivo. Foram aplicados nos dois estudos, dois sistemas de graduação histológica (Patnaik e Kiupel), a coloração especial de azul de toluidina e a imuno-histoquímica para as proteínas KIT e Ki67. Adicionalmente, no estudo prospectivo, foram testados dois sistemas de amplificação (biotinilado e não biotinilado) para a proteína Ki67 e a técnica de AgNOR (contagem das regiões organizadoras nucleolares argirofílicas). Na etapa retrospectiva, observou-se uma maior concordância entre os patologistas avaliadores quando o sistema Kiupel foi utilizado. A imunomarcação para KIT se manteve eficaz em ambos os estudos, independentemente do tempo de fixação. A imunomarcação para o Ki67 mostrou-se altamente sensível ao tempo de fixação em formol, sendo observada falha na imunomarcação em 56% dos casos do estudo retrospectivo. No estudo prospectivo, constatou-se que amostras fixadas por mais de 24 horas em formol apresentaram redução na quantidade de células imunomarcadas (alterando a determinação da fração de crescimento celular) ou apresentaram ausência de imunomarcação em ambos os sistemas de amplificação. A utilização do método AgNOR, para avaliar a taxa de proliferação celular, pode ser uma alternativa quando o tempo de fixação do neoplasma for desconhecido ou superior a 24 horas.(AU)

Combination of ethylene glycol with sucrose increases survival rate after vitrification of somatic tissue of collared peccaries (Pecari tajacu Linnaeus, 1758)

ABSTRACT: The cryopreservation of somatic tissue in collared peccaries promotes an alternative source of genetic material of this specie. The solid-surface vitrification (SSV) is a great option for tissue conservation; nevertheless, the optimization of SSV requirements is necessary, especially when referred to cryoprotectants that will compose the vitrification solution. Therefore, the aim was to evaluate the effect of the presence of 0.25 M sucrose in addition to different combinations (only or association) and concentrations (1.5 M or 3.0 M) of ethylene glycol (EG) and/or dimethyl sulfoxide (DMSO) in the somatic tissue vitrification of collared peccaries. Subsequently, we tested six combinations of cryoprotectants with or without sucrose in Dulbecco modified Eagle medium (DMEM) plus 10% fetal bovine serum (FBS). Thus, 3.0 M EG with sucrose was able to maintain normal tissue characteristics compared with non-vitrified (control), especially for the volumetric ratio of epidermis (61.2 vs. 58.7%) and dermis (34.5 vs. 36.6%), number of fibroblast (90.3 vs. 127.0), argyrophilic nucleolar organizer region (AgNOR) ratio (0.09 vs. 0.17%) and nucleus area (15.4 vs. 14.5 m2) respectively. In conclusion, 3.0 M EG with 0.25 M sucrose and 10% FBS resulted in a better cryoprotectant composition in the SSV for somatic tissue of collared peccaries.

RESUMO: A criopreservação de tecido somático em catetos promove uma fonte alternativa de material genético nesta espécie. A vitrificação em superfície sólida (VSS) é uma ótima opção para a conservação do tecido; contudo, a otimização dos requerimentos da VSS é necessária, especialmente quanto aos crioprotetores que irão compor a solução de vitrificação. Portanto, o objetivo foi avaliar o efeito da presença de 0,25 M de sacarose em adição com diferentes combinações (individual ou associação) e concentrações (1,5 M ou 3,0 M) de etilenoglicol (EG) e/ou dimetilsulfóxido (DMSO) na vitrificação de tecido somático de catetos. Subsequentemente, nós testamos seis combinações de crioprotetores com ou sem sacarose em meio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) acrescido de 10% de soro fetal bovino (SFB). Assim, 3,0 M de EG com sacarose foi capaz de manter as características normais do tecido comparado com o não vitrificado (controle), especialmente para a proporção volumétrica da epiderme (61,2 vs. 58,7%) e derme (34,5 vs. 36,6%), número de fibroblastos (90,3 vs. 127,0), razão da região argirófila organizadora de nucléolo (AgNOR) (0,09 vs. 0,17%) e área do núcleo (15,4vs.14,5 m2), respectivamente. Em conclusão, 3,0 M de EG com 0,25 M de sacarose e 10% de SFB resultaram na melhor composição de crioprotetores na VSS para tecido somático de catetos.

Combination of ethylene glycol with sucrose increases survival rate after vitrification of somatic tissue of collared peccaries (Pecari tajacu Linnaeus, 1758) / Combinação de etilenoglicol com sacarose aumenta a taxa de sobrevivência após a vitrificação de tecido somático de catetos (Pecari tajacu Linnaeus, 1758)

The cryopreservation of somatic tissue in collared peccaries promotes an alternative source of genetic material of this specie. The solid-surface vitrification (SSV) is a great option for tissue conservation; nevertheless, the optimization of SSV requirements is necessary, especially when referred to cryoprotectants that will compose the vitrification solution. Therefore, the aim was to evaluate the effect of the presence of 0.25 M sucrose in addition to different combinations (only or association) and concentrations (1.5 M or 3.0 M) of ethylene glycol (EG) and/or dimethyl sulfoxide (DMSO) in the somatic tissue vitrification of collared peccaries. Subsequently, we tested six combinations of cryoprotectants with or without sucrose in Dulbecco modified Eagle medium (DMEM) plus 10% fetal bovine serum (FBS). Thus, 3.0 M EG with sucrose was able to maintain normal tissue characteristics compared with non-vitrified (control), especially for the volumetric ratio of epidermis (61.2 vs. 58.7%) and dermis (34.5 vs. 36.6%), number of fibroblast (90.3 vs. 127.0), argyrophilic nucleolar organizer region (AgNOR) ratio (0.09 vs. 0.17%) and nucleus area (15.4 vs. 14.5 µm2) respectively. In conclusion, 3.0 M EG with 0.25 M sucrose and 10% FBS resulted in a better cryoprotectant composition in the SSV for somatic tissue of collared peccaries.(AU)

A criopreservação de tecido somático em catetos promove uma fonte alternativa de material genético nesta espécie. A vitrificação em superfície sólida (VSS) é uma ótima opção para a conservação do tecido; contudo, a otimização dos requerimentos da VSS é necessária, especialmente quanto aos crioprotetores que irão compor a solução de vitrificação. Portanto, o objetivo foi avaliar o efeito da presença de 0,25 M de sacarose em adição com diferentes combinações (individual ou associação) e concentrações (1,5 M ou 3,0 M) de etilenoglicol (EG) e/ou dimetilsulfóxido (DMSO) na vitrificação de tecido somático de catetos. Subsequentemente, nós testamos seis combinações de crioprotetores com ou sem sacarose em meio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) acrescido de 10% de soro fetal bovino (SFB). Assim, 3,0 M de EG com sacarose foi capaz de manter as características normais do tecido comparado com o não vitrificado (controle), especialmente para a proporção volumétrica da epiderme (61,2 vs. 58,7%) e derme (34,5 vs. 36,6%), número de fibroblastos (90,3 vs. 127,0), razão da região argirófila organizadora de nucléolo (AgNOR) (0,09 vs. 0,17%) e área do núcleo (15,4vs.14,5 µm2), respectivamente. Em conclusão, 3,0 M de EG com 0,25 M de sacarose e 10% de SFB resultaram na melhor composição de crioprotetores na VSS para tecido somático de catetos.(AU)

Combination of ethylene glycol with sucrose increases survival rate after vitrification of somatic tissue of collared peccaries (Pecari tajacu Linnaeus, 1758) / Combinação de etilenoglicol com sacarose aumenta a taxa de sobrevivência após a vitrificação de tecido somático de catetos (Pecari tajacu Linnaeus, 1758)

The cryopreservation of somatic tissue in collared peccaries promotes an alternative source of genetic material of this specie. The solid-surface vitrification (SSV) is a great option for tissue conservation; nevertheless, the optimization of SSV requirements is necessary, especially when referred to cryoprotectants that will compose the vitrification solution. Therefore, the aim was to evaluate the effect of the presence of 0.25 M sucrose in addition to different combinations (only or association) and concentrations (1.5 M or 3.0 M) of ethylene glycol (EG) and/or dimethyl sulfoxide (DMSO) in the somatic tissue vitrification of collared peccaries. Subsequently, we tested six combinations of cryoprotectants with or without sucrose in Dulbecco modified Eagle medium (DMEM) plus 10% fetal bovine serum (FBS). Thus, 3.0 M EG with sucrose was able to maintain normal tissue characteristics compared with non-vitrified (control), especially for the volumetric ratio of epidermis (61.2 vs. 58.7%) and dermis (34.5 vs. 36.6%), number of fibroblast (90.3 vs. 127.0), argyrophilic nucleolar organizer region (AgNOR) ratio (0.09 vs. 0.17%) and nucleus area (15.4 vs. 14.5 µm2) respectively. In conclusion, 3.0 M EG with 0.25 M sucrose and 10% FBS resulted in a better cryoprotectant composition in the SSV for somatic tissue of collared peccaries.(AU)

A criopreservação de tecido somático em catetos promove uma fonte alternativa de material genético nesta espécie. A vitrificação em superfície sólida (VSS) é uma ótima opção para a conservação do tecido; contudo, a otimização dos requerimentos da VSS é necessária, especialmente quanto aos crioprotetores que irão compor a solução de vitrificação. Portanto, o objetivo foi avaliar o efeito da presença de 0,25 M de sacarose em adição com diferentes combinações (individual ou associação) e concentrações (1,5 M ou 3,0 M) de etilenoglicol (EG) e/ou dimetilsulfóxido (DMSO) na vitrificação de tecido somático de catetos. Subsequentemente, nós testamos seis combinações de crioprotetores com ou sem sacarose em meio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) acrescido de 10% de soro fetal bovino (SFB). Assim, 3,0 M de EG com sacarose foi capaz de manter as características normais do tecido comparado com o não vitrificado (controle), especialmente para a proporção volumétrica da epiderme (61,2 vs. 58,7%) e derme (34,5 vs. 36,6%), número de fibroblastos (90,3 vs. 127,0), razão da região argirófila organizadora de nucléolo (AgNOR) (0,09 vs. 0,17%) e área do núcleo (15,4vs.14,5 µm2), respectivamente. Em conclusão, 3,0 M de EG com 0,25 M de sacarose e 10% de SFB resultaram na melhor composição de crioprotetores na VSS para tecido somático de catetos.(AU)

Tratamento de feridas excisionais de coelhos com extrato de barbatimão associado a células mononucleares autólogas da medula óssea / Treatment of excisional wound in rabbits with barbatiman extracts associated with autologous bone marrow mononuclear cells

Objetivou-se com este estudo avaliar o processo de cicatrização de feridas de coelhos tratadas com extrato de barbatimão (S. adstringens) associado a células mononucleares autólogas da medula óssea (CMMO). Utilizaram-se 20 coelhos, distribuídos em quatro grupos: B, extrato de barbatimão; CB, CMMO com extrato de barbatimão; CS, CMMO com solução fisiológica; S, solução fisiológica. Foi avaliada a presença de crosta, hiperemia, secreção, hemorragia, reepitelização, área da ferida e tempo de cicatrização. No terceiro, sétimo, 14º e 21º dias pós-operatório, realizou-se a biópsia das feridas e avaliaram-se os indicadores dos processos de inflamação e de reparo, com destaque para o colágeno, na coloração picrosírius, bem como de proliferação celular, na coloração AgNOR. Houve maior deposição de fibras colágenas nos grupos B e CB (P=0,00003) e formação de crostas mais espessas no sétimo dia, com fibras colágenas mais organizadas no 21º dia. Conclui-se que o barbatimão estimula a produção de fibras colágenas e promove a formação de crostas mais espessas sobre a ferida na fase inicial da cicatrização e, na fase de remodelação, favorece a orientação das fibras colágenas. Além disso, a associação desse fitoterápico com CMMO não estimula a cicatrização de feridas.(AU)

This study aimed to evaluate the healing process of wounds of rabbits in response to treatment with barbatiman extract (S. adstringens) associated with autologous mononuclear bone marrow cells (BM-MNC). We used 20 rabbits, divided into four groups: B, 10% barbatiman extract with 9.48% of total tannins; CB, BM-MNC with barbatiman extract; CS, BM-MNC with NaCl 0.9% solution; S, NaCl 0.9% solution. Clinical evaluation was performed by observing the presence of crust, redness, discharge, bleeding, re-epithelialization, the wound area and healing time in days. In the third, seventh, 14th and 21st postoperative days wounds were biopsied for microscopic evaluation of inflammation and repair process indicators, especially collagen, in picrosirius staining, and cell proliferation, in AgNOR staining. There was a greater deposition of collagen fibers in groups B and CB (p=0.00003) on the seventh day and formation of thicker crusts, and more organized collagen fibers on the 21st day in these groups. In conclusion, in the initial phase of healing, barbatiman extract stimulates the production of collagen fibers and promotes the formation of more exuberant crusts on the wounds and remodeling phase favors the orientation of collagen fibers, but when combined with BMMC does not stimulate wound healing in rabbits.(AU)

Tratamento de feridas excisionais de coelhos com extrato de barbatimão associado a células mononucleares autólogas da medula óssea / Treatment of excisional wound in rabbits with barbatiman extracts associated with autologous bone marrow mononuclear cells

Objetivou-se com este estudo avaliar o processo de cicatrização de feridas de coelhos tratadas com extrato de barbatimão (S. adstringens) associado a células mononucleares autólogas da medula óssea (CMMO). Utilizaram-se 20 coelhos, distribuídos em quatro grupos: B, extrato de barbatimão; CB, CMMO com extrato de barbatimão; CS, CMMO com solução fisiológica; S, solução fisiológica. Foi avaliada a presença de crosta, hiperemia, secreção, hemorragia, reepitelização, área da ferida e tempo de cicatrização. No terceiro, sétimo, 14º e 21º dias pós-operatório, realizou-se a biópsia das feridas e avaliaram-se os indicadores dos processos de inflamação e de reparo, com destaque para o colágeno, na coloração picrosírius, bem como de proliferação celular, na coloração AgNOR. Houve maior deposição de fibras colágenas nos grupos B e CB (P=0,00003) e formação de crostas mais espessas no sétimo dia, com fibras colágenas mais organizadas no 21º dia. Conclui-se que o barbatimão estimula a produção de fibras colágenas e promove a formação de crostas mais espessas sobre a ferida na fase inicial da cicatrização e, na fase de remodelação, favorece a orientação das fibras colágenas. Além disso, a associação desse fitoterápico com CMMO não estimula a cicatrização de feridas.(AU)

This study aimed to evaluate the healing process of wounds of rabbits in response to treatment with barbatiman extract (S. adstringens) associated with autologous mononuclear bone marrow cells (BM-MNC). We used 20 rabbits, divided into four groups: B, 10% barbatiman extract with 9.48% of total tannins; CB, BM-MNC with barbatiman extract; CS, BM-MNC with NaCl 0.9% solution; S, NaCl 0.9% solution. Clinical evaluation was performed by observing the presence of crust, redness, discharge, bleeding, re-epithelialization, the wound area and healing time in days. In the third, seventh, 14th and 21st postoperative days wounds were biopsied for microscopic evaluation of inflammation and repair process indicators, especially collagen, in picrosirius staining, and cell proliferation, in AgNOR staining. There was a greater deposition of collagen fibers in groups B and CB (p=0.00003) on the seventh day and formation of thicker crusts, and more organized collagen fibers on the 21st day in these groups. In conclusion, in the initial phase of healing, barbatiman extract stimulates the production of collagen fibers and promotes the formation of more exuberant crusts on the wounds and remodeling phase favors the orientation of collagen fibers, but when combined with BMMC does not stimulate wound healing in rabbits.(AU)

Técnica adaptada para determinação do índice proliferativo AgNOR em amostras citológicas de mastocitoma canino

Mastocitomas são proliferações neoplásicas de mastócitos pouco comuns na maioria das espécies e frequentes em animais de estimação. A grande maioria ocorre na derme e tecido subcutâneo e a etiopatogenia é desconhecida. Sua aparência clínica varia amplamente e sempre deve ser considerado potencialmente maligno, podendo estar associado à manifestação de sinais clínicos causados pela liberação de aminas vasoativas que estão presentes nos grânulos dos mastócitos. Deve ser feita investigação de possíveis metástases e, sempre que possível, remoção cirúrgica para graduação histológica do tumor, que é o exame padrão-ouro na determinação prognóstica do mastocitoma. O exame citopatológico é a ferramenta diagnóstica inicial, de baixo custo, rápida e não invasivo para o diagnóstico do mastocitoma. Recentemente, sistemas de graduação citológica do mastocitoma vem sendo propostos, possibilitando a identificação precoce do grau do tumor, o que pode ser útil para planejar estratégias de tratamento e discutir o prognóstico com o proprietário do cão. Outros marcadores podem e devem ser empregados para identificar o índice proliferativo do tumor, como a contagem de regiões organizadoras nucleolares argirofílicas (AgNORs). Este trabalho busca gerar dados que auxiliem na caracterização da apresentação do paciente com mastocitoma em associação ao índice proliferativo AgNOR. Neste sentido, foram gerados dois manuscritos acerca da abordagem prática do paciente canino com mastocitoma. No primeiro manuscrito, foi padronizada uma técnica para determinar o índice proliferativo AgNOR coletadas citológicas, através da qual possibilitou-se impregnar lâminas previamente coradas com corantes de rotina, antecipando assim o índice proliferativo tumoral. No segundo manuscrito, foram selecionados 63 casos de cães com mastocitoma, os quais tiveram o índice AgNOR relacionado ao sexo, raça, local e grau citológico. Os achados demonstram que não há predisposição sexual nem racial para elevados índices AgNOR, mas em alguns locais anatômicos o desenvolvimento do mastocitoma possui maiores índices proliferativos. Também observou-se que altos índices AgNOR estão associados a mastocitomas de alto grau citológico, o que pode representar um pior prognóstico. Dessa forma, sugere-se avaliar o paciente com mastocitoma no pré-cirúrgico através do estadiamento clínico conjuntamente à análise citológica e índice AgNOR citológico para o adequado direcionamento das estratégias terapêuticas. A utilização do marcador proliferativo AgNOR é vantajosa pois é de execução rápida e fácil e fornece suporte para que a abordagem clínica tenha melhores resultados, permitindo definir a necessidade de procedimentos terapêuticos complementares além da remoção cirúrgica

Mast cell tumors are neoplastic proliferations of mast cells, uncommon in most species and frequent in pets. Majority of MCT occur in the dermis and subcutaneous tissue and the etiopathogenesis is unknown. Its clinical appearance varies a lot and must always be considered potentially malignant, and may be associated with the expression of clinical signs caused by the release of vasoactive amines that are present in mast cell granules. Metastases should be searched and, whenever possible, surgical removal for histological grading of the tumor, which is the gold standard exam in the prognostication of mast cell tumor. The cytopathological exam is the initial, inexpensive, fast, and non-invasive tool for diagnosing mast cell tumors. Recently, cytological grading systems for mast cell tumors have been proposed, enabling the early identification of the tumor grade, which can be useful to plan treatment strategies and discuss the prognosis with the dog's owner. Other markers should be used to identify the proliferative index of the tumor, such as the count of argyrophilic nucleolar organizer regions (AgNORs). This work aims to generate information to advise about the presentation of patients with mast cell tumors in association with the AgNOR proliferative index. Thus, two manuscripts were produced about the practical approach of the canine patient with mast cell tumor. In the first manuscript, a technique to determine the AgNOR proliferative index collected from cytology was standardized, through which it was possible to impregnate slides previously stained with routine dyes, thus anticipating the tumor proliferative index. In the second manuscript, 63 cases of dogs with mast cell tumors were selected, which had the AgNOR index related to sex, breed, location and cytological grade. The findings demonstrate that there is no sexual or racial predisposition to high AgNOR indices, but in some anatomical sites the development of mast cell tumors has higher proliferative indices. It was also observed that high AgNOR indices are associated with high cytological grade mast cell tumors, which may represent a worse prognosis. Thus, it is suggested to evaluate the patient with mast cell tumor in the pre-surgical period by clinical staging, cytological analysis and cytological AgNOR index for the proper targeting of therapeutic strategies. The use of the AgNOR proliferative marker is useful because it is quick and easy to perform and provides support for the clinical approach having better results, helping to define the need for complementary therapeutic procedures in addition to surgical removal.

Avaliação de índice proliferativo em amostras citopatológicas de tumores mamários caninos: correlação histopatológica

As neoplasias mamárias são umas das mais frequentes neoplasias na rotina de pequenos animais, principalmente na espécie canina. Acomete animais de diferentes idades e raças e seus aspectos clínicos e histopatológicos são variados. O diagnóstico desses tumores podem ser obtidos através da citologia aspirativa por agulha fina ou histopatologia. Recentemente, sistemas de graduação citológica vem sendo propostos, possibilitando a identificação precoce do grau do tumor classificando-o em benigno ou maligno, podendo ser útil para planejar estratégias de tratamento e discutir o prognóstico com o proprietário do animal. Outros marcadores podem e devem ser empregados para identificar o índice proliferativo do tumor, como a contagem de regiões organizadoras nucleolares argirofílicas (AgNORs) com o intuito de auxiliar na determinação de um protocolo terapêutico adequado. Os valores da contagem de AgNOR em 31 tumores mamários diagnosticados pela citopatologia em cadelas atendidas no Hospital Veterinário da Universidade Federal de Santa Maria correlacionando com a histopatologia e também a comparação entre os dois avaliadores mostrou que não houve diferença nas médias dos índices AgNORs dos diferentes tipos histológicos para nenhum dos avaliadores. A comparação entre os dois avaliadores mostrou diferença estatística significativa. Esse experimento evidenciou a necessidade de outros estudos com um maior número de amostras associado a outros marcadores prognósticos.

The mammary gland is a modified apocrine sweat gland that has been observed in mammals for millions of years. It is subject to the development of tumors and, although the etiology is not very clear, several factors are associated with its development, such as hormones, nutrition, age and race. Neoplasms are among the main diseases that directly affect the mammary glands of bitches. Therefore, there was a need to use prognostic markers to identify the proliferative index of these tumors, such as argyrophilic nucleolar organizer regions (AgNOR), with the aim of helping to establish an adequate therapeutic protocol. This study aimed to investigate whether there is an agreement between the cytopathological evaluation by the tumor proliferative index, through the AgNOR technique, and the histopathological examination of mammary neoplasms in bitches. The samples collected by fine needle aspiration cytology (FNAC) were analyzed at the Laboratory of Veterinary Clinical Analysis of the Federal University of Santa Maria, and the histopathological examination was performed by the Laboratory of Veterinary Pathology within the same institution. Data were obtained from the analysis using computer software (IBM SPSS Statistics 23). The AgNOR count values of the cytological samples were correlated with the histopathological reports by a non-parametric Kruskal-Wallis test and the comparison between the AgNORs indices of two evaluators was also made using the Wilcoxon test for data analysis. It is considered that there were no differences in the mean AgNOR indexes of the different histological types of breast tumors for any of the evaluators, while the calculated p was greater than 0.05 and the comparison between the counts of the two evaluators showed that there was a difference because the p value was less than 0.05. We were able to conclude that further studies are needed with a larger number of samples and other prognostic markers that may help us to validate and complement the AgNOR technique

First cytogenetic record for a species of Otothyropsis Ribeiro, Carvalho & Melo, 2005 (Loricariidae, Hypoptopomatinae)

Hypoptopomatinae is a monophyletic subfamily that includes 147 species, distributed in 20 genera. Otothyropsis is a genus of Hypoptopomatinae, recently described. Here, we provided the first cytogenetic information of Otothyropsis . The specimens were collected from córrego Dourado, a small tributary of rio Iguatemi, which flows into rio Paraná. The specimens of Otothyropsis cf. polyodon were analyzed with respect to diploid number, C-Band and Ag-NOR patterns. The diploid number was 54 chromosomes, distributed in 18 metacentric, 28 submetacentric, and 8 subtelocentric chromosomes, with single Ag-NOR and conspicuous heterochromatic blocks on the short and long arms of the 24th pair of chromosomes. Our study highlights the conservation trend of the diploid number (2n=54) and fundamental number (FN = 108) among the species of Hypoptopomatinae. However, the karyotype formula (18m+28sm+8st) seems to be specific to O. cf. polyodon , considering the other Hypoptopomatinae species already analyzed.(AU)

Hypoptopomatinae é uma subfamília monofilética que inclui 147 espécies distribuídas em 20 gêneros, sendo Otothyropsis um gênero recentemente descrito. Aqui, fornecemos a primeira informação citogenética do gênero Otothyropsis . Espécimes foram coletados no córrego Dourado, um pequeno tributário do rio Iguatemi, o qual deságua no rio Paraná. Espécimes de Otothyropsis cf. polyodon foram analisados em relação ao número diploide e padrões de Banda-C e Ag-NOR. O número diploide foi de 54 cromossomos, distribuídos em 18 metacêntricos, 28 submetacêntricos e 8 subtelocêntricos, com Ag-NOR simples e blocos heterocromáticos evidentes no braços curto e longo do par de cromossomos 24. Nosso estudo destaca a tendência de conservação do número diploide (2n=54) e número fundamental (NF=108) entre as espécies de Hypoptopomatinae. Entretanto, a fórmula cariotípica (18m+28sm+8st) parece ser específica para O. cf. polyodon, considerando as outras espécies de Hypoptopomatinae já analisadas.(AU)

CARACTERIZAÇÃO MORFOLÓGICA, CITOGENÉTICA E MOLECULAR DE Mazama sarae E Mazama chunyi (CETARTIODACTYLA; CERVIDAE) A PARTIR DE TOPÓTIPOS ATUAIS

O gênero Mazama está cercado de incertezas taxônomicas devido à alta diversidade cariotípica inter e intra-específica, origem polifilética e convergência morfológica, sendo que o número de espécies descritas em diferentes revisões varia entre quatro e dezoito. Dentro da espécie Mazama americana é sugerida a existência de novas espécies, já que além das diferenças moleculares e citogenéticas, existem evidências de isolamento reprodutivo pós-zigótico entre populações de veado-mateiro. Na Bolívia, até o momento foram descritas duas formas do gênero Mazama. A primeira delas é M. sarae Thomas, 1925; uma forma de veado vermelho descrito na região sul da Bolívia. Atualmente é considerado sinônimo de M. americana, com base nas características morfológicas daquele único exemplar descrito por Thomas (1925), sem nenhum tipo de abordagem genética. A segunda é M. chunyi Hershkovitz, 1959; uma forma de veado marrom de tamanho pequeno, que habita gradientes altitudinais de Puna-Yungas, no noroeste da Bolívia. Apesar de ser aceita como espécie única, as análises moleculares tem sido escassas e ainda não foi descrita cromossomicamente. Portanto, o presente estudo objetivou a caracterização de um topótipo de Mazama sarae e um topotipo de Mazama chunyi, sob aspectos morfológicos (biometria corporal, padrões de coloração da pele, craniometria), citogenéticos (coloração convencional Giemsa, biometria cromossômica, bandamento C, bandamento G, coloração Ag-NOR), e moleculares (análises filogenéticas do genoma mitocondrial, no caso de M. sarae, e de 3 genes mitocondriais para M. chunyi). Os resultados morfológicos posicionam ambas as espécies no clado dos pequenos Mazama (M. temama, M. nana, M. nemorivaga e M. gouazoubira). Segundo os padrões citogenéticos, os topótipos de ambas as espécies não se enquadram em nenhuma variante das espécies de Mazama atualmente conhecidas. As árvores filogenéticas geradas para o topótipo de M. sarae, permite evidenciar a espécie dentro da subtribo Odocoileina, mostrando uma distância considerável em relação ao M. americana e ao resto das espécies incluídas na subtribo. Por sua vez, o topótipo de M. chunyi, posiciona-se dentro da subtribo Blastocerina, próximo ao haplogrupo monofilético formado pelos espécimes de M. gouazoubira. Assim, propõe-se a caracterização de um topótipo para cada espécie estudada, o qual é o ponto de partida para a descrição de novas espécies e possível mudança completa na nomenclatura do gênero Mazama.

Mazama genus' taxonomic uncertainties are due to high inter and intraspecific karyotypic diversity, polyphyletic origin, and morphological convergence. The number of species described in different reviews ranges from four to eighteen. Within the Mazama americana species, new species' existence is suggested since, in addition to molecular and cytogenetic differences, there is evidence of post-zygotic reproductive isolation between red brocket deer populations. In Bolivia, two forms of the genus Mazama have been described to date. The first of these is M. sarae Thomas, 1925; a form of red deer described in the southern region of Bolivia. It is currently considered a synonym of M. americana, based on the morphological characteristics of that single specimen described by Thomas (1925), without having any genetic approach. The second is M. chunyi Hershkovitz, 1959, a small-sized brown deer that inhabits altitudinal gradients of Puna-Yungas in northwestern Bolivia. Although accepted as a unique species, molecular analyses have been scarce and have not yet been described chromosomally.Therefore, the present study aimed at the characterization of a topotype of Mazama sarae and of a topotype of Mazama chunyi, under morphological aspects (body biometrics, skin color patterns, craniometry), cytogenetic (Giemsa conventional coloration, chromosomal biometry, C banding, G banding, Ag-NOR coloration) and molecular (phylogenetic analyses of the mitochondrial genome, in the case of M. sarae, and of 3 mitochondrial genes for M. chunyi). The morphological results position both species in the clade of the small Mazama (M. temama, M. nana, M. nemorivaga e M. gouazoubira). According to cytogenetic patterns, both species' topotypes do not fit any variant of the Mazama species known until now. The phylogenetic trees generated for the topotype of M. sarae, allow us to evidence the species within the subtribe Odocoileina, showing a considerable distance from M. americana and the rest of the species subtribe. In this way, M. chunyi topotype is positioned within subtribe Blastocerina, close to the monophyletic haplogroup formed by specimens of M. gouazoubira. Thus, we propose the characterization of a topotype for each species studied, which is the starting point for the description of new species and possible complete change in the nomenclature of the genus Mazama.