In vitro predatory activity of nematophagous fungi isolated from water buffalo feces and from soil in the Mexican southeastern / Atividade predatória in vitro de fungos nematófagos isolados de fezes de búfalos e do solo no sudeste mexicano

Nematophagous fungi from the feces of water buffalo and soil from southeastern Mexico were isolated, and their in vitro predatory activity against Haemonchus contortus infective larvae (L3) (HcL3) was assessed. The fungi were isolated by sprinkling soil or feces on water agar plates. Six series of 10 Petri dishes containing a 7-day-old culture of each fungus and a series without fungi as the control were prepared. Five hundred HcL3 were added to each plate. The plates were incubated at room temperature. The average of recovered HcL3 was considered to estimate the larval reduction rate. Four nematophagous fungi isolates corresponding to Arthrobotrys oligospora, var microspora (strains 4-276, 269 and 50-80) and one identified as A. oligospora,var. oligospora (isolates 48-80) were obtained from water buffalo feces. From the soil, five isolates were isolated; three corresponded to A. musiformis (Bajío, Yumca and Macuspana isolates), and two isolates were identified as A. oligospora (Comalcalco and Jalapa de Méndez isolates). The predatory activity of isolates from water buffalo feces ranged between 85.9 and 100%. Meanwhile, the fungi from the soil ranged between 55.5 and 100% (p0.05). The nematophagous fungi obtained could have important implications in the control of parasites of importance in the livestock industry.(AU)

Fungos nematófagos das fezes de búfalo de água e do solo no sudeste do México foram isolados, e a atividade predatória in vitro contra larvas infectantes de Haemonchus contortus (L3) (HcL3) foi avaliada.Os fungos foram isolados por aspersão de solo e de fezes em placas de agar água. Foram preparadas seis séries de 10 placas de Petri contendo uma cultura de 7 dias de idade de cada fungo e uma série sem fungos como controle. Quinhentos HcL3 foram adicionadas a cada placa. As placas foram incubadas à temperatura ambiente. O número médio de HcL3 recuperadas foi considerado para estimar a taxa de redução larval. Quatro isolados de fungos nematófagos corresponderam a Arthrobotrys oligospora, var microspora (estirpes 4-276, 269 e 50-80) e um isolado identificado como A. oligospora, var. oligospora (isolados 48-80 de fezes de búfalo de água. Do solo, dos cinco isolados três corresponderam a A. musiformis (Bajío, Yumca e Macuspana isolados), e dois isolados foram identificados como A. oligospora (isolados de Comalcalco e Jalapa de Méndez). A atividade predatória de isolados de fezes de búfalo de água variou entre 85,9 e 100%. Enquanto isso, os fungos do solo variaram entre 55,5 e 100% (p0,05). Os fungos nematófagos obtidos podem ter importantes implicações nesse controle de parasitos de importância na indústria pecuária.(AU)

In vitro susceptibility of nematophagous fungi to antiparasitic drugs: interactions and implications for biological control

Abstract The fast anthelmintic resistance development has shown a limited efficiency in the control of animals endoparasitosis and has promoted research using alternative control methods. The use of chemicals in animal anthelmintic treatment, in association with nematophagous fungi used for biological control, is a strategy that has proven to be effective in reducing the nematode population density in farm animals. This study aims to verify the in vitro susceptibility of the nematophagous fungi Arthrobotrys oligospora, Duddingtonia flagrans and Paecilomyces lilacinus against the antiparasitic drugs albendazole, thiabendazole, ivermectin, levamisole and closantel by using the Minimum Inhibitory Concentration (MIC). MICs ranged between 4.0 and 0.031 µg/mL for albendazole, thiabendazole and ivermectin, between 0.937 and 0.117 µg/mL for levamisole, and between 0.625 and 0.034 µg/mL for closantel. The results showed that all antiparasitic drugs had an in vitro inhibitory effect on nematophagous fungi, which could compromise their action as agents of biological control. D. flagrans was the most susceptible species to all drugs.

Resumo O desenvolvimento rápido da resistência anti-helmíntica demonstrou a eficiência limitada no controle de endoparasitoses em animais, e promoveu a investigação em métodos de controles alternativos. O uso de produtos químicos no tratamento anti-helmíntico animal, em associação com fungos nematófagos utilizados para o controlo biológico, é uma estratégia que tem provado ser eficaz na redução da densidade da população de nematódeos em animais agrícolas. Este estudo teve como objetivo verificar a suscetibilidade in vitro dos fungos nematófagos Arthrobotrys oligospora, Duddingtonia flagrans e Paecilomyces lilacinus frente aos antiparasitários albendazol, tiabendazol, ivermectina, levamisol e closantel, usando a concentração inibitória mínima (MIC). Os MICs variaram entre 4,0 e 0,031 g/mL para albendazol, tiabendazol e ivermectina, entre 0,937 e 0,117 g/mL para o levamisol, e entre 0,625 e 0,034 g/mL para closantel. Os resultados mostraram que todos os antiparasitários tiveram um efeito inibidor in vitro sobre os fungos nematófagos, o que poderia comprometer suas atividades como agentes de controle biológico. D. flagrans foi a espécie mais sensível a todas as drogas.

In vitro susceptibility of nematophagous fungi to antiparasitic drugs: interactions and implications for biological control

Abstract The fast anthelmintic resistance development has shown a limited efficiency in the control of animals endoparasitosis and has promoted research using alternative control methods. The use of chemicals in animal anthelmintic treatment, in association with nematophagous fungi used for biological control, is a strategy that has proven to be effective in reducing the nematode population density in farm animals. This study aims to verify the in vitro susceptibility of the nematophagous fungi Arthrobotrys oligospora, Duddingtonia flagrans and Paecilomyces lilacinus against the antiparasitic drugs albendazole, thiabendazole, ivermectin, levamisole and closantel by using the Minimum Inhibitory Concentration (MIC). MICs ranged between 4.0 and 0.031 µg/mL for albendazole, thiabendazole and ivermectin, between 0.937 and 0.117 µg/mL for levamisole, and between 0.625 and 0.034 µg/mL for closantel. The results showed that all antiparasitic drugs had an in vitro inhibitory effect on nematophagous fungi, which could compromise their action as agents of biological control. D. flagrans was the most susceptible species to all drugs.

Resumo O desenvolvimento rápido da resistência anti-helmíntica demonstrou a eficiência limitada no controle de endoparasitoses em animais, e promoveu a investigação em métodos de controles alternativos. O uso de produtos químicos no tratamento anti-helmíntico animal, em associação com fungos nematófagos utilizados para o controlo biológico, é uma estratégia que tem provado ser eficaz na redução da densidade da população de nematódeos em animais agrícolas. Este estudo teve como objetivo verificar a suscetibilidade in vitro dos fungos nematófagos Arthrobotrys oligospora, Duddingtonia flagrans e Paecilomyces lilacinus frente aos antiparasitários albendazol, tiabendazol, ivermectina, levamisol e closantel, usando a concentração inibitória mínima (MIC). Os MICs variaram entre 4,0 e 0,031 g/mL para albendazol, tiabendazol e ivermectina, entre 0,937 e 0,117 g/mL para o levamisol, e entre 0,625 e 0,034 g/mL para closantel. Os resultados mostraram que todos os antiparasitários tiveram um efeito inibidor in vitro sobre os fungos nematófagos, o que poderia comprometer suas atividades como agentes de controle biológico. D. flagrans foi a espécie mais sensível a todas as drogas.

In Vitro Nematophagous Activity Of Predatory Fungi On Infective Larvae Of Strongyloides Papillosus

An in vitro experiment was carried out to assess the effect of fungal isolates of the genus Arthrobotrys, Duddingtonia, Monacrosporium and Nematoctonus on infective Strongyloides papillosus larvae. A suspension of 1,000 infective S. papillosus larvae was dripped on to Petri dishes containing fungi grown in agar-water. There was a statistically significant difference (p<0.05) among all the isolates and the fungus-free control. Comparing the results between isolates, difference was observed in some isolates of the genus Arthrobotrys (CG 719, I40, A1, A2, C1, B1), D. flagrans (CG722), Monacrosporium (CGI, SF53, NF34A) and N. robustus (D1) that showed a better capture and destruction results and consequently a greater decrease in the average of the uncaptured larvae recovered. The results showed that there may be variations in the predatory capacity of different species and among fungal isolates of the same species on Strongyloides papillosus and indicated that nematophagous fungi may be used for the biological control of this helminth.

In Vitro Nematophagous Activity Of Predatory Fungi On Infective Larvae Of Strongyloides Papillosus

An in vitro experiment was carried out to assess the effect of fungal isolates of the genus Arthrobotrys, Duddingtonia, Monacrosporium and Nematoctonus on infective Strongyloides papillosus larvae. A suspension of 1,000 infective S. papillosus larvae was dripped on to Petri dishes containing fungi grown in agar-water. There was a statistically significant difference (p<0.05) among all the isolates and the fungus-free control. Comparing the results between isolates, difference was observed in some isolates of the genus Arthrobotrys (CG 719, I40, A1, A2, C1, B1), D. flagrans (CG722), Monacrosporium (CGI, SF53, NF34A) and N. robustus (D1) that showed a better capture and destruction results and consequently a greater decrease in the average of the uncaptured larvae recovered. The results showed that there may be variations in the predatory capacity of different species and among fungal isolates of the same species on Strongyloides papillosus and indicated that nematophagous fungi may be used for the biological control of this helminth.(AU)

Predatory activity of Butlerius nematodes and nematophagous fungi against Haemonchus contortus infective larvae / Atividade predatória de nematóides Butlerius e fungos nematófagos contra larvas infectantes de Haemonchus contortus

The purpose of this study was to evaluate the predatory activity of the nematode Butlerius spp. and fungal isolates of Duddingtonia flagrans, Clonostachys rosea, Arthrobotrys musiformis and Trichoderma esau against H. contortusinfective larvae (L3) in grass pots. Forty-eight plastic gardening pots containing 140 g of sterile soil were used. Panicum spp. grass seeds (200 mg) were sown into each pot and individually watered with 10 mL of tap water. Twelve days after seeding, the pots were randomly divided into 6 groups (n=8). Two thousand H. contortus infective larvae (L3) were added to each group. Additionally, the following treatments were established: Group 1 2000 Butlerius spp. larvae; group 2 A. musiformis (1x107 conidia); group 3 T. esau (1x107 conidia); group 4 C. rosea (1x107 conidia), group 5 D. flagrans (1x107conidia) and Group 6 no biological controller (control group). The larval population of H. contortus exposed to Butlerius spp. was reduced by 61.9%. Population reductions of 90.4, 66.7, 61.9 and 85.7% were recorded in the pots containing A. musiformis, T. esau, C. rosea and D. flagrans, respectively. The results of this study indicate that the predatory nematode Butlerius spp. and the assessed fungi display an important predatory activity can be considered suitable potential biological control agents.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade predatória do nematoide Butlerius spp. e isolados fúngicos de Duddingtonia flagrans, Clonostachys rosea, Arthrobotrys musiformis e Trichoderma esau contra larvas infectantes (L3) de Haemonchus contortus em vasos plantados com Panicum spp. Foram utilizados quarenta e oito potes plásticos de jardinagem contendo 140 g de solo estéril, 200 mg de sementes de Panicum spp.. Cultivar colonião, foi semeado em cada vaso e, diariamente, molhados com 10 mL de água da torneira. Doze dias após, os vasos foram divididos em 6 grupos (n = 8), e duas mil L3 de H. contortus foram adicionadas a cada vaso. Foram estabelecidos os seguintes tratamentos: Grupo 1 - 2.000 larvas de Butlerius spp.; Grupo 2 - A. musiformis (1x107 conídios); grupo 3 - T. esau (1x107 conídios); grupo 4 - C. rosea (1x107 conídios); grupo 5 - D. flagrans (1x107conidia); e Grupo 6 somente L3 de H. contortus que serviu como controle negativo. A população de L3 de H. contortus expostas a Butlerius spp. foi reduzida em 61,9%. Redução populacional de 90,4, 66,7, 61,9 e 85,7% foram observadas nos vasos contendo A. musiformis, T. esau, C. rosea e D. flagrans, respectivamente. Os resultados deste estudo indicaram que o nematoide Butlerius spp. e os fungos avaliados exibiram importante atividade predatória e podem ser considerados como agentes de controle biológico.(AU)

AÇÃO DE FUNGOS NEMATÓFAGOS Arthrobotrys spp e Duddingtonia flagrans (Bioverm®) NO CONTROLE BIOLÓGICO DAS NEMATODIOSES GASTRINTESTINAIS EM BOVINOS DE CORTE NO CENTRO-OESTE DO BRASIL

O uso indiscriminado de anti-helmínticos para o controle das nematodioses gastrintestinais em bovinos gera nematóides resistente, constitui um sério problema na criação de bovinos devido ao impacto que estes parasitas causam na produção de carne e leite e aos altos custos das medidas de controle. Os objetivos deste trabalho foram: i) avaliar diferentes combinações de espécies do gênero Arthrobotrys de fungos nematófagos no controle de larvas infectantes de nematóides gastrintestinais em bovinos no Centro-Oeste do Brasil. ii) avaliar a eficácia da utilização do produto comercial Bioverm®, contendo clamidósporos de duddingtonia flagrans - ACOO1, no controle de helmintos em bovinos de corte, na região Centro Oeste do Brasil. Primeiramente, foram utilizados oito bovinos das raças nelore e aberdeen angus. Os animais foram divididos em quatro grupos com dois animais cada. Grupo 1, foram administrados péletes contendo a associação dos fungos A. robusta + A. musiformis; Grupo 2, péletes contendo a associação dos fungos A. robusta + A. sinensis; Grupo 3, péletes contendo a associação dos fungos A. musiformis + A. sinensis; todos os animais receberam por via oral em dose única os peletes, e Grupo 4 (controle). Em seguida, foi realizado o teste de viabilidade em placas de Petri contendo meio de cultura ágar-água 2% e 1000 L3 de GIN de bovinos. Os resultados demonstraram que houve diferença (p<0,01) dos grupos experimentais (G1, G2 e G3) em relação ao grupo controle (G4) em todos os horários estudados (12 horas à 72 horas). A viabilidade das associações foi confirmada por meio da visualização de estruturas condizentes com o gênero Arthrobotrys. Conclui-se que as três associações de fungos do gênero Arthrobotrys, administrados por via oral apresentaram eficácia e foram viáveis após teste de passagem em bovinos. Posteriormente, foram utilizados 18 bovinos, divididos em dois grupos (grupo tratado e grupo controle), para melhorar os resultados de tratamentos com fungos isolados e potencializar o controle dos nematóides que parasitam bovinos. Os animais do grupo tratado receberam uma grama para cada 10 kg de peso vivo animal, administrados diariamente. Já no grupo controle cada animal recebeu 1 g de farelo de arroz para cada 10 kg de peso vivo animal, sem bioverm. Amostras de fezes e pastagens foram coletadas quinzenalmente durante sete meses. Os gêneros de nematóides mais prevalentes foram: Haemonchus sp., Cooperia sp. e Oesophagostomum sp., refletindo os resultados encontrados na forragem. A formulação fúngica Bioverm® apresentou eficácia na diminuição das recidivas de infecção, na descontaminação ambiental, com reflexos diretos no ganho de peso dos animais.

The indiscriminate use of anthelmintics to control gastrointestinal nematodes in cattle generates resistant nematodes, constitutes a serious problem in the breeding of cattle due to the impact that these parasites have on meat and milk production and the high costs of control measures. The objectives of this work were: i) to evaluate different combinations of species of the genus Arthrobotrys of nematophagous fungi in the control of infective larvae of gastrointestinal nematodes in cattle in the Midwest of Brazil. ii) evaluate the effectiveness of the use of the commercial product Bioverm®, containing chlamydospores of duddingtonia flagrans - ACOO1, in the control of helminths in beef cattle, in the Midwest region of Brazil. First, eight cattle of the Nelore and Aberdeen Angus breeds were used. The animals were divided into four groups with two animals each. Group 1, pellets were administered containing the association of fungi A. robusta + A. musiformis; Group 2, pellets containing the association of fungi A. robusta + A. sinensis; Group 3, pellets containing the association of fungi A. musiformis + A. sinensis; all animals received the pellets orally in a single dose, and Group 4 (control). Then, the viability test was carried out in Petri dishes containing 2% agar-water culture medium and 1000 L3 of bovine GIN. The results showed that there was a difference (p <0.01) between the experimental groups (G1, G2 and G3) in relation to the control group (G4) at all times studied (12 hours to 72 hours). The viability of the associations was confirmed through the visualization of structures consistent with the genus Arthrobotrys. It is concluded that the three associations of fungi of the genus Arthrobotrys, administered orally showed efficacy and were viable after passage test in cattle. Subsequently, 18 cattle were used, divided into two groups (treated group and control group), to improve the results of treatments with isolated fungi and enhance the control of nematodes that parasitize cattle. The animals in the treated group received one gram for each 10 kg of animal live weight, administered daily. In the control group, each animal received 1 g of rice bran for each 10 kg of animal live weight, without bioverm. Stool and pasture samples were collected every two weeks for seven months. The most prevalent nematode genera were: Haemonchus sp., Cooperia sp. and Oesophagostomum sp., reflecting the results found in the forage. The fungal formulation Bioverm® was effective in decreasing infection recurrences, in environmental decontamination, with direct effects on the animals' weight gain.

AÇÃO DO FUNGO ARTHROBOTRYS CLADODES COMO CONTROLADOR BIOLÓGICO DE NEMATÓDEOS GASTRINTESTINAIS DE OVINOS

As helmintoses gastrintestinais ocupam lugar de destaque dentre os fatores que interferem na cadeia produtiva de pequenos ruminantes. Dentre as alternativas promissoras de controle, destaca-se a utilização de fungos nematófagos. A presente dissertação de mestrado é composta por dois capítulos, em que o primeiro é uma revisão de literatura relacionada ao tema controle biológico por fungos nematófagos; e o segundo é um artigo científico que objetivou avaliar a eficiência de isolados do fungo Arthrobotrys cladodes (CG 719) no controle biológico de nematódeos gastrintestinais de ovinos. No ensaio in vitro (experimento 1), foram utilizadas 30 placas de Petri divididos em dois grupos: tratado e controle. O grupo tratado foi composto por 15 placas, onde em cada placa foram difundidos 10 péletes e 2000 larvas infectantes de ovinos. No experimento 2, foram formados dois grupos (tratado e controle) com seis ovinos cada. Os animais do grupo tratado receberam 10g da formulação peletizada com o fungo e a partir de 12, 24, 36, 48, 60 e 72 horas após administração, foram obtidas as fezes dos animais. Constatou-se no ensaio in vitro redução larval de 72,3%, após sete dias de interação das larvas com os fungos. No ensaio A, houve redução larval significativa (p<0,01), apresentando redução de 83,5%. No ensaio B, observou-se diferença estatisticamente significativa (p<0,01) do número de larvas recuperadas a partir das coproculturas, com redução de 72,4%. Concluiu-se que A. cladodes peletizado em matriz de alginato de sódio foi capaz de predar larvas e sobreviver à passagem pelo trato gastrintestinal de ovinos.

Gastrointestinal helminths occupy a prominent place among the factors that interfere in the small ruminant productive chain. Among the promising control alternatives, the use of nematophagous fungi stands out. The present master's dissertation consists of two chapters, in which the first is a literature review related to the biological control theme by nematophagous fungi; and the second is a scientific article that aimed to evaluate the efficiency of isolates of the fungus Arthrobotrys cladodes (CG 719) in the biological control of gastrointestinal nematodes in sheep. In the in vitro test (experiment 1), 30 Petri dishes were used, divided into two groups: treated and control. The treated group consisted of 15 plates, where 10 pellets and 2000 infective sheep larvae were spread on each plate. In experiment 2, two groups were formed (treated and control) with six sheep each. The animals in the treated group received 10g of the formulation pelleted with the fungus and after 12, 24, 36, 48, 60 and 72 hours after administration, the animals feces were obtained. Larval reduction of 72.3% was found in the in vitro test, after seven days of interaction of the larvae with the fungi. In test A, there was a significant larval reduction (p <0.01), with a reduction of 83.5%. In trial B, there was a statistically significant difference (p <0.01) in the number of larvae recovered from cocultures, with a reduction of 72.4%. It was concluded that A. cladodes pelleted in a sodium alginate matrix was able to prey on larvae and survive the passage through the gastrointestinal tract of sheep

Arthrobotrys cladodes var macroides E Pochonia chlamydosporia COMO CONTROLADORES BIOLÓGICOS DE NEMATÓIDES PARASITOS GASTRINTESTINAIS DE EQUINOS

Os nematóides parasitas gastrintestinais são responsáveis por gerar perdas econômicas significativas para a equideocultura mundial. O surgimento de resistência aos anti-helmínticos tem se tornado frequente e o controle biológico através do uso de fungos nematófagos torna-se uma alternativa para auxiliar na profilaxia das helmintoses gastrintestinais de equinos. Neste trabalho foi avaliada a eficácia do fungo nematófago Arthrobotrys cladodes var. macroides (isolado CG719) em predar larvas infectantes (L3) de ciatostomíneos in vitro, bem como sua atividade predatória após a passagem pelo trato gastrointestinal de equinos (TGI). Os testes in vitro e após passagem pelo TGI apresentaram reduções (p <0,05) de 56,6% e 31,42% respectivamente de L3, confirmando a capacidade de A. cladodes em controlar L3 de ciatostomíneos e suportar a passagem pelo TGI. Esses resultados incentivaram a avaliação da eficácia do fungo A. cladodes em testes com equinos a campo. Nesse ensaio, o fungo foi utilizado em formulações à base de alginato de sódio fornecidas duas vezes por semana, durante 9 meses. Embora os resultados tenham mostrado redução na contagem de ovos por grama de fezes, bem como de larvas recuperadas de coproculturas e de pastagem, não foram observadas diferenças estatisticamente significantes entre o grupo controle e tratado. Isso demonstra que fatores externos, como pluviosidade, temperatura e umidade relativa podem ter afetado sua eficácia a campo. Nesse trabalho, também foi avaliada a eficácia do nematicida biológico Rizotec® formulado com clamidósporos do fungo nematófago Pochonia chlamydosporia (isolado Pc 10). Foram utilizadas diferentes doses de Rizotec® equivalentes a (1x105 , 2,5x105 , 5x105 , 7,5x105 e 1x106 ) clamidósporos. Após 7, 14 e 21 dias de interação, os ovos foram classificados quanto aos efeitos ovicidas tipos 1, 2 e 3. Somente as doses de 14,25 mg e 19,0 mg de Rizotec® apresentaram diferenças (p<0,05) com relação ao efeito lítico tipo 3 com 21 dias de interação em relação ao grupo controle. Foi observada uma tendência de aumento nas percentagens (17,0%, 26,33%, 28,33%, 47,83% e 65,66%) de ovos com esse efeito ao se elevar a dose do produto. As curvas de regressão para as doses testadas mostraram uma tendência de aumento do efeito lítico tipo 3 com o aumento do tempo de interação. Os resultados apresentados neste trabalho confirmam a eficácia dos fungos Arthrobotrys cladodes var. macroides (isolado CG719) e Pochonia chlamydosporia (isolado Pc 10) no controle de formas infectantes e ovos de nematóides gastrintestinais de equinos in vitro.

Gastrointestinal parasitic nematodes are responsible for generating significant economic losses for the world equideoculture. The emergence of resistance to anthelmintics has become frequent and biological control through the use of nematophagous fungi has become a promising alternative to assist in the prophylaxis of gastrointestinal helminths in horses. In this work, the efficacy of the nematophagous fungus Arthrobotrys cladodes var. macroides (CG 719) in predating infective larvae (L3) of cyathostomins in vitro, as well as their predatory activity after passing through the equine gastrointestinal tract (GIT). Tests in vitro and after passing through the GIT showed reductions (p <0.05) of 56.6% and 31.42%, respectively, of L3, confirming the ability of A. cladodes to control cyathostomin L3 and support the passage through the GIT. These results encouraged the evaluation of the effectiveness of the fungus A. cladodes in tests with horses in the field. In this test, the fungus was used in formulations based on sodium alginate supplied twice weekly, for 10 months. Although the results showed a reduction in the egg count per gram of feces, as well as in larvae recovered from coprocultures and pasture, no significant differences were observed between the control and treated groups. This demonstrates that external factors such as rainfall, temperature and relative humidity can affect its effectiveness in the field. In this work, the effectiveness of the biological nematicide Rizotec® (1.9 mg, 4.75 mg, 9.5 mg, 14.25 mg and 19.0 mg) formulated with chlamydospores of the nematophagous fungus Pochonia chlamydosporia (isolated Pc 10) was also evaluated, in destroying Parascaris equorum eggs in vitro. The eggs were classified according to the ovicidal effects (types 1, 2 and 3) caused by the fungus in 7, 14 and 21 days of interaction. Only the doses of 14.25 mg and 19.0 mg of Rizotec® showed differences (p <0.05) in relation to the type 3 lytic effect with 21 days of interaction in relation to the control group. There was a tendency to increase the percentages (17,0%, 26,33%, 28,33%, 47,83% and 65,66%) of eggs with this effect when increasing the product dose. The regression curves for the tested doses showed a tendency to increase the type 3 lytic effect with increasing interaction time. The results presented in this work confirm the efficacy of the fungi A. cladodes and P. chlamydosporia (isolated Pc10) in the control of infectious forms and eggs of gastrointestinal nematodes in horses in vitro

ASSOCIAÇÃO ENTRE OS FUNGOS NEMATÓFAGOS Monacrosporium sinense E Arthrobotrys musiformis NO CONTROLE BIOLÓGICO DE NEMATOIDES GASTROINTESTINAIS DE EQUINOS

Os nematoides gastrointestinais que parasitam os equinos são responsáveis por causar morbidade e mortalidade dos animais, ocasionando em prejuízos ao produtor. A constatação do surgimento resistência por parte das populações destes parasitas à anti-helmínticos empregados em seu controle, aponta para a necessidade de desenvolvimento de métodos alternativos de controle, com intuito de diminuir a frequência de utilização destes produtos e por consequência diminuir a velocidade ocorrência desse processo. Portanto, o potencial de se empregar fungos nematófagos, e a ausência de registros de efeitos nocivos aos animais e ao meio ambiente, tornam esses organismos alvo de interesse de mais estudos. O objetivo do presente estudo foi avaliar, pela primeira vez, a eficácia de predação e viabilidade dos fungos nematófagos Monacrosporium sinense (isolado SF53) e Arthrobotrys musiformis (isolado A144), associados e separadamente, sobre larvas infectantes de ciatostomíneos, após a passagem de peletes de matriz de alginato de sódio contendo micélios dos fungos, pelo trato gastrointestinal de equinos. Também foram investigadas a capacidade de predação desses fungos em teste in vitro. Foi constatada a eficácia de predação dos fungos no experimento in vitro e as formulações peletizadas contendo a estrutura fúngica resistiram a passagem pelo trato gastrointestinal preservando a capacidade de crescimento, formação de armadilhas e de predação dos fungos. O uso combinado de M. sinense e A. musiformis apresentou maior eficácia no controle das larvas infectantes de ciatostomíneos que acometem os equinos, quando comparados ao uso isoladamente desses fungos, tanto no experimento in vitro, como no teste de passagem pelo trato gastrointestinal. A associação dos fungos apresentou no experimento in vitro um percentual de redução larval de 84,3%, enquanto que o fungo A. musiformis separadamente apresentou uma redução de 77,3% e o fungo M. sinense 69,7% de redução larval. Sendo assim, seu uso associado se apresenta como uma promissora alternativa para o controle biológico desses organismos, reduzindo a carga parasitária de larvas em fase de vida livre no ambiente de criação dos equinos.

Gastrointestinal nematodes that parasitize horses are responsible for causing morbidity and mortality in animals, causing losses to the producer. The confirmation of the emergence of resistance by the populations of these parasites to anthelmintics used in their control, points to the need to develop alternative methods of control, in order to reduce the frequency of use of these products and consequently decrease the speed of occurrence of this process. Therefore, the association of fungi showed in the in vitro experiment a percentage of larval reduction of 84.3%, while the fungus A. musiformis potential of using nematophagous fungi, and the absence of a record of harmful effects in the animals and the environment, make these organisms the target of further studies. The objective of the present study was to evaluate, for the first time, the predation efficacy and viability of the predatory nematophagous fungi Monacrosporium sinense (isolated SF53) and Arthrobotrys musiformis (isolated A144), associated and separately, on infective larvae of ciatostomines, after the passage of pellets of sodium alginate matrix containing mycelia of fungi, through the gastrointestinal tract of horses. The ability of these fungi to predate in vitro testing was also investigated. The effectiveness of predation of fungi in the in vitro experiment was verified and the pelletized formulations containing the fungal structure resisted the passage through the gastrointestinal tract preserving the growth capacity, formation of traps and predation of the fungi. The combined use of M. sinense and A. musiformis showed greater efficacy in the control of infective larvae of cyiatostomines that affect horses, when compared to the isolated use of these fungi, both in the in vitro experiment and in the passage test through the gastrointestinal tract. separately showed a reduction of 77.3% and the fungus M. sinense 69.7% of larval reduction. Therefore, its associated use presents itself as a promising alternative for the biological control of these organisms, reducing the parasitic load of larvae in the free-living phase in the environment where horses are raised.

Efeito da pulverização de conídios de Arthrobotrys conoides na pastagem no controle da verminose em ovinos / Effect of spraying Arthrobotrys conoides conidia on pastures to control nematode infection in sheep

Este experimento foi realizado para avaliar o efeito da pulverização de conídios do fungo Arthrobotrys conoides (GenBank ID: JN191309) sobre a pastagem visando o controle biológico da verminose em cordeiros. Uma área de 12.000 m2 foi dividida em seis piquetes de 2.000 m2. Dois grupos foram formados: grupo tratamento constituído por três piquetes em que foram pulverizados semanalmente conídios na pastagem na quantidade de 7,5 x 104 conídios m-2. E o grupo controle, onde não foi pulverizado conídios na pastagem que era constituída por aveia preta (Avena strigosa Schreb) e azevém anual (Lolium multiflorum Lam.). Tanto nos piquetes controle quanto nos piquetes que receberam tratamento foram colocados cinco cordeiros naturalmente infectados por helmintos gastrintestinais. A avaliação do controle biológico foi realizada no período de maio a setembro de 2009, por meio da contagem de larvas infectantes (L3) na pastagem; taxa de infecção dos animais monitorados pela contagem de ovos de helmintos por grama de fezes (OPG) e o ganho de peso dos animais. O impacto negativo no solo foi avaliado pelo número de nematoides e fito nematoides de vida livre. O número de larvas infectantes(L3) nas pastagens tratadas reduziu significativamente no final dos meses de agosto e setembro. No final do experimento, houve redução de 52,4% de larvas infectantes na pastagem que foi pulverizado os conídios quando comparado ao grupo controle, diferindo estatisticamente entre si. Durante o período avaliado a redução média na contagem de OPG nos animais foi de 49,1% na pastagem tratada quando comparado ao controle. Os gêneros de helmintos predominantes foram Haemonchus e Trichostrongylus. O ganho de peso dos animais e o número de nematoides do solo não diferiram estatisticamente.(AU)

The effect of spraying pastures with conidia of the fungus Arthrobotrys conoides (GenBank ID: JN191309) for the biological control of gastrointestinal nematode infection-pressure in lambs was assessed. A 12,000-m2 area was divided into six 2,000-m2 fenced areas. Two groups were formed: the treatment group comprised three fenced areas, where conidia were sprayed on the pasture weekly at 7.5 x 104 conidia m-2; and the control group, also comprising three fenced areas, where conidia were not sprayed. The pastures included lopsided oat (Avena strigosa Schreb) and Italian ryegrass (Lolium multiflorum Lam.). Five naturally infected lambs, were placed between July and September in each fenced area. The effectiveness of biological control was assessed between May and September 2009 by counting the number of third-stage larvae (L3) in each pasture. Additionally, the egg output of the sentinel animals was monitored by counting the number of gastrointestinal nematode eggs per gram of faeces (EPG) and the average weight gain was measured. The negative impact on soil was assessed by counting the number of free-living nematodes and phytonematodes. The number of gastrointestinal nematode larvae in the treated pastures decreased. This was significant at two examination days (end August and end of September). At the end of the study, conidia treatment reduced gastrointestinal nematodes on pasture by 52.4% compared to the control group; this difference was statistically significant. Regardingthe whole examination period the average reductions in EPG in treatment group was 49.1% comparedto the control group. The most common genera of gastrointestinal nematodes were Haemonchus andTrichostrongylus. Animal weight gain and soil nematode counts did not differ significantly.(AU)

Fungos nematófagos no controle biológico de nematoides parasitas gastrintestinais de bovinos

Nematoides parasitas gastrintestinais são responsáveis por perdas significativas nos processos produtivos de ruminantes, principalmente em sistemas extensivos de produção de bovinos. A resistência dos helmintos a anti-helmínticos tem se tornado frequente e o controle biológico pela utilização de fungos nematófagos é uma promissora alternativa na profilaxia das helmintoses gastrintestinais de bovinos. Fungos nematófagos ovicidas e predadores possuem mecanismos de ação distintos, assim, quando utilizados em combinação, podem apresentar ação complementar e sinérgica no controle biológico de helmintos. Os objetivos do presente trabalho foram: avaliar os fungos Arthrobotrys cladodes (isolado CG719), Duddingtonia flagrans (isolado AC001) e Pochonia chlamydosporia (isolado VC4) em diversas condições de temperatura, quanto ao crescimento micelial, à produção de clamidósporos e à atividade nematicida sobre larvas infectantes (L3) de helmintos parasitas de bovinos; avaliar a compatibilidade de crescimento conjunto entre o fungo predador A. cladodes e o fungo ovicida P. chlamydosporia; avaliar a viabilidade e a atividade nematicida de A. cladodes e de P chlamydosporia, isoladamente e associados em matriz de alginato de sódio, após passagem pelo trato gastrintestinal de bovinos; e avaliar a ação conjunta e isolada de A. cladodes e P chlamydosporia na redução da carga parasitária de bovinos criados em pastagens. A. cladodes, D. flagrans e P. chlamydosporia apresentaram níveis variados de crescimento micelial, atividade nematicida e produção de clamidósporos nas temperaturas de 15, 20, 25, 30 e 35 º C. Os testes de antagonismo em confrontação direta, de antibiose e do efeito de metabólitos voláteis entre P. chlamydosporia e A. cladodes indicaram a viabilidade de crescimento em conjunto destes fungos. As formulações peletizadas de alginato de sódio contendo P. chlamydosporia e A. cladodes resistiram à passagem pelo trato gastrintestinal de bovinos e os fungos mantiveram a viabilidade de crescimento e predação de helmintos. O uso combinado de A. cladodes e P. chlamydosporia mostrou-se eficaz no controle biológico de helmintos parasitas gastrintestinais de bovinos e apresentou maior atividade nematicida que os mesmos fungos utilizados isoladamente. A carga parasitária foi menor e o ganho de peso foi maior (p 0,05) nos grupos de bovinos tratados com fungos nematófagos. Portanto, a utilização de A. cladodes e P. chlamydosporia mostrou-se promissora no controle de helmintoses em bovinos criados em pastagens.

Gastrointestinal parasitic nematodes are responsible for significant losses in ruminant production processes, especially in extensive cattle production systems. Helminth resistance to anthelmintics has become frequent and biological control by the use of nematophagous fungi is a promising alternative in the prophylaxis of bovine gastrointestinal helminthiasis. Ovicidal and predatory nematophagous fungi have distinct mechanisms of action, so when used in combination they may have complementary and synergistic action in the biological control of helminths. The objectives of the present work were: to evaluate the fungi Arthrobotrys cladodes (CG719 isolate), Duddingtonia flagrans (AC001 isolate) and Pochonia chlamydosporia (VC4 isolate) under different temperature conditions, for mycelial growth, chlamydospore production and nematicidal activity against bovine helminth infective larvae; to evaluate the compatibility of joint growth between the predatory fungus A. cladodes and the ovicidal fungus P. chlamydosporia; to evaluate the viability and nematicidal activity of A. cladodes and P. chlamydosporia, alone and associated in sodium alginate matrix, after passage through the gastrointestinal tract of cattle; and evaluate the joint and isolated action of A. cladodes and P. chlamydosporia in reducing the parasitic load of grazing cattle. A. cladodes, D. flagrans and P. chlamydosporia presented varying levels of mycelial growth, nematicidal activity and chlamydospore production at temperatures of 15, 20, 25, 30 and 35 º C. Tests of direct confrontation antagonism, antibiosis and the effect of volatile metabolites between P. chlamydosporia and A. cladodes indicated the viability of these fungi to grow together. Pelletized sodium alginate formulations containing P. chlamydosporia and A. cladodes resisted passage through the bovine gastrointestinal tract and the fungi maintained the viability of growth and predation of helminths. The combined use of A. cladodes and P. chlamydosporia was effective in the biological control of bovine gastrointestinal parasitic helminths and showed higher nematicidal activity than the same fungi used alone. The parasite load was lower and the weight gain was higher (p 0.05) in the groups of cattle treated with nematophagous fungi. Therefore, the use of A. cladodes and P. chlamydosporia was promising to control helminthiasis in grazing cattle.

Fungo nematófago Arthrobotrys musiformis como controlador biológico de nematoides de equinos

Arthrobotrys musiformis é um fungo formador de armadilhas do tipo redes adesivas tridimensionais, capazes de capturar e predar larvas infectantes (L3) de nematoides. Nos equinos, os nematoides gastrintestinais podem levar a condições patológicas que interferem no desenvolvimento corporal e podem, inclusive, levar os animais a óbito. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar a eficácia do fungo nematófago Arthrobotrys musiformis (isolado A144) no controle de L3 de nematoides estrongilídeos que acometem equinos. Inicialmente foi analisado a capacidade do isolado A144 de passar pelo trato gastrintestinal de equinos e manter a sua atividade predatória sobre larvas infectantes de ciatostomíneos. Coletas de fezes foram feitas 12h, 24, 36, 48 e 72h após a administração de péletes contendo micélio fúngico. Os péletes recuperados na última coleta foram colocados em placas de Petri contendo meio ágar-ágar 2% para germinarem, e larvas infectantes de ciatostomíneos foram adicionadas, para avaliar a atividade do fungo sobre essas. Paralelamente, placas contendo o isolado A144 crescido a partir de colônias mantidas em laboratório também receberam L3 de ciatostomíneos e ao final de sete dias de interação, foram obtidos os percentuais de redução de 96.61% e 96.18% dos grupos contendo o fungo mantido em laboratório e o fungo recuperados dos péletes, respectivamente, demonstrando que o fungo é capaz de passar pelo trato gastrintestinal de equinos e manter a sua capacidade predatória. Diferentes doses de conídios do isolado A144 foram avaliadas em placas, em coproculturas e em bolos fecais depositados em pastagem e o que se observou é que a redução de L3 nas dosagens de conídios testadas apresentou pouca variação entre elas, mas todas apresentaram diferença estatisticamente significativa quando comparadas ao grupo controle. As doses iniciais de esporos avaliadas neste trabalho não foram determinantes na capacidade do isolado A144 em reduzir o número de larvas infectantes de estrongilídeos, tanto em condições controladas, quanto em condições à campo. O isolado A144 do fungo nematófago Arthrobotrys musiformis é capaz de manter sua viabilidade após passagem pelo trato gastrintestinal de equinos e predar larvas infectantes de estrongilídeos. Os resultados encontrados indicam que o fungo Arthrobotrys musiformis (isolado A144) é uma alternativa para o controle das fases de vida livre dos estrongilídeos nematoides de equinos.

Arthrobotrys musiformis is a trap-forming fungus of three-dimensional adhesive nets, capable of capturing and predating infective (L3) nematode larvae. In horses, gastrointestinal nematodes can cause pathological conditions that interfere with body development and can even cause death. The objective of this work was to evaluate the efficacy of the nematophagous fungus Arthrobotrys musiformis (isolate A144) in the control of L3 of strongylid nematodes of horses. Initially, the ability of the isolate A144to pass through the gastrointestinal tract of horses and to maintain its predatory activity on infective Cyathostomin larvae was analyzed. The mycelium of the fungus was incorporated into pellets of sodium alginate and administered orally, in a single dose, to horses. Fecal collections were performed 12h, 24, 36, 48 and 72h after administration of pellets. Pellets recovered in the last collection were placed in Petri dishes containing 2% agar-agar medium to germinate, and infective larvae of cyathostomins were added to evaluate fungus activity on them. In parallel, plaques containing the A144 isolate grown from colonies kept in the laboratory also received L3 from cyathostomins and at the end of seven days of interaction, reduction rates of 96.61% and 96.18% of the L3 in group containing the fungus were kept in the laboratory and the fungus recovered from the pellets, respectively, demonstrating that the fungus is able to pass through the gastrointestinal tract of horses and maintain its predatory capacity. Different doses of conidia of isolate A144 were evaluated in plaques, coprocultures and fecal pats deposited on pasture and was observed that the reduction of L3 in the dosages of conidia tested showed little variation among them, but all presented a statistically significant difference when compared to the control group. The initial doses of spores evaluated in this work were not determinant in the ability of isolate A144 to reduce the number of infectious larvae of strongyles under both controlled and field conditions. The A144 isolate of the nematophagous fungus Arthrobotrys musiformis is able to maintain its viability after passage through the gastrointestinal tract of horses and predate infectious larvae of strongyles. The results indicate that the fungus Arthrobotrys musiformis (isolate A144) is an alternative to the control of free life stages of equine nematodes strongyles.

First report of interaction of nematophagous fungi onLibyostrongylus douglassii (Nematoda: Trichostrongylidae)

Libyostrongylus douglassii is a gastrointestinal nematode parasite of ostriches that can cause up to 50% mortality in young birds. The objective of this study was to compare the predatory capacity of two isolates of the predatory fungi Duddingtonia flagrans(AC001 and CG722 isolates) and one of Arthrobotrys cladodes (CG719) on infective larvae (L3) of L. douglassii under laboratory conditions, in 2% water-agar medium. The results showed that the fungi tested were effective in preying upon the L3 of L. douglassii (P 0.05), compared with the control group. However, there was no difference in predatory capacity between the fungi tested (P > 0.05) during the seven days of experimental testing. In comparison with the control, without fungus, there were significant decreases (P 0.05) of 85.2% (AC001), 81.2% (CG722) and 89.2% (CG719) in the average numbers of L3 of L. douglassii recovered from treatments with the isolates tested. In the present study, the three isolates of the predatory fungi D. flagrans (AC001 and CG722) andA. cladodes (CG719) were efficient at in vitro destruction of the L3 of L. douglassii.

Libyostrongylus douglassii é um nematóide parasito gastrintestinal de avestruzes que pode causar até 50% de mortalidade em aves jovens. O objetivo deste trabalho foi comparar a capacidade predatória de dois isolados de fungos predadores Duddingtonia flagrans (isolados AC001 e CG722) e umArthrobotrys cladodes (CG719) sobre larvas infectantes (L3) de L. douglassii em condições laboratoriais, em meio ágarágua 2%. Os resultados demonstraram que os fungos testados foram eficientes em predar as L3 de L. douglassii (P 0,05) em relação ao grupo controle. Contudo, não foi observada nenhuma diferença na capacidade predatória entre os fungos testados (P > 0,05) durante os sete dias do ensaio experimental. Em comparação ao controle, sem fungo, houve uma redução significativa (P 0,05) de 85,2% (AC001); 81,2% (CG722) e 89,2% (C719) na média de L3 recuperadas nas placas do grupo tratado com os isolados testados. No presente trabalho, os três isolados de fungos predadores D. flagrans (AC001 e CG722) e A. cladodes (CG719) foram eficientes na destruição in vitro das L3 deL. douglassii.

First report of interaction of nematophagous fungi on Libyostrongylus douglassii (Nematoda: Trichostrongylidae) / Primeiro relato da interação de fungos nematófagos sobre Libyostrongylus douglassii (Nematoda: Trichostrongilidae)

Libyostrongylus douglassii is a gastrointestinal nematode parasite of ostriches that can cause up to 50% mortality in young birds. The objective of this study was to compare the predatory capacity of two isolates of the predatory fungi Duddingtonia flagrans(AC001 and CG722 isolates) and one of Arthrobotrys cladodes (CG719) on infective larvae (L3) of L. douglassii under laboratory conditions, in 2% water-agar medium. The results showed that the fungi tested were effective in preying upon the L3 of L. douglassii (P < 0.05), compared with the control group. However, there was no difference in predatory capacity between the fungi tested (P > 0.05) during the seven days of experimental testing. In comparison with the control, without fungus, there were significant decreases (P < 0.05) of 85.2% (AC001), 81.2% (CG722) and 89.2% (CG719) in the average numbers of L3 of L. douglassii recovered from treatments with the isolates tested. In the present study, the three isolates of the predatory fungi D. flagrans (AC001 and CG722) and A. cladodes (CG719) were efficient at in vitro destruction of the L3 of L. douglassii.

Libyostrongylus douglassii é um nematóide parasito gastrintestinal de avestruzes que pode causar até 50% de mortalidade em aves jovens. O objetivo deste trabalho foi comparar a capacidade predatória de dois isolados de fungos predadores Duddingtonia flagrans (isolados AC001 e CG722) e um Arthrobotrys cladodes (CG719) sobre larvas infectantes (L3) de L. douglassii em condições laboratoriais, em meio ágar­água 2%. Os resultados demonstraram que os fungos testados foram eficientes em predar as L3 de L. douglassii (P < 0,05) em relação ao grupo controle. Contudo, não foi observada nenhuma diferença na capacidade predatória entre os fungos testados (P > 0,05) durante os sete dias do ensaio experimental. Em comparação ao controle, sem fungo, houve uma redução significativa (P < 0,05) de 85,2% (AC001); 81,2% (CG722) e 89,2% (C719) na média de L3 recuperadas nas placas do grupo tratado com os isolados testados. No presente trabalho, os três isolados de fungos predadores D. flagrans (AC001 e CG722) e A. cladodes (CG719) foram eficientes na destruição in vitro das L3 de L. douglassii.

Controle biológico de nematoides gastrintestinais de bovinos através da utilização do fungo nematófago Arthrobotrys cladodes

A cada ano, a participação brasileira no comércio internacional vem crescendo, com destaque para a produção de carne bovina. As doenças parasitárias, principalmente as causadas por endoparasitas ocupam lugar de destaque dentre os fatores que interferem no desenvolvimento pleno da produção animal. Dentre as alternativas promissoras para o combate não químico de parasitos, pode-se destacar a utilização do controle biológico feito através de fungos nematófagos. O potencial antagônico do fungo Arthrobotrys cladodes var. macroides sobre larvas infectantes de nematoides parasitas gastrintestinais de bovinos foi avaliado por meio de microscopia eletrônica de varredura e foi realizado teste in vivo da resistência e viabilidade do fungo em uma formulação a base de alginato de sódio a passagem por via oral de bovinos. O fungo estudado apresentou alta produção de conídios e clamidósporos. Em teste de interação do fungo com os nematoides foi observada uma redução de 68,65% das larvas infectantes de nematóides nas placas de Petri do grupo tratado, em comparação com o controle. Sendo que a interação entre o fungo e os nematoides foi confirmada pela microscopia eletrônica de varredura. A observação das placas contendo as amostras de fezes coletadas após uma administração única por via oral de 100 gramas de péletes contendo o fungo A. cladodes mostrou que o mesmo foi capaz de sobreviver à passagem pelo trato gastrintestinal de ruminantes, crescer sobre o ágar, formar armadilhas e predar as larvas de terceiro estádio de parasitas gastrointestinais. Com o objetivo de avaliar a eficácia do fungo nematofago Arthrobotrys cladodes var. macroides no controle biológico de nematoides gastrintestinais de bovinos, doze bovinos mestiços holandês x zebu com sete a nove meses de idade, foram divididos aleatoriamente em dois grupos (grupo tratado e grupo controle) e distribuídos em piquetes de Brachiaria decumbens, naturalmente infestados com larvas de helmintos. Os animais do grupo tratado receberam 1g de pélete em matriz de alginato de sódio para cada 10 kg de peso vivo animal, contendo o fungo Arthrobotrys cladodes var macroides administrados duas vezes por semana conjuntamente com ração comercial. Já no grupo controle cada animal recebeu 1 g de pélete para cada 10 kg de peso vivo animal, sem micélio fúngico adicionado a ração. Amostras de fezes e pastagens foram coletadas quinzenalmente durante 12 meses. Os gêneros de nematoides mais prevalentes nas coproculturas foram Haemonchus sp., Cooperia sp. e Oesophagostomum sp. refletindo os resultados encontrados na forragem. A pastagem que continha os animais que receberam tratamento com o fungo apresentou redução de 59% e 52% de larvas recuperadas nas distâncias de 20cm e 40cm do bolo fecal, respectivamente . As médias mensais de ovos por grama de fezes e peso não diferiram significativamente (p>0,05) entre o grupo tratado e controle. Amostras de fezes e solo de ambos os grupos foram colonizadas pelo fungo A. cladodes e por outros fungos. A administração do micélio de Arthrobotrys cladodes var macroides por meio de matriz de alginato de sódio, duas vezes na semana, diminuiu a infestação de larvas na pastagem, indicando que esse fungo pode ser um controlador biológico promissor no combate das formas infectantes de nematoides presentes no meio ambiente.

Every year, Brazilian participation in international trade has been increasing, with emphasis on beef production. The parasitic diseases, especially those caused by endoparasites occupy a prominent place among the factors that interfere in the full development of animal production. Among the promising alternatives for the nonchemical control of parasites, one can highlight the use of biological control made by nematophagous fungi. The antagonistic potential of the fungus Arthrobotrys cladodes var. macroides on infective larvae of bovine gastrointestinal parasitic nematodes was evaluated by scanning electron microscopy and an in vivo test of the resistance and viability of the fungus in a formulation based on sodium alginate was carried out orally by bovines. The fungus studied showed high production of conidia and chlamydospores. In a test of interaction of the fungus with the nematodes, a 68.65% reduction of the nematode infecting larvae in the Petri dishes of the treated group was observed, in comparison with the control. The interaction between the fungus and the nematodes was confirmed by scanning electron microscopy. Observation of plates containing feces collected after oral administration of 100 grams of pellets containing the A. cladodes fungus showed that it was able to survive passage through the gastrointestinal tract of ruminants, grow on the agar, form traps and predatory larvae of the third stage of gastrointestinal parasites. In order to evaluate the efficacy of the nematophagous fungus A. cladodes var. macroides of the bovine gastrointestinal nematodes, twelve crossbred Dutch - zebu cattle with seven to nine months of age were randomly divided into two groups (treated group and control group) and distributed in Brachiaria decumbens pickets, naturally infested with larvae of helminths. The animals in the treated group received 1g of sodium alginate matrix pellet for every 10 kg of animal live weight containing the fungus A. cladodes var macroides administered twice a week in conjunction with commercial feed. In the control group, each animal received 1 g of pellet for every 10 kg of animal live weight, without fungal mycelium added to the feed. Samples of feces and pastures were collected biweekly for 12 months. The most prevalent nematode genera in the coprocultures were Haemonchus sp., Cooperia sp. and Oesophagostomum sp. reflecting the results found in forage. The pasture that contained the animals that received treatment with the fungus presented reduction of 59% and 52% of larvae recovered at distances of 20cm and 40cm of the fecal mass, respectively. The mean monthly egg per gram stool and weight did not differ significantly (p> 0.05) between the treated and control groups. Feces and soil samples from both groups were colonized by the fungus A. cladodes and by other fungi. Administration of the mycelium of Arthrobotrys cladodes var macroides by means of a sodium alginate matrix twice weekly reduced the infestation of larvae in the pasture, indicating that this fungus may be a promising biological controller in the control of the nematode infecting forms present in the environment.

Fungos Helmintófagos Duddingtonia flagrans, Monacrosporium thaumasium e Arthrobotrys robusta no Controle de Oesophagostomum spp. parasito intestinal de suinos

A produção de suínos em sistemas semi-intensivo e extensivo constitui uma alternativa aos sistemas tradicionais de criação, entretanto, a infecção por helmintos parasitas pode ser favorecida. Dentre as parasitoses que acometem os suínos, se destacam os helmintos pertencentes aos gêneros Ascaris, Strongyloides, Hyostrongylus e Oesophagostomum, que apresentam suas formas infectantes presentes no ambiente, causando perdas econômicas no rebanho. Diante disso, esse trabalho teve como objetivos: Avaliar a eficácia in vitro da formulação fúngica contendo o fungo helmintófago Duddingtonia flagrans sobre larvas infectantes de Oesophagostomum spp.; Observar a dinâmica de eliminação de esporos do fungo helmintófago Duddingtonia flagrans e avaliar a viabilidade após a passagem pelo trato gastrintestinal de suínos; Avaliar a eficácia in vitro dos isolados dos fungos helmintófagos Duddingtonia flagrans, Monacrosporium thaumasium e Arthrobotrys robusta, sobre larvas infectantes de Oesophagostomum spp. O trabalho foi dividido em dois capítulos, onde o primeiro verificou a eficácia in vitro dos isolados de Duddingtonia flagrans, Monacrosporium thaumasium e Arthrobotrys robusta, sobre larvas infectantes de Oesophagostomum spp., onde todos os isolados demonstraram capacidade predatória eficaz sobre larvas infectantes. O segundo capitulo foi subdivido em três ensaios, que foi verificado a predação in vitro da formulação fúngica sobre larvas infectantes de Oesophagostomum spp. em placas de Petri, em coproculturas, e após a passagem pelo trato gastrintestinal de suínos. Ambos os ensaios obtiveram resultados satisfatórios, quanto a predação das larvas infectantes, e os isolados fúngicos suportaram a passagem pelo trato gastrintestinal, sem perder a capacidade de predação sobre as larvas infectantes. Os resultados apresentados nesse trabalho demonstram alta eficiência da formulação fúngica feita a partir do isolado de Duddingtonia flagrans em farelo de arroz, e dos isolados Monacrosporium thaumasium e Arthrobotrys robusta na predação de larvas infectantes de Oesophagostomum spp., podendo xii ser uma alternativa no controle de formas infectantes de nematoides parasitas de suínos.

The pigs production in semi-intensive and extensive systems constitute an alternative to traditional farming systems, however, infection with parasitic helminths can be favored. Among the parasites that affect pigs, stand out helminths belonging to the genera Ascaris, Strongyloides, Hyostrongylus and Oesophagostomum, which present their infective forms present in the environment causing economic losses in the herd. Thus, this study aimed: To evaluate the in vitro efficacy of fungi isolated from helmintófagos Duddingtonia flagrans on infective larvae of the Oesophagostomum spp.; Observing the dynamics of elimination of spores and assessing the viability after passage through the gastrointestinal tract of pigs; and to assess the in vitro efficacy of fungi isolated helmintófagos Duddingtonia flagrans, Monacrosporium thaumasium and Arthrobotrys robust on infective larvae of the Oesophagostomum spp. The study was divided in two chapters, where the first verified in vitro efficacy of isolated Duddingtonia flagrans, Monacrosporium thaumasium and Arthrobotrys robust on infective larvae of Oesophagostomum spp., where all isolates showed predatory capacity. The second chapter subdivided into three tests, to verified in vitro predation of fungal formulation rises infective larvae of Oesophagostomum spp. in Petri dishes in fecal cultures and after passage through the gastrointestinal tract of pigs. Both assays obtained satisfactory results, and predation of infective larvae, and supporting the passage through the gastrointestinal tract without losing predation capacity. The results presented in this study demonstrate high efficiency of the fungal formulation made from the isolated Duddingtonia flagrans in rice bran, and isolated Monacrosporium thaumasium and Arthrobotrys robust in predation infective larvae of the Oesophagostomum spp., could be an alternative to control infective forms of nematode parasites pigs.

CONTROLE BIOLÓGICO IN VITRO COM FUNGOS NEMATÓFAGOS SOBRE ESTRONGILÍDEOS (Strongilydae) DE LHAMAS (Lama glama) PROVENIENTES DO ZOOLÓGICO DE MARECHAL FLORIANO-ES

As lhamas são mamíferos ruminantes pertencentes à família dos camelídeos, que sofrem também com as parasitoses gastrintestinais. Dessa forma, estudos in vitro em condições laboratoriais foram realizados para avaliar a atividade predatória de isolados fúngicos no controle biológico in vitro de nematoides parasitos gastrintestinais de Lhamas, provenientes do zoológico de Marechal Floriano, Espírito Santo, Brasil. Foram utilizadas as espécies Duddingtonia flagrans (AC001 e CG768); Arthrobotrys conoides (I40); Arthrobotrys robusta (I31); Monacrosporuim sinense (SF53); e Monacrosporuim thaumasium (NF34) no experimento crescidas em meio de cultura ágar-água 2% (AA2%) em placas de petri de 9,0 cm de diâmetro. Após sete dias de interação foi observado que todos os isolados fúngicos foram eficientes na captura e destruição das L3, contudo não diferindo sua atividade predatória entre si (p>0,05), mas diferindo do grupo controle. Ao final do experimento os seguintes percentuais de redução foram obtidos 87,56% (AC001); 90,45% (CG768); 93,07% (I40); 94,58% (I31); 90,28% (SF53); 92,30% (NF34) em relação ao grupo controle. Conclui-se que todos os isolados fúngicos foram eficientes no controle biológico in vitro de L3 de nematoides de Lhamas. Contudo, maiores estudos, principalmente a campo são necessários para se obter um controle mais efetivo das formas de vida livre destes parasitos em Lhamas criadas em zoológico de Marechal Floriano, ES.

The llamas are mammals ruminants belonging to the family of camelids, which also suffer from gastrointestinal parasites. Thus, in vitro studies in laboratory conditions were conducted to evaluate the predatory activity of fungal isolates in biological control in vitro gastrointestinal nematode parasites of Llamas, from the Marechal Floriano Zoo, Espírito Santo, Brazil. Species Duddingtonia flagrans (AC001 and CG768); Arthrobotrys conoides (I40); Arthrobotrys robust (I31); Monacrosporuim sinense (SF53); and Monacrosporuim thaumasium (NF34) were used in the experiment grown on agar-water culture 2% (AW2%) in petri dishes 9.0 cm in diameter. After seven days of interaction was observed that all fungal isolates were efficient in the capture and destruction of L3. However the predatory activity between itself (p>0,05), but differing from the control group. At the end of the experiment the following reduction percentages were obtained 87.56% (AC001); 90.45% (CG768); 93.07% (I40); 94.58% (I31); 90.28% (SF53); 92.30% (NF34) in the control group. It may be concluded that all fungal isolates were effective in vitro in biological control of nematodes L3 llamas. However, more studies are required to obtain a more effective control of free life forms of these parasites in Llamas created in Marechal Floriano Zoo, ES.

Diversidade genética de cepas do fungo Arthrobotrys spp. predador de nematóides por RAPO e PCR-RFLP do rDNA

A diversidade genética de seis cepas de Arthrobotrys conoides, três de A. oligospora e sete de A. robusta foi avaliada por meiode RAPO. A amplificação resultou em um total de 107 fragmentos de DNA polimórficos, utilizando-se 11 oligonucleotídeos. Asdistâncias genéticas variaram de 9 a 83%, quando analisadas em conjunto, demonstrando grande diversidade genética dascepas dessas três espécies. Por meio dessas análises, pôde-se diferenciar as cepas A51 (A.robusta) e A78 (A.conoides) dassuas respectivas espécies. Além desses, a cepa A183 (A.oligospora) também se diferenciou de sua espécie agrupando-secom cepas de A. robusta. A variação dentro do espaçador interno transcrito (ITS) do rDNA de seis cepas de A.conoides e setede A.robusta foi analisada por PCR seguida pela análise de "restriction fragment length polimorphism" (RFLP). Duas cepasfúngicas, A51 e A78, apresentaram polimorfismo de tamanho de fragmentos dentro de suas respectivas espécies. Os produtosda amplificação da região ITS foram hidrolisados com diferentes endonucleases de restrição. Análises de agrupamento,baseadas nos fragmentos de DNA de restrição, separaram as cepas em três distintos grupos: o Grupo 1, que contém aquelaspertencentes à espécie A.conoides, exceto a cepa A78; o Grupo 2, que contém as cepas da espécie A. robusta, exceto a A51; eo Grupo 3, formado pelas cepas A78 e A51, sugerindo uma nova análise na sua

CONTROLE BIOLÓGICO DE NEMATOIDES GASTRINTESTINAIS DE BOVINOS POR MEIO DA ASSOCIAÇÃO DE FUNGOS HELMINTÓFAGOS E PESQUISA DE PARASITOSES INTESTINAIS EM HUMANOS NA ZONA DA MATA DE MINAS GERAIS

O Brasil possui o segundo maior rebanho efetivo do mundo, com cerca de 200 milhões de cabeças. Porém, as helmintoses gastrintestinais de ruminantes são fatores de grande impacto na bovinocultura. O controle biológico utilizando fungos nematófagos surge como uma alternativa promissora no combate das helmintoses. Três isolados dos fungos nematófagos, Duddingtonia flagrans (AC001) Pochonia chlamydosporia (VC4) e Arthrobotrys robusta (I31) foram avaliados em condições laboratoriais quanto a capacidade de predar larvas infectantes. Péletes foram confeccionados contendo os 3 isolados e separados 2 grupos composto por 15 placas de Petri contendo AA2%. Foram adicionados 75 péletes, distribuídos sobre as placas e incubadas à 25o C. Cerca de 3000 larvas de Haemonchus sp, Cooperia sp. e Oesophagostomum sp. foram gotejadas sobre as placas, mantidas em estufa à 25o C e observadas diariamente, por 5 dias. Como controle, também foram gotejadas aproximadamente 3000 larvas infectantes dos mesmos nematoides em placas sem fungo. As larvas livres de predação foram recuperadas a partir do método de Baermann. Observou-se um percentual de redução na recuperação das larvas de 94 % no grupo tratado em relação ao grupo controle (p<0,01), mostrando serem eficientes. Em seguida os mesmos isolados foram avaliados à campo. Doze animais foram utilizados, sendo previamente vermifugados com anti-helmíntico para bovinos e pesados, em seguida foram separados em dois grupos. No primeiro grupo, cada animal foi tratado com aproximadamente 2 g de péletes para cada 10 kg de animal, contendo os mesmos fungos associados, administrados 2 vezes por semana conjuntamente com ração comercial. No grupo controle cada animal recebeu 2 g de péletes sem micélio adicionados a ração. Durante todo período experimental, os animais do grupo tratado mantiveram contagem de ovos por gramas de fezes significativamente menor (p<0,01) em relação aos animais do ixgrupo controle, com uma redução de 91,8%. A redução do número de larvas infectantes recuperadas das pastagens foi de 27,5 % na distância de 0-20 cm e de 26,7 % na distância de 0-40 cm dos bolos fecais. A associação de fungos nematófagos fornecida em matriz de alginato de sódio foi eficaz no controle dos nematoides Haemonchus sp., Cooperia sp. e Oesophagostomum sp. por diminuir a reinfecção devido a ação antagônica dos fungos sobre larvas infectantes disponíveis nas pastagens. Infecções parasitárias acometem não só animais como também seres humanos, tendo elevada prevalência em países subdesenvolvidos. Elas são responsáveis por quadros clínicos variáveis podendo estar associadas à diarréia crônica e à desnutrição, o que pode comprometer o desenvolvimento de indivíduos de diferentes faixas etárias. Este trabalho também tem por objetivo avaliar a prevalência de parasitoses intestinais em pacientes atendidos em um Hospital localizado na Zona da Mata de Minas Gerais no período de maio de 2007 a fevereiro de 2015. Os exames de fezes foram realizados através da técnica de Hoffman, Pons e Janer (HPJ). A prevalência das parasitoses intestinais de um total de 1.832 amostras foi de 13,85%. Entre as mulheres, 8,40% estavam parasitadas e 5,45% nos homens. Houve associação do número de parasitoses intestinais quando comparados com fatores socioeconômicos, sendo que 68,3% dos indivíduos positivos para alguma parasitose possuía renda mensal menor que um salário mínimo. A alta prevalência de enteroparasitoses no Brasil deve-se entre outros fatores, o difícil acesso ao saneamento básico e a falta de programas de educação sanitária

Brazil has the second most effective herd in the world, with around 200 million heads. Since 2004, the country took the lead in exports, sales over 180 countries. However, the gastrointestinal helminths of ruminants are major impact on cattle factors. Biological control using nematophagous fungi appears as a promising alternative to combat the gastrointestinal helminth infections from ruminants. Three strains of fungi nematophagous, Duddingtonia flagrans (AC001), Pochonia chlamydosporia (VC4) and Arthrobotrys robust (I31)) were evaluated under laboratory conditions as the ability to avoid infective. Pellets were prepared containing the 3 isolated, which were separated in 2 groups consisting of 15 Petri plates containing AA2%. 75 pellets were added, distributed on the plates, incubated at 25 °C. Approximately 3000 larvae of Haemonchus sp., Cooperia sp. and Oesophagostomum sp. were dripped onto the plates, kept in an oven at 25 °C and observed daily for 5 days. As a control technique, it was also dripped about 3000 infective larvae of nematodes in plates without fungus. The free predation larvae were recovered from the Baermann method. There was a reduction in the percentage recovery of the larvae of 94% in the treated group compared to the control group (p<0.01), showing efficient. Then, the same isolates were evaluated in field. Twelve animals were used, previously vaccinated with anthelmintic, weighed and then separated into two groups. Each animal in the first group was treated with approximately 2 grams of pellet per 10 kg of body, containing the administered fungi associated twice a week, together with the commercial feed. Each animal in the control group received 2 grams of mycelium pellets without the fungi association added to feed. Throughout the test period, the animals of the treated group remained egg counts per gram of feces significantly lower (p<0.01) compared to the control group animals, reduction of 91.8%. The reduction in the number of infective larvae recovered from pasture was 27.5% at a xidistance of 0-20 cm and 26.7% at the distance of 0-40 cm from the stool bulk. The animals of the treated group with the combination of fungi had a weight gain of approximately 26.9% compared to the control group animals. The association nematophagous fungi provided by sodium alginate matrix was effective in controlling nematodes Haemonchus sp., Cooperia sp. and Oesophagostomum sp. by reducing reinfection due to its antagonistic action of fungi on infective larvae on pastures available. However, the parasitic infection affects not only animals but also human, with high prevalence in developing countries. They are responsible for different cases, being associated with chronic diarrhea and malnutrition, which can jeopardize the development of different age groups. This work also aims to evaluate the occurrence of intestinal parasites of patients treated in a hospital located in Minas Gerais, Zona da Mata region, in the period from May of 2007 to February of 2015. The stool tests were performed by technique Hoffman, Pons and Janer (HPJ). The prevalence of intestinal parasites was 13.85% of all samples (1832 in total). About genre, 8.40% women were parasitized, against to 5.45% of men. There was an association of the number of intestinal parasites compared to socioeconomic factors, where 68.3% of all infections were observed in population receiving less than the minimum salary. The high prevalence of enteroparasitosis in Brazil, among other, is due to the difficult access to basic sanitation and lack of health education programs.