Relação entre a capacitação espermática e a fertilidade de sêmen criopreservado de bovinos / Relationship between sperm capacitation and fertility in bovine cryopreserved semen

A qualidade do sêmen criopreservado, utilizado na inseminação artificial em tempo fixo (IATF) em bovinos, é um dos principais fatores que impactam sobre a fertilidade, e está relacionada à capacidade de produção espermática dos touros, à criotolerância dos espermatozoides e aos critérios técnicos do processo de criopreservação adotados. Neste sentido, devemos destacar a importância do controle de qualidade das partidas de sêmen antes de serem liberadas para uso na IATF. Nos últimos anos várias técnicas vêm sendo desenvolvidas para avaliar com mais acurácia as partidas de sêmen e evitar o uso daquelas que possam resultar em prejuízos na fertilidade, mas mesmo assim, tem se notado alta variabilidade na taxa de prenhez entre touros e entre partidas de sêmen. Esta divergência se deve ao fato da habilidade fértil do espermatozoide ser multifatorial, ou seja, dependente de diversas características estruturais, morfofuncionais e moleculares. Ademais, os eventos que permitem os espermatozoides passarem por capacitação espermática, um pré-requisito para a fertilidade, têm intrigado os pesquisadores em vista da complexidade dos processos envolvidos e dos efeitos deletérios da criopreservação espermática. Esta revisão tem por objetivo compilar estudos que mostrem a relação entre a capacitação espermática e a fertilidade do sêmen bovino criopreservado, levando em consideração as técnicas de avaliação e os resultados até o momento.(AU)

The quality of cryopreserved semen, used in fixed-time artificial insemination (FTAI) in cattle, is one of the main factors that impact fertility and is related to the sperm production capacity of bulls, sperm cryotolerance, and the technical criteria for cryopreservation. In this sense, we must highlight the importance of quality control of semen batches before commercialization for the FTAI. In recent years, several techniques have progressed to more accurately evaluate semen batches and avoid using those that may result in impaired fertility. However, we still notice a high variability in the pregnancy rate between bulls and between semen batches. This divergence is due to the multifactorial sperm-fertilizing ability, i.e., it depends on several structural, morphofunctional, and molecular characteristics. In addition, the events that allow sperm to undergo sperm capacitation, a prerequisite for fertility, have intrigued researchers due to the complexity of the processes involved and the adverse effects of sperm cryopreservation. This review aims to compile studies that show the relationship between sperm capacitation and fertility in cryopreserved bovine semen, considering the evaluation techniques and results to date.(AU)

Fertilidade e suscetibilidade à criopreservação espermática: avanços e desafios / Fertility and susceptibility to sperm cryopreservation: advances and challenges

Estudos sobre a fisiologia espermática demonstram que padrões de fertilidade e funcionalidade espermática pós-criopreservação possuem relação importante com a eficiência do metabolismo energético destas células, bem como com a sua capacidade de manter a homeostase oxidativa. Os conhecimentos sobre a relação entre perfil fisiológico de espermatozoides e fertilidade foram e, ainda estão sendo, aprimorados, com o uso de análises de perfis moleculares, com destaque para a metabolômica. As análises moleculares permitiram a identificação de classes de metabólitos importantes na fisiologia espermática, bem como de potenciais biomarcadores de fertilidade, inclusive em bovinos. No entanto, ainda não há disponível uma avaliação isolada capaz de estimar o padrão de fertilidade de amostras seminais. Há vários desafios a serem superados para a validação de biomarcadores de fertilidade, principalmente considerando-se as diferenças entre perfis metabólicos de raças distintas de touros e a heterogeneidade dos ejaculados. A superação destes desafios pode ser iniciada com um maior aproveitamento dos resultados já obtidos e futuros, com a aplicação de análises mais avançadas e com eficácia em elevado número de dados. Para tal, podem ser utilizados modelos estatísticos de inteligência artificial, cuja aplicação pode aumentar a acurácia das observações obtidas, bem como aproximá-las da aplicação pelo setor de produção animal.(AU)

Studies on sperm physiology demonstrate that fertility outcomes and sperm post-cryopreservation have an important relation with sperm energy metabolism efficiency and ability to maintain oxidative homeostasis. Knowledge on sperm physiology has been enhanced, continually, with the application of molecular profiling analysis, focusing on metabolomics. Molecular analysis allowed the identification of important classes of metabolites in sperm physiology, as well as potential fertility biomarkers, including in bovine. Despite all developments, there is still no isolated assessment available capable of estimating fertility on sperm samples. There are several challenges to be overcome for the validation of fertility biomarkers, especially considering the metabolic profiles differences between bull breeds and the ejaculate heterogeneity. Overcoming these challenges could start with the application of more advanced and effective data analysis from research database already obtained, as well as future ones. To this end, statistical models of artificial intelligence can be used, whose application can increase the accuracy of the observations obtained, as well as bringing them closer to the application by the animal production sector.(AU)

Espermiogênese alterada em um touro doador de sêmen: relato de caso / Altered spermiogenesis in a semen donor bull: case report

A espermiogênese é o processo final da espermatogênese no qual a espermátide se transforma em espermatozoide. Durante esse processo podem ocorrer alterações espermáticas, especialmente no acrossoma, na morfologia da cabeça, na condensação da cromatina e na formação dos vacúolos nucleares. A diferenciação entre os quadros clínicos é feita com repetições dos exames andrológicos. A avaliação morfológica indica a situação da espermiogênese nas 4 semanas anteriores a coleta do sêmen. Com os resultados do exame andrológico é possível identificar a qualidade seminal naquele período. O presente artigo é o relato de caso de um touro jovem doador de sêmen com 26 meses de idade, no início do regime de coletas de sêmen em um Centro de Coleta e Processamento de Sêmen no Sul do Brasil. A produção espermática deste animal foi avaliada durante 12 meses de coleta, apresentando sempre morfologia espermática muito alterada e motilidade média de 54% no exame imediato. Em 13 coletas seminais, o ejaculado deste animal apresentou em média 86% de defeitos maiores, 10% de defeitos menores e 96% de defeitos totais. Os defeitos maiores, que são os que possuem maior efeito na fertilidade, estão diretamente ligados a espermiogênese e os defeitos menores, que possuem menor efeito na fertilidade, são ocasionados principalmente durante o trânsito pelo epidídimo. O quadro clínico desse animal demonstrou a importância do exame morfológico para avaliar a espermatogênese e principalmente o processo de diferenciação final da espermátide em espermatozoide. Casos como este devem ser descritos como espermiogênese alterada e o reprodutor deve ser afastado da reprodução, após descartar alterações morfológicas devido a degeneração testicular grave.(AU)

Spermiogenesis is the final process of spermatogenesis in which the spermatid transforms into sperm. During this process, sperm alterations may occur, especially in the acrosome, head morphology, chromatin condensation and formation of nuclear vacuoles. Differentiation between clinical conditions is made with repetitions of andrological exams. The morphological evaluation indicates the status of spermiogenesis in the 4 weeks prior to semen collection. With the results of the breeding soundness examination, it is possible to identify the seminal quality in that period. The present article is a case report of a young 26-month-old semen donor bull, that started semen collection routines at a Semen Collection and Processing Center in southern Brazil. The sperm production of this animal was evaluated during 12 months of collection, always showing very altered sperm morphology and average motility of 54% in the immediate examination. In 13 seminal collections, the ejaculate of this animal presented an average of 86% of major defects, 10% of minor defects and 96% of total defects. Major defects, which have the greatest impact on fertility, are directly linked to spermiogenesis and minor defects, which have less effect on fertility, are mainly caused during transit through the epididymis. The clinical conditions of this animal demonstrated the importance of the morphological examination to evaluate spermatogenesis and especially the process of final differentiation of the spermatid into spermatozoa. Cases like this should be described as altered spermiogenesis and the bull should be withdrawn from breeding, after ruling out morphological changes due to severe testicular degeneration.(AU)

Supplementation of two sources of selenium at different levels in diet of boars and this effect on the seminal quality / Suplementação de duas fontes de selênio em diferentes níveis na dieta de cachaços e seu efeito sobre a qualidade seminal

The spermatic membrane is rich in polyunsaturated fatty acids, which makes it sensitive to the action of reative species of oxygen, which can damage the seminal quality of the scraps. The purpose of this study was to evaluate the effect of the supplementation of two selenium sources at different doses. Third five scraps were allocated in four groups: (INOR30) 0.30 ppm sodium selenite; (COMP30) 0.30 ppm selenium metal-amino acid; (MIXED15+15) 0.15 ppm sodium selenite + 0.15 ppm selenium metal-amino acid and (COMP15) 0.15 ppm selenium metal-amino acid. The ejaculates of the scraps were evaluated over 22 weeks, resulting in 210 samples evaluated for volume, motility, pH, presence of agglutination and morphological changes, and 140 samples for spermatic concentration. The data was analyzed with repeated measures in time in a mixed model with type of selenium supplementation, periods of evaluation (one period of two weeks + five periods of four weeks) and their interactions as fixed effects, and animal and the worker that collected the ejaculates as random effects. Results showed no difference in selenium supplementation with the sources and doses used. In this way, it was possible to verify that the metal amino acid of selenium at the dose of 0.15 ppm promotes the same effect as the diets formulated with 0.30 ppm of sodium selenite.(AU)

A membrana espermática é rica em ácidos graxos poliinsaturados, o que a torna sensível à ação de espécies reativas de oxigênio, que podem prejudicar a qualidade seminal dos cachaços. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da suplementação de duas fontes de selênio em diferentes doses. Trinta e cinco cachaços foram distribuídos em quatro grupos: (INOR30) 0,30 ppm de selenito de sódio; (COMP30) 0,30 ppm de metal-aminoácido de selênio; (MISTO15+15) 0,15 ppm de selenito de sódio + 0,15 ppm de metal-aminoácido de selênio e (COMP15) 0,15 ppm de metal-aminoácido de selênio. Os ejaculados dos cachaços foram avaliados durante 22 semanas, resultando em 210 amostras avaliadas para volume, motilidade, pH, presença de aglutinação e alterações morfológicas, e 140 amostras para concentração espermática. Os dados foram analisados com medidas repetidas no tempo em modelo misto, em que o tipo de suplementação de selênio, os períodos de avaliação (um período de duas semanas + cinco períodos de quatro semanas) e suas interações foram os efeitos fixos, e o animal e o funcionário que coletou os ejaculados foram os efeitos aleatórios. Os resultados obtidos demonstraram não haver diferença na suplementação de selênio com as fontes e doses utilizadas. Com isso, foi possível verificar que o metal-aminoácido de selênio na dose de 0,15 ppm promove o mesmo efeito das dietas formuladas com 0,30 ppm de selenito de sódio.(AU)

Análises computadorizadas da motilidade espermática (CASA): conceitos e possibilidades de padrões / Computerized analysis of sperm motility (CASA): concepts and possibilities of standards

O melhoramento genético possibilitou a evolução da eficiência e taxas de desfrute da pecuária nacional. A biotécnica da IATF (Inseminação Artificial por Tempo Fixo) consolidou-se como a principal ferramenta de disseminação de genética melhorada em rebanhos de leite e de corte. A avaliação espermática laboratorial tem o objetivo de analisar o potencial de reprodutores/partidas de sêmen e buscar a desafiadora tarefa de determinar e estabelecer características confiáveis que possam ser utilizadas como indicadores de fertilidade. Nesse contexto emerge o sistema CASA (Computer-Assisted Sperm Analysis) como ferramenta promissora para obtenção de parâmetros indicativos de fertilidade seminal.(AU)

Genetic improvement enabled the evolution and efficiencies of national livestock activity. The IATF (Fixed Time Artificial Insemination) biotechnology, has established itself as the main tool for the dissemination of improved genetics in dairy and beef herds. Laboratory sperm evaluation aims to analyze the potential of a sires/semen batches and seek the challenging task of determining and establishing reliable characteristics that can be used as fertility indicators. In this context, the computerized system of sperm motility (CASA) emerges as a promising tool for obtaining parameters indicative of seminal fertility.(AU)

Morfologia espermática em touros: quais os principais defeitos e o porquê ocorrem / Sperm morphology in bulls: which are the main defects and why they occur

A morfologia espermática é uma característica seminal que está associada à fertilidade e é, portanto, um componente importante na rotina do controle de qualidade em Centros de Coleta e Processamento de Sêmen (CCPS). É utilizada para caracterizar e quantificar os vários tipos de anormalidades nas células espermáticas do touro, usando preparação em montagem úmida para microscopia de Contraste de Interferência Diferencial (DIC), Contraste de Fase (CF) e Lâmina Corada (LC). O perfil da morfologia espermática permite a tomada de decisão sobre o aproveitamento ou descarte de um ejaculado para criopreservação e predizer a fertilidade de uma amostra de sêmen. Alterações no espermograma, com evidências do histórico e exame físico do touro, levam a interpretação da função testicular anormal, e consequentemente, ao diagnóstico, tratamento e prognóstico, se for o caso. As causas mais comuns de uma espermatogênese anormal nos touros incluem: termorregulação testicular anormal, desequilíbrios hormonais, estresse de manejo, ambiental e nutricional, efeitos de toxinas ou expressão de genes deletérios, além de defeitos de origem genética. Conhecendo-se a estrutura do espermatozoide, torna-se mais fácil a identificação das anormalidades espermáticas bem como a descrição das mesmas e uma melhor compreensão de sua origem.(AU)

Sperm morphology is a seminal trait that is associated with fertility and is therefore an important component of routine quality control in Semen Collection and Processing Centers (SCPC). It is used to characterize and quantify the various types of abnormalities in bull sperm cells, using wet mount preparation for Differential Interference Contrast (DIC), Phase Contrast (PC) and Slides Smear (SS) microscopy. The sperm morphology profile allows decision making on the use or disposal of an ejaculate for cryopreservation and predicts the fertility of a semen sample. Changes in sperm morphology may indicate that fertility may be impacted and therefore it is important to routinely monitor ejaculates. An abnormal spermogram with evidence from a history and physical examination of the bull can lead to the interpretation of abnormal testicular function, and consequently, to the diagnosis, treatment and prognosis, if any. The most common causes of abnormal spermatogenesis in bulls include: abnormal testicular thermoregulation, hormonal imbalances, management, environmental and nutritional stress, effects of toxins or expression of deleterious genes, in addition to defects of genetic origin. Knowledge in the structure of the sperm makes easier the identification of sperm abnormalities, as well as their description and provides a better understanding of their origin.(AU)

Evaluation of biochemical and electrolytic components of semen from ram supplemented with different concentrations of selenium and its correlation with sperm quality / Avaliação de componentes bioquímicos e eletrolíticos do sêmen de ovinos suplementados com diferentes concentrações de selênio e sua correlação com a qualidade espermática

The aim of the study was to evaluate whether supplementation with different levels of selenium (Se) can change the biochemical and electrolytic components of semen, causing an improvement in seminal quality in rams. Thirty animals were kept in an intensive pen system, fed with hay and commercial ration, allocated into five groups (six animals/pen) and supplemented with a mineral mixture containing Omg (G1), 5mg (G2), 10mg (G3), 15mg (G4) and 20mg (G5) of Se/kg. Each group received a different treatment every 56 days and treatments were rotated between groups following a dynamic sequence. Semen samples were collected by electroejaculation after the end of each treatment to evaluate the levels of fructose, citric acid, potassium (K), sodium (Na), calcium (Ca), Se, zinc (Zn), manganese (Mn), sulfur (S) and lead (Pb). The statistical design was a 5x5 Latin square. The different levels of Se supplementation evaluated maintained the concentrations of electrolytes and minerals in the semen at the required levels and did not change the sperm quality, concluding that higher intakes of Se do not cause antagonistic effects on the absorption and subsequent action of other essential minerals supplied to the animals and still maintains electrolyte balance.

O objetivo do estudo foi avaliar se a suplementação com diferentes níveis de selênio (Se) pode alterar os componentes bioquímicos e eletrolíticos do sêmen, ocasionando, por conseguinte, uma melhoria na qualidade seminal em carneiros. Foram utilizados 30 animais, mantidos em sistema intensivo de baias, alimentados com feno e ração comercial, sendo alocados em cinco grupos (seis animais/baia) e suplementados com uma mistura mineral contendo 0mg (G1), 5mg (G2), 10mg (G3), 15mg (G4) e 20mg (G5) de Se/kg. Cada grupo recebeu um tratamento diferente a cada 56 dias, e foi realizado um rodízio de tratamentos entre os grupos seguindo uma sequência dinâmica. Amostras de sêmen foram colhidas por eletroejaculação após o fim de cada tratamento, a fim de se avaliarem os níveis de frutose, ácido cítrico, potássio (K), sódio (Na), cálcio (Ca), Se, zinco (Zn), manganês (Mn), enxofre (S) e chumbo (Pb). O desenho estatístico foi um quadrado latino 5x5. Os diferentes níveis de suplementação de Se avaliados mantiveram as concentrações de eletrólitos e de minerais do sêmen nos níveis exigidos e não modificaram a qualidade espermática, concluindo-se que maiores ingestões de Se não causam efeitos antagônicos na absorção e subsequente ação de outros minerais essenciais fornecidos aos animais e ainda mantêm o equilíbrio eletrolítico.

In vitro and in vivo parameters for identification of landrace pigs with low reproductive performance / Parâmetros in vitro e in vivo para detecção de machos suínos Landrace com baixo desempenho reprodutivo

In pig farming, measurements of production parameters play a fundamental role in the success of the activity. Minimal differences in fertility between breeders can lead to less reproductive efficiency and, less productivity. However, assessing the fertility of each male and the early identification of subfertile males is a difficult task to be performed. Thus, the aim of this study was to evaluate the use of in vitro and in vivo parameters in the identification of subfertile males of the Landrace breed, aiming to collaborate with genetic improvement programs, routine optimization in the Genetic Diffusion Units (GDUs) and the results of performance. In experiment 1, an approach to identify males with subfertility was evaluated based on retrospective data. For this, the results (averages of birth rates, number of total births and average percentages of female and male piglets per litter) were evaluated for a total of 996 matings and 847 parturitions. The inseminations came from ejaculates of 32 males, who had at least 19 females inseminated with homospermic doses in the concentration of 2.5 x 109 total sperm from the same male. As for the birth rate (BR), an average of 85.47% ± 6.05 was observed with a group of median males, seven males that stood out and one individual (M32) with a performance of 58.06% ± 9.0. For the total number of piglets born (PB) the average was 13.41 ± 0.56, with three males with better performance and one (M32) with very poor performance (8.62 ± 0.59). In experiment 2, it was verified whether evaluations of inseminating doses (ID) of semen in vitro (motility and sperm morphology) after 96 hours of storage had correlations with fertility in vivo, which can be used to identify subfertile males. The evaluations were performed on 30 ejaculates regarding the means of BR and PB, considering only those who had at least 7 females inseminated. There were no correlations between the motility assessments and semen morphological changes and the reproductive parameters evaluated. The results obtained in vivo, referring to BR and PB, demonstrated that it was possible to identify differences between males, the individual (M32) had the worst results for the percentages of BR and PB. It is concluded that there are males of high and low fertility and that only the in vitro analyzes carried out in this study are not enough to categorize them, however, the evaluation of retrospective data was efficient for this purpose.(AU)

Na suinocultura moderna, as mensurações de parâmetros de produção têm papel fundamental para o sucesso da atividade. No entanto, a avaliação da fertilidade de cada macho e a identificação precoce de machos subférteis é uma tarefa difícil de ser realizada. O objetivo deste estudo foi avaliar a utilização de parâmetros in vivo e in vitro na identificação de machos subférteis da raça Landrace, visando colaborar com os programas de melhoramento genético, otimização da rotina nas Unidade de Difusão Genética (UDGs) e dos resultados a campo. No experimento 1, foi proposta uma abordagem de identificação dos machos subférteis tendo como base dados retrospectivos. Para isso, foram avaliados os resultados (médias das taxas de parto, número de nascidos totais e média das porcentagens de leitões fêmeas e machos por leitegada) de um total de 996 coberturas e 847 partos. As inseminações foram oriundas de ejaculados de 32 machos, que tiveram ao menos 19 fêmeas cobertas com doses homospérmicas na concentração de 2,5 x 109 de espermatozoides totais e obrigatoriamente do mesmo macho. Quanto a taxa de parto (TP) obtivemos uma média de 85,47% ± 6,05 e observou-se um grupo de machos medianos, sete machos que se destacaram positivamente e um indivíduo (M32) com um desempenho 58,06 ± 9,0. Para número de leitões nascidos totais (NT) obtivemos uma média de 13,41 ± 0,56 e notou-se três machos com melhor desempenho e um (M32) com péssimo desempenho (8,62 ± 0,59). No experimento 2, foi verificado se as avaliações das doses inseminantes (DI) de sêmen in vitro (motilidade e morfologia espermática) após 96 horas de armazenamento apresentaram correlação com a fertilidade in vivo. As avaliações foram realizadas em 30 ejaculados quanto às médias de TP e NT, considerando apenas ejaculados que tiveram ao menos 7 fêmeas inseminadas. Não foram verificadas correlações entre as avaliações de motilidade e alterações morfológicas do sêmen com os parâmetros produtivos avaliados. Os resultados obtidos in vivo, referentes a TP e NT, mostrou que foi possível identificar diferença entre os machos, onde o indivíduo (M32) apresentou os piores resultados para as porcentagens de TP e NT. Desta forma, pode-se concluir que existem machos de alta e baixa fertilidade e que somente as análises in vitro realizadas neste estudo não são suficientes para categorizá-los, no entanto, a avaliação de dados retrospectivos foi eficiente para esta finalidade.(AU)

Sperm filtration as an alternative technique for seminal plasma separation in boars / Filtração de ejaculados suínos como alternativa para a separação do plasma seminal

The present study aimed to evaluate the filtration for separating seminal plasma of boars' ejaculate by means of sperm viability and the occurrence of hyperactivation and lipid peroxidation in fresh semen and after cooling for up to 96 hours. The ejaculate of eight healthy boars of different breeds was collected and the gelatinous portion was separated and discarded. In the laboratory, the semen was fractioned into three aliquots (groups G1, G2 and G3) as follows: G1: semen with plasma diluted in BTS (TOTAL BTS); G2: semen centrifuged at 600G/10' (BTS CEN); and G3: semen filtered with the Sperm-filter® following dilution of the retained cells with BTS (BTS FIL). The analyses were performed at three moments: with fresh samples (D0) and after 48 (D2) and 96 hours (D4) of cooling at 17ºC. The kinetic evaluation was performed using the CASA system, which provided data for the classification of sperm hyperactivity. For lipid stress analysis, the TBARS (thiobarbituric acid reactive substance) test was performed. The variance analysis test was conducted to compare the results between the groups and moments analyzed. The results showed better total motility values (%) for G1 at D0 (67.9, P= 0.001), D2 (36.6, P= 0.004) and D4 (26.1, P= 0.003). The occurrence of hyperactivity was observed in G2 and G3 at moments D2 and D4. In addition, TBARS showed higher peroxidation levels for G1 at D0 (8.1 mM MDA/ml, P= 0.01), D2 (7.4 mM MDA/ml, P= 0.02), and D4 (6.41mMol MDA/ml, P= 0.008) when compared to G2 and G3. Since the filtration method did not demonstrate any damage to the sperm viability, the study concluded that sperm filtration is an accessible and valid tool to replace centrifugation.(AU)

O presente estudo objetivou avaliar a filtração como alternativa para a separação do plasma seminal de ejaculados suínos, ao considerar a viabilidade espermática por meio da ocorrência de hiperativação e peroxidação lipídica no sêmen fresco e após refrigeração por até 96 horas. O ejaculado, de oito cachaços saudáveis de diferentes raças, foram colhidos por meio da técnica da mão enluvada e porção gelatinosa foi separada e descartada. Em laboratório, o sêmen foi fracionado em três alíquotas (grupos G1, G2 e G3) da seguinte forma: G1: sêmen e plasma seminal, diluído em BTS (TOTAL BTS); G2: ejaculado centrifugado a 600G/10' para separação do plasma seminal, e o pellet de espermatozoides formados foram ressuspensos em BTS (BTS CEN); e G3: sêmen filtrado com Sperm-filter®, e espermatozoides retidos foram diluídos em BTS (BTS FIL). As análises foram realizadas em três momentos: amostras frescas (D0), após 48 horas (D2) e seguidas 96 horas (D4) de refrigeração a 17ºC. A avaliação cinética foi realizada pelo sistema CASA, que forneceu dados para a classificação da hiperatividade espermática. Para análise de estresse lipídico, foi realizado o teste TBARS (substâncias reagente ao ácido barbitúrico). Um teste de análise de variâncias foi feito para detectar diferenças entre os grupos e momentos avaliados. Os resultados mostraram melhores valores de motilidade total (%) para G1 em D0 (67,9, P = 0,001), D2 (36,6, P = 0,004) e D4 (26,1, P = 0,003). A ocorrência de hiperatividade foi observada em G2 e G3 nos momentos D2 e D4. Além disso, o TBARS mostrou níveis de peroxidação lipídica mais elevados para G1 em D0 (8,1 mM MDA / ml, P = 0,01), D2 (7,4 mM MDA/ml, P = 0,02) e D4 (6,41 mMol MDA / ml, P = 0,008) quando comparado com G2 e G3. Como a filtração não induziu a danos na viabilidade espermática, o estudo concluiu que a filtração espermática é uma ferramenta acessível e válida para substituir a centrifugação com intuito de separar o plasma seminal.(AU)

The importance of updated criteria in breeding soundness examination of commercial Nellore bulls for the herd reproductive improvement / [Importância de critérios atualizados na avaliação andrológica de touros Nelore a campo para a evolução reprodutiva do rebanho]

The aim of this work was to compare results of breeding soundness examination (BSE) of Nellore bulls (n=1257) according to evaluation criteria from two different classification tables (traditional-Table1 used since 1997 and an updated-Table2-proposed in 2020). Data were separated into 3 categories: questionable animals in Table1 and Table2 (Q1Q2), animals approved in Table1 and questionable in Table2 (A1Q2) and animals approved in Table1 and Table2 (A1A2). BSE parameters were submitted to ANOVA (P<005), according to age groups. Higher (P<0.0001) scrotal perimeter (PE) were observed in A1A2 category (18-24m=33.4±2.4cm; 24-36m=34.5±2.2cm; 36-48m=36.6±1.7cm; >48m=38.6±1.7cm) compared to A1Q2 (18-24m=29.05±0.98cm; 24-36m=30.3±0.6cm; 36-48m=32.9±1.0cm; >48m=34.8±1.0cm) and to Q1Q2 (24-36m=26.8±2.0cm; 36-48m=30.0±0.1cm; >48m=31.3±1.1cm), for all age groups. At the age of 36-48months (Q1Q2=2.7±0.3; A1Q2=3.2±0.3; A1A2=3.3±0.6) and >48months (Q1Q2=3.0±0.4; A1Q2=3.3±0.5; A1A2=3.4±0.5), animals with better andrological classifications presented higher (P<0.05) body condition score (BCS). Additionally, at age >48m, higher sperm Motility (P=0.0250) and Vigor (P=0.0335) were observed in animals A1Q2 (Mot=55.5±14.7%; V=3.21±0.82) and A1A2 (Mot=55.8±12.2%; V=3.23±0.81) compared to Q1Q2 (Mot=50.2±17.4%; V=2.77±0.82). It was concluded that bulls approved using strict selection criteria demonstrated higher PE and BCS, regardless of the age. The utilization of updated classification tables is highly recommended for further reproductive potential development of Nellore bulls in the field.(AU)

O objetivo deste estudo foi comparar os resultados obtidos no exame andrológico a campo de touros Nelore (n=1257) de acordo com os critérios de avaliação de duas tabelas de classificação (uma tabela tradicional - tabela 1 - proposta em 1997 e uma nova tabela atualizada - tabela 2 - proposta em 2020). Os dados foram separados em três categorias: animais questionáveis nas tabelas 1 e 2 (Q1Q2), animais aprovados na tabela 1 e questionáveis na tabela 2 (A1Q2) e animais aprovados nas tabelas 1 e 2 (A1A2). Os parâmetros foram submetidos à análise de variância (P<0,05), por faixa etária. Observou-se maior (P<0,0001) PE no grupo A1A2 (18-24m=33,4±2,4cm; 24-36m=34,5±2,2cm; 36-48m=36,6±1,7cm; >48m=38,6±1,7cm) em comparação ao grupo A1Q2 (18-24m=29,05±0,98cm; 24-36m=30,3±0,6cm; 36-48m=32,9±1,0cm; >48m=34,8±1,0cm) e este maior (P<0,0001) que Q1Q2 (24-36m=26,8±2,0cm; 36-48m=30,0±0,1cm; >48m=31,3±1,1cm) em todas as idades. Nas faixas etárias 36-48m (Q1Q2=2,7±0,3; A1Q2=3,2±0,3; A1A2=3,3±0,6) e >48m (Q1Q2=3,0±0,4;A1Q2=3,3±0,5; A1A2=3,4±0,5), animais com melhor classificação andrológica apresentaram melhor (P<0,05) escore de condição corporal (ECC). Adicionalmente, na idade >48m, maiores motilidade (P=0,0250) e vigor (P=0,0335) foram observados nos animais A1Q2 (Mot=55,5±14,7%; V=3,21±0,82) e A1A2 (Mot=55,8±12,2%; V=3,23±0,81) comparados aos animais Q1Q2 (Mot=50,2±17,4%; V=2,77±0,82). Concluiu-se que touros aprovados na tabela com critérios mais rigorosos de classificação (tabela 2) apresentaram maior PE e ECC, independentemente da idade. Assim, a utilização de tabelas classificatórias atualizadas é fundamental para maior desenvolvimento do potencial reprodutivo de touros Nelore a campo.(AU)

Effect of adding anethole to the cryopreservation medium (powdered coconut water) on morphology, kinetics, and oxidative stress of buck sperm / Efeito da adição de anethole ao meio de criopreserção (água de coco em pó) na morfologia, cinética e estresse oxidativo do sêmen de bode

The quality of post-thawing goat sperm is critical to the success of artificial insemination protocols and may be influenced by extenders, cryoprotectants, and antioxidant substances. Therefore, the objective of this study was to evaluate the effects of the antioxidant anethole on goat sperm diluted in preservation medium based on powdered coconut water (ACP-101c) and frozen. For that, each ejaculate was submitted to the following treatments: ACP-101c (control); control plus supplementation with 30, 300, or 2000 µg/ mL anethole. The samples were thawed and evaluated for morphology, kinetics, membrane integrity, and reactive oxygen species (ROS). The addition of anethole increased morphological abnormalities (P < 0.05), however, it did not affect sperm kinetics. Flow cytometry analysis showed that sperm cells cryopreserved with 300 µg/mL anethole had lower acrosome integrity than those cryopreserved in other treatments. Evaluation of oxidative stress revealed that cells stored in the presence of 2000 µg/mL anethole had small amounts of ROS when compared to those preserved in the control medium alone or supplemented with 300 µg/mL anethole (P < 0.05). After cryopreservation of sperm with 2000 µg/mL anethole, the highest percentage of viable sperm without ROS was observed (P < 0.05). In conclusion, despite reducing ROS levels, the supplementation of anethole in ACP-101c did not affect sperm kinetics or membrane integrity post-thawing, however, it did cause morphological damage to sperm.(AU)

A qualidade do espermatozoide caprino pós-descongelação é crítica para o sucesso dos protocolos de inseminação artificial e pode ser influenciada por extensores, crioprotetores e substâncias antioxidantes. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do antioxidante anetole sobre espermatozoides caprinos diluídos em meio de conservação à base de água de coco em pó (ACP-101c) e congelados. Para tanto, cada ejaculado foi submetido aos seguintes tratamentos: ACP-101c (controle); controle mais suplementação com 30, 300 ou 2000 µg / mL de anetole. As amostras foram descongeladas e avaliadas quanto à morfologia, cinética, integridade de membranas e espécies reativas de oxigênio. A adição de anetole aumentou as anormalidades morfológicas (P < 0,05), no entanto, não afetou a cinética dos espermatozoides. A análise da citometria de fluxo mostrou que as células de esperma criopreservadas com 300 µg / mL anethole tinham integridade acrosma menor do que aquelas criopreservadas em outros tratamentos. A avaliação do estresse oxidativo revelou que as células armazenadas na presença de 2000 µg / mL anethole apresentaram pequenas quantidades de ROS quando comparadas às preservadas em meio de controle isoladamente ou suplementadas com 300 µg / mL anethole (P < 0,05). Após a criopreservação de espermatozoides com 2000 µg / mL anethole, observou-se a maior porcentagem de espermatozoides viáveis sem ROS (P < 0,05). A população com espermatozoides viáveis sem ROS foi maior quando utilizado 2.000 µg / mL (P < 0,05). Em conclusão, apesar de reduzir os níveis de ROS, a suplementação de anetole em ACP-101c não afetou a cinética espermática e a integridade da membrana pós-descongelação, entretanto, causou danos morfológicos nos espermatozoides.(AU)

Spermatozoon head size the main differentiating feature between spermatozoa of blue and white Arctic fox (Vulpes lagopus)

Morfologia e morfometria espermática, este é um importante determinante da capacidade reprodutiva masculina. Dados morfométricos podem fornecer informações relevantes em estudos focados em biologia evolutiva, avaliação da qualidade do esperma, incluindo previsão do potencial de fertilidade, criopreservação de sêmen ou efeito de reprotóxicos. O artigo apresenta a análise morfométrica de espermatozóides de dois morfos coloridos de raposa do Ártico (Vulpes lagopus), e tenta determinar a relação entre indicadores de qualidade selecionados e dimensões e forma dos espermatozóides. O material de pesquisa consistiu em ejaculados coletados uma única vez por estimulação manual de 20 raposas do Ártico de um ano de idade (10 indivíduos do morfo azul e 10 do morfo branco). Ejaculados foram analisados ​​para parâmetros padrão (volume, concentração de esperma, número total de espermatozóides no ejaculado) e utilizado para a preparação de espécimes microscópicos. Verificou-se que as dimensões dos espermatozóides das raposas do Ártico dependem dos morfos da cor masculina. Os espermatozóides das raposas brancas do Ártico foram significativamente mais longos (1,82 µm) e tinham cabeças maiores (0,32 µm mais longas e 0,15 µm mais largas) em comparação com os espermatozóides das raposas azuis do Ártico (P <0,05). As interações entre as dimensões particulares dos espermatozoides indicaram a ocorrência de gametas com formas diferentes. Todos os coeficientes de correlação entre as características morfométricas dos espermatozoides foram estatisticamente significantes. Nossa pesquisa provou que nas raposas azuis do Ártico, as dimensões dos espermatozóides (comprimento da cauda e comprimento total do espermatozóide) podem estar relacionadas com a porcentagem de espermatozóides com alterações primárias (respectivamente: r = -0,68 er = -0,75; em P <0,05).(AU)

Efficiency of the anti-GnRH vaccine for castration of lambs intended for finishing in pastures / Eficiência da vacina anti-GnRH para castração de cordeiros destinados à terminação a pasto

It was aimed to evaluate anti-GnRH vaccine efficiency on productive characteristics, seminal performance, size, and histology of testicles of lambs submitted to immunocastration. Twenty contemporary Texel lambs were evaluated, being 10 animals received two doses of 1 mL of anti-GnRH vaccine and 10 received two doses of 1 mL of saline, with an interval of 30 days. Seminal characteristics, weight and histological cut for the testicles, productive performance, and blood parameters were analyzed. Andrological monitoring was carried out every 30 days. All animals were kept on pasture of Urochloa spp. receiving daily supplementation protein-energetic by 90 days. There was effect of immunocastration on slaughter weight (44.3 vs. 48.3 kg),total gain (9.9 vs. 10.3 kg), daily gain (104.5 vs. 108.9 g/day), and feed conversion (5.83 vs. 5.97) respectivelyto immunocastrated and intact lambs. There was immunocastration effect on testicle weight (0.09 vs. 0.35g), motility (4.5 vs. 61.0%), vigor (0.40 vs. 3.00), volume (0.09 vs. 0.74 mL) and swirling (0.20 vs. 2.70) in the third semen collection. Immunocastration through two doses of 1 mL of anti-GnRH vaccine with a 30-day interval between doses, causes infertility in sheep and can be adopted for lambs.

O objetivo foi avaliar a eficiência da vacina anti-GnRH quanto às características de desempenho produtivo e seminais, tamanho e histologia dos testículos de cordeiros submetidos à imunocastração. Foram avaliados 20 cordeiros contemporâneos cruzados SRD x Texel, dos quais 10 animais receberam duas doses de 1 mL de vacina anti-GnRH e 10 receberam duas doses de 1 mL de soro fisiológico, com intervalo de 30 dias entre doses. As variáveis analisadas foram concentração espermática, motilidade, vigor, turbilhonamento e volume de ejaculado para o sêmen, peso e corte histológico para os testículos, peso ao abate, ganho de peso total, ganho médio diário, consumo médio de suplemento e conversão alimentar para o desempenho produtivo e GGT, AST, albumina, creatinina, proteínas totais e ureia para o sangue. A cada 30 dias foi realizado o acompanhamento andrológico para verificação do efeito da vacina sobre características seminais e testiculares dos animais. Durante os 90 dias de duração do experimento, os animais foram mantidos a pasto de Urochloa spp., com suplementação diária, sendo abatidos ao final deste período. Houve diferença entre animais imunocastrados e inteiros respectivamente, para o peso ao abate (44,3 vs. 48,3 kg), ganho de peso total (9,9 vs 10,3 kg), ganho médio diário (104,5 vs. 108,9 g/dia) e conversão alimentar (5,83 vs. 5,97). Houve efeito significativo para motilidade (4,5 vs. 61,0%), vigor (0,40vs. 3,00), volume (0,09 vs. 0,74 mL) e turbilhonamento (0,20 vs. 2,70) na terceira colheita de sêmen, que foi 30 dias após a segunda dose da vacina. Houve efeito significativo para peso dos testículos (0,09 vs. 0,35g). No perfil bioquímico do sangue dos animais não houve alterações significativas durante o experimento em ambos os tratamentos. A imunocastração através de duas doses de 1 mL de vacina anti-GnRH com 30 dias de intervalo entre as doses, [...].

Efficiency of the anti-GnRH vaccine for castration of lambs intended for finishing in pastures / Eficiência da vacina anti-GnRH para castração de cordeiros destinados à terminação a pasto

It was aimed to evaluate anti-GnRH vaccine efficiency on productive characteristics, seminal performance, size, and histology of testicles of lambs submitted to immunocastration. Twenty contemporary Texel lambs were evaluated, being 10 animals received two doses of 1 mL of anti-GnRH vaccine and 10 received two doses of 1 mL of saline, with an interval of 30 days. Seminal characteristics, weight and histological cut for the testicles, productive performance, and blood parameters were analyzed. Andrological monitoring was carried out every 30 days. All animals were kept on pasture of Urochloa spp. receiving daily supplementation protein-energetic by 90 days. There was effect of immunocastration on slaughter weight (44.3 vs. 48.3 kg),total gain (9.9 vs. 10.3 kg), daily gain (104.5 vs. 108.9 g/day), and feed conversion (5.83 vs. 5.97) respectivelyto immunocastrated and intact lambs. There was immunocastration effect on testicle weight (0.09 vs. 0.35g), motility (4.5 vs. 61.0%), vigor (0.40 vs. 3.00), volume (0.09 vs. 0.74 mL) and swirling (0.20 vs. 2.70) in the third semen collection. Immunocastration through two doses of 1 mL of anti-GnRH vaccine with a 30-day interval between doses, causes infertility in sheep and can be adopted for lambs.(AU)

O objetivo foi avaliar a eficiência da vacina anti-GnRH quanto às características de desempenho produtivo e seminais, tamanho e histologia dos testículos de cordeiros submetidos à imunocastração. Foram avaliados 20 cordeiros contemporâneos cruzados SRD x Texel, dos quais 10 animais receberam duas doses de 1 mL de vacina anti-GnRH e 10 receberam duas doses de 1 mL de soro fisiológico, com intervalo de 30 dias entre doses. As variáveis analisadas foram concentração espermática, motilidade, vigor, turbilhonamento e volume de ejaculado para o sêmen, peso e corte histológico para os testículos, peso ao abate, ganho de peso total, ganho médio diário, consumo médio de suplemento e conversão alimentar para o desempenho produtivo e GGT, AST, albumina, creatinina, proteínas totais e ureia para o sangue. A cada 30 dias foi realizado o acompanhamento andrológico para verificação do efeito da vacina sobre características seminais e testiculares dos animais. Durante os 90 dias de duração do experimento, os animais foram mantidos a pasto de Urochloa spp., com suplementação diária, sendo abatidos ao final deste período. Houve diferença entre animais imunocastrados e inteiros respectivamente, para o peso ao abate (44,3 vs. 48,3 kg), ganho de peso total (9,9 vs 10,3 kg), ganho médio diário (104,5 vs. 108,9 g/dia) e conversão alimentar (5,83 vs. 5,97). Houve efeito significativo para motilidade (4,5 vs. 61,0%), vigor (0,40vs. 3,00), volume (0,09 vs. 0,74 mL) e turbilhonamento (0,20 vs. 2,70) na terceira colheita de sêmen, que foi 30 dias após a segunda dose da vacina. Houve efeito significativo para peso dos testículos (0,09 vs. 0,35g). No perfil bioquímico do sangue dos animais não houve alterações significativas durante o experimento em ambos os tratamentos. A imunocastração através de duas doses de 1 mL de vacina anti-GnRH com 30 dias de intervalo entre as doses, [...].(AU)

Diets for Macrobrachium acanthurus breeders: Sperm evaluation / Dietas para reprodutores de Macrobrachium acanthurus: avaliação espermática

The application of biotechnology in animal reproduction has enabled the production of young forms in both quantity and quality. Increasing the number of viable gametes produced by reproducers, among other factors, through an ideal diet, can ensure higher production. Therefore, the aim of this study was to determine the influence of three diets on the sperm survival of Macrobrachium acanthurus. To this end, 24 M. acanthurus males were used, distributed randomly and equally among treatments. Their diets were composed of 100% fresh food (fish and squid muscle - 14% protein), 100% dry feed (commercial feed - 50% protein) and a mixture of these diets containing 30% protein. Spermatophores were extracted through electrical stimulation every 15 days, and the controls consisted of spermatophores obtained directly from nature. No significant difference between diets was observed comparing shrimp and spermatophore weights. The 100% fresh diet provided the best sperm survival performance.

A aplicação de biotecnologias na reprodução animal tem possibilitado produzir formas jovens em quantidade e qualidade. O aumento da quantidade de gametas viáveis produzidos pelos reprodutores, mediante uma dieta ideal, entre outros fatores, pode garantir uma maior produção. Assim, o objetivo deste trabalho foi determinar o efeito de três dietas quanto à sobrevivência espermática de Macrobrachium acanthurus. Para tanto, 24 machos de M. acanthurus foram utilizados, sendo distribuídos ao acaso e de forma igual entre os tratamentos. As dietas foram compostas por 100% de alimento fresco (músculo de peixe e lula - 14% de proteína), 100% de alimento seco (ração comercial - 50% de proteína) e uma mescla dessas dietas contendo 30% de proteína. Os espermatóforos foram extraídos por eletroestimulação a cada 15 dias, sendo o controle aqueles obtidos diretamente da natureza. Não houve diferença significativa entre as dietas quando comparado os pesos dos camarões e dos espermatóforos. A alimentação 100% fresca proporcionou o melhor desempenho para a sobrevivência espermática.

Diets for Macrobrachium acanthurus breeders: Sperm evaluation / Dietas para reprodutores de Macrobrachium acanthurus: avaliação espermática

The application of biotechnology in animal reproduction has enabled the production of young forms in both quantity and quality. Increasing the number of viable gametes produced by reproducers, among other factors, through an ideal diet, can ensure higher production. Therefore, the aim of this study was to determine the influence of three diets on the sperm survival of Macrobrachium acanthurus. To this end, 24 M. acanthurus males were used, distributed randomly and equally among treatments. Their diets were composed of 100% fresh food (fish and squid muscle - 14% protein), 100% dry feed (commercial feed - 50% protein) and a mixture of these diets containing 30% protein. Spermatophores were extracted through electrical stimulation every 15 days, and the controls consisted of spermatophores obtained directly from nature. No significant difference between diets was observed comparing shrimp and spermatophore weights. The 100% fresh diet provided the best sperm survival performance.(AU)

A aplicação de biotecnologias na reprodução animal tem possibilitado produzir formas jovens em quantidade e qualidade. O aumento da quantidade de gametas viáveis produzidos pelos reprodutores, mediante uma dieta ideal, entre outros fatores, pode garantir uma maior produção. Assim, o objetivo deste trabalho foi determinar o efeito de três dietas quanto à sobrevivência espermática de Macrobrachium acanthurus. Para tanto, 24 machos de M. acanthurus foram utilizados, sendo distribuídos ao acaso e de forma igual entre os tratamentos. As dietas foram compostas por 100% de alimento fresco (músculo de peixe e lula - 14% de proteína), 100% de alimento seco (ração comercial - 50% de proteína) e uma mescla dessas dietas contendo 30% de proteína. Os espermatóforos foram extraídos por eletroestimulação a cada 15 dias, sendo o controle aqueles obtidos diretamente da natureza. Não houve diferença significativa entre as dietas quando comparado os pesos dos camarões e dos espermatóforos. A alimentação 100% fresca proporcionou o melhor desempenho para a sobrevivência espermática.(AU)

Effectiveness of tes-tris or tris association with low density lipoprotein on in vitro longevity of refrigerated buffalo semen / Eficácia da associação TES-TRIS ou TRIS com lipoproteína de baixa densidade sobre a longevidade in vitro de sêmen refrigerado de búfalos

This study investigated in vitro the efficacy of four different extenders (TES-TRIS and TRIS with LDL low-density lipoprotein at concentrations of 10 or 5%) on the longevity of buffalo sperm in the refrigeration process at 5ºC. Sperm motility was assessed every 24 hours up to 72 hours of incubation using computer assisted sperm analysis and sperm membrane integrity was examined by the hypoosmotic test (HOST) at T1, T24, T48 and T72 hours. Eleven buffaloes (1 ejaculate per buffalo) of the Murrah breed were used, ranging in age from 4 to 5 years. Immediately after collection, each ejaculate was fractionated into 4 aliquots, and each aliquot was diluted in one of four diluents to obtain 50x106SPTZ/mL. The samples were packed in 0.5mL straws and refrigerated (-0.25°C/min) to 5°C and maintained at this temperature until evaluation. Prior to evaluation the samples were heated at 37°C for 30 seconds. The statistical package used for analysis was STATA 12.0 "Statistical Analysis Software" and means were compared by the Friedman test (P<0.05). The results of sperm kinetics and HOST indicate that the TRIS diluent with 10% LDL could be a promising alternative for semen refrigeration at 5ºC, to be used in conventional and fixed time artificial insemination.(AU)

Este estudo investigou in vitro a eficácia de quatro diferentes extensores (TES-TRIS e TRIS com lipoproteína de baixa densidade - LDL, nas concentrações de 10 ou 5%) sobre a longevidade espermática de búfalos no processo de refrigeração a 5ºC. A motilidade espermática foi avaliada a cada 24 horas até 72 horas de incubação, por sistema computadorizado "CASA", e a integridade de membrana espermática foi examinada pelo teste hiposmótico (HOST) em T1, T24, T48 e T72 horas. Foram utilizados 11 búfalos (um ejaculado por búfalo) da raça Murrah, com idade variando de quatro a cinco anos. Imediatamente após a coleta, cada ejaculado foi fracionado em quatro alíquotas, e cada alíquota foi diluída em um dos quatro diluidores para a obtenção de 50x106 SPTZ/mL. As amostras foram envasadas em palhetas de 0,5 mL, refrigeradas (-0,25oC/minuto) até 5oC e mantidas nessa temperatura até a avaliação. Previamente à avaliação, as amostras foram aquecidas a 37oC por 30 segundos. O pacote estatístico utilizado para as análises foi o STATA 12.0 "Statistical Analysis Software", e as médias foram comparadas pelo teste de Friedman (P<0,05). Os resultados de cinética e HOST até o tempo de 48 horas indicam que o diluidor TRIS com 10% LDL seria uma alternativa promissora para a refrigeração do sêmen a 5ºC, a ser utilizado na inseminação artificial e na inseminação artificial em tempo fixo.(AU)

Effectiveness of tes-tris or tris association with low density lipoprotein on in vitro longevity of refrigerated buffalo semen / Eficácia da associação TES-TRIS ou TRIS com lipoproteína de baixa densidade sobre a longevidade in vitro de sêmen refrigerado de búfalos

This study investigated in vitro the efficacy of four different extenders (TES-TRIS and TRIS with LDL low-density lipoprotein at concentrations of 10 or 5%) on the longevity of buffalo sperm in the refrigeration process at 5ºC. Sperm motility was assessed every 24 hours up to 72 hours of incubation using computer assisted sperm analysis and sperm membrane integrity was examined by the hypoosmotic test (HOST) at T1, T24, T48 and T72 hours. Eleven buffaloes (1 ejaculate per buffalo) of the Murrah breed were used, ranging in age from 4 to 5 years. Immediately after collection, each ejaculate was fractionated into 4 aliquots, and each aliquot was diluted in one of four diluents to obtain 50x106SPTZ/mL. The samples were packed in 0.5mL straws and refrigerated (-0.25°C/min) to 5°C and maintained at this temperature until evaluation. Prior to evaluation the samples were heated at 37°C for 30 seconds. The statistical package used for analysis was STATA 12.0 "Statistical Analysis Software" and means were compared by the Friedman test (P<0.05). The results of sperm kinetics and HOST indicate that the TRIS diluent with 10% LDL could be a promising alternative for semen refrigeration at 5ºC, to be used in conventional and fixed time artificial insemination.(AU)

Este estudo investigou in vitro a eficácia de quatro diferentes extensores (TES-TRIS e TRIS com lipoproteína de baixa densidade - LDL, nas concentrações de 10 ou 5%) sobre a longevidade espermática de búfalos no processo de refrigeração a 5ºC. A motilidade espermática foi avaliada a cada 24 horas até 72 horas de incubação, por sistema computadorizado "CASA", e a integridade de membrana espermática foi examinada pelo teste hiposmótico (HOST) em T1, T24, T48 e T72 horas. Foram utilizados 11 búfalos (um ejaculado por búfalo) da raça Murrah, com idade variando de quatro a cinco anos. Imediatamente após a coleta, cada ejaculado foi fracionado em quatro alíquotas, e cada alíquota foi diluída em um dos quatro diluidores para a obtenção de 50x106 SPTZ/mL. As amostras foram envasadas em palhetas de 0,5 mL, refrigeradas (-0,25oC/minuto) até 5oC e mantidas nessa temperatura até a avaliação. Previamente à avaliação, as amostras foram aquecidas a 37oC por 30 segundos. O pacote estatístico utilizado para as análises foi o STATA 12.0 "Statistical Analysis Software", e as médias foram comparadas pelo teste de Friedman (P<0,05). Os resultados de cinética e HOST até o tempo de 48 horas indicam que o diluidor TRIS com 10% LDL seria uma alternativa promissora para a refrigeração do sêmen a 5ºC, a ser utilizado na inseminação artificial e na inseminação artificial em tempo fixo.(AU)

Padronização do Sperm Class Analyzer® (SCA®) para avaliação de espermatozoides equinos criopreservados / [Standardization of the Sperm Class Analyzer® (SCA®) for the evaluation of cryopreserved equine sperm]

Objetivou-se, no primeiro experimento, avaliar o efeito da velocidade de captura de imagens de 25Hz, 30Hz e 50Hz na cinética dos espermatozoides equinos criopreservados. Todas as velocidades mostraram-se adequadas para capturar o movimento espermático (P>0,05). No segundo experimento, objetivou-se avaliar o efeito da deposição de sêmen em lâmina sob lamínula, Leja®10 e 20, na cinética espermática. O uso de lâmina e lamínula foi superior às lejas para manter a LIN e o WOB (P<0,05). No terceiro experimento, objetivou-se avaliar o efeito das concentrações de 25, 50 e 100x106 na cinética espermática. As concentrações de 25 e 50 x106 foram superiores a 100x106 para preservar a LIN, a STR e a BCF e não afetar negativamente a motilidade (P<0,05). No quarto experimento, objetivou-se avaliar o efeito dos diluidores BotuCrio®, BotuSêmen®, TALP sperm e da solução fisiológica na cinética espermática. O BotuCrio® foi superior a todos os diluidores em preservar a BCF e os hiperativos (P<0,05). Conclui-se que o emprego da velocidade de captura entre 25 e 50Hz, a deposição do sêmen entre lâmina e lamínula e a rediluição em diluidor de congelação para atingir 25 a 50x106 de espermatozoides/mL são ideais para o SCA® avaliar, de forma fidedigna, o sêmen equino criopreservado.(AU)

The objective of the first experiment was to evaluate the effect of 25, 30 and 50Hz frame acquisition rate on equine cryopreserved sperm. All frame acquisition rates tested were adequate to capture the sperm movement (P>0.05). The aim of the second experiment was to evaluate the effect of chambers, slide-coverslip, Leja®10 and 20 on sperm movement. The use of slide-coverslip was superior to maintain LIN and WOB (P<0.05). The aim of the third experiment was to evaluate the effect of 25, 50 and 100x106 sperm/mL concentration on sperm movement. Concentrations of 25 and 50x106 sperm/mL were greater than 100x106 to preserve LIN, STR and BCF and did not adversely affect motility (P<0.05). The aim of the fourth experiment was to evaluate the effect of BotuCrio®, BotuSêmen®, TALP sperm and physiological solution on sperm movement. BotuCrio® was superior among other extenders in preserving BCF and hyperactive (P<0.05). It is concluded that the use of the frame acquisition rate between 25 and 50 Hz; the deposition of semen between slide and coverslip and new dilution in the freezing extender to 25-50x106 of sperm/mL is ideal to reliably evaluate cryopreserved equine semen by SCA®.(AU)

Padronização do Sperm Class Analyzer® (SCA®) para avaliação de espermatozoides equinos criopreservados / [Standardization of the Sperm Class Analyzer® (SCA®) for the evaluation of cryopreserved equine sperm]

Objetivou-se, no primeiro experimento, avaliar o efeito da velocidade de captura de imagens de 25Hz, 30Hz e 50Hz na cinética dos espermatozoides equinos criopreservados. Todas as velocidades mostraram-se adequadas para capturar o movimento espermático (P>0,05). No segundo experimento, objetivou-se avaliar o efeito da deposição de sêmen em lâmina sob lamínula, Leja®10 e 20, na cinética espermática. O uso de lâmina e lamínula foi superior às lejas para manter a LIN e o WOB (P<0,05). No terceiro experimento, objetivou-se avaliar o efeito das concentrações de 25, 50 e 100x106 na cinética espermática. As concentrações de 25 e 50 x106 foram superiores a 100x106 para preservar a LIN, a STR e a BCF e não afetar negativamente a motilidade (P<0,05). No quarto experimento, objetivou-se avaliar o efeito dos diluidores BotuCrio®, BotuSêmen®, TALP sperm e da solução fisiológica na cinética espermática. O BotuCrio® foi superior a todos os diluidores em preservar a BCF e os hiperativos (P<0,05). Conclui-se que o emprego da velocidade de captura entre 25 e 50Hz, a deposição do sêmen entre lâmina e lamínula e a rediluição em diluidor de congelação para atingir 25 a 50x106 de espermatozoides/mL são ideais para o SCA® avaliar, de forma fidedigna, o sêmen equino criopreservado.(AU)

The objective of the first experiment was to evaluate the effect of 25, 30 and 50Hz frame acquisition rate on equine cryopreserved sperm. All frame acquisition rates tested were adequate to capture the sperm movement (P>0.05). The aim of the second experiment was to evaluate the effect of chambers, slide-coverslip, Leja®10 and 20 on sperm movement. The use of slide-coverslip was superior to maintain LIN and WOB (P<0.05). The aim of the third experiment was to evaluate the effect of 25, 50 and 100x106 sperm/mL concentration on sperm movement. Concentrations of 25 and 50x106 sperm/mL were greater than 100x106 to preserve LIN, STR and BCF and did not adversely affect motility (P<0.05). The aim of the fourth experiment was to evaluate the effect of BotuCrio®, BotuSêmen®, TALP sperm and physiological solution on sperm movement. BotuCrio® was superior among other extenders in preserving BCF and hyperactive (P<0.05). It is concluded that the use of the frame acquisition rate between 25 and 50 Hz; the deposition of semen between slide and coverslip and new dilution in the freezing extender to 25-50x106 of sperm/mL is ideal to reliably evaluate cryopreserved equine semen by SCA®.(AU)