Immunogenicity of Streptococcus equi subsp. equi recombinant SeM protein and bacterin in mice

ABSTRACT: The infection caused by Streptococcus equi, known as strangles, affects the respiratory system of horses, causing high morbidity and rapid spread among the herd. Bacterin vaccines, composed of inactivated whole cells of S. equi, have variable efficacy and duration. Infected animals produce specific antibodies against SeM, the immunodominant antigen of S. equi. This makes it a promising target for vaccine development. In this context, the objective of this work was to evaluate a vaccine combining S. equi bacterin and recombinant SeM protein. Mice were vaccinated with bacterin (S. equi ~1.2 × 108CFU/ml); rSeM protein (20g); bacterin-rSeM combination; or PBS (Control Group) and challenged with a suspension of S. equi, containing 10 × LD50. All vaccinated mice survived the challenge and produced anti-rSeM and anti-S. equi antibodies, which were assessed by indirect ELISA. The Control Group reached endpoint criteria 96 h after infection. These results demonstrate that a vaccine combining the S. equi bacterin with rSeM protein protects mice against strangles. This combination vaccine could potentially protect horses and overcome the limitations of currently available strangle vaccines.

RESUMO: A infecção causada por Streptococcus equi, denominada adenite, atinge o sistema respiratório de equinos, causando alta morbidade e rápida disseminação entre o rebanho. Vacinas bacterinas, compostas de células inteiras inativadas de S. equi apresentam eficácia e duração variáveis. Animais infectados apresentam anticorpos específicos à proteína SeM, antígeno imunodominante de S. equi, o que a torna um alvo promissor para o desenvolvimento de vacinas. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi avaliar uma vacina baseada na administração simultânea da bacterina e da proteína SeM recombinante. Camundongos foram vacinados com a bacterina (S. equi ~1.2 × 108CFU/ml); a proteína rSeM (20g); a bacterina e rSeM simultaneamente; ou PBS (Grupo Controle) e, posteriormente, foram desafiados com uma suspensão de S. equi contendo 10 × LD50. Todos os animais vacinados apresentaram anticorpos anti-rSeM e contra S. equi, avaliados através de ELISA indireto, e mantiveram-se e sobreviveram ao desafio letal. O Grupo Controle atingiu critérios de endpoint 96 h após a infecção. Estes resultados demonstram que uma vacina constituída de células inteiras de S. equi com rSeM protege camundongos contra adenite, sugerindo a capacidade de proteção a equinos e, possivelmente, superando as limitações das vacinas contra adenite atualmente disponíveis.

Immunogenicity of Streptococcus equi subsp. equi recombinant SeM protein and bacterin in mice / Imunogenicidade da proteína recombinante SeM de Streptococcus equi subsp. equi e da bacterina em camundongos

The infection caused by Streptococcus equi, known as strangles, affects the respiratory system of horses, causing high morbidity and rapid spread among the herd. Bacterin vaccines, composed of inactivated whole cells of S. equi, have variable efficacy and duration. Infected animals produce specific antibodies against SeM, the immunodominant antigen of S. equi. This makes it a promising target for vaccine development. In this context, the objective of this work was to evaluate a vaccine combining S. equi bacterin and recombinant SeM protein. Mice were vaccinated with bacterin (S. equi ~1.2 × 108CFU/ml); rSeM protein (20μg); bacterin-rSeM combination; or PBS (Control Group) and challenged with a suspension of S. equi, containing 10 × LD50. All vaccinated mice survived the challenge and produced anti-rSeM and anti-S. equi antibodies, which were assessed by indirect ELISA. The Control Group reached endpoint criteria 96 h after infection. These results demonstrate that a vaccine combining the S. equi bacterin with rSeM protein protects mice against strangles. This combination vaccine could potentially protect horses and overcome the limitations of currently available strangle vaccines.(AU)

A infecção causada por Streptococcus equi, denominada adenite, atinge o sistema respiratório de equinos, causando alta morbidade e rápida disseminação entre o rebanho. Vacinas bacterinas, compostas de células inteiras inativadas de S. equi apresentam eficácia e duração variáveis. Animais infectados apresentam anticorpos específicos à proteína SeM, antígeno imunodominante de S. equi, o que a torna um alvo promissor para o desenvolvimento de vacinas. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi avaliar uma vacina baseada na administração simultânea da bacterina e da proteína SeM recombinante. Camundongos foram vacinados com a bacterina (S. equi ~1.2 × 108CFU/ml); a proteína rSeM (20μg); a bacterina e rSeM simultaneamente; ou PBS (Grupo Controle) e, posteriormente, foram desafiados com uma suspensão de S. equi contendo 10 × LD50. Todos os animais vacinados apresentaram anticorpos anti-rSeM e contra S. equi, avaliados através de ELISA indireto, e mantiveram-se e sobreviveram ao desafio letal. O Grupo Controle atingiu critérios de endpoint 96 h após a infecção. Estes resultados demonstram que uma vacina constituída de células inteiras de S. equi com rSeM protege camundongos contra adenite, sugerindo a capacidade de proteção a equinos e, possivelmente, superando as limitações das vacinas contra adenite atualmente disponíveis.(AU)

Immunogenicity of Streptococcus equi subsp. equi recombinant SeM protein and bacterin in mice / Imunogenicidade da proteína recombinante SeM de Streptococcus equi subsp. equi e da bacterina em camundongos

The infection caused by Streptococcus equi, known as strangles, affects the respiratory system of horses, causing high morbidity and rapid spread among the herd. Bacterin vaccines, composed of inactivated whole cells of S. equi, have variable efficacy and duration. Infected animals produce specific antibodies against SeM, the immunodominant antigen of S. equi. This makes it a promising target for vaccine development. In this context, the objective of this work was to evaluate a vaccine combining S. equi bacterin and recombinant SeM protein. Mice were vaccinated with bacterin (S. equi ~1.2 × 108CFU/ml); rSeM protein (20μg); bacterin-rSeM combination; or PBS (Control Group) and challenged with a suspension of S. equi, containing 10 × LD50. All vaccinated mice survived the challenge and produced anti-rSeM and anti-S. equi antibodies, which were assessed by indirect ELISA. The Control Group reached endpoint criteria 96 h after infection. These results demonstrate that a vaccine combining the S. equi bacterin with rSeM protein protects mice against strangles. This combination vaccine could potentially protect horses and overcome the limitations of currently available strangle vaccines.(AU)

A infecção causada por Streptococcus equi, denominada adenite, atinge o sistema respiratório de equinos, causando alta morbidade e rápida disseminação entre o rebanho. Vacinas bacterinas, compostas de células inteiras inativadas de S. equi apresentam eficácia e duração variáveis. Animais infectados apresentam anticorpos específicos à proteína SeM, antígeno imunodominante de S. equi, o que a torna um alvo promissor para o desenvolvimento de vacinas. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi avaliar uma vacina baseada na administração simultânea da bacterina e da proteína SeM recombinante. Camundongos foram vacinados com a bacterina (S. equi ~1.2 × 108CFU/ml); a proteína rSeM (20μg); a bacterina e rSeM simultaneamente; ou PBS (Grupo Controle) e, posteriormente, foram desafiados com uma suspensão de S. equi contendo 10 × LD50. Todos os animais vacinados apresentaram anticorpos anti-rSeM e contra S. equi, avaliados através de ELISA indireto, e mantiveram-se e sobreviveram ao desafio letal. O Grupo Controle atingiu critérios de endpoint 96 h após a infecção. Estes resultados demonstram que uma vacina constituída de células inteiras de S. equi com rSeM protege camundongos contra adenite, sugerindo a capacidade de proteção a equinos e, possivelmente, superando as limitações das vacinas contra adenite atualmente disponíveis.(AU)

Protective efficacy of commercial vaccines against a virulent field strain of Clostridium chauvoei / Eficácia protetiva de vacinas comerciais contra uma cepa de campo virulenta de Clostridium chauvoei

Blackleg is an acute and frequently fatal infection that mainly affects cattle and is caused by Clostridium chauvoei. Formalin-killed, whole-cell vaccines are commonly used to control blackleg. The aim of this study was to verify the protective efficacy of two commercial vaccines against the infection of guinea pigs with two strains of C. chauvoei, a virulent field strain (SBP 07/09) and the reference strain used in official tests (Manguinhos-Teixeira or MT). The strains used in the challenge were characterized by whole genome sequencing, and the minimal inhibitory concentrations of 15 antimicrobials were determined. To assess the protective efficacy, guinea pigs were vaccinated and subsequently challenged with C. chauvoei. All four vaccinated and challenged groups seroconverted after vaccination, while the control group remained seronegative, as determined by indirect ELISA. The identical performance of the two C. chauvoei strains in terms of virulence after challenge and their inability to infect vaccinated animals was correlated with their high genetic homology. Both commercial vaccines showed good protective efficacy against both the reference and field strains. Although C. chauvoei vaccination failures have been reported, the results from our study and others reported high similarity among C. chauvoei strains from all over the world, which suggests that the vaccine failures are not due to antigenic variability but inadequate vaccine management.(AU)

O carbúnculo sintomático é uma infecção aguda e frequentemente fatal que afeta principalmente os bovinos, causada pelo Clostridium chauvoei. A administração de vacinas formolizadas compostas pelas células bacterianas inteiras é comumente utilizada no controle desta doença. O objetivo deste estudo foi verificar, em cobaios, a eficácia protetiva de duas vacinas comerciais contra duas cepas de Clostridium chauvoei, uma cepa de campo virulenta (SBP 07/09) e a cepa de referência utilizada nos testes oficiais (MT, Manguinhos-Teixeira). Adicionalmente, realizar a caracterização das cepas utilizadas no desafio pelo sequenciamento completo do genoma e pela determinação da concentração inibitória mínima frente a 15 antimicrobianos. Para tanto, os cobaios foram vacinados e subsequentemente desafiados com. Os quatro grupos vacinados e desafiados soroconverteram, enquanto que o grupo controle permaneceu soronegativo pelo teste de ELISA indireto. O desempenho idêntico das duas cepas de C. chauvoei após o desafio in vivo e a incapacidade de infectar os animais vacinados está correlacionado com a homologia genética das cepas. Além disso, ambas as vacinas comerciais demonstraram uma adequada eficácia protetiva contra as cepas de campo e de referência. Embora o insucesso das vacinações contra C. chauvoei tenha sido previamente relatado, os resultados deste estudo, juntamente com a alta similaridade genética reportada previamente em cepas provenientes de diferentes continentes sugerem que as falhas vacinais não estão relacionadas à variabilidade antigênica, mas sim ao manejo vacinal inadequado.(AU)

Protective efficacy of commercial vaccines against a virulent field strain of Clostridium chauvoei / Eficácia protetiva de vacinas comerciais contra uma cepa de campo virulenta de Clostridium chauvoei

Blackleg is an acute and frequently fatal infection that mainly affects cattle and is caused by Clostridium chauvoei. Formalin-killed, whole-cell vaccines are commonly used to control blackleg. The aim of this study was to verify the protective efficacy of two commercial vaccines against the infection of guinea pigs with two strains of C. chauvoei, a virulent field strain (SBP 07/09) and the reference strain used in official tests (Manguinhos-Teixeira or MT). The strains used in the challenge were characterized by whole genome sequencing, and the minimal inhibitory concentrations of 15 antimicrobials were determined. To assess the protective efficacy, guinea pigs were vaccinated and subsequently challenged with C. chauvoei. All four vaccinated and challenged groups seroconverted after vaccination, while the control group remained seronegative, as determined by indirect ELISA. The identical performance of the two C. chauvoei strains in terms of virulence after challenge and their inability to infect vaccinated animals was correlated with their high genetic homology. Both commercial vaccines showed good protective efficacy against both the reference and field strains. Although C. chauvoei vaccination failures have been reported, the results from our study and others reported high similarity among C. chauvoei strains from all over the world, which suggests that the vaccine failures are not due to antigenic variability but inadequate vaccine management.

O carbúnculo sintomático é uma infecção aguda e frequentemente fatal que afeta principalmente os bovinos, causada pelo Clostridium chauvoei. A administração de vacinas formolizadas compostas pelas células bacterianas inteiras é comumente utilizada no controle desta doença. O objetivo deste estudo foi verificar, em cobaios, a eficácia protetiva de duas vacinas comerciais contra duas cepas de Clostridium chauvoei, uma cepa de campo virulenta (SBP 07/09) e a cepa de referência utilizada nos testes oficiais (MT, Manguinhos-Teixeira). Adicionalmente, realizar a caracterização das cepas utilizadas no desafio pelo sequenciamento completo do genoma e pela determinação da concentração inibitória mínima frente a 15 antimicrobianos. Para tanto, os cobaios foram vacinados e subsequentemente desafiados com. Os quatro grupos vacinados e desafiados soroconverteram, enquanto que o grupo controle permaneceu soronegativo pelo teste de ELISA indireto. O desempenho idêntico das duas cepas de C. chauvoei após o desafio in vivo e a incapacidade de infectar os animais vacinados está correlacionado com a homologia genética das cepas. Além disso, ambas as vacinas comerciais demonstraram uma adequada eficácia protetiva contra as cepas de campo e de referência. Embora o insucesso das vacinações contra C. chauvoei tenha sido previamente relatado, os resultados deste estudo, juntamente com a alta similaridade genética reportada previamente em cepas provenientes de diferentes continentes sugerem que as falhas vacinais não estão relacionadas à variabilidade antigênica, mas sim ao manejo vacinal inadequado.

Aplicação da proteômica de Leptospira e ferramentas de imunoinformática para a identificação de candidatos ao desenvolvimento de uma vacina contra leptospirose

A leptospirose é uma zoonose causada por espiroquetas do gênero Leptospira, que tem um impacto significativo em saúde pública com mais de um milhão de novas infecções e 59 mil mortes por ano, além de grandes perdas econômicas na agropecuária. A falta de uma vacina totalmente eficaz contra a doença é um dos principais fatores que comprometem o seu controle, por isso é emergencial o desenvolvimento de novas vacinas que seja capaz de superar as limitações das vacinais disponíveis no mercado atualmente, e que possa ser empregada em populações humanas globalmente. Por isso, o objetivo deste estudo foi realizar uma avaliação completa do perfil proteico de Leptospira interrogans sorovar Copenhageni cepa M20, com caracterização in silico das proteínas desconhecidas e das proteínas com capacidade de gerar resposta imune para compor uma vacina multiepítopo. Para a realização da proteômica foi desenvolvido um protocolo simplificado de obtenção do extrato proteico seguido pela espectrometria de massas LTQ-Orbitrap Velos acoplado à cromatografia líquida EASY-nLC II. As proteínas encontradas passaram por uma avaliação ampla, como análise taxonômica para identificação das proteínas comuns à outras espécies e sorovares da bactéria, descrição dos grupos funcionais, design da estrutura tridimensional de proteínas importantes no estudo da Leptospira e caracterização in silico das proteínas não caracterizadas e das proteínas já identificadas como geradoras de resposta imune. A partir daí foram utilizados diversos servidores para realização das análises de imunoinformática, visando a identificação e de seleção das proteínas com maior potencial para alvo vacinal e subsequente seleção dos melhores epítopos, capazes de estimular resposta imune humoral e celular. As proteínas Loa 22, LipL32, Flagelina, Fator de elongação Tu e Fator de elongação Ts, tiveram sua estrutura tridimensional desenvolvida e validada. Dentre as proteínas selecionadas com maior potencial para alvo vacinal, a maioria correspondeu a proteínas não caracterizadas até então. Este estudo também identificou epítopos de células B, de Linfócito T Citotóxico, de Linfócito T Helper, de células TCD4 e indutores de IFN-, que foram reunidos através de um design racional para constituir em uma proteína quimérica multiepítopo a ser empregada como alvo vacinal com potencial para superar as limitações da bacterina utilizada atualmente. O estudo do perfil proteico de Leptospira associado a triagem de alvos vacinais, por meio da imunoinformática, resultou na construção de uma proteína quimérica, com características desejáveis para um imunógeno no processo de desenvolvimento da vacina.

Leptospirosis is a zoonosis caused by spirochetes of the Leptospira genus, which causes a significant impact on public health, with more than one million new infections and 59,000 deaths each year, moreover major economic losses in agriculture. Lack of an fully effective vaccine against the disease is one of the main factors that compromise its control, so it is urgent to develop new vaccines that is able to overcoming the limitations of vaccines currently available, that can be used in human populations globally. Therefore, the aim of this study was to fully evaluate the protein profile of Leptospira interrogans serovar Copenhageni strain M20, with in silico characterization of uncharacterized proteins and proteins that is able to induce immune response and compose a subunit vaccine. To perform proteomics, a simplified protocol for obtaining protein extract was developed followed by mass spectrometry LTQ-Orbitrap Velos coupled to liquid chromatography EASY-nLC II. The proteins found undego a full evaluation, like a taxonomic analysis to identify common proteins to other species and serovars of the bacterium; description of functional categories; design of the three-dimensional structure of important proteins in the Leptospira study and in silico characterization of uncharacterized proteins and proteins already identified as induce an immune response. Then, many servers were used to perform immunoinformatics analysis, aiming to identify and select the proteins with the major potential for vaccine target and subsequent selection of the best epitopes able to stimulating humoral and cellular immunity. Proteins Loa 22, LipL32, Flagellin, Elongation fator Tu and Elongation fator Ts had their three-dimensional structure developed and validated. Among the selected proteins with the major vaccine target potential, most are uncharacterized proteins until then. This study also identified epitopes of B cell, of cytotoxic T lymphocyte, of helper T lymphocyte, of TCD4 cell and of IFN- inducers. This epitopes have been assembled through rational design to constitute a multi-epitope chimeric protein that can be used as a vaccine target with potential for overcome the bacterin limitations. The detailed study of Leptospira protein profile associated with the screening of vaccine targets by immunoinformatics resulted in the design of a chimeric protein, with desirable characteristics for an immunogen in the vaccine development process.

AVALIAÇÃO DA IMUNIDADE MATERNA NA PROGÊNIE DE REPRODUTORAS PESADAS VACINADAS COM UM CANDIDATO VACINAL RECOMBINANTE CONTRA Salmonella Enteretidis

Salmonella enterica subsp. enterica serovar Enteritidis (SE) é o principal agente de doenças transmitidas por alimentos (DTA) em seres humanos. Vacinação apresenta-se como uma das ferramentas mais utilizadas para prevenir a colonização e infecção por SE em aves. O presente estudo avaliou a eficácia de um candidato vacinal recombinante contra SE. Trinta aves matrizes pesadas e cinco aves machos com 10 semanas e status Salmonella-free foram alojadas e divididos em 3 grupos: não vacinado (NV), vacinado com candidato vacinal recombinante (VAC) e vacinado com bacterina comercial (BAC). Amostras de soro e ovos embrionados foram colhidos em dois períodos após a dose booster, para quantificação da taxa de transferência de IgY para os ovos e a progênie. Quarenta pintos de um dia da progênie foram divididos em dois grupos, NV e VAC, e desafiados com 107 UFC de SE no segundo dia de vida. Soro, fragmentos de intestino e fígado e conteúdo cecal foram colhidos em cada grupo. Os níveis de IgY foram significativamente maiores no grupo VAC comparado com o NV em todos os períodos no soro e gema de ovos embrionados de matrizes pesadas e no soro das progênies, sendo as taxas de transferências de IgY maiores no grupo VAC comparado com grupo BAC. Foram encontradas maiores relações vilo-cripta no duodeno, jejuno e íleo a 4 dpi na progênie do grupo VAC. Foi utilizado uma elevada dose desafio de SE (107 UFC/pinto), no entanto, apesar da forte resposta imune, não houve diferença estatística na recuperação de SE no conteúdo cecal das progênies. Assim, outros estudos sobre a capacidade de estímulo a resposta imune mediada por células, a proteção a diferentes doses desafio e capacidade de proteção direta na ave vacinada, auxiliarão na elaboração dessa vacina.

Salmonella enterica subsp. enterica serovar Enteritidis (SE) is the main cause of foodborne diseases (FBD) in humans. Vaccination is one of the most used tools to prevent colonization and infection by SE in birds. The present study evaluated the effectiveness of a candidate for SE recombinant vaccine. Thirty broiler breeders and five roosters with 10 weeks age and Salmonella-free status were housed and divided into 3 groups: unvaccinated (UV), vaccinated with recombinant vaccine candidate (VAC) and vaccinated with commercial bacterin (BAC). Samples of serum and embryonated eggs were collected 7 and 12 weeks after the booster dose, to quantify the transfer rate of IgY to the eggs and the progeny. Forty day-old progeny chicks were divided into two groups, UV and VAC, and challenged with 107 CFU of SE on the second day of life. Serum, fragments of intestine and liver and cecal content were collected in each group. The IgY levels were significantly higher in the VAC group compared to the UV in all periods in the egg yolk and broiler breeders serum and in the progenys serum, with the IgY transfer rates being higher in the VAC group compared to the BAC group. Greater vilo-crypt ratio were found in the duodenum, jejunum and ileum at 4 dpi in the progeny of the VAC group. A high challenge dose of SE (107 CFU / chick) was used, however, despite the strong immune response, there were no statistical difference in the recovery of SE in the progenies cecal contents. Thus, more studies on the ability to stimulate the cell-mediated immune response, the protection at different challenge doses and the ability to directly protect the vaccinated poultry will assist in the development of this vaccine.

SUPERDOSING DE FITASES SOBRE O DESEMPENHO, QUALIDADE ÓSSEA E BEM ESTAR DE POEDEIRAS COMERCIAIS LEVES

A fitase é uma enzima bastante utilizada na nutrição de monogástricos, e tem por principal benefício a capacidade de promover a liberação do fósforo fítico presente nos alimentos, melhorando sua digestibilidade, liberando os nutrientes que estavam complexados a molécula de fitato, dentre estes alguns minerais com efeito antioxidante. O uso de superdosagens de fitase tem despertado o interesse dos pesquisadores, pela maior degradação do fitato, com consequente liberação de mais nutrientes. Assim objetivou-se avaliar dois tipos de fitases (bacteriana e fúngica) em duas dosagens (450 e 900 FTUs) e uma dieta controle sobre o desempenho, qualidade óssea e bem-estar de poedeiras leves. Utilizaram-se 270 poedeiras leves da linhagem Hy-Line White, em primeiro e segundo ciclos produtivos (58 a 107 semanas de idade). Foram avaliados o desempenho, qualidade de ovos, variáveis biométricas, características ósseas, respostas termorreguladoras e comportamentais, além das variáveis ambientais. No primeiro ciclo, a produção de ovos foi maior nos tratamentos com fitase bacterina e o peso do ovo foi maior nos tratamentos com fitase fúngica. A matéria mineral apresentou maior valor nos tratamentos que continham a dosagem de 450 FTUs. A frequência respiratória (FR), temperatura da cloaca (TC), temperatura superficial com (TSCP) e sem pena (TSSP) foram maiores à tarde, enquanto o gradiente térmico (GT) foi mais elevado pela manhã. Aves suplementadas com fitase bacteriana apresentam respostas termorreguladoras e comportamentais diferentes das suplementadas com fitase fúngica pela manhã, no entanto, à tarde foram semelhantes. A expressão da atividade comendo foi maior pela manhã, enquanto à tarde, as aves permaneceram mais tempo sentadas. As dosagens de fitases (450 e 900 FTUs) não apresentaram efeito sobre as respostas termorreguladoras, comportamentais e de desempenho produtivo, porém quanto à fitase bacteriana, essa foi diferente da fúngica e sem suplementação. Em ordem de importância, a produção de ovos, conversão alimentar por dúzia de ovos e os comportamentos: sentada, explorando as penas e bicagem corresponderam a 81,10% das diferenças entres os três tratamentos (suplementação de fitase bacteriana e fúngica e sem suplementação). A fitase bacteriana melhora o desempenho de poedeiras leves, independente da dosagem utilizada e a dosagem de 450FTUs melhora a qualidade óssea de poedeiras leves, no primeiro ciclo produtivo. Ambas as fitases (bacteriana e fúngica) e dosagens (450 e 900 FTUs) são eficientes em promover melhora no desempenho e qualidade dos ovos de poedeiras leves em segundo ciclo produtivo. A suplementação com fitase bacteriana, independente da dosagem, melhora a produção de ovos, perfil termorregulador, comportamental e desempenho de poedeiras leves criadas em ambiente quente.

Phytase is an enzyme widely used in the nutrition of monogastrics, and its main benefit is the ability to promote the release of phytic phosphorus present in food, improving its digestibility, releasing the nutrients that were complexed to the phytate molecule, among these some minerals with antioxidant effect. The use of phytase superdosing has aroused the interest of researchers, due to the greater degradation of phytate, with consequent release of more nutrients. Thus, the objective was to evaluate two types of phytase (bacterial and fungal) in two dosages (450 and 900 FTUs) and a control diet on performance, bone quality and well-being of light layers. 270 light laying hens of the Hy-Line White lineage were used in the first and second productive cycles (58 to 107 weeks of age). Performance, egg quality, biometric variables, bone characteristics, thermoregulatory and behavioral responses, as well as environmental variables were evaluated. In the first cycle, egg production was higher in treatments with bacterial phytase and egg weight was higher in treatments with fungal phytase. The mineral matter showed greater value in the treatments that contained the dosage of 450 FTUs. Respiratory rate (RR), cloaca temperature (CT), surface temperature with (STWF) and without feather (STF) were higher in the afternoon, while the thermal gradient (TG) was higher in the morning. Birds supplemented with bacterial phytase show different thermoregulatory and behavioral responses than those supplemented with fungal phytase in the morning, however, in the afternoon they were similar. The expression of the activity eating was greater in the morning, while in the afternoon, the birds remained seated longer. The phytase dosages (450 and 900 FTUs) had no effect on the thermoregulatory, behavioral and productive performance responses, however, as for bacterial phytase, this was different from the fungal and without supplementation. In order of importance, egg production, feed conversion per dozen eggs and behaviors: sitting, exploring feathers and pecking corresponded to 81.10% of the differences between the three treatments (bacterial and fungal phytase supplementation and without supplementation). Bacterial phytase improves the performance of light laying hens, regardless of the dosage used and the dosage of 450FTUs improves the bone quality of light laying hens, in the first production cycle. Both phytases (bacterial and fungal) and dosages (450 and 900 FTUs) are efficient in promoting improvement in the performance and quality of light laying eggs in the second production cycle. Supplementation with bacterial phytase, regardless of dosage, improves egg production, thermoregulatory, behavioral profile and performance of light laying hens raised in a warm environment.

AVALIAÇÃO DE GENES E MOLÉCULAS PRÓ-INFLAMATÓRIAS EM JUNDIÁS (RHAMDIA QUELEN) VACINADOS OU INFECTADOS COM AEROMONAS HYDROPHILA

Nesse estudo avaliamos a cinética da atividade hemolítica natural do sistema do complemento, atividade da lisozima e mieloperoxidase sérica, e a cinética de expressão dos genes responsáveis pela codificação do fator alfa de necrose tumoral (Tumoral necrosis fator alfa = TNF-), da interleucina 1 (Interleukin 1- = IL-1), da proteína kinase 4 associada ao receptor de interleucina (Interleukin receptor associated kinase-4 = IRAK-4) e da enzima mieloperoxidase (Myeloperoxidase = MPO), em jundiás vacinados com uma bacterina de Aeromonas hydrophila ou infectados pela mesma bactéria. Os peixes foram aclimatados por duas semanas antes do início do experimento em três tanques (n = 36/tanque) cada qual constituindo um grupo experimental: (i) grupo controle (inoculado com solução salina fosfatada - PBS, pH 7,4); (ii) grupo vacinado, inoculado com 5x108 bactérias inativadas contendo 20% do adjuvante Montanide® Gel PR1; e (iii) grupo inoculado com 2x108 bactérias viáveis. Foram coletadas amostras de sangue para as análises imunológicas e de tecido (rim cranial) para extração de RNA/confecção de cDNA dos peixes de cada grupo antes do início das inoculações e 24h e 72h pós-inoculação. As análises imunológicas no soro dos peixes demonstraram que a atividade do sistema do complemento estava elevada 24 e 72 horas pós-inoculação nos peixes vacinados e infectados; no entanto, a atividade da mieloperoxidase foi maior nesses grupos somente 24h pós-inoculação e a atividade da lisozima estava elevada apenas no grupo infectado, 72 horas pós-inoculação. Além disso, nossos resultados mostraram que, nos peixes vacinados e/ou infectados, a expressão dos genes TNF-, IL-1 e MPO, 24h após a inoculação, foi maior em relação ao grupo controle; no entanto, a expressão do gene IRAK-4 permaneceu inalterada nos tempos avaliados. Os níveis de mRNA de todos os genes avaliados estavam próximos dos basais 72 horas pós-inoculação, sugerindo a ativação de mecanismo de regulação da inflamação. Os resultados indicam que a vacina gera uma resposta pró-inflamatória mediada pela expressão dos genes TNF-, IL-1b e MPO e incrementa mecanismos de combate aos patógenos via ação da MPO e do sistema do complemento. Esse efeito ocorre em níveis compatíveis aos da infecção pela mesma bactéria. Concluímos que a vacina potencializa os mecanismos efetores da resposta imune inata e tem potencial para ser utilizada como profilaxia contra infecções por A. hydrophila em jundiás.

In this work we evaluated the kinetics of the natural hemolytic activity of complement, serum lysozyme and myeloperoxidase activity, and the expression kinetics of the tumoral necrosis factor alfa (TNF-), interleukin 1- (IL-1), interleukin receptor associated kinase-4 (IRAK-4) and myeloperoxidase enzyme (MPO) in silver catfish vaccinated with Aeromonas hydrophila or infected with the same bacteria. The fish were acclimatized for two weeks prior to the experiment in three tanks (n = 36 fish/tank) each composing an experimental group: (i) the placebo group, inoculated with sterile phosphate buffered saline (PBS, pH 7.4); (ii) vaccinated group, inoculated with 5x108 inactivated A. hydrophila adjuvanted with Montanide® Gel PR1at 20%; and (iii) infected group, inoculated with 2x108 viable A. hydrophila. Blood samples were collected for immunological assays and head kidney for RNA extraction from fish (n=6/group) prior to and at 24 and 72 h post inoculation (p.i.). The natural hemolytic activity of complement, measured on serum samples, was higher at 24 and 72h p.i. in the vaccinated and infected groups; serum myeloperoxidase was also higher on these groups but only at 24h p.i. and lysozyme activity was higher only in the infected group at 72h p.i. In addition, in the vaccinated and or infected fish, the expression of TNF-, IL-1 e MPO genes at 24h p.i. was higher compared to the control group; however, the expression of IRAK-4 was not altered throughout the experiment. And, at 72h p.i., the mRNA levels of all evaluated genes were returned to basal levels as compared to the control group, suggesting the activation of a regulatory mechanism. Our results indicate that the vaccine induces a proinflammatory response mediated by the expression of TNF-, IL-1 e MPO genes and improved pathogen-combating mechanisms mediated by myeloperoxidase and natural complement system. We concluded the vaccine optimizes the effector mechanisms of the innate immune response and might be a useful tool in the prophylaxis of A. hydrophila infection in silver catfish.

Aditivos funcionais como alternativas para minimizar os impactos causados pelas micotoxinas na dieta de poedeiras e leitões

As micotoxinas são metabólitos tóxicos secundários produzidos por fungos filamentosos. As diversas espécies de micotoxinas são consideradas uma preocupação mundial quanto a saúde humana e animal. Na cadeia produtiva animal, as micotoxicoses prejudicam a produtividade dos animais. É preciso buscar alternativas que sejam capazes de minimizar os efeitos tóxicos das micotoxinas, por meio de ingredientes adicionados a alimentação com efeitos hepatoprotetores, de adsorção e inativação das toxinas. Desta forma, o objetivo foi determinar os impactos das micotoxinas aflatoxina B1 (AFLB1), T2 e fumonisina B1 (FB1), na produção avícola e de suínos, assim como verificar os efeitos da adição de biocolina vegetal (BV) e um adsorvente à base de lisado de Saccharomyces cerevisiae (LSC) na dieta contaminada desses animais. Para isso, foram realizados três experimentos distintos. No experimento 1, foram utilizadas 64 galinhas poedeiras, divididas em grupo controle T1 (alimentadas com ração basal), grupo T2 (ração basal suplementada com 800 mg/kg de BV), grupo T3 (ração basal contaminada com 2.5 mg/kg de AFLB1) e grupo T4 (ração com 800 mg/kg de BV+ 2.5 mg/kg de AFLAB1). O foco dessa pesquisa foi parâmetros de composição físico-químico de ovos, contagem bacterina total nos ovos (CBT), saúde das aves e desempenho zootécnico. A ingestão de aflatoxina reduziu a taxa de postura das galinhas e a BV não foi capaz de minimizar esse efeito negativo, porém a BV teve efeitos positivos na saúde das galinhas e melhorou a qualidade dos ovos através da ação antioxidante e antimicrobiana. No experimento 2, utilizamos 60 galinhas poedeiras, divididas em grupo NoC (ração basal sem contaminação experimental por micotoxinas, grupo C+ (ração contaminada com 4 ppm de T2 e 20 ppm de fumonisina), grupo C+D500 (ração contaminada com 4 ppm de T2 e 20 ppm de fumonisina + 500 g/ton de LSC, grupo C+D1000 (ração contaminada com 4 ppm de T2 e 20 ppm de fumonisina + 1000 g/ton de LSC e grupo C+D500+U100o (ração contaminada com 4 ppm de T2 e 20 ppm de fumonisina + 500 g/ton de LSC + 1000g/ton Uniwall MOS 25 (ácidos orgânicos, parede celular de levedura e carier mineral). O consumo de ração foi menor nas galinhas que consumiram a ração contaminada pelas micotoxinas. O uso de LSC minimizou os efeitos negativos da micotoxina sobre a taxa de conversão alimentar. As galinhas que ingeriram micotoxinas apresentaram menor resistência e espessura da casca quando comparadas ao NoC. A concentração sérica de espécies reativas de oxigênio foi maior nas galinhas que ingeriram micotoxina apenas no dia 84 em comparação ao NoC. A atividade sérica da glutationa S-transferase foi maior no dia 56 nas galinhas C+D500 e C+D1000 em comparação com outras. Concluímos nesse experimento que o consumo de micotoxinas prejudicou o desempenho e a qualidade dos ovos das galinhas, assim como a adição do lisado de S. cerevisiae e o combinado de outros ingredientes (ácidos orgânicos, a parede celular de leveduras e o transportador mineral) minimizaram alguns efeitos negativos causados por T-2 e FB1. No experimento 3, utilizamos 72 leitões, desmamados com média de 26 dias, divididos em quatro grupos com seis repetições cada. Os tratamentos foram: Afla0Bio0 (sem aflatoxina e sem biocolina); Afla500Bio0 (500 ppb de aflatoxina); Afla0Bio800 800 mg/kg de biocolina; Afla500Bio800 500 ppb de aflatoxina + 800 mg/kg de biocolina. O estudo avaliou o desempenho zootécnico (ganho de peso - GP, consumo de ração CR e conversão alimentar - CA). Amostras de sangue foram coletadas nos dias 0, 10, 20, 30 e 40 do experimento, assim como foram abatidos 24 animais aos 30 dias do experimento para a coleta de fígado, baço e porção do intestino para análise histopatológica. A suplementação com VB na dose usada, nessa fase de creche, teve efeito positivo nos primeitos 10 dias quando consumida por leitões desafiados com AFLB1, mas de modo geral interferiu no desenvolvimento dos leitões quando consumido. Consumo da aflatoxina aumentou atividade das enzimas AST e ALT no soro, assim como uma maior contagem de neutrófilos, menores níveis de triglicerídeos sérico e variáveis de estresse oxidativo tecidual. Muitos dessas alterações foram evitadas e/ou minimizadas pelo consumo de BV, caracterizada por um potencial antioxidante em animais desafiados com aflatoxina B1. Nesse estudo verificamos efeitos positivos da ingestão de BV sobre a saúde dos leitões, mas negativo sobre o desempenho. De maneira geral, concluímos que as micotoxinas prejudicam o desempenho e saúde animal, e que os aditivos aqui estudados podem ser uma alternativa promissora para minimizar estes impactos negativos na produção animal.

Mycotoxins are toxic secondary metabolites produced by filamentous fungi. The various species of mycotoxins are considered a worldwide concern in terms of human and animal health. In the animal production chain, mycotoxicosis impair animal productivity. It is necessary to look for alternatives that are able to minimize the toxic effects of mycotoxins, through ingredients added to the diet with hepatoprotective effects, adsorption and inactivation of toxins. Thus, the objective was to determine the impacts of mycotoxins aflatoxin B1 (AFLB1), T2 and fumonisin B1 (FB1), on poultry and swine production, as well as to verify the effects of the addition of vegetable biocolline (BV) and an adsorbent to the base of Saccharomyces cerevisiae (LSC) lysate in the contaminated diet of these animals. For this, three different experiments were carried out. In experiment 1, 64 laying hens were used, divided into control group T1 (fed with basal feed), group T2 (basal feed supplemented with 800 mg / kg BV), group T3 (basal feed contaminated with 2.5 mg / kg of AFLB1 ) and group T4 (diets with 800 mg / kg of BV + 2.5 mg / kg of AFLAB1). The focus of this research was parameters of physical-chemical composition of eggs, total bacterial egg count (CBT), bird health and zootechnical performance. Ingestion of aflatoxin reduced the laying rate of the chickens and BV was not able to minimize this negative effect, however BV had positive effects on the health of the chickens and improved the quality of the eggs through the antioxidant and antimicrobial action. In experiment 2, we used 60 laying hens, divided into a NoC group (basal feed without experimental mycotoxin contamination, group C + (feed contaminated with 4 ppm of T2 and 20 ppm of fumonisin), group C + D500 (feed contaminated with 4 ppm of T2 and 20 ppm of fumonisin + 500 g / ton of LSC, group C + D1000 (ration contaminated with 4 ppm of T2 and 20 ppm of fumonisin + 1000 g / ton of LSC and group C + D500 + U100o (ration contaminated with 4 ppm of T2 and 20 ppm of fumonisin + 500 g / ton of LSC + 1000g / ton Uniwall MOS 25 (organic acids, yeast cell wall and mineral carier). Feed consumption was lower in chickens that consumed the feed contaminated by mycotoxins The use of LSC minimized the negative effects of mycotoxin on the feed conversion rate Chickens that ingested mycotoxins showed less resistance and thickness of the shell when compared to NoC. The serum concentration of reactive oxygen species was higher in chickens that ingested mycotoxin. only on di to 84 compared to NoC. The serum activity of glutathione S-transferase was higher on day 56 in chickens C + D500 and C + D1000 compared to others. We concluded in this experiment that the consumption of mycotoxins impaired the performance and quality of the eggs of the chickens, as well as the addition of the S. cerevisiae lysate and the combination of other ingredients (organic acids, the yeast cell wall and the mineral transporter) minimized some negative effects caused by T-2 and FB1. In experiment 3, we used 72 piglets, weaned for an average of 26 days, divided into four groups with six repetitions each. The treatments were: Afla0Bio0 - (without aflatoxin and without biocolina); Afla500Bio0 - (500 ppb of aflatoxin); Afla0Bio800 - 800 mg / kg of biocholine; Afla500Bio800 - 500 ppb of aflatoxin + 800 mg / kg of biocholine. The study evaluated zootechnical performance (weight gain - GP, feed intake - CR and feed conversion - CA). Blood samples were collected on days 0, 10, 20, 30 and 40 of the experiment, as well as 24 animals were slaughtered at 30 days of the experiment for the collection of liver, spleen and intestine portion for histopathological analysis. Supplementation with BV in the dose used, in this daycare phase, had a positive effect in the first 10 days when consumed by piglets challenged with AFLB1, but in general it interfered in the development of the piglets when consumed. Aflatoxin consumption increased the activity of the AST and ALT enzymes in the serum, as well as a higher neutrophil count, lower serum triglyceride levels and tissue oxidative stress variables. Many of these changes were avoided and / or minimized by the consumption of BV, characterized by an antioxidant potential in animals challenged with aflatoxin B1. In this study, we verified positive effects of BV ingestion on piglet health, but negative on performance. In general, we conclude that mycotoxins impair animal performance and health, and that the additives studied here can be a promising alternative to minimize these negative impacts on animal production.

Changes in age -related susceptibility to Streptococcus agalactie infection in nile tilapia: outbreaks , genetic characterization and vaccine development

A tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus L.) é a espécie de peixe mais cultivado no Brasil. A infecção causada pela bactéria Streptococcus agalactiae é uma das principais responsáveis por perdas na produção da espécie no país. Surtos de septicemia e meningoencefalite por S. agalactiae são comumente verificados em tilápias na fase de engorda (adultas; > 50 g), principalmente no Verão. Os programas de vacinação tem sido o único método eficiente de prevenção da doença nas fazendas nacionais. A primeira vacina contra a doença para tilápia do Nilo no país foi licenciada em 2011 e começou a ser amplamente empregada a partir de 2017. Apesar de ser operacionalmente laboriosa a vacina tem demonstrado bons resultados de proteção para tilápias cultivadas. A principal limitação da vacinação nos cultivos é o tamanho mínimo do peixe a ser vacinado (25g), pois a vacina é administrada por injeção intraperitoneal (i.p). Coincidentemente a implementação dos programas de vacinação, surtos de meningoencefalite acometendo alevinos e juvenis de tilápias do Nilo passaram a ser verificados de forma crescente no país. Os objetivos dessa dissertação foram descrever os casos de meningoencefalite em alevinos e juvenis em fazendas de tilápia no Brasil, bem como, realizar caracterização genética dos isolados e o desenvolvimento de vacina para imunoprofilaxia em formas jovens. Cinco de surtos de mortalidade em lotes de alevinos e juvenis foram acompanhados em fazendas localizadas nas regiões Nordeste e Sudeste. 50 peixes doentes (1 a 29 g) foram submetidos a exame bacteriológico. A diversidade genética dos isolados S.agalactiae foi avaliada por REP-PCR e detecção de 12 genes de virulência realizada para avalição do perfil de virulência das amostras. Foi desenvolvida uma vacina contendo S. agalactiae e adjuvante aquoso para administração por imersão. Células completas de S. agalactiae inativadas (bacterina) foram homogeneizadas com adjuvante aquoso MontanideTM IMS1312VG na proporção de 1:1. A eficiência da vacina foi avaliada pelo desafio dos animais vacinados com a amostra patogênica SA95-10. Foram isoladas 50 amostras de S. agalactiae sorotipo Ib. A análise de REP-PCR revelou que os 13 isolados selecionados de S. agalactiae foram clonalmente relacionados entre si e com amostra proveniente de tilápia adulta doente. Os isolados apresentaram diferentes padrões de genes de virulência, similar ao verificado para amostras associadas a casos clínicos em peixes adultos no país. A vacina contendo bacterina de S.agalactiae e MontanideTMIMS1312 VG administrada por imersão, apresentou porcentagem relativa de sobrevivência (PRS) de 40%. A vacina por imersão conferiu baixa proteção aos alevinos de tilápia do Nilo desafiados com S. agalactiae. Esse é o primeiro relato de surtos múltiplos causados por S. agalactiae em tilápias jovens. Os isolados de formas jovens apresentam perfil genético e de virulência similares ao de peixes adultos, sugerindo que os programas de vacinação são o fator de risco para os surtos em alevinos e juvenis. A vacina por imersão demonstrou baixa eficiência. Novas formulações e futuros testes de campo devem ser realizados para verificação da eficiência dessa no controle da estreptococose em formas jovens de tilápia do Nilo.

Nile tilapia (Oreochromis niloticus L.) is the most cultivated fish species in Brazil. The infection caused by the bacterium Streptococcus agalactiae is one of the main cause of for losses in this specie production in the country. Outbreaks of septicemia and meningoencephalitis by S.agalactiae are commonly characterized in adult tilapia, especially during the summer. Vaccination programs have been the main method of disease prevention on farms. The first Nile tilapia vaccine against S. agalactiae in the country was licensed in 2011 and began to be widely used in 2017. Although operationally laborious the vaccine has been showing positive results in the farms. The main limitation of vaccination on farms is the minimum size of fish to be vaccinated (25g), since it is administered by intraperitoneal (i.p) injection. Coincidentally with the implementation of vaccination programs, outbreaks of meningoencephalitis affecting Nile tilapia fingerlings and juveniles started to be verified in the country. The aims of this dissertation were to describe cases of meningoencephalitis in fingerlings and juveniles of tilapia cultivated in Brazil, as well as, to carry out genetic characterization of the isolates and the development of vaccine for immunoprophylaxis of young fish. Five outbreaks were accompanied in tilapia fingerlings and juveniles herds raised in farms located at Northeast and Southeast regions. 50 diseased young fish (1 to 29 g) were submitted to bacteriology. The genetic diversity of isolates was evaluated by REP-PCR and detection of 12 virulence genes carried out by PCR. A vaccine containing S.agalactiae and aqueous adjuvant for immersion administration has been developed. Whole cells of S.agalactiae inactivated (bacterin) were homogenized with Montanide IMS1312VG aqueous adjuvant in the ratio of 1:1. Vaccine efficiency was assessed by the challenge of the animals vaccinated with the pathogenic sample SA95-10. Fifty strains of S. agalactiae serotype Ib were isolated. REP-PCR analysis revealed that the 13 isolates selected from S.agalactiae were clonally related to each other and with S. agalactiae isolate from diseased adult tilapia. The isolates presented different patterns of virulence genes, similar to those found in samples associated with cases in adult fish. Vaccine containing bacterin of S.agalactiae and MontanideTM IMS1312 VG showed a relative survival percentage (RPS) of 40%. This is the first report of multiple outbreaks caused by S. agalactiae in farm raised Nile tilapia fingerlings and juveniles. The similar genetic patterns and virulence profile of isolates with typical strains of adult tilapia suggest that vaccination programs are the main risk factor to young fish. Immersion vaccine resulted in low levels of protection. New preparations and future field trials should be carried out to assess the vaccine efficiency against estreptotococosis in young tilapia

Tratamento alternativo de ferida com tecido de granulação exuberante: relato de caso / Alternative treatment of wound with exuberant granulation tissue: case report / Tratamiento alternativo de herida con tejido de granulación exuberante: reporte de un caso

Relata-se o tratamento alternativo de uma ferida com tecido de granulação exuberante em equino, fêmea da raça Quarto de Milha, de 23 anos, alojada em uma central de reprodução. O animal apresentou uma lesão no membro posterior direito desde meados de abril de 2018 sendo iniciado o tratamento em agosto de 2018. No início da lesão, o animal apresentou um episódio de grande edema no membro pélvico da região do calcâneo até o boleto, sensibilidade no membro e perda de condição corporal, a suspeita inicial era de um quadro de linfangite, e então foi adotado um protocolo de ducha local, massagem com pomada anti-inflamatória à base de Dimetilsulfóxido e profilaxia com enrofloxacino e fenilbutazona. Não se obteve resolução do quadro e posteriormente apareceram pontos de necrose na região do boleto, e perda total da pele na região com a exposição de tecidos moles e ineficácia na epitelização local, foi então realizada uma coleta de material biológico para a realização de cultura bacterina e antibiograma, após os resultados foi realizado tratamento sistêmico com amicacina durante 30 dias e também perfusão regional com amicacina, em dias alternados, durante 20 dias. Como não se obteve resultado com a profilaxia antibacteriana no mês de agosto de 2018 foi iniciado o tratamento alternativo para a remoção do tecido de granulação exuberante que possuía o tamanho semelhante ao de uma bola de futebol. O tratamento foi composto por sulfato de cobre, vaselina sólida, extrato de barbatimão e óleo de copaíba. A evolução da ferida foi lenta não obtendo a cicatrização total da ferida, mas é possível afirmar que cerca de 85% do tecido exuberante foi extraído com a utilização do tratamento alternativo.

Alternative treatment of a wound with lush granulation tissue in a 23-year-old Quarter Horse female housed in a breeding center is reported. The animal had an injury to the righ thind limb since mid-April 2018 and treatment was started in August 2018. At the beginning of the injury, the animal had an episode of larges welling in the pelvic limb from the calcaneal region to the boletus, tenderness in the limb and loss of body condition, the initial suspicion was Iymphangitis, and then a local shower protocol, massage with anti-inflammatory ointment based on Dimethylsulfoxide and prophylaxis with enrofloxacin and phenylbutazone were adopted. There was no resolution of the condition and later necrosis points appeared in the region of the boletus, and total loss of skin in the region with exposure of soft tissues and inefficacy in local epithelialization, was then performed a collection of biological material for bacterial culture and antibiogram, after the results a systemic treatment with amikacin was performed for 30 days and also regional infusion with amikacin, in alternate days, for 20 days. As no antibacterial prophylaxis results were obtained in August 2018, alternative treatment for the removal of lush granulation tissue that was similar in size to that of a soccer ball was started. The treatment consisted of copper sulfate, solid petroleum jelly, barbatimão extract and copaiba oil. The evolution of the wound was slow and the total healing of the wound was not achieved, but it can be said that about 85% of the lush tissue was extracted using the alternative treatment.

Se relata el tratamiento alternativo de una herida con tejido de granulación exuberante en equino, hembra de la raza Cuarto de Milla, de 23 años, alojada en una central de reproducción. El animal presentaba una lesión en el miembro posterior derecho desde mediados de abril de 2018 siendo el inicio del tratamiento en agosto de 2018. En el inicio de la sesión, el animal presentó un episodio de gran edematizacion del miembro pelviano en la región del calcáneo hasta el nudillo (articulación metatarso-falangiana) sensibilidad en el miembro y pérdida de condición corporal, Ia sospecha inicial era de un cuadro de linfangitis, y entonces fue adoptado un protocolo de ducha local, masaje con pomada antiinflamatoria a base de dimetilsulfoxido y profilaxis con enrofloxacina y fenilbutazona. No se obtuvo resolución del cuadro y posteriormente aparecen puntos de necrosis en la región del nudillo y pérdida total de lapiel de la región con exposición de tejidos blandos e ineficacia en la epitelizacion local, entonces fue realizado tratamiento sistemico con amikacina durante 30 días y también perfusión regional con amikacina, en días alternados, durante 20 días. La decisión de la amikacina fue luego de la prueba de antibiograma a partir del cultivo de la secreción proveniente de la lesión. En el mes de agosto del 2018 fue iniciado el tratamiento para la remoción del tejido de granulación exuberante que tenía un tamaño semejante a un balón de fútbol. El tratamiento alternativo con sulfato de cobre, vaselina sólida, extracto de barbatimão y aceite de copaiba. La evolución de la herida fue lenta y todavía no se obtiene cierre total, pero es posible afirmar que cerca del 85% del tejido exuberante fue extraído con la utilización de tratamiento alternativo.

Tratamento alternativo de ferida com tecido de granulação exuberante: relato de caso / Alternative treatment of wound with exuberant granulation tissue: case report / Tratamiento alternativo de herida con tejido de granulación exuberante: reporte de un caso

Relata-se o tratamento alternativo de uma ferida com tecido de granulação exuberante em equino, fêmea da raça Quarto de Milha, de 23 anos, alojada em uma central de reprodução. O animal apresentou uma lesão no membro posterior direito desde meados de abril de 2018 sendo iniciado o tratamento em agosto de 2018. No início da lesão, o animal apresentou um episódio de grande edema no membro pélvico da região do calcâneo até o boleto, sensibilidade no membro e perda de condição corporal, a suspeita inicial era de um quadro de linfangite, e então foi adotado um protocolo de ducha local, massagem com pomada anti-inflamatória à base de Dimetilsulfóxido e profilaxia com enrofloxacino e fenilbutazona. Não se obteve resolução do quadro e posteriormente apareceram pontos de necrose na região do boleto, e perda total da pele na região com a exposição de tecidos moles e ineficácia na epitelização local, foi então realizada uma coleta de material biológico para a realização de cultura bacterina e antibiograma, após os resultados foi realizado tratamento sistêmico com amicacina durante 30 dias e também perfusão regional com amicacina, em dias alternados, durante 20 dias. Como não se obteve resultado com a profilaxia antibacteriana no mês de agosto de 2018 foi iniciado o tratamento alternativo para a remoção do tecido de granulação exuberante que possuía o tamanho semelhante ao de uma bola de futebol. O tratamento foi composto por sulfato de cobre, vaselina sólida, extrato de barbatimão e óleo de copaíba. A evolução da ferida foi lenta não obtendo a cicatrização total da ferida, mas é possível afirmar que cerca de 85% do tecido exuberante foi extraído com a utilização do tratamento alternativo.(AU)

Alternative treatment of a wound with lush granulation tissue in a 23-year-old Quarter Horse female housed in a breeding center is reported. The animal had an injury to the righ thind limb since mid-April 2018 and treatment was started in August 2018. At the beginning of the injury, the animal had an episode of larges welling in the pelvic limb from the calcaneal region to the boletus, tenderness in the limb and loss of body condition, the initial suspicion was Iymphangitis, and then a local shower protocol, massage with anti-inflammatory ointment based on Dimethylsulfoxide and prophylaxis with enrofloxacin and phenylbutazone were adopted. There was no resolution of the condition and later necrosis points appeared in the region of the boletus, and total loss of skin in the region with exposure of soft tissues and inefficacy in local epithelialization, was then performed a collection of biological material for bacterial culture and antibiogram, after the results a systemic treatment with amikacin was performed for 30 days and also regional infusion with amikacin, in alternate days, for 20 days. As no antibacterial prophylaxis results were obtained in August 2018, alternative treatment for the removal of lush granulation tissue that was similar in size to that of a soccer ball was started. The treatment consisted of copper sulfate, solid petroleum jelly, barbatimão extract and copaiba oil. The evolution of the wound was slow and the total healing of the wound was not achieved, but it can be said that about 85% of the lush tissue was extracted using the alternative treatment.(AU)

Se relata el tratamiento alternativo de una herida con tejido de granulación exuberante en equino, hembra de la raza Cuarto de Milla, de 23 años, alojada en una central de reproducción. El animal presentaba una lesión en el miembro posterior derecho desde mediados de abril de 2018 siendo el inicio del tratamiento en agosto de 2018. En el inicio de la sesión, el animal presentó un episodio de gran edematizacion del miembro pelviano en la región del calcáneo hasta el nudillo (articulación metatarso-falangiana) sensibilidad en el miembro y pérdida de condición corporal, Ia sospecha inicial era de un cuadro de linfangitis, y entonces fue adoptado un protocolo de ducha local, masaje con pomada antiinflamatoria a base de dimetilsulfoxido y profilaxis con enrofloxacina y fenilbutazona. No se obtuvo resolución del cuadro y posteriormente aparecen puntos de necrosis en la región del nudillo y pérdida total de lapiel de la región con exposición de tejidos blandos e ineficacia en la epitelizacion local, entonces fue realizado tratamiento sistemico con amikacina durante 30 días y también perfusión regional con amikacina, en días alternados, durante 20 días. La decisión de la amikacina fue luego de la prueba de antibiograma a partir del cultivo de la secreción proveniente de la lesión. En el mes de agosto del 2018 fue iniciado el tratamiento para la remoción del tejido de granulación exuberante que tenía un tamaño semejante a un balón de fútbol. El tratamiento alternativo con sulfato de cobre, vaselina sólida, extracto de barbatimão y aceite de copaiba. La evolución de la herida fue lenta y todavía no se obtiene cierre total, pero es posible afirmar que cerca del 85% del tejido exuberante fue extraído con la utilización de tratamiento alternativo.(AU)

PRODUÇÃO E AVALIAÇÃO ANTIGÊNICA DE BACTERINA CONTRA Streptococcus agalactiae LAVRAS MG 2018

A mastite bovina é um processo inflamatório da glândula mamária resultante da interação de fatores inerentes ao animal, patógenos e ambiente. A doença geralmente decorre da invasão microbiana da glândula mamária, principalmente por bactérias. Entre os principais microrganismos envolvidos em sua etiologia destaca-se o Streptococcus agalactiae, que geralmente acarreta índices elevados de novas infecções, afetando a quantidade e qualidade do leite produzido pelo animal ou rebanho infectado. Em relação às medidas de controle e prevenção para a mastite bovina, a vacinação tem sido extensamente estudada com objetivos de reduzir novas infecções intramamárias e diminuir a duração e a gravidade dos casos existentes. Diante disto, o objetivo deste trabalho foi desenvolver e avaliar a antigenicidade de uma bacterina para o controle e prevenção da mastite bovina ocasionada por S. agalactiae. Para tal, foi confeccionada uma bacterina experimental adjuvada com hidróxido de alumínio, contendo os isolados de S. galactiae SA522 e SA199, numa concentração de 1x109UFC/mL de cada isolado. Para os testes de antigenicidade da vacina, foram utilizadas 45 novilhas gestantes, pertencentes a uma fazenda leiteira localizada na região Sul de Minas Gerais livre de infecções por S. agalactiae, sendo 30 utilizadas no grupo vacinado e as demais (15), no grupo controle. Os animais do grupo vacinado foram vacinados pela via subcutânea, utilizando-se duas doses de 5 mL intervaladas de 21 dias. O grupo controle foi inoculado com 5 mL de solução fisiológica estéril. Previamente à vacinação, foi realizada a coleta de sangue e de leite de cada animal, para cultura de todos os quartos mamários de todos os animais, a fim de assegurar que eles eram livres de infecção por S. agalactiae. Sete dias após a segunda dose vacinal, foi realizada coleta de sangue dos animais de ambos os grupos para mensuração de anticorpos induzidos pela bacterina por meio de um teste de ELISA indireto padronizado para este fim. Os dados foram analisados estatisticamente pelo Software R e pelo Software GraphPad Prism, sendo considerada uma diferença significativa de 5%. Foram observadas diferenças estatísticas (p<0,05) pelo teste T para o grupo vacinado antes da vacinação (D0) e após a segunda dose vacinal (D30) (p=0,0056). O grupo controle não apresentou alteração entre os momentos D0 e D30 (p=0,3303). A bacterina desenvolvida foi capaz de induzir a produção de anticorpos anti-S. agalactiae nas vacas estudadas. Estudos futuros devem ser realizados para avaliar a imunogenicidade desta vacina em rebanhos infectados por S. agalactiae.

Bovine mastitis is an inflammatory process of the mammary gland due to the interaction of animals related to the animal, pathogen and environment. This disease is generally caused by microbial invasion of the mammary gland, mainly by bacteria. Among the main pathogens involved in its aetiology, Streptococcus agalactiae stands out, which determines the high clinical levels of new infections, leading to a decrease in the quantity and quality of milk produced by the infected animal or herd. Among the measures of control and prevention for bovine mastitis the use of vaccines has been extensively, aiming to reduce de level of new infections and duration and severity of cases. Therefore, the objective of this work was to develop and evaluate the antigenicity of one bacterin for the control and prevention of bovine mastitis caused by S. agalactiae. To this propose, it was produced an experimental bacterin adjuvanted with aluminum hydroxide, containing the strains SA522 and SA199 at the concentration of 1x109 UFC / mL of each isolate. For antigenicity tests of vaccine, 45 pregnant heifers belonging to a dairy farm located in the south of Minas Gerais, which were negative for S. agalactiae were used, as 30 in vaccinated group and 15 in control group. Animals of vaccinated group received two doses of bacterin (5mL/dosis) by the subcutaneous route with interval of 21 days. The control was inoculated with placebo (5 mL sterile saline). Previously to vaccination was performed blood and milk collecting blood from each animal in order to assegurate that used animals were not infected by S. agalactiae. Nine days after second vaccinal dosis (D30) blood collections of all animals of vacinal group and control groups were performed and dosages of anti-S. agalactiae immunoglobulins were done by indirect enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA). Due to the lack of ELISA kits for anti-S. agalactiae antibodies in cattle, an ELISA standardization was performed for this purpose. Data were statistically analised by Software R and GraphPad Prism Software, with a 5% statistical error level. Statistically significant differences (p <0.05) for test T, were observed for the vaccinated group before vaccination (D0) and after a second vaccine dose (D30) (p = 0.0056). The animals of the control group didn´t show differences in antibodies levels in D0 relation D30 (p = 0.3303). A vaccine produced was able to induce a production of anti-S.agalactiae antibodies in the studied cows. Further studies must be conduced to evaluate the immunogenicity of this bacterin in herds infected by S. agalactiae.

Efficacy of bacterin-, outer membrane protein- and fimbriae extract-based vaccines for the control of Salmonella Enteritidis experimental infection in chickens / Eficácia de bactéria inativada (bacterina), proteína da membrana externa e extrato de fimbrias no controle de infecção experimental por Salmonella Enteritidis (SE) em galinhas

The efficacy of three vaccines was evaluated in chickens for the control of experimental infection with Salmonella Enteritidis (SE) phage type 4. The vaccines were produced with bacterin, outer membrane proteins (OMP) and fimbriae crude extract (FE). The chickens were vaccinated intramuscularly with two doses of each vaccine at 12 and 15 weeks of age. The chickens were then orally challenged with 10(9) CFU/chicken Salmonella Enteritidis phage type 4 at 18 weeks of age. Fecal swabs were performed for the recovery of shedding SE, and SE was recovered from the liver and spleen. Additionally, antibody titers were measured in the serum by micro-agglutination test. The results indicated that the vaccine produced with bacterin yielded better results and resulted in reduction of fecal shedding and organ invasion by SE after oral challenge, although no vaccine was 100% effective for the control of SE experimental infection.(AU)

A eficácia de três vacinas de Salmonella Enteritidis fagotipo 4, produzidas na forma de bacterina, proteínas de membrana externa (OMP) e extrato bruto de fímbrias (FE) foi avaliada para proteção de aves infectadas experimentalmente. As aves foram vacinadas por via intramuscular com duas doses de cada vacina as 12 e 15 semanas de idade e desafiadas com 10(9) UFCs de Salmonella Enteritidis fagotipo 4 às 18 semanas de idade, por via oral. A eficácia foi determinada através do reisolamento da bactéria nas fezes e no fígado e baço, e os anticorpos foram mensurados no soro. Os resultados demonstraram que a vacina produzida com a bacterina foi mais eficaz em comparação às outras vacinas examinadas, para reduzir a excreção fecal e a invasão de órgãos após o desafio por SE.(AU)

Controle da eficácia de bacterinas antileptospirose: relação entre os resultados dos testes de inibição de crescimento de leptospiras in vitro com os do desafio in vivo em hamsters / Efficacy of anti-leptospirosis bacterines. Relation between the results of the in vitro growth inhibition test and the potency test, in vivo, with challenge in hamsters

Foi efetuada a comparação em hamsters da proteção conferida e dos níveis de anticorpos induzidos por duas bacterinas comerciais antileptospirose. Os ensaios empregados foram o teste oficial de potência com desafio (TP), o ensaio proposto, teste de inibição de crescimento de leptospiras in vitro (ICLIV) e a soroaglutinação microscópica (SAM). O protocolo de imunização foi representado por duas aplicações individuais de 0,25 mL das bacterinas, puras ou de suas diluições geométricas de razão dois variando de 200 a 51.200 para a bacterina A e de 200 a 3.200 para a bacterina B, por via subcutânea com o intervalo de 15 dias. Decorridos 15 dias da segunda aplicação de vacina, um grupo de animais foi desafiado com 0,2 mL de cultivos de leptospiras, por indivíduo, respectivamente dos sorovares Canicola (bacterinas A e B) ou Kennewicki (bacterina A). Os números de doses infectantes empregados nos desafios foram de 100 e 631 respectivamente, para os sorovares Canicola e Kennewicki. Decorridos 21 dias do desafio, os grupos de animais utilizados nos testes de ICLIV e SAM foram sangrados e os seus soros foram reunidos em pools (n = 5). No TP, adotando-se os critérios internacionais, as bacterinas foram aprovadas. A comparação do desempenho das bacterinas para os sorovares adotados, segundo sua concentração, por meio das proporções de animais sobreviventes ao TP e a média dos títulos de anticorpos identificados no teste de ICLIV, indicou que um título igual ou superior a 0,77 log corresponde ao nível de aprovação da bacterina no TP(AU)

It was performed a comparison between the protection afforded in hamsters and the antibody levels induced by two commercial vaccines against leptospirosis. The assays used were the official challenge test (TP), the in vitro leptospires growth inhibition test (ICLIV) and microscopic agglutination test (MAT). The immunization protocol consisted of two single applications, 15 days from each other, of 0.25 mL of the bacterins, pure or its two-fold serial dilutions: 200 to 51,200 for bacterin A and 200 to 3.200 bacterin B, both of them administered subcutaneously. A group of animals was challenged, after 15 days from the second vaccine application, with 0.2 mL/animal of live leptospire cultures, with Canicola (bacterin A and B) or Kennewicki (bacterin A) serovars. The numbers of infective doses employed in the challenges were 100 and 631 for Canicola and Kennewicki serovars, respectively. After 15 days from the second vaccine dose the groups of animals used in ICLIV and SAM tests were bled and their sera were collected in pools (n = 5). In TP, adopting the criteria established by the Code Federal Regulation, both bacterins were approved. The comparison of the performance of the tested bacterins with the adopted serovars, according to its concentration, by the proportions of surviving animals to the challenge assay and the average of the neutralizing antibodies titers, established a neutralizing antibodies titer equal or higher than 0.77 log corresponding with the bacterin level of approval in the potency assay(AU)

Anticorpos revelados pelo teste de inibição do crescimento de leptospiras in vitro (TICL) contra os sorovares Canicola, Icterohaemorrhagiae e Copenhageni em cães adultos revacinados anualmente com vacina comercial contendo bacterinas dos sorovares Canicola, Icterohaemorrhagiae, Grippotyphosa e Pomona / Antibody revealed by growth inhibition test the of leptospires in vitro (GIT) against serovars Canicola, Icterohaemorrhagiae and Copenhageni in adult dogs revaccinated annually with commercial vaccine containing serovars Canicola, Icterohaemorrhagiae, Grippotyphosa and Pomona bacterins

Na atualidade, o sorovar Copenhageni é o representante do sorogrupo Icterohaemorrhagiae, mantido por roedores sinantrópicos, que tem prevalecido nos cães e seres humanos das grandes metrópoles brasileiras. A despeito de alguns autores sugerirem a existência de proteção cruzada entre sorovares incluídos em um mesmo sorogrupo esta condição ainda não foi suficientemente esclarecida para os sorovares Icterohaemorrhagiae e Copenhageni. No presente trabalho cães adultos com dois a seis anos de idade primo-vacinados com três doses intervaladas de 30 dias a partir dos 60 dias de idade e revacinados anualmente com vacina anti-leptospirose polivalente contendo os sorovares Canicola, Icterohaemorrhagiae, Grippotyphosa e Pomona foram revacinados com a mesma vacina e aos 30 dias da revacinação foram submetidos aos testes de soroaglutinação microscópica (SAM) e de inibição do crescimento de leptospiras in vitro (TICL), para avaliação comparativa dos níveis de anticorpos produzidos para os sorovares Canicola, Icterohaemorrhagiae e Copenhageni. Os resultados obtidos indicaram que a imunidade conferida pela vacina para o sorovar Icterohaemorrhagiae é mais duradoura que a observada para o sorovar Canicola, já que títulos de anticorpos neutralizantes >1,0 log10 foram observados antes do reforço vacinal não havendo substancial aumento após a revacinação. Quanto ao sorovar Canicola, a revacinação resultou em considerável aumento do título de anticorpos neutralizantes quando comparado ao momento anterior a revacinação (p=0,001). A análise dos valores encontrados após a revacinação demonstrou claramente que cães revacinados com bacterina produzida com o sorovar Icterohaermorrhagiae não apresentam aumento do título de anticorpos inibidores do crescimento contra o sorovar Copenhageni, em nível suficiente para inibir o crescimento de leptospiras. Apesar disso, os títulos de anticorpos inibidores de crescimento anti-Copenhageni encontrados antes e após a revacinação demonstraram que, pelo menos certo grau de proteção contra a infecção por esse sorovar pode ser esperado para os cães vacinados com bacterinas do sorovar Icterohaemorrhagiae, não sendo, no entanto, uma proteção cruzada completa.(AU)

Currently, the serovar Copenhageni is the representative of serogroup Icterohaemorrhagiae maintained in synanthropic rodents found most frequently in dogs and humans in metropolitan areas of Brazil. Despite some authors have suggested the existence of cross-protection between serovars included in the same serogroup, this condition has not yet been sufficiently clarified for serovars Icterohaemorrhagiae and Copenhageni. In the present work, 2 to 6-year-old dogs, vaccinated at 60, 90 and 120 days of age and thereafter, revaccinated annually with commercial vaccine containing Canicola, Icterohaemorrhagiae, Grippotyphosa and Pomona bacterins were evaluated as to the immune status against leptospirosis before and 30 days after revaccination. Mycroscopic agglutination test (MAT) and in vitro growth inhibition test (GIT) were performed to search for agglutinating anti-Leptospira antibodies and neutralizing anti-Leptospira antibodies, respectively for serovars Canicola and Icterohaemorrhagiae, and additionally, for serovar Copenhageni, not included in the vaccine. The results showed that the immunity conferred by the vaccine to serovar Icterohaemorrhagiae is more lasting than that observed for serovar Canicola, since neutralizing antibody titers >1.0 log10 were observed before the booster vaccination with no substantial increase after revaccination. As for the serovar Canicola, revaccination resulted in a considerable increase in neutralizing antibody titer when compared to the one observed previously to the revaccination (p=0.001). The analysis of the data obtained by GIT allowed us to conclude that dogs given vaccine containing Icterohaemorrhagiae bacterin did not produce neutralizing antibodies against serovar Copenhageni enough to inhibit leptopiral growth at the same level as occurred for the homologous serovar. Despite this, the GIT titer found for serovar Copenhageni before and after revaccination showed that at least, some level of protection could be expected for dogs vaccinated with serovar Icterohaemorrhagiae bacterin, not a complete cross protection.(AU)

EFICÁCIA DE VACINA COMERCIAL E PRODUTO TESTE NO CONTROLE DE MASTITE SUBCLÍNICA BOVINA

O manejo intensivo de bovinos predispõe a inúmeras doenças, dentre elas as que acometem o úbere, as afecções podais e os problemas de fertilidade, causando prejuízos econômicos. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a prevalência de mastite subclínica e eficácia de vacina comercial e produto teste, ambos compostos por bacterina mista inativada, em bovinos de leite. Coletou-se amostras de leite, dos quatro quartos mamários, de 210 vacas em lactação para realização de contagem de células somáticas e exame microbiológico. Das 210 amostras de leite coletadas observou-se crescimento de microrganismos em 33,81% e os principais agentes etiológicos isolados foram dos gêneros Staphylococcus e Streptococcus. Em relação à CCS esses mesmos microrganismos foram responsáveis por aumento da CCS do leite em comparação às amostras negativas no exame microbiológico. Vacina comercial e produto teste foram testados em 36 animais e não foram responsáveis por diminuir CCS. Também não se observou diferença em relação aos títulos de IgG sérica nos animais tratados quando comparado aos animais do grupo controle. Tanto a vacina comercial quanto o produto teste apresentaram uma maior porcentagem de cura (63,64% e 60%) em relação aos animais não tratados (18,18%), sendo assim a vacinação é uma alternativa no controle das mastites subclínicas.

The intensive management of cattle predisposes to various diseases, including mammary and foot disorders, and fertility problems, leading to economic losses. The present study aimed to evaluate the prevalence of subclinical mastitis and efficacy of commercial vaccine and test product, both composed of inactivated mixed bacterin, in dairy cows. Samples of lactating dairy cows were collected from four lactating quarters for somatic cell count and microbiological examination.From 210 milk samples, 33.81% showed growth of microorganisms, and the most prevalent were Staphylococcus spp. and Streptococcus spp., which led to a higher somatic cell count in milk. The comercial vaccine and the test product were tested in 36 cows and were not responsible for decreasing SCC and no difference was observed in IgG titers in treated animals. Both treatments had a higher percentage of cure (63.64% and 60%) than the untreated animals (18.18%), thus vaccination was an alternative for the control of subclinical mastitis.

Prospecção e avaliação de proteínas recombinantes para o desenvolvimento de uma vacina contra a leptospirose

Esta tese reúne os trabalhos referentes ao desenvolvimento de uma vacina recombinante contra a leptospirose bovina, uma zoonose bacteriana causada por membros patogênicos do gênero Leptospira. Primeiramente, é apresentada uma revisão bibliográfica sobre a doença, ressaltando os aspectos clínicos envolvidos e a prevalência do sorovar Hardjo como causador da leptospirose em bovinos. Depois, o processo relacionado à seleção de novos candidatos vacinais para o desenvolvimento de uma vacina recombinante é explorado. Dos cinco alvos proteicos previamente identificados e amplificados a partir do genoma de Leptospira interrogans sorovar Copenhageni cepa Fiocruz L1-130, quatro (LIC11889, LIC10666, LIC10463 e LIC10498) foram expressos em sistema de expressão heteróloga em Escherichia coli e purificados, constituindo alvos potenciais para os ensaios de imunogenicidade e imunoproteção em modelo animal. Como hamsters (Mesocricetus auratus) são usados como modelo animal experimental para o estudo da leptospirose aguda, avaliamos os níveis de bilirrubina total, alanina aminotransferase e creatinina após infecção com cepa patogênica. Não foi encontrada diferença estatística significativa entre os valores encontrados para animais experimentalmente infectados quando comparados ao grupo imunizado com bacterina. Finalmente, descrevemos o uso das proteínas recombinantes rLIC11889 e rLIC10666 como preparação vacinal na imunização de hamsters. As proteínas foram capazes de proteger os animais desafiados com cepa homóloga virulenta da leptospirose letal.

This thesis combines the work related to the development of a recombinant vaccine against bovine leptospirosis, a bacterial zoonosis caused by pathogenic member of the genus Leptospira. Firstly, a literature review is presented on the disease, highlighting the clinical aspects and the prevalence of the serovar Hardjo as the cause of leptospirosis in cattle. Then, the process related to the selection of novel vaccine candidates for the development of a recombinant vaccine is explored. Of the five protein targets previously identified and amplified from the genome of Leptospira interrogans serovar Copenhageni strain Fiocruz L1-130, four (LIC11889, LIC10666, LIC10463 and LIC10498) were expressed in a heterologous expression system in Escherichia coli and purified, constituting potential targets for the immunogenicity and immunoprotection assays in the animal model. As hamsters (Mesocricetus auratus) are used as an experimental model for the study of acute leptospirosis, we evaluated levels of total bilirubin, alanine aminotransferase and creatinine after infection with a pathogenic strain. No statistically significant difference was found between the values for the experimentally infected animals when compared to the group immunized with bacterin. Finally, we describe the use of the recombinant proteins rLIC11889 and rLIC10666 as a vaccine preparation in the immunization of hamsters. Proteins were able to protect challenged animals with virulent homologous strain of lethal leptospirosis.

Avaliação de diferentes esquemas de vacinação contra Mycoplasma hyopneumoniae em suínos abatidos da região exportadora de Itapua, Paraguai

Objetivo O presente estudo tem como objetivo verificar o nível de anticorpos anti-Mycoplasma hyopneumoniae em suínos expostos a diferentes esquemas de vacinação e verificar as lesões histopatológicas no momento do abate desses animais. Desenho Amostras de soro foram avaliadas por ELISA indireto para identificar presença de anticorpos vacinais nos em quatro grupos, grupo controle (C); grupo vacinado com dose única com bacterina contendo CpG DNA como adjuvante (G2); grupo vacinado com duas doses com bacterina contendo Hidróxido de Alumínio (G3) e grupo vacinado com duas doses com bacterina cujo adjuvante foi o Polímero de Carbono (G4). Amostras de pulmões foram submetidas a análises histopatológicas para verificar a presença de diferentes graus de lesão pulmonares nos animais dos grupos experimentais. Resultados Verificou-se que o grupo vacinado com vacina adjuvantada com polímero de carbono apresentou um menor número de animais positivos (67%), enquanto os outros esquemas estudados (Cpg DNA e Hidróxido de Alumínio) apresentaram maior número de animais sororreagentes (<90%), além do fato que o grupo controle não apresentou animais soropositivos. Todos os grupos estudados apresentavam animais com lesões variáveis em intensidade e distribuição. Não houve diferença estatística significativa entre o número de lesões nos diferentes grupos experimentais. Através de regressão linear simples, comprovou-se que a quantidade e gravidade das lesões aumentavam de acordo com a maior quantidade de anticorpos. Conclusão Pode ser concluir que o uso de bacterinas associadas a adjuvante polímero de carbono não foi capaz de induzir uma resposta humoral tão significativa quanto os adjuvantes CpG DNA e hidróxido de alumínio. Bacterina de Mycoplasma hyopneumoniae com adjuvante CpG DNA em uma única dose foi capaz de induzir níveis de anticorpos similares aos animais vacinados duas vezes com bacterina associada a adjuvante hidróxido de alumínio.

Objective The present study had the objective to study the anti-Mycoplasma hyopneumoniae antibodies levels in pigs inoculated with different vaccines and to verify the histopathological lesions in the moment of slaughter. Methods Serum samples were evaluated by ELISA to verify the levels of vaccinal antibodies in the four experimental groups, as follows: (G1) control group, with no vaccination against M. hyopneumoniae; (G2) animals vaccinated just one time with M. hyopneumoniae bacterin associated with CpG DNA as adjuvant; (G3) animals vaccinated twice with bacterin and aluminum hydroxide as adjuvant; (G4) animals vaccinated twice with bacterin associated with carbon polymer as adjuvant. Biopsy samples from animals lungs were subjected to histopathological analysis to verify the presence of lesions and its different grades Results The group that was vaccinated with bacterin associated to carbon polymer showed the lowest number of positive animals (67%), while the other two vaccinated groups showed a higher number of positive animals (> 90%). The control group did not showed any positive result at the ELISA. All the studied groups presented lung lesions with different grades and distribution. There was no significant statistical difference in the number of lesions in different experimental groups. Through linear regression, it could be seen that the number and grade of lesions were higher in animals with the strongest humoral response. Conclusions It can be concluded that the use of bacterin associated with carbon polymer adjuvant was not able to induce a humoral response as strong as the CpG DNA and the aluminum hydroxide adjuvants. The use of just one dose of the vaccine containing bacterin and CpG DNA was able to induce antibodies levels that were similar to those found in animals inoculated with two doses of bacterin associated with aluminum hydroxide.