Iron and zinc mycelial bioaccumulation in Agaricus subrufescens strains / Bioacumulação micelial de ferro e zinco em linhagens de Agaricus subrufescens

Agaricus subrufescens, a basidiomycete native to Brazil, is worldwide cultivated due to its medicinal properties. This fungus is capable of bioaccumulating metals in the mycelial biomass when cultured in the presence of them; however, this capacity is little explored for functional food production. This study aimed to evaluate the amount of iron or zinc bioaccumulated in the vegetative mycelium of sixteen strains of A. subrufescens. Mycelia were grown in malt extract agar added with 50 mg/L of iron or with 7.5 mg/L of zinc. The metal bioaccumulation in the mycelial biomass was strain-dependent. In general, metal can inhibit or stimulate the mycelial growth ranging from -81 to +78% for iron and from -86 to +100% for zinc. The highest bioaccumulated iron and zinc concentrations in the mycelial biomass was 2,595.65 mg/kg and 1,655.83 mg/kg, respectively and occurred in the U4-4 strain. The supplementation of mycelial biomass using iron or zinc is an alternative to develop food supplements, that can be used both in the human and animal diet and in the prevention of diseases.

Agaricus subrufescens, basidiomiceto nativo do Brasil, é cultivado mundialmente devido aos seus aspectos medicinais. Este fungo tem capacidade de bioacumulação de metais na biomassa micelial, no entanto, esta propriedade é pouco explorada para a produção de alimentos funcionais. O objetivo deste trabalho foi avaliar a quantidade de ferro ou zinco bioacumulada no micélio vegetativo de diversas linhagens de Agaricus subrufescens. Foram utilizadas 16 linhagens de A. subrufescens da coleção de culturas da Universidade Paranaense. O crescimento da biomassa micelial e a bioacumulação de ferro e zinco foram avaliados em micélio crescido em ágar extrato de malte adicionado de 50 mg L-1 de ferro ou 7,5 mg L-1 de zinco. A bioacumulação dos metais na biomassa micelial foi linhagem dependente. De forma geral, os metais podem inibir ou estimular o crescimento com variação entre de -81 a +78% para o ferro e de -86 a +100% para o zinco. A maior concentração de ferro na biomassa foi para o ferro de 2595,65 mg kg-1 e para o zinco de 1655,83 mg kg-1, ambos para a linhagem U4-4. O enriquecimento da biomassa micelial com ferro e/ou zinco é uma alternativa ao desenvolvimento de novos alimentos ou suplementos alimentares fonte de ferro e zinco de origem não-animal.

Iron and zinc mycelial bioaccumulation in Agaricus subrufescens strains / Bioacumulação micelial de ferro e zinco em linhagens de Agaricus subrufescens

Agaricus subrufescens, a basidiomycete native to Brazil, is worldwide cultivated due to its medicinal properties. This fungus is capable of bioaccumulating metals in the mycelial biomass when cultured in the presence of them; however, this capacity is little explored for functional food production. This study aimed to evaluate the amount of iron or zinc bioaccumulated in the vegetative mycelium of sixteen strains of A. subrufescens. Mycelia were grown in malt extract agar added with 50 mg/L of iron or with 7.5 mg/L of zinc. The metal bioaccumulation in the mycelial biomass was strain-dependent. In general, metal can inhibit or stimulate the mycelial growth ranging from -81 to +78% for iron and from -86 to +100% for zinc. The highest bioaccumulated iron and zinc concentrations in the mycelial biomass was 2,595.65 mg/kg and 1,655.83 mg/kg, respectively and occurred in the U4-4 strain. The supplementation of mycelial biomass using iron or zinc is an alternative to develop food supplements, that can be used both in the human and animal diet and in the prevention of diseases.(AU)

Agaricus subrufescens, basidiomiceto nativo do Brasil, é cultivado mundialmente devido aos seus aspectos medicinais. Este fungo tem capacidade de bioacumulação de metais na biomassa micelial, no entanto, esta propriedade é pouco explorada para a produção de alimentos funcionais. O objetivo deste trabalho foi avaliar a quantidade de ferro ou zinco bioacumulada no micélio vegetativo de diversas linhagens de Agaricus subrufescens. Foram utilizadas 16 linhagens de A. subrufescens da coleção de culturas da Universidade Paranaense. O crescimento da biomassa micelial e a bioacumulação de ferro e zinco foram avaliados em micélio crescido em ágar extrato de malte adicionado de 50 mg L-1 de ferro ou 7,5 mg L-1 de zinco. A bioacumulação dos metais na biomassa micelial foi linhagem dependente. De forma geral, os metais podem inibir ou estimular o crescimento com variação entre de -81 a +78% para o ferro e de -86 a +100% para o zinco. A maior concentração de ferro na biomassa foi para o ferro de 2595,65 mg kg-1 e para o zinco de 1655,83 mg kg-1, ambos para a linhagem U4-4. O enriquecimento da biomassa micelial com ferro e/ou zinco é uma alternativa ao desenvolvimento de novos alimentos ou suplementos alimentares fonte de ferro e zinco de origem não-animal.(AU)

Inhibition of symbiote fungus of the leaf cutter ant Atta sexdens by secondary metabolites from the bacterium Xenorhabdus szentirmaii associated with entomopathogenic nematodes / Inibição do fungo simbionte da formiga-cortadeira Atta sexdens por metabólitos secundários da bactéria Xenorhabdus szentirmaii associada a nematoides entomopatogênicos

Leaf-cutter ants (Hymenoptera: Formicidae) have evolved as dominant herbivores on the American continent. These social insects remove the leaves of economically important plant species to maintain their colony's food reserves, the symbiotic fungus Leucocoprinus gongylophorus, a basidiomycete. Such fungus can be used for applications of fungicide molecules from metabolites generated by symbiont bacteria (Xenorhabdus and Photorhabdus) from entomopathogenic nematodes (Steinernema and Heterorhabditis). Through isolation and multiplication in tryptic soy broth (TSB) medium of the bacteria Xenorhabdus szentirmaii isolated PAM 25, we conducted laboratorial tests using treatments with 10, 25, and 50% of the metabolites obtained in the sixth day of cultivation. The treatments were centrifuged and filtered to generate a supernatant, which was diluted in potato + dextrose + agar (PDA), to verify the consequences of exposure to the fungus L. gongylophorus in Petri dishes. To confirm metabolite efficiency, the control treatments in PDA only and mixed (PDA+TSB) media were conducted simultaneously for 14 days. We observed total inhibition of the symbiont fungus in both the 25 and 50% dilutions during the first days of the tests. Our results support that these metabolites have inhibitory effect on the development of symbiont fungus of leaf-cutter ants.(AU)

As formigas-cortadeiras (Hymenoptera: Formicidae) evoluíram estabelecendo-se no continente americano como herbívoros dominantes. Esses insetos sociais praticam a desfolha de espécies vegetais de interesse econômico, com a finalidade de manter a reserva alimentar da colônia, o fungo simbionte Leucocoprinus gongylophorus, um basidiomiceto. Tal fungo pode ser alvo de aplicações de moléculas fungicidas encontradas em metabólitos gerados por bactérias simbiontes (Xenorhabdus e Photorhabdus) de nematoides entomopatogênicos (Steinernema e Heterorhabditis). Por meio do isolamento e da multiplicação em meio caldo triptona de soja (TSB) da bactéria Xenorhabdus szentirmaii (isolado PAM 25), foram realizados testes laboratoriais com tratamentos contendo 10, 25 e 50% do metabólito obtido no sexto dia de cultivo. Para tanto, o metabólito foi centrifugado e filtrado, gerando um sobrenadante, o qual foi diluído em batata + dextrose + ágar (BDA), para verificar as consequências da exposição do fungo L. gongylophorus em placas de Petri. Os tratamentos de controle apenas com meio BDA e misto (BDA + TSB) também foram conduzidos simultaneamente por 14 dias, a fim de confirmar a eficiência dos metabólitos. Tanto na diluição de 25 e 50% houve total inibição do fungo simbionte já nos primeiros dias da condução dos testes. Diante dos resultados obtidos, pode-se afirmar que os metabólitos são a causa do efeito inibitório do desenvolvimento do fungo simbionte das formigas-cortadeiras.(AU)

Dermatite fúngica associada à Rhodotorula glutinis em cão - Canis familiaris ): relato de caso / Fungal dermatitis associated to Rhodotorula glutinis in dog (Canis familiaris): case report

O fungo Rhodotorula sp. era considerado como não patogênico, mas, com o aumento de casos de humanos imunossuprimidos nas últimas duas décadas, as espécies R. mucilaginosa, R. glutinis e R. minuta se tornaram agentes potencialmente patogênicos. Poucos relatos clínicos veterinários associados à Rhodotorula spp. foram descritos, e o objetivo deste trabalho foi descrever um caso de dermatite fúngica causada por R. glutinis em cão imunossuprimido devido à leishmaniose visceral e osteossarcoma, na cidade de Cuiabá-Mato Grosso. Um cão, macho, 11 anos, sem raça definida, foi trazido ao Hospital Veterinário apresentando lesões de pele com diagnóstico de dermatofitose e foi prescrito tratamento tópico à base de óleo de melaleuca, sem melhora após um mês de tratamento. O animal retornou ao Hospital Veterinário com hemorragia na região lesionada da cauda, e foi realizada biópsia para exames microbiológico e histopatológico. Nas análises microbiológica e histopatológica, foi isolada uma levedura e detectada a presença de estrutura semelhante a leveduras na coloração de prata, respectivamente. A levedura isolada foi identificada como R. glutinis por meio do sequenciamento do DNA. Um novo tratamento foi instituído, sem melhora do quadro clínico. O animal foi diagnosticado também com leishmaniose e osteossarcoma, provavelmente ocasionando a immunossupressão, e seu quadro evoluiu a óbito.(AU)

The fungi Rhodotorula sp was considered nonpathogenic, but with the increase of immunosuppressed humans in the last two decades, the species R. mucilaginosa, R. glutinis and R. minuta became potentially pathogenic agents. There have been few veterinary clinical reports associated with Rhodotorula spp. and this work aims to describe the first case of fungal dermatitis caused by R. glutinis in immunosuppressed dog due to visceral leishmaniasis and osteosarcoma in the city of Cuiabá-Mato Grosso. An 11-year-old male mongrel dog was examined to the Veterinary Hospital with skin lesions and the diagnosis was dermatophytosis and the treatment was implemented with topical tea tree oil for one month, but the treatment failed. The animal returned to the Veterinary Hospital with bleeding in the injured area of the tail and biopsy was performed for microbiological and histopathology evaluation. In the microbiological and histopathological analysis, yeast was isolated and yeast-like structures in silver staining were observed, respectively. The isolated yeast was identified as R. glutinis by DNA sequencing. A new treatment was implemented without clinical improvement. The animal was diagnosed with leishmaniasis and osteosarcoma, which probably caused immunosuppression, and its clinical conditions evolved to death.(AU)

Dermatite fúngica associada à Rhodotorula glutinis em cão - Canis familiaris ): relato de caso / Fungal dermatitis associated to Rhodotorula glutinis in dog (Canis familiaris): case report

O fungo Rhodotorula sp. era considerado como não patogênico, mas, com o aumento de casos de humanos imunossuprimidos nas últimas duas décadas, as espécies R. mucilaginosa, R. glutinis e R. minuta se tornaram agentes potencialmente patogênicos. Poucos relatos clínicos veterinários associados à Rhodotorula spp. foram descritos, e o objetivo deste trabalho foi descrever um caso de dermatite fúngica causada por R. glutinis em cão imunossuprimido devido à leishmaniose visceral e osteossarcoma, na cidade de Cuiabá-Mato Grosso. Um cão, macho, 11 anos, sem raça definida, foi trazido ao Hospital Veterinário apresentando lesões de pele com diagnóstico de dermatofitose e foi prescrito tratamento tópico à base de óleo de melaleuca, sem melhora após um mês de tratamento. O animal retornou ao Hospital Veterinário com hemorragia na região lesionada da cauda, e foi realizada biópsia para exames microbiológico e histopatológico. Nas análises microbiológica e histopatológica, foi isolada uma levedura e detectada a presença de estrutura semelhante a leveduras na coloração de prata, respectivamente. A levedura isolada foi identificada como R. glutinis por meio do sequenciamento do DNA. Um novo tratamento foi instituído, sem melhora do quadro clínico. O animal foi diagnosticado também com leishmaniose e osteossarcoma, provavelmente ocasionando a immunossupressão, e seu quadro evoluiu a óbito.(AU)

The fungi Rhodotorula sp was considered nonpathogenic, but with the increase of immunosuppressed humans in the last two decades, the species R. mucilaginosa, R. glutinis and R. minuta became potentially pathogenic agents. There have been few veterinary clinical reports associated with Rhodotorula spp. and this work aims to describe the first case of fungal dermatitis caused by R. glutinis in immunosuppressed dog due to visceral leishmaniasis and osteosarcoma in the city of Cuiabá-Mato Grosso. An 11-year-old male mongrel dog was examined to the Veterinary Hospital with skin lesions and the diagnosis was dermatophytosis and the treatment was implemented with topical tea tree oil for one month, but the treatment failed. The animal returned to the Veterinary Hospital with bleeding in the injured area of the tail and biopsy was performed for microbiological and histopathology evaluation. In the microbiological and histopathological analysis, yeast was isolated and yeast-like structures in silver staining were observed, respectively. The isolated yeast was identified as R. glutinis by DNA sequencing. A new treatment was implemented without clinical improvement. The animal was diagnosed with leishmaniasis and osteosarcoma, which probably caused immunosuppression, and its clinical conditions evolved to death.(AU)

Inhibition of symbiote fungus of the leaf cutter ant Atta sexdens by secondary metabolites from the bacterium Xenorhabdus szentirmaii associated with entomopathogenic nematodes / Inibição do fungo simbionte da formiga-cortadeira Atta sexdens por metabólitos secundários da bactéria Xenorhabdus szentirmaii associada a nematoides entomopatogênicos

Leaf-cutter ants (Hymenoptera: Formicidae) have evolved as dominant herbivores on the American continent. These social insects remove the leaves of economically important plant species to maintain their colony's food reserves, the symbiotic fungus Leucocoprinus gongylophorus, a basidiomycete. Such fungus can be used for applications of fungicide molecules from metabolites generated by symbiont bacteria (Xenorhabdus and Photorhabdus) from entomopathogenic nematodes (Steinernema and Heterorhabditis). Through isolation and multiplication in tryptic soy broth (TSB) medium of the bacteria Xenorhabdus szentirmaii isolated PAM 25, we conducted laboratorial tests using treatments with 10, 25, and 50% of the metabolites obtained in the sixth day of cultivation. The treatments were centrifuged and filtered to generate a supernatant, which was diluted in potato + dextrose + agar (PDA), to verify the consequences of exposure to the fungus L. gongylophorus in Petri dishes. To confirm metabolite efficiency, the control treatments in PDA only and mixed (PDA+TSB) media were conducted simultaneously for 14 days. We observed total inhibition of the symbiont fungus in both the 25 and 50% dilutions during the first days of the tests. Our results support that these metabolites have inhibitory effect on the development of symbiont fungus of leaf-cutter ants.(AU)

As formigas-cortadeiras (Hymenoptera: Formicidae) evoluíram estabelecendo-se no continente americano como herbívoros dominantes. Esses insetos sociais praticam a desfolha de espécies vegetais de interesse econômico, com a finalidade de manter a reserva alimentar da colônia, o fungo simbionte Leucocoprinus gongylophorus, um basidiomiceto. Tal fungo pode ser alvo de aplicações de moléculas fungicidas encontradas em metabólitos gerados por bactérias simbiontes (Xenorhabdus e Photorhabdus) de nematoides entomopatogênicos (Steinernema e Heterorhabditis). Por meio do isolamento e da multiplicação em meio caldo triptona de soja (TSB) da bactéria Xenorhabdus szentirmaii (isolado PAM 25), foram realizados testes laboratoriais com tratamentos contendo 10, 25 e 50% do metabólito obtido no sexto dia de cultivo. Para tanto, o metabólito foi centrifugado e filtrado, gerando um sobrenadante, o qual foi diluído em batata + dextrose + ágar (BDA), para verificar as consequências da exposição do fungo L. gongylophorus em placas de Petri. Os tratamentos de controle apenas com meio BDA e misto (BDA + TSB) também foram conduzidos simultaneamente por 14 dias, a fim de confirmar a eficiência dos metabólitos. Tanto na diluição de 25 e 50% houve total inibição do fungo simbionte já nos primeiros dias da condução dos testes. Diante dos resultados obtidos, pode-se afirmar que os metabólitos são a causa do efeito inibitório do desenvolvimento do fungo simbionte das formigas-cortadeiras.(AU)

AVALIAÇÃO DA TOXICIDADE AGUDA DA BIOMASSA MICELIAL DO Ganoderma lucidum (Curt.: Fr.) Karst. BIOACUMULADA COM LÍTIO EM RATOS

O transtorno bipolar, um distúrbio mental crônico caracterizado por episódios maníacos e/ou depressivos, afeta mais de 60 milhões de pessoas em todo o mundo. O tratamento é crônico e sintomático e tem como principal fármaco representante o carbonato de lítio. Porém, devido ao estreito índice terapêutico, este medicamento pode provocar muitos efeitos adversos, como hipotiroidismo, tremor muscular involuntário, polidipsia, poliúria, diarreia, dispneia, ganho de peso e rash cutâneo. Assim, o controle da absorção e biodisponibilidade do lítio é fundamental para reduzir a dose do fármaco e consequentemente atenuar seus efeitos adversos. Uma alternativa promissora para o controle destes fatores é a acumulação do medicamento em macromoléculas presentes na biomassa micelial de cogumelos que poderiam retardar a absorção do lítio ao longo do sistema digestório. Um destes cogumelos é o Ganoderma lucidum (Curt.: Fr.) Karst. (Basidiomycota), um dos cogumelos medicinais mais populares do mundo, que tem amplo potencial de bioacumular metais de interesse nutricional e farmacológico em seu micélio. Entretanto, previamente aos estudos pré-clínicos para comprovação da eficácia desta substância, estudos de toxicidade devem ser conduzidos. Desta forma, esta pesquisa teve como objetivo avaliar a intensidade da toxicidade ocasionada pela administração aguda da biomassa micelial de G. lucidum bioacumulada com lítio em ratos Wistar, de acordo com o protocolo 423 da Organização para a Cooperação e Desenvolvimento Econômico (OECD). Todo o protocolo experimental foi aprovado pelo Comitê de Ética Envolvendo Pesquisa e Experimentação Animal da UNIPAR (protocolo nº 1006/2019). A biomassa micelial de G. lucidum foi produzida em frascos Erlenmeyer contendo meio líquido de cultivo à base de melaço de cana-de-açúcar e solução de carbonato de lítio, mantidos em cultivo por 21 dias, em estufa. Para o estudo de toxicidade, dois grupos de ratos Wistar machos de 2 meses (n = 6), foram tratados com dose única de 300 mg/kg ou 2000 mg/kg de biomassa micelial de G. lucidum bioacumulada com lítio, por gavagem. Ratos Wistar machos tratados agudamente com veículo (água deionizada) compuseram o grupo basal (n = 6). A avaliação dos sinais clínicos e peso corporal dos animais foi realizada 30 minutos, 1, 2, 3 e 4 horas e 14 dias após o tratamento. No 15º dia, após a eutanásia dos animais por aprofundamento anestésico em câmara de saturação com isoflurano, o sangue foi coletado por decapitação para investigação de parâmetros bioquímicos e hematológicos. Na sequência, rins, fígado, baço e coração foram coletados, pesados e processados para análises histopatológicas. Não foram observadas diferenças significativas no peso dos animais, sinais clínicos e parâmetros bioquímicos, hematológicos e histopatológicos. Conclui-se, assim, que ratos tratados com a biomassa micelial de G. lucidum bioacumulada com lítio não apresentam sinais de toxicidade. Entretanto, estudos de toxicidade com doses repetidas devem ser conduzidos para a determinação do perfil de toxicidade desta substância.

Bipolar disorder, a chronic mental disorder characterized by manic and/or depressive episodes, affects more than 60 million people worldwide. The treatment is chronic and symptomatic, and its main representative drug is lithium carbonate. However, due to the narrow therapeutic index, this medication can cause many adverse effects, such as hypothyroidism, involuntary muscle tremor, polydipsia, polyuria, diarrhea, dyspnoea, weight gain and skin rash. Thus, controlling the absorption and bioavailability of lithium is essential to reduce the dose of the drug and consequently mitigate its adverse effects. A promising alternative for the control of these factors, is the accumulation of the drug in macromolecules present in the mycelial biomass of mushrooms that could delay the absorption of lithium throughout the digestive system. One of these mushrooms is Ganoderma lucidum (Curt.: Fr.) Karst. (Basidiomycota), one of the most popular medicinal mushrooms in the world, which has ample potential to accumulate metals of nutritional and pharmacological interest in its mycelium. However, prior to preclinical studies to prove the efficacy of this substance, toxicity studies must be conducted. Thus, this research evaluated the intensity of toxicity caused by the acute administration of the mycelial biomass of G. lucidum accumulated with lithium in Wistar rats, according to protocol 423 of the Organization for Economic Cooperation and Development (OECD). The entire experimental protocol was approved by the Ethics Committee Involving Animal Research and Experimentation at UNIPAR (protocol nº 1006/2019). The mycelial biomass of G. lucidum was produced in Erlenmeyer flasks containing liquid culture medium based on sugarcane molasses and lithium carbonate solution, kept in culture for 21 days, in an oven. For the toxicity study, two groups of 2-month-old male Wistar rats (n = 6) were treated with a single dose of 300 mg/kg or 2000 mg/kg of mycelial biomass of G. lucidum accumulated with lithium, by gavage. Male Wistar rats treated acutely with vehicle (deionized water) composed the basal group (n = 6). The evaluation of clinical signs and body weight of the animals was performed 30 minutes, 1, 2, 3 and 4 hours and 14 days after treatment. On the 15th day, after euthanizing the animals by deepening anesthetic in a saturation chamber with isoflurane, blood was collected by decapitation to investigate biochemical and hematological parameters. Then, kidneys, liver, spleen, and heart were collected, weighed, and processed for histopathological analysis. There were no significant differences in the animals' weight, clinical signs, and biochemical, hematological, and histopathological parameters. It is concluded, therefore, that rats treated with the mycelial biomass of G. lucidum accumulated with lithium do not show signs of toxicity. However, toxicity studies with repeated doses should be conducted to determine the toxicity profile of this substance.

Microscopia de epifluorescência para a determinação de biomassa micelial em substrato de cultivo sólido particulado / Epifluorescense microscopy for the determination of mycelial biomass in particulated solid substrate cultivation / Microscopia de pifluorescencia para la determinación de biomasa micelial en sustrato de cultivo solido particulado

A determinação de biomassa micelial fúngica crescida em substratos de cultivo sólido particulado (SCSP) é ainda um desafio devido à dificuldade de separação do micélio e o substrato. O objetivo deste trabalho foi avaliar a técnica de microscopia de epifluorescência para determinação da biomassa micelial de Pleurotus ostreatus em SCSP. Para determinação da exatidão da metodologia P. ostreatus foi crescido em meio líquido de extrato de malte e; a biomassa micelial foi separada por centrifugação, liofilizada e moída. Concentrações conhecidas do pó do micélio foram misturadas ao SCSP, composto de bagaço de cana de açúcar e fibra de soja, previamente autoclavado. Em seguida, a biomassa micelial foi determinada por microscopia de epifluorescência. Para promover a variação da biomassa micelial a ser determinada por microscopia de epifluorescência, SCSP adicionado de diferentes concentrações de ferro foram utilizados para o crescimento do fungo. Concluiu- -se que a técnica apresenta baixa precisão e exatidão, o que implica na necessidade de maiores estudos para aplicação desta técnica para a determinação de biomassa micelial crescida em SCSP.

Determination of fungal mycelial biomass grown on solid substrate cultivation (SSC) is still a challenge due to the difficulty in separating mycelium and substrate. The objective of this study was to evaluate the epifluorescence microscopy to determine the mycelial biomass of Pleurotus ostreatus grown in SSC. P. ostreatus was grown in malt extract liquid medium and mycelial biomass was separated by centrifugation. It was then lyophilized and milled. Mycelial powder was added at known concentrations to SSC composed of sugarcane bagasse and soy fiber, previously autoclaved. Mycelial biomass was determined by epifluorescence microscopy. In order to promote mycelial biomass variation for the determination by epifluorescence microscopy, SSC added at different iron concentrations was used for fungus growth. It was concluded that the technique has low precision and accuracy, which implies the need for further studies in order to apply this technique for the determination of mycelial biomass grown in SSC.

La determinación de biomasa micelial fúngica crecida en sustratos de cultivo sólido particulado (SCSP) es todavía un reto debido a la dificultad de separación del micelio y el sustrato. El objetivo de este estudio fue evaluar la técnica de microscopía de epifluorescencia para determinación de la biomasa micelial de Pleurotus ostreatus en SCSP. Para determinación de exactitud de la metodología P. ostreatus se cultivó en medio líquido de extracto de malta y; la biomasa micelial separada por centrifugación, liofilizada y molida. Concentraciones conocidas del polvo del micelio fueron mezcladas al SCSP, compuesto de bagazo de caña de azúcar y fibra de soya, previamente tratado en autoclave. A continuación, la biomasa micelial a ser determinada por microscopía de epifluorescencia. Para promover la variación de la biomasa micelial a ser determinada por microscopía de epifluorescencia, SCSP añadida con diferentes concentraciones de hierro fueron utilizados para el crecimiento del hongo. Se concluye que la técnica presenta baja precisión y exactitud, lo que implica en la necesidad de realizar más estudios para aplicación de esta técnica para la determinación de biomasa micelial crecida en SCSP.

Microscopia de epifluorescência para a determinação de biomassa micelial em substrato de cultivo sólido particulado / Epifluorescense microscopy for the determination of mycelial biomass in particulated solid substrate cultivation / Microscopia de pifluorescencia para la determinación de biomasa micelial en sustrato de cultivo solido particulado

A determinação de biomassa micelial fúngica crescida em substratos de cultivo sólido particulado (SCSP) é ainda um desafio devido à dificuldade de separação do micélio e o substrato. O objetivo deste trabalho foi avaliar a técnica de microscopia de epifluorescência para determinação da biomassa micelial de Pleurotus ostreatus em SCSP. Para determinação da exatidão da metodologia P. ostreatus foi crescido em meio líquido de extrato de malte e; a biomassa micelial foi separada por centrifugação, liofilizada e moída. Concentrações conhecidas do pó do micélio foram misturadas ao SCSP, composto de bagaço de cana de açúcar e fibra de soja, previamente autoclavado. Em seguida, a biomassa micelial foi determinada por microscopia de epifluorescência. Para promover a variação da biomassa micelial a ser determinada por microscopia de epifluorescência, SCSP adicionado de diferentes concentrações de ferro foram utilizados para o crescimento do fungo. Concluiu- -se que a técnica apresenta baixa precisão e exatidão, o que implica na necessidade de maiores estudos para aplicação desta técnica para a determinação de biomassa micelial crescida em SCSP.(AU)

Determination of fungal mycelial biomass grown on solid substrate cultivation (SSC) is still a challenge due to the difficulty in separating mycelium and substrate. The objective of this study was to evaluate the epifluorescence microscopy to determine the mycelial biomass of Pleurotus ostreatus grown in SSC. P. ostreatus was grown in malt extract liquid medium and mycelial biomass was separated by centrifugation. It was then lyophilized and milled. Mycelial powder was added at known concentrations to SSC composed of sugarcane bagasse and soy fiber, previously autoclaved. Mycelial biomass was determined by epifluorescence microscopy. In order to promote mycelial biomass variation for the determination by epifluorescence microscopy, SSC added at different iron concentrations was used for fungus growth. It was concluded that the technique has low precision and accuracy, which implies the need for further studies in order to apply this technique for the determination of mycelial biomass grown in SSC.

La determinación de biomasa micelial fúngica crecida en sustratos de cultivo sólido particulado (SCSP) es todavía un reto debido a la dificultad de separación del micelio y el sustrato. El objetivo de este estudio fue evaluar la técnica de microscopía de epifluorescencia para determinación de la biomasa micelial de Pleurotus ostreatus en SCSP. Para determinación de exactitud de la metodología P. ostreatus se cultivó en medio líquido de extracto de malta y; la biomasa micelial separada por centrifugación, liofilizada y molida. Concentraciones conocidas del polvo del micelio fueron mezcladas al SCSP, compuesto de bagazo de caña de azúcar y fibra de soya, previamente tratado en autoclave. A continuación, la biomasa micelial a ser determinada por microscopía de epifluorescencia. Para promover la variación de la biomasa micelial a ser determinada por microscopía de epifluorescencia, SCSP añadida con diferentes concentraciones de hierro fueron utilizados para el crecimiento del hongo. Se concluye que la técnica presenta baja precisión y exactitud, lo que implica en la necesidad de realizar más estudios para aplicación de esta técnica para la determinación de biomasa micelial crecida en SCSP.(AU)

Crescimento miceliano in vitro de pleurotus ostreatoroseus e colonização do substrato capim-elefante (pennisetum purpureum schum.) suplementado com diferentes farelos

ABSTRACT Mushrooms of the genera Pleurotus develop in different substrates or compounds based on celullosic or lignified residues. As crop yield depends on the formulation of the culture media, the present study was aimed at measuring and evaluating the in-vitro mycelium growth of P. ostreatoroseus in different culture media and its colonization of elephantgrass substrate supplemented with different brans. Experiment 1 consisted of the mushroom stains cultured in elephant-grass culture media supplemented with soy, wheat, rice and corn brans in the concentrations 0, 10 and 20%, distributed in Petri plates, inoculated with the strain POR01/03 of P. ostreatoroseus and incubated at 28° C. Mass and mycelium growth were evaluated. Experiment 2 involved the use of the previously moistened elephant-grass substrate, which received the same supplementation as that of experiment 1. This was packaged in test tubes, sterilized, inoculated with the same strain and then maintained under the same conditions of experiment 1. The elephantgrass culture media supplemented with 20% soy bran and 20% rice bran provided, respectively, larger development of the mass and mycelium growth, when compared with the other treatments. However, colonization took place the quickest on the elephant-grass substrate without addition of the soy, wheat, rice and corn brans.

RESUMO Cogumelos do gênero Pleurotus desenvolvem-se em diferentes substratos ou compostos à base de resíduos celulósicos ou lignificados, sendo que conforme a formulação do meio de cultivo e do substrato, maior colonização poderá ser obtida. Assim, este trabalho teve como objetivo avaliar o crescimento miceliano in vitro de P. ostreatoroseus em diferentes meios de cultura e a sua colonização no substrato capim-elefante, suplementado com diferentes farelos. O experimento 1 consistiu na utilização de meios de cultura estéril à base de capim-elefante suplementados com farelos de soja, trigo, arroz e milho nas concentrações de 0, 10 e 20%, distribuídos em placas de Petri, inoculados com a linhagem POR01/03 de P. ostreatoroseus e incubados a 28º C, visando a avaliação da massa e do crescimento miceliano. O experimento 2 constituiu-se na utilização do substrato capim-elefante previamente umedecido, o qual recebeu a mesma suplementação do experimento 1. Este foi acondicionado em tubos de ensaio, esterilizado, inoculado com a mesma linhagem e conduzido nas mesmas condições que o experimento anterior. O meio de cultivo à base de capimelefante suplementado com 20% de farelo de soja e 20% de farelo de arroz proporcionou, respectivamente, maior desenvolvimento de massa e crescimento miceliano, quando comparado aos demais tratamentos. Enquanto que a colonização do substrato capim-elefante ocorreu de forma mais rápida no tratamento sem a suplementação do substrato com os farelos de soja, trigo, arroz e milho.

Submerged culture conditions for the production of mycelial biomass and antimicrobial metabolites by Polyporus tricholoma Mont.

Basidiomycete fungi of the Polyporus genus are a source of secondary metabolites which are of medicinal interest as antibacterial compounds. As these substances are produced in a small amount by the fungi, the study of the cultivation conditions in vitro that could possibly optimize their production seems of major importance. The effects of glucose and lactose, pH and agitation on biomass concentration and on the specific growth rate caused by the basidiomycete Polyporus tricholoma were investigated. The initial pH (4.5, 6.5 and 8.5) was autoregulated at pH 5.5, and the agitation increased the mycelial growth and the specific growth rate. The high concentration of carbon sources (4%) increased biomass production. The lactose concentration and the absence of agitation were determinant in the production of antibacterial metabolites. The characterization of the antibacterial substance by GC-MS indicated a major compound, isodrimenediol, produced by the fungus Polyporus tricholoma with activity against Staphylococcus aureus.

Os fungos basidiomicetos do gênero Polyporus são fonte de metabólitos secundários de interesse medicinal como os compostos antibacterianos. Como estas substâncias são produzidas em pequenas quantidades pelos fungos, o estudo de condições de cultivo in vitro que otimizem sua produção, é de fundamental importância. Os efeitos da glicose e lactose, pH e agitação na concentração da biomassa e na velocidade específica de crescimento realizada pelo basidiomiceto Polyporus tricholoma foram investigados. O pH inicial (4.5, 6.5 e 8.5) foi autoregulado para pH 5.5, e a agitação aumentou o crescimento micelial e a velocidade específica de crescimento. A maior concentração das fontes de carbono (4%) incrementou a produção de biomassa. A concentração de lactose e a ausência de agitação foram determinantes na produção dos metabólitos antibacterianos. A caracterização da substância antibacteriana por CG-EM mostrou como componente majoritário o isodrimenediol, produzido pelo fungo Polyporus tricholoma, com atividade contra Staphylococcus aureus.

Behavioural and chemical studies of discrimination processes in the leaf-cutting ant Acromyrmex laticeps nigrosetosus (Forel, 1908)

Leaf-cutting ants live in symbiosis with a basidiomycete fungus that is exploited as a source of nutrients for ant larvae. Tests of brood transport revealed that Acromyrmex laticeps nigrosetosus workers did not discriminate a concolonial brood from an alien brood. The same result was observed with tests of fungus transport. Adult workers showed no aggressive behaviour to workers from other alien colonies (non-nestmates). There was no qualitative variation in the chemical profiles of larvae, pupae and adult workers from the different colonies. However, quantitative differences were observed between the different colonies. Hypotheses about the lack of intraspecific aggression in this subspecies of ants are discussed.

As formigas cortadeiras vivem em simbiose com um fungo basidiomiceto que é utilizado como fonte de nutriente para suas larvas. Testes de transporte de prole revelaram que as operárias de Acromyrmex laticeps nigrosetosus não discriminaram a prole concolonial de prole estranha. O mesmo resultado foi verificado com testes de transporte do fungo. As operárias adultas não exibiram comportamento agressivo frente a operárias de outras colônias (não companheiras de ninho). Não houve variação qualitativa nos perfis químicos de larvas, pupas e operárias adultas de diferentes colônias. No entanto, diferenças quantitativas foram observadas entre as diferentes colônias. Hipóteses sobre a ausência de agressão intra-específica nesta subespécie de formiga são discutidas.

Antiviral activity of Agaricus blazei Murrill ss. Heinem extract against human and bovine herpesviruses in cell culture

The aqueous extract of Agaricus blazei Murill ss. Heinem, a basidiomycete native from Brazil, frequently used by popular medicine, mainly in the form of tea, was assessed to its antiviral action against herpes simplex type 1 (HSV-1) and bovine herpes type 1 (BoHV-1) in HEp-2 cell culture. Viral replication inhibition was evaluated by plaque assay and immunofluorescence test. The extract demonstrated virucide action for both viruses, being more effective against HSV-1, inhibiting its infectivity in 78.4 and 73.9% at the concentrations of 50 and 100 µg/mL, respectively moreover, reduction in 47% the number of fluorescent cells was observed for both concentrations. The extract also showed discrete therapeutic activity. These results suggest that A. blazei extract acts mainly in the viral particle, however, the effect during virus replication can not be ruled out.

O extrato aquoso de Agaricus blazei Murill ss. Heinem, um basidiomiceto nativo do Brasil, usado na medicina popular, na forma de chá, foi avaliado quanto suas propriedades antivirais contra herpes simplex tipo 1 (HSV-1) e herpes bovino tipo 1 (BoHV-1) em cultura de células HEp-2. A inibição da replicação viral foi monitorada pelos ensaio de placa e reação de imunofluorescência. O extrato apresentou atividade virucida mais efetiva do que terapêutica para ambos os vírus, sendo mais efetivo portanto para HSV-1, inibindo em mais de 70% o número de plaques e em cerca de 47% o número de células apresentando fluorescência específica, nas concentrações de 50 e 100 µg/mL, nas duas técnicas utilizadas. Os resultados obtidos sugerem que o extrato aquoso de A. blazei deve agir principalmente sobre a partícula viral, embora a inibição durante o ciclo replicativo do vírus não deva ser excluída.

Genetic characterization of isolates of the basidiomycete Agaricus blazei by RAPD

The genetic divergence of five isolates of Agaricus blazei was determined based on RAPD data. Results indicate that there is little genetic variability among the commercialized strains and that RAPD is a feasible and low cost technique that can be used to characterize this fungus.

Determinou-se a divergência genética entre cinco isolados do fungo Agaricus blazei pela técnica de RAPD. Dos cinco isolados três não apresentaram qualquer divergência, sendo caracterizados como isolados de uma mesma origem, embora obtidos em locais diferentes do país. Outros dois isolados mostraram-se diferentes do primeiro grupo e divergentes entre si.

Screening of Colletotrichum isolates from the Amazon biodiversity as producers of laccases using a simple methodology / Seleção de isolados de Colletotrichum da biodiversidade da Amazônia como produtores de lacases utilizando uma metodologia simplificada

This work presents a simple and rapid technique to select fungal strains with the ability to produce laccases. Fifteen strains of Colletotrichum spp. from the Amazon region (isolated from cumarú, puerária, cupuaçu and weed plants), as well as a strain isolated from espinheira santa in the south of Brazil, were found to produce laccases. Laccase activity was assayed using ABTS and DMP as putative substrates. Only Colletotrichum isolates of puero (P2 and P3) did not present activity towards DMP. Isolates D3 (weed plants), M3 (espinheira santa), C2 and C3 (cumarú) were selected, and were compared with the basidiomycete Pleurotus ostreatus used as a reference laccase producer under stationary and submerged culture conditions. Highest laccase activity was detected only in the stationary cultures of Colletotrichum isolate D3 assayed against ABTS (35 U/l) and DMP (8 U/l).

O presente trabalho apresenta uma metodologia simples e rápida para selecionar isolados fúngicos produtores de lacases. Foram avaliados quinze isolados de Colletotrichum da biodiversidade da Amazônia (obtidos de cumarú, puerária, cupuaçu e plantas daninhas), além de um isolado de espinheira santa do sul do país, quanto à produção de lacases. A atividade da enzima foi determinada utilizandose os substratos ABTS e o DMP. Somente os isolados de puerária P2 e P3 não apresentaram atividade sobre o substrato DMP. Os isolados D3 (planta daninha), M3 (espinheira santa), C2 e C3 (cumarú) foram selecionados e comparados quanto à produção de lacases em cultivos líquidos estáticos e agitados, utilizando-se o Pleurotus ostreatus, um basidiomiceto produtor de lacase, como referência. A maior atividade de lacase foi detectada apenas nos cultivos estáticos do isolado D3 (35U/l em ABTS; 8U/l em e DMP).

Oxidative enzymes activities from Lentinula edodes on agribusiness substrate / Atividade de enzimas oxidativas do Lentinula edodes em substratos agroindustriais

Basidyomycete Lentinula edodes has its related enzymatic activity mainly on the agribusiness waste kind used as a substrate. The objective of this work was to verify the activity of oxidative enzymes lacase (Lac), lignina peroxidase (LiP) and manganese peroxidase (MnP) of three L. edodes strains, in stationary system, cultivated the 25 ºC, in the absence of light, in substrates wtih 20% of bran of rice, 1% of CaCO3 and 79% of rice husk (CA), eucalyptus sawdust (SE), cassava bagasse (BM) and sugarcane bagasse (BC), adjusted to 60% of humidity. The Lac and MnP activities were bigger in eucalyptus sawdust (SE)  and sugarcane bagasse (BC). The LiP activity was not induced for tested substrates. The rice husk (CA) and cassava bagasse (BM) substrates, although are not adequate to produce Lac or MnP, can be used as additives to increase the porosity, air availability and easy metabolism polysaccharides.

O basidiomiceto Lentinula edodes tem sua atividade enzimática relacionada, principalmente, ao tipo de resíduo agroindustrial utilizado como substrato. O objetivo deste trabalho foi verificar a atividade das enzimas oxidativas lacase (Lac), lignina peroxidase (LiP) e manganês peroxidase (MnP) de três linhagens de L. edodes, em sistema estacionário, cultivadas a 25 ºC, na ausência de luz, em substratos compostos de 20% de farelo de arroz, 1% de CaCO3 e 79% de casca de arroz (CA), serragem de eucalipto (SE), bagaço de mandioca (BM) e bagaço de cana-de-açúcar (BC), ajustados à 60% de umidade. As atividades de Lac e MnP foram maiores nos substratos a base de serragem de eucalipto (SE) e bagaço de cana-de-açúcar (BC). A atividade de LiP não foi induzida pelos substratos testados. Os substratos à base de casca de arroz (CA) e bagaço de mandioca (BM), não se mostraram adequados na indução da produção de Lac ou MnP, mas podem ser utilizados como aditivos para aumentar a porosidade, disponibilidade de ar e fornecer polissacarídeos de fácil metabolização.

Screening of Colletotrichum isolates from the Amazon biodiversity as producers of laccases using a simple methodology / Seleção de isolados de Colletotrichum da biodiversidade da Amazônia como produtores de lacases utilizando uma metodologia simplificada

This work presents a simple and rapid technique to select fungal strains with the ability to produce laccases. Fifteen strains of Colletotrichum spp. from the Amazon region (isolated from cumarú, puerária, cupuaçu and weed plants), as well as a strain isolated from espinheira santa in the south of Brazil, were found to produce laccases. Laccase activity was assayed using ABTS and DMP as putative substrates. Only Colletotrichum isolates of puero (P2 and P3) did not present activity towards DMP. Isolates D3 (weed plants), M3 (espinheira santa), C2 and C3 (cumarú) were selected, and were compared with the basidiomycete Pleurotus ostreatus used as a reference laccase producer under stationary and submerged culture conditions. Highest laccase activity was detected only in the stationary cultures of Colletotrichum isolate D3 assayed against ABTS (35 U/l) and DMP (8 U/l).

O presente trabalho apresenta uma metodologia simples e rápida para selecionar isolados fúngicos produtores de lacases. Foram avaliados quinze isolados de Colletotrichum da biodiversidade da Amazônia (obtidos de cumarú, puerária, cupuaçu e plantas daninhas), além de um isolado de espinheira santa do sul do país, quanto à produção de lacases. A atividade da enzima foi determinada utilizandose os substratos ABTS e o DMP. Somente os isolados de puerária P2 e P3 não apresentaram atividade sobre o substrato DMP. Os isolados D3 (planta daninha), M3 (espinheira santa), C2 e C3 (cumarú) foram selecionados e comparados quanto à produção de lacases em cultivos líquidos estáticos e agitados, utilizando-se o Pleurotus ostreatus, um basidiomiceto produtor de lacase, como referência. A maior atividade de lacase foi detectada apenas nos cultivos estáticos do isolado D3 (35U/l em ABTS; 8U/l em e DMP).

Oxidative enzymes activities from Lentinula edodes on agribusiness substrate / Atividade de enzimas oxidativas do Lentinula edodes em substratos agroindustriais

Basidyomycete Lentinula edodes has its related enzymatic activity mainly on the agribusiness waste kind used as a substrate. The objective of this work was to verify the activity of oxidative enzymes lacase (Lac), lignina peroxidase (LiP) and manganese peroxidase (MnP) of three L. edodes strains, in stationary system, cultivated the 25 ºC, in the absence of light, in substrates wtih 20% of bran of rice, 1% of CaCO3 and 79% of rice husk (CA), eucalyptus sawdust (SE), cassava bagasse (BM) and sugarcane bagasse (BC), adjusted to 60% of humidity. The Lac and MnP activities were bigger in eucalyptus sawdust (SE)  and sugarcane bagasse (BC). The LiP activity was not induced for tested substrates. The rice husk (CA) and cassava bagasse (BM) substrates, although are not adequate to produce Lac or MnP, can be used as additives to increase the porosity, air availability and easy metabolism polysaccharides.

O basidiomiceto Lentinula edodes tem sua atividade enzimática relacionada, principalmente, ao tipo de resíduo agroindustrial utilizado como substrato. O objetivo deste trabalho foi verificar a atividade das enzimas oxidativas lacase (Lac), lignina peroxidase (LiP) e manganês peroxidase (MnP) de três linhagens de L. edodes, em sistema estacionário, cultivadas a 25 ºC, na ausência de luz, em substratos compostos de 20% de farelo de arroz, 1% de CaCO3 e 79% de casca de arroz (CA), serragem de eucalipto (SE), bagaço de mandioca (BM) e bagaço de cana-de-açúcar (BC), ajustados à 60% de umidade. As atividades de Lac e MnP foram maiores nos substratos a base de serragem de eucalipto (SE) e bagaço de cana-de-açúcar (BC). A atividade de LiP não foi induzida pelos substratos testados. Os substratos à base de casca de arroz (CA) e bagaço de mandioca (BM), não se mostraram adequados na indução da produção de Lac ou MnP, mas podem ser utilizados como aditivos para aumentar a porosidade, disponibilidade de ar e fornecer polissacarídeos de fácil metabolização.

Testing for the ability to modify antibiotics of Panus tigrinus 8/18 Lentinus strigosus 1566 laccase

Abstract In advanced biotechnology, the utilization of enzymes to achieve new or modified compounds with antibacterial, fungicidal, and anti-cancer specifications is crucial. Mushroom lactases are a hopeful biocatalyst for the synthesis and modification of different compounds. They are an accessible and inexpensive enzyme for the preparation of reaction objects and have recently received attention. Laccase purification was performed from basidiomycete Lentinus strigosus (LS) in several stages: Stage 1. On ion-exchange chromatography on TEAE Servacell 23 (400 ml), two distinctly separated laccase activity peaks were observed, eluted from the carrier at 0.21 and 0.27 M NaCl. In order to reduce the loss of enzymes, all fractions with laccase activity were collected, concentrated, and desalted using an ultrafiltration cell (Amicon, United States) with a UM-10 membrane. Stage 2. The resulting preparation with laccase activity was applied to a Q-Sepharose column (60 ml). Two well-separated peaks with laccase activity were obtained during the elution: laccase I (0.12 M NaCl) and laccase II (0.2 M NaCl). Stage 3. In the course of further purification of both enzymes, carried out on anion-exchange carrier Resource Q (6 ml), a broken gradient was used: 0 - 10%, 10 - 20%, and 20 - 100% with 1M NaCl. Stage 4. Both laccase I and laccase II, obtained after Resource Q, were desalted, concentrated to 1 ml each, and applied to a Superdex 75 gel filtration column. As a result, two laccases were obtained in a homogeneous form.

Resumo Na biotecnologia moderna, o uso de enzimas para obter compostos novos ou modificados com propriedades antibacterianas, antifúngicas e anticancerígenas é crucial. Lactases de cogumelos são biocatalisadores promissores para síntese e modificação de diferentes compostos, por serem enzimas baratas e disponíveis para a preparação de componentes de reação, e vem recebendo a devida atenção recentemente. A purificação da lacase foi realizada a partir do basidiomiceto Lentinus strigosus em vários estágios: Etapa 1 - na cromatografia de troca iônica em TEAE Servacell 23 (400 ml), foram observados dois picos de atividade da lacase distintamente separados, com eluição do transportador a 0,21 e 0,27 M de NaCl. Para reduzir a perda de enzimas, todas as frações com atividade de lacase foram coletadas, concentradas e dessalinizadas em uma célula de ultrafiltração (Amicon, Estados Unidos) com membrana UM-10; Etapa 2 - a preparação resultante com atividade de lacase foi aplicada a uma coluna Q-Sepharose (60 ml). Durante a eluição, foram obtidos dois picos bem separados com atividade de lacase: lacase I (NaCl 0,12 M) e lacase II (NaCl 0,2 M); Etapa 3 - no decurso da purificação adicional de ambas as enzimas, realizada no Recurso Q de transportador de troca aniônica (6 ml), um gradiente quebrado foi usado: 0-10%, 10-20% e 20-100% com NaCl 1M; Etapa 4 - tanto a lacase I como a lacase II, obtidas após o Recurso Q, foram dessalinizadas e concentradas para 1 ml cada e aplicadas a uma coluna de filtração em gel Superdex 75. Como resultado, duas lacases foram obtidas de forma homogênea.

Pasteurization of Brazilian peat for Agaricus brasiliensis cultivation / Pasteurização de turfa brasileira para o cultivo de Agaricus brasiliensis

Agaricus brasiliensis is a Brazilian basidiomycete which has been cultivated and consumed around the world as a therapeutic food. Casing layer is one of the most important steps on A. brasiliensis cultivation and European peat is the most used casing layer. Besides the importance of it on mushroom cultivation the peat import could be a risk of exotic organism introduction. Alternative as Brazilian peat is barely used for mushroom growers in Brazil. Thus, the objective of this work was to evaluate Brazilian peat with and without pasteurization as casing layer on A. brasiliensis cultivation. The fungus was previously grown on wheat grains and transferred to a substratum prepared by composted traditional method. After mycelium colonization of the substratum a pasteurized or non pasteurized Brazilian peat (casing layer) was added. It was concluded that pasteurization of the casing layer increases in 30% yield after 65 days of cultivation. There is no difference of yield for pasteurized and non pasteurized casing layer until 30 days of cultivation. An increase of flies is observed in non pasteurized casing layer. The production flush is easily perceived with pasteurized casing layer but not with non pasteurized casing layer.

Agaricus brasiliensis é um basidiomiceto originário do Brasil, produzido e consumido mundialmente como alimento terapêutico. A camada de cobertura é uma das mais importantes etapas do cultivo de A. brasiliensis, sendo a turfa européia a mais utilizada para este fim. Apesar da importância deste material no cultivo de cogumelos, a sua importação implica em riscos de introdução de organismos exóticos. Alternativas como a turfa brasileira são pouco exploradas pelos produtores brasileiros. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a turfa brasileira, com e sem pasteurização, como camada de cobertura no cultivo de A. brasiliensis. O fungo foi inicialmente cultivado em grãos de trigo e transferido para o substrato preparado pelo método de compostagem tradicional. Após a completa colonização do substrato, foi adicionada a camada de cobertura (turfa brasileira) pasteurizada ou não pasteurizada. Conclui-se que a pasteurização da camada de cobertura aumenta em 30% a produção de basidiocarpos em 65 dias de cultivo. Para a produção até 30 dias de cultivo não há diferença entre a turfa pasteurizada e não pasteurizada, porém o uso da turfa não pasteurizada aumenta a quantidade de moscas no cultivo e induz a produção de cogumelos de fluxos irregulares ou indefinidos, diferentemente da turfa pasteurizada, que mantém um fluxo de produção regular.