Transferability of heterologous primers in Brycon falcatus / Transferibilidade de primers heterólogos em Brycon falcatus

The genusBryconcomprises fish species of significant socioeconomic and biological importance in Brazil. Despite that, the genetic knowledge about these species is scarce, especially regardingBrycon falcatus. Thus, the objective of this study was to evaluate the transferability of heterologous microsatellite primers inB. falcatus for the first time. Heterologous primers obtained from B. opalinus, B. hilarii, B. insignis, B. orbignyanus, B. amazonicus, Prochilodus argenteus, Prochilodus lineatus, Piaractus mesopotamicus, and Colossoma macropomum were evaluated. The primers that showed the best amplification patterns were applied to a sample of 22 individuals and the genetic parameters were calculated. Nine primers displayed satisfactory cross-amplification withB. falcatus: BoM5 (Brycon opalinus); Bh8, Bh13 and Bh16 (B. hilarii); Borg59 (B. orbignyanus); Bag22 (B. amazonicus); Par12 and Par80 (P. argenteus), and Cm1A8 (C. macropomum). The genetic parameters (number of alleles, effective alleles, allele richness, and expected and observed heterozygosity) and the polymorphic information content (PIC) confirmed the viability of these primers for population genetics analyses. Our study demonstrates the potential of transferability of microsatellite markers from related species and even different genera to B. falcatus, providing usefull tools for future population genetic studies in this species.(AU)

O gênero Brycon compreende um grupo de espécies de peixes de grande importância socioeconômica e biológica no Brasil. Entretanto, o conhecimento genético dessas espécies é escasso, principalmente no caso do Brycon falcatus. Diante disso, objetivou-se verificar a transferibilidade de primers heterólogos em B. falcatus. Foram avaliados primers heterólogos provenientes das espécies B. opalinus, B. hilarii, B. insignis, B. orbignyanus, B. amazonicus, Prochilodus argenteus, Prochilodus lineatus, Piaractus mesopotamicus e Colossoma macropomum. Os primers que demonstraram melhores padrões de amplificação foram aplicados a uma amostra de 22 indivíduos e os parâmetros genéticos foram calculados. Nove primers apresentaram resultados satisfatórios de amplificação cruzada com B. falcatus: BoM5 (Brycon opalinus), Bh8, Bh13 e Bh16 (B. hilarii); Borg59 (Brycon orbignyanus); Bag22 (B. amazonicus); Par12 and Par80 (Prochilodus argenteus) e Cm1A8 (Colossoma macropomum). Os parâmetros genéticos (número de alelos, alelos efetivos, riqueza de alelos e heterozigosidade esperada e observada) e o conteúdo de informação polimórfica (PIC) demonstraram a viabilidade da utilização dos primers para análises genéticas populacionais. Nosso estudo demonstra o potencial de transferibilidade de marcadores microssatélites de espécies relacionadas e até de gêneros diferentes para B. falcatus, fornecendo ferramentas úteis para futuros estudos genéticos populacionais nessa espécie.(AU)

Variation in the structure of the ichthyoplankton community in the lower Paraíba do Sul River

The Paraíba do Sul River is affected by extensive water collection for supply, organic and industrial pollution, and dams. Nonetheless, the ichthyofauna maintains biodiversity and sustains artisanal fisheries. This study analyzes the composition, abundance and distribution of fish larvae, an important approach to determine the reproductive period and spawning sites. The sampling occurred from August 2011 through February 2013 in five sites at a transect between the banks on the lower reach of the Paraíba do Sul River. A total of 5,412 larvae belonging to 20 taxa was captured. The predominant order was Characiformes. Larvae of Prochilodus spp. and Leporinus spp. were the most abundant; larvae of Brycon insignis, an endangered species, were present. Fewer larvae were collected in the second reproductive cycle during a severe drought. The absence of eggs indicates that the study area is not used for spawning, and highlights the need for studies in the main channel and in the tributaries of the Paraíba do Sul River. Fish larvae need to have access to the marginal lagoons along the lower stretch of the river, an area which is the object of disputes between fishermen and farmers.(AU)

O rio Paraíba do Sul é afetado por retirada de água para abastecimento, poluição orgânica e industrial e barramentos, mas mantém a biodiversidade de peixes e sustenta a pesca artesanal. Este estudo apresenta a composição, abundância e distribuição de larvas de peixes, abordagem importante para determinar o período de reprodução e locais de desova. A amostragem ocorreu entre agosto de 2011 e fevereiro de 2013 em cinco pontos de um transecto de 500 m entre as margens no trecho inferior do rio Paraíba do Sul. Um total de 5.412 larvas de 20 táxons foi capturado. Predominaram Characiformes, sendo que larvas de Prochilodus spp. e Leporinus spp. foram as mais abundantes. Larvas de Brycon insignis, espécie em extinção, foram registradas. Larvas foram menos abundantes no segundo ciclo reprodutivo, coincidindo com o início de uma seca severa na região. A ausência de ovos nas amostras indica que a área estudada não é utilizada para desova e aponta a necessidade de estudos no canal principal a montante e nos afluentes. Ressaltamos a necessidade de acesso das larvas às lagoas marginais no trecho inferior do rio Paraíba do Sul, área objeto de desentendimentos entre pescadores e agricultores.(AU)

Variation in the structure of the ichthyoplankton community in the lower Paraíba do Sul River

The Paraíba do Sul River is affected by extensive water collection for supply, organic and industrial pollution, and dams. Nonetheless, the ichthyofauna maintains biodiversity and sustains artisanal fisheries. This study analyzes the composition, abundance and distribution of fish larvae, an important approach to determine the reproductive period and spawning sites. The sampling occurred from August 2011 through February 2013 in five sites at a transect between the banks on the lower reach of the Paraíba do Sul River. A total of 5,412 larvae belonging to 20 taxa was captured. The predominant order was Characiformes. Larvae of Prochilodus spp. and Leporinus spp. were the most abundant; larvae of Brycon insignis, an endangered species, were present. Fewer larvae were collected in the second reproductive cycle during a severe drought. The absence of eggs indicates that the study area is not used for spawning, and highlights the need for studies in the main channel and in the tributaries of the Paraíba do Sul River. Fish larvae need to have access to the marginal lagoons along the lower stretch of the river, an area which is the object of disputes between fishermen and farmers.(AU)

O rio Paraíba do Sul é afetado por retirada de água para abastecimento, poluição orgânica e industrial e barramentos, mas mantém a biodiversidade de peixes e sustenta a pesca artesanal. Este estudo apresenta a composição, abundância e distribuição de larvas de peixes, abordagem importante para determinar o período de reprodução e locais de desova. A amostragem ocorreu entre agosto de 2011 e fevereiro de 2013 em cinco pontos de um transecto de 500 m entre as margens no trecho inferior do rio Paraíba do Sul. Um total de 5.412 larvas de 20 táxons foi capturado. Predominaram Characiformes, sendo que larvas de Prochilodus spp. e Leporinus spp. foram as mais abundantes. Larvas de Brycon insignis, espécie em extinção, foram registradas. Larvas foram menos abundantes no segundo ciclo reprodutivo, coincidindo com o início de uma seca severa na região. A ausência de ovos nas amostras indica que a área estudada não é utilizada para desova e aponta a necessidade de estudos no canal principal a montante e nos afluentes. Ressaltamos a necessidade de acesso das larvas às lagoas marginais no trecho inferior do rio Paraíba do Sul, área objeto de desentendimentos entre pescadores e agricultores.(AU)

Cross-amplification of heterologous microsatellite markers in Piracanjuba / Amplificação cruzada de marcadores microssatélites heterólogos em piracanjuba

Brycon orbignyanus, popularly known in Brazil as piracanjuba, is a fish with great economic value but whose natural population drastically decreased in number during the last years. In this context, genetic variability studies of natural stocks and in restocking programs are fundamental for the adoption of conservation measures. Current analysis verifies the cross-amplification of heterologous primers in B. orbignyanus. Fifty-two primers of the species Brycon opalinus, Brycon hilarii, Brycon insignis, Prochilodus sp., Piaractus mesopotamicus, Colossoma macropomum and Oreochromis niloticus were tested. Primers with the best reproducibility were applied to a sample of 20 individuals and the genetic parameters were calculated. Nine primers provided good results for cross-amplification with B. orbignyanus, involving (BoM5 and BoM13) of Brycon opalinus, (Bh5, Bh6, Bh8, Bh13 and Bh16) of Brycon hilarii, (Bc48-10) of Brycon insignis and (Par80) of Prochilodus argenteus. Primers of Piaractus mesopotamicus, Colossoma macropomum and Oreochromis niloticus failed to provide amplification or provided non-specificity. Results demonstrated the possibility of using primers of different species and genera of B. orbignyanus, facilitating genetic studies on the species.

A piracanjuba (Brycon orbignyanus) é um peixe de grande valor econômico que nos últimos anos tem apresentado uma redução drástica em suas populações naturais. Nesse contexto, estudos de variabilidade genética dos estoques naturais e nos programas de repovoamento são fundamentais para adoção de medidas conservacionistas. O objetivo do presente trabalho foi verificar a amplificação cruzada de primers heterologos em B. orbignyanus. Foram avaliados um total de 52 primers das espécies Brycon opalinus, Brycon hilarii, Brycon insignis, Prochilodus sp., Piaractus mesopotamicus, Colossoma macropomum e Oreochromis niloticus. Os primers com melhor reprodutibilidade foram aplicados a uma amostra de 20 indivíduos e os parâmetros genéticos foram calculados. Nove primers apresentaram resultados satisfatórios de amplificação cruzada com B. orbignyanus, sendo das espécies Brycon opalinus (BoM5 e BoM13), Brycon hilarii (Bh5, Bh6, Bh8, Bh13 e Bh16), Brycon insignis (Bc48-10) e Prochilodus argenteus (Par80). Os primers de Piaractus mesopotamicus, Colossoma macropomum e Oreochromis niloticus não apresentaram amplificação ou apresentaram inespecificidade. Os resultados revelaram a possibilidade da utilização de primers de diferentes espécies e gênero em B. orbignyanus, o que facilita a realização de estudos genéticos nessa espécie.

Cross-amplification of heterologous microsatellite markers in Piracanjuba / Amplificação cruzada de marcadores microssatélites heterólogos em piracanjuba

Brycon orbignyanus, popularly known in Brazil as piracanjuba, is a fish with great economic value but whose natural population drastically decreased in number during the last years. In this context, genetic variability studies of natural stocks and in restocking programs are fundamental for the adoption of conservation measures. Current analysis verifies the cross-amplification of heterologous primers in B. orbignyanus. Fifty-two primers of the species Brycon opalinus, Brycon hilarii, Brycon insignis, Prochilodus sp., Piaractus mesopotamicus, Colossoma macropomum and Oreochromis niloticus were tested. Primers with the best reproducibility were applied to a sample of 20 individuals and the genetic parameters were calculated. Nine primers provided good results for cross-amplification with B. orbignyanus, involving (BoM5 and BoM13) of Brycon opalinus, (Bh5, Bh6, Bh8, Bh13 and Bh16) of Brycon hilarii, (Bc48-10) of Brycon insignis and (Par80) of Prochilodus argenteus. Primers of Piaractus mesopotamicus, Colossoma macropomum and Oreochromis niloticus failed to provide amplification or provided non-specificity. Results demonstrated the possibility of using primers of different species and genera of B. orbignyanus, facilitating genetic studies on the species.(AU)

A piracanjuba (Brycon orbignyanus) é um peixe de grande valor econômico que nos últimos anos tem apresentado uma redução drástica em suas populações naturais. Nesse contexto, estudos de variabilidade genética dos estoques naturais e nos programas de repovoamento são fundamentais para adoção de medidas conservacionistas. O objetivo do presente trabalho foi verificar a amplificação cruzada de primers heterologos em B. orbignyanus. Foram avaliados um total de 52 primers das espécies Brycon opalinus, Brycon hilarii, Brycon insignis, Prochilodus sp., Piaractus mesopotamicus, Colossoma macropomum e Oreochromis niloticus. Os primers com melhor reprodutibilidade foram aplicados a uma amostra de 20 indivíduos e os parâmetros genéticos foram calculados. Nove primers apresentaram resultados satisfatórios de amplificação cruzada com B. orbignyanus, sendo das espécies Brycon opalinus (BoM5 e BoM13), Brycon hilarii (Bh5, Bh6, Bh8, Bh13 e Bh16), Brycon insignis (Bc48-10) e Prochilodus argenteus (Par80). Os primers de Piaractus mesopotamicus, Colossoma macropomum e Oreochromis niloticus não apresentaram amplificação ou apresentaram inespecificidade. Os resultados revelaram a possibilidade da utilização de primers de diferentes espécies e gênero em B. orbignyanus, o que facilita a realização de estudos genéticos nessa espécie.(AU)

Seminal characteristics of piabanha before and after induction with different hormones / Características seminais de piabanha antes e após a indução com diferentes hormônios

The migratory species piabanha does not reproduce in lentic environments since it requires environmental stimuli for the maturation and extrusion of gametes, and therefore hormonal induction is mandatory. Current study compares the seminal characteristics of Brycon insignis without any hormonal induction (Control - Ctrl) and with two types of hormonal inductors, or rather, carp pituitary extract (T1 - 2.5 mg kg-1 body weight) and GnRH analogues, the latter applied in two different concentrations (T2 - 0.7 mg kg-1 body weight and T3 - 1.4 mg kg-1 body weight). Post-induction analyses showed that the hormones increased the motility rate - Ctrl (95%), T1 (100%), T2 (100%) and T3 (98%), although sperm concentration - Ctrl (11.52 x 109); T1 (4.37 x 109); T2 (4.34 x 109); T3 (4.01 x 109) decreased. Assessments for sperm vigor, motility time and spermatic morphology did not vary with hormonal induction. Hormonal inducer does not alter negatively the seminal characteristics of the piabanha, and the choice for the proper hormone depends on the preference of the dispenser. (AU)

A espécie migradora piabanha não possui a capacidade de reproduzir em ambientes lênticos devido à necessidade de estímulos ambientais para a maturação e extrusão dos gametas, por isso a necessidade da indução hormonal. No presente estudo, as características seminais do Brycon insignis foram comparadas sem indução hormonal (Ctrl) e utilizando dois tipos de indutores hormonais - Extrato de Hipófise de Carpa (T1 - 2,5 mg kg-1 de peso vivo) e Análogos de GnRH, sendo este último aplicado em duas concentrações distintas (T2 - 0,7 mg kg-1 de peso vivo e T3 - 1,4 mg kg-1 de peso vivo). As análises realizadas após a indução mostraram que os hormônios utilizados produziram um aumento da taxa de motilidade - Ctrl (95%), T1 (100%), T2 (100%) e T3 (98%), porém houve uma diminuição na concentração espermática - Ctrl (11,52 x 109 ), T1 (4,37 x 109 ), T2 (4,34 x 109 ) e T3 (4,01 x 109 ). Os restantes das avaliações, vigor espermático, tempo de motilidade e morfologia espermática não apresentaram variações com a indução hormonal. Portanto, a utilização do indutor hormonal não altera negativamente as características seminais de piabanha, e a escolha do mesmo se deve à preferência do manipulador.(AU)

Osmolalidade das soluções ativadoras com ou sem íons na ativação da motilidade do sêmen criopreservado de piabanha Brycon insignis (Characiformes)

O objetivo deste estudo foi determinar o efeito de soluções ativadoras com diferentes osmolalidades, com ou sem íons, na qualidade espermática do sêmen criopreservado de Brycon insignis. O sêmen de 8 machos foi coletado após tratamento hormonal com extrato de hipófise de carpa. Após a coleta, o sêmen foi criopreservado utilizando metilglicol como crioprotetor e uma solução de BTS® como diluidor. O sêmen diluído foi envasado em palhetas de 0,5 mL, que foram congeladas em botijão de vapor de nitrogênio (dryshipper) e armazenadas em botijão de nitrogênio líquido. Após cinco anos, as palhetas foram descongeladas em banho-maria a 60°C por 8 segundos. No experimento 1, 11 soluções foram preparadas utilizando água osmose reversa (~ 0 mOsm/Kg) e glicose ou NaCl ajustadas as seguintes osmolalidades: 50, 100, 150, 200 e 250 mOsm/Kg. No experimento 2, 6 soluções foram preparadas utilizando água osmose reversa e NaHCO3, citrato de sódio (Na3C6H5O7), NaCl, KCl, CaCl2 ou glicose (controle não iônico), ajutadas a ~ 98 mOsm/Kg. Os parâmetros de taxa de motilidade, velocidade curvilínea (VCL), velocidade retilínea (VSL), velocidade média de percurso (VAP) e frequência de batimento flagelar cruzado (BCF) do sêmen após o descongelamento foram determinados utilizando o sistema computadorizado de análise de sêmen (CASA). Maiores taxas de motilidade e velocidades foram observadas em amostras ativadas nas soluções de NaCl e glicose em osmolalidades de 0 a 200 mOsm/Kg, se comparadas com as amostras ativadas nas soluções de 250 mOsm/Kg e não foram observadas diferenças estatísticas entre as soluções de NaCl e glicose dentro da mesma osmolalidade. As amostras ativadas em NaHCO3, citrato de sódio, NaCl, KCl e glicose apresentaram as maiores taxas de motilidade, se comparada às amostras ativadas em CaCl2. Maiores velocidades curvilineares foram observadas em amostras ativadas em NaHCO3, citrato de sódio, KCl e glicose, quando comparadas às amostras ativadas em CaCl2. As amostras ativadas em NaCl apresentaram valores intermediários para VCL. O sêmen criopreservado de B. insignis pode ser ativado em soluções iônicas ou não iônicas com osmolalidades de 0 a 200 mOsm/Kg, entretanto a solução de CaCl2 deve ser evitada.

The objective of this study was to determine the effect of activating solutions with different osmolalities, with or without ions, on the sperm quality of the cryopreserved sperm of Brycon insignis. The semen of 8 males was collected after hormonal treatment with carp pituitary extract. After collection, the semen was cryopreserved using methyl glycol as a cryoprotectant and a BTS solution was used as extender. The diluted sperm loaded into 0.5 mL straws, which were frozen in a nitrogen vapor vessel (dry shipper) and stored in a liquid nitrogen vessel. After five years the straws were thawed in a water bath at 60 °C for 8 seconds. In experiment 1, 11 solutions were prepared with reverse osmosis water (0 mOsm kg-1) and glucose or NaCl adjusted to an osmolality of 50, 100, 150, 200 and 250 mOsm kg-1. In experiment 2, 6 solutions were prepared with reverse osmosis water e NaHCO3, sodium citrate ((Na3C6H5O7), NaCl, KCl, CaCl2 or glicose (as an ion-free control), adjusted to ~98 mOsm Kg-1. The parameters of motility rate, curvilinear velocity (VCL), straight line (VSL), average path (VAP) and beat-cross frequency (BCF) of the post-thaw were determined using a Computer-Assisted Sperm Analyzer (CASA). Higher motility rates and velocities were observed in activated samples in NaCl and glucose solutions at osmolalities of 0 to 200 mOsm Kg-1, when compared to the activated samples in the solutions of 250 mOsm Kg-1 and was no statistical difference on motility rate and velocities between samples activated in NaCl or in glucose solutions within the same osmolality. The samples activated in NaHCO3, sodium citrate, NaCl, KCl or glucose presented the higher rates of motility, when compared to samples activated in CaCl2. Higher curvilinear velocities were observed in samples activated in NaHCO3, sodium citrate, KCl and glucose, when compared to samples activated in CaCl2. Samples activated in NaCl presented intermediate VCL values. The post-thaw sperm in B. insignis can be activated in ionic or non-ionic solutions with osmolalities of 0 to 200 mOsm/kg, however the CaCl2 solution should be avoided.

Microsatellite variation and population genetic structure of a neotropical endangered Bryconinae species Brycon insignis Steindachner, 1877: implications for its conservation and sustainable management

Piabanha (Brycon insignis) is a freshwater fish species from the drainages in Southeastern Brazil. During the 1950s, it was an important economic and food resource for local populations, but dramatic and continuous environmental degradation seriously jeopardized the B. insignis populations in the region. Microsatellite markers were used to assess the genetic structure of wild populations of B. insignis and compare the genetic variability and integrity of the wild populations with a captive population. Samples of DNA from 208 specimens from geographically isolated populations were analyzed. Population genetic structure was investigated using F ST, R ST estimates as well as AMOVA. All five loci used in this study were polymorphic with observed heterozygosity ranging from 0.77 (± 0.15) to 0.88 (± 0.07) in the wild population and 0.90 (± 0.09) in the captive population and the allelic richness average were 7.56 (± 0.27) and 5.80 (± 1.02), respectively. Overall genetic differences were significantly partitioned among populations (F ST = 0.072, p = 0.034). Evidence of a genetic bottleneck was found in some of the wild populations, but especially in the captive population. The results showed that genetic variability still can be found in B. insignis populations which are currently structured possibly due to anthropic actions. The implications of these findings for the management and conservation of B. insignis populations are discussed.(AU)

Piabanha (Brycon insignis) é uma espécie de peixe de água doce oriunda de drenagens da região sudeste do Brasil. Durante os anos de 1950, esta espécie foi um importante recurso econômico para populações locais. Contudo, a intensa e contínua degradação ambiental afetou seriamente as populações de B. insignis na região. Marcadores microssatélites foram usados para avaliar a estrutura genética de populações selvagens de B. insignis e comparar a variabilidade genética e integridade das populações selvagens com uma população de cativeiro. Amostras de DNA de 208 espécimes de populações geograficamente isoladas foram analisadas. A estrutura populacional foi investigada usando-se estimadores de F ST e R ST bem como AMOVA. Todos os loci usados neste estudo foram polimórficos com heterozigosidades observadas variando de 0.77 (± 0.15) a 0.88 (± 0.77) em populações selvagens e 0.90 (± 0.09) na população de cativeiro e a riqueza alélica média foi de 7.56 (± 0.27) e 5.80 (± 1.02), respectivamente. A maioria das diferenças genéticas foi significativa entre populações (F ST = 0.072, p = 0.034). Evidências de efeito gargalo foram observadas em algumas populações selvagens e especialmente também na população de cativeiro. Os resultados do presente estudo mostraram que as populações de B. insignis ainda apresentam variabilidade genética e que estas populações estão atualmente estruturadas geneticamente provavelmente devido a ações antrópicas. As implicações destes achados para o manejo e conservação das populações de B. insiginis são discutidas.(AU)

Microsatellite variation and population genetic structure of a neotropical endangered Bryconinae species Brycon insignis Steindachner, 1877: implications for its conservation and sustainable management

Piabanha (Brycon insignis) is a freshwater fish species from the drainages in Southeastern Brazil. During the 1950s, it was an important economic and food resource for local populations, but dramatic and continuous environmental degradation seriously jeopardized the B. insignis populations in the region. Microsatellite markers were used to assess the genetic structure of wild populations of B. insignis and compare the genetic variability and integrity of the wild populations with a captive population. Samples of DNA from 208 specimens from geographically isolated populations were analyzed. Population genetic structure was investigated using F ST, R ST estimates as well as AMOVA. All five loci used in this study were polymorphic with observed heterozygosity ranging from 0.77 (± 0.15) to 0.88 (± 0.07) in the wild population and 0.90 (± 0.09) in the captive population and the allelic richness average were 7.56 (± 0.27) and 5.80 (± 1.02), respectively. Overall genetic differences were significantly partitioned among populations (F ST = 0.072, p = 0.034). Evidence of a genetic bottleneck was found in some of the wild populations, but especially in the captive population. The results showed that genetic variability still can be found in B. insignis populations which are currently structured possibly due to anthropic actions. The implications of these findings for the management and conservation of B. insignis populations are discussed.(AU)

Piabanha (Brycon insignis) é uma espécie de peixe de água doce oriunda de drenagens da região sudeste do Brasil. Durante os anos de 1950, esta espécie foi um importante recurso econômico para populações locais. Contudo, a intensa e contínua degradação ambiental afetou seriamente as populações de B. insignis na região. Marcadores microssatélites foram usados para avaliar a estrutura genética de populações selvagens de B. insignis e comparar a variabilidade genética e integridade das populações selvagens com uma população de cativeiro. Amostras de DNA de 208 espécimes de populações geograficamente isoladas foram analisadas. A estrutura populacional foi investigada usando-se estimadores de F ST e R ST bem como AMOVA. Todos os loci usados neste estudo foram polimórficos com heterozigosidades observadas variando de 0.77 (± 0.15) a 0.88 (± 0.77) em populações selvagens e 0.90 (± 0.09) na população de cativeiro e a riqueza alélica média foi de 7.56 (± 0.27) e 5.80 (± 1.02), respectivamente. A maioria das diferenças genéticas foi significativa entre populações (F ST = 0.072, p = 0.034). Evidências de efeito gargalo foram observadas em algumas populações selvagens e especialmente também na população de cativeiro. Os resultados do presente estudo mostraram que as populações de B. insignis ainda apresentam variabilidade genética e que estas populações estão atualmente estruturadas geneticamente provavelmente devido a ações antrópicas. As implicações destes achados para o manejo e conservação das populações de B. insiginis são discutidas.(AU)

Utilização do espermatócrito para estimar a concentração espermática no sêmen da piabanha (Brycon insignis) / Use of spermatocrit to estimate sperm concentration of semen frompiabanha (Brycon insignis)

O objetivo deste trabalho foi verificar a viabilidade da utilização do espermatócrito para estimar a concentração espermática do sêmen de piabanha. Os exemplares (n=29) de piabanha Brycon insignis foram hipofisados, sendo posteriormente realizada a coleta de sêmen. O espermatócrito foi determinado utilizando-se micro-centrífuga de tubos capilares. A concentração espermática foi verificada por contagem em câmara de Neubauer, após diluição. A concentração espermática verificada (média ± desvio padrão) foi de 24,38 ± 3,84 x 10 elevado a 9 espermatozóides / mL, e o espermatócrito foi de 16,14±5,20 %. A equação de regressão: Ý= 14,01.10 elevado a 9 + 0,6428.10 elevdo a 9.X foi significativa (P<0,01) e apresentou R2 ajustado = 0,75. Deste modo, é possível estimar a concentração através da determinação do espermatócrito.(AU)

The aim of this work was to determine the viability of spermatocrit use in Piabanhas sperm concentration estimation. Gametogenesis of piabanha Brycon insignis (n=29) was induced with crude pituitary extract of carp and semen was further collected. The spermatocrit was determined using cappilar tube micro-centrifuge. The sperm concentration was verified by counting in “Neubauer chamber”, after dilution. The verified sperm concentration (mean±standard deviation) was 24,38±3,84x10 involution 9 spermatozoa/mL, and the spermatocrit was 16,14±5,20 %. The regression model: Ý = 14,01.10 involution 9 + 0,6428.10 involution 9.X was significant (P<0,01) and presented adjusted R2 = 0,75. Thus, the estimation of sperm concentration using the spermatocrit is possible.(AU)

Determinação da razão ótima de espermatozóides por ovócitos de piabanha Brycon insignis (pisces - characidae) / Determination of the optimum ratio of spermatozoa per oocyte of the piabanha Brycon insignis

Determinou-se a razão ótima de espermatozóides por ovócitos da piabanha Brycon insignis, utilizando-se dois machos e duas fêmeas da espécie, submetidos ao procedimento de desova induzida. Os gametas foram extrusados manualmente 200 horas-grau após a aplicação do extrato bruto de hipófise. Os ovócitos foram misturados e deste pool retiraram-se amostras com 2g de ovócitos (701 ovócitos/g). O sêmen do pool foi diluído em solução de NaCL 1,2 por cento de tal forma que, após a adição de 1ml do sêmen diluído aos ovócitos, fossem obtidas as seguintes razões espermatozóides por ovócitos em cada tratamento: T1=86.662, T2=173.324, T3=259.986, T4=346.648 e T5=433.310. A taxa de fertilização do sêmen não diluído usado como controle foi de 65,3 por cento. Após ativação espermática com NaHCO3 1 por cento e fecundação, os ovos foram transferidos para as incubadoras e nelas foram observadas as seguintes percentagens de fertilização em relação à do grupo-controle: T1=35,7 por cento, T2=53,1 por cento, T3=79,1 por cento, T4=93,4 por cento e T5=87,8 por cento. A percentagem de fertilização (em relação ao controle) aumentou de forma linear, segundo a equação de regressão: Y=15,55+0,0002297X (P<0,01; R²=0,98), até a proporção de 314.481 espermatozóides por ovócitos, após o que a taxa de fertilização se estabilizou no limite de 88 por cento(AU)

The optimum spermatozoa:oocyte ratio of piabanha Brycon insignis was studied. Two males and two females were induced to spawn, and the gametes were stripped after 200 hourgrades starting from the application of carp pituitary gland. Oocytes from two females were mixed, and samples of 2g (701 oocytes/g) were collected from the obtained pool and placed into plastic cups. The semen from the two males, after mixed to compose a pool, was diluted in NaCl solution (1.2 percent) so that, after the addition of 1ml of diluted sperm into the oocytes, the following spermatozoa:oocyte ratios (tri-replicated) were obtained: T1=86,662, T2=173,324, T3=259,986, T4=346,648 and T5=433,310. After the activation using 1 percent NaHCO3 and fertilization, the eggs were transferred to incubators, and observed the percentages of fertilization relative to the control. T1=35.7 percent, T2=53.1 percent, T3=79.1 percent, T4=93.4 percent and T5=87.8 percent. Undiluted semen was used as "control", which showed 65 percent of fertilization. The percentage of fertilization (relative to the control) increased linearly according to the regression Y= 15.55 + 0.0002297X (P<0.01; R²=0.98), until the proportion of 314,481 spermatozoa per oocyte, and, from this point, the fertilization rate maintained at 88 percent(AU)

LEVANTAMENTO DE PARASITOS EM INFRAPOPULAÇÃO DE Brycon insignis STEINDACHNER, 1876 (PISCES, CHARACIDAE), CRIADA NA REGIÃO NORTE FLUMINENSE, RIO DE JANEIRO, BRASIL

Este trabalho tem como objetivo fazer um levantamento de parasitos na piabanha, um peixe da família Characidae e do gênero Brycon, o mesmo do matrinxã, da piraputanga e de outras sessenta espécies. Nativa do rio Paraíba do Sul, Região Norte Fluminense do Estado do Rio de Janeiro, Brasil, trata-se de espécie ameaçada de extinção. Analisaram-se sessenta espécimes de Brycon insignis Steindachner, 1876, com peso médio de 6,0 a 8,0 kg e comprimento total de 15,0 a 45,0 cm no período compreendido entre novembro e dezembro de 2002, encontrando-se crustáceos copépodes do gênero Lernaea sp., com prevalência de 31,7%. Também foram encontrados nematóides do gênero Procamallanus sp., com prevalência de 3,3%. Por conta de problemas causados pela Lernaea sp. em peixes, a presença desses crustáceos parasitos nos espécimes coletados de cativeiro tem provocado prejuízos nessa criação. Acrescente-se o fato de que esses alevinos são soltos no rio Paraíba do Sul, de modo que o parasito citado, comum em cativeiro, pode vir a infectar peixes de ambiente natural. PALAVRAS-CHAVE: Brycon insignis, Lernaea, parasitos, piabanha, Rio de Janeiro.

LEVANTAMENTO DE PARASITOS EM INFRAPOPULAÇÃO DE Brycon insignis STEINDACHNER, 1876 (PISCES, CHARACIDAE), CRIADA NA REGIÃO NORTE FLUMINENSE, RIO DE JANEIRO, BRASIL

Este trabalho tem como objetivo fazer um levantamento de parasitos na piabanha, um peixe da família Characidae e do gênero Brycon, o mesmo do matrinxã, da piraputanga e de outras sessenta espécies. Nativa do rio Paraíba do Sul, Região Norte Fluminense do Estado do Rio de Janeiro, Brasil, trata-se de espécie ameaçada de extinção. Analisaram-se sessenta espécimes de Brycon insignis Steindachner, 1876, com peso médio de 6,0 a 8,0 kg e comprimento total de 15,0 a 45,0 cm no período compreendido entre novembro e dezembro de 2002, encontrando-se crustáceos copépodes do gênero Lernaea sp., com prevalência de 31,7%. Também foram encontrados nematóides do gênero Procamallanus sp., com prevalência de 3,3%. Por conta de problemas causados pela Lernaea sp. em peixes, a presença desses crustáceos parasitos nos espécimes coletados de cativeiro tem provocado prejuízos nessa criação. Acrescente-se o fato de que esses alevinos são soltos no rio Paraíba do Sul, de modo que o parasito citado, comum em cativeiro, pode vir a infectar peixes de ambiente natural. PALAVRAS-CHAVE: Brycon insignis, Lernaea, parasitos, piabanha, Rio de Janeiro.

EMBRYONIC AND LARVAL DEVELOPMENT OF THE PIABANHA, Brycon insignis, STEINDACHNER, 1876 (PISCES, CHARACIDAE) / Desenvolvimento embrionário e larval da piabanha, Brycon insignis, Steindachner, 1876 (Pisces, Characidae)

This study presents preliminary observations on the embryonic and larval development until alevine stage of the piabanha, Brycon insignis. This is an indigenous and endemic species from Paraíba do Sul River Basin, Brazil. The eggs were obtained after reproductive induction utilizing breeders kept in captivity at Estação Experimental de Paraibuna, São Paulo, which belongs to CESP (Companhia Energética de São Paulo), during the period of January-February/1996. Soon after artificial fertilization, the eggs were kept in incubators under constant temperature (26 ± 1°C). Samples were taken every 10 minutes during the first 3 hours, and after that, every 20 minutes, until hatching have occurred. After hatching, daily observations took place until the attainment of the fingerling stage. The eggs presented coloration varying from dark to brownish green, rigid chorion and large perivitelline space. They were spherical, demersal, non-adhesive, and showed high hydration degree and their diameter varied from 3.750 to 4.100 mm. The stages of embryonic development observed and described began with cleavage, followed by morula, blastula, gastrula, neurula until hatching of non-pigmented larvae, which displayed total average length of 6.0 mm ± 0.22, 14 hours after fertilization. On the second day of life, the larvae displayed total average length of 8.0 mm ± 0.21, pectoral fins already form

O presente trabalho apresenta observações preliminares sobre o desenvolvimento embrionário e larval da piabanha, Brycon insignis, até a fase de alevino. Brycon insignis é uma espécie nativa e endêmica da bacia do Rio Paraíba do Sul, Brasil. Durante os meses de janeiro e fevereiro/1996, os ovos foram obtidos através de reprodução induzida, utilizando-se reprodutores mantidos em cativeiro na Estação Experimental de Paraibuna, pertencente à CESP (Companhia Energética de São Paulo). Logo após a fertilização, os ovos foram mantidos em incubadoras sob temperatura constante (26 ± 1°C). Amostras foram retiradas a cada 10 minutos durante as três primeiras horas e, depois, a cada 20 minutos, até a eclosão das larvas. Após a eclosão, as observações foram feitas diariamente até a fase de alevino. Os ovos são esféricos e não adesivos, apresentando coloração variando do verde escuro ao verde acastanhado, córion rígido, grande espaço perivitelínico, elevado grau de hidratação e diâmetro variando entre 3,750 e 4,100 mm. As fases do desenvolvimento embrionário observadas tiveram início com a clivagem seguida pela mórula, blástula, gástrula e nêurula até a eclosão de uma larva despigmentada, medindo em média 6,0 mm ± 0,22 de comprimento total, 14 horas após a fertilização. No segundo dia de vida, a larva apresentava, em média, 8,0 mm ± 0,21 de comprimento total, nadadeiras peitorais formadas, bo

EMBRYONIC AND LARVAL DEVELOPMENT OF THE PIABANHA, Brycon insignis, STEINDACHNER, 1876 (PISCES, CHARACIDAE) / Desenvolvimento embrionário e larval da piabanha, Brycon insignis, Steindachner, 1876 (Pisces, Characidae)

This study presents preliminary observations on the embryonic and larval development until alevine stage of the piabanha, Brycon insignis. This is an indigenous and endemic species from Paraíba do Sul River Basin, Brazil. The eggs were obtained after reproductive induction utilizing breeders kept in captivity at Estação Experimental de Paraibuna, São Paulo, which belongs to CESP (Companhia Energética de São Paulo), during the period of January-February/1996. Soon after artificial fertilization, the eggs were kept in incubators under constant temperature (26 ± 1°C). Samples were taken every 10 minutes during the first 3 hours, and after that, every 20 minutes, until hatching have occurred. After hatching, daily observations took place until the attainment of the fingerling stage. The eggs presented coloration varying from dark to brownish green, rigid chorion and large perivitelline space. They were spherical, demersal, non-adhesive, and showed high hydration degree and their diameter varied from 3.750 to 4.100 mm. The stages of embryonic development observed and described began with cleavage, followed by morula, blastula, gastrula, neurula until hatching of non-pigmented larvae, which displayed total average length of 6.0 mm ± 0.22, 14 hours after fertilization. On the second day of life, the larvae displayed total average length of 8.0 mm ± 0.21, pectoral fins already form

O presente trabalho apresenta observações preliminares sobre o desenvolvimento embrionário e larval da piabanha, Brycon insignis, até a fase de alevino. Brycon insignis é uma espécie nativa e endêmica da bacia do Rio Paraíba do Sul, Brasil. Durante os meses de janeiro e fevereiro/1996, os ovos foram obtidos através de reprodução induzida, utilizando-se reprodutores mantidos em cativeiro na Estação Experimental de Paraibuna, pertencente à CESP (Companhia Energética de São Paulo). Logo após a fertilização, os ovos foram mantidos em incubadoras sob temperatura constante (26 ± 1°C). Amostras foram retiradas a cada 10 minutos durante as três primeiras horas e, depois, a cada 20 minutos, até a eclosão das larvas. Após a eclosão, as observações foram feitas diariamente até a fase de alevino. Os ovos são esféricos e não adesivos, apresentando coloração variando do verde escuro ao verde acastanhado, córion rígido, grande espaço perivitelínico, elevado grau de hidratação e diâmetro variando entre 3,750 e 4,100 mm. As fases do desenvolvimento embrionário observadas tiveram início com a clivagem seguida pela mórula, blástula, gástrula e nêurula até a eclosão de uma larva despigmentada, medindo em média 6,0 mm ± 0,22 de comprimento total, 14 horas após a fertilização. No segundo dia de vida, a larva apresentava, em média, 8,0 mm ± 0,21 de comprimento total, nadadeiras peitorais formadas, bo

Feeding of the Brycon cephalus, Triportheus elongatus and Semaprochilodus insignis (osteichthyes, characiformes) larvae in Solimões/Amazonas River and floodplain areas

Information on larval fish feeding is essential for understanding their trophic relations, including the management in conditions totally or partially controlled by humans. An experiment was designed to evaluate the larval diets of three commercially important species. Four varzea-lakes and the adjacent river were sampled with bongo and hand nets from January 1993 to November 1995. Larval diets were evaluated by length-classes and capture sites, and were tested by two factor ANOVA. The larvae were feeding in all habitats, except in the flooded forests. The three species had different diets, which varied with their length and lake. The rotifers were the main initial food item of the three species, replaced by fish larvae in Brycon cephalus, cladocerans in Triportheus elongatus and detritus in Semaprochilodus insignis. The increase of the ingestion limit, as the larvae grew, was higher than the increase in the consumed prey size for the three species.

Informações sobre a alimentação das larvas de peixes são essenciais para entender suas relações tróficas, incluindo o manejo em condições controladas parcial ou totalmente pelo homem. Um experimento foi desenhado para avaliar a dieta das larvas de três espécies de importância comercial. Quatro lagos de várzea e o rio adjacente foram amostrados com rede de ictioplâncton de Janeiro de 1993 a Novembro de 1995. A dieta das larvas foi avaliada por classes de comprimento e locais de captura, e foram testadas por ANOVA com dois fatores. As larvas estavam alimentando-se em todos os habitats, exceto na floresta inundada. As três espécies apresentaram dietas diferentes, que variaram com o comprimento e com o lago. Os rotíferos foram o principal item alimentar para as três espécies no início da alimentação exógena, e depois substituídos por por larvas de peixes em Brycon cephalus, cladóceros em Triportheus elongatus e detritos em Semaprochilodus insignis. O aumento do limite de ingestão das larvas com o crescimento, foi maior que o aumento no tamanho da presa consumida para as três espécies.

Feeding of the Brycon cephalus, Triportheus elongatus and Semaprochilodus insignis (osteichthyes, characiformes) larvae in Solimões/Amazonas River and floodplain areas.

Information on larval fish feeding is essential for understanding their trophic relations, including the management in conditions totally or partially controlled by humans. An experiment was designed to evaluate the larval diets of three commercially important species. Four varzea-lakes and the adjacent river were sampled with bongo and hand nets from January 1993 to November 1995. Larval diets were evaluated by length-classes and capture sites, and were tested by two factor ANOVA. The larvae were feeding in all habitats, except in the flooded forests. The three species had different diets, which varied with their length and lake. The rotifers were the main initial food item of the three species, replaced by fish larvae in Brycon cephalus, cladocerans in Triportheus elongatus and detritus in Semaprochilodus insignis. The increase of the ingestion limit, as the larvae grew, was higher than the increase in the consumed prey size for the three species.

Informações sobre a alimentação das larvas de peixes são essenciais para entender suas relações tróficas, incluindo o manejo em condições controladas parcial ou totalmente pelo homem. Um experimento foi desenhado para avaliar a dieta das larvas de três espécies de importância comercial. Quatro lagos de várzea e o rio adjacente foram amostrados com rede de ictioplâncton de Janeiro de 1993 a Novembro de 1995. A dieta das larvas foi avaliada por classes de comprimento e locais de captura, e foram testadas por ANOVA com dois fatores. As larvas estavam alimentando-se em todos os habitats, exceto na floresta inundada. As três espécies apresentaram dietas diferentes, que variaram com o comprimento e com o lago. Os rotíferos foram o principal item alimentar para as três espécies no início da alimentação exógena, e depois substituídos por por larvas de peixes em Brycon cephalus, cladóceros em Triportheus elongatus e detritos em Semaprochilodus insignis. O aumento do limite de ingestão das larvas com o crescimento, foi maior que o aumento no tamanho da presa consumida para as três espécies.

Análise e criopreservação do sêmen da piabanha Brycon insignis Steindachner, 1877 (Pices, Characidae)

SHIMODA, EDUARDO. D.Sc. Universidade Estadual do Norte Fluminense Darcy Ribeiro. Fevereiro/2004. Análise e criopreservação do sêmen da piabanha Brycon insignis Steindachner, 1877 (Pices, Characidade). Dalcio Ricardo de Andrade (Orientador) Manuel Vazquez Vidal Júnior, José Frederico Straggiotti Silva e Hugo Pereira Godinho. A piabanha é uma espécie de peixe da bacia do rio Paraíba do sul cuja população vem escasseando rapidamente nos últimos anos. As estratégicas atuais para conservação da espécie consistem na implantação de centros de reprodução que, embora permitam o repovoamento, trabalham com poucos redutores. Em decorrência disto, verifica-se a perda da biodiversividade genética. O objetivo deste trabalho foi estudar aspectos relacionados à análise seminal e à conservação do sêmen da piabanha Brycon insignis. Quanto à análise microscópica, foi verificada concentração espermática média de 24,38 x 109 espermatozóides/mL e espermatócrito de 16,14%. Os dois parâmetros se correlacionam significativa (P<0,01; R2 = 75,9%) e positivamente segundo a equação de regressão: Y = 14,01.109 + 0,6428.109 . X. Verificou-se que o peso e comprimento-padrão da piabanha não têm influência sobre a concentração espermática ou sobre o espermatócrito. No que se refere à mitilidade, observou-se que os espermatozóides da piabanha não são ativados quando diluídos em soluções que contenham concentrações de NaCl superiores a 1,2%, podendo estas serem utilizadas em pré diluições não ativadoras da motilidade. Com base nesta informação foi testada uma metodologia de análise subjetiva em duas etapas, consistindo em (1) uma pré-diluição não ativadora da ordem de 1:100 (20 uL de sêmen diluídos em 2 mL de NaCl 1,2%) e (2) uma diluição ativadora da ordem de 1:5 50uL da pré-diluição + 250 uL de NaHCO3 1%), sendo, desta maneira, possível observar os espermatozóides de forma individualizada e a ativação de todos simultaneamente. Verificou-se, ainda, que a indução hormonal com extrato bruto de hipófise de carpa aumenta a motilidade espermática subjetiva no sêmen da piabanha, quando esta foi inferior a 80% antes do tratamento. Para evitar subjetiviade na análise da motilidade computadorizado para análise do sêmen de piabanha, que permite a obtenção de parâmetros com percentual de espermatozóides móveis, percentual de espermatozóides progressivos e freqüência de batimento flagelar. No que diz respeito à capacidade fecundante do sêmen. Foram testadas várias proporções espermatozóides por ovócitos, sendo encontrada

Indução a desova, ontogenia inicial, etologia larval e alevinagem da Piabanha (Bryci insignis, Steindachner, 1877)

Foram utilizados reprodutores da espécie piabanha (Brycon insignis), pertencentes ao plantel do Projeto Piabanha, localizado no município de Itaocara ? RJ, no período de dezembro de 1999 a março de 2003, com o objetivo de determinar aspectos reprodutivos desta espécie, incluindo a descrição morfológica da ontogenia inicial, e o acompanhamento do desenvolvimento das larvas, pós-larvas e alevinos. Foram induzidas 43 fêmeas, utilizando-se extrato bruto hipofisário. A quantidade de horas-grau (HG) médias necessárias para a extrusão dos ovócitos foi de 158,69 ? 8,11 HG, a uma temperatura média de 26,25 ? 1,15 °C. Os ovócitos recém extrusados apresentaram-se esféricos, não aderentes, de coloração azul acinzentada em sua grande maioria e possuíam diâmetro de 1,35 ? 0,02 mm, sendo que um grama continha 760,45 ? 86,78 ovócitos. Após a fertilização e hidratação os ovos demoraram em média 16,00 ? 1,00 minutos para o endurecimento do córion. O diâmetro médio do ovo hidratado passou a 2,40 ? 0,08 mm, atingindo um peso médio de 14,06 ? 0,66 miligramas. Verificou-se uma alta correlação (p > 0,05) entre a temperatura da água do tanque de reprodutores e a taxa de fecundação. Uma hora após a fertilização houve a formação do blastodisco. O fechamento do blastóporo ocorreu 5 horas após a fertilização, na temperatura média de 25,5 ? 1°C, o que equivale a 170,55 ? 14,01 HG, a partir da 2ª dose hormonal. Nove horas e meia após a fecundação observou-se a flexão da notocorda seguida pela expansão da região posterior do embrião e a visualização de 26 pares de somitos. A média geral do processo de eclosão da larva foi de 18,15 ? 2,40 horas, equivalente a 451,54 ? 114,98 HG. Observou-se a ocorrência de canibalismo intraespecífico em média, com 29,87 ? 1,53 horas após a eclosão, à uma temperatura de 26,41 ? 0,80 °C.. A eficácia na captura de larvas forrageiras pelas pós-larvas de Brycon insignis esteve relacionada ao local de inserção da mordida. Ao final do período experimental, no vigésimo quinto dia de vida, os peixes possuíam o formato típico dos juvenis desta espécie e apresentaram a seguinte biometria: peso total de 0,94 ? 0,12 g, comprimento total de 51,60 ? 1,82 mm e altura total de 10,1 ? 0,22 mm