Pathology, microbiology, and molecular evaluation of tissues from equids serologically positive for Burkholderia mallei in Midwestern Brazil / Avaliação patológica, microbiológica e molecular em amostras de tecidos de equídeos sorologicamente positivos para Burkholderia mallei no Centro-Oeste do Brasil

Glanders is a disease caused by the bacterium Burkholderia mallei that primarily affects horses, mules and donkeys. The disease can cause lesions in the skin, lungs and several other organs. However, it often manifests as an asymptomatic disease. In Brazil, serological tests of high sensitivity and specificity are used to assist in the detection of antibodies against B. mallei and to contribute to the control of the disease. However, due to the mandatory euthanasia of seroreactive animals, equids with positive serology for B. mallei and asymptomatic generated great conflicts between breeders, veterinarians and diagnostic laboratories. This study clarifies the limitations of complementary diagnostic tests for detecting B. mallei. It describes the clinical, morphological and laboratory findings in 24 equines from different municipalities in the Mato Grosso State, Brazil, which reacted to the complement fixation test and were positive in the western blotting test for glanders. Data and tissue samples were collected from 24 horses for histological, microbiological and molecular analysis. In 23 horses, no clinical signs, morphological alterations, microbiological isolation, or molecular detection would characterize B. mallei infection. On the other hand, samples from an asymptomatic horse without lesional alterations showed sequence amplification compatible with B. mallei in the PCR. Considering that the infection by B. mallei is subject to the application of animal sanitary defense measures and that, by international requirement and national legislation, the serological results are tools that should support the sanitation procedures for the error of the bacteria in the Mato Grosso State, Brazil.

Mormo é uma enfermidade causada pela bactéria Burkholderia mallei que acomete primariamente cavalos, mulas e burros. A doença pode causar lesões na pele, pulmões e em diversos outros órgãos, entretanto frequentemente manifesta-se como uma enfermidade assintomática. No Brasil são utilizados testes sorológicos de elevada sensibilidade e especificidade para auxiliar na detecção de anticorpos contra B. mallei e contribuir para controle da doença. Porém, devido à obrigatoriedade da eutanásia de animais sororeagentes, os equídeos com sorologia positiva para B. mallei e assintomáticos geraram grandes embates entre criadores, médicos-veterinários e laboratórios de diagnóstico. Este trabalho esclarece as limitações dos testes diagnósticos complementares para detecção de B. mallei e descreve os achados clínicos, morfológicos e de exames laboratoriais em 24 equídeos, procedentes de diferentes municípios do estado de Mato Grosso, Brasil, que reagiram ao teste de fixação de complemento e foram positivos no teste de "western blotting" para mormo. Foram colhidos dados e amostras de tecidos de 24 equídeos para análise histológica, microbiológica e molecular. Em 23 equídeos não existiam sinais clínicos, alterações morfológicas, isolamento microbiológico ou detecção molecular que caracterizassem infecção por B. mallei. Por outro lado, amostras de um cavalo assintomático e sem alterações lesionais apresentaram amplificação de sequência compatível com B. mallei na PCR. Considerando que a infecção por B. mallei é passível da aplicação de medidas de defesa sanitária animal e que por exigência internacional e da legislação nacional, os resultados sorológicos são ferramentas que devem amparar os procedimentos de saneamento para erradicação da bactéria no estado de Mato Grosso, Brasil.

Identification of management factors associated with glanders's occurrence in equids in Brazilian Northeast region / Identificação dos fatores de manejo associados à ocorrência do Mormo em equídeos no Nordeste do Brasil

Glanders is a contagious zoonotic infectious disease characterized by an acute or chronic condition that mainly affects equids and is caused by Burkholderia (B.) mallei. From January 2005 to December 2017, 697 farms with positive cases of this disease were registered in Brazil, with the Northeast region accounting for 61.4% (428/697) of the total number of cases. This study conducted an epidemiological study of B. mallei infections that occurred in farms in the states of Pernambuco, Paraíba, Ceará and Alagoas. For this purpose, investigative questionnaires were applied to six farms where there were outbreaks of glanders and 11 farms where there were no reports of glanders between 2017 and 2021, and statistical analysis of the factors associated with the occurrence of glanders in Northeastern Brazil was performed. Factors such as the purpose of rearing (P = 0.023), lack of information on disease transmission modes (P = 0.034), failure to carry out periodic tests for glanders diagnosis (P = 0,029), no request for glanders tests prior to the purchase of new animals periodic tests for glanders diagnosis (P = 0.029), not requiring a negative test for glanders in the acquisition of animals (P = 0.06), use of extensive breeding systems(P = 0.027), and poor stall hygiene were associated with disease occurrence (P = 0.001). Understanding the factors related to the occurrence of glanders in the Northeast Region of Brazil helps to establish management measures that minimize bacteria transmission, thereby reducing the number of cases in the region and economic losses associated with glanders.

O mormo é uma doença infectocontagiosa, zoonótica, de caráter agudo ou crônico, que acomete principalmente os equídeos, causado por Burkholderia (B.) mallei. De janeiro de 2005 até dezembro de 2017, 697 focos da doença foram registrados no Brasil, sendo que a região Nordeste detém 61,4% (428/697) do total de focos. Objetivou-se realizar um estudo epidemiológico da infecção por Burkholderia mallei em propriedades nos estados de Pernambuco, Paraíba, Ceará e Alagoas. Para tal foi aplicado questionário investigativo em seis fazendas onde houve caso de Mormo e 11 fazendas em que não houve relato entre 2007 e 2011 e realizada análise estatística dos fatores de manejo associados à ocorrência do Mormo no Nordeste do Brasil. Observou-se associação significativa para as seguintes variáveis: objetivo da criação (comércio, esporte e trabalho nas fazendas) (P = 0,023); ausência de informação sobre as formas de transmissão da bactéria (P = 0,034); não realização de exames periódicos para o diagnóstico do mormo (P = 0,029); exigência de exame negativo na compra de equinos (P = 0,06); utilização do sistema de criação extensivo (P = 0,027) e deficiência de higienização das baias (P = 001). Os resultados obtidos devem ser utilizados na implementação de medidas de manejo que minimizem o risco de transmissão da bactéria, reduzindo os casos da doença na região e as perdas econômicas com o mormo.

Historical highlights regarding glanders, from 2007 to 2017, in the state of Maranhão, Brazil / Destaques históricos do mormo, de 2007 a 2017, no estado do Maranhão, Brasil

Glanders is an infectious disease of equids caused by Burkholderia mallei, a facultative intracellular non-mobile Gram-negative bacterium that can be transmitted to other animals and humans. This study described glanders cases reported in the state of Maranhão, located within an Amazon-Cerrado transition region in northeastern Brazil, from 2007 to 2017. A database in an electronic spreadsheet (Microsoft Excel 2010) was developed containing information on the number of positive animals according to age, sex, purpose, year and month, municipality and mesoregion of origin of the animal. The descriptive analyzis was performed on data provided by the State Agency for Agricultural and Livestock Protection of the state of Maranhão (AGED), and by the official private laboratory. As the database did not have information data about negative animals, possible risk factors could not be evaluated. Among the total of 62,555 equids were evaluated by means of the complement fixation test (CFT), 59,036 were horses, 2,981 mules and 538 donkeys. Thirty-five samples (0.06%) reacted in the CFT. Five additional samples were by the western blot technique and three of them were positive. All the reactive horses (Equuscaballus) were from rural areas. Results presented here indicate that glanders may be endemic in the state of Maranhão and is a public health concern.

O mormo é uma doença infecciosa de equídeos causada por Burkholderia mallei, uma bactéria Gram-negativa intracelular, não móvel e facultativa que pode ser transmitida a outros animais e humanos. O objetivo deste estudo foi descrever os casos de mormo relatados no estado do Maranhão, em uma região de transição Amazônia-Cerrado do Nordeste do Brasil, no período de 2007 a 2017. Um banco de dados em uma planilha eletrônica (Microsoft Excel 2010) foi desenvolvido contendo informações sobre o número de animais positivos de acordo com a idade, sexo, finalidade, ano, mês, municípios e mesorregiões de origem do animal. A análise descritiva foi realizada sobre os dados fornecidos pela Agência Estadual de Defesa Agropecuária do Estado do Maranhão (AGED), e pelo laboratório privado oficial. Como o banco de dados não possui informações sobre animais negativos, possíveis fatores de risco não puderam ser avaliados. Entre o total de 62.555 equídeos foram avaliados com o teste de fixação do complemento (CFT), 59.036 eram cavalos, 2.981 mulas e 538 jumentos. Trinta e cinco (0,06%) amostras reagiram ao CFT. Cinco amostras adicionais foram testadas pela técnica de western blot e três foram positivas. Todos os animais positivos foram cavalos (Equus caballus) da área rural. Os resultados indicam que o mormo pode ser endêmico no estado do Maranhão e uma preocupação de saúde pública.

Identification of management factors associated with glanders's occurrence in equids in Brazilian Northeast region / Identificação dos fatores de manejo associados à ocorrência do Mormo em equídeos no Nordeste do Brasil

ABSTRACT: Glanders is a contagious zoonotic infectious disease characterized by an acute or chronic condition that mainly affects equids and is caused by Burkholderia (B.) mallei. From January 2005 to December 2017, 697 farms with positive cases of this disease were registered in Brazil, with the Northeast region accounting for 61.4% (428/697) of the total number of cases. This study conducted an epidemiological study of B. mallei infections that occurred in farms in the states of Pernambuco, Paraíba, Ceará and Alagoas. For this purpose, investigative questionnaires were applied to six farms where there were outbreaks of glanders and 11 farms where there were no reports of glanders between 2017 and 2021, and statistical analysis of the factors associated with the occurrence of glanders in Northeastern Brazil was performed. Factors such as the purpose of rearing (P = 0.023), lack of information on disease transmission modes (P = 0.034), failure to carry out periodic tests for glanders diagnosis (P = 0,029), no request for glanders tests prior to the purchase of new animals periodic tests for glanders diagnosis (P = 0.029), not requiring a negative test for glanders in the acquisition of animals (P = 0.06), use of extensive breeding systems(P = 0.027), and poor stall hygiene were associated with disease occurrence (P = 0.001). Understanding the factors related to the occurrence of glanders in the Northeast Region of Brazil helps to establish management measures that minimize bacteria transmission, thereby reducing the number of cases in the region and economic losses associated with glanders.

RESUMO: O mormo é uma doença infectocontagiosa, zoonótica, de caráter agudo ou crônico, que acomete principalmente os equídeos, causado por Burkholderia (B.) mallei. De janeiro de 2005 até dezembro de 2017, 697 focos da doença foram registrados no Brasil, sendo que a região Nordeste detém 61,4% (428/697) do total de focos. Objetivou-se realizar um estudo epidemiológico da infecção por Burkholderia mallei em propriedades nos estados de Pernambuco, Paraíba, Ceará e Alagoas. Para tal foi aplicado questionário investigativo em seis fazendas onde houve caso de Mormo e 11 fazendas em que não houve relato entre 2007 e 2011 e realizada análise estatística dos fatores de manejo associados à ocorrência do Mormo no Nordeste do Brasil. Observou-se associação significativa para as seguintes variáveis: objetivo da criação (comércio, esporte e trabalho nas fazendas) (P = 0,023); ausência de informação sobre as formas de transmissão da bactéria (P = 0,034); não realização de exames periódicos para o diagnóstico do mormo (P = 0,029); exigência de exame negativo na compra de equinos (P = 0,06); utilização do sistema de criação extensivo (P = 0,027) e deficiência de higienização das baias (P = 001). Os resultados obtidos devem ser utilizados na implementação de medidas de manejo que minimizem o risco de transmissão da bactéria, reduzindo os casos da doença na região e as perdas econômicas com o mormo.

Monitoring the outbreak of equine glanders in Alagoas, Brazil: Clinical, immunological, molecular, and anatomopathological findings / Monitoramento de surtos de mormo nos equídeos em Alagoas, Brasil: achados clínicos, imunológicos, moleculares e anatomopatológico

Glanders is an infectious and often lethal zoonotic disease of equines caused by the bacterium, Burkholderia mallei. This condition is characterized by respiratory, lymphatic, and cutaneous lesions. In this study, we monitored the development of clinical symptoms in animals naturally infected with B. mallei across different equine breeds and also isolated and characterized the disease-causing bacteria. We studied two official glanders outbreaks in the state of Alagoas, Brazil. During the outbreaks, we performed clinical and immunological follow-up of the animals, as well as euthanasia and anatomopathological examination. We also collected diagnostic materials for isolative, phenotypic, molecular, and biological testing. We did not observe any clinical patterns of glanders among animals infected with the same strain of B. mallei. Based on our results, we suggest that early diagnosis of infection should be made through highly sensitive and specific immunoassays. In asymptomatic but positive test cases, we confirmed the importance of conducting pathological, microbiological, and molecular examinations.

O mormo é uma enfermidade infectocontagiosa e frequentemente letal, aguda ou crônica, caracterizada por lesões respiratórias, linfáticas e cutâneas em equídeos, porém de caráter zoonótico. Objetivou-se acompanhar o desenvolvimento dos sinais clínicos e de lesões em animais infectados naturalmente por B. mallei em diferentes propriedades de criação de equídeos, e isolar e caracterizar a bactéria causadora da doença. Foram estudados dois focos oficiais para o mormo no estado de Alagoas. Realizou-se o acompanhamento clinico e imunológico dos animais nos focos, eutanásia e exame anatomopatológico dos animais, além de colheita de material para diagnóstico através de técnicas de isolamento, fenotípicas, moleculares e prova biológica. Neste estudo não se observou um padrão clínico para o diagnóstico do mormo em animais infectados com a mesma cepa de B. mallei. O diagnóstico precoce da infecção deve ser realizado por meio de testes imunológicos de elevada sensibilidade e especificidade. Nos casos assintomáticos e positivos nos testes oficiais é importante a realização do exame anatomopatológico, microbiológico e molecular.

Monitoring the outbreak of equine glanders in Alagoas, Brazil: Clinical, immunological, molecular, and anatomopathological findings / Monitoramento de surtos de mormo nos equídeos em Alagoas, Brasil: achados clínicos, imunológicos, moleculares e anatomopatológico

Glanders is an infectious and often lethal zoonotic disease of equines caused by the bacterium, Burkholderia mallei. This condition is characterized by respiratory, lymphatic, and cutaneous lesions. In this study, we monitored the development of clinical symptoms in animals naturally infected with B. mallei across different equine breeds and also isolated and characterized the disease-causing bacteria. We studied two official glanders outbreaks in the state of Alagoas, Brazil. During the outbreaks, we performed clinical and immunological follow-up of the animals, as well as euthanasia and anatomopathological examination. We also collected diagnostic materials for isolative, phenotypic, molecular, and biological testing. We did not observe any clinical patterns of glanders among animals infected with the same strain of B. mallei. Based on our results, we suggest that early diagnosis of infection should be made through highly sensitive and specific immunoassays. In asymptomatic but positive test cases, we confirmed the importance of conducting pathological, microbiological, and molecular examinations.(AU)

O mormo é uma enfermidade infectocontagiosa e frequentemente letal, aguda ou crônica, caracterizada por lesões respiratórias, linfáticas e cutâneas em equídeos, porém de caráter zoonótico. Objetivou-se acompanhar o desenvolvimento dos sinais clínicos e de lesões em animais infectados naturalmente por B. mallei em diferentes propriedades de criação de equídeos, e isolar e caracterizar a bactéria causadora da doença. Foram estudados dois focos oficiais para o mormo no estado de Alagoas. Realizou-se o acompanhamento clinico e imunológico dos animais nos focos, eutanásia e exame anatomopatológico dos animais, além de colheita de material para diagnóstico através de técnicas de isolamento, fenotípicas, moleculares e prova biológica. Neste estudo não se observou um padrão clínico para o diagnóstico do mormo em animais infectados com a mesma cepa de B. mallei. O diagnóstico precoce da infecção deve ser realizado por meio de testes imunológicos de elevada sensibilidade e especificidade. Nos casos assintomáticos e positivos nos testes oficiais é importante a realização do exame anatomopatológico, microbiológico e molecular.(AU)

Monitoring the outbreak of equine glanders in Alagoas, Brazil: Clinical, immunological, molecular, and anatomopathological findings / Monitoramento de surtos de mormo nos equídeos em Alagoas, Brasil: achados clínicos, imunológicos, moleculares e anatomopatológico

ABSTRACT: Glanders is an infectious and often lethal zoonotic disease of equines caused by the bacterium, Burkholderia mallei. This condition is characterized by respiratory, lymphatic, and cutaneous lesions. In this study, we monitored the development of clinical symptoms in animals naturally infected with B. mallei across different equine breeds and also isolated and characterized the disease-causing bacteria. We studied two official glanders outbreaks in the state of Alagoas, Brazil. During the outbreaks, we performed clinical and immunological follow-up of the animals, as well as euthanasia and anatomopathological examination. We also collected diagnostic materials for isolative, phenotypic, molecular, and biological testing. We did not observe any clinical patterns of glanders among animals infected with the same strain of B. mallei. Based on our results, we suggest that early diagnosis of infection should be made through highly sensitive and specific immunoassays. In asymptomatic but positive test cases, we confirmed the importance of conducting pathological, microbiological, and molecular examinations.

RESUMO: O mormo é uma enfermidade infectocontagiosa e frequentemente letal, aguda ou crônica, caracterizada por lesões respiratórias, linfáticas e cutâneas em equídeos, porém de caráter zoonótico. Objetivou-se acompanhar o desenvolvimento dos sinais clínicos e de lesões em animais infectados naturalmente por B. mallei em diferentes propriedades de criação de equídeos, e isolar e caracterizar a bactéria causadora da doença. Foram estudados dois focos oficiais para o mormo no estado de Alagoas. Realizou-se o acompanhamento clinico e imunológico dos animais nos focos, eutanásia e exame anatomopatológico dos animais, além de colheita de material para diagnóstico através de técnicas de isolamento, fenotípicas, moleculares e prova biológica. Neste estudo não se observou um padrão clínico para o diagnóstico do mormo em animais infectados com a mesma cepa de B. mallei. O diagnóstico precoce da infecção deve ser realizado por meio de testes imunológicos de elevada sensibilidade e especificidade. Nos casos assintomáticos e positivos nos testes oficiais é importante a realização do exame anatomopatológico, microbiológico e molecular.

Situação atual do mormo no estado de São Paulo e no Brasil

O Mormo é uma enfermidade causada pela bactéria Burkholderiamallei que acomete principalmente os equídeos e é caracterizada por provocar lesões nos sistemas respiratório cutâneo e linfático. Em virtude do grande impacto gerado na equideocultura e, principalmente, por ser uma enfermidade de caráter zoonótico, está incluída na lista de doenças de notificação imediata de qualquer caso suspeito no Brasil, e os casos confirmados são informados a Organização Mundial de Saúde Animal (OIE).

Situação atual do mormo no estado de São Paulo e no Brasil

O Mormo é uma enfermidade causada pela bactéria Burkholderiamallei que acomete principalmente os equídeos e é caracterizada por provocar lesões nos sistemas respiratório cutâneo e linfático. Em virtude do grande impacto gerado na equideocultura e, principalmente, por ser uma enfermidade de caráter zoonótico, está incluída na lista de doenças de notificação imediata de qualquer caso suspeito no Brasil, e os casos confirmados são informados a Organização Mundial de Saúde Animal (OIE).(AU)

Burkholderia mallei isolation from milk of a mare and evidence of congenital transmission of glanders in equids: case reports / Isolamento de Burkholderia mallei de leite de égua e evidência de transmissão congênita de mormo em equinos: relatos de casos

This is the first report of Burkholderia mallei isolation in milk from a mare diagnosed with glanders and of transplacental transmission of the bacteria in a seropositive pregnant mare, both from São Paulo State, Brazil, 2016 and 2019. After necropsy, the horses were evaluated for macroscopic lesions, and organ samples were removed for histological, bacteriological, and molecular analysis. B.mallei was identified in milk samples by culture isolation and PCR, whereas in the fetus of the pregnant mare by PCR of the stomach fluid. These findings will contribute to the epidemiological knowledge of glanders life cycle in Brazil.

Este é o primeiro relato de isolamento de Burkholderia mallei no leite de uma égua com diagnóstico de mormo e de transmissão transplacentária da bactéria em uma égua prenhe soropositiva, ambas do Estado de São Paulo, Brasil, 2016 e 2019. Após a necropsia, os cavalos foi verificada a presença de lesões macroscópicas e amostras de órgãos foram coletadas para posterior análise histológica, bacteriológica e molecular. B.mallei foi identificada em amostras de leite por isolamento bacteriano e PCR, enquanto no feto de égua prenhe por PCR do fluido estomacal. Esses achados contribuirão para o conhecimento epidemiológico do ciclo de vida do mormo no Brasil.

Burkholderia mallei isolation from milk of a mare and evidence of congenital transmission of glanders in equids: case reports / Isolamento de Burkholderia mallei de leite de égua e evidência de transmissão congênita de mormo em equinos: relatos de casos

This is the first report of Burkholderia mallei isolation in milk from a mare diagnosed with glanders and of transplacental transmission of the bacteria in a seropositive pregnant mare, both from São Paulo State, Brazil, 2016 and 2019. After necropsy, the horses were evaluated for macroscopic lesions, and organ samples were removed for histological, bacteriological, and molecular analysis. B.mallei was identified in milk samples by culture isolation and PCR, whereas in the fetus of the pregnant mare by PCR of the stomach fluid. These findings will contribute to the epidemiological knowledge of glanders life cycle in Brazil.(AU)

Este é o primeiro relato de isolamento de Burkholderia mallei no leite de uma égua com diagnóstico de mormo e de transmissão transplacentária da bactéria em uma égua prenhe soropositiva, ambas do Estado de São Paulo, Brasil, 2016 e 2019. Após a necropsia, os cavalos foi verificada a presença de lesões macroscópicas e amostras de órgãos foram coletadas para posterior análise histológica, bacteriológica e molecular. B.mallei foi identificada em amostras de leite por isolamento bacteriano e PCR, enquanto no feto de égua prenhe por PCR do fluido estomacal. Esses achados contribuirão para o conhecimento epidemiológico do ciclo de vida do mormo no Brasil.(AU)

Caracterização molecular e estudo do genoma de Burkholderia mallei isoladas de equídeos nos estados de Pernambuco e Alagoas, Brasil

Mormo é uma doença infectocontagiosa primeiramente relatada entre os séculos II e IV e que causa graves perdas econômicas para a equideocultura. O objetivo desse estudo foi caracterizar geneticamente isolados de Burkholderia mallei obtidos de equídeos com mormo nos estados de Pernambuco e Alagoas. Durante as necropsias dos animais soropositivos foram coletadas amostras das lesões piogranulomatosas. O material foi submetido ao isolamento bacteriano e confirmação pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) convencional e tempo real. No total, seis isolados foram identificados nas propriedades de equinos nos dois estados, sendo cinco isolados do estado Pernambuco e um isolado de Alagoas. Os produtos das amplificações foram sequenciados e comparados ao banco de dados encontrado no National Center for Biotechnology Information (NCBI), onde foi possível observar similaridade com o isolado Turkey 10, relatado primeiramente na Turquia. Os isolados foram submetidos à Reação em Cadeia da Polimerase High Resolution Melting (PCR-HRM) para caracterização genética por meio da variação dos Single Nucleotide polymorphisms (SNPs) e posteriormente ao sequenciamento completo do genoma (WGS). O sequenciamento do genoma revelou uma correlação entre as cepas circulantes nos dois estados, com uma variação genética entre cepas isoladas de animais de Pernambuco. Foram descritos dois genótipos de Burkholderia mallei circulantes no Brasil, sendo o genótipo L3B2, anteriormente descrito para um isolado brasileiro e o genótipo L3B3Sb3Gp1SbGp1, ainda não descrito anteriormente no país. Este é a primeira descrição de um isolado com similaridade genética com outras cepas relatadas na Europa, sugerindo mais de um evento de introdução da doença no Brasil. A caracterização dos isolados de B. mallei circulantes é importante para o desenvolvimento e aprimoramento de técnicas de diagnóstico sorológico e desenvolvimento de marcadores moleculares específicos para detecção de cepas brasileiras, além de ser um meio de adicional no controle da doença, possibilitando estabelecer ligações entre os diversos casos e identificar cadeias de transmissão.

Glanders is an infectious-contagious disease first reported between the 2nd and 4th centuries and that causes serious economic losses for equidae culture. The aim of this study was to genetically characterize Burkholderia mallei isolates obtained from equine glanders in the states of Pernambuco and Alagoas. During necropsies of seropositive animals, samples of pyogranulomatous lesions were collected. The material was subjected to bacterial isolation and bacterial cultures were analyzed by conventional and real time Polymerase Chain Reaction (PCR) for confirmation. In total, six isolates were identified on horse farms in both states, five from Pernambuco state and one from Alagoas. The amplicons were sequenced and compared to the database found at the National Center for Biotechnology Information (NCBI), where it was possible to observe similarity with the Turkey 10 isolate, first reported in Turkey. In order to confirm the result, the isolates were submitted to Polymerase Chain Reaction - High Resolution Melting (PCR-HRM) for genetic characterization through the variation of Single Nucleotide polymorphisms (SNPs) and subsequently to complete genome sequencing (WGS). The complete genome sequencing revealed a correlation between the circulating strains between the two states, but a genetic variation was observed among strains isolated from animals from Pernambuco. Two genotypes of Burkholderia mallei circulating in Brazil have been described, being the L3B2 genotype previously described for a Brazilian isolate and the L3B3Sb3Gp1SbGp1 genotype, never previously described for contemporary strains in Brazil. This is the first current description of an isolate with genetic similarity to other strains reported in Europe, suggesting more than one event of introduction of the disease in Brazil. The characterization of circulating B. mallei isolates is important for the development and improvement of serological diagnostic techniques and the development of specific molecular markers for the detection of Brazilian strains, in addition to being an additional means of controlling the disease, making it possible to establish links between the different cases and identify transmission chains.

Ocorrência de focos de mormo em equídeos no estado de Alagoas, no período de 2013 a 2020.

O mormo é uma zoonose infectocontagiosa de alta morbidade e mortalidade, que acomete os equídeos, e ocorre de forma endêmica em diferentes partes do mundo. É listada pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento como uma doença de notificação compulsória de qualquer caso suspeito. Alagoas tem na agropecuária a base de sua economia, motivo pelo qual a criação de equídeos tem grande importância socioeconômica para o estado. Assim, objetivou-se, por meio da pesquisa, descrever a ocorrência de focos de mormo em equídeos no estado de Alagoas, no período de 2013 a 2020, a fim de se conhecer melhor sua situação epidemiológica no estado e de auxiliar a escolha das medidas de controle e erradicação mais eficazes.

Glanders is an infectious zoonosis of high morbidity and mortality, that mainly affects Equidae, and occurs endemically in different parts of the world. It is listed by the Brazilian Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento as a disease of compulsory notification of any suspicious case. Alagoas has in agriculture the basis of its economy, which is why the creation of Equidae has great socioeconomic importance for the state. Thus, considering the reemerging profile of the disease and its importance for public health, the objective of this study was to describe the occurrence of foci of glanders in Equidae in the state of Alagoas, in the period from 2013 to 2020, in order to better understand the epidemiological situation in the state and to help the choice of the most effective control and eradication measures. The study data were obtained from the research forms used in the opening, monitoring and sanitation of foci of animal diseases by the Official Veterinary Service of Alagoas (SVO-AL) and demonstrated that glanders is present endemically in the state, being considered a health and economic problem for equine agribusiness and a risk to the health of the population, demonstrating the need to strengthen the control and eradication measures of the disease in Alagoas.

PERFIL SANITÁRIO DE ASININOS ERRANTES DO NORDESTE BRASILEIRO

A anemia infecciosa equina, a arterite viral equina, a febre do Nilo ocidental, as encefalomielites equinas leste, oeste e venezuelana, as herpesviroses equinas e o mormo são doenças infecciosas que acometem os membros da família Equidae (equinos, asininos e muares). A maioria dos estudos de prevalência dessas doenças foi conduzida em equinos (Equus caballus), com pouca informação comparativa sobre a infecção nas outras espécies da família, como os asininos (jumentos). O Brasil possui uma das maiores populações de jumentos (Equus asinus) do mundo, concentrada principalmente na região nordeste, sendo que muitos deles vivem de forma errante ou abandonados, com status sanitário desconhecido. O presente trabalho teve por objetivo pesquisar através de métodos sorológicos e moleculares a presença do Equine infectious anemia virus (EIAV), do Alphaarterivirus equid, o West nile virus (WNV), Eastern equine encephalitis vírus (EEEV), Western equine encephalitis virus (WEEV), Venezuelan equine encephalitis vírus (VEEV) e dos Equine herpesvirus (EHV), além do mormo em asininos errantes do nordeste brasileiro. Os resultados encontrados, na população estudada, demonstraram que os asininos não estão infectados pela Burkholderia mallei e VEEV, porém os agentes EIAV, EHV, EEEV, WEEV, Alphaarterivirus equid e WNV estão circulando em algumas regiões do nordeste. Esse é o maior estudo feito para essas oito agentes em asininos no mundo, e permite avaliar o impacto dessa espécie como hospedeira natural dos respectivos agentes infecciosos nesta região do Brasil

Equine infectious anemia, equine viral arteritis, West Nile fever, eastern, western and Venezuelan equine encephalomyelitis, equine herpesviruses and glanders are infectious diseases that affect members of the family Equidae (horses, donkeys and mules). The Most studies on prevalence of these diseases have been conducted in horses (Equus caballus), with little comparative information about the infection in other species of the family, such as donkeys. Brazil has one of the largest populations of donkeys (Equus asinus) in the world, concentrated mainly in the northeast region, and many of them live wandering or abandoned, with unknown health status. The present work aimed to investigate the presence of Equine infectious anemia virus (EIAV), Alphaarterivirus equid, West Nile virus (WNV), Eastern equine encephalitis virus (EEEV), Western equine encephalitis virus (WEEV), Venezuelan equine encephalitis virus (VEEV) and Equine herpesvirus (EHV), in addition to glanders in errant donkeys from northeastern Brazil, through serological and molecular methods. The results found in the studied population showed that donkeys are not affected by Burkholderia mallei and VEEV, but the agents EIAV, EHV, EEEV, WEEV, Alphaarterivirus equid and WNV are circulating in some regions of the northeast. This is the largest study carried out on these eight pathogens in donkeys in the world, and allows us to evaluate impact of this species as a natural host of the respective infectious agents in this region of Brazil

Métodos de diagnóstico e estratégias de controle do mormo no brasil

Glanders is a zoonotic disease caused by Burkholderia mallei that affects equidae. After its re-emergence in Brazil the disease has been reported in almost all country. The control strategy established by the Ministry of Agriculture, Livestock and Supply (MAPA) involves statutory testing for equidae trafic control, movement restrictions and culling of positive animals from the detected outbreaks. These measures are based on the results of serological tests performed by private laboratories accredited by MAPA or by official MAPA laboratories. The complement fixation (CF) test is prescribed as screening and western blotting (WB) as a confirmatory test. The major problems for the diagnosis of glanders in Brazil are technological dependence, the quality of certain antigens, as well as the limitations of the screening test (CF), with low sensitivity (Se) and specificity (Sp), and the subjectivity of the WB. Alternatively, we have developed an indirect ELISA (ELISAi) employing antigens of B. mallei isolated in Brazil (Diagnostic kit – Glanders iELISA; MAPA License n: 10.080/2015). The ELISAi showed Se and Sp of 98.76% and 99.65%, respectively. The Kit will be submitted to international validation (OIE-Tender ref. AD/SR/2015/1885). The next step to complete the validation in Brazil is the conduction of reproductibility assay. Then it is expected that the ELISAi will be included in the Equidae National Health Program as official test for serological diagnosis of glanders.

O Mormo é uma zoonose causada pela bactéria Burkholderia mallei que afeta equídeos. Após sua reemergência no Brasil a doença tem sido notificada em praticamente todo território nacional. A estratégia de controle instituída pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e abastecimento (MAPA) envolve o teste para controle de trânsito e de eventos de aglomeração de equídeos, bem como interdição e saneamento dos focos detectados. Essas medidas são baseadas nos resultados de testes sorológicos realizados por laboratórios privados credenciados pelo MAPA ou por laboratórios oficiais do MAPA. A fixação do complemento (FC) é o teste prescrito como triagem e o western blotting (WB) como prova confirmatória. Os principais gargalos para o diagnóstico do mormo no Brasil são a dependência tecnológica, a qualidade de certos antígenos, bem como as limitações do teste de triagem (FC), com baixa sensibilidade (Se) e especificidade (Sp), além da subjetividade do WB. Como alternativa, desenvolvemos um ELISA indireto (ELISAi) empregando antígeno de amostras de B. mallei isoladas no Brasil (Kit diagnóstico Mormo ELISAi; MAPA Licença no: 10.080/2015). O teste apresentou Se e Sp de 98,76% e 99,65%, respectivamente. O Kit será submetido à validação internacional (OIE-Tender ref. AD/ SR/2015/1885). A próxima etapa para concluir a validação no Brasil é a realização de provas de reprodutibilidade. Espera-se que, cumprida essa etapa, o ELISAi seja incluído no Programa Nacional de Sanidade dos Equídeos como teste oficial para diagnóstico sorológico do mormo.

Métodos de diagnóstico e estratégias de controle do mormo no brasil

Glanders is a zoonotic disease caused by Burkholderia mallei that affects equidae. After its re-emergence in Brazil the disease has been reported in almost all country. The control strategy established by the Ministry of Agriculture, Livestock and Supply (MAPA) involves statutory testing for equidae trafic control, movement restrictions and culling of positive animals from the detected outbreaks. These measures are based on the results of serological tests performed by private laboratories accredited by MAPA or by official MAPA laboratories. The complement fixation (CF) test is prescribed as screening and western blotting (WB) as a confirmatory test. The major problems for the diagnosis of glanders in Brazil are technological dependence, the quality of certain antigens, as well as the limitations of the screening test (CF), with low sensitivity (Se) and specificity (Sp), and the subjectivity of the WB. Alternatively, we have developed an indirect ELISA (ELISAi) employing antigens of B. mallei isolated in Brazil (Diagnostic kit Glanders iELISA; MAPA License n: 10.080/2015). The ELISAi showed Se and Sp of 98.76% and 99.65%, respectively. The Kit will be submitted to international validation (OIE-Tender ref. AD/SR/2015/1885). The next step to complete the validation in Brazil is the conduction of reproductibility assay. Then it is expected that the ELISAi will be included in the Equidae National Health Program as official test for serological diagnosis of glanders.(AU)

O Mormo é uma zoonose causada pela bactéria Burkholderia mallei que afeta equídeos. Após sua reemergência no Brasil a doença tem sido notificada em praticamente todo território nacional. A estratégia de controle instituída pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e abastecimento (MAPA) envolve o teste para controle de trânsito e de eventos de aglomeração de equídeos, bem como interdição e saneamento dos focos detectados. Essas medidas são baseadas nos resultados de testes sorológicos realizados por laboratórios privados credenciados pelo MAPA ou por laboratórios oficiais do MAPA. A fixação do complemento (FC) é o teste prescrito como triagem e o western blotting (WB) como prova confirmatória. Os principais gargalos para o diagnóstico do mormo no Brasil são a dependência tecnológica, a qualidade de certos antígenos, bem como as limitações do teste de triagem (FC), com baixa sensibilidade (Se) e especificidade (Sp), além da subjetividade do WB. Como alternativa, desenvolvemos um ELISA indireto (ELISAi) empregando antígeno de amostras de B. mallei isoladas no Brasil (Kit diagnóstico Mormo ELISAi; MAPA Licença no: 10.080/2015). O teste apresentou Se e Sp de 98,76% e 99,65%, respectivamente. O Kit será submetido à validação internacional (OIE-Tender ref. AD/ SR/2015/1885). A próxima etapa para concluir a validação no Brasil é a realização de provas de reprodutibilidade. Espera-se que, cumprida essa etapa, o ELISAi seja incluído no Programa Nacional de Sanidade dos Equídeos como teste oficial para diagnóstico sorológico do mormo.(AU)

Produção e purificação parcial de PPD-maleína para diagnóstico do mormo em equídeos / Partially purified malleo-proteins production for glanders diagnosis in Equidae

Objetivou-se com este estudo produzir e purificar parcialmente a PPD-maleína a partir de amostras de Burkholderia mallei isoladas de equídeos no Brasil com potencial para uso no diagnóstico do mormo. As linhagens de B. mallei fenotipicamente caracterizadas e de virulência comprovada foram inoculadas em caldo Dorset-Henley para crescer e metabolizar. Em seguida, as proteínas foram separadas por precipitação com ácido tricloroacético e precipitadas com sulfato de amônia. As PPDs-maleínas foram concentradas em 1,0mg/mL e na avaliação realizada em cobaios foi eficaz no desenvolvimento da hipersensibilidade do tipo tardia e consequentemente na identificação de animais verdadeiro positivos e exclusão dos verdadeiro negativos, sendo uma possibilidade em potencial para utilização no diagnóstico do mormo.(AU)

The objective of this study was to produce and partially purify Malleo-protein from Burkholderia mallei samples isolates from Equidae in Brazil with potential for use in the diagnosis of glanders. The strain B. mallei phenotypically characterized and proven virulent was inoculated into broth Dorset-Henley to grow and metabolize. The proteins were separated by trichloroacetic acid precipitation and amonium sulfate precipitation. The PPD mallein was concentrated 1.0mg/mL and biologically tested in guinea pigs. It was effective in the development of delayed-type hypersensitivity and consequently to identify true-positive animals and to exclude of true negatives. There is the possibility for potential use in the glanders diagnosis in Equidae.(AU)

Detecção da hipersensibilidade do tipo tardia (HTT) à maleína produzida no Brasil em equinos sensibilizados em Alagoas

O mormo é uma enfermidade infecto-contagiosa causada por uma bactéria denominada Burkholderia mallei, um bacilo Gram-negativo, aeróbio, imóvel e intracelular facultativo. Acomete principalmente os equinos, asininos e muares, e o homem é hospedeiro acidental, sendo, geralmente, uma doença ocupacional e fatal. Geralmente, a maleína e os testes sorológicos, são utilizados no diagnóstico da doença. A maleinização é similar à tuberculização, sendo a maleína uma glicoproteína extraída a partir de culturas de B. mallei que é utilizada como antígeno no teste intradermo-palpebral em equídeos. Objetivou-se detectar a Hipersensibilidade do Tipo Tardia (HTT) à PPD-maleína produzida no Brasil em equinos sensibilizados em uma propriedade no estado de Alagoas.

AVALIAÇÃO DO DIAGNÓSTICO DO MORMO

O Mormo constitui-se em uma doença altamente contagiosa dos solípedes causada pela Burkholderia mallei, uma bactéria Gram-negativa, não móvel e cocobacilo aeróbio, infectando primariamente equínos, asininos e muares, entretanto humanos são considerados hospedeiros acidentais. Burkholderia mallei está relacionada na lista de doenças da Organização Mundial para a Saúde Animal (OIE) como doença de importância de saúde pública, e devido ao seu alto potencial de infecção é referenciada como agente de bioterrorismo. De acordo com a OIE o diagnóstico compreende o teste sorológico, alérgico, isolamento bacteriano e testes de biologia molecular, sendo a fixação do complemento, o teste oficial a ser realizado para trânsito de animais. O Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento, através da Portaria Nº 22, de 16 de março de 2018 do Ministério, utiliza o teste da Fixação do Complemento e Elisa para triagem dos animais, sendo aqueles reagentes, testados posteriormente com o Western Blotting para confirmação. Neste trabalho, temos como objetivo identificar filogeneticamente as cepas circulantes em território nacional para os animais suspeitos de Mormo. A partir do isolamento bacteriano foram identificados 08 resultados compatíveis com a Burkholderia em amostras oriundas de vigilância epidemiológica em áreas focos da doença. O sequenciamento demonstrou a circulação das cepas Burkholderia pseudomallei e Burkholdeia mallei, em território brasileiro onde há presença do Mormo. Os resultados mostram a diferenciação das estirpes circulantes em território nacional e proporciona o conhecimento de sua epidemiologia e virulência, auxiliando posteriormente em formulações de medidas para controle e erradicação da enfermidade.

Glanders is a highly contagious disease caused by Burkholderia mallei solipeds, a Gram - negative bacterium, not motility and aerobic coccobacillus, primarily infecting horses, donkeys and mules, though humans are considered accidental hosts . The Burkholderia mallei is listed in the list of the World Organisation for Animal Health (OIE) as an important public health disease, and due to its high potential for infection is referred to as a bioterrorism agent. According to the OIE comprises the serological diagnosis, allergy testing and bacterial isolation, and complement fixation, the official test to be performed for trade of animals. This method of diagnosis is recommended in Brazil by Instruction Nº 22, 16 of march of 2018, Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply by its high sensitivity and specificity. According to the OIE comprises the serological diagnosis, allergy testing and bacterial isolation, and complement fixation, the official test to be performed for trade of animals and bacterial isolation is considered gold test for identification of the agent. From the bacterial isolation the presence of Burkholderia was identified in 11 samples from epidemiological surveillance in the disease outbreaks. Sequencing demonstrated the circulation of the strains Burkholderia pseudomallei and Burkholderia mallei in Brazilian territory where Mormo is present. The results show the differentiation of the circulating strains in the national territory and provides the knowledge of their epidemiology and virulence, later assisting in formulations of disease control and eradication measures

Infecção Natural por Burkholderia mallei em Equídeos e cobaios (Cavia porcellus): estudo clínico e avaliação da resposta humoral

O mormo é uma enfermidade infectocontagiosa e frequentemente letal, aguda ou crônica, caracterizada por lesões respiratórias, linfáticas e cutâneas em equídeos, porém de caráter zoonótico. O diagnóstico do mormo consiste na associação dos aspectos clínico-epidemiológicos, anatomohistopatológicos, isolamento bacteriano, inoculação em animais de laboratório, reação imunoalérgica e testes sorológicos como FC, ELISA e WB. Estudos inerentes ao acompanhamento de focos naturais do mormo auxiliam a elucidar lacunas referentes à patologia e diagnóstico da doença e atualmente existem algumas lacunas referentes ao padrão de resposta imunológica dos equídeos em diferentes fases de infecção durante o quadro natural de desenvolvimento da doença. Com isso, objetivou-se estudar os aspectos de diagnóstico clínico, imunológico, anatomopatológico e microbiológico em equídeos naturalmente infectados por Burkholderia mallei, em dois focos para o mormo de acordo com a ADEAL e MAPA, no estado de Alagoas.

Glanders is an infectious and frequently lethal disease, acute or chronic, characterized by respiratory, lymphatic and cutaneous lesions in equidae, but of a zoonotic nature. The mormo diagnosis consists of the association of clinical and epidemiological aspects, anatomohistopathological, bacterial isolation, inoculation in laboratory animals, immunoallergic reaction and serological tests such as FC, ELISA and WB. Studies in the monitoring of natural foci of glanders help to elucidate gaps regarding the pathology and diagnosis of the disease and there are currently some gaps regarding the pattern of immunological response of the equines in different phases of infection during the natural development of the disease. The aim of this study was to study the clinical, immunological, anatomopathological and microbiological aspects of equidae naturally infected with Burkholderia mallei in two outbreaks for glanders according to ADEAL and MAPA, in the state of Alagoas.