Potential neuroprotective of trans-resveratrol a promising agent tempeh and soybean seed coats-derived against beta-amyloid neurotoxicity on primary culture of nerve cells induced by 2-methoxyethanol

Abstract Resveratrol, a natural polyphenol found in tempeh, has not been investigated especially in vitro as a neuroprotective agent against 2-methoxyethanol (2-ME)-induced beta-amyloid cytotoxicity. Beta amyloid peptides (A) could initiate neurotoxic events and neuron-inflammatory response via microglial activation. However, it remains unknown whether the neurotoxic effect of beta-amyloid and/or associated with the potential of 2-ME to induce neurotoxic effects on primary culture of nerve cells induced by 2-ME. This study investigated potential neuroprotective of trans-resveratrol a promising agent tempeh and soybean seed coats-derived against beta-amyloid cytotoxicity on primary culture of nerve cells induced by 2-methoxyethanol. Biotium and MTT assays were used to analyze neurons, which were isolated from the cerebral cortex of fetal mice at gestation day 19 (GD-19). A standard solution of 2-methoxyethanol was dosed at 10 L. The cultured cells were randomly divided into the following groups: (1) 2-ME group + resveratrol standard, (2) 2-ME group + resveratrol isolated from tempeh, (3) 2-ME group + resveratrol isolated from soybean seed coats, and (4) the control group, without the addition of either 2-ME or resveratrol. Exposure of the primary cortical neuron cells to beta-amyloid monoclonal antibody pre-incubated for 24 h with 10 µL of 4.2 µg/mL resveratrol and 7.5 mmol/l 2-methoxy-ethanol additions. Here, we report that the addition of 2-ME and resveratrol (standard and isolated from tempeh) of cell culture at concentrations of 1.4, 2.8 and 4.2 µg/mL showed that the majority of neurons grew well. In contrast, after exposure to 2-ME and Beta-amyloid, showed that glial activated. These findings demonstrate a role for resveratrol in neuroprotective-neurorescuing action.

Resumo O resveratrol, um polifenol natural encontrado em tempê, não foi investigado apenas in vitro como agente neuroprotetor contra a citotoxicidade beta-amiloide induzida por 2-metoxietanol (2-ME). Os peptídeos beta-amiloides (A) podem iniciar eventos neurotóxicos e resposta inflamatória dos neurônios via ativação microglial. No entanto, permanece desconhecido se o efeito neurotóxico do peptídeo beta-amiloide associado ao potencial do 2-ME causa efeitos neurotóxicos na cultura primária de células nervosas induzidas pelo 2-ME. Este estudo investigou o potencial neuroprotetor do agente trans-resveratrol em cascas de sementes de soja e tempê derivadas da citotoxicidade beta-amiloide na cultura primária de células nervosas induzidas pelo 2-metoxietanol. Ensaios de biotium e MTT foram utilizados para analisar os neurônios isolados do córtex cerebral de camundongos fetais no dia da gestação 19 (GD-19). As células cultivadas foram divididas aleatoriamente nos seguintes grupos: (1) grupo 2-ME + padrão de resveratrol; (2) grupo 2-ME + resveratrol isolado de tempê; (3) grupo 2-ME + resveratrol isolado de cascas de sementes de soja; e (4) grupo controle, sem a adição de 2-ME ou resveratrol. Houve exposição das células primárias dos neurônios corticais ao anticorpo monoclonal beta-amiloide pré-incubado por 24 horas, com 10 µL de 4,2 µg/mL de resveratrol, e adições de 7,5 mmol/l de 2-metoxietanol. A adição de 2-ME e resveratrol (padrão e isolado do tempê) da cultura de células nas concentrações de 1,4, 2,8 e 4,2 µg/mL mostrou que a maioria dos neurônios cresceu bem. Por outro lado, após a exposição ao 2-ME e beta-amiloide, a glia foi ativada. Esses achados demonstram um papel do resveratrol na ação neuroprotetora e de neurorresgate.

Potential neuroprotective of trans resveratrol a promising agent tempeh and soybean seed coats-derived against betaamyloid neurotoxicity on primary culture of nerve cells induced by 2-methoxyethanol / Potencial neuroprotetor do agente trans-resveratrol em cascas de sementes de soja e tempê derivadas da neurotoxicidade beta-amiloide na cultura primária de células nervosas induzidas pelo 2-metoxietanol

Resveratrol, a natural polyphenol found in tempeh, has not been investigated especially in vitro as a neuroprotective agent against 2-methoxyethanol (2-ME)-induced beta-amyloid cytotoxicity. Beta amyloid peptides (Aβ) could initiate neurotoxic events and neuron-inflammatory response via microglial activation. However, it remains unknown whether the neurotoxic effect of beta-amyloid and/or associated with the potential of 2-ME to induce neurotoxic effects on primary culture of nerve cells induced by 2-ME. This study investigated potential neuroprotective of trans-resveratrol a promising agent tempeh and soybean seed coats-derived against beta amyloid cytotoxicity on primary culture of nerve cells induced by 2-methoxyethanol. Biotium and MTT assays were used to analyze neurons, which were isolated from the cerebral cortex of fetal mice at gestation day 19 (GD-19). A standard solution of 2-methoxyethanol was dosed at 10 μL. The cultured cells were randomly divided into the following groups: (1) 2-ME group + resveratrol standard, (2) 2-ME group + resveratrol isolated from tempeh, (3) 2-ME group + resveratrol isolated from soybean seed coats, and (4) the control group, without the addition of either 2-ME or resveratrol. Exposure of the primary cortical neuron cells to beta-amyloid monoclonal antibody pre-incubated for 24 h with 10 µL of 4.2 µg/mL resveratrol and 7.5 mmol/l 2-methoxy-ethanol additions. Here, we report that the addition of 2-ME and resveratrol (standard and isolated from tempeh) of cell culture at concentrations of 1.4, 2.8 and 4.2 µg/mL showed that the majority of neurons grew well. In contrast, after exposure to 2-ME and Beta-amyloid, showed that glial activated. These findings demonstrate a role for resveratrol in neuroprotective-neurorescuing action.

O resveratrol, um polifenol natural encontrado em tempê, não foi investigado apenas in vitro como agente neuroprotetor contra a citotoxicidade beta-amiloide induzida por 2-metoxietanol (2-ME). Os peptídeos beta amiloides (Aβ) podem iniciar eventos neurotóxicos e resposta inflamatória dos neurônios via ativação microglial. No entanto, permanece desconhecido se o efeito neurotóxico do peptídeo beta-amiloide associado ao potencial do 2-ME causa efeitos neurotóxicos na cultura primária de células nervosas induzidas pelo 2-ME. Este estudo investigou o potencial neuroprotetor do agente trans-resveratrol em cascas de sementes de soja e tempê derivadas da citotoxicidade beta-amiloide na cultura primária de células nervosas induzidas pelo 2-metoxietanol. Ensaios de biotium e MTT foram utilizados para analisar os neurônios isolados do córtex cerebral de camundongos fetais no dia da gestação 19 (GD-19). As células cultivadas foram divididas aleatoriamente nos seguintes grupos: (1) grupo 2-ME + padrão de resveratrol; (2) grupo 2-ME + resveratrol isolado de tempê; (3) grupo 2-ME + resveratrol isolado de cascas de sementes de soja; e (4) grupo controle, sem a adição de 2-ME ou resveratrol. Houve exposição das células primárias dos neurônios corticais ao anticorpo monoclonal beta-amiloide pré-incubado por 24 horas, com 10 µL de 4,2 µg/mL de resveratrol, e adições de 7,5 mmol/l de 2-metoxietanol. A adição de 2-ME e resveratrol (padrão e isolado do tempê) da cultura de células nas concentrações de 1,4, 2,8 e 4,2 µg/mL mostrou que a maioria dos neurônios cresceu bem. Por outro lado, após a exposição ao 2-ME e beta-amiloide, a glia foi ativada. Esses achados demonstram um papel do resveratrol na ação neuroprotetora e de neurorresgate.

Potential neuroprotective of trans resveratrol a promising agent tempeh and soybean seed coats-derived against betaamyloid neurotoxicity on primary culture of nerve cells induced by 2-methoxyethanol / Potencial neuroprotetor do agente trans-resveratrol em cascas de sementes de soja e tempê derivadas da neurotoxicidade beta-amiloide na cultura primária de células nervosas induzidas pelo 2-metoxietanol

Resveratrol, a natural polyphenol found in tempeh, has not been investigated especially in vitro as a neuroprotective agent against 2-methoxyethanol (2-ME)-induced beta-amyloid cytotoxicity. Beta amyloid peptides (Aβ) could initiate neurotoxic events and neuron-inflammatory response via microglial activation. However, it remains unknown whether the neurotoxic effect of beta-amyloid and/or associated with the potential of 2-ME to induce neurotoxic effects on primary culture of nerve cells induced by 2-ME. This study investigated potential neuroprotective of trans-resveratrol a promising agent tempeh and soybean seed coats-derived against beta amyloid cytotoxicity on primary culture of nerve cells induced by 2-methoxyethanol. Biotium and MTT assays were used to analyze neurons, which were isolated from the cerebral cortex of fetal mice at gestation day 19 (GD-19). A standard solution of 2-methoxyethanol was dosed at 10 μL. The cultured cells were randomly divided into the following groups: (1) 2-ME group + resveratrol standard, (2) 2-ME group + resveratrol isolated from tempeh, (3) 2-ME group + resveratrol isolated from soybean seed coats, and (4) the control group, without the addition of either 2-ME or resveratrol. Exposure of the primary cortical neuron cells to beta-amyloid monoclonal antibody pre-incubated for 24 h with 10 µL of 4.2 µg/mL resveratrol and 7.5 mmol/l 2-methoxy-ethanol additions. Here, we report that the addition of 2-ME and resveratrol (standard and isolated from tempeh) of cell culture at concentrations of 1.4, 2.8 and 4.2 µg/mL showed that the majority of neurons grew well. In contrast, after exposure to 2-ME and Beta-amyloid, showed that glial activated. These findings demonstrate a role for resveratrol in neuroprotective-neurorescuing action.(AU)

O resveratrol, um polifenol natural encontrado em tempê, não foi investigado apenas in vitro como agente neuroprotetor contra a citotoxicidade beta-amiloide induzida por 2-metoxietanol (2-ME). Os peptídeos beta amiloides (Aβ) podem iniciar eventos neurotóxicos e resposta inflamatória dos neurônios via ativação microglial. No entanto, permanece desconhecido se o efeito neurotóxico do peptídeo beta-amiloide associado ao potencial do 2-ME causa efeitos neurotóxicos na cultura primária de células nervosas induzidas pelo 2-ME. Este estudo investigou o potencial neuroprotetor do agente trans-resveratrol em cascas de sementes de soja e tempê derivadas da citotoxicidade beta-amiloide na cultura primária de células nervosas induzidas pelo 2-metoxietanol. Ensaios de biotium e MTT foram utilizados para analisar os neurônios isolados do córtex cerebral de camundongos fetais no dia da gestação 19 (GD-19). As células cultivadas foram divididas aleatoriamente nos seguintes grupos: (1) grupo 2-ME + padrão de resveratrol; (2) grupo 2-ME + resveratrol isolado de tempê; (3) grupo 2-ME + resveratrol isolado de cascas de sementes de soja; e (4) grupo controle, sem a adição de 2-ME ou resveratrol. Houve exposição das células primárias dos neurônios corticais ao anticorpo monoclonal beta-amiloide pré-incubado por 24 horas, com 10 µL de 4,2 µg/mL de resveratrol, e adições de 7,5 mmol/l de 2-metoxietanol. A adição de 2-ME e resveratrol (padrão e isolado do tempê) da cultura de células nas concentrações de 1,4, 2,8 e 4,2 µg/mL mostrou que a maioria dos neurônios cresceu bem. Por outro lado, após a exposição ao 2-ME e beta-amiloide, a glia foi ativada. Esses achados demonstram um papel do resveratrol na ação neuroprotetora e de neurorresgate.(AU)

Potential neuroprotective of trans-resveratrol a promising agent tempeh and soybean seed coats-derived against beta-amyloid neurotoxicity on primary culture of nerve cells induced by 2-methoxyethanol / Potencial neuroprotetor do agente trans-resveratrol em cascas de sementes de soja e tempê derivadas da neurotoxicidade beta-amiloide na cultura primária de células nervosas induzidas pelo 2-metoxietanol

Resveratrol, a natural polyphenol found in tempeh, has not been investigated especially in vitro as a neuroprotective agent against 2-methoxyethanol (2-ME)-induced beta-amyloid cytotoxicity. Beta amyloid peptides (Aß) could initiate neurotoxic events and neuron-inflammatory response via microglial activation. However, it remains unknown whether the neurotoxic effect of beta-amyloid and/or associated with the potential of 2-ME to induce neurotoxic effects on primary culture of nerve cells induced by 2-ME. This study investigated potential neuroprotective of trans-resveratrol a promising agent tempeh and soybean seed coats-derived against betaamyloid cytotoxicity on primary culture of nerve cells induced by 2-methoxyethanol. Biotium and MTT assays were used to analyze neurons, which were isolated from the cerebral cortex of fetal mice at gestation day 19 (GD-19). A standard solution of 2-methoxyethanol was dosed at 10 µL. The cultured cells were randomly divided into the following groups: (1) 2-ME group + resveratrol standard, (2) 2-ME group + resveratrol isolated from tempeh, (3) 2-ME group + resveratrol isolated from soybean seed coats, and (4) the control group, without the addition of either 2-ME or resveratrol. Exposure of the primary cortical neuron cells to beta-amyloid monoclonal antibody pre-incubated for 24 h with 10 µL of 4.2 µg/mL resveratrol and 7.5 mmol/l 2-methoxy-ethanol additions. Here, we report that the addition of 2-ME and resveratrol (standard and isolated from tempeh) of cell culture at concentrations of 1.4, 2.8 and 4.2 µg/mL showed that the majority of neurons grew well. In contrast, after exposure to 2-ME and Beta-amyloid, showed that glial activated. These findings demonstrate a role for resveratrol in neuroprotective-neurorescuing action.

O resveratrol, um polifenol natural encontrado em tempê, não foi investigado apenas in vitro como agente neuroprotetor contra a citotoxicidade beta-amiloide induzida por 2-metoxietanol (2-ME). Os peptídeos betaamiloides (Aß) podem iniciar eventos neurotóxicos e resposta inflamatória dos neurônios via ativação microglial. No entanto, permanece desconhecido se o efeito neurotóxico do peptídeo beta-amiloide associado ao potencial do 2-ME causa efeitos neurotóxicos na cultura primária de células nervosas induzidas pelo 2-ME. Este estudo investigou o potencial neuroprotetor do agente trans-resveratrol em cascas de sementes de soja e tempê derivadas da citotoxicidade beta-amiloide na cultura primária de células nervosas induzidas pelo 2-metoxietanol. Ensaios de biotium e MTT foram utilizados para analisar os neurônios isolados do córtex cerebral de camundongos fetais no dia da gestação 19 (GD-19). As células cultivadas foram divididas aleatoriamente nos seguintes grupos: (1) grupo 2-ME + padrão de resveratrol; (2) grupo 2-ME + resveratrol isolado de tempê; (3) grupo 2-ME + resveratrol isolado de cascas de sementes de soja; e (4) grupo controle, sem a adição de 2-ME ou resveratrol. Houve exposição das células primárias dos neurônios corticais ao anticorpo monoclonal beta-amiloide pré-incubado por 24 horas, com 10 µL de 4,2 µg/mL de resveratrol, e adições de 7,5 mmol/l de 2-metoxietanol. A adição de 2-ME e resveratrol (padrão e isolado do tempê) da cultura de células nas concentrações de 1,4, 2,8 e 4,2 µg/mL mostrou que a maioria dos neurônios cresceu bem. Por outro lado, após a exposição ao 2-ME e beta-amiloide, a glia foi ativada. Esses achados demonstram um papel do resveratrol na ação neuroprotetora e de neurorresgate.

Neuroprotective properties of RT10, a fraction isolated from Parawixia bistriata spider venom, against excitotoxicity injury in neuron-glia cultures

Background: L-Glutamate (L-Glu), the major excitatory neurotransmitter in the mammalian Central Nervous System (CNS), is essential to cognitive functions. However, when L-Glu is accumulated in large concentrations at the synaptic cleft, it can induce excitotoxicity that results in secondary damage implicated in many neurological disorders. Current therapies for the treatment of neurological disorders are ineffective and have side effects associated with their use; therefore, there is a need to develop novel treatments. In this regard, previous studies have shown that neuroactive compounds obtained from the venom of the spider Parawixia bistriata have neuroprotective effects in vitro and in vivo. In this sense, this work aimed to evaluate potential neuroprotective effects of fraction RT10, obtained from this spider venom, on primary cultures of neuron and glial cells subjected to glutamate excitotoxicity insults. Methods: Primary cultures of neurons and glia were obtained from the cerebral tissue of 1-day-old postnatal Wistar rats. After 7 days in vitro (DIV), the cultures were incubated with fraction RT10 (0.002; 0.02; 0.2 and 2 µg/µL) or riluzole (100 µM) for 3-hours before application of 5 mM L-Glu. After 12 hours, the resazurin sodium salt (RSS) test was applied to measure metabolic activity and proliferation of living cells, whereas immunocytochemistry for MAP2 was performed to measure neuronal survival. In addition, the cells were immunolabeled with NeuN and GFAP in baseline conditions. Results: In the RSS tests, we observed that pre-incubation with RT10 before the excitotoxic insults from L-Glu resulted in neuroprotection, shown by a 10% reduction in the cell death level. RT10 was more effective than riluzole, which resulted in a cell-death reduction of 5%. Moreover, qualitative analysis of neuronal morphology (by MAP2 staining, expressed as fluorescence intensity (FI), an indirect measure of neuronal survival)...(AU)

The differentiation potential of adipose tissue-derived mesenchymal stem cells into cell lineage related to male germ cells / Potencial de diferenciação de células-tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo em células da linhagem germinativa masculina

The adipose tissue is a reliable source of Mesenchymal stem cells (MSCs) showing a higher plasticity and transdifferentiation potential into multilineage cells. In the present study, adipose tissue-derived mesenchymal stem cells (AT-MSCs) were isolated from mice omentum and epididymis fat depots. The AT-MSCs were initially compared based on stem cell surface markers and on the mesodermal trilineage differentiation potential. Additionally, AT-MSCs, from both sources, were cultured with differentiation media containing retinoic acid (RA) and/or testicular cell-conditioned medium (TCC). The AT-MSCs expressed mesenchymal surface markers and differentiated into adipogenic, chondrogenic and osteogenic lineages. Only omentum-derived AT-MSCs expressed one important gene marker related to male germ cell lineages, after the differentiation treatment with RA. These findings reaffirm the importance of adipose tissue as a source of multipotent stromal-stem cells, as well as, MSCs source regarding differentiation purpose.(AU)

O tecido adiposo é uma fonte apropriada de células-tronco mesenquimais (MSCs), as quais demonstram ampla plasticidade com capacidade de transdiferenciar em diversas linhagens. No presente estudo, as células-tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo (AT-MSC) foram isoladas de tecido adiposo localizado nas regiões próximas ao omento e testículos de camundongos. Primeiramente, as AT-MSCs foram comparadas com base na expressão de marcadores antigênicos de superfície e no potencial de diferenciação nas três linhagens mesodérmicas. Além disso, AT-MSC, de ambas as fontes, foram cultivadas com meio de diferenciação contendo ácido retinóico (RA) e / ou meio condicionado testicular (TCC). As AT-MSCs expressaram marcadores de superfície mesenquimais e diferenciaram nas linhagens adipogênica, condrogênica e osteogênica. Após o tratamento com RA, somente as AT-MSCs isoladas do tecido adiposo depositado na região do omento expressaram um único importante marcador relacionado às células da linhagem germinativa masculina. Estes resultados reafirmam a importância do tecido adiposo como fonte de células-tronco estromais-multipotentes, bem como, uma fonte de MSCs para estudos de diferenciação.(AU)

The differentiation potential of adipose tissue-derived mesenchymal stem cells into cell lineage related to male germ cells / Potencial de diferenciação de células-tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo em células da linhagem germinativa masculina

The adipose tissue is a reliable source of Mesenchymal stem cells (MSCs) showing a higher plasticity and transdifferentiation potential into multilineage cells. In the present study, adipose tissue-derived mesenchymal stem cells (AT-MSCs) were isolated from mice omentum and epididymis fat depots. The AT-MSCs were initially compared based on stem cell surface markers and on the mesodermal trilineage differentiation potential. Additionally, AT-MSCs, from both sources, were cultured with differentiation media containing retinoic acid (RA) and/or testicular cell-conditioned medium (TCC). The AT-MSCs expressed mesenchymal surface markers and differentiated into adipogenic, chondrogenic and osteogenic lineages. Only omentum-derived AT-MSCs expressed one important gene marker related to male germ cell lineages, after the differentiation treatment with RA. These findings reaffirm the importance of adipose tissue as a source of multipotent stromal-stem cells, as well as, MSCs source regarding differentiation purpose.(AU)

O tecido adiposo é uma fonte apropriada de células-tronco mesenquimais (MSCs), as quais demonstram ampla plasticidade com capacidade de transdiferenciar em diversas linhagens. No presente estudo, as células-tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo (AT-MSC) foram isoladas de tecido adiposo localizado nas regiões próximas ao omento e testículos de camundongos. Primeiramente, as AT-MSCs foram comparadas com base na expressão de marcadores antigênicos de superfície e no potencial de diferenciação nas três linhagens mesodérmicas. Além disso, AT-MSC, de ambas as fontes, foram cultivadas com meio de diferenciação contendo ácido retinóico (RA) e / ou meio condicionado testicular (TCC). As AT-MSCs expressaram marcadores de superfície mesenquimais e diferenciaram nas linhagens adipogênica, condrogênica e osteogênica. Após o tratamento com RA, somente as AT-MSCs isoladas do tecido adiposo depositado na região do omento expressaram um único importante marcador relacionado às células da linhagem germinativa masculina. Estes resultados reafirmam a importância do tecido adiposo como fonte de células-tronco estromais-multipotentes, bem como, uma fonte de MSCs para estudos de diferenciação.(AU)

Modelagem celular de bebês nascidos com microcefalia causada por infecção vertical por Zika vírus

Em 2015, um número incomum de casos de bebês nascidos com microcefalia no Nordeste do Brasil chamou atenção, especialmente por apontarem um arbovírus, o Zika vírus (ZIKV), como possível causador de uma infecção congênita. O ZIKV é um Flavivírus transmitido pelo mosquito Aedes aegypti e cuja infecção produz efeitos brandos em humanos, com raras manifestações neurológicas e ocasionalmente síndrome de Guillain-Barré. Entretanto, em função de esclarecer os casos de microcefalia, estudos foram realizados comprovando que o ZIKV era capaz de infectar células do Sistema Nervoso Central (SNC), como neurônios e células da glia e, em especial, células mais imaturas, como as progenitoras neurais (NPC), abundantes no feto. Quando as NPC são infectadas pelo ZIKV, há menos migração celular, comprometimento da neurogênese e morte celular por apoptose, o que provavelmente acaba contribuindo para a microcefalia em recém-nascidos. O intuito desse projeto foi o de modelar in vitro o SNC de pacientes que nasceram com microcefalia congênita causada pela infecção vertical por ZIKV. Nosso objetivo foi verificar os efeitos celulares e moleculares da ação do vírus nestes pacientes durante a formação do SNC sob a hipótese de que a infecção maternal tenha induzido modificações celulares e moleculares que sejam responsáveis pelo fenótipo patogênico apresentado na síndrome congênita do Zika vírus (CZS). Nossos resultados mostraram que os fibroblastos utilizados para a reprogramação e estudo desses pacientes in vitro foi uma ótima alternativa mediante a dificuldade de obtenção de amostras. Além disso, as iPSC geradas através da reprogramação via transfecção de plasmídeos epissomais nos fibroblastos foram diferenciadas em astrócitos e neurônios. De acordo com a porcentagem de células diferenciadas, os pacientes foram divididos em dois grupos: um com 20% de astrócitos na cultura mista de neurônios (CZS-A), semelhante ao grupo controle, e outro grupo que apresentou baixa expressão de marcadores de astrócitos (CZS-B). A investigação da quantidade de sinapses nos neurônios derivados das iPSC dos pacientes com a CZS apresentavam menor expressão nas proteínas pré e pós-sinápticas (em ambos os grupos), assim como na sua colocalização, indicando que esses pacientes apresentam uma redução significativa de sinapses comparado ao grupo controle. Entretanto, foi observado uma redução significativa de proteína pós-sináptica e sua colocalização com a proteína pré- sináptica ao comparar os dois grupos de neurônios, sendo menor em pacientes CZS- B. Um quadro de redução significativa na produção de glutamato também foi observado nos astrócitos dos pacientes com CZS em comparação ao grupo controle, porém a curva de recaptação de glutamato apresentou o mesmo padrão de recaptação em ambos os grupos. Com esse trabalho e os resultados obtidos, podemos dizer que é possível modelar a CZS in vitro focando nos fenótipos celulares e moleculares, porém mais estudos serão necessários para confirmar esses achados e eventualmente correlacioná-los com as características clínicas encontradas nestas crianças.

In 2015, an unusual number of cases of babies born with microcephaly in Northeastern Brazil drew attention, especially for pointing out an arbovirus, the Zika virus (ZIKV), as a possible cause of congenital infection. ZIKV is a flavivirus transmitted by the Aedes aegypti mosquito and whose infection produces mild effects in humans, with rare neurological manifestations and occasionally Guillain-Barré syndrome. However, to clarify the microcephaly cases, studies have been carried out proving that ZIKV was able to infect cells of the Central Nervous System (CNS), such as neurons and glial cells and, in particular, more immature cells, such as neural progenitors. (NPC), abundant in the fetus. When NPCs are infected with ZIKV, there is less cell migration, impaired neurogenesis, and cell death from apoptosis, which probably contributes to microcephaly in newborns. The aim of this project was to model in vitro the CNS of patients who were born with congenital microcephaly caused by vertical ZIKV infection. Our objective was to verify the cellular and molecular effects of the virus action in these patients during the CNS formation under the hypothesis that maternal infection has induced cellular and molecular changes responsible for the pathogenic phenotype presented in the congenital Zika virus syndrome (CZS). Our results showed that the fibroblasts used for reprogramming and studying these patients in vitro were a great alternative due to the difficulty of obtaining samples. Also, iPSCs generated by reprogramming via transfection of episomal plasmids in fibroblasts were differentiated into astrocytes and neurons. According to the percentage of differentiated cells, patients were divided into two groups: one with 20% of astrocytes in the mixed neuron culture (CZS-A), similar to the control group, and another group that presented low expression of astrocyte markers. (CZS-B). The investigation of the number of synapses in the iPSC-derived neurons of patients with CZS showed less expression in pre-and postsynaptic proteins (in both groups), as well as in their colocalization, indicating that these patients have a significant reduction in synapses compared to the control group. However, a significant reduction in postsynaptic protein and its colocalization with presynaptic protein was observed when comparing the two groups of neurons, lower CZS-B patients. A picture of a significant reduction in glutamate production was also observed in the astrocytes of patients with CZS compared to the control group. Still, the glutamate reuptake curve showed the same reuptake pattern in both groups. With this work and the results obtained, we can say that it is possible to model CZS in vitro, focusing on cellular and molecular phenotypes. However, more studies will be needed to confirm these findings and eventually correlate them with the clinical characteristics found in these children.

Infección sistémica en herpes simple en una sagui-de-tufo-branco (Callithrix jacchus) en Semiárido em Paraiba / Systemic infection due to herpes simples virus in a white-tufted-ear marmoset (Callithrix jacchus) in the Semiarid Region of Paraiba, Brasil / Infecção sistêmica por herpesvírus simples em um sagui-de-tufo-branco (Callithrix jacchus) no Semiárido da Paraíba

Describe los aspectos epidemiológicos, clínicos y patológicos de la infección por virus del herpes simple en un Sagui-de-tufo-branco (Callithrix jacchus) la región semiárida de Paraíba. La enfermedad se produjo en una hembra de 7 meses de edad que se encontro prostada con lesiones ulcerosas cutáneas y en la cavidad oral. Un niño con lesiones herpéticas orales aparentemente comparte el mismo alimento con el animal. En la necropsia se observaron lesiones vesiculares y ulceradas en la comisura de la boca, el paladar blando y la lengua. Histopatología había dermatitis facial, estomatitis y glositis pustular y ulcerativa asociada con meningoencefalitis no supurativa con vasculitis y corpúsculos inclusiones intranucleares en las células epiteliales, neuronas y células gliales, inclusiones personajes de tipo Cowdry A. El diagnóstico de la infección por virus del herpesvírus simplex se llevó a cabo por datos epidemiológicos, clínicos y patológicos y confirmada por inmunohistoquímica.(AU)

We describe the epidemiological, clinical and pathological aspects of a herpes virus simples infection in a white-tufted-ear marmoset (Callithrix jacchus) in the semiarid region of Paraiba. The disease occurred in a female marmoset, seven-month-old, which presented prostration and ulcerative lesions in the skin and oral cavity. The owners also informed that a child with oral herpetic lesions shared food with the animal. At necropsy, there were vesicular and ulcerative lesions on the labial commissure, soft palate and tongue were observed. On histopathology, there was facial dermatitis, stomatitis and pustular and ulcerative glossitis associated with nonsuppurative meningoencephalitis and vasculitis containing intranuclear Cowdry A type inclusion bodies in epithelial cells, neurons and glial cells. The diagnosis of herpesvirus simplex infection was performed by the epidemiological, clinical and pathological data and confirmed by immunohistochemistry.(AU)

Descrevem-se os aspectos epidemiológicos, clínicos e patológicos da infecção por herpesvírus simples em um sagui-de-tufo branco (Callithrix jacchus) no semiárido da Paraíba. A doença ocorreu em uma fêmea de 7 meses de idade que se apresentava prostrada e com lesões ulcerativas cutâneas e na cavidade oral. Uma criança com lesões orais herpéticas aparentemente compartilhava o mesmo alimento com o animal. Na necropsia, observaram-se lesões vesiculares e ulcerativas na comissura labial, palato mole e na língua. Na histopatologia, verificou-se dermatite facial, estomatite e glossite pustular e ulcerativa associada à meningoencefalite não supurativa com vasculite e corpúsculos de inclusões intranucleares em células epiteliais, neurônios e células da glia, características de inclusões de Cowdry tipo A. O diagnóstico de infecção pelo herpesvírus simplex foi realizado pelos dados epidemiológicos, clínico-patológicos e confirmado pela imuno-histoquímica.(AU)

Infección sistémica en herpes simple en una sagui-de-tufo-branco (Callithrix jacchus) en Semiárido em Paraiba / Systemic infection due to herpes simples virus in a white-tufted-ear marmoset (Callithrix jacchus) in the Semiarid Region of Paraiba, Brasil / Infecção sistêmica por herpesvírus simples em um sagui-de-tufo-branco (Callithrix jacchus) no Semiárido da Paraíba

Describe los aspectos epidemiológicos, clínicos y patológicos de la infección por virus del herpes simple en un Sagui-de-tufo-branco (Callithrix jacchus) la región semiárida de Paraíba. La enfermedad se produjo en una hembra de 7 meses de edad que se encontro prostada con lesiones ulcerosas cutáneas y en la cavidad oral. Un niño con lesiones herpéticas orales aparentemente comparte el mismo alimento con el animal. En la necropsia se observaron lesiones vesiculares y ulceradas en la comisura de la boca, el paladar blando y la lengua. Histopatología había dermatitis facial, estomatitis y glositis pustular y ulcerativa asociada con meningoencefalitis no supurativa con vasculitis y corpúsculos inclusiones intranucleares en las células epiteliales, neuronas y células gliales, inclusiones personajes de tipo Cowdry A. El diagnóstico de la infección por virus del herpesvírus simplex se llevó a cabo por datos epidemiológicos, clínicos y patológicos y confirmada por inmunohistoquímica.

We describe the epidemiological, clinical and pathological aspects of a herpes virus simples infection in a white-tufted-ear marmoset (Callithrix jacchus) in the semiarid region of Paraiba. The disease occurred in a female marmoset, seven-month-old, which presented prostration and ulcerative lesions in the skin and oral cavity. The owners also informed that a child with oral herpetic lesions shared food with the animal. At necropsy, there were vesicular and ulcerative lesions on the labial commissure, soft palate and tongue were observed. On histopathology, there was facial dermatitis, stomatitis and pustular and ulcerative glossitis associated with nonsuppurative meningoencephalitis and vasculitis containing intranuclear Cowdry A type inclusion bodies in epithelial cells, neurons and glial cells. The diagnosis of herpesvirus simplex infection was performed by the epidemiological, clinical and pathological data and confirmed by immunohistochemistry.

Descrevem-se os aspectos epidemiológicos, clínicos e patológicos da infecção por herpesvírus simples em um sagui-de-tufo branco (Callithrix jacchus) no semiárido da Paraíba. A doença ocorreu em uma fêmea de 7 meses de idade que se apresentava prostrada e com lesões ulcerativas cutâneas e na cavidade oral. Uma criança com lesões orais herpéticas aparentemente compartilhava o mesmo alimento com o animal. Na necropsia, observaram-se lesões vesiculares e ulcerativas na comissura labial, palato mole e na língua. Na histopatologia, verificou-se dermatite facial, estomatite e glossite pustular e ulcerativa associada à meningoencefalite não supurativa com vasculite e corpúsculos de inclusões intranucleares em células epiteliais, neurônios e células da glia, características de inclusões de Cowdry tipo A. O diagnóstico de infecção pelo herpesvírus simplex foi realizado pelos dados epidemiológicos, clínico-patológicos e confirmado pela imuno-histoquímica.

Glial cells of the central nervous system of Bothrops jararaca (Reptilia, Ofidae): an ultrastructural study / Células gliais do sistema nervoso central de Bothrops jararaca (Reptilia, Ofidae): um estudo ultraestrutural

Although ultrastructural characteristics of mature neuroglia in the central nervous system (CNS) are very well described in mammals, much less is known in reptiles, especially serpents. In this context, two specimens of Bothrops jararaca were euthanized for morphological analysis of CNS glial cells. Samples from telencephalon, mesencephalon and spinal cord were collected and processed for light and transmission electron microscopy investigation. Astrocytes, oligodendrocytes, microglial cells and ependymal cells, as well as myelin sheaths, presented similar ultrastructural features to those already observed in mammals and tended to maintain their general aspect all over the distinct CNS regions observed. Morphological similarities between reptilian and mammalian glia are probably linked to their evolutionary conservation throughout vertebrate phylogeny.(AU)

Muito embora as características ultraestruturais da neuróglia madura do sistema nervoso central (SNC) sejam bem descritas em mamíferos, muito pouco é conhecido em répteis, especialmente em serpentes. Neste contexto, dois espécimes de Bothrops jararaca foram eutanasiados para análise morfológica das células gliais presentes no SNC. Amostras de telencéfalo, mesencéfalo e medula espinhal foram coletadas e processadas para investigação por microscopia de luz e eletrônica de transmissão. Astrócitos, oligodendócitos, células microgliais e ependimárias, bem como bainhas de mielina, apresentaram características ultraestruturais similares àquelas já observadas em mamíferos e tenderam a manter seu aspecto geral pelas diferentes regiões observadas no SNC. Similaridades morfológicas entre as células gliais de mamíferos e de répteis estão provavelmente ligadas a sua conservação evolutiva ao longo da filogenia dos vertebrados.(AU)

Ácido elágico e hesperidina como potenciais terapêuticos em desordens neuroinflamatórias

Neuroinflamação pode impactar negativamente o processo de neurogênese em adultos mamíferos, além de ser considerada fator de risco para déficit cognitivo e demência. Dentre os modelos experimentais de neuroinflamação, destacam-se os modelos que utilizam aplicações intrapeirtoneais (IP) de lipopolissacarídeos (LPS) ou administração intracerebroventricular (ICV) de estreptozotocina (STZ). Diversas pesquisas têm sido realizadas para buscar alternativas terapêuticas para desordens neuroinflamatórias. Os flavonoides, como o ácido elágico (AE) e a hesperidina (HES), provenientes principalmente de frutas, apresentam diversos efeitos benéficos ao organismo, como propriedades antioxidantes e anti-inflamatórias, e reduzida toxicidade. Nesse contexto, esta pesquisa teve por objetivo avaliar o potencial terapêutico do AE ou HES em modelos experimentais de neuroinflamação. Este estudo foi dividido em dois experimentos. No primeiro (MANUSCRITO I) o objetivo do estudo foi avaliar o potencial do AE em modelo experimental de neuroinflamação induzida por múltiplas aplicações de LPS. Foram utilizados 32 ratos machos Wistar, distribuídos em 4 grupos (n=8): controles (CTRL+SAL) e controle tratado com AE (CTRL+AE), e os grupos dos animais que receberam LPS (LPS+ SAL) e (LPS+AE). Os grupos LPS receberam 8 injeções IP diárias de LPS em 8 dias consecutivos na dose de 250mg/kg de peso corporal, dissolvida em salina 0,9% enquanto os grupos CTRL e AE receberam apenas o veículo salina 0,9% no mesmo volume. Duas horas após as aplicações (IP), os ratos do grupo AE e LPS+AE foram tratados com AE na dose de 100mg/kg por via oral durante os 8 dias de tratamento. Os testes de campo aberto e reconhecimento de objetos foram realizados nos dias seis, sete e oito do período experimental. No segundo experimento (MANUSCRITO II) o objetivo do estudo foi avaliar os efeitos da HES e sua associação com a rivastigmina (RIV) na memória e parâmetros oxidativos em um modelo de Doença de Alzheimer (DA) esporádica induzido por injeção intracerebroventricular de estreptozotocina (ICV-STZ). Foram utilizados 64 ratos Wistar, distribuídos em oito grupos (n=8): controle (CTRL), RIV, HES, RIV+HES, STZ, STZ+RIV e STZ+HES, STZ+RIV+HES. Os ratos receberam injeção ICV-STZ (3 mg/kg) ou solução salina e foram tratados diariamente, a partir do quarto dia, com 100 mg/kg de HES via oral, durante 30 dias. Aos 21 dias, pós injeção ICV-STZ, iniciou-se o tratamento oral com 2 mg/kg de RIV que teve duração de 13 dias. Realizou-se teste comportamental pelo labirinto aquático de Morris 30 dias após a injeção ICV-STZ. Em ambos estudos, os antioxidantes utilizados (AE ou HES) demonstraram potencial para reverter os efeitos deletérios do LPS ou STZ, a partir da redução do dano oxidativo, com incremento do sistema antioxidante e redução das espécies reativas de oxigênio (ERO), e melhora no potencial cognitivo dos animais. Em adição, no MANUSCRITO I, o AE demonstrou potencial imunomodulador, a partir de redução da expressão de células da glia, bem como capacidade de prevenir o aumento na atividade da acetilcolinesterase (AChE) e fosforilação da Tau. Esses resultados demonstram o potencial terapêutico do AE e HES em desordens cognitivas secundárias à neuroinflamação, o que torna esses antioxidantes potenciais candidatos para o tratamento de doenças neurodegenerativas.

Neuroinflammation can negatively impact the process of neurogenesis in adult mammals in addition to being considered a risk factor for cognitive impairment and dementia. Among the experimental models of neuroinflammation, we highlight the models that use intraperitoneal (IP) applications of lipopolysaccharides (LPS) or intracerebroventricular administration (ICV) of streptozotocin (STZ). Several types of research have been carried out to search for therapeutic alternatives for neuroinflammatory disorders. Flavonoids, such as ellagic acid (EA) and hesperidin (HES), found mainly in fruits, have several beneficial effects on the body, such as antioxidant and anti-inflammatory properties, as well as reduced toxicity. In this context, this research aimed to evaluate the therapeutic potential of EA or HES in experimental models of neuroinflammation. This study was divided into two experiments. In the first one (MANUSCRIPT I), the objective of the study was to evaluate the potential of EA in an experimental model of neuroinflammation induced by multiple applications of LPS. Thirty-two male Wistar rats were used, distributed in 4 groups (n = 8): controls (CTRL+SAL) and control-treated with EA (CTRL+EA), and the groups of animals that received LPS (LPS+SAL) and (LPS+EA). The LPS groups received eight daily IP injections of LPS for eight consecutive days at a dose of 250mg/kg of body weight, dissolved in 0.9% saline while the CTRL and EA groups received only 0.9% saline vehicle in the same volume. Two hours after applications (IP), animals in the EA and LPS+EA group were treated with EA at a dose of 100mg/kg orally during the eight days of treatment. The open-field test and object recognition were performed at sixth, seventh, and eighth days of the experimental period. In the second experiment (MANUSCRIPT II), the study aimed to evaluate the effects of HES and its association with rivastigmine (RIV) on memory and oxidative parameters in a sporadic model of Alzheimer's Disease (AD) induced by ICV-STZ injection. 64 Wistar rats were used, divided into eight groups (n = 8): control (CTRL), RIV, HES, RIV+HES, STZ, STZ+RIV, and STZ, HES, STZ+RIV+HES. The rats received an ICV-STZ injection or saline solution (3 mg/kg) and were treated daily, from the fourth day, with 100 mg/kg of HES orally, for 30 days. Twenty-one days after ICV-STZ injection, oral treatment was started with 2 mg/kg of IVR that lasted for 13 days. Behavioral testing was performed by the Morris water maze 30 days after the ICV-STZ injection. In both studies, the antioxidants used (EA or HES) demonstrated the potential to reverse the harmful effects of LPS or STZ by reducing oxidative damage, increasing the antioxidant system, reducing reactive oxygen species (ROS), and improving in the animals' cognitive potential. Also, in MANUSCRIPT I, EA demonstrated immunomodulatory potential, from reduced expression of glial cells, as well as the ability to reduce acetylcholinesterase (AChE) activity and Tau phosphorylation. These results demonstrate the therapeutic potential of EA and HES in cognitive disorders secondary to neuroinflammation, which makes these antioxidants potential candidates for the treatment of neurodegenerative diseases.

ATIVIDADE CITOTÓXICA E ANTI-INFLAMATÓRIA DE EXTRATO DE FOLHAS DE Jatropha curcas L. EM CÉLULAS GLIAIS

A Jatropha curcas L. (J. curcas L.), planta da família da Euforbeáceae, conhecida localmente como pinhão manso, apresenta alta plasticidade adaptativa, sendo cultivada em diferentes regiões de clima tropical e subtropical do mundo. Configura-se uma alternativa na medicina popular tradicional e veterinária para tratamentos de várias condições patológicas. Estudos demonstram que ação farmacológica como antimicrobiano, antifúngico, antioxidante, cicatrizante e anti-inflamatório possa está associado à presença de classes de compostos bioativos como os flavonoides e taninos. No entanto, não existem relatos da ação de compostos isolados desta planta no Sistema Nervoso Central (SNC). A escassez de conhecimento técnico-científico sobre a espécie gera uma demanda por estudos mais aprofundados. Assim o presente estudo objetivou realizar um mapeamento prospectivo sitemático sobre evolução tecnológica das diversas utilizações da planta Jatropha curcas L., obter extrato metanólico de folhas de J. curcas L. (EJC) e suas frações (FnEJC), realizar triagem fitoquímica qualitativa dos bioativos do EJC e investigar a atividade citotóxica e anti-inflamatória em culturas primárias de células gliais submetidas a estímulo inflamatório. A prospecção de registros tecnológicos a partir da base de dados do Escritório Europeu de Patentes (Espacenet®), entre o período de 1983 a 2012, não revelou documentos de tecnologiais (patentes) com finalidade terapêutica farmacológica da J. curcas L. A triagem fitoquímica do EJC apresentou resultado positivo para xantonas, leucoantocianidinas, catequinas (taninos catéquicos), flavanonas e flavonoides, xantonas, esteroides, terpenoides e saponinas. Foi observada atividade anti-inflamatória do extrato metanólico de folhas de J. curcas L. e frações em células gliais obtidas a partir de córtex cerebral de ratos Wistar neonatos, tratadas com lipopolissacarideo de Escherichia coli (LPS 1 g mL-1). O EJC (0,1 g mL-1 a 1.000 g mL-1) não foi citotóxica para as células gliais e apresentou EC50 de 10,794 g mL-1. O tratamento com LPS induziu ativação de astrócitos e microglias caracterizada por modificações morfológicas e da expressão de marcadores epecíficos GFAP e Iba-1, respectivamente além dada ativação do Fator Nuclear kaap B (NF-kB) em astrócitos além de aumento da produção de Oxido nítrico (NO). O Tratamento com o EJC preservou células quiescentes e atenuou ativação de células gliais pós indução inflamatória. Observou-se que EJC, F1EJC e F2EJC (0,1 g mL-1) inibiram a produção de NO, inclusive após estímulo inflamatório com LPS. Os resultados sugerem que o EJC inibe a ativação do NF-kB por apresentar compostos bioativos da J. curcas L. com possível bloqueio da resposta glial na regulação de genes envolvidos no processo inflamatório. Os resultados também contribuíram para a geração do documento de depósito de patente no Instituto Nacional da Propriedade Industrial (INPI) no intuito de assegurar as novas descobertas desenvolvidas.

Jatropha curcas L. (Euforbeáceae), known locally as pinhão manso, is a plant with highly adaptable plant cultivated in different regions of tropical and subtropical regions of the world. Its adopeted in traditional folk medicine for the treatment of various pathological conditions, including arthritis, wounds and especially inflammation. Parts of the plant heve been demonstrated biological activites, as antimicrobial, antifungal, antioxidant, healing and anti-inflammatort, however, there are no evidences about effects on the Central Nervous System (CNS). Increasing evidence shows that glia cells, in speciall astrocytes and microglia, play a crucial role in the inflammatory response in the CNS, implicated in the pathogenesis and progression of neurodegenerative diseases. The glial reaction (gliosis) is chacterized by a set of alterations including changes in the synthesis and distribution of cytoskeletal proteins, release of molecules involved in inflammation, and reduced ability to regulate extracellular neurotransmitters and ions. The objective of the present work was to perform a prospective study about the technological evolution of the various uses of the Jatropha curcas L., to obtain a methanolic extract from leaves of J. curcas L. (EJC) and its fractions (FnEJC), to perform qualitative phytochemical study of EJC and to investigate the cytotoxic and anti-inflammatory activity in primary cultures of glial cells submitted to inflammatory stimuli. The prospection of technological registrations from the database of the European Patent Office (Espacenet®), the platform with the largest number of associates in the world, between the yars of 1983 and 2012, did not reveal technology documents (patents) with pharmacological therapeutic purpose of J. curcas L. Phytochemical screening of EJC showed positive results for xanthones, leucoanthocyanidins, catechins (catheteric tannins), flavanones and flavonoids, xanthones, steroids, terpenoids and saponins. Glial cell cultures were obtained from the cerebral cortex of neonates Wistar rats and treated wit LPS (1 g mL-1). EJC at 0.1 1,000 g mL-1 was not toxic to glial cells, and presented EC50 of 10.794 g mL-1. Treatment with LPS induced astrocyte and microglia activation characterized by morphological modifications and changes on expression of GFAP and Iba-1, markers of astrocytes and microglia, respectively, as well as activation of transcription factor NF-kB and production of NO. EJC treatment associated with LPS attenuated gliosis and activation of the LPS-induced Nuclear kaap B Factor (NF-kB). Moreover, (EJC) and fractions F1EJC and F2EJC reduced LPS-induced prodution of NO. Togheter these results indicates that EJC presentes anti-inflammatory antivity in reative glial cells associated to inibition of NF-kB. The results also contributed to the generation of the patent document of invention in the National Institute of Industrial Property (INPI) in order to ensure the new discoveries developed.

Gliomatosis Cerebri in a Dog

A 6-year-old, female, mixed-breed dog was presented for necropsy with history of prostration and incoordination followed by circling to the right and seizures. There were no gross findings in the brain. Histologically, there were numerous neoplastic glial cells throughout the thalamus, midbrain, pons and medulla oblongata. Moderate multifocal lymphoplasmacytic perivascular cuffings were also present in the same areas. In addition, severe multifocal proliferation of glial cells was observed in the leptomeninge and white matter of the cerebellum. The neoplastic cells observed in the brain stem were negative for GFAP, while in the cerebellum the neoplastic glial cells were strongly labeled with GFAP and vimentin. Based on the histopathological findings and on the immunohistochemical results, a diagnosis of gliomatosis cerebri was made.(AU)

PLANTAS TÓXICAS PARA BOVINOS E EQUINOS EM RORAIMA

Informações sobre intoxicações por plantas em ruminantes e equinos no Estado de Roraima são escassas. Portanto, descreve-se surtos de intoxicação por plantas em bovinos e equinos no Estado de Roraima. Este trabalho é composto por três capítulos formatados com base nas normas da revista. No primeiro capítulo, publicado na revista TOXICON (v.60, n.3, p.324-328, 2012), relata-se a intoxicação por Indigofera lespedezioides. Os sinais clínicos observados em um cavalo afetado espontaneamente e outro induzido experimentalmente, foram anorexia, sonolência, incoordenação, ataxia severa, fraqueza, tropeços e perda de peso progressiva. As lesões histológicas foram lipofuscinose neuronal no cérebro, cerebelo e medula espinhal e Degeneração Walleriana em alguns tratos do mesencéfalo. Na microscopia eletrônica, observou-se degeneração e lipofuscinose neuronal e axonal. Os compostos tóxicos encontrados foram indospicina e toxinas nitro. O segundo capítulo, publicado na revista TOXICON (v.82, p.93-96, 2014), descreve a intoxicação espontânea por Solanum subinerme Jack como causa de degeneração cerebelar cortical em bovinos no estado de Roraima. Os sinais clínicos foram crises epileptiformes periódicas com perda de equilíbrio, quedas e recuperação. As lesões histológicas foram vacuolização fina do pericário dos neurônios de Purkinje, desaparecimento dessas células e substituição por células da glia de Bergman. O terceiro capítulo, publicado na revista TOXICON (v.115, p.22-27, 2016), relata um estudo a respeito da classificação e suposta toxicidade da Fridericia japurensis (Arrabidaea japurensis) no Brasil. O objetivo desta pesquisa foi determinar se F. japurensis contém monofluoracetato (MFA) e investigar a causa de morte súbita em locais do Estado de Roraima, onde essa planta foi suspeita de causar morte súbita, avaliando os sinais clínicos e as lesões histológicas em coelhos testados. Amostras de herbário de Tanaecium bilabiatum e F. japurensis e coletas a campo das áreas onde ocorreram mortes súbitas foram avaliadas para a presença de MFA. T. bilabiatum foi positiva para MFA, como já havia sido descrita anteriormente, enquanto que F. japurensis foi negativa. Amostras a campo de T. bilabiatum, identificadas erroneamente como F. japurensis, causaram morte súbita em coelhos e foram positivas para MFA. Após revisão taxonômica de F. japurensis, descrita anteriormente como a causa de morte súbita em bovinos em Roraima, verificou-se que esta foi identificada de forma incorreta, sendo que a identificação botânica correta para esta planta é T. bilabiatum. Este trabalho corrige a literatura relatada anteriormente.

Information on plant poisonings in ruminants and horses in state of Roraima are scarce. Wherefore describes outbreaks of poisoning by plants in cattle and horses in state of Roraima. This work consists of three chapters formatted based on the journal's standards. The first chapter, published in journal TOXICON (v.60, n.3, p.324-328, 2012), it reports the poisoning by Indigofera lespedezioides in horses. The clinical signs observed in a horse affected spontaneously and another induced experimentally, were anorexia, sleepiness, incoordination, severe ataxia, weakness, stumbling, and progressive weight loss. Histological lesions were neuronal lipofuscinosis observed in the brain, cerebellum, and spinal cord and Wallerian-type degeneration on some mesencephalic tracts. The toxic compound found was indospicine and nitro toxins. The second chapter, published in journal TOXICON (v.82, p.93-96, 2014), describe the spontaneous poisoning by Solanum subinerme Jack as a cause of cerebellar cortical degeneration in cattle in state of Roraima. Clinical signs were periodic epileptiform crises loss of balance, falls and recovery. The histological lesions consisted of slim vacuolation of the perikaryon of the Purkinje neurons, followed by the loss of these cells and their substitution by Bergman glia. The third chapter, published in journal TOXICON (v.115, p.22-27, 2016), reports a study in regard to the classification and putative toxicity of Fridericia japurensis (Arrabidaea japurensis) in Brazil. The objective of this research was to determine if F. japurensis contains monofluoracetate (MFA) and causes sudden death by investigating several sites in the state of Roraima where this plant was suspected of causing sudden death, evaluating the clinical signs and histologic lesions in rabbits dosed. Herbarium specimens of F. japurensis and Tanaecium bilabiatum and field collections of the areas where there were sudden deaths were evaluated for the presence of MFA. T. bilabiatum was positive for MFA, as already described above, while the F. japurensis was negative. Field collections have caused sudden death in rabbits and were positive for MFA. Upon review taxonomic F. japurensis, previously described as the cause of sudden death in Roraima, it was found that it was incorrectly identified. The correct botanical name for this plant is T. bilabiatum. Thus, this paper corrects the previously reported literature.

Transplante alogênico de células-tronco mesenquimais induz alteração do perfil de citocinas pró e antiflamatórias e de fatores neurotróficos no tratamento da lesão espinal

O objetivo deste estudo foi comparar dois protocolos de tratamento da lesão espinal aguda com células-tronco mesenquimais criopreservadas, extraídas do tecido adiposo (CTM-AD) de ratos Lewis eGFP. Avaliou-se a expressão de marcadores de superfície, capacidade de diferenciação e viabilidade celular pré e pós criopreservação de CTM-ADsubmetidas à três meios de criopreservação com concentrações distintas de soro fetal bovino (SFB). Os resultados demonstraram que as CTM-AD não perdem sua multipotência, não modificam a expressão fenotípica e apresentam alta viabilidade celular por até 90 dias de criopreservação. Avaliou-se também os efeitos imunomodulatórios e neuroprotetores do tratamento único (grupo GI) e duplo (grupo GII) com CTM-AD alogênicas criopreservadas por via intravenosa após lesão espinal Os grupos tratados (GI e GII) foram avaliados conjuntamente com o grupo sham (GS) e controle negativo (GC) atravéz da escala de função motora (BBB), expressão dos transcriptos gênicos de interleucina-10 (IL-10), interleucina-1 beta (IL-1), fator de necrose tumoral alfa (TNF-), fator de transformação do crescimento (TGF-), fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF), fator neutrófico derivado da glia (GDNF) e fator de crescimento endotelial vascular (VEGF). Adicionalmente realizou-se quantificação por imunohistoquímica do infiltrado inflamatório (anti-CD68), integridade neuronal (anti-NeuN), e ativação de astrócitos (anti-GFAP). Quando comparado ao grupo GC, os grupos tratados com CTM apresentaram maiores escores nas avaliações funcionais a partir de 72h após lesão, sendo a média dos maiores escores alcançada pelo grupo GII; menor expressão de CD68 e GFAP juntamente com a redução da degeneração da substância branca e maior expressão de NeuN. O tratamento com as células também resultou em aumento da expressão de IL-10, GDNF, VEGF e redução da expressão de TNF- e TGF-. Adicionalmente o grupo GII apresentou redução da expressão de IL-1 e aumento da expressão de BDNF. Conclui-se que o tratamento alogênico com duas aplicações de CTM-AD criopreservadas promove melhor recuperação da atividade motora, reduz o infiltrado inflamatório, ativa células da micróglia/macrógafos com fenótipo antinflamatório, aumenta a quantidade de neurônios íntegros, reduz a degeneração da substância branca e a ativação de astrócitos na medula espinal e aumenta a secreção do fator neurotrófico BDNF.

This thesis aimed to compare two treatment protocols with cryopreserved allogenic adipose-derived mesenchymal stem cells (AD-MSC) after spinal cord injury. Experiment 1 evaluated pre-freeze and pos-freeze populations of AD-MSCs response to freezing at 30, 60 and 90 days following cryopreservation. Plasticity, cell surface phenotype and cell viability were evaluated at different times after thawing technique. Results showed that MSC do not lose their multipotency, do not alter phenotypic profile and have a high cell viability for up to 90 days of cryopreservation. Experiment 2 evaluated the immunomodulatory and neuroprotective effects of cryopreserved allogenic adipose-derived MSCs after spinal cord injury (SCI). Treatment effects were comparatively evaluated by quantitation of gene expression of interleukin-10 (IL-10), interleukin-1 beta (IL-1), tumor necrosis factor (TNF-), transforming growth factor (TGF -), brain-derived neurotrophic factor (BDNF), glial derived neurotrophic factor (GDNF) and vascular endothelial growth factor (VEGF). Immunohistochemical analyzes were used to quantify inflammatory infiltrate (anti-CD68), neural integrity (anti-NeuN), and astrocytes activation (anti-GFAP). Frozen adipose-derived MSCs were transplanted after three hours (GI) and three hours and seven days after SCI (GII). The results were compared with animals without SCI (GS) and SCI without treatment (GC). MSCs treated groups had higher scores in functional assessments from 72h after injury, being the average of the highest scores achieved by the GII; lower expression of CD68 and GFAP along with reducing of degeneration of the white matter and increased expression of NeuN. The treatment with the cells also resulted in increased IL-10 expression, GDNF, VEGF and reduced of TNF- and TGF- expression. Additionally the GII decreased IL-1 expression and increased BDNF expression. The results suggest that early intravenous injection of AD-MSCs after acute SCI promotes better recovery of function, prevent futher damage through enhancement of anti-inflammatory mechanisms, reduces the inflammatory infiltrate, active anti-inflammatory phenotype of microglia, increase neuron viability, reduces the degeneration of the white matter and astrocyte activation in SCI. In addition, treatment with double applications of AD-MSCs was superior to the single administration of these cells, resulting in improved motor response and secretion of BDNF.

Avaliação da resposta inflamatória no sistema nervoso central causada pelo herpesvírus equino tipo 1 utilizando um modelo murino de neuroinfecção

O herpesvirus equino tipo 1 (EHV-1) é um importante patógeno que causa doença respiratória, abortamento e desordens neurológicas em equinos. O presente estudo foi realizado visando avaliar a resposta inflamatória causada pelo EHV-1 por meio da análise das manifestações clínicas, alterações histopatológicas e resposta imune do hospedeiro no sistema nervoso central (SNC). Camundongos das linhagens BALB/c (H2d), C57BL/6 (H2b) e C3H/HeJ (H2k) foram inoculados por via intranasal com as estirpes brasileiras A4/72 e A9/92 do EHV-1. Nesse estudo, associou-se a histopatologia, a resposta de citocinas pró-inflamatórias no SNC de camundongos das diferentes linhagens e o método de transcrição reversa seguida pela reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (RT-qPCR) para investigar a relação entre a infecção pelo EHV-1 e a resposta inflamatória com o desenvolvimento de lesões. As estirpes brasileiras A4/72 e A9/92 do EHV-1 causaram infecção aguda e letal nas diferentes linhagens de camundongos isogênicos. Os sinais clínicos e neurológicos, tais como perda de peso, pelos arrepiados, postura arqueada, apatia, dispneia, desidratação e sialorreia apareceram entre o 2º e 3º dia pós-infecção (dpi). Essas manifestações foram acompanhadas pelo aumento da sensibilidade a estímulos externos, convulsões, recumbência e morte. As alterações histopatológicas consistiram em necrose neuronal, edema, necrose de liquefação, leptomeningite neutrofílica, manguito perivascular, hemorragia focal, inflamação não supurativa, gliose multifocal e infiltração perivascular de células polimorfonucleares e mononucleares. As características e a extensão das lesões variaram entre as linhagens de camundongos. Animais inoculados com a estirpe A4/72 apresentaram lesões histopatológicas de maior grau de severidade quando comparados com aqueles inoculados com a estirpe A9/92. Observou-se aumento da concentração plasmática de TNF-, IL-6, CCL2 e IFN-g nos camundongos infectados pelo EHV-1 no 2º dpi. Detectou-se aumento da concentração plasmática e da expressão de mRNA para TNF-, IL-6 e CCL2 no SNC dos camundongos infectados pelo EHV-1 no 3º dpi; entretanto, não houve aumento da concentração plasmática nem da expressão de mRNA para IFN-g no 3º dpi. Evidenciou-se que a estirpe A4/72 do EHV-1 induz uma resposta imune sistêmica mais efetiva, enquanto que o vírus A9/92 culmina em uma resposta imunológica mais efetiva no SNC. Os camundongos com o fundo genético C57BL/6 e BALB/c mostraram níveis mais altos de expressão de mRNA para TNF-, IL-6 e CCL2, quando comparados com os C3H/HeJ. A gravidade dos sinais clínicos observados em camundongos infectados pode ser correlacionada com o pico dessas citocinas pró-inflamatórias (TNF- e IL-6) e da quimiocina CCL2, que são produzidas logo após a infecção viral por células residentes da glia e/ou infiltrativas no SNC. Esses achados indicam que as diferentes linhagens de camundongos isogênicos são susceptíveis à infecção por estirpes neuropatogênicas do EHV-1; as diferenças no padrão de alterações histopatológicas mostram que elas dependem do hospedeiro infectado, da estirpe viral e da resposta imunológica; e a supressão do interferon (IFN) tipo 1 sugere ser um mecanismo de escape do EHV-1 frente ao sistema imune. A baixa expressão de IL-6, TNF- e da quimiocina CCL2 em camundongos C3H/HeJ se explica pela mutação no gene toll-like receptor 4 (TLR-4) existente nessa linhagem de camundongo. Adicionalmente, os camundongos C3H/HeJ apresentaram lesões histopatológicas mais severas no SNC quando comparados com BALB/c e C57BL/6. Sugere-se que o IFN tipo I e o gene TLR-4 apresentam importante papel na patogênese do EHV-1 bem como proteínas do agente viral responsáveis pela supressão do IFN e partículas virais que sejam reconhecidas pelo TLR-4 podem ser alvos para o desenvolvimento de novas abordagens para o tratamento da doença viral e para a eficiência de imunógenos.

The equine herpesvirus type 1 (EHV-1) is an important pathogen that causes respiratory disease, abortion and neurological disorders in horses. This study was conducted to evaluate the inflammatory response caused by EHV-1 by the analysis of clinical manifestations, histopathological changes and the host immune response in the central nervous system (CNS). BALB/c (H2d), C57BL/6 (H2b) and C3H/HeJ (H2k) mice were inoculated intranasally with Brazilian EHV-1 strains A4/72 and A9/92. In this study, joined histopathology, the response of proinflammatory cytokines in the CNS of mice of different strains and reverse transcription method followed by quantitative polymerase chain reaction in real time (RT-qPCR) to investigate the relationship between infection by EHV-1 and inflammatory response in the development of lesions. Brazilian strains A4/72 and A9/92 EHV-1 caused acute lethal infection in different strains of inbred mice. Clinical and neurological signs such as weight loss, the bristly hair, hunched posture, apathy, dyspnoea, dehydration and salivary hypersecretion appeared between 2nd and 3rd day after infection (dpi). These events were accompanied by increase in the sensitivity to external stimuli, convulsions, recumbency and death. Histopathological changes were neuronal necrosis, edema, liquefaction necrosis, neutrophilic leptomeningitis, perivascular cuff, focal hemorrhage, non-suppurative inflammation, multifocal gliosis and perivascular infiltration of polymorphonuclear and mononuclear cells. The characteristics and the extent of the injuries varied between strains of mice. Animals inoculated with the A4/72 strain showed histopathological lesions of greater severity when compared with those inoculated with the A9/92 strain. There was an increase in plasma concentrations of TNF-, IL-6, CCL2 and IFN-g in mice infected by EHV-1 in 2nd dpi. Plasma concentrations and the expression of mRNA for TNF-, IL-6 and CCL2 in the CNS of mice infected with EHV-1 at 3rd dpi were increased; however, there was no increase in plasma concentration or expression for the mRNA of IFN-g at 3rd dpi. It was evident that the EHV-1 strain A4/72 induces a more effective systemic immune response, whereas the A9/92 virus culminates in a more effective immune response in the CNS. The C57BL/6 and BALB/c mice showed higher levels of mRNA expression for TNF-, IL-6 and CCL2, compared to C3H/HeJ mice. The severity of clinical signs observed in infected mice can be correlated with the peak of these proinflammatory cytokines (TNF- and IL-6) and CCL2 chemokine, which are then produced after viral infection by resident glial cells and/or infiltrative cells in the CNS. These findings indicate that different strains of inbred mice are susceptible to infection neuropathogenic EHV-1 strains; the differences in the pattern of pathological changes show that they depend on the infected host, the EHV-1 strain and the immune response; and the suppression of interferon (IFN) type I suggested to be an escape mechanism for the EHV-1 against the immune system. The low expression of IL-6, TNF- and chemokine CCL2 in C3H/HeJ mice can be explained by a mutation in toll-like receptor 4 (TLR-4) gene existing in this mouse strain. Additionally, C3H/HeJ mice exhibited more severe histopathological lesions in the CNS as compared to BALB/c and C57BL/6. It is suggested that type I IFN and TLR-4 gene have important role in the pathogenesis of EHV-1 and viral agent proteins responsible for the suppression of IFN and the viral particles that are recognized by TLR-4 can be targets for the development of new approaches for the treatment of viral disease and the efficiency of immunogens.

Astrocyte intermediate filaments are important markers in olfactory bulb of bovine Herpesvirus type 5 natural infections

Astroglial cells are the most abundant cells in the mammalian central nervous system, yet our knowledge about their function in bovine Herpesvirus type 5 (BoHV-5) has been limited. The aim of this study was to detect by immunohistochemistry assay the reactive astrocytes for glial fibrilary acidic protein (GFAP) and vimentin (VIM), considered intermediate filaments of the cytoskeleton, localized in olfactory bulb from natural acute cases of BoHV-5 infection. All samples were submitted to virus isolation, real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) and in situ hybridization (ISH) technique to confirm the virus transcription and respective genome. Samples were classified into four groups according to the severity of histological lesions. Groups III and IV, which histological lesions were classified as alacia, gliosis, satellitosis, neuronophagia and neuronal necrosis, 35% (± 1.8-2.1) of the inflammatory mononuclear cells, corresponded to CD3 positive lymphocytes. In the same group, 35% (± 1.8) of astrocytes were described as reactive to GFAP and VIM proteins. An agreement of r = 1.0 (P<0.0001) was found between histological lesions, intermediate filaments expression, viral DNA and transcription and CD3 lymphocytes. However, samples with mild histological lesions, 10.8 to 14.2% of astrocytes were classified as reactive to GFAP and VIM filaments. Our findings suggest that GFAP and VIM reactive astrocytes, in primary site of virus replication, seems to play an important role in neurovirulence, in spite of many questions concerning the virus immunopathology remains unclear(AU)

Astrocyte intermediate filaments are important markers in olfactory bulb of bovine Herpesvirus type 5 natural infections

Astroglial cells are the most abundant cells in the mammalian central nervous system, yet our knowledge about their function in bovine Herpesvirus type 5 (BoHV-5) has been limited. The aim of this study was to detect by immunohistochemistry assay the reactive astrocytes for glial fibrilary acidic protein (GFAP) and vimentin (VIM), considered intermediate filaments of the cytoskeleton, localized in olfactory bulb from natural acute cases of BoHV-5 infection. All samples were submitted to virus isolation, real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) and in situ hybridization (ISH) technique to confirm the virus transcription and respective genome. Samples were classified into four groups according to the severity of histological lesions. Groups III and IV, which histological lesions were classified as alacia, gliosis, satellitosis, neuronophagia and neuronal necrosis, 35% (± 1.8-2.1) of the inflammatory mononuclear cells, corresponded to CD3 positive lymphocytes. In the same group, 35% (± 1.8) of astrocytes were described as reactive to GFAP and VIM proteins. An agreement of r = 1.0 (P<0.0001) was found between histological lesions, intermediate filaments expression, viral DNA and transcription and CD3 lymphocytes. However, samples with mild histological lesions, 10.8 to 14.2% of astrocytes were classified as reactive to GFAP and VIM filaments. Our findings suggest that GFAP and VIM reactive astrocytes, in primary site of virus replication, seems to play an important role in neurovirulence, in spite of many questions concerning the virus immunopathology remains unclear

The review of the methods to obtain non-neuronal cells to study glial influence on Amyotrophic Lateral Sclerosis pathophysiology at molecular level in vitro / Revisão dos métodos de obtenção de células não neuronais para o estudo da fisiopatologia da Esclerose Lateral Amiotrófica ao nível molecular in vitro

PURPOSE: Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a fatal neurodegenerative disease that displays a rapid evolution. Current treatments have failed to revert clinical symptoms because the mechanisms involved in the death of motoneuron are still unknown. Recent publications have put non-neuronal cells, particularly, astrocyte and microglia, in the scenario of pathophisiology of the disease. Animal models for ALS, particularly transgenic mice expressing the human SOD1 gene with a G93A mutation (hSOD1), are available and display the phenotype of the disease at cellular and clinical levels. However, it is a lack of detailed information regarding the methods to study the disease in vitro to better understand the contribution of non-neuronal cells in the onset and progression of the pathology. METHODS: Colonies of Swiss mice and transgenic mice expressing hSOD1 mutation as well as non-transgenic controls (wild-type) were amplified after a genotyping evaluation. Disease progression was followed behaviorally and mortality was registered. Highly purified primary cultures of astrocytes and microglia from mouse spinal cord were obtained. Cells were identified by means of GFAP and CD11B immunocytochemistry. The purity of astroglial and microglial cell cultures was also accompanied by means of Western blot and RT-PCR analyses employing a number of markers. RESULTS: The disease onset was about 105 days and the majority of transgenic mice displayed the disease symptoms by 125 days of age and reached the endpoint 20 days later. A substantial motor weakens was registered in the transgenic mice compared to wild-type at the end point. Immunocytochemical, biochemical and RT-PCR analyses demonstrated a highly purified primary cultures of spinal cord astrocytes and microglia. CONCLUSION: It is possible to achieve highly purified primary cultures of spinal cord astrocytes and microglia to be employed in cellular and molecular analyses of the influence of such non-neuronal cells in the pathophysiology of ALS.

OBJETIVO: A esclerose lateral amiotrófica (ELA) é uma doença neurodegenerativa fatal com evolução rápida. Os tratamentos atualmente disponíveis falham em reverter os sintomas porque os mecanismos envolvidos na morte do neurônio motor ainda não são conhecidos. Publicações recentes colocam as células não neuronais, particularmente o astrócito e a microglia, no cenário da fisiopatologia da doença. Modelos animais para a ELA, particularmente os camundongos transgênicos que expressam o gene da SOD1 humana (hSOD1) mutante estão disponíveis e mostram o fenótipo da doença ao nível celular e clínico. Entretanto, informações detalhadas são escassas sobre os métodos de estudo da doença in vitro para a melhor compreensão da participação das células não neuronais no início e na progressão da patologia. MÉTODOS: Colônias de camundongos Swiss e camundongos transgênicos que expressam a hSOD1 mutante assim como os controles não transgênicos (selvagem) foram amplificadas após avaliação genotípica. A progressão da doença foi acompanhada pelo comportamento e a mortalidade foi registrada. Culturas primárias altamente purificadas de astrócitos e microglia da medula espinal dos camundongos foram obtidas. As células foram identificadas pela immunocitoquímica da GFAP e CD11B. A pureza das culturas de astrócitos e microglia foi acompanhada pelas análises do Western blot e RT-PCR empregando-se marcadores específicos. RESULTADOS: Os primeiros sinais da doença ocorreram por volta dos 105 dias de vida e a maioria dos camundongos transgênicos já estava com a doença manifestada aos 125 dias de idade e alcançaram o estágio terminal aproximadamente 20 dias depois. Fraqueza substancial da força muscular foi registrada nos animais transgênicos comparados com os animais selvagens. Análises imuncitoquímica, bioquímica e pelo RT-PCR demonstraram culturas primárias altamente purificadas de astrócito e microglia da medula espinal dos camundongos. CONCLUSÃO: É possível obter culturas purificadas de astrócitos e microglia da medula espinal do camundongo a ser empregadas em análises celulares e moleculares da influência destas células não neuronais na fisiopatologia da ELA.