The dynamics of genome size and GC contents evolution in genus Nicotiana / A dinâmica do tamanho do genoma e a evolução dos conteúdos de GC no gênero Nicotiana

Hybridization and Polyploidization are most common of the phenomenon observed in plants, especially in the genus Nicotiana leading to the duplication of genome. Although genomic changes associated with these events has been studied at various levels but the genome size and GC content variation is less understood because of absence of sufficient genomic data. In this study the flow cytometry technique was used to uncover the genome size and GC contents of 46 Nicotiana species and we compared the genomic changes associated with the hybridization events along evolutionary time scale. The genome size among Nicotiana species varied between 3.28 pg and 11.88 pg whereas GC contents varied between 37.22% and 51.25%. The tetraploid species in genus Nicotiana including section Polydiclae, Repandae, Nicotiana, Rustica and Sauveolentes revealed both up and downsizing in their genome sizes when compared to the sum of genomes of their ancestral species. The genome sizes of three homoploid hybrids were found near their ancestral species. Loss of large genome sequence was observed in the evolutionary more aged species (>10 Myr) as compared to the recently evolved one’s (<0.2 Myr). The GC contents were found homogenous with a mean difference of 2.46% among the Nicotiana species. It is concluded that genome size change appeared in either direction whereas the GC contents were found more homogenous in genus Nicotiana.

A hibridização e a poliploidização são os fenômenos mais comuns observados em plantas, principalmente no gênero Nicotiana, levando à duplicação do genoma. Embora as mudanças genômicas associadas a esses eventos tenham sido estudadas em vários níveis, o tamanho do genoma e a variação do conteúdo de GC são menos compreendidos devido à ausência de dados genômicos suficientes. Neste estudo, a técnica de citometria de fluxo foi usada para descobrir o tamanho do genoma e o conteúdo de GC de 46 espécies de Nicotiana, e comparamos as mudanças genômicas associadas aos eventos de hibridização ao longo da escala de tempo evolutiva. O tamanho do genoma entre as espécies de Nicotiana variou entre 3,28 pg e 11,88 pg, enquanto os conteúdos de GC variaramentre 37,22% e 51,25%. As espécies tetraploides do gênero Nicotiana, incluindo as seções Polydiclae, Repandae, Nicotiana, Rustica e Sauveolentes, revelaram aumento e redução do tamanho do genoma quando comparados à soma dos genomas de suas espécies ancestrais. Os tamanhos do genoma de três híbridos homoploides foram encontrados perto de suas espécies ancestrais. A perda da grande sequência do genoma foi observada nas espécies evolutivas mais velhas (> 10 Myr) em comparação com as que evoluíram recentemente (< 0,2 Myr). Os teores de GC foram homogêneos com diferença média de 2,46% entre as espécies de Nicotiana. Conclui-se que a mudança no tamanho do genoma apareceu em ambas as direções, enquanto os conteúdos de GC foram encontrados mais homogêneos no gênero Nicotiana.

The dynamics of genome size and GC contents evolution in genus Nicotiana / A dinâmica do tamanho do genoma e a evolução dos conteúdos de GC no gênero Nicotiana

Hybridization and Polyploidization are most common of the phenomenon observed in plants, especially in the genus Nicotiana leading to the duplication of genome. Although genomic changes associated with these events has been studied at various levels but the genome size and GC content variation is less understood because of absence of sufficient genomic data. In this study the flow cytometry technique was used to uncover the genome size and GC contents of 46 Nicotiana species and we compared the genomic changes associated with the hybridization events along evolutionary time scale. The genome size among Nicotiana species varied between 3.28 pg and 11.88 pg whereas GC contents varied between 37.22% and 51.25%. The tetraploid species in genus Nicotiana including section Polydiclae, Repandae, Nicotiana, Rustica and Sauveolentes revealed both up and downsizing in their genome sizes when compared to the sum of genomes of their ancestral species. The genome sizes of three homoploid hybrids were found near their ancestral species. Loss of large genome sequence was observed in the evolutionary more aged species (>10 Myr) as compared to the recently evolved ones (<0.2 Myr). The GC contents were found homogenous with a mean difference of 2.46% among the Nicotiana species. It is concluded that genome size change appeared in either direction whereas the GC contents were found more homogenous in genus Nicotiana.(AU)

A hibridização e a poliploidização são os fenômenos mais comuns observados em plantas, principalmente no gênero Nicotiana, levando à duplicação do genoma. Embora as mudanças genômicas associadas a esses eventos tenham sido estudadas em vários níveis, o tamanho do genoma e a variação do conteúdo de GC são menos compreendidos devido à ausência de dados genômicos suficientes. Neste estudo, a técnica de citometria de fluxo foi usada para descobrir o tamanho do genoma e o conteúdo de GC de 46 espécies de Nicotiana, e comparamos as mudanças genômicas associadas aos eventos de hibridização ao longo da escala de tempo evolutiva. O tamanho do genoma entre as espécies de Nicotiana variou entre 3,28 pg e 11,88 pg, enquanto os conteúdos de GC variaramentre 37,22% e 51,25%. As espécies tetraploides do gênero Nicotiana, incluindo as seções Polydiclae, Repandae, Nicotiana, Rustica e Sauveolentes, revelaram aumento e redução do tamanho do genoma quando comparados à soma dos genomas de suas espécies ancestrais. Os tamanhos do genoma de três híbridos homoploides foram encontrados perto de suas espécies ancestrais. A perda da grande sequência do genoma foi observada nas espécies evolutivas mais velhas (> 10 Myr) em comparação com as que evoluíram recentemente (< 0,2 Myr). Os teores de GC foram homogêneos com diferença média de 2,46% entre as espécies de Nicotiana. Conclui-se que a mudança no tamanho do genoma apareceu em ambas as direções, enquanto os conteúdos de GC foram encontrados mais homogêneos no gênero Nicotiana.(AU)

The dynamics of genome size and GC contents evolution in genus Nicotiana

Abstract Hybridization and Polyploidization are most common of the phenomenon observed in plants, especially in the genus Nicotiana leading to the duplication of genome. Although genomic changes associated with these events has been studied at various levels but the genome size and GC content variation is less understood because of absence of sufficient genomic data. In this study the flow cytometry technique was used to uncover the genome size and GC contents of 46 Nicotiana species and we compared the genomic changes associated with the hybridization events along evolutionary time scale. The genome size among Nicotiana species varied between 3.28 pg and 11.88 pg whereas GC contents varied between 37.22% and 51.25%. The tetraploid species in genus Nicotiana including section Polydiclae, Repandae, Nicotiana, Rustica and Sauveolentes revealed both up and downsizing in their genome sizes when compared to the sum of genomes of their ancestral species. The genome sizes of three homoploid hybrids were found near their ancestral species. Loss of large genome sequence was observed in the evolutionary more aged species (>10 Myr) as compared to the recently evolved ones ( 0.2 Myr). The GC contents were found homogenous with a mean difference of 2.46% among the Nicotiana species. It is concluded that genome size change appeared in either direction whereas the GC contents were found more homogenous in genus Nicotiana.

Resumo A hibridização e a poliploidização são os fenômenos mais comuns observados em plantas, principalmente no gênero Nicotiana, levando à duplicação do genoma. Embora as mudanças genômicas associadas a esses eventos tenham sido estudadas em vários níveis, o tamanho do genoma e a variação do conteúdo de GC são menos compreendidos devido à ausência de dados genômicos suficientes. Neste estudo, a técnica de citometria de fluxo foi usada para descobrir o tamanho do genoma e o conteúdo de GC de 46 espécies de Nicotiana, e comparamos as mudanças genômicas associadas aos eventos de hibridização ao longo da escala de tempo evolutiva. O tamanho do genoma entre as espécies de Nicotiana variou entre 3,28 pg e 11,88 pg, enquanto os conteúdos de GC variaram entre 37,22% e 51,25%. As espécies tetraploides do gênero Nicotiana, incluindo as seções Polydiclae, Repandae, Nicotiana, Rustica e Sauveolentes, revelaram aumento e redução do tamanho do genoma quando comparados à soma dos genomas de suas espécies ancestrais. Os tamanhos do genoma de três híbridos homoploides foram encontrados perto de suas espécies ancestrais. A perda da grande sequência do genoma foi observada nas espécies evolutivas mais velhas (> 10 Myr) em comparação com as que evoluíram recentemente ( 0,2 Myr). Os teores de GC foram homogêneos com diferença média de 2,46% entre as espécies de Nicotiana. Conclui-se que a mudança no tamanho do genoma apareceu em ambas as direções, enquanto os conteúdos de GC foram encontrados mais homogêneos no gênero Nicotiana.

In vitro cytotoxicity of curcuminoids against head and neck cancer HNO97 cell line

Abstract Oral squamous cell carcinoma (OSCC) is a malignant tumour of Head and Neck Cancer (HNC). The recent therapeutic approaches used to treat cancer have adverse side effects. The natural agents exhibiting anticancer activities are generally considered to have a robust therapeutic potential. Curcuminoids, one of the major active compounds of the turmeric herb, are used as a therapeutic agent for several diseases including cancer. In this study, the cytotoxicity of curcuminoids was investigated against OSCC cell line HNO97. Our data showed that curcuminoids significantly inhibits the proliferation of HNO97 in a time and dose-dependent manner (IC50=35 M). Cell cycle analysis demonstrated that curcuminoids increased the percentage of G2/M phase cell populations in the treated groups. Treating HNO97 cells with curcuminoids led to cell shrinking and increased detached cells, which are the typical appearance of apoptotic cells. Moreover, flow cytometry analysis revealed that curcuminoids significantly induced apoptosis in a time-dependent manner. Furthermore, as a response to curcuminoids treatment, comet tails were formed in cell nuclei due to the induction of DNA damage. Curcuminoids treatment reduced the colony formation capacity of HNO97 cells and induced morphological changes. Overall, these findings demonstrate that curcuminoids can in vitro inhibit HNC proliferation and metastasis and induce apoptosis.

Resumo O carcinoma de células escamosas oral (OSCC) é um tumor maligno do câncer de cabeça e pescoço (HNC). As recentes abordagens terapêuticas usadas para tratar o câncer têm efeitos colaterais adversos. Os agentes naturais que exibem atividades anticâncer são geralmente considerados como tendo um potencial terapêutico robusto. Curcuminoides, um dos principais compostos ativos da erva cúrcuma, são usados como agente terapêutico para várias doenças, incluindo câncer. Neste estudo, a citotoxicidade dos curcuminoides foi investigada contra a linha de células OSCC HNO97. Nossos dados mostraram que os curcuminoides inibem significativamente a proliferação de HNO97 de forma dependente do tempo e da dose (IC50 = 35 M). A análise do ciclo celular demonstrou que os curcuminoides aumentaram a porcentagem de populações de células da fase G2 / M nos grupos tratados. O tratamento das células HNO97 com curcuminoides levou ao encolhimento celular e ao aumento das células destacadas, que são a aparência típica das células apoptóticas. Além disso, a análise de citometria de fluxo revelou que os curcuminoides induziram significativamente a apoptose de uma maneira dependente do tempo. Além disso, em resposta ao tratamento com curcuminoides, caudas de cometa foram formadas nos núcleos das células devido à indução de danos ao DNA. O tratamento com curcuminoides reduziu a capacidade de formação de colônias das células HNO97 e induziu alterações morfológicas. No geral, esses achados demonstram que os curcuminoides podem inibir in vitro a proliferação e metástase de HNC e induzir apoptose.

Efficiency of chemical preservatives used in raw milk samples for bacterial counts by flow cytometry

The objective of this study was to evaluate and compare two chemical preservatives in terms of their sample preservation capabilities, considering the individual bacterial count (IBC) and time and temperature variables. Samples were collected in expansion tanks in three commercial dairy farms located in the northwest of Rio Grande do Sul, characterized as G1: low IBC values, G2: average IBC values, and G3: high IBC values. The tanks were stored at three different temperatures (4, 10, and 25 °C) for 14 d. Samples supplemented with the preservative Azilat in G1 (lower IBC group) exhibited the best results at a temperature of 4 °C, whereas for G2 and G3, the results showed no statistically significant difference between temperatures 4 and 10 °C. The temperature 25 °C exhibited the worst results. For samples preserved with Azidiol, regardless of the studied group (G1, G2, and G3), the temperatures of 4 and 10 °C did not present a significant difference regarding the preservation of the samples, with the temperature of 25 °C exhibiting the worst results. Azilat was effective in keeping the samples conserved when they presented low IBC, being able to fluctuate with the increase in IBC and temperature variation. Azidiol was effective regardless of the initial IBC level.

Cooling of porcine semen in an extender supplemented with isoespintanol / Resfriamento de sêmen suíno em um diluente suplementado com isoespintanol

ABSTRACT: Spermatozoa experience oxidative, osmotic, chemical, and thermal stresses when cooled, which degrade the quality and fertilizing capacity of the cells. Adding antioxidants to the sperm extender mitigates these alterations. This study evaluated the effect of isoespintanol (ISO) on boar semen subjected to cooling. Fifteen ejaculates from five boars (Susscrofadomestica) were extended in Beltsville thawing solution (BTS) supplemented with 0 µM (control), 5 µM (ISO5), 10 µM (ISO10), 15 µM (ISO15), 20 µM (ISO20), 25 µM (ISO25), and 30 µM (ISO30) of ISO, which were then cooled for five days at 16 °C. Sperm kinetics, total motility (TM), and progressive motility (PM) were evaluated every 24 h using an IVOS computer-assisted sperm analysis (CASA) system. On day 1 and day 5 of cooling, a hypoosmotic test, spectrofluorometry, and flow cytometry were performed to evaluate the following: membrane functionality, measured as a function of hypoosmotic swelling (HOS); total antioxidant capacity (TAC); reactive oxygen species (ROS); and mitochondrial membrane potential (Δ¥M). Regression analysis and comparison of means using the Duncan test were performed. The ISO added had a slight impact on sperm motility, as evidenced by a reduction in TM at 24 h of cooling (but not prior) with the addition of 20 µM of ISO. Similarly, no effect of the ISO on the kinetics and functional integrity of the sperm membrane was observed at 96 h of cooling; however, the regression coefficients indicated that the ISO lowered the rate of decrease in sperm motility and the proportion of rapid spermatozoa relative to the concentration of ISO used. The ISO did not affect the TAC of the cooled semen; however, different concentrations of ISO lowered ROS production in the semen after 96 h of cooling. ISO also impacted the Δ¥M of the spermatozoa at 0 h of cooling, increasing the proportion of low Δ¥M cells and decreasing the proportion of high Δ¥M cells. In conclusion, ISO can reduce the loss of quality and oxidative stress occurring in boar semen during cooling and can modulate the mitochondrial activity of sperm.

RESUMO: Durante a refrigeração, os espermatozoides sofrem estresse oxidativo, osmótico, químico e térmico, que diminuem sua qualidade e afetam sua capacidade de fertilização. A adição de antioxidantes ao diluente espermático é uma alternativa para mitigar essas alterações. O objetivo desta pesquisa foi avaliar o efeito do isospintanol (ISO) na refrigeração do sêmen suíno. Quinze ejaculados de cinco varrascos (Sus scrofa domestica) foram diluídos em BTS suplementado com ISO a 0 (controle), 5 (ISO5), 10 (ISO10), 15 (ISO15), 20 (ISO20), 25 (ISO25) e 30 (ISO30) µM e foram refrigerados por cinco dias a 16 °C. A motilidade total (MT), motilidade progressiva (MP) e cinética dos espermatozóides foram avaliadas a cada 24 h com um sistema CASA IVOS. Nos dias um e cinco de refrigeração, foram avaliadas a funcionalidade da membrana, a capacidade antioxidante total (CAT), as espécies reativas de oxigênio (ROS) e o potencial de membrana mitocondrial (Δ¥M), através do teste hiposmótico (HOS), espectrofluorimetría e citometria de fluxo. Foram realizadas análises de regressão e comparação de médias, pelo teste de Duncan. A adição de ISO teve pouca influência na motilidade espermática, apresentando apenas redução na MT em 24 h de refrigeração, devido à adição de 20 µM. Da mesma forma, não foi observada influência de ISO na cinética e integridade funcional da membrana em 96 horas de refrigeração; porém, os coeficientes de regressão mostraram que ISO produziu menor taxa de diminuição da motilidade e proporção de espermatozoides rápidos dependendo da concentração utilizada. ISO não influenciou significativamente na CAT do sêmen refrigerado; entretanto, diferentes concentrações de ISO reduziram a produção de EROs a partir do sêmen após de 96 h de refrigeração. ISO também influenciou o Δ¥M dos espermatozóides em 0 h de refrigeração, com aumento das células de baixo Δ¥M e diminuição das células de alto Δ¥M. Em conclusão, o isospintanol pode reduzir a perda da qualidade e o estresse oxidativo do sêmen suíno durante a refrigeração e pode modular a atividade mitocondrial do esperma.

O que análises avançadas do sêmen podem contribuir de fato para a os resultados da IA em suínos? / What advanced semen analyzes can contribute to AI results in pigs?

O controle da qualidade seminal produzido por centrais e unidades de disseminação genética permite a maximização da produção de doses inseminantes por ejaculado, bem como organiza o acompanhamento da produtividade de cada macho. Este acompanhamento é crítico tanto quando o reprodutor jovem é introduzido na rotina de coleta de sêmen quanto na determinação do momento do descarte e reposição. Essencialmente, a avaliação do sêmen em suínos é a mesma há décadas, porém novas metodologias de análise individual da célula como a citometria de fluxo e de constituintes de tecidos e fluídos como a proteômica e metabolômica já estão trazendo avanços na andrologia animal. Na presente revisão, são abordados os aspectos técnicos, vantagens e limitações destas três análises avançadas aplicadas ao sêmen suíno, discutindo a sua implementação e impactos no manejo reprodutivo da espécie.(AU)

The quality control of the semen doses produced by artificial insemination centers and allows the maximization of the production of inseminating doses per ejaculate, as well as organizes the monitoring of the productivity of each male. This follow-up is critical when the young male is initiated in routine semen collection and in determining the moment of male replacement. Essentially, semen evaluation in pigs has been the same for decades, but new methodologies for individual cell analysis such as flow cytometry and tissue and fluid constituents such as proteomics and metabolomics are already bringing advances in animal andrology. In this review, the technical aspects, advantages, and limitations of these three advanced analyzes applied to swine semen are addressed, discussing their implementation and impacts on the reproductive management of the species.(AU)

The dynamics of genome size and GC contents evolution in genus Nicotiana / A dinâmica do tamanho do genoma e a evolução dos conteúdos de GC no gênero Nicotiana

Abstract Hybridization and Polyploidization are most common of the phenomenon observed in plants, especially in the genus Nicotiana leading to the duplication of genome. Although genomic changes associated with these events has been studied at various levels but the genome size and GC content variation is less understood because of absence of sufficient genomic data. In this study the flow cytometry technique was used to uncover the genome size and GC contents of 46 Nicotiana species and we compared the genomic changes associated with the hybridization events along evolutionary time scale. The genome size among Nicotiana species varied between 3.28 pg and 11.88 pg whereas GC contents varied between 37.22% and 51.25%. The tetraploid species in genus Nicotiana including section Polydiclae, Repandae, Nicotiana, Rustica and Sauveolentes revealed both up and downsizing in their genome sizes when compared to the sum of genomes of their ancestral species. The genome sizes of three homoploid hybrids were found near their ancestral species. Loss of large genome sequence was observed in the evolutionary more aged species (>10 Myr) as compared to the recently evolved one's (<0.2 Myr). The GC contents were found homogenous with a mean difference of 2.46% among the Nicotiana species. It is concluded that genome size change appeared in either direction whereas the GC contents were found more homogenous in genus Nicotiana.

Resumo A hibridização e a poliploidização são os fenômenos mais comuns observados em plantas, principalmente no gênero Nicotiana, levando à duplicação do genoma. Embora as mudanças genômicas associadas a esses eventos tenham sido estudadas em vários níveis, o tamanho do genoma e a variação do conteúdo de GC são menos compreendidos devido à ausência de dados genômicos suficientes. Neste estudo, a técnica de citometria de fluxo foi usada para descobrir o tamanho do genoma e o conteúdo de GC de 46 espécies de Nicotiana, e comparamos as mudanças genômicas associadas aos eventos de hibridização ao longo da escala de tempo evolutiva. O tamanho do genoma entre as espécies de Nicotiana variou entre 3,28 pg e 11,88 pg, enquanto os conteúdos de GC variaram entre 37,22% e 51,25%. As espécies tetraploides do gênero Nicotiana, incluindo as seções Polydiclae, Repandae, Nicotiana, Rustica e Sauveolentes, revelaram aumento e redução do tamanho do genoma quando comparados à soma dos genomas de suas espécies ancestrais. Os tamanhos do genoma de três híbridos homoploides foram encontrados perto de suas espécies ancestrais. A perda da grande sequência do genoma foi observada nas espécies evolutivas mais velhas (> 10 Myr) em comparação com as que evoluíram recentemente (< 0,2 Myr). Os teores de GC foram homogêneos com diferença média de 2,46% entre as espécies de Nicotiana. Conclui-se que a mudança no tamanho do genoma apareceu em ambas as direções, enquanto os conteúdos de GC foram encontrados mais homogêneos no gênero Nicotiana.

Addition of orange, pineapple and beet juices as extenders for cryopreservation of ram semen / Adição de sucos de laranja, abacaxi e beterraba em diluidor para criopreservação de sêmen de carneiros

Searching for improvements in semen cryopreservation, natural substances are commonly studied focusing to improve the sperm quality. The aim of this study were evaluated the effect of adding orange, pineapple, and beet juices in different concentrations and combinations to the ram semen cryopreservation extender. Five ejaculates from five adult rams were used. The semen pool was diluted in egg yolk-based extender and mixed with the following 15 treatments (at a final concentration of 400.106 sptz/mL): orange 10% (O10) and 15% (O15); pineapple 10% (P10) and 15% (P15); beet 10% (B10) and 15% (B15); pineapple + orange 10% (PO10) and 15% (PO15); pineapple + beet 10% (PB10) and 15% (PB15); beet + orange 10% (BO10) and 15% (BO15); pineapple + beet + orange 10% (PBO10) and 15% (PBO15); and the control group (CON). Post-thaw in 0.25 mL straws semen quality analysis of cryopreserved semen was performed by CASA and flow cytometry. Analysis of variance (PROC GLM) was carried out and the averages were compared using the SNK test. Pearson's correlation test was also performed. No effect was noted in the addition of juices to the semen extender prior to cryopreservation. Post-thawed, although, statistically similar to the control group, the total motility of the B10 group reached acceptable standards of total motility. In addition, B10 group showed the highest values (p< 0.05) of progressive motility than control group or other treatments. The addition of 10% beet juice to the ram semen extender can improve the cryopreservation of sperm motility.

Em busca de melhorias na criopreservação do sêmen, substâncias naturais são comumente estudadas com o objetivo de melhorar a qualidade do sêmen. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da adição de sucos de laranja, abacaxi e beterraba em diferentes concentrações e combinações ao diluidor de criopreservação de sêmen ovino. Foram utilizados cinco ejaculados de cinco carneiros adultos. O pool de sêmen foi diluído em diluente à base de gema de ovo e misturado com os seguintes 15 tratamentos (na concentração final de 400x106 sptz/ml): laranja 10% (O10) e 15% (O15); abacaxi 10% (P10) e 15% (P15); beterraba 10% (B10) e 15% (B15); abacaxi + laranja 10% (PO10) e 15% (PO15); abacaxi + beterraba 10% (PB10) e 15% (PB15); beterraba + laranja 10% (BO10) e 15% (BO15); abacaxi + beterraba + laranja 10% (PBO10) e 15% (PBO15); e o grupo controle (CON). Pós-descongelação em palhetas de 0,25 ml a análise da qualidade do sêmen criopreservado foi realizada pelo CASA e citometria de fluxo. A análise de variância foi realizada e as médias comparadas pelo teste SNK. O teste de correlação de Pearson também foi realizado. Nenhum efeito foi observado na adição de sucos ao diluidor de sêmen antes da criopreservação. Após o descongelamento, embora estatisticamente semelhante ao grupo controle, a motilidade total do grupo B10 atingiu padrões aceitáveis de motilidade total. Além disso, o grupo B10 apresentou os maiores valores (p<0,05) de motilidade progressiva que o grupo controle ou os outros tratamentos. A adição de 10% de suco de beterraba ao diluente de sêmen ovino pode melhorar a criopreservação da motilidade espermática.

In vitro cytotoxicity of curcuminoids against head and neck cancer HNO97 cell line / Citotoxicidade in vitro de curcuminoides contra a linhagem de células HNO97 de câncer de cabeça e pescoço

Oral squamous cell carcinoma (OSCC) is a malignant tumour of Head and Neck Cancer (HNC). The recent therapeutic approaches used to treat cancer have adverse side effects. The natural agents exhibiting anticancer activities are generally considered to have a robust therapeutic potential. Curcuminoids, one of the major active compounds of the turmeric herb, are used as a therapeutic agent for several diseases including cancer. In this study, the cytotoxicity of curcuminoids was investigated against OSCC cell line HNO97. Our data showed that curcuminoids significantly inhibits the proliferation of HNO97 in a time and dose-dependent manner (IC50=35 μM). Cell cycle analysis demonstrated that curcuminoids increased the percentage of G2/M phase cell populations in the treated groups. Treating HNO97 cells with curcuminoids led to cell shrinking and increased detached cells, which are the typical appearance of apoptotic cells. Moreover, flow cytometry analysis revealed that curcuminoids significantly induced apoptosis in a time-dependent manner. Furthermore, as a response to curcuminoids treatment, comet tails were formed in cell nuclei due to the induction of DNA damage. Curcuminoids treatment reduced the colony formation capacity of HNO97 cells and induced morphological changes. Overall, these findings demonstrate that curcuminoids can in vitro inhibit HNC proliferation and metastasis and induce apoptosis.

O carcinoma de células escamosas oral (OSCC) é um tumor maligno do câncer de cabeça e pescoço (HNC). As recentes abordagens terapêuticas usadas para tratar o câncer têm efeitos colaterais adversos. Os agentes naturais que exibem atividades anticâncer são geralmente considerados como tendo um potencial terapêutico robusto. Curcuminoides, um dos principais compostos ativos da erva cúrcuma, são usados como agente terapêutico para várias doenças, incluindo câncer. Neste estudo, a citotoxicidade dos curcuminoides foi investigada contra a linha de células OSCC HNO97. Nossos dados mostraram que os curcuminoides inibem significativamente a proliferação de HNO97 de forma dependente do tempo e da dose (IC50 = 35 μM). A análise do ciclo celular demonstrou que os curcuminoides aumentaram a porcentagem de populações de células da fase G2 / M nos grupos tratados. O tratamento das células HNO97 com curcuminoides levou ao encolhimento celular e ao aumento das células destacadas, que são a aparência típica das células apoptóticas. Além disso, a análise de citometria de fluxo revelou que os curcuminoides induziram significativamente a apoptose de uma maneira dependente do tempo. Além disso, em resposta ao tratamento com curcuminoides, caudas de cometa foram formadas nos núcleos das células devido à indução de danos ao DNA. O tratamento com curcuminoides reduziu a capacidade de formação de colônias das células HNO97 e induziu alterações morfológicas. No geral, esses achados demonstram que os curcuminoides podem inibir in vitro a proliferação e metástase de HNC e induzir apoptose.

In vitro cytotoxicity of curcuminoids against head and neck cancer HNO97 cell line / Citotoxicidade in vitro de curcuminoides contra a linhagem de células HNO97 de câncer de cabeça e pescoço

Oral squamous cell carcinoma (OSCC) is a malignant tumour of Head and Neck Cancer (HNC). The recent therapeutic approaches used to treat cancer have adverse side effects. The natural agents exhibiting anticancer activities are generally considered to have a robust therapeutic potential. Curcuminoids, one of the major active compounds of the turmeric herb, are used as a therapeutic agent for several diseases including cancer. In this study, the cytotoxicity of curcuminoids was investigated against OSCC cell line HNO97. Our data showed that curcuminoids significantly inhibits the proliferation of HNO97 in a time and dose-dependent manner (IC50=35 μM). Cell cycle analysis demonstrated that curcuminoids increased the percentage of G2/M phase cell populations in the treated groups. Treating HNO97 cells with curcuminoids led to cell shrinking and increased detached cells, which are the typical appearance of apoptotic cells. Moreover, flow cytometry analysis revealed that curcuminoids significantly induced apoptosis in a time-dependent manner. Furthermore, as a response to curcuminoids treatment, comet tails were formed in cell nuclei due to the induction of DNA damage. Curcuminoids treatment reduced the colony formation capacity of HNO97 cells and induced morphological changes. Overall, these findings demonstrate that curcuminoids can in vitro inhibit HNC proliferation and metastasis and induce apoptosis.(AU)

O carcinoma de células escamosas oral (OSCC) é um tumor maligno do câncer de cabeça e pescoço (HNC). As recentes abordagens terapêuticas usadas para tratar o câncer têm efeitos colaterais adversos. Os agentes naturais que exibem atividades anticâncer são geralmente considerados como tendo um potencial terapêutico robusto. Curcuminoides, um dos principais compostos ativos da erva cúrcuma, são usados como agente terapêutico para várias doenças, incluindo câncer. Neste estudo, a citotoxicidade dos curcuminoides foi investigada contra a linha de células OSCC HNO97. Nossos dados mostraram que os curcuminoides inibem significativamente a proliferação de HNO97 de forma dependente do tempo e da dose (IC50 = 35 μM). A análise do ciclo celular demonstrou que os curcuminoides aumentaram a porcentagem de populações de células da fase G2 / M nos grupos tratados. O tratamento das células HNO97 com curcuminoides levou ao encolhimento celular e ao aumento das células destacadas, que são a aparência típica das células apoptóticas. Além disso, a análise de citometria de fluxo revelou que os curcuminoides induziram significativamente a apoptose de uma maneira dependente do tempo. Além disso, em resposta ao tratamento com curcuminoides, caudas de cometa foram formadas nos núcleos das células devido à indução de danos ao DNA. O tratamento com curcuminoides reduziu a capacidade de formação de colônias das células HNO97 e induziu alterações morfológicas. No geral, esses achados demonstram que os curcuminoides podem inibir in vitro a proliferação e metástase de HNC e induzir apoptose.(AU)

CD4+ and CD8+ T lymphocyte counts and ratio in cats with chronic gingivostomatitis and naturally infected with feline immunodeficiency virus: a preliminary study / Razão e contagem de linfócitos T CD4+ e linfócitos T CD8+ em gatos com gengivoestomatite crônica e infectados naturalmente pelo vírus da imunodeficiência felina: estudo preliminar

This study aimed to evaluate the CD4+ and CD8+ T lymphocytes counts and CD4+: CD8+ ratio in a colony of cats with chronic gingivostomatitis (CGS). We used forty domestic short-haired cats inhabiting the same colony. Ten cats with CGS were immunodeficiency virus-positive (group IV), and ten with CGS were immunodeficiency virus-negative (group III). As a control, twenty cats without CGS were used: ten cats were immunodeficiency virus-positive (group II) and ten cats were immunodeficiency virus-negative (group I). We employed flow cytometry to count CD4+ and CD8+ T lymphocytes. In cats infected with the immunodeficiency virus, the presence of CD4+ lymphocytes were lower both for animals with and without CGS. Conversely, not immunodeficiency virus-infected cats with CGS had a higher amount of CD4+ when compared to seronegative animals without CGS. The counts of CD8+ T lymphocytes showed no significant difference among cats with CGS, whether infected with immunodeficiency virus or not. The CD4+: CD8+ ratio was only different for group III, which was higher than any other group. No difference was observed for total lymphocyte number and CD8+ among groups. By contrast, mean CD4+ levels were different, with cats from groups III and IV showing higher levels than those from groups I and II. The flow cytometry could be a useful tool for the diagnosis and prognosis of cats with CGS infected by the immunodeficiency virus.

Este estudo teve como objetivo avaliar a contagem e a razão de linfócitos T CD4+ e CD8+ em uma colônia de gatos com gengivoestomatite crônica (CGS). Foram analisados quarenta gatos domésticos que habitavam a mesma colônia. Dez gatos com CGS foram positivos para o vírus da imunodeficiência (grupo IV), e dez com CGS foram negativos para o vírus da imunodeficiência (grupo III). Como controle, vinte gatos sem CGS foram usados: dez gatos foram positivos para o vírus da imunodeficiência (grupo II) e dez gatos foram negativos para o vírus da imunodeficiência (grupo I). Empregou-se a citometria de fluxo para contagem de linfócitos T CD4+ e CD8+. Nos gatos infectados pelo vírus da imunodeficiência, a presença de linfócitos CD4+ foi menor tanto para os animais com e sem CGS. Por outro lado, gatos não infectados e com CGS apresentaram maior quantidade de linfócitos CD4+ quando comparados a animais soronegativos sem CGS. A contagem de linfócito T CD8+ não mostrou diferença significativa entre gatos com CGS, infectados ou não com o vírus da imunodeficiência. A razão CD4+:CD8+ foi diferente apenas para o grupo III, que foi maior do que qualquer outro grupo. Não foi observada diferença para o número total de linfócitos e CD8+ entre os grupos. Em contraste, os níveis médios de CD4+ foram diferentes, com os gatos dos grupos III e IV apresentando níveis mais elevados do que os dos grupos I e II. A citometria de fluxo pode ser uma ferramenta útil para o diagnóstico e prognóstico de gatos com CGS infectados pelo vírus da imunodeficiência.

Citometria de Fluxo em andrologia: da pesquisa básica para a rotina clínica / Flow citometry in andrology: from basic research to clinical routine

Os primeiros estudos de espermatozoides com citometria de fluxo com espermatozoides iniciaram no final da década de 1970. Com os avanços tecnológicos, hoje contamos com equipamentos com alta sensibilidade e eficiência que, em conjunto com amplo catálogo de sondas fluorescentes, podemos mensurar com alta precisão características celulares. Como exemplo, destacam-se dano em membrana plasmática, atividade mitocondrial, produção de espécies reativas de oxigênio, dano ao DNA espermático e muito mais. Na presente revisão, as potencialidades e limitação para a implementação da citometria de fluxo na análise seminal de espécies domésticas são exploradas e comentadas.

The first flow cytometry studies with spermatozoa were published in the late 1970s. With the technological advances in the following years, today we have equipments with high sensitivity and efficiency that, together with a large number of commercially available fluorescent probes, allow us to measure different cell characteristics with high accuracy. Some of the most evaluated characteristics are plasma membrane damage, mitochondrial activity, production of reactive oxygen species, sperm DNA damage, and much more. In this review, the potentials and limitations for the implementation of flow cytometry in the seminal analysis of domestic species are explored and commented.

A comparative evaluation of methods for estimating the colostrum quality in sows / Avaliação comparativa de métodos para estimar a qualidade do colostro em porcas

Colostrum is the main source of immunoglobulins (Ig) for neonate piglets and plays a crucial role within the health and growth of the piglet. Currently in pig farming, there are still no widespread practical methods for measuring the Ig concentration in colostrum at herd level. We evaluated sows' colostrum IgG concentration using an optical and a digital Brix refractometer and their performance was correlated to an IgG ELISA test, and flow cytometry. Colostrum concentrations of IgG and IgA averaged 74.05 ± 21.37mg/mL and 20.2 ± 5.32mg/mL respectively. The mean value of the Brix percentages for optical refractometer was 26.32%, and for digital was 28.32%. The Brix refractometer measurements of colostrum samples presented high correlation for IgG content analyzed by ELISA (Optical = 0.74, Digital = 0.87; P <0.001). Considering the immunophenotyping, the values for IgG and IgA lymphoblasts indicated a highly significant relationship to ELISA (IgG=0.77, IgA=0.84; P<0.001). The Brix refractometer can be considered a useful tool to be included in a colostrum monitoring program to improve potentially neonatal health. In addition, we demonstrated that flow cytometry can be an important tool to analyze and characterize the immunological potential of sow colostrum.(AU)

O colostro é a principal fonte de imunoglobulinas (Ig) para leitões recém-nascidos e desempenha um papel crucial na saúde e no crescimento dos leitões. Atualmente, na suinocultura, ainda não existem métodos amplamente utilizados na prática de produção para medir a concentração de imunoglobulinas no colostro suíno. Avaliou-se a concentração de IgG no colostro de porcas usando refratômetros Brix óptico e digital, e o desempenho foi comparado com ELISA e citometria de fluxo. As concentrações de IgG e IgA no colostro foram 74,05 ± 21,37mg/mL e 20,2 ± 5,32mg/mL, respectivamente. A percentagem de Brix média das amostras de colostro para o refratômetro óptico foi 26,32%, e para o digital foi 28,32%. As medições dos refratômetros de Brix apresentaram elevada correlação com a concentrações de IgG medidas por ELISA (óptico=0,74, digital=0,87; P<0,001). Considerando a imunofenotipagem, os valores dos linfoblastos IgG e IgA apresentaram alta correlação com o ELISA (IgG=0,77, IgA=0,84; P<0,001). O refratômetro Brix pode ser considerado uma ferramenta útil para ser incluída em um programa de monitoramento de colostro para melhorar a saúde neonatal. Além disso, foi demonstrado que a citometria de fluxo pode ser uma ferramenta importante para analisar e caracterizar o potencial imunológico do colostro de porcas.(AU)

Cytometric blood phenotyping in free-living white-eyed parakeet (Psittacara leucophthalmus)

ABSTRACT: This study aimed at performing cytometric phenotyping of the blood samples from free-living, young white-eyed parakeets (Psittacara leucophthalmus), stained with 3,3-dihexyloxacarbocyanine [DiOC6(3)]. DiOC6(3)-stained whole blood samples from 19 free-living, young white-eyed parakeets were analyzed by flow cytometry and cell types were distinguished by their typical fluorescence in blue laser channel (FL-1) and SSC (side scatter). It was possible to differentiate erythrocytes (58.3±13.6) from leukocytes (32.4±13.1) and some of the leucocyte subpopulations: lymphocytes/thrombocytes (29.7±7.7), monocytes (30.6±8.5), and granulocytes (5.9-26). However, lymphocytes and thrombocytes could not be sorted in the plots. Our study determined that the predominant population in white-eyed parakeet (P. leucophthalmus) was lymphocytes, thrombocytes, and monocytes in the leucocytes gates in comparison to the granulocyte population. The cytometry method and use of DiOC6(3) stain was available for parakeets blood samples and can be studied and applied to other species of parrots.

RESUMO: Este estudo teve como objetivo realizar a fenotipagem citométrica com 3,3-di-hexiloxacarbocianina [DiOC6 (3)] de amostras de sangue de maritacas jovens de vida-livre (Psittacara leucophthalmus). As amostras de sangue total, coradas com DiOC6(3) de 19 maritacas de vida livre, foram analisadas por citometria de fluxo e os tipos de células foram distinguidos por sua fluorescência típica no canal laser azul (FL-1) e SSC (dispersão lateral). Foi possível diferenciar eritrócitos (58,3±13,6) de leucócitos (32,4±13,1) e algumas subpopulações de leucócitos: linfócitos/trombócitos (29,7±7,7), monócitos (30,6±8,5) e granulócitos (5,9-26), entretanto, linfócitos e trombócitos não puderam ser diferenciados em duas populações distintas. Nosso estudo determinou que a população predominante P. leucophthalmus foi mononuclear agranulocítica em comparação com a taxa de aquisição da população granulocítica. A metodologia de citometria de fluxo com uso da coloração de DiOC6(3) foi aplicável a amostras sanguíneas das maritacas e pode ser estudado e aplicado para outras espécies de psitacídeos.

Cytometric blood phenotyping in free-living white-eyed parakeet (Psittacara leucophthalmus) / Fenotipagem citométrica do sangue de maritacas jovens de vida-livre (Psittacara leucophthalmus)

This study aimed at performing cytometric phenotyping of the blood samples from free-living, young white-eyed parakeets (Psittacara leucophthalmus), stained with 3,3-dihexyloxacarbocyanine [DiOC6(3)]. DiOC6(3)-stained whole blood samples from 19 free-living, young white-eyed parakeets were analyzed by flow cytometry and cell types were distinguished by their typical fluorescence in blue laser channel (FL-1) and SSC (side scatter). It was possible to differentiate erythrocytes (58.3±13.6) from leukocytes (32.4±13.1) and some of the leucocyte subpopulations: lymphocytes/thrombocytes (29.7±7.7), monocytes (30.6±8.5), and granulocytes (5.9-26). However, lymphocytes and thrombocytes could not be sorted in the plots. Our study determined that the predominant population in white-eyed parakeet (P. leucophthalmus) was lymphocytes, thrombocytes, and monocytes in the leucocytes gates in comparison to the granulocyte population. The cytometry method and use of DiOC6(3) stain was available for parakeets blood samples and can be studied and applied to other species of parrots.(AU)

Este estudo teve como objetivo realizar a fenotipagem citométrica com 3,3-di-hexiloxacarbocianina [DiOC6 (3)] de amostras de sangue de maritacas jovens de vida-livre (Psittacara leucophthalmus). As amostras de sangue total, coradas com DiOC6(3) de 19 maritacas de vida livre, foram analisadas por citometria de fluxo e os tipos de células foram distinguidos por sua fluorescência típica no canal laser azul (FL-1) e SSC (dispersão lateral). Foi possível diferenciar eritrócitos (58,3±13,6) de leucócitos (32,4±13,1) e algumas subpopulações de leucócitos: linfócitos/trombócitos (29,7±7,7), monócitos (30,6±8,5) e granulócitos (5,9-26), entretanto, linfócitos e trombócitos não puderam ser diferenciados em duas populações distintas. Nosso estudo determinou que a população predominante P. leucophthalmus foi mononuclear agranulocítica em comparação com a taxa de aquisição da população granulocítica. A metodologia de citometria de fluxo com uso da coloração de DiOC6(3) foi aplicável a amostras sanguíneas das maritacas e pode ser estudado e aplicado para outras espécies de psitacídeos.(AU)

Cytometric blood phenotyping in free-living white-eyed parakeet (Psittacara leucophthalmus) / Fenotipagem citométrica do sangue de maritacas jovens de vida-livre (Psittacara leucophthalmus)

This study aimed at performing cytometric phenotyping of the blood samples from free-living, young white-eyed parakeets (Psittacara leucophthalmus), stained with 3,3-dihexyloxacarbocyanine [DiOC6(3)]. DiOC6(3)-stained whole blood samples from 19 free-living, young white-eyed parakeets were analyzed by flow cytometry and cell types were distinguished by their typical fluorescence in blue laser channel (FL-1) and SSC (side scatter). It was possible to differentiate erythrocytes (58.3±13.6) from leukocytes (32.4±13.1) and some of the leucocyte subpopulations: lymphocytes/thrombocytes (29.7±7.7), monocytes (30.6±8.5), and granulocytes (5.9-26). However, lymphocytes and thrombocytes could not be sorted in the plots. Our study determined that the predominant population in white-eyed parakeet (P. leucophthalmus) was lymphocytes, thrombocytes, and monocytes in the leucocytes gates in comparison to the granulocyte population. The cytometry method and use of DiOC6(3) stain was available for parakeets blood samples and can be studied and applied to other species of parrots.(AU)

Este estudo teve como objetivo realizar a fenotipagem citométrica com 3,3-di-hexiloxacarbocianina [DiOC6 (3)] de amostras de sangue de maritacas jovens de vida-livre (Psittacara leucophthalmus). As amostras de sangue total, coradas com DiOC6(3) de 19 maritacas de vida livre, foram analisadas por citometria de fluxo e os tipos de células foram distinguidos por sua fluorescência típica no canal laser azul (FL-1) e SSC (dispersão lateral). Foi possível diferenciar eritrócitos (58,3±13,6) de leucócitos (32,4±13,1) e algumas subpopulações de leucócitos: linfócitos/trombócitos (29,7±7,7), monócitos (30,6±8,5) e granulócitos (5,9-26), entretanto, linfócitos e trombócitos não puderam ser diferenciados em duas populações distintas. Nosso estudo determinou que a população predominante P. leucophthalmus foi mononuclear agranulocítica em comparação com a taxa de aquisição da população granulocítica. A metodologia de citometria de fluxo com uso da coloração de DiOC6(3) foi aplicável a amostras sanguíneas das maritacas e pode ser estudado e aplicado para outras espécies de psitacídeos.(AU)

Melittin-induced metabolic changes on the Madin-Darby Bovine Kidney cell line / [Mudanças metabólicas induzidas por melitina em células da linhagem Madin-Darby Bovine Kidney]

In this study, the toxic effects of melittin on Madin-Darby Bovine Kidney cells (MDBK) were analyzed with respect to mitochondrial functionality by reduction of MTT and flow cytometry, apoptosis potential, necrosis, oxygen reactive species (ROS) production, lipid peroxidation, and DNA fragmentation using flow cytometry and cell membrane destabilization by confocal microscopy. The toxicity presented dose-dependent characteristics and mitochondrial activity was inhibited by up to 78.24 ±3.59% (P<0.01, n = 6) in MDBK cells exposed to melittin (10µg/mL). Flow cytometry analysis revealed that melittin at 2µg/mL had the highest necrosis rate (P<0.05) for the cells. The lipoperoxidation of the membranes was also higher at 2µg/mL of melittin (P<0.05), which was further confirmed by the microphotographs obtained by confocal microscopy. The highest ROS production occurred when the cells were exposed to 2.5µg/mL melittin (P<0.05), and this concentration also increased DNA fragmentation (P<0.05). There was a significative and positive correlation between the lipoperoxidation of membranes with ROS (R=0.4158), mitochondrial functionality (R=0.4149), and apoptosis (R=0.4978). Thus, the oxidative stress generated by melittin culminates in the elevation of intracellular ROS that initiates a cascade of toxic events in MDBK cells.(AU)

Neste estudo, os efeitos tóxicos da melitina em células Madin-Darby Bovine Kidney (MDBK) foram analisados quanto à funcionalidade mitocondrial, por redução de MTT e citometria de fluxo, potencial de apoptose, necrose, produção de espécies reativas de oxigênio (ROS), peroxidação lipídica e fragmentação de DNA, utilizando-se citometria de fluxo e desestabilização da membrana celular, por microscopia confocal. A toxicidade apresentou características dose-dependentes e a atividade mitocondrial foi inibida até 78,24±3,59% (P<0,01, n = 6) em células MDBK expostas à melitina (10µg/mL). Análises por citometria de fluxo revelaram que a melitina a 2µg/mL apresentou o maior índice necrótico celular (P<0,05). A maior lipoperoxidação de membranas também foi na concentração de 2µg/mL de melitina (P<0,05), o que foi posteriormente confirmado por microscopia confocal. A maior produção de ROS aconteceu quando as células foram expostas a 2,5µg/mL de melitina (P<0,05), e essa concentração também aumentou a fragmentação de DNA (P<0,05). Houve uma significativa correlação positiva entre a lipoperoxidação de membranas e a produção de ROS (R=0,4158), funcionalidade mitocondrial (R=0,4149) e apoptose (R=0,4978). Portanto, o estresse oxidativo gerado pela melitina culminou na elevação de ROS intracelular, que inicia uma cascata de eventos tóxicos nas células MDBK.(AU)

The role of Rho-associated kinase inhibitor, Y-27632 on primary culture of ovine spermatogonial stem cells

The access to sufficient numbers of spermatogonial stem cells (SSCs) is a prerequisite for the study of their regulation and further biomanipulation. Rho kinase (ROCK) belongs to a family of serine/threonine kinases and involves in a wide range of fundamental cellular functions. The aim of the present study was to study the effect of ROCK inhibitor, Y-27632 (0.1-40 µM), during the primary culture of ovine SSCs. SSCs were collected from 3-5-month-olds lamb testes. The viability of SSCs, the apoptosis assay of SSCs, the intracellular reactive oxygen species (ROS) analysis, and the SSCs markers and apoptosis-related gene expressions were detected by MTT reduction assay, Annexin V–FITC/ Propidium Iodide (PI) dual staining, flow cytometry and real-time-PCR studies, respectively. Morphological analyses indicated that the 5-10 µM Y-27632 had an optimal effect on the number of presumptive SSCs colonies and the area covered by them after a 10 days culture. The cell viability, apoptosis and necrosis of SSCs after 10 days culture were not affected in comparison with the control group, and the 20 µM of Y-27632 resulted in significantly decreased cell viability (P<0.05) and an increased necrosis of cells. On day 10 after culture, the expression of P53 was decreased with an increase from 0 to 10 µM in the Y-27632 dose. In the 20 µM Y-27632 group, the expressions of P53 and Bax were higher and the Bcl-2 was lower than other groups and these values were significantly different from 5 and 10 µM Y-27632 groups (P<0.05). The level of intracellular ROS was decreased with an increase in the Y-27632 dose from 5 to 20 µM in comparison with the control group. In conclusion, the present study demonstrated that Y-27632 at a concentration of 5-10 µM provided optimal culture conditions for the primary culture of ovine SSCs.(AU)

Effect of flunixin or ketoprofen in caudectomy by elastration in lambs: pain and neutrophil function

ABSTRACT: Painful procedures can affect the function of innate immune cells, such as neutrophils and macrophages, increasing the risk of infectious diseases. The present work aimed to verify if the analgesics flunixin meglumine or ketoprofen can attenuate the pain/discomfort of newborn lambs submitted by elastration tail docking and thereby avoid the impairment of blood granulocytes function. Twenty-one neonate lambs were divided into three treatments: the control group (n=7), not subjected to caudectomy; the flunixin group (n=7), subjected to caudectomy under local anesthesia and analgesia with two doses of flunixin meglumine; and the ketoprofen group (n=7), subjected to caudectomy under local anesthesia and two doses of ketoprofen. Pain indicators were observed by pain posture score (PS), the number of vocalizations (V), frequency of the movement of the ears (EF), and respiratory rates (RR), observed by a 10 minutes videos for each time points: -15min, 6h, 48h, and 144h. At the same time points, the reactive oxygen species (ROS) production and phagocytosis of blood granulocytes were measured by flow cytometry. At 6h after caudectomy, there was a pain indicator increase (RR, V, and PS), a blood granulocyte percentage increase, and a granulocytes phagocytosis reduction for both groups. At 48h, the ketoprofen group spend more time in pain posture and, at 144h, they exhibited a ROS production granulocyte reduction without signs of pain. We conclude the flunixin meglumine and ketoprofen did not prevent the acute pain/discomfort caused by caudectomy, because the groups showed a pain behavior and impaired of the innate immune response however, the flunixin meglumine was effective in controlling the chronic pain and their effects on blood granulocytes function in compare ketoprofen.

RESUMO: Procedimentos dolorosos podem afetar a função das células imunes inatas como neutrófilos e macrófagos, aumentando o risco de ocorrer doenças infeciosas. Desta maneira, o presente trabalho pretendeu verificar se os analgésicos flunixin meglumine ou cetoprofeno conseguem atenuar a dor/desconforto de cordeiros neonatos submetidos a caudectomia por elastração, evitando assim o comprometimento da função dos granulócitos sanguíneos. Para tanto 21 cordeiras foram aleatoriamente divididas em três tratamentos: grupo controle (n=7) não submetido a caudectomia, grupo flunixin (n=7) submetido a caudectomia precedida por anestesia local e duas doses de flunixin meglumine, e cetoprofeno (n=7) submetido a caudectomia precedida por anestesia local e duas doses de cetoprofeno. Mensurou-se os indicadores de dor/desconforto após caudectomia por observações de escore de postura de dor (EP), número de vocalizações (V), frequência de movimentar as orelhas (FO) e frequência respiratória (FR), observados em vídeos de 10 minutos nos momentos -15 min e 6, 48 e 144h. Nos mesmos momentos, avaliou-se a as funções de produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) e de fagocitose por granulócitos sanguineos em citometria de fluxo. Notou-se aumento dos indicadores de dor (FR, de V e de EP), da porcentagem dos granulócitos sanguíneos e redução da eficiência de fagocitose em ambos os grupos as 6h. As 48h, os animais do grupo cetoprofeno ainda apresentava mais tempo em postura de dor que os demais grupos e as 144h, apresentou redução da produção ERO por granulócitos. Tais achados permitem concluir que tanto o flunexin meglumine como o cetoprofeno não preveniram dor/desconforto agudo promovido pela elastração, pois os dois grupos manifestaram comportamento de dor e redução da resposta imune inata. Ainda, o analgésico flunixin meglumine foi efetivo em controlar a dor mais tardia e seus efeitos na função de granulócitos sanguíneos em comparação ao cetoprofeno.