Smartphone-based rapid and low-cost method for the determination of eugenol content of clove essential oil / Método rápido e de baixo custo empregando smartphone para a determinação de eugenol em óleo essencial de cravo

ABSTRACT: The determination of eugenol in clove essential oil was performed using a smartphone-operated device, which was used for image capture and processing. The colorimetric reaction with the Folin-Ciocalteu reagent was used, and the lighting conditions were evaluated to capture images directly in 2 mL disposable vessels. The free application PhotoMetrix UVC was used for partial least squares regression calibration with suitable values (R² greater than 0.99). The accuracy of the proposed method was compared with traditional methods, such as gas chromatography (GC) and spectrophotometry, and it can be observed that there were no significant differences (Student's t-test (P > 0.05), with agreements from 97% to 101%. The smartphone method allowed the evaluation of several samples in a few minutes, with simple analysis steps and easy interpretation of the results. The miniaturized scale allowed the use of small amounts of reagents with minimal waste generation. Therefore, the proposed method can be easily operated in the field and allows the evaluation of the quality of clove essential oil in places of restricted access without the need for a laboratory structure and specialized analysts.

RESUMO: A determinação de eugenol em óleo essencial de cravo-da-índia foi realizada utilizando um dispositivo operado com smartphone para captura e processamento de imagens. Para tal desenvolvimento foi utilizada a reação colorimétrica com o reagente de Folin-Ciocalteu. Foram avaliadas diferentes condições de iluminação para a captura das imagens diretamente em frascos descartáveis de 2 mL. O aplicativo livre PhotoMetrix UVC foi usado para a calibração por regressão de mínimos quadrados parciais com valores adequados (R2 maior que 0.99). A exatidão do método proposto foi comparada com métodos tradicionais, tais como cromatografia gasosa (CG) e espectrofotometria, sem diferenças significativas (teste t de Student (P > 0,05) e com concordâncias entre 97% e 101%. O método com smartphone permitiu a avaliação de várias amostras em poucos minutos, com etapas de análise simples e com fácil interpretação dos resultados. A escala miniaturizada permitiu o uso de pequenas quantidades de reagentes e mínima geração de resíduos. Portanto, o método proposto pode ser facilmente operado em campo e permite avaliar a qualidade de óleo essencial de cravo- da- índia em locais de acesso restrito, sem a necessidade de estrutura laboratorial e analistas especializados.

Smartphone-based rapid and low-cost method for the determination of eugenol content of clove essential oil / Método rápido e de baixo custo empregando smartphone para a determinação de eugenol em óleo essencial de cravo

The determination of eugenol in clove essential oil was performed using a smartphone-operated device, which was used for image capture and processing. The colorimetric reaction with the Folin-Ciocalteu reagent was used, and the lighting conditions were evaluated to capture images directly in 2 mL disposable vessels. The free application PhotoMetrix UVC was used for partial least squares regression calibration with suitable values (R² greater than 0.99). The accuracy of the proposed method was compared with traditional methods, such as gas chromatography (GC) and spectrophotometry, and it can be observed that there were no significant differences (Student's t-test (P > 0.05), with agreements from 97% to 101%. The smartphone method allowed the evaluation of several samples in a few minutes, with simple analysis steps and easy interpretation of the results. The miniaturized scale allowed the use of small amounts of reagents with minimal waste generation. Therefore, the proposed method can be easily operated in the field and allows the evaluation of the quality of clove essential oil in places of restricted access without the need for a laboratory structure and specialized analysts.

A determinação de eugenol em óleo essencial de cravo-da-índia foi realizada utilizando um dispositivo operado com smartphone para captura e processamento de imagens. Para tal desenvolvimento foi utilizada a reação colorimétrica com o reagente de Folin-Ciocalteu. Foram avaliadas diferentes condições de iluminação para a captura das imagens diretamente em frascos descartáveis de 2 mL. O aplicativo livre PhotoMetrix UVC foi usado para a calibração por regressão de mínimos quadrados parciais com valores adequados (R2 maior que 0.99). A exatidão do método proposto foi comparada com métodos tradicionais, tais como cromatografia gasosa (CG) e espectrofotometria, sem diferenças significativas (teste t de Student (P > 0,05) e com concordâncias entre 97% e 101%. O método com smartphone permitiu a avaliação de várias amostras em poucos minutos, com etapas de análise simples e com fácil interpretação dos resultados. A escala miniaturizada permitiu o uso de pequenas quantidades de reagentes e mínima geração de resíduos. Portanto, o método proposto pode ser facilmente operado em campo e permite avaliar a qualidade de óleo essencial de cravo- da- índia em locais de acesso restrito, sem a necessidade de estrutura laboratorial e analistas especializados.

Significant production of vanillin and in vitro amplification of ech gene in local bacterial isolates

Abstract Vanillin is the major component which is responsible for flavor and aroma of vanilla extract and is produced by 3 ways: natural extraction from vanilla plant, chemical synthesis and from microbial transformation. Current research was aimed to study bacterial production of vanillin from native natural sources including sewage and soil from industrial areas. The main objective was vanillin bio-production by isolating bacteria from these native sources. Also to adapt methodologies to improve vanillin production by optimized fermentation media and growth conditions. 47 soil and 13 sewage samples were collected from different industrial regions of Lahore, Gujranwala, Faisalabad and Kasur. 67.7% bacterial isolates produced vanillin and 32.3% were non-producers. From these 279 producers, 4 bacterial isolates selected as significant producers were; A3, A4, A7 and A10. These isolates were identified by ribotyping as A3 Pseudomonas fluorescence (KF408302), A4 Enterococcus faecium (KT356807), A7 Alcaligenes faecalis (MW422815) and A10 Bacillus subtilis (KT962919). Vanillin producers were further tested for improved production of vanillin and were grown in different fermentation media under optimized growth conditions for enhanced production of vanillin. The fermentation media (FM) were; clove oil based, rice bran waste (residues oil) based, wheat bran based and modified isoeugenol based. In FM5, FM21, FM22, FM23, FM24, FM30, FM31, FM32, FM34, FM35, FM36, and FM37, the selected 4 bacterial strains produced significant amounts of vanillin. A10 B. subtilis produced maximum amount of vanillin. This strain produced 17.3 g/L vanillin in FM36. Cost of this fermentation medium 36 was 131.5 rupees/L. This fermentation medium was modified isoeugenol based medium with 1% of isoeugenol and 2.5 g/L soybean meal. ech gene was amplified in A3 P. fluorescence using ech specific primers. As vanillin use as flavor has increased tremendously, the bioproduction of vanillin must be focused.

Resumo A vanilina é o principal componente responsável pelo sabor e aroma do extrato de baunilha e é produzida de três formas: extração natural da planta da baunilha, síntese química e transformação microbiana. A pesquisa atual teve como objetivo estudar a produção bacteriana de vanilina a partir de fontes naturais nativas, incluindo esgoto e solo de áreas industriais. O objetivo principal era a bioprodução de vanilina por meio do isolamento de bactérias dessas fontes nativas. Também para adaptar metodologias para melhorar a produção de vanilina por meio de fermentação otimizada e condições de crescimento. Foram coletadas 47 amostras de solo e 13 de esgoto de diferentes regiões industriais de Lahore, Gujranwala, Faisalabad e Kasur; 67,7% dos isolados bacterianos produziram vanilina e 32,3% eram não produtores. Desses 279 produtores, 4 isolados bacterianos selecionados como produtores significativos foram: A3, A4, A7 e A10. Esses isolados foram identificados por ribotipagem como fluorescência A3 Pseudomonas (KF408302), A4 Enterococcus faecium (KT356807), A7 Alcaligenes faecalis (MW422815) e A10 Bacillus subtilis (KT962919). Os produtores de vanilina foram posteriormente testados para produção aprimorada de vanilina e foram cultivados em diferentes meios de fermentação sob condições de crescimento otimizadas para produção aprimorada de vanilina. Os meios de fermentação (FM) foram: à base de óleo de cravo, à base de resíduos de farelo de arroz (resíduos de óleo), à base de farelo de trigo e à base de isoeugenol modificado. Em FM5, FM21, FM22, FM23, FM24, FM30, FM31, FM32, FM34, FM35, FM36 e FM37, as 4 cepas bacterianas selecionadas produziram quantidades significativas de vanilina. A10 B. subtilis produziu quantidade máxima de vanilina. Essa cepa produziu 17,3 g / L de vanilina em FM36. O custo desse meio de fermentação 36 foi de 131,5 rúpias / L. Esse meio de fermentação foi um meio à base de isoeugenol modificado com 1% de isoeugenol e 2,5 g / L de farelo de soja. O gene ech foi amplificado em A3 P. fluorescence usando primers específicos para ech. Como o uso da vanilina como sabor aumentou tremendamente, a bioprodução da vanilina deve ser focada.

Significant production of vanillin and in vitro amplification of ech gene in local bacterial isolates / Produção significativa de vanilina e amplificação in vitro do gene ech em isolados bacterianos locais

Abstract Vanillin is the major component which is responsible for flavor and aroma of vanilla extract and is produced by 3 ways: natural extraction from vanilla plant, chemical synthesis and from microbial transformation. Current research was aimed to study bacterial production of vanillin from native natural sources including sewage and soil from industrial areas. The main objective was vanillin bio-production by isolating bacteria from these native sources. Also to adapt methodologies to improve vanillin production by optimized fermentation media and growth conditions. 47 soil and 13 sewage samples were collected from different industrial regions of Lahore, Gujranwala, Faisalabad and Kasur. 67.7% bacterial isolates produced vanillin and 32.3% were non-producers. From these 279 producers, 4 bacterial isolates selected as significant producers were; A3, A4, A7 and A10. These isolates were identified by ribotyping as A3 Pseudomonas fluorescence (KF408302), A4 Enterococcus faecium (KT356807), A7 Alcaligenes faecalis (MW422815) and A10 Bacillus subtilis (KT962919). Vanillin producers were further tested for improved production of vanillin and were grown in different fermentation media under optimized growth conditions for enhanced production of vanillin. The fermentation media (FM) were; clove oil based, rice bran waste (residues oil) based, wheat bran based and modified isoeugenol based. In FM5, FM21, FM22, FM23, FM24, FM30, FM31, FM32, FM34, FM35, FM36, and FM37, the selected 4 bacterial strains produced significant amounts of vanillin. A10 B. subtilis produced maximum amount of vanillin. This strain produced 17.3 g/L vanillin in FM36. Cost of this fermentation medium 36 was 131.5 rupees/L. This fermentation medium was modified isoeugenol based medium with 1% of isoeugenol and 2.5 g/L soybean meal. ech gene was amplified in A3 P. fluorescence using ech specific primers. As vanillin use as flavor has increased tremendously, the bioproduction of vanillin must be focused.

Resumo A vanilina é o principal componente responsável pelo sabor e aroma do extrato de baunilha e é produzida de três formas: extração natural da planta da baunilha, síntese química e transformação microbiana. A pesquisa atual teve como objetivo estudar a produção bacteriana de vanilina a partir de fontes naturais nativas, incluindo esgoto e solo de áreas industriais. O objetivo principal era a bioprodução de vanilina por meio do isolamento de bactérias dessas fontes nativas. Também para adaptar metodologias para melhorar a produção de vanilina por meio de fermentação otimizada e condições de crescimento. Foram coletadas 47 amostras de solo e 13 de esgoto de diferentes regiões industriais de Lahore, Gujranwala, Faisalabad e Kasur; 67,7% dos isolados bacterianos produziram vanilina e 32,3% eram não produtores. Desses 279 produtores, 4 isolados bacterianos selecionados como produtores significativos foram: A3, A4, A7 e A10. Esses isolados foram identificados por ribotipagem como fluorescência A3 Pseudomonas (KF408302), A4 Enterococcus faecium (KT356807), A7 Alcaligenes faecalis (MW422815) e A10 Bacillus subtilis (KT962919). Os produtores de vanilina foram posteriormente testados para produção aprimorada de vanilina e foram cultivados em diferentes meios de fermentação sob condições de crescimento otimizadas para produção aprimorada de vanilina. Os meios de fermentação (FM) foram: à base de óleo de cravo, à base de resíduos de farelo de arroz (resíduos de óleo), à base de farelo de trigo e à base de isoeugenol modificado. Em FM5, FM21, FM22, FM23, FM24, FM30, FM31, FM32, FM34, FM35, FM36 e FM37, as 4 cepas bacterianas selecionadas produziram quantidades significativas de vanilina. A10 B. subtilis produziu quantidade máxima de vanilina. Essa cepa produziu 17,3 g / L de vanilina em FM36. O custo desse meio de fermentação 36 foi de 131,5 rúpias / L. Esse meio de fermentação foi um meio à base de isoeugenol modificado com 1% de isoeugenol e 2,5 g / L de farelo de soja. O gene ech foi amplificado em A3 P. fluorescence usando primers específicos para ech. Como o uso da vanilina como sabor aumentou tremendamente, a bioprodução da vanilina deve ser focada.

Effects of ortho-eugenol on anxiety, working memory and oxidative stress in mice / Efeitos do orto-eugenol na ansiedade, memória de trabalho e estresse oxidativo em camundongos

Ortho-eugenol is a synthetic derivative from eugenol, the major compound of clove essential oil, which has demonstrated antidepressant and antinociceptive effects in pioneering studies. Additionally, its effects appear to be dependent on the noradrenergic and dopaminergic systems. Depression and anxiety disorders are known to share a great overlap in their pathophysiology, and many drugs are effective in the treatment of both diseases. Furthermore, high levels of anxiety are related to working memory deficits and increased oxidative stress. Thus, in this study we investigated the effects of acute treatment of ortho-eugenol, at 50, 75 and 100 mg/kg, on anxiety, working memory and oxidative stress in male Swiss mice. Our results show that the 100 mg/kg dose increased the number of head-dips and reduced the latency in the hole-board test. The 50 mg/kg dose reduced malondialdehyde levels in the prefrontal cortex and the number of Y-maze entries compared to the MK-801-induced hyperlocomotion group. All doses reduced nitrite levels in the hippocampus. It was also possible to assess a statistical correlation between the reduction of oxidative stress and hyperlocomotion after the administration of ortho-eugenol. However, acute treatment was not able to prevent working memory deficits. Therefore, the present study shows that ortho-eugenol has an anxiolytic and antioxidant effect, and was able to prevent substance-induced hyperlocomotion. Our results contribute to the elucidation of the pharmacological profile of ortho-eugenol, as well as to direct further studies that seek to investigate its possible clinical applications.

Ortho-eugenol é um derivado sintético do eugenol, composto principal do óleo essencial de cravo, que demonstrou efeitos antidepressivos e antinociceptivos em estudos pioneiros. Além disso, seus efeitos parecem ser dependentes dos sistemas noradrenérgico e dopaminérgico. Sabe-se que os transtornos de depressão e ansiedade compartilham uma grande sobreposição em sua fisiopatologia, e muitas drogas são eficazes no tratamento de ambas as doenças. Além disso, altos níveis de ansiedade estão relacionados a déficits de memória de trabalho e aumento do estresse oxidativo. Assim, o presente estudo investigou os efeitos do tratamento agudo de orto-eugenol, nas doses de 50, 75 e 100 mg/kg, na ansiedade, memória de trabalho e estresse oxidativo em camundongos Swiss machos. Nossos resultados mostram que a dose de 100 mg/kg aumentou o número de mergulhos e reduziu a latência no teste da placa perfurada. A dose de 50 mg/kg reduziu os níveis de malondialdeído no córtex pré-frontal e o número de entradas no labirinto em Y em comparação com o grupo de hiperlocomoção induzida por MK-801. Todas as doses reduziram os níveis de nitrito no hipocampo. Também foi possível avaliar uma correlação estatística entre a redução do estresse oxidativo e a hiperlocomoção após a administração do orto-eugenol. No entanto, o tratamento agudo não foi capaz de prevenir os déficits de memória de trabalho. Portanto, o presente estudo mostra que o orto-eugenol tem efeito ansiolítico e antioxidante, sendo capaz de prevenir a hiperlocomoção induzida pela substância. Nossos resultados contribuem para a elucidação do perfil farmacológico do orto-eugenol, bem como para direcionar novos estudos que busquem investigar suas possíveis aplicações clínicas.

The influence of clove leave extract (Syzygium aromaticum) on growth performance and bacterial population of broiler chickens raised in stressful conditions of high stocking density

Broilers maintenance at high stocking density impacts uncomfortable conditions; this increases the potential for stress, reduces feed consumption, and reduces production performance and health in broiler chickens. This study aims to evaluate the effect of clove leaf extract on growth performance and microbial population in the digestive tract of broiler chickens reared at high density. From the eighth day, five treatment groups, T0 (negative control with a typical density of 10 birds/m2 ), T1 (positive control with a high density of 16 birds/m2 ), T2, T3, and T4 with a high density of 16 birds/m2, were randomly assigned from 444 broilers (bodyweight of 129.78±0.75 g) with six repetitions each on the eighth day. The feed includes clove leave extract as much as 0.5, 0.75, and 1 ml/kg for T2, T3, and T4, respectively. The weight gain, feed intake, and feed conversion ratio were tracked weekly. One chicken from each replicate was taken randomly, slaughtered, and feathered on day 35. The digesta was taken from the ileum and cecum to measure the intestinal bacterial population and put into a sterile container. Digesta from the duodenum, jejunum, ileum, and cecum were also collected to determine pH levels. MRS agar was used to determine the amount of LAB in the digesta. The findings revealed that giving clove leaf extract of feed to broiler chickens kept at high stocking density could higher body weight gain (P < 0.05), higher feed consumption (P < 0.05), decreased the pH of the ileum and cecum (P < 0.05), increased lactic acid bacteria and decreased coliform bacteria in the ileum and cecum (P < 0.05).

Antimicrobial activity of essential oils against Pasteurella spp isolated from the oral cavity of domestic cats / Avaliação da atividade antimicrobiana de óleos essenciais frente a isolados de Pasteurella spp oriundos da cavidade bucal de gatos domésticos

Pasteurella spp. have been identified predominantly in the oral microbiota of domestic cats. However, Pasteurella spp. was significantly more prevalent in cats with inflammatory oral disease; and consequently, it was considered as part of the etiology in this disease. In addition, in animals, Pasteurella spp. have become increasingly resistant to a large number of antimicrobials. Natural products, especially essential oils, could contribute to minimizing this issue. This study determined the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) of six essential oils against Pasteurella spp. isolates from the oral cavity of domestic cats. Our results showed that essential oils with better antimicrobial effectiveness against most of the Pasteurella isolates were lemongrass, tea tree and clove, with inhibition values between 50 to 800 µg mL-¹. All essential oils showed bacteriostatic activity against the species of Pasteurella isolated from the domestic cats. These results suggested that lemongrass, tea tree and clove oils have potential to be used in products for oral hygiene and treatment of oral infections in domestic cats.

O gênero Pasteurella spp., considerado um comensal da cavidade bucal de gatos domésticos, vem sendo, nos últimos anos, apontado como possível agente etiológico de quadros inflamatórios crônicos bucais em felinos. Ademais, em animais, as espécies de Pasteurella têm apresentado cada vez mais resistência a um grande número de antimicrobianos de uso rotineiro. Nesse contexto, os produtos naturais, como óleos essenciais com potencial antimicrobiano tem sido alvo de estudos e apontados como alternativa terapêutica. Neste estudo, objetivou-se determinar a Concentração Mínima Inibitória (CMI) e da Concentração Bactericida Mínima (CBM) de seis óleos essenciais frente a isolados de Pasteurella spp. oriundos da cavidade bucal de gatos domésticos. Dos óleos essenciais testados, o capim-limão, tea tree, cravo e a camomila romana apresentaram ação bacteriostática frente aos isolados de Pasteurella spp. Contudo, os óleos de capim-limão, tea-tree e cravo apresentaram os melhores resultados, com valores de inibitórios entre 50 a 800 µg mL-¹. Esses resultados sugerem que os óleos de capim-limão, tea tree e cravo têm potencial para serem utilizados como produtos para higiene bucal e para o tratamento de infecções da cavidade bucal de gatos domésticos.

Estudo in vitro da eficácia do óleo essencial de cravo-da-índia (Syzygium aromaticum, Myrtaceae) sobre carrapato Rhipicephalus sanguineus

Resumen: Rhipicephalus sanguineus se ha convertido en una plaga urbana, con informes de infestaciones en hogares y poblaciones resistentes a los acaricidas, lo que genera preocupación tanto a los médicos veterinarios como a la salud pública. Con el objetivo de alternativas más sostenibles para el control ambiental de R. sanguineus, el objetivo de este estudio fue evaluar el efecto in vitro del aceite esencial de clavo, Syzygium aromaticum, sobre las larvas de Rhipicephalus sanguineus. Este aceite es rico en eugenol, un compuesto aromático ampliamente explorado por la industria alimentaria y farmacéutica, y que a pesar de su excelente acción acaricida, existen pocos estudios de su acción sobre R. sanguineus. Se utilizaron larvas con 15 días de vida para realizar las pruebas, y se probaron concentraciones de 0.5%, 1% y 2% del aceite esencial. La sensibilidad larvaria se probó mediante pruebas de inmersión larvaria (TIL) con adaptaciones. Se encontró una eficacia larvicida superior al 99% sobre R. sanguineus con concentraciones superiores al 0,5% de aceite de Syzygium aromaticum diluido en solución hidroalcohólica. Demostrando efecto prometedor acaricida del aceite esencial de clavo para el control de larvas de R. sanguineus.

Abstract: Rhipicephalus sanguineus has become an urban plague, with reports of infestations on residences and resistant populations to acaricides, bringing concerns both to veterinarians and public health. Looking for alternatives more sustainable for environmental control of R. sanguineus, the aim of this study was to evaluate the in vitro effect of the clove essential oil, Syzygium aromaticum, on Rhipicephalus sanguineus larvae. This oil is abundant in eugenol, an aromatic compound widely explored by the pharmaceutical and food industry, despite its strong acaricidal activity there are not many studies on its impact on R. sanguineus. In the present study, it was used 15 old day larvae, which were tested the 0,5%, 1% and 2% concentrations of the essential oil. The sensibility of the larvae was tested by the larvae immersion tests (LIT) with adaptations. It was noted the larvicidal efficacy above 99% on R. sanguineus in concentrations above 0,5% of Syzygium aromaticum oil diluted in hydroalcoholic solution. Demonstrating promising acaricidal effect of clove essential oil on tick R. sanguineus.

Resumo: Rhipicephalus sanguineus vem se tornando uma praga urbana, com relatos de infestações em residências e populações resistentes a acaricidas, trazendo preocupações tanto a clínicos veterinários como também em saúde pública. Visando alternativas mais sustentáveis para o controle ambiental de R. sanguineus, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito in vitro do óleo essencial de cravo-da-índia, Syzygium aromaticum, sobre larvas de Rhipicephalus sanguineus. Esse óleo é rico em eugenol, composto aromático amplamente explorado pela indústria alimentícia e farmacêutica, e que apesar da sua excelente ação acaricida, existem poucos estudos de sua ação sobre R. sanguineus. Para realizar os testes foram utilizadas larvas com 15 dias de vida, sendo testadas as concentrações de 0,5%, 1% e 2% do óleo essencial. A sensibilidade das larvas foi testada pelos testes de imersão larval (TIL) com adaptações. Foi encontrada eficácia larvicida acima de 99% sobre R. sanguineus com concentrações acima de 0,5% de óleo de Syzygium aromaticum diluído em solução hidroalcóolica. Demonstrando promissor efeito acaricida do óleo essencial de cravo-da-índia sobre larvas de R. sanguineus.

Estudo in vitro da eficácia do óleo essencial de cravo-da-índia (Syzygium aromaticum, Myrtaceae) sobre fase larval de Rhipicephalus sanguineus / In vitro effect of clove essential oil (Syzygium aromaticum, Myrtaceae) on the larval phase of Rhipicephalus sanguineus / Efecto in vitro del aceite esencial de clavo de olor (Syzygium aromaticum, Myrtaceae) sobre la fase larval de Rhipicephalus sanguineus

Rhipicephalus sanguineus vem se tornando uma praga urbana, com relatos de infestações em residências e populações resistentes a acaricidas, trazendo preocupações tanto a clínicos veterinários como também em saúde pública. Visando alternativas mais sustentáveis para o controle ambiental de R. sanguineus, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito in vitro do óleo essencial de cravo-da-índia, Syzygium aromaticum, sobre larvas de Rhipicephalus sanguineus. Para realizar os testes foram utilizadas larvas com 15 dias de vida, sendo testadas as concentrações de 0,5%, 1% e 2% do óleo essencial. A sensibilidade das larvas foi analisada pelos testes de imersão larval (TIL) com adaptações. Foi encontrada eficácia larvicida acima de 99% sobre R. sanguineus com concentrações acima de 0,5% de óleo de S. aromaticum diluído em solução hidroalcóolica. Demonstrando promissor efeito acaricida do óleo essencial de cravo-da-índia sobre larvas de R. sanguineus.(AU)

Rhipicephalus sanguineus has become an urban plague, with reports of infestations on residences and resistant populations to acaricides, bringing concerns both to veterinarians and public health. Looking for alternatives more sustainable for environmental control of R. sanguineus, the aim of this study was to evaluate the in vitro effect of the clove essential oil, Syzygium aromaticum, on Rhipicephalus sanguineus larvae. In the present study, it was used 15 old day larvae, which were tested concentrations of 0,5%, 1% and 2% of the essential oil. The sensibility of larvae was tested by the larvae immersion tests (LIT) with adaptations. It was noted the larvicidal efficacy above 99% on R. sanguineus in concentrations above 0,5% of Syzygium aromaticum oil diluted in hydroalcoholic solution. Demonstrating promising acaricidal effect of clove essential oil on tick R. sanguineus.(AU)

Rhipicephalus sanguineus se ha convertido en una plaga urbana, con informes de infestaciones en hogares y poblaciones resistentes a los acaricidas, lo que genera preocupación tanto a los médicos veterinarios como a la salud pública. Con el objetivo de alternativas más sostenibles para el control ambiental de R. sanguineus, el objetivo de este estudio fue evaluar el efecto in vitro del aceite esencial de clavo, Syzygium aromaticum, sobre las larvas de Rhipicephalus sanguineus. Se utilizaron larvas con 15 días de vida para realizar las pruebas, y se probaron concentraciones de 0.5%, 1% y 2% del aceite esencial. La sensibilidad larvaria se probó mediante pruebas de inmersión larvaria (TIL) con adaptaciones. Se encontró una eficacia larvicida superior al 99% sobre R. sanguineus con concentraciones superiores al 0,5% de aceite de Syzygium aromaticum diluido en solución hidroalcohólica. Demostrando efecto prometedor acaricida del aceite esencial de clavo para el control de larvas de R. sanguineus.(AU)

Inhibitory activities of propolis, nisin, melittin and essential oil compounds on Paenibacillus alvei and Bacillus subtilis

Background: Natural products represent important sources of antimicrobial compounds. Propolis and compounds from essential oils comprise good examples of such substances because of their inhibitory effects on bacterial spores, including bee pathogens. Methods: Ethanol extracts of propolis (EEP) from Apis mellifera were prepared using different methods: double ultrasonication, double maceration and maceration associated with ultrasonication. Together with the antimicrobial peptides nisin and melittin, and compounds present in the essential oils of clove (Syzygium aromaticum) and cinnamon (Cinnamomum zeylanicum), assays were carried out on one Bacillus subtilis isolate and Paenibacillus alvei (ATCC 6344) against vegetative and sporulated forms, using the resazurin microtiter assay. Synergism with all the antimicrobials in association with tetracycline was verified by the time-kill curve method. Potassium and phosphate efflux, release of proteins and nucleic acids were investigated. Results: EEPs showed the same MIC, 156.25 µg/mL against B. subtilis and 78.12 µg/mL against P. alvei. The peptides showed better activities against B. subtilis (MIC of 12 µg/ mL for melittin and 37.50 µg/mL for nisin). Antimicrobials showed similar inhibitory effects, but cinnamaldehyde (39.06 µg/mL) showed the best action against P. alvei. Melittin and nisin showed the greatest capacity to reduce spores, regarding B. subtilis there was a 100% reduction at 6.25 and 0.78 µg/mL, respectively. Concerning P. alvei, the reduction was 93 and 98% at concentrations of 80 µg/mL of melittin and 15 µg/ mL of nisin. EEPs showed the highest effects on the protein release against B. subtilis and P. alvei. Nucleic acid release, phosphate and potassium efflux assays indicated bacterial cell membrane damage. Synergism between antimicrobials and tetracycline was demonstrated against both bacteria. Conclusion: All antimicrobials tested showed antibacterial activities against vegetative and sporulated forms of P. alvei and B. subtilis, especially nisin and melittin. Synergism with tetracycline and damage on bacterial cell membrane also occurred.(AU)

Flaxseed oil and clove leaf essential oil in Zebrafish diet (Danio rerio)

Flaxseed oil is recognized as the plant source richest in α-linolenic acid, whereas clove leaf essential oil has a strong antioxidant capacity.The objective of this study was to determine the in vitro antioxidant capacity of diets containing a combination of flaxseed oil (FO) and clove leaf essential oil (CLEO), as well as to use zebrafish (Danio rerio) to assess theireffect on the animalsgrowth. Fifty days after hatching, a total of 420 male specimens (0.29 ± 0.04 g)weredivided into seven groups for each diet and fed for 55 daysto be used, with the diets being: control, absent FO and CLEO; 3% FO + 0.5% CLEO; 3% FO + 1% CLEO; 6% FO + 0.5% CLEO; 6% FO + 1% CLEO; 9% FO + 0.5% CLEO and 9% FO + 1% CLEO. Antioxidant activity was determined through DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) tests, showing interaction effect between factors (FO x CLEO, p <0.05); the diets containing 1% combined with 3, 6 or 9%of FOpresented meanshigher than those of the0.5%diets. No mortality was observed during the experiment. For final weight and weight gain, there was no interaction effect (p> 0.05), only isolated effect for FO, with the fish fed 6 and 9% diets having the best results. Final total length and specific growth rates showed interaction effect (p <0.05). As for specific growth rates, the best response was that of the diet with 6% FO and 0.5% CLEO. Final length showed increase with FO levels, even when there was association with0.5 or 1% of CLEO. Therefore, combined use of9% of FL with 0.5% of CLEO is recommended for zebrafish.(AU)

Flaxseed oil and clove leaf essential oil in Zebrafish diet (Danio rerio)

Flaxseed oil is recognized as the plant source richest in α-linolenic acid, whereas clove leaf essential oil has a strong antioxidant capacity.The objective of this study was to determine the in vitro antioxidant capacity of diets containing a combination of flaxseed oil (FO) and clove leaf essential oil (CLEO), as well as to use zebrafish (Danio rerio) to assess theireffect on the animals’growth. Fifty days after hatching, a total of 420 male specimens (0.29 ± 0.04 g)weredivided into seven groups for each diet and fed for 55 daysto be used, with the diets being: control, absent FO and CLEO; 3% FO + 0.5% CLEO; 3% FO + 1% CLEO; 6% FO + 0.5% CLEO; 6% FO + 1% CLEO; 9% FO + 0.5% CLEO and 9% FO + 1% CLEO. Antioxidant activity was determined through DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) tests, showing interaction effect between factors (FO x CLEO, p 0.05), only isolated effect for FO, with the fish fed 6 and 9% diets having the best results. Final total length and specific growth rates showed interaction effect (p <0.05). As for specific growth rates, the best response was that of the diet with 6% FO and 0.5% CLEO. Final length showed increase with FO levels, even when there was association with0.5 or 1% of CLEO. Therefore, combined use of9% of FL with 0.5% of CLEO is recommended for zebrafish.

Eugenol and tricaine methanesulfonate as anhestesics for the pearl cichlid

Anesthesia reduces the handling process duration and prevent fish injuries. The anesthetic effect and ideal concentrations of eugenol and tricaine methanesulfonate (MS-222) were tested for pearl cichlid (Geophagus brasiliensis) juveniles with an average weight of 4.4 g in water at 24ºC. The criterion for determining the optimal dose considered an induction time of one minute. Experiment 1 tested the concentrations of 25, 75, 150 and 300 mg L-1 of eugenol. The best results were obtained at doses of 150 and 300 mg L-1. Experiment 2 aimed to establish a more accurate result by testing the concentrations of 180, 210, 240 and 270 mg L-1, and led to an estimation of 217 mg L-1 of eugenol to induce anesthesia in one minute. Experiment 3 evaluated 200, 300, 400, 500 and 600 mg L-1 of tricaine, of which the concentration of 294 mg L-1 was estimated to induce anesthesia in one minute. No significant differences were observed for recovery times when using either of the anesthetics. No mortality was observed within 24 hours after the experiments for any concentration of the anesthetics. The present study recommends 217 mg L-1 of eugenol or 394 mg L-1 of tricaine for anesthesia of the pearl cichlid.

Eugenol and tricaine methanesulfonate as anhestesics for the pearl cichlid

Anesthesia reduces the handling process duration and prevent fish injuries. The anesthetic effect and ideal concentrations of eugenol and tricaine methanesulfonate (MS-222) were tested for pearl cichlid (Geophagus brasiliensis) juveniles with an average weight of 4.4 g in water at 24ºC. The criterion for determining the optimal dose considered an induction time of one minute. Experiment 1 tested the concentrations of 25, 75, 150 and 300 mg L-1 of eugenol. The best results were obtained at doses of 150 and 300 mg L-1. Experiment 2 aimed to establish a more accurate result by testing the concentrations of 180, 210, 240 and 270 mg L-1, and led to an estimation of 217 mg L-1 of eugenol to induce anesthesia in one minute. Experiment 3 evaluated 200, 300, 400, 500 and 600 mg L-1 of tricaine, of which the concentration of 294 mg L-1 was estimated to induce anesthesia in one minute. No significant differences were observed for recovery times when using either of the anesthetics. No mortality was observed within 24 hours after the experiments for any concentration of the anesthetics. The present study recommends 217 mg L-1 of eugenol or 394 mg L-1 of tricaine for anesthesia of the pearl cichlid.(AU)

Research of antifungal effects on some essential oils with tube dilution / Pesquisa de efeitos antifúngicos em alguns óleos essenciais com diluição em tubo

The aim of study to investigate inhibition effects of cinnamic acid (volatile compound of cinnamon), limonene (essential oil of lemon) and eugenol (essential oil of clove, cinnamon) on Metschnikowia fructicola, Candida oleophila, Schisosaccharomyces pombe, Saccharomyces uvarum and Kloeckera apiculata. In this study, tube dilution method was used. Among eugenol, limonene and cinnamic acid, it was found that cinnamic acid has the most inhibition effect with low concentrations (%2.8, %3.84, %4.36, %5,4) at tube dilution methods. Also it was found that test yeast have different resistance against test materials.(AU)

O objetivo do estudo foi investigar os efeitos de inibição do ácido cinâmico (composto volátil da canela), limoneno (óleo essencial de limão) e eugenol (óleo essencial de cravo, canela) sobre Metschnikowia fructicola, Candida oleophila, Schisosaccharomyces pombe, Saccharomyces uvarum e Kloeckera apiculata. Neste estudo, foi utilizado o método de diluição em tubo. Entre eugenol, limoneno e ácido cinâmico, verificou-se que o ácido cinâmico tem o maior efeito de inibição com baixas concentrações (% 2,8,% 3,84,% 4,36,% 5,4) nos métodos de diluição em tubo. Também foi descoberto que a levedura testada tem diferentes resistências contra os materiais de teste.(AU)

Storage stability of minimally processed pinhão by using edible coatings with antimicrobial characteristics / Conservação de pinhão minimamente processado pelo uso de revestimentos comestíveis com características antimicrobianas

The pinhão shows high nutritional value; however, its consumption is still low owing to the long cooking time required because it is hard to peel, and it is susceptible to sprouting, larval infestation, and fungal contamination. Thus, this study aimed to evaluate the storage stability of minimally processed pinhão by using edible coatings with antimicrobial characteristics. The pinhões were subjected to minimal processing with the following treatments: Treatment A - control; Treatment B - chitosan; Treatment C - xanthan gum and clove essential oil. After drying, they were packed in polyethylene terephthalate and stored at 4 °C for nine days. The pinhões were analyzed for mass loss, total acidity, reducing sugars, vitamin C, color, firmness, respiratory rate, sensory characteristics, and microbial growth. In general, no differences were observed in mass loss, reducing sugars, and oxygen concentrations of the pinhões after any treatment. In addition, we observed a reduction in acidity and carbon dioxide concentrations, maintenance of color parameters, and the absence of growth of thermotolerant coliforms and coagulase positive Staphylococcus. Although the minimal processing did not increase the respiratory rate of pinhões, it did not stop the process of seed maturation. Of the coatings evaluated, chitosan coating of the pinhões was associated with a higher content of vitamin C as well as a lower number of psychrotrophic microorganisms. The coatings did not influence the taste and aroma of the minimally processed pinhões.

O pinhão apresenta alto valor nutricional, entretanto seu consumo ainda é pouco expressivo devido ao longo tempo de cocção, por apresentar um difícil descasque, ser susceptível ao processo de brotamento, infestação por larvas e deterioração fúngica. Assim, o presente trabalho teve por objetivo avaliar a conservação de pinhões minimamente processados por meio de revestimentos comestíveis com características antimicrobianas. Os pinhões foram submetidos ao processamento mínimo e após aos diferentes tratamentos: Tratamento A - controle; Tratamento B - quitosana; Tratamento C - xantanae óleo essencial de cravo-da-índia. Após, foram secos sob ventilação forçada, acondicionados em embalagem de Polietileno Tereftalato (PET) e armazenados a 4 ºC, durante 9 dias. Foram realizadas avaliações de perda de massa, acidez total titulável, açúcares redutores, vitamina C, firmeza, cor, taxa respiratória, análise sensorial e microbiológica. De uma forma geral, independente do tratamento, pôde se observar comportamento semelhante nas características dos pinhões, em relação ao aumento da perda de massa, dos açúcares redutores, da concentração de oxigênio e da deterioração fisiológica. Além disso, foi observada a redução da acidez e da concentração de dióxido de carbono, bem como a manutenção dos parâmetros de cor e a ausência de crescimento de coliformes termotolerantes e Staphylococcus coagulase positiva. O processamento mínimo não elevou a taxa respiratória dos pinhões, porém não freou o processo de maturação das sementes. Dos revestimentos avaliados, a quitosana possibilitou a obtenção de pinhões com maior teor de vitamina C e contagem de microrganismos psicrotróficos. Os revestimentos não influenciaram no sabor e aroma dos pinhões minimamente processados.

Storage stability of minimally processed pinhão by using edible coatings with antimicrobial characteristics / Conservação de pinhão minimamente processado pelo uso de revestimentos comestíveis com características antimicrobianas

The pinhão shows high nutritional value; however, its consumption is still low owing to the long cooking time required because it is hard to peel, and it is susceptible to sprouting, larval infestation, and fungal contamination. Thus, this study aimed to evaluate the storage stability of minimally processed pinhão by using edible coatings with antimicrobial characteristics. The pinhões were subjected to minimal processing with the following treatments: Treatment A - control; Treatment B - chitosan; Treatment C - xanthan gum and clove essential oil. After drying, they were packed in polyethylene terephthalate and stored at 4 °C for nine days. The pinhões were analyzed for mass loss, total acidity, reducing sugars, vitamin C, color, firmness, respiratory rate, sensory characteristics, and microbial growth. In general, no differences were observed in mass loss, reducing sugars, and oxygen concentrations of the pinhões after any treatment. In addition, we observed a reduction in acidity and carbon dioxide concentrations, maintenance of color parameters, and the absence of growth of thermotolerant coliforms and coagulase positive Staphylococcus. Although the minimal processing did not increase the respiratory rate of pinhões, it did not stop the process of seed maturation. Of the coatings evaluated, chitosan coating of the pinhões was associated with a higher content of vitamin C as well as a lower number of psychrotrophic microorganisms. The coatings did not influence the taste and aroma of the minimally processed pinhões.(AU)

O pinhão apresenta alto valor nutricional, entretanto seu consumo ainda é pouco expressivo devido ao longo tempo de cocção, por apresentar um difícil descasque, ser susceptível ao processo de brotamento, infestação por larvas e deterioração fúngica. Assim, o presente trabalho teve por objetivo avaliar a conservação de pinhões minimamente processados por meio de revestimentos comestíveis com características antimicrobianas. Os pinhões foram submetidos ao processamento mínimo e após aos diferentes tratamentos: Tratamento A - controle; Tratamento B - quitosana; Tratamento C - xantanae óleo essencial de cravo-da-índia. Após, foram secos sob ventilação forçada, acondicionados em embalagem de Polietileno Tereftalato (PET) e armazenados a 4 ºC, durante 9 dias. Foram realizadas avaliações de perda de massa, acidez total titulável, açúcares redutores, vitamina C, firmeza, cor, taxa respiratória, análise sensorial e microbiológica. De uma forma geral, independente do tratamento, pôde se observar comportamento semelhante nas características dos pinhões, em relação ao aumento da perda de massa, dos açúcares redutores, da concentração de oxigênio e da deterioração fisiológica. Além disso, foi observada a redução da acidez e da concentração de dióxido de carbono, bem como a manutenção dos parâmetros de cor e a ausência de crescimento de coliformes termotolerantes e Staphylococcus coagulase positiva. O processamento mínimo não elevou a taxa respiratória dos pinhões, porém não freou o processo de maturação das sementes. Dos revestimentos avaliados, a quitosana possibilitou a obtenção de pinhões com maior teor de vitamina C e contagem de microrganismos psicrotróficos. Os revestimentos não influenciaram no sabor e aroma dos pinhões minimamente processados.(AU)

Survival of Pseudomonas marginalis pv. marginalis in garlic cloves / Sobrevivência de Pseudomonas marginalis pv. marginalis em bulbilhos de alho

Bacterial soft rot of garlic caused by Pseudomonas marginalis pv. marginalis is one of the crops main leaf diseases, and little is known about its dynamics of survival in the clove. Accordingly, this study set out to determine this bacteriums survival in the clove with and without asepsis during storage. Garlic cloves of the Chonan cultivar were inoculated with an isolated rifampicin-resistant mutant of P. marginalis pv. marginalis to distinguish them from other bacteria and were transplanted in the field. The population present in the clove was evaluated at the end of the crop cycle and then on a monthly basis until the sixth month in storage. To quantify the bacterial population, three replications were conducted with ten grams each of cloves with and without asepsis by sodium hypochlorite for three minutes. Serial dilution was then used for isolation, followed by plating in a King B culture medium with rifampicin for selective isolation of the bacterium. After 48 hours of incubation at 28 ºC, the colonies were counted on a monthly basis to analyze their survival in the clove. The results indicate that the bacterium is unable to survive in cloves subjected to asepsis during storage, but it can survive without asepsis for up to three months.

A queima-bacteriana-do-alho causada por Pseudomonas marginalis pv. marginalis é uma das principais doenças foliares da cultura e pouco se conhece de sua dinâmica de sobrevivência no bulbilho. Dentro deste aspecto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a sobrevivência desta bactéria no bulbilho com e sem assepsia durante o armazenamento. Bulbilhos de alho do cultivar Chonan foram inoculados com isolado mutante a rifampicina de P. marginalis pv. marginalis para diferenciar de outras bactérias e foram transplantados a campo. Ao final do ciclo da cultura foi avaliada a população presente no bulbilho e mensalmente até o sexto mês de armazenamento. Para quantificação da população bacteriana foram realizadas três repetições composta de dez gramas cada de bulbilhos sem e com assepsia com hipoclorito de sódio por três minutos, seguida do isolamento pela técnica de diluição seriada seguida de plaqueamento em meio de cultura King-B com rifampicina para isolamento seletivo da bactéria. Após incubação de 48 horas a 28 ºC, as colônias foram contadas para analisar mensalmente a sua sobrevivência no bulbilho. Mediante aos resultados obtidos, a bactéria não tem capacidade de sobreviver nos bulbilhos submetidos à assepsia durante o armazenamento, mas consegue sobreviver sem assepsia por até três meses.

Survival of Pseudomonas marginalis pv. marginalis in garlic cloves / Sobrevivência de Pseudomonas marginalis pv. marginalis em bulbilhos de alho

Bacterial soft rot of garlic caused by Pseudomonas marginalis pv. marginalis is one of the crops main leaf diseases, and little is known about its dynamics of survival in the clove. Accordingly, this study set out to determine this bacteriums survival in the clove with and without asepsis during storage. Garlic cloves of the Chonan cultivar were inoculated with an isolated rifampicin-resistant mutant of P. marginalis pv. marginalis to distinguish them from other bacteria and were transplanted in the field. The population present in the clove was evaluated at the end of the crop cycle and then on a monthly basis until the sixth month in storage. To quantify the bacterial population, three replications were conducted with ten grams each of cloves with and without asepsis by sodium hypochlorite for three minutes. Serial dilution was then used for isolation, followed by plating in a King B culture medium with rifampicin for selective isolation of the bacterium. After 48 hours of incubation at 28 ºC, the colonies were counted on a monthly basis to analyze their survival in the clove. The results indicate that the bacterium is unable to survive in cloves subjected to asepsis during storage, but it can survive without asepsis for up to three months.(AU)

A queima-bacteriana-do-alho causada por Pseudomonas marginalis pv. marginalis é uma das principais doenças foliares da cultura e pouco se conhece de sua dinâmica de sobrevivência no bulbilho. Dentro deste aspecto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a sobrevivência desta bactéria no bulbilho com e sem assepsia durante o armazenamento. Bulbilhos de alho do cultivar Chonan foram inoculados com isolado mutante a rifampicina de P. marginalis pv. marginalis para diferenciar de outras bactérias e foram transplantados a campo. Ao final do ciclo da cultura foi avaliada a população presente no bulbilho e mensalmente até o sexto mês de armazenamento. Para quantificação da população bacteriana foram realizadas três repetições composta de dez gramas cada de bulbilhos sem e com assepsia com hipoclorito de sódio por três minutos, seguida do isolamento pela técnica de diluição seriada seguida de plaqueamento em meio de cultura King-B com rifampicina para isolamento seletivo da bactéria. Após incubação de 48 horas a 28 ºC, as colônias foram contadas para analisar mensalmente a sua sobrevivência no bulbilho. Mediante aos resultados obtidos, a bactéria não tem capacidade de sobreviver nos bulbilhos submetidos à assepsia durante o armazenamento, mas consegue sobreviver sem assepsia por até três meses.(AU)

Efficiency of chitosan synergism with clove essential oil in the coating of intentionally contaminated Tambaqui fillets / Eficiência do sinergismo de quitosana com óleo essencial de cravo no revestimento de filés de tambaqui contaminados intencionalmente

The edible coating of chitosan with clove essential oil (CEO) was studied for its ability to reduce the microbial growth of pathogens (Escherichia coli O157:H7 CDCEDL933, Listeria monocytogenes CERELA, Salmonella Enteritidis ATCC13076, Staphylococcus aureus ATCC43300, and Pseudomonas aeruginosa ATCC27853) in Tambaqui fillets kept under refrigeration. In in vitro tests, chitosan showed higher antimicrobial activity against S. aureus and L. monocytogenes (MIC 0.5%), and CEO for L. monocytogenes (MIC 0.08%). Based on the antimicrobial activity of chitosan and CEO, Tambaqui fillets were subjected to different treatments, T1: chitosan 2%; T2: chitosan 2% + CEO 0.16%, and T3: chitosan 0.5% + CEO 0.08%, kept at 4 ºC for 72 h. The chitosan coating, incorporated with CEO, inhibited microorganisms in Tambaqui fillets and enhanced coating efficiency (p < 0.05). It was most effective against L. monocytogenes and S. aureus at the lowest CEO concentration (0.08%). Chitosan coating in combination with CEO enhanced the antimicrobial effect of pathogens on Tambaqui fillets, increased their shelf life under refrigeration, and was more effective against Gram-positive pathogens than Gram-negative pathogens.(AU)

O revestimento comestível de quitosana com óleo essencial de cravo (OEC) foi estudado por sua capacidade em reduzir o crescimento microbiano de patógenos (Escherichia coli O157:H7 CDCEDL933, Listeria monocytogenes CERELA Salmonella Enteritidis ATCC 13076, Staphylococcus aureus ATCC43300 e Pseudomonas aeruginosa ATCC27853) em filés de tambaqui mantidos sob refrigeração. Nos testes in vitro, a quitosana apresentou maior atividade antimicrobiana para S. aureus e L. monocytogenes (CIM 0,5%) e o OEC para L. monocytogenes (CIM 0,08%). Com base na atividade antimicrobiana da quitosana e OEC, os filés de Tambaqui foram submetidos a T1: quitosana a 2%; T2: quitosana 2% + OEC 0,16% e T3: quitosana 0,5% + OEC 0,08%, mantidos a 4 ºC por 72 h. O revestimento de quitosana, incorporado ao OEC, inibiu os micro-organismos nos filés de Tambaqui aumentando a eficiência do revestimento (p< 0,05); e foi mais eficaz para L. monocytogenes e S. aureus na menor concentração do OEC (0,08%). O revestimento de quitosana quando combinado ao OEC aumentou o efeito antimicrobiano de patógenos nos filés de Tambaqui, aumentando sua vida útil sob refrigeração, sendo mais eficaz contra patógenos Gram positivos do que os patógenos Gram negativos.(AU)