Characterization of nonpathological intrascleral cartilage in the domestic sheep (Ovis aries) / Caracterização de cartilagem intraescleral não patológica em ovinos (Ovis aries)

ABSTRACT: Birds, cartilaginous and teleost fish, reptiles, and some amphibians have intrascleral cartilage and/or bone; however, these are rarely reported in therian mammals. This study aimed to investigate and characterize a nonpathological formation of cartilage in the posterior sclera of sheep macroscopically, histologically, and by immunohistochemical exam (IHC). Ninety eyes from 45 domestic sheep were collected, underwent gross examination, fixed in formalin, and embedded in paraffin for the microscopical assessment. Sections with histological shreds of cartilage were selected to perform IHC to confirm the presence of cartilage. Intrascleral cartilage was detected in 60 eyeballs (66.66%) from 37 sheep (82.22%). A slight whitish thickening was grossly seen in the posterior sclera. The histologic exam revealed a few scattered, isolated chondrocytes to larger aggregates of cartilaginous islands in the posterior sclera. Eighteen (30%) of 60 eyeballs revealed marked anti-collagen type II immunolabeling. The development of cartilaginous structures in the eyes is considered rare in mammalian animals. The high occurrence of intrascleral cartilage in the examined sheep eyes suggests that this finding corresponds to an anatomical component of sheep sclera, despite the age, breed, or body condition.

RESUMO: Aves, peixes cartilaginosos e teleósteos e répteis, bem como alguns anfíbios possuem cartilagem e/ou osso intraescleral, contudo, isso é raramente descrito em marsupiais. O objetivo deste trabalho foi investigar e caracterizar a formação não patológica de cartilagem hialina na esclera posterior de ovinos, por exame macroscópico, histológico e imuno-histoquímico. Olhos de 45 ovinos foram coletados, submetidos a exame macroscópico, fixados em formalina a 10% tamponada e incluídos em parafina para o exame histológico. Amostras com evidência de formação cartilaginosa ao exame histológico foram selecionadas para a realização da técnica de imuno-histoquímica para confirmação. Cartilagem intraescleral foi detectada em 60 amostras oculares (66,66%) de 37 ovinos (82,22%), caracterizada na avaliação macroscópica como discretos espessamentos esbranquiçados na esclera posterior. O exame histológico revelou formações que variaram de condrócitos isolados e dispersos a grandes agregados, formando ilhas cartilaginosas na esclera. Dezoito (30%) de 60 bulbos oculares mostraram imunomarcação anti-colágeno tipo II. O desenvolvimento de estruturas cartilaginosas nos bulbos oculares é considerado raro em mamíferos. A identificação de cartilagem intraescleral em 66% dos olhos ovinos avaliados no estudo indica que a formação de cartilagem corresponde a um componente anatômico normal na esclera de ovinos, independente de idade, raça ou condição corporal.

Análise ultraestrutural do colágeno de feridas cutâneas de coelhos tratadas com plasma rico em plaquetas de equino / Ultrastructural analysis of the collagen of rabbit skin wounds treated with platelet-rich equine plasma

O colágeno é sintetizado e segregado no espaço extracelular e organizados em fibrilas estriadas de acordo com o tipo de tecido. Utilizaram-se 24 coelhos brancos da raça Nova Zelândia, com idade de 12 meses e com 3,0kg de peso corporal, para avaliar a porcentagem de colágeno das feridas cutâneas tratadas com plasma rico em plaquetas de equino e pomada contendo gentamicina, sulfanilamida, sulfadiazina, ureia e vitamina A. Os animais foram separados em quatro grupos de igual número e submetidos à remoção de pele na região das linhas médias dorsal torácica (feridas tratadas) e lombar (feridas controle). As feridas torácicas foram tratadas com plasma rico em plaqueta de equino e pomada contendo gentamicina, sulfanilamida, sulfadiazina, ureia e vitamina A, e as do grupo controle somente com a pomada. Dos animais do grupo I, foi coletado tecido cutâneo, para a avaliação histológica e a ultraestrutural, com três dias de pós-operatório; dos animais do grupo II, com sete dias; do grupo III, com 14 dias; e do grupo IV, com 21 dias. Decorrido o período de avaliação de cada grupo, foi coletado fragmento de pele para avaliação da porcentagem de colágeno, bem como do diâmetro e da densidade da fibrila de colágeno por microscopia eletrônica de transmissão. O tratamento com PRP de equino associado à aplicação tópica da pomada mostrou-se eficaz na maturação das fibrilas colágenas e na antecipação do processo cicatricial.(AU)

Collagen is synthesized and secreted into the extracellular space and organized into striated fibrils according to the tissue type. This study evaluated the concentration of collagen in rabbit skin wounds treated with equine platelet-rich plasma (PRP) and ointment containing gentamicin, sulfanilamide, sulfadiazine, urea, and vitamin A. Twenty-four New Zealand white rabbits aged 2 to 12 months and weighing 3.0kg were included. The animals were allocated equally into four groups and the skin was removed from the thoracic dorsal midline (treated wound) and lumbar (control wound) regions. The thoracic wounds were treated with equine PRP and ointment containing gentamicin, sulfanilamide, sulfadiazine, urea, and vitamin A, and the control group was treated with the ointment alone. For histological and ultrastructural assessment, cutaneous tissue was collected on postoperative days 3 (group I), 7 (group II), 14 (group III), and 21 (group IV). After the evaluation period, in each group, a skin fragment was collected for analysis of the collagen concentration, as well as the collagen fibril diameter and density by transmission electron microscopy. The results indicated that treatment with equine PRP combined with topical application of the ointment was effective in facilitating the maturation of collagen fibrils and the wound healing process.(AU)

Análise ultraestrutural do colágeno de feridas cutâneas de coelhos tratadas com plasma rico em plaquetas de equino / Ultrastructural analysis of the collagen of rabbit skin wounds treated with platelet-rich equine plasma

O colágeno é sintetizado e segregado no espaço extracelular e organizados em fibrilas estriadas de acordo com o tipo de tecido. Utilizaram-se 24 coelhos brancos da raça Nova Zelândia, com idade de 12 meses e com 3,0kg de peso corporal, para avaliar a porcentagem de colágeno das feridas cutâneas tratadas com plasma rico em plaquetas de equino e pomada contendo gentamicina, sulfanilamida, sulfadiazina, ureia e vitamina A. Os animais foram separados em quatro grupos de igual número e submetidos à remoção de pele na região das linhas médias dorsal torácica (feridas tratadas) e lombar (feridas controle). As feridas torácicas foram tratadas com plasma rico em plaqueta de equino e pomada contendo gentamicina, sulfanilamida, sulfadiazina, ureia e vitamina A, e as do grupo controle somente com a pomada. Dos animais do grupo I, foi coletado tecido cutâneo, para a avaliação histológica e a ultraestrutural, com três dias de pós-operatório; dos animais do grupo II, com sete dias; do grupo III, com 14 dias; e do grupo IV, com 21 dias. Decorrido o período de avaliação de cada grupo, foi coletado fragmento de pele para avaliação da porcentagem de colágeno, bem como do diâmetro e da densidade da fibrila de colágeno por microscopia eletrônica de transmissão. O tratamento com PRP de equino associado à aplicação tópica da pomada mostrou-se eficaz na maturação das fibrilas colágenas e na antecipação do processo cicatricial.(AU)

Collagen is synthesized and secreted into the extracellular space and organized into striated fibrils according to the tissue type. This study evaluated the concentration of collagen in rabbit skin wounds treated with equine platelet-rich plasma (PRP) and ointment containing gentamicin, sulfanilamide, sulfadiazine, urea, and vitamin A. Twenty-four New Zealand white rabbits aged 2 to 12 months and weighing 3.0kg were included. The animals were allocated equally into four groups and the skin was removed from the thoracic dorsal midline (treated wound) and lumbar (control wound) regions. The thoracic wounds were treated with equine PRP and ointment containing gentamicin, sulfanilamide, sulfadiazine, urea, and vitamin A, and the control group was treated with the ointment alone. For histological and ultrastructural assessment, cutaneous tissue was collected on postoperative days 3 (group I), 7 (group II), 14 (group III), and 21 (group IV). After the evaluation period, in each group, a skin fragment was collected for analysis of the collagen concentration, as well as the collagen fibril diameter and density by transmission electron microscopy. The results indicated that treatment with equine PRP combined with topical application of the ointment was effective in facilitating the maturation of collagen fibrils and the wound healing process.(AU)

Cartilagem articular, patogênese e tratamento da osteoartrite / Articular cartilage, and pathogenesis and treatment of the osteoarthritis / Cartílago articular, patogénesis y tratamiento de la osteoartritis

A osteoartrite caracteriza-se por dor e claudicação, sendo considerada processo não específico, mais sim uma sequela comum a várias formas de lesão articular, com envolvimento de fatores biológicos e mecânicos. Desta forma, o objetivo da presente revisão foi discorrer sobre alguns aspectos da cartilagem articular (generalidades, histogênese), patogênese da osteoartrite, bem como algumas possibilidades de tratamentos intra-articulares para a osteoatrite. A cartilagem articular, juntamente com o líquido sinovial, tem papel mecânico importante nas articulações diartrodiais. Os condrócitos estão entre os principais componentes da cartilagem articular e são apontados como células altamente diferenciadas com capacidade limitada de proliferação e migração. O outro componente é a matriz extracelular constituída de colágeno tipo II, proteoglicanos, proteínas não colagenosas, glicoproteínas, água e eletrólitos. A osteoartrite é classificada como doença articular não inflamatória, com múltiplas interações bioquímicas e biomecânicas. Todos os componentes da articulação podem ser comprometidos, porém a cartilagem é considerada o tecido alvo. A afecção pode ser classificada como primária, que ocorre predominantemente em animais idosos, e secundária, decorrente de doenças que afetam a articulação e as estruturas de suporte. Entre os tratamentos intra-articulares para a osteoartrite estão a viscossuplementação com ácido hialurônico, o uso de corticosteroides, e a combinação de ácido hialurônico e corticosteroides. Contudo, há ainda várias controvérsias quanto à eficácia.

Osteoarthritis is characterized by pain and lameness, being considered a non-specific process, but rather a common sequel to various forms of joint lesion, with involvement of biological and mechanical factors. Therefore, the purpose of the present review is to discuss some aspects of articular cartilage (generalities and histogenesis), pathogenesis of osteoarthritis, as well as some possibilities of intra-articular treatments for osteoarthritis. The articular cartilage, along with the synovial fluid, have an important mechanical role in diarthrodial joints. Chondrocytes are one of principal components of articular cartilage and are designated as highly differentiated cells with limited proliferation and migration capacity. The other component is the extracellular matrix composed of collagen type II, proteoglycans, non-collagenous proteins, glycoproteins, water and electrolytes. Osteoarthritis is classified as a non-inflammatory joint disease with multiple biochemical and biomechanical interactions. All components of the joint can be compromised, but cartilage is considered the target tissue. The osteoarthritis can be classified as primary, which occurs predominantly in elderly animals, and secondary, due to diseases that affect the joint and supporting structures. Among the intra-articular treatments for osteoarthritis are viscosupplementation with hyaluronic acid, the use of corticosteroids, and the combination of hyaluronic acid and corticosteroids. However, there are still several controversies regarding efficacy.

La osteoartritis se caracteriza por dolor e claudicación, considerándose como un proceso no especifico, y si, una secuela común a varias formas de lesión articular, involucrando factores biológicos e mecánicos. De esta forma, el objetivo de la presente revisión es mencionar algunos aspectos del cartílago articular (generalidades, histogénesis), patogénesis de la osteoartritis, así como algunas posibilidades de tratamientos intra-articulares para la osteoartritis. El cartílago articular, junto con el líquido sinovial, tienen un papel mecánico importante en las articulaciones diartrodiales. Los condrocitos están entre los principales componentes del cartílago articular y son fijados como células altamente diferenciadas con capacidad limitada de proliferación y migración. El otro componente es la matriz extracelular constituida de colágeno tipo II, proteoglicanos, proteínas no colagenosas, glicoproteínas, agua y electrólitos. La osteoartritis es clasificada como una enfermedad articular no inflamatoria, con múltiples interacciones bioquímicas y biomecánicas. Todos los componentes de la articulación pueden ser comprometidos, sin embargo, el cartílago articular es considerado el tejido de interés. La afección puede ser clasificada como primaria, que ocurre predominantemente en animales de edad avanzada, y secundaria, debido a enfermedades que afectan la articulación y las estructuras de soporte. Entre los tratamientos intra-articulares para la osteoartritis esta la viscosuplementación con ácido hialurônico, el uso de corticosteroides, e la combinación de ácido hialurônico e corticosteroides. Sin embargo, hay aun varias controversias en cuanto la eficacia.

Cartilagem articular, patogênese e tratamento da osteoartrite / Articular cartilage, and pathogenesis and treatment of the osteoarthritis / Cartílago articular, patogénesis y tratamiento de la osteoartritis

A osteoartrite caracteriza-se por dor e claudicação, sendo considerada processo não específico, mais sim uma sequela comum a várias formas de lesão articular, com envolvimento de fatores biológicos e mecânicos. Desta forma, o objetivo da presente revisão foi discorrer sobre alguns aspectos da cartilagem articular (generalidades, histogênese), patogênese da osteoartrite, bem como algumas possibilidades de tratamentos intra-articulares para a osteoatrite. A cartilagem articular, juntamente com o líquido sinovial, tem papel mecânico importante nas articulações diartrodiais. Os condrócitos estão entre os principais componentes da cartilagem articular e são apontados como células altamente diferenciadas com capacidade limitada de proliferação e migração. O outro componente é a matriz extracelular constituída de colágeno tipo II, proteoglicanos, proteínas não colagenosas, glicoproteínas, água e eletrólitos. A osteoartrite é classificada como doença articular não inflamatória, com múltiplas interações bioquímicas e biomecânicas. Todos os componentes da articulação podem ser comprometidos, porém a cartilagem é considerada o tecido alvo. A afecção pode ser classificada como primária, que ocorre predominantemente em animais idosos, e secundária, decorrente de doenças que afetam a articulação e as estruturas de suporte. Entre os tratamentos intra-articulares para a osteoartrite estão a viscossuplementação com ácido hialurônico, o uso de corticosteroides, e a combinação de ácido hialurônico e corticosteroides. Contudo, há ainda várias controvérsias quanto à eficácia.(AU)

Osteoarthritis is characterized by pain and lameness, being considered a non-specific process, but rather a common sequel to various forms of joint lesion, with involvement of biological and mechanical factors. Therefore, the purpose of the present review is to discuss some aspects of articular cartilage (generalities and histogenesis), pathogenesis of osteoarthritis, as well as some possibilities of intra-articular treatments for osteoarthritis. The articular cartilage, along with the synovial fluid, have an important mechanical role in diarthrodial joints. Chondrocytes are one of principal components of articular cartilage and are designated as highly differentiated cells with limited proliferation and migration capacity. The other component is the extracellular matrix composed of collagen type II, proteoglycans, non-collagenous proteins, glycoproteins, water and electrolytes. Osteoarthritis is classified as a non-inflammatory joint disease with multiple biochemical and biomechanical interactions. All components of the joint can be compromised, but cartilage is considered the target tissue. The osteoarthritis can be classified as primary, which occurs predominantly in elderly animals, and secondary, due to diseases that affect the joint and supporting structures. Among the intra-articular treatments for osteoarthritis are viscosupplementation with hyaluronic acid, the use of corticosteroids, and the combination of hyaluronic acid and corticosteroids. However, there are still several controversies regarding efficacy.(AU)

La osteoartritis se caracteriza por dolor e claudicación, considerándose como un proceso no especifico, y si, una secuela común a varias formas de lesión articular, involucrando factores biológicos e mecánicos. De esta forma, el objetivo de la presente revisión es mencionar algunos aspectos del cartílago articular (generalidades, histogénesis), patogénesis de la osteoartritis, así como algunas posibilidades de tratamientos intra-articulares para la osteoartritis. El cartílago articular, junto con el líquido sinovial, tienen un papel mecánico importante en las articulaciones diartrodiales. Los condrocitos están entre los principales componentes del cartílago articular y son fijados como células altamente diferenciadas con capacidad limitada de proliferación y migración. El otro componente es la matriz extracelular constituida de colágeno tipo II, proteoglicanos, proteínas no colagenosas, glicoproteínas, agua y electrólitos. La osteoartritis es clasificada como una enfermedad articular no inflamatoria, con múltiples interacciones bioquímicas y biomecánicas. Todos los componentes de la articulación pueden ser comprometidos, sin embargo, el cartílago articular es considerado el tejido de interés. La afección puede ser clasificada como primaria, que ocurre predominantemente en animales de edad avanzada, y secundaria, debido a enfermedades que afectan la articulación y las estructuras de soporte. Entre los tratamientos intra-articulares para la osteoartritis esta la viscosuplementación con ácido hialurônico, el uso de corticosteroides, e la combinación de ácido hialurônico e corticosteroides. Sin embargo, hay aun varias controversias en cuanto la eficacia.(AU)

Comparison of the effects of triamcinolone acetonide or platelet-rich plasma on expression of extracellular matrix-related genes in equine healthy chondrocytes in vitro / Comparação dos efeitos do acetonido de triancinolona ou plasma rico em plaquetas na expressão de genes relacionados à matriz extracelular de condrócitos in vitro de equinos adultos

In healthy cartilage, chondrocytes maintain an expression of collagens and proteoglycans and are sensitive to growth factors and cytokines that either enhance or reduce type II collagen synthesis. In osteoarthritis, pro-inflammatory cytokines, such as IL-6, induce overexpression of metalloproteinases (MMP) and decreasing synthesis of aggrecan. Use of chondroprotectors agents, such as Platelet-Rich Plasma (PRP) and triamcinolone (TA) are alternatives to reduce the progression of joint damage. In this study, we used chondrocytes extracted from metacarpophalangeal joints of healthy horses as the experimental model. Cells were treated in vitro with PRP or TA. No differences were observed between these treatments in comparison to the control group when the expressions of MMP9, MMP13, IL-6 and ACAN genes were evaluated (P<0.05). With these results, we can suggest that the treatments were not deleterious to equine cultured chondrocyte, once they did not stimulate MMPs and IL-6 synthesis or caused changes in ACAN.(AU)

Na cartilagem saudável, os condrócitos mantêm a expressão de colágenos e proteoglicanos, sendo sensíveis a fatores de crescimento e citocinas que aumentam ou reduzem a síntese de colágeno tipo II. Na osteoartrite, citocinas pró-inflamatórias, como a IL-6, estimulam a expressão de metaloproteinases (MMP) e reduzem a síntese de agrecano. O uso de condroprotetores, como o Plasma Rico em Plaquetas (PRP) e triancinolona (TA) é uma alternativa para se reduzir a progressão do dano articular. Neste estudo foram usados condrócitos extraídos das articulações metacarpofalangeanas de equinos saudáveis. As células foram tratadas in vitro com TA ou PRP. Não foram observadas diferenças entre os tratamentos comparando-se com o grupo controle quanto à expressão genética de MMP-9, MMP-13, IL-6 e ACAN (p<0,05). Assim, pode-se sugerir que os tratamentos não foram deletérios ao cultivo de condrócitos, uma vez que não estimularam a síntese de MMP e IL-6 e nem causaram alterações no ACAN.(AU)

Osteogênese Imperfeita em cão jovem da raça pinscher / Osteogenesis Imperfect in an young pinscher dog

Background: Osteogenesis imperfecta is a severe genetic disease rarely described in veterinary medicine. This multisystemic condition is caused by a defect in the production and metabolization of collagen, which implicates in bone fragility. This disease has been described in cattle, sheep, domestic felines, mouse and dogs of different breeds, including collie, golden retriever, beagle, dachshund and chow chow. Animals affected by this condition present multiple fractures without previous occurrence of trauma. Therefore, this report aimed to describe a case of osteogenesis imperfecta type III in a miniature pinscher dog.Case: A 1-year-old male miniature pinscher dog, was admitted for clinical evaluation in Fortaleza, Brazil, with a history of spontaneous fractures without known causes. This animal was maintained indoors, fed on dry feed and presented recurrent events of claudication and pain. In the physical examination, the individual walked solely with the forelimbs, avoiding the use of the hind limbs and presented pain behavior. Bulging of the skull was observed laterally, which promoted a triangular appearance of head and face. Fontanelles were soft, and the eyes presented blueish sclera and corneal opacity. Teeth were small, translucid, fragile and deformed. Radiography images revealed bulging of the calvaria and persistent fontanelles with open cranial sutures. In addition, cranial convolutions were less clear, which was compatible with hydrocephalus. Dental roots were narrow, short and presented partial pulp obliteration. The radiographic contrast of the dentin was low with a reduction of periapical radiolucency. Bone radiopacity was low in the bones of the abdomen and pelvis, in addition to femur. Metaphysis of the right tibia was enlarged and angular. Multiple fractures were identified in the pelvis with the formation of opaque bony calluses and bone marrow sclerosis. Physiological parameters and blood test results were unaltered.[...]

Osteogênese Imperfeita em cão jovem da raça pinscher / Osteogenesis Imperfect in an young pinscher dog

Background: Osteogenesis imperfecta is a severe genetic disease rarely described in veterinary medicine. This multisystemic condition is caused by a defect in the production and metabolization of collagen, which implicates in bone fragility. This disease has been described in cattle, sheep, domestic felines, mouse and dogs of different breeds, including collie, golden retriever, beagle, dachshund and chow chow. Animals affected by this condition present multiple fractures without previous occurrence of trauma. Therefore, this report aimed to describe a case of osteogenesis imperfecta type III in a miniature pinscher dog.Case: A 1-year-old male miniature pinscher dog, was admitted for clinical evaluation in Fortaleza, Brazil, with a history of spontaneous fractures without known causes. This animal was maintained indoors, fed on dry feed and presented recurrent events of claudication and pain. In the physical examination, the individual walked solely with the forelimbs, avoiding the use of the hind limbs and presented pain behavior. Bulging of the skull was observed laterally, which promoted a triangular appearance of head and face. Fontanelles were soft, and the eyes presented blueish sclera and corneal opacity. Teeth were small, translucid, fragile and deformed. Radiography images revealed bulging of the calvaria and persistent fontanelles with open cranial sutures. In addition, cranial convolutions were less clear, which was compatible with hydrocephalus. Dental roots were narrow, short and presented partial pulp obliteration. The radiographic contrast of the dentin was low with a reduction of periapical radiolucency. Bone radiopacity was low in the bones of the abdomen and pelvis, in addition to femur. Metaphysis of the right tibia was enlarged and angular. Multiple fractures were identified in the pelvis with the formation of opaque bony calluses and bone marrow sclerosis. Physiological parameters and blood test results were unaltered.[...](AU)

Equine multinodular pulmonary fibrosis in southern Brazil: pathology and differential diagnosis / Fibrose pulmonar multinodular em equinos no Sul do Rio Grande do Sul: patologia e diagnóstico diferencial

Equine multinodular pulmonary fibrosis (EMPF) diagnosed at the Laboratório Regional de Diagnóstico of Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade Federal de Pelotas (LRD/UFPel), is described. Differential aspects of other pulmonary diseases in horses with pneumonia and interstitial fibrosis were discussed. The disease occurred in a 15-year-old equine that presented with clinical signs of respiratory distress, intermittent fever, anorexia, and dyspnea. Macroscopically, there was enlargement of the lungs with whitish, pale, firm and well-delimited nodules, approximately 7-10 cm in diameter, distributed throughout the parenchyma. Histologically, the lung nodules had alveolar spaces with walls covered by cuboidal epithelium containing macrophages, neutrophils, lymphocytes, hyperplasia of type II pneumocytes and, eventually, multinucleated giant cells. The interstitium was markedly thickened by mature fibrous connective tissue and collagen. There were intranuclear inclusion bodies in the macrophages. The PCR technique for detecting the EHV-5 DNA was positive. In a retrospective study of pneumonia cases in horses with interstitial fibrosis diagnosed in the LRD/UFPel, two animals had macroscopic and histological lesions similar to those with EMPF, but they were negative for EHV-5 in PCR. Four cases diagnosed with pneumonia and interstitial tissue fibrosis had a histological pattern that was different from that observed in the EMPF animal, thus eliminating the possibility of EMPF. It is concluded that EMPF is a sporadic disease that should be considered in cases of respiratory disease in horses. Reports of such cases are important to alert technicians about the occurrence of rare diseases in Brazil. It is also necessary to establish the true role of EHV-5 in the pathogenesis of EMPF. Cases of pulmonary fibrosis such as EMPF, in which the virus is not present, should be studied to establish whether it could be an idiopathic form of the disease.(AU)

Descreve-se a fibrose multinodular pulmonar equina (EMPF) diagnosticado no Laboratório Regional de Diagnóstico da Faculdade de Veterinária da Universidade Federal de Pelotas. Foram discutidos a patologia da doença e os aspectos diferenciais de outras enfermidades pulmonares de equinos que cursam com pneumonia e fibrose intersticial. A doença ocorreu em um equino sem raça definida de 15 anos de idade que apresentou sinais clínicos de dificuldade respiratória febre intermitente, anorexia e dispneia, com evolução de aproximadamente 10 dias. Macroscopicamente havia aumento de volume dos pulmões e nódulos esbranquiçados, pálidos, firmes e bem delimitados, de aproximadamente 7-10 cm de diâmetro, distribuídos pelo parênquima. Histologicamente, o tecido pulmonar apresentava nódulos caracterizados pela presença de espaços alveolares, com paredes revestidas por epitélio cuboidal achatado, contendo macrófagos e neutrófilos e havia, também, linfócitos e hiperplasia de pneumócitos tipo II e eventualmente células gigantes multinuacleadas. O interstício estava acentuadamente espessado por tecido conjuntivo fibroso maduro e por colágeno. Havia corpúsculos de inclusão intranucleares em macrófagos. A técnica de PCR para detecção do DNA de herpes vírus equino-5 (EHV-5) resultou positiva. Em um estudo retrospectivo de casos de pneumonia com fibrose intersticial diagnosticados no LRD entre 2000 e 2015, dois equinos apresentaram lesões macroscópicas e histológicas similares às de EMPF, porém resultaram negativos na PCR para detecção de EHV-5. Quatro casos de pneumonia com fibrose do tecido intersticial apresentaram padrão histológico diverso da EMPF descartando-se a possibilidade de tratar-se da doença. Conclui-se que EMPF é uma enfermidade esporádica, no entanto deve ser levada em consideração em casos de doença respiratória em equinos. A descrição dos casos diagnosticados é importante para alertar técnicos sobre a ocorrência da mesma no Brasil. É necessário estabelecer o real papel do EHV-5 na patogenia da doença. Casos de fibrose pulmonar semelhantes à EMPF em que não esteja presente o vírus, devem ser estudados a fim de ficar estabelecido se poderia ser uma forma idiopática da mesma doença.(AU)

Equine multinodular pulmonary fibrosis in southern Brazil: pathology and differential diagnosis / Fibrose pulmonar multinodular em equinos no Sul do Rio Grande do Sul: patologia e diagnóstico diferencial

Equine multinodular pulmonary fibrosis (EMPF) diagnosed at the Laboratório Regional de Diagnóstico of Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade Federal de Pelotas (LRD/UFPel), is described. Differential aspects of other pulmonary diseases in horses with pneumonia and interstitial fibrosis were discussed. The disease occurred in a 15-year-old equine that presented with clinical signs of respiratory distress, intermittent fever, anorexia, and dyspnea. Macroscopically, there was enlargement of the lungs with whitish, pale, firm and well-delimited nodules, approximately 7-10 cm in diameter, distributed throughout the parenchyma. Histologically, the lung nodules had alveolar spaces with walls covered by cuboidal epithelium containing macrophages, neutrophils, lymphocytes, hyperplasia of type II pneumocytes and, eventually, multinucleated giant cells. The interstitium was markedly thickened by mature fibrous connective tissue and collagen. There were intranuclear inclusion bodies in the macrophages. The PCR technique for detecting the EHV-5 DNA was positive. In a retrospective study of pneumonia cases in horses with interstitial fibrosis diagnosed in the LRD/UFPel, two animals had macroscopic and histological lesions similar to those with EMPF, but they were negative for EHV-5 in PCR. Four cases diagnosed with pneumonia and interstitial tissue fibrosis had a histological pattern that was different from that observed in the EMPF animal, thus eliminating the possibility of EMPF. It is concluded that EMPF is a sporadic disease that should be considered in cases of respiratory disease in horses. Reports of such cases are important to alert technicians about the occurrence of rare diseases in Brazil. It is also necessary to establish the true role of EHV-5 in the pathogenesis of EMPF. Cases of pulmonary fibrosis such as EMPF, in which the virus is not present, should be studied to establish whether it could be an idiopathic form of the disease.(AU)

Descreve-se a fibrose multinodular pulmonar equina (EMPF) diagnosticado no Laboratório Regional de Diagnóstico da Faculdade de Veterinária da Universidade Federal de Pelotas. Foram discutidos a patologia da doença e os aspectos diferenciais de outras enfermidades pulmonares de equinos que cursam com pneumonia e fibrose intersticial. A doença ocorreu em um equino sem raça definida de 15 anos de idade que apresentou sinais clínicos de dificuldade respiratória febre intermitente, anorexia e dispneia, com evolução de aproximadamente 10 dias. Macroscopicamente havia aumento de volume dos pulmões e nódulos esbranquiçados, pálidos, firmes e bem delimitados, de aproximadamente 7-10 cm de diâmetro, distribuídos pelo parênquima. Histologicamente, o tecido pulmonar apresentava nódulos caracterizados pela presença de espaços alveolares, com paredes revestidas por epitélio cuboidal achatado, contendo macrófagos e neutrófilos e havia, também, linfócitos e hiperplasia de pneumócitos tipo II e eventualmente células gigantes multinuacleadas. O interstício estava acentuadamente espessado por tecido conjuntivo fibroso maduro e por colágeno. Havia corpúsculos de inclusão intranucleares em macrófagos. A técnica de PCR para detecção do DNA de herpes vírus equino-5 (EHV-5) resultou positiva. Em um estudo retrospectivo de casos de pneumonia com fibrose intersticial diagnosticados no LRD entre 2000 e 2015, dois equinos apresentaram lesões macroscópicas e histológicas similares às de EMPF, porém resultaram negativos na PCR para detecção de EHV-5. Quatro casos de pneumonia com fibrose do tecido intersticial apresentaram padrão histológico diverso da EMPF descartando-se a possibilidade de tratar-se da doença. Conclui-se que EMPF é uma enfermidade esporádica, no entanto deve ser levada em consideração em casos de doença respiratória em equinos. A descrição dos casos diagnosticados é importante para alertar técnicos sobre a ocorrência da mesma no Brasil. É necessário estabelecer o real papel do EHV-5 na patogenia da doença. Casos de fibrose pulmonar semelhantes à EMPF em que não esteja presente o vírus, devem ser estudados a fim de ficar estabelecido se poderia ser uma forma idiopática da mesma doença.(AU)

AVALIAÇÃO DA MEMBRANA DE COLÁGENO TIPO II NA CICATRIZAÇÃO DE FERIDAS CUTÂNEAS EXCISIONAIS EM RATOS WISTAR

Novos estudos apontam a produção de curativos, sintéticos ou com biomateriais, que possam influenciar de maneira benéfica na maioria dos tipos de feridas, seja por liberação de substâncias para a cicatrização ou por entrega de drogas nas células. A utilização de colágeno para esse fim está sendo amplamente estudada, a principal vantagem desse composto é sua alta degradabilidade e biocompatibilidade. O objetivo desse estudo foi verificar se o processo cicatricial da pele submetida à lesão cutânea induzida em ratos Wistar, responde positivamente usando membrana de colágeno tipo II não hidrolisado como curativo. Utilizaram-se 52 ratos da linhagem Wistar. Em cada animal foi realizada uma ferida com um trépano de 10mm na altura da cernelha. Os animais foram distribuídos em 3 grupos, grupo Controle, grupo Controle Positivo e grupo Tratamento. Foram avaliadas as respostas da cicatrização de maneira macro e microscópicas ao 5, 10 e 15 dias. As analises macroscópicas levaram em conta a área da ferida pós tratamento, já as análises microscópicas avaliaram a porcentagem de colágeno e características de reepitelização, infiltrado linfoplasmocitário e presença de crosta. Pode-se perceber que o tratamento com colágeno tipo II foi benéfico em relação a produção de colágeno na ferida aos 15 dias, além disso ao 10º dia pode-se observar uma taxa maior de reepitelização, diminuição do infiltrado linfoplasmocitário e ausência de crosta em relação aos outros grupos. O uso de UCII em feridas excisionais em ratos mostrou se eficaz em relação a melhora na produção final de colágeno e iniciando a fase proliferativa mais rapidamente.

New studies point to the production of dressings, synthetic or with biomaterials, which can beneficially influence most types of wounds, either by releasing substances for healing or by delivering drugs into cells. The use of collagen for this purpose is being widely studied, the main advantage of this compound is its high degradability and biocompatibility. The aim of the study was to verify whether the healing process of the skin submitted to cutaneous injury induced in Wistar rats responds positively using non-hydrolyzed type II collagen membrane as a dressing. 52 Wistar rats were used. Each animal was wounded with a 10mm burr at the height of the withers. The animals were divided into 3 groups, Control group, Positive Control group and Treatment group. Macro and microscopic healing responses were evaluated at 5, 10 and 15 days. The macroscopic analyzes took into account the area of the wound after treatment, while the microscopic analyzes assess the percentage of collagen and characteristics of reepithelialization, lymphoplasmacytic infiltrate and the presence of crust. It can be seen that the treatment with collagen type II was beneficial in relation to the production of collagen in the wound at 15 days, in addition to the 10th day, a higher rate of re-epithelialization, decreased lymphoplasmacytic infiltrate and absence of crust can be observed in relation to to other groups. The use of UCII in excisional wounds in rats shows effectively in relation to the improvement in the final production of collagen and initiating a more rapidly proliferative phase.

Efeito da taxa de crescimento nos períodos de pré-desmame, pós-desmame e engorda sobre os atributos da carcaça e carne em sistemas de recria e engorda de bovinos Nelore

Objetivou-se avaliar as características de carcaça e carne de bovinos Nelore terminados em confinamento, submetidos a distintos ganhos de peso alto (H) e baixo (L) no período pré-desmame (PREW) e pós-desmame (PROW). Os animais foram separados em quatro tratamentos: PREW_H, PREW_L, PROW_H e PROW_L. Foram utilizados 283 bovinos machos, não castrados, inseridos no Programa da Associação Nacional de Criadores e Pesquisadores (ANCP). As comparações das taxas de ganhos foram realizadas com base em grupos de animais agrupados por ano de nascimento e época (seca ou chuvas) do ano, os quais foram manejados de forma similar dentro de um determinado rebanho, formando 20 grupos de contemporâneos do desmame ao sobreano, e em seguida criados na fase da cria e recria em sistema a pasto, suplementados com sal mineral e terminados em confinamento por 90 dias. Durante o confinamento, a relação volumoso:concentrado variou de 50:50 a 30:70, dependendo da fazenda. A dieta dos animais consistiu de silagem de milho integral ou de planta de sorgo, além de milho em grãos e / ou sorgo moído como concentrado energético e soja como concentrado proteico. O grupo de contemporâneos ao desmame foi composto por animais pertencentes à mesma fazenda, ano de nascimento, grupo de manejo ao pré-desmame e sexo, e o grupo de contemporâneo pós-desmame por animais pertencentes à mesma fazenda, ano de nascimento, grupo de manejo ao sobreano e sexo. Os animais foram classificados em: PREW_L e PREW_H, obtida pela diferença entre o peso ajustado aos 120 e 240 dias de idade e PROW_L e PROW_H, calculada pela diferença entre o peso ajustado aos 240 e 450 dias de idade. Para a análise da qualidade da carcaça e da carne, utilizou-se um total de 46 animais (PREW_L = 26, PREW_H = 20, PROW_L = 30 e PROW_H = 16) e peso vivo final de abate 580 ± 65,17 kg. Os animais foram selecionados considerando os valores extremos de desempenho dentro dos grupos a serem terminados em confinamento e posteriormente abatidos aos 24 meses de idade. No abate, foram avaliados o peso da carcaça quente (HCW), rendimento de carcaça quente (DP), e para a identificação do tipo de fibra muscular (MyHC) por SDS-PAGE foram coletadas amostras do músculo Longissimus thoracis (LT) e Semitendinosus (ST). Durante a desossa analisou-se o valor do pH 24 horas, área de olho de lombo (REA), espessura de gordura subcutânea (FT) e marmorização (MARM). Amostras do músculo LT entre as 12ª e 13ª costelas foram coletadas para análises da força de cisalhamento (WBSF), maturadas por sete dias a 0-2ºC, perdas por cocção (CL), cor da carne, perfil de ácidos graxos (FA), lipídeos totais (LT), colesterol (Cho), comprimento de sarcômero (SL), colágeno total (TCol), colágeno solúvel (SCol) e colágeno insolúvel (ICol). Após as análises, constatou-se que a taxa de ganho de peso influenciou o HCW, FT e SL (p < 0.05). No entanto, não foram observadas diferenças para pH, REA, MARM, WBSF, cor da carne e LT (p > 0.05). A carne de animais PROW_H apresentou melhor porcentagem de alguns ácidos graxos considerados desejáveis à saúde humana (p <0.05). Observamos poucos resultados para a interação da taxa de ganho de peso entre as fases PREW x PROW para o ácido vacênico (18:1 trans-11), EPA- Eicosapentaenoico, (22:5 n3), ácido graxo linolênico conjugado CLA e isomêro CLA trans 10 cis 12. A taxa de ganho de peso não influenciou o Cho, tipo de fibras MyHC (I e II) e componentes do tecido conjuntivo (TCol,ICol e SCol) (p > 0.05). No entanto, para o TCol foi encontrada correlação negativa com HCQ, CL, MyHC-I, e correlação positiva para MyHC-II. Os resultados desse estudo mostram que a utilização de critérios de seleção, como taxa de ganho de peso nas fases pré e pós-desmame, em bovinos Nelore, poderia ser uma alternativa na obtenção de bons índices de qualidade de carne e características de carcaça. Sendo assim, a taxa de ganho de peso para as características de carcaça melhoradas, como HCW, SL e alguns perfis de FA, sugerem que os animais PROW_H apresentaram carne favorável à saúde humana, com condições de atender a demanda do consumidor por produtos de alta qualidade e da indústria de carne bovina.

The objective of this study was to evaluate the carcass, and meat traits of Nellore cattle finished in a feedlot, submitted to different high (H) and low (L) weight gains in the pre-weaning (PREW) and post-weaning (PROW) periods. The animals were separated into four treatments: PREW_H, PREW_L, PROW_H, and PROW_L. Data of 283 non-castrated males from the National Association of Breeders and Researchers Association (ANCP, Ribeirão Preto, Brazil) were used. Comparisons of weight gain rates were made based on groups of animals grouped by year of birth and season of the year, which were handled similarly within a given herd, forming 20 contemporary groups from weaning to yearling, and then reared at the stage of rearing and rearing in a pasture system, supplemented with mineral salt and finished in confinement for 90 days. During the feedlot period, the forage: concentrate ratio ranged from 50:50 to 30:70, depending on the farm. The animals' diet consisted of whole corn silage or sorghum plant, in addition to corn grain and/or ground sorghum as an energy concentrate and soy as a protein concentrate. The contemporary groups at weaning were composed of animals belonging to the same farm, year of birth, weaning management group, and sex. The postweaning contemporary group was formed by animals belonging to the same farm, year of birth, group of yearling management, and sex. The animals were classified into PREW_L and PREW_H by the difference between the adjusted weight at 120 and 240 days of age and PROW_L and PROW_H, calculated by the difference between the adjusted weight at 240 and 450 days of age. For the analysis of carcass and meat quality, a total of 46 animals (PREW_L = 26, PREW_H = 20, PROW_L = 30, and PROW_H = 16) and final live weight 580 ± 65.17 kg were used. The animals were selected considering the extreme performance values within the groups to be finished in feedlot and subsequently slaughtered at 24 months of age. At the slaughterhouse, we measured the hot carcass weight (HCW), hot carcass yield (DP), and collected samples of the Longissimus thoracis (LT) and Semitendinosus (ST) muscle samples to identify the type of muscle fiber (MyHC) by SDS-PAGE. During deboning, the pH value was analyzed 24 hours, the rib eye area (REA), subcutaneous fat thickness (FT), and marbling (MARM). Samples of the LT muscle between the 12th and 13th ribs were collected for shear force analysis (WBSF), matured for seven days at 0-2º C, cooking losses (CL), meat color, fatty acid profile (FA), total lipids (LT), cholesterol (Cho), sarcomere length (SL), total collagen (TCol), soluble collagen (SCol) and insoluble collagen (ICol). After the analysis, it was found that the weight gain rate influenced HCW, FT, and SL (p< 0.05). However, no differences were observed for pH, OER, MARM, WBSF, meat color, and LT (p> 0.05). The meat of PROW_H animals showed a better percentage of some fatty acids considered desirable to human health, (p <0.05). The statistical analyzes showed that there was an interaction of the weight gain rate between the PREW x PROW phases with the vaccenic acid (18: 1 trans-11), EPAEicosapentaenoic acid, (22: 5 n3), acid conjugated linolenic fat CLA and isomer CLA trans 10 cis 12. The rate of weight gain did not influence Cho, type of MyHC fibers (I and II), and connective tissue components (TCol, ICol, and SCol) (p> 0.05). However, for TCol a negative correlation was found with HCW, CL, MyHC-I, and a positive correlation for MyHC-II. The results of this study show that the use of selection criteria such as the rate of weight gain in the pre-and post-weaning phases in Nellore cattle could be an alternative to improve carcass andmeat quality traits. Thus, the rate of weight gain for improved carcass traits, such as HCW, SL and FA, suggests that PROW_H animals presented meat favorable to human health, able to meet consumer demand for high-quality products and the meat industry beef.

Morphology of the testes and epididymal ducts in the pampas cat Leopardus colocolo (Molina, 1782) / Morfologia dos testículos e ductos epididimários do gato-palheiro Leopardus colocolo (Molina, 1782)

The pampas cat Leopardus colocolo (Molina, 1782) is a species of the Felidae family, widely distributed in South America, included on CITES Appendix II and classified as Near Threatened on the IUCN Red List, with population trend decreasing. Based on this information, the objective of this study is to describe morphologically the testes and epididymal ducts of pampas cat. The animal, coming from the Federal University of Mato Grosso Zoo, Brazil, had died after anesthesia procedure and the male reproductive system was dissected to collect the testicles. The samples taken were fragmented and histologically examined. From the microscopic analysis of the testes were identified: vaginal and tunica albuginea, formed by dense connective tissue modeled with large amount of collagen fibers. The tunica albuginea fibrous septa emits into the body. The seminiferous tubules are coiled and coated internally by spermatogenic epithelium consisting of Sertoli cells, surrounded by a basement membrane in the presence of myoid cells. The interstitial tissue between the seminiferous tubules, is composed of loose connective tissue, blood and lymph vessels, and Leydig cells in polyhedral shape. The epididymal ducts showed pseudostratified columnar epithelium with secretory cells of which stereocilia design, situated on a basement membrane filled by myoid cells. This epithelium has principal and basal cells, the main cell design stereocilia toward the lumen of the epididymal duct.(AU)

O gato-palheiro Leopardus colocolo (Molina, 1782) é uma espécie da família Felidae, com ampla distribuição na América do Sul. Está incluido no Appendix II da CITES e classificada como Próxima da Extinção na Lista Vermelha da IUCN, apresentando população em decrescimo. Com base nessas informações o objetivo deste estudo é caracterizar morfologicamente os testículos e ductos epididimários de L. colocolo. O animal, oriundo do Zoológico da Universidade Federal de Mato Grosso, Brasil, veio a óbito após procedimento anestésico e o sistema reprodutor masculino foi dissecado para coleta dos testículos. As amostras retiradas foram fragmentadas e histologicamente examinadas. A partir das análises microscópicas dos testículos foram identificados: a túnica vaginal e albugínea, formada por tecido conjuntivo denso modelado, com grande quantidade de fibras de colágeno. A túnica albugínea emite septos fibrosos para o interior do órgão. Os túbulos seminíferos são enovelados e revestidos internamente por epitélio estratificado constituído por células espermatogênicas e células somáticas de Sertoli, envolvidos por uma membrana basal com presença de células mioides. O tecido intersticial, entre os túbulos seminíferos, é constituído de tecido conjuntivo do tipo frouxo com vasos sanguíneos e linfáticos, e células de Leydig em formato poliédrico. Os ductos epididimários apresentaram epitélio cilíndrico pseudoestratificado com células secretoras dos quais projetam estereocílios, situados sobre uma membrana basal repleta por células mióides. Este epitélio apresenta células principais e basais, cujas células principais projetam estereocílios em direção ao lúmen do ducto epididimário.(AU)

Morphology of the testes and epididymal ducts in the pampas cat Leopardus colocolo (Molina, 1782) / Morfologia dos testículos e ductos epididimários do gato-palheiro Leopardus colocolo (Molina, 1782)

The pampas cat Leopardus colocolo (Molina, 1782) is a species of the Felidae family, widely distributed in South America, included on CITES Appendix II and classified as Near Threatened on the IUCN Red List, with population trend decreasing. Based on this information, the objective of this study is to describe morphologically the testes and epididymal ducts of pampas cat. The animal, coming from the Federal University of Mato Grosso Zoo, Brazil, had died after anesthesia procedure and the male reproductive system was dissected to collect the testicles. The samples taken were fragmented and histologically examined. From the microscopic analysis of the testes were identified: vaginal and tunica albuginea, formed by dense connective tissue modeled with large amount of collagen fibers. The tunica albuginea fibrous septa emits into the body. The seminiferous tubules are coiled and coated internally by spermatogenic epithelium consisting of Sertoli cells, surrounded by a basement membrane in the presence of myoid cells. The interstitial tissue between the seminiferous tubules, is composed of loose connective tissue, blood and lymph vessels, and Leydig cells in polyhedral shape. The epididymal ducts showed pseudostratified columnar epithelium with secretory cells of which stereocilia design, situated on a basement membrane filled by myoid cells. This epithelium has principal and basal cells, the main cell design stereocilia toward the lumen of the epididymal duct.(AU)

O gato-palheiro Leopardus colocolo (Molina, 1782) é uma espécie da família Felidae, com ampla distribuição na América do Sul. Está incluido no Appendix II da CITES e classificada como Próxima da Extinção na Lista Vermelha da IUCN, apresentando população em decrescimo. Com base nessas informações o objetivo deste estudo é caracterizar morfologicamente os testículos e ductos epididimários de L. colocolo. O animal, oriundo do Zoológico da Universidade Federal de Mato Grosso, Brasil, veio a óbito após procedimento anestésico e o sistema reprodutor masculino foi dissecado para coleta dos testículos. As amostras retiradas foram fragmentadas e histologicamente examinadas. A partir das análises microscópicas dos testículos foram identificados: a túnica vaginal e albugínea, formada por tecido conjuntivo denso modelado, com grande quantidade de fibras de colágeno. A túnica albugínea emite septos fibrosos para o interior do órgão. Os túbulos seminíferos são enovelados e revestidos internamente por epitélio estratificado constituído por células espermatogênicas e células somáticas de Sertoli, envolvidos por uma membrana basal com presença de células mioides. O tecido intersticial, entre os túbulos seminíferos, é constituído de tecido conjuntivo do tipo frouxo com vasos sanguíneos e linfáticos, e células de Leydig em formato poliédrico. Os ductos epididimários apresentaram epitélio cilíndrico pseudoestratificado com células secretoras dos quais projetam estereocílios, situados sobre uma membrana basal repleta por células mióides. Este epitélio apresenta células principais e basais, cujas células principais projetam estereocílios em direção ao lúmen do ducto epididimário.(AU)

Avaliação in vitro de condrócitos da cartilagem articular e da diferenciação osteogênica das células tronco da medula óssea extraídas da prole de ratas tratadas com etanol

Foram realizados dois estudos para avaliar os efeitos do consumo materno de etanol sobre os condrócitos da cartilagem articular e na diferenciação osteogênica das células tronco mesenquimais da medula óssea (CTM-MO) da prole. Foram utilizadas 13 ratas Wistar adultas distribuídas em dois grupos experimentais, grupo controle e o grupo tratado com etanol. As ratas do grupo etanol e controle, receberam por gavagem diária, a partir do nono dia de gestação, solução alcoólica 40% e água destilada, respectivamente até o trigésimo dia de lactação. No dia do parto, foram eutanasiados quatro neonatos por fêmea e, aos 30 dias de lactação, três filhotes por fêmea. O primeiro estudo avaliou, in vitro, o efeito do consumo materno de etanol sobre os condrócitos da cartilagem articular. Os condrócitos foram extraídos das cartilagens articulares e cultivados em meio condrogênico por sete, 14 e 21 dias. Foram realizados os testes de conversão do MTT, atividade de fosfatase alcalina, porcentagem de células por campo e porcentagem de áreas PAS+ em cultura 3D. Aos 21 dias, foi realizada a quantificação dos transcritos gênicos para agrecano, Sox-9, colágeno tipo II, colágeno X, Runx-2 e VEGF pelo RT-PCR em tempo real. O segundo estudo avaliou o efeito do consumo materno de etanol durante a gestação e lactação sobre a diferenciação osteogênica CTM-MO dos filhotes ao desmame. As CTM-MO foram extraídas dos membros pélvicos e cultivadas em meio osteogênico por sete, 14 e 21 dias. Foram realizados os testes de conversão do MTT, atividade de fosfatase alcalina e porcentagem de células por campo. Aos 21 dias, foram realizados a quantificação do tamanho médio dos nódulos mineralizados e a quantificação dos transcritos gênicos para osteopontina, osteocalcina, BMP-2, Runx-2 e colágeno tipo I por RT-PCR em tempo real. As médias foram comparadas pelo teste t de student e as diferenças foram consideradas significativas se p<0,05. Os neonatos das mães que receberam etanol foram menos pesados quando comparados aos neonatos controle. A cultura dos condrócitos do grupo etanol apresentou maior conversão de MTT, maior atividade de fosfatase alcalina e maior porcentagem de células relação ao grupo controle em todos os períodos. Não houve diferença entre ambos os grupos na porcentagem de áreas PAS+ em cultura 3D. Houve maior expressão de colágeno tipo II e menor expressão de Sox-9 no grupo etanol 15 em relação ao grupo controle. O peso dos filhotes, ao desmame, das mães que receberam etanol foi significativamente menor quando comparado ao controle. As CTM-MO do grupo etanol apresentaram menor conversão de MTT aos sete dias de diferenciação osteogênica porém maior atividade de fosfatase alcalina, maior porcentagem de células, maior tamanho médio dos nódulos mineralizados bem como maior expressão de BMP-2, osteopontina e osteocalcina. Conclui-se que o consumo materno de etanol durante a gestação e lactação altera, in vitro, o fenótipo e a atividade de síntese dos condrócitos dos neonatos bem como aumenta a diferenciação osteogênica das CTM-MO da prole ao desmame

Two studies were performed to evaluate the effects of maternal ethanol consumption on articular cartilage chondrocytes and on osteogenic differentiation of offspring bone marrow mesenchymal stem cells (BMMSCs). Thirteen adult female Wistar rats were divided into two experimental groups, the control group and the ethanol-treated group. The rats of the ethanol and control group received by daily gavage, from the ninth day of gestation, 40% alcohol solution and distilled water, respectively until the thirtieth day of lactation. On the day of delivery, four newborns were euthanized per female and, at 30 days of lactation, three pups per female. The first study evaluated in vitro the effect of maternal ethanol consumption on articular cartilage chondrocytes. Chondrocytes were extracted from articular cartilage and cultivated in chondrogenic medium for seven, 14 and 21 days. MTT conversion tests, alkaline phosphatase activity, percentage of cells per field and percentage of PAS+ areas in 3D culture were performed. At 21 days, the quantification of gene transcripts for agrecan, Sox-9, collagen type II, collagen X, Runx-2 and VEGF was performed by real-time RT-PCR. The second study evaluated the effect of maternal ethanol consumption during pregnancy and lactation on BMMSCs osteogenic differentiation of pups at weaning. The BMMSCs were extracted from the pelvic limbs and cultured in osteogenic medium for seven, 14 and 21 days. MTT conversion, alkaline phosphatase activity and cell percentage per field tests were performed. At 21 days, the average size of the mineralized nodules was quantified and the gene transcripts were quantified for osteopontin, osteocalcin, BMP-2, Runx-2 and collagen I by real-time RT-PCR. Means were compared by Student's t-test and differences were considered significant if p <0.05. Neonates of mothers receiving ethanol were less heavy when compared to control neonates. The chondrocyte culture of the ethanol group showed higher MTT conversion, higher alkaline phosphatase activity and higher percentage of cells compared to the control group in all periods. There was no difference between both groups in the percentage of PAS+ areas in 3D culture. There was higher expression of collagen type II and lower expression of Sox-9 in the ethanol group compared to the control group. The weight of pups at weaning of mothers receiving ethanol was significantly lower when compared to control. BMMSCs ethanol group showed lower MTT conversion after seven days of osteogenic differentiation but 17 higher alkaline phosphatase activity, increased percentage of cells larger average size of mineralized nodules as well as increased expression of BMP-2, osteopontin and osteocalcin. In conclusion, maternal ethanol consumption during pregnancy and lactation alters, in vitro, the phenotype and chondrocyte synthesis activity of neonates, as well as increases the osteogenic differentiation of BMMSCs from weaning offspring

PARÂMETROS MORFOFUNCIONAIS DO TECIDO OVARIANO SUBMETIDO AO TRANSPLANTE HETEROTÓPICO

O transplante de tecido ovariano é a principal alternativa para a retomada da função endócrina e reprodutiva em pacientes jovens candidatos ao tratamento quimioterápico. Resultados promissores e nascimentos até o momento foram alcançados. No entanto, um protocolo eficiente para transportar e enxertar o tecido ovariano ainda não está estabelecido. Portanto, o objetivo da presente tese foi investigar os principais fatores envolvidos nos procedimentos de conservação e enxerto, divididos em duas fases. A fase I teve como objetivo investigar o efeito dos sítios heterotópicos superficiais subcutâneo (SC) e intramuscular (IM) sobre a viabilidade tecidual, impacto sobre os folículos ovarianos e ao estroma, e favorecimento da revascularização após 7 ou 15 dias de transplante utilizando o modelo caprino. Uma porcentagem aumentada de folículos em desenvolvimento foi observada nos grupos enxertados (P< 0,05). Foi observada uma forte redução na densidade folicular e de células estromais, principalmente após 15 dias de transplante (P < 0,05). Proporções semelhantes de fibras colágenas tipo I foram observadas após 7 dias e de tipo III após 15 dias, independentemente do sítio. Além disso, a fragmentação do DNA tecidual foi semelhante após 15 dias de enxerto. Observaram-se associações positivas entre a densidade de células estromais e a deposição de fibras colágenas tipo I com a porcentagem de folículos normais nos grupos enxertados. Não foram encontradas diferenças entre a dinâmica vascular durante o período de enxertia. Concluiu-se que ambos os locais promovem taxa de desenvolvimento folicular semelhante, sugerindo que danos e alterações na composição do estroma são potenciais biomarcadores da viabilidade do enxerto. A fase II teve como objetivo avaliar o efeito da suplementação de VEGF ao meio de transporte de tecido ovariano bovino a 4º durante 24h. Para isso, tecidos ovarianos bovinos foram coletados e subdividos nos grupos (i) a fresco: controle fresco, transplante a fresco; (ii) resfriados: controle resfriado, resfriado e transplantado, e resfriado e cultivado; (iii) resfriados na presença de 50 ng/ml de VEGF: controle resfriado+, resfriado+ e transplantado, e resfriado+ e cultivado. Observou-se que o resfriamento com VEGF proporcionou maior porcentagem (P <0,05) de folículos morfológicos normais e o desenvolvimento de folículos após 7 dias de cultivo ou transplante em relação ao resfriamento sem suplementação. Além disso, tecidos ovarianos pré-incubados com VEGF após o transplante apresentaram maior sobrevivência folicular, desenvolvimento e densidade folicular e de células estromais quando comparados ao transplante fresco (P<0,05). Observou-se aumento da deposição de fibras de colágeno tipo I e redução de fibras de colágeno tipo III no tratamento resfriado com VEGF seguido de transplante em relação a todos os outros tratamentos (P< 0,05), exceto no transplante fresco. Além disso, uma imunoquantificação semelhante de PCNA foi encontrada entre tecidos ovarianos pré-incubados com VEGF após enxerto ou cultivo (P> 0,05) e menor que os outros tratamentos (P < 0,05). Concluiu-se que a presença de VEGF antes do transplante ou do cultivo in vitro pode favorecer a viabilidade das estruturas foliculares.

Ovarian tissue transplantation is the main alternative for the resumption of endocrine and reproductive function in young patients who are candidates for chemotherapy treatment. Promising results and births to date were achieved, however, an efficient protocol to transport and engraft the ovarian tissue still not stablished. Therefore, the aim of the present thesis was to investigate the main factors involved in conservation and engraftment procedures, divided in 2 phases. Phase I aimed to investigate the effect of subcutaneous (SC) and intramuscular (IM) superficial heterotopic sites on tissue viability, impact on ovarian follicles and stroma, and favoring revascularization after 7 or 15 days of transplantation using the model Goat model. An increased percentage of developing follicles was observed in grafted groups. A strong reduction in follicular and stromal cell density was observed, especially after 15 days of transplantation (P< 0.05). Similar proportions of collagen fibers type I was observed after 7 days and type III after 15 days, regardless of site. Also, DNA fragmentation was similar after 15 days of grafting. Positive associations were observed among stromal cell density and deposition of type I collagen fibers with the percentage of normal follicles in grafted groups. No differences were found among vascular dynamics during grafting period. It was concluded that both sites promote similar follicular development rate, suggesting that damage and changes in stromal composition are potential biomarkers of graft viability. Phase II aimed to evaluate the effect of supplementing VEGF to the transport medium of bovine ovarian tissue at 4º for 24h. For this, bovine ovarian tissues were collected and subdivided into groups (i) fresh: fresh control, fresh transplant; (ii) colds: control cold, cooled and transplanted, and cooled and cultivated; (iii) presence of 50 ng / ml of VEGF: control cooled +, cooled + and transplanted, and cooled + and cultured. It was observed that cooling with VEGF provided a higher percentage (P <0.05) of morphological normal follicles and the developmental rate after 7 days of in vitro culture or transplantation in relation to cooling without supplementation. In addition, ovarian tissues pre-incubated with VEGF after transplantation showed greater follicular survival, follicular and stromal cell development and density when compared to fresh transplantation (P <0.05). There was an increase in the deposition of type I collagen fibers and a reduction in type III collagen fibers in the cooled treatment+ VEGF followed by transplantation in relation to all other treatments (P <0.05), except for fresh transplantation. In addition, a similar immunoquantification of PCNA was found among ovarian tissues pre-incubated with VEGF after grafting or in vitro culture (P> 0.05) and lower than the other treatments (P <0.05). It was concluded that the presence of VEGF prior to transplantation or in vitro culture may favor the viability of follicular structures.

ANÁLISES HISTOLÓGICAS E IMUNOCELULARES EM JOELHOS DE RATOS COM OSTEOARTROSE INDUZIDA APÓS USO DE CLODRONATO LIPOSSOMA

A osteoartrite de joelho é uma das doenças que mais causa incapacidade no mundo. Apresenta fisiopatologia complexa, onde uma série de interações mecânicas e inflamatórias promovem a destruição da superfície articular, sinovite, rigidez e perda de função. O diagnóstico é baseado em sinais clínicos e de imagem, geralmente é tardio e em fases onde o processo já se encontra irreversível. O objetivo de nosso estudo foi analisar comparativamente, alterações da cartilagem articular em joelhos de ratos com osteoartrite induzida que receberam infiltração intra-articular de clodronato revestido em lipossoma, procurando correlacionar as alterações estruturais precoces da cartilagem articular com a concentração de um biomarcador sérico da degradação do colágeno tipo II, da presença no soro da citocina Interleucina 10 (IL-10) e identificar os possíveis efeitos benéficos e preventivos na osteoartrite por meio da inativação dos macrófagos da superfície da sinóvia. Foram utilizados nos experimentos 21 ratos Wistar, divididos em 3 grupos. Um grupo designado de controle, não recebeu nenhum tipo de tratamento, nos outros 2 grupos se induziu a osteoartrose (OA) por meio da transecção do ligamento cruzado anterior (TLCA). Nos grupos submetidos a TLCA, um grupo (n=7) recebeu infiltração intra-articular no joelho de clodronato revestido em lipossoma e no outro grupo (n=7) solução fisiológica, estes procedimentos ocorreram sete dias anteriores ao procedimento cirúrgico. Durante o experimento amostras de sangue foram colhidas para avaliações laboratoriais, no sétimo e no vigésimo primeiro dia de pós-operatório (PO), quando os animais foram eutanasiados e coletado material para histologia. Os resultados identificaram que o biomarcador de degradação da matriz extracelular não foi capaz de identificar as alterações precoces na cartilagem no tempo adotado para o experimento, que não foi possível determinar concentrações significativas de IL-10 sistêmica neste período, que a técnica empregada na indução osteoartose é uma metodologia adequada a este tipo de estudo, e que a histologia tem papel fundamental na identificação das alterações iniciais de implantação da osteoartrite. Achado importante a ser destacado é que o uso do clodronato lipossoma parece ter um efeito protetor sobre a cartilagem articular.

The knee osteoarthritis is one of the most disabling diseases in the world. It presents complex pathophysiology, where a series of mechanical and inflammatory interactions promote the destruction of the joint surface, synovitis, stiffness and loss of function. The diagnosis depends of clinical and imaging signs, it is usually late and at a stage where the process has already irreversible. The aim of our study was to comparatively analyze changes in articular cartilage in the knees of rats with induced osteoarthritis that received intra-articular infiltration of liposome-coated clodronate, seeking to correlate the early structural changes in articular cartilage with the concentration of serum degradation biomarker collagen, the presence in the serum of the cytokine Interleukin 10 (IL-10) and to identify the possible beneficial and preventive effects in osteoarthritis by inactivating macrophages on the surface of the synovium. Twenty-one Wistar rats were used in the experiments, divided into 3 groups. One group, designated as control, did not receive any type of treatment, the other 2 groups induced osteoarthritis (OA) through transection of anterior cruciate ligament (TLAC). In the groups submitted to TLAC, one group (n = 7) received intraarticular knee infiltration with clodronate liposome and the other group (n = 7) received saline solution, these procedures occurred seven days before the TLAC surgical procedure. During the experiment, blood samples were collected for laboratory evaluation on the seventh day and on the twenty-first postoperative day (PO) when the animals were euthanized and material for histology was collected. The results identified that the extracellular matrix degradation biomarker was not able to identify early changes in cartilage in the time adopted for the experiment, that it was not possible to determine significant concentrations of IL-10 systemic in this period, that the technique employed in inducing osteoarthritis is adequate methodology for this type of study, and that histology has a fundamental role in the identification of the initial changes in the implantation of osteoarthritis. An important finding to be highlighted is that the use of liposome clodronate seems to have a protective effect on articular cartilage

DEVELOPMENT OF A TISSUE ENGINEERING PLATFORM USING BOVINE SPECIES AS A MODEL: PLACENTAL SCAFFOLDS SEEDED WITH BOVINE ADIPOSE-DERIVED CELLS

A tecnologia de células-tronco e as ciências de biomateriais obtiveram um grande avanço nas últimas décadas e se tornaram mais populares em todo o mundo. Pesquisadores buscam investigar e avaliar diferentes fontes de células e de biomateriais que, em combinação, possam fornecer uma plataforma de engenharia tecidual de baixo custo e produzida em larga escala, para serem utilizadas em testes de drogas, terapias celulares e transplantes, com objetivo de fornecer suporte terapêutico à lesões e regeneração de tecidos danificados. Em geral, os três componentes mais importantes da engenharia de tecidos são: a escolha do tipo de célula, a fonte do biomaterial (scaffold), criação e manutenção de um ambiente propício à formação tecidual. Quando esses três componentes são gerenciados com sucesso, o microambiente celular in vitro é mais semelhante ao que a célula está exposta in vivo, permitindo que o crescimento e diferenciação celular ocorra de maneira mais fidedigna e eficiente. A placenta bovina descelularizada demonstrou ter uma rica matriz extracelular, vasos bem desenvolvidos, sendo um biomaterial com alta disponibilidade e baixo custo. No entanto, não há informação sobre o potencial dos scaffolds placentários em serem repovoados com células-tronco mesenquimais (MSC) derivadas do tecido adiposo, processo chamado recelularização. Ainda, também não há informação sobre a capacidade dos scaffolds placentários, de após recelularização, oferecer um ambiente adequado para diferenciação dessas células em diferentes linhagens. Assim, a fim de fornecer informações sobre a capacidade do complexo MSC - scaffold placentário em ser usado com sucesso na engenharia tecidual, os objetivos desta tese foram: estudar o potencial dos scaffolds placentários bovinos em oferecer suporte para recelularização por células-tronco derivadas do tecido adiposo bovino, bem como avaliar a capacidade de diferenciação celular em linhagens osteogênica e condrogênica. O primeiro artigo desta tese trata-se de uma revisão de literatura, que discute a natureza das células-tronco mesenquimais, suas aplicações na medicina regenerativa, a importância da tecnologia com células- tronco na indústria pecuária e o uso da espécie bovina na medicina translacional. O segundo artigo consiste na avaliação da recelularização e da diferenciação celular. As placentas bovinas foram decelularizadas por perfusão de SDS do vaso umbilical e as linhas celulares estabelecidas após digestão enzimática do tecido adiposo de seisxiv vacas e seleção por adesão rápida à placa de cultivo. Em seguida, as células foram cultivadas com os scaffolds em um sistema de agitação 2D por 21 dias em meio de diferenciação ou manutenção. Quando cultivadas na placa de cultivo, as células isoladas exibiram morfologia semelhante ao fibroblasto, expressão de CD90, CD73 e CD105, enquanto não expressaram os marcadores CD34 e CD45. Além disso, as células foram capazes de se diferenciar em linhagens condrogênicas e osteogênicas, fornecendo evidências de sua natureza mesenquimal. Posteriormente, quando cultivadas com os scaffolds, as células aderiram-se aos mesmos por projeções celulares, estabeleceram comunicação célula-scaffold e se proliferaram, fato evidenciado por análise histológica e microscopia eletrônica de varredura (SEM). Em seguida, o potencial das células em se diferenciarem em linhagem osteogênica quando cultivadas com scaffold foi avaliado. Durante um período de cultivo de 21 dias no meio osteogênico, as células se proliferaram e diferenciaram de maneira dependente do tempo, ou seja, a cada semana pode ser observado maior abundância de células, evidenciada pela coloração dos núcleos celulares e aumento da intensidade da coloração para COLAGENO 1 (COL1), que também foi expresso por reação quantitativa em cadeia da polimerase em tempo real (qRT-PCR). O mesmo padrão foi observado pela análise histológica; acúmulos generalizados de cálcio também foram mais abundantes nos scaffolds na terceira semana de cultivo, evidenciado pela coloração de Von Kossa. A análise SEM revelou que as células secretaram estruturas globulares quando cultivadas sob condições de indução osteogênica, condizente com a secreção observada pela análise histológica. Em relação à diferenciação condrogênica, os corantes Safranina e Fast Green revelaram sucesso na diferenciação, através da coloração de proteoglicanos, células semelhantes aos condrócitos e colágeno tipo II. A análise SEM mostrou que as células mudaram sua morfologia de fibroblastos para globulares quando cultivadas com meio de indução condrogênica por 21 dias. Além disso, os complexos célulasscaffold expressaram um marcador de linhagem cartilaginosa, COLAGENO 2 (COL2), que são condizentes com as observações histológicas e SEM. Considerando os resultados, este estudo demonstrou que os scaffolds placentários bovinos cultivados com células-tronco derivadas de tecido adiposo bovino possuem potencial para serem utilizados na engenharia de tecidos ósseos e cartilaginosos.

Stem cell technologies and biomaterial sciences have advanced and grown more popular all over the world. The researchers aim to investigate and evaluate different sources of cells and biomaterials that, in combination, could provide a low cost, highly scalable tissue engineering platform that could be used in drug tests, cell therapies and cell transplantation. The three most important components of tissue engineering systems in general are cell source, biomaterial source (scaffolding system), and the creation and maintenance of an environment that is conducive to tissue formation. When these three components are successfully managed, the tissue engineering treatment achieves a faithful imitation of the in vivo environment, allowing for the differentiation of cells into the desirable cell types. Decellularized bovine placenta has been demonstrated to be rich in extracellular matrix (ECM) and to have well-developed vasculature, representing a highly available, low cost, practically scalable biomaterial. However, it is not known if placental scaffolds have the potential to support recellularization with adipose-derived cells and their subsequent differentiation into different lineages. Thus, in order to provide information on the ability of the mesenchymal stem cell (MSC) - placental scaffold complex to be used in tissue engineering approaches, the objectives of this thesis were: to study the potential of bovine placental scaffolds to support adipose-derived cell recellularization and their differentiation into osteogenic and chondrogenic lineages. The first article of this thesis is a literature review that discusses the nature of mesenchymal stem cells, their applications in regenerative medicine, the importance of stem cell technologies to the livestock industry and the use of bovine species for translational medicine. The second article consists of an evaluation of scaffold recellularization and the differentiation of cells on the scaffolds. The bovine placentae were decellularized by umbilical vessel sodium dodecyl sulfate (SDS) perfusion and cell lines were established after the enzymatic digestion of adipose tissue from six cows and cell selection by rapid adherence to the culture plate. Then, cells were seeded onto the scaffolds and cultured in a 2D rocker system for 21 days in either differentiation or maintenance medium. The isolated cells, when cultured in the plastic dish, exhibited fibroblast-like morphology, CD90, CD73 and CD105 expression, and lacked CD34 and CD45 expression. Moreover, the cells were able to undergo differentiation into chondrogenic and osteogenic lineages, providing evidence of their mesenchymalxii nature. Subsequently, the cells adhered to the scaffolds by cell projections, established cell-scaffold communication, and proliferated while maintaining cell-cell communication, which was evidenced by histological and scanning electron microscopy (SEM) assays. Throughout a 21-day culture period in the osteogenic medium, the cells exhibited proliferation and differentiation in a time-dependent manner, which can be observed by the greater abundance of cells in later periods, evidenced by cell nuclei staining (4,6-diamidino-2-phenylindole - DAPI) and increased intensity of staining for COLLAGEN 1 (COL1) in the immunohistochemical assay, and by its expression as measured by real time polymerase chain reaction (qRT-PCR). This same pattern was observed by histological analysis. Widespread calcium accumulations were also more abundant on the scaffolds as time progressed, as evidenced by Von Kossa staining. The SEM analysis revealed that cells secreted globular/round structures when seeded under osteogenic induction conditions, in accordance with histological findings. Regarding chondrogenic differentiation, Safranin O and Fast Green staining revealed successful differentiation through staining of proteoglycans, chondrocyte-like cells and type II collagen on the scaffold. The SEM analysis showed that the cells changed morphology from fibroblast-like to globular when cultured with chondrogenic induction medium for 21 days. Additionally, cellscaffold complexes expressed a cartilage marker, COLLAGEN 2 (COL2), which is conducive to the histological and SEM observations. Considering the results as a whole, this study demonstrated that placental scaffolds seeded with adipose-derived cells have the potential to be used in bone and cartilage tissue-engineering applications.

POTENCIAL DE IMUNOMODULAÇÃO E REPARAÇÃO DAS CÉLULAS TRONCO MESENQUIMAIS DERIVADAS DA MEMBRANA SINOVIAL E ENCAPSULADAS EM HIDROGEL DE ALGINATO EM LESÕES ARTICULARES INDUZIDAS EXPERIMENTALMENTE EM EQUINOS

A alta casuística e os desafios encontrado no tratamento da osteoartrite (OA) em equinos, tem impulsionado a comunidade científica na busca do tratamento mais efetivo. As células tronco mesenquimais derivadas de membrana sinovial (CTMMS) tem apresentado resultados promissores no tratamento de lesões articulares, especialmente por seu potencial de imunomodulação e reparação, mas que necessita de melhor compreensão. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar as características da imunomodulação e reparação após a aplicação intra-articular das CTMMS livres e encapsuladas em hidrogel de alginato em lesões articulares induzidas em equinos. Lesões condrais foram realizadas na tróclea medial do talus em quinze cavalos. No dia da indução os animais foram divididos em três grupos. Os grupos foram divididos em CTMMS encapsulada, CTMMS livres e controle. Foram realizadas avaliações clínicas, análise citológica, química e dosagem de citocinas no líquido sinovial (IL-1, IL-10, IL-6, INF-, TNF , Substância P, amilóide sérica A, TGF, IGF e PGE2), antes do defeito e 24, 48, 96, 168 e 336 horas. Após 150 dias da instituição dos tratamentos, foram realizadas avaliação in situ através da cirurgia artroscópica utilizando os escores ICRS e coletamos material para análise histológica escore de ODriscoll e imunohistoquímica para colágeno tipo II. O tratamento com CTMMS seja ela livre ou encapsulada reduziu o processo inflamatório articular. O grupo CTMMS encapsulada apresentou maior processo inflamatório inicial comparado com os demais grupos, em função do elevado número de neutrófilos, macrófagos, IL-6, IL-10, TNF e INF-. Na avaliação in situ da reparação da cartilagem, foi observado diferença estatística na avaliação global de reparo no CTMMS encapsulada. Na análise macroscópica coradas com hematoxilina-eosina e azul de toluidina, o CTMMS encapsulada e CTMMS livre, demonstraram diferentes graus da formação de fibrocartilagem, maior quantidade no CTMMS livre, no entanto as características morfológicas foram semelhantes a cartilagem nativa. As CTMMS encapsuladas em hidrogel de alginato demonstram ter maior potencial de imunomodulação por reduzir a contagem de linfócitos e macrófagos, aumentar a IL-10 e IL-6 no líquido sinovial, o que contribuiu de forma mais eficaz para o controle da inflamação e na reparação quando comparado ao grupo de CTMMS livres, provavelmente devido ao maior tempo de permanência das células encapsuladas dentro da articulação.

The high casuistry and the challenges encountered in the treatment of osteoarthritis (OA) in horses has driven the scientific community in the search for the most effective treatment. Mesenchymal stem cells derived from synovial membrane (MSCSM) have shown promising results in the treatment of joint lesions, especially for their potential for immunomodulation and repair, but need better understanding. Therefore, the objective of this work was to evaluate the characteristics of immunomodulation and repair after the intra-articular application of free and encapsulated MSCSM in alginate hydrogel in equine induced joint lesions. Chondral lesions were performed in the medial trochlea of the talus in fifteen horses. On the day of induction the animals were divided into three groups. The groups were divided into encapsulated MSCSM, free MSCSM and control. Clinical evaluations, cytological analysis, chemistry and cytokine dosage in the synovial fluid (IL-1, IL-10, IL-6, INF-, TNF , Substance P, amyloid serum A, TGF, IGF and PGE2) were performed before the defect and 24, 48, 96, 168 and 336 hours. After 150 days from the institution of treatment, in situ evaluation was performed through arthroscopic surgery using the ICRS scores and we collected material for histological analysis O'Driscoll score and immunohistochemistry for collagen type II. The treatment with MSCSM, either free or encapsulated, reduced the joint inflammatory process. The encapsulated MSCSM group presented a greater initial inflammatory process compared to the other groups, due to the high number of neutrophils, macrophages, IL-6, IL-10, TNF and INF-. In the in situ evaluation of the cartilage repair, a statistical difference was observed in the global evaluation of the encapsulated MSCSM repair. In the macroscopic analysis stained with hematoxylin-eosin and toluidine blue, the encapsulated MSCSM and free MSCSM demonstrated different degrees of fibrocartilage formation, greater amount in free MSCSM, however the morphological characteristics were similar to native cartilage. The MSCSM encapsulated in alginate hydrogel showed higher immunomodulation potential by reducing the lymphocyte and macrophage counts, increasing the IL-10 and IL-6 in the synovial fluid, which contributed more effectively to the control of inflammation and repair when compared to the group of free MSCSM, probably due to the longer stay of the encapsulated cells inside the joint

Expressão gênica do colágeno em ferida cutânea de equinos tratada com plasma rico em plaquetas / Collagen gene expression in skin wound of horses treated with platelet-rich plasma

[...]The objective of this study was to evaluate type I and III collagen gene expression during different phases of the healing process of PRP-treated skin. Eight healthy crossbred geldings, aged 16 and 17 years (16.37±0.52) were used. Three quadrangular-shaped lesions (6.25cm²) were surgically induced in the right and left gluteal regions of all the animals. Twelve hours after induction of the lesions, 0.5mL of PRP was administered in each of the four edges of the wounds (T=treated group) in one of the gluteal regions, randomly chosen. The contralateral region was used as control (NT=non-treated group). The wounds were submitted to daily cleaning with Milli-Q water, and the samples were obtained with a 6mm diameter biopsy Punch. Six skin biopsies were obtained, with the first being performed on the day the lesions were induced (T0), and the others 1 (T1), 2 (T2), 7 (T3), and 14 (T4) days, after the wound was induced. The sixth biopsy (T5) was performed after fully healed of the skin. Evaluation of type I and III collagen gene expression was carried out by the qRT-PCR technique. The data were analyzed by the Bonferroni test, Student t-test, paired t-test, and regression analysis (p<0,05). Difference (p<0.05) between groups were observed for both collagen gene expressions from T1 to T4, being higher in the animals of group T. The peak for type I and III collagen gene expressions occurred in T5 for both groups, but the highest expression was different (p<0.05) from zero time, starting in T3. In the animals of treated group, collagen expression started to establish at T5, while in the horses of NT group, the values remained increased. Local administration of a single PRP dose in cutaneous wound of the gluteal region of horses results in a higher local gene expression of type I and III collagens. However, this expression does not alter the maximum time of macroscopic healing of the wound. (AU)

[...] Objetivou-se avaliar a expressão dos genes dos colágenos tipos I e III durante diferentes fases do processo de cicatrização da pele tratada com PRP. Foram utilizados oito equinos machos castrados, mestiços, hígidos, com idade entre 16 e 17 (16,37±0,52) anos. Três feridas em formato quadrangular (6,25cm²) foram confeccionadas nas regiões glúteas direita e esquerda de todos os animais. Doze horas após indução das lesões, 0,5mL do PRP foi administrado em cada uma das quatro extremidades das feridas (T=grupo tratado), de uma das regiões glúteas, escolhida aleatoriamente. A região contralateral foi utilizada como controle (NT=grupo não tratado). As feridas foram submetidas à limpeza diária com água Milli Q, e amostras foram obtidas com biópsias utilizando-se Punch de 6mm de diâmetro. Seis biópsias de pele foram obtidas a primeira no dia de indução das lesões (T0), e as demais com 1 (T1) 2 (T2) 7 (T3) e 14 (T4) dias após a realização das feridas. A sexta biópsia (T5) foi realizada após o completo fechamento da pele. A avaliação da expressão dos genes dos colágenos tipos I e III foi realizada pela técnica qRT-PCR e os dados analisados pelo teste de Bonferroni, t de Student, t pareado e análise de regressão (p<0,05). Diferenças (p<0,05), entre grupos, foram observadas para a expressão de ambos os colágenos nos T1 a T4, sendo maior nos animais do grupo T. O pico de expressão dos colágenos tipos I e III ocorreu no T5 para ambos os grupos, mas a maior expressão foi diferente (p<0,05) do tempo zero a partir do T3. Nos animais do grupo tratado a expressão dos colágenos começou a estabilizar no T5, enquanto que nos equinos do NT os valores permaneceram elevados. A administração local de uma única dose do PRP em ferida cutânea na região glútea de equinos, resulta em maior expressão gênica local dos colágenos tipos I e III. Entretanto, essa expressão não altera o tempo máximo de fechamento macroscópico da ferida. (AU)