Chondroitin sulfate and glucosamine in the cartilage and subchondral bone repair of dogs - Histological findings / Sulfato de condroitina e glucosamina na reparação da cartilagem e do osso subcondral de cães - Achados histológicos

Chondroitin and glucosamine sulfate nutraceuticals are commonly used in the management of degenerative articular disease in veterinary routine. However, there are controversies on the contribution of these substances to articular cartilage. The purpose of this study was to evaluate the efficiency of a chondroitin and glucosamine sulfate-based veterinary nutraceutical on the repair of an induced osteochondral defect in a dog femoral condyle, by macroscopic, histological and histomorphometric analyses. The nutraceutical was orally administered the day following injury induction, every 24 hours (treated group, TG, n=24), compared with animals that did not receive the product (control group, CG, n=24). Six animals per group were anaesthetized for sample collection at 15, 30, 60 and 90 days after surgery. At 15 days, defects were macroscopically filled with red-pinkish tissue. After 30 days, whitish color tissue was observed, both in TG and CG animals, with firmer consistency to touch at 60 and 90 postoperative days. Histological analysis demonstrated that, in both groups, there was initial blood clot formation, which was subsequently substituted by a fibrin net, with capillary proliferation from the adjacent bone marrow and infiltration of mesenchymal cells in clot periphery. As cellular differentiation developed, repair tissue presented a fibrocartilage aspect most of the time, and new subchondral bone formation occurred in the deepest area corresponding to the defect. Histomorphometry suggested that the nutraceutical did not favor the articular cartilage repair process. It was concluded that nutraceutical did not significantly influence chondrocytes proliferation or hyaline architecture restoration.(AU)

Os nutracêuticos compostos de sulfato de condroitina e glucosamina são comumente utilizados no manejo da doença articular degenerativa na rotina veterinária. Entretanto, existem controvérsias sobre a contribuição dessas substâncias à cartilagem articular. O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficácia de um nutracêutico veterinário à base de sulfato de condroitina e glucosamina na reparação de defeitos osteocondrais induzidos no côndilo femoral de cães, através de análises macroscópica, histológica e histomorfométrica. O nutracêutico foi administrado no dia seguinte à indução da lesão, pela via oral, a cada 24 horas (grupo tratado - GT, 24 animais), sendo comparado a animais que não receberam o produto (grupo controle - GC, de igual número de animais). Aos 15, 30, 60 e 90 dias após a cirurgia, seis animais por grupo foram anestesiados para ser realizada a coleta das amostras. Aos 15 dias, os defeitos eram macroscopicamente preenchidos por tecido de coloração rósea a avermelhada. Já a partir dos 30 dias, observou-se preenchimento por tecido de coloração esbranquiçada, tanto nos animais do GT quanto nos do GC, com consistência mais firme ao toque digital aos 60 e 90 dias de pós-operatório. A análise histológica revelou que, em ambos os grupos, houve inicialmente formação de coágulo sanguíneo que, posteriormente, foi substituído por uma rede de fibrina, com proliferação de capilares a partir da medula óssea adjacente e infiltração de células mesenquimais na periferia do coágulo. À medida que se processou a diferenciação celular, o tecido de reparação se apresentou na maioria das vezes com aspecto de fibrocartilagem e, na região mais profunda da área correspondente ao defeito, ocorreu formação de osso novo subcondral. A histomorfometria sugeriu que o nutracêutico não favoreceu o processo de reparação da cartilagem articular. Concluiu-se que o nutracêutico não influenciou consideravelmente na proliferação de condrócitos nem na restauração da arquitetura hialina.(AU)

Chondroitin sulfate and glucosamine in the cartilage and subchondral bone repair of dogs - Histological findings / Sulfato de condroitina e glucosamina na reparação da cartilagem e do osso subcondral de cães - Achados histológicos

Chondroitin and glucosamine sulfate nutraceuticals are commonly used in the management of degenerative articular disease in veterinary routine. However, there are controversies on the contribution of these substances to articular cartilage. The purpose of this study was to evaluate the efficiency of a chondroitin and glucosamine sulfate-based veterinary nutraceutical on the repair of an induced osteochondral defect in a dog femoral condyle, by macroscopic, histological and histomorphometric analyses. The nutraceutical was orally administered the day following injury induction, every 24 hours (treated group, TG, n=24), compared with animals that did not receive the product (control group, CG, n=24). Six animals per group were anaesthetized for sample collection at 15, 30, 60 and 90 days after surgery. At 15 days, defects were macroscopically filled with red-pinkish tissue. After 30 days, whitish color tissue was observed, both in TG and CG animals, with firmer consistency to touch at 60 and 90 postoperative days. Histological analysis demonstrated that, in both groups, there was initial blood clot formation, which was subsequently substituted by a fibrin net, with capillary proliferation from the adjacent bone marrow and infiltration of mesenchymal cells in clot periphery. As cellular differentiation developed, repair tissue presented a fibrocartilage aspect most of the time, and new subchondral bone formation occurred in the deepest area corresponding to the defect. Histomorphometry suggested that the nutraceutical did not favor the articular cartilage repair process. It was concluded that nutraceutical did not significantly influence chondrocytes proliferation or hyaline architecture restoration.(AU)

Os nutracêuticos compostos de sulfato de condroitina e glucosamina são comumente utilizados no manejo da doença articular degenerativa na rotina veterinária. Entretanto, existem controvérsias sobre a contribuição dessas substâncias à cartilagem articular. O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficácia de um nutracêutico veterinário à base de sulfato de condroitina e glucosamina na reparação de defeitos osteocondrais induzidos no côndilo femoral de cães, através de análises macroscópica, histológica e histomorfométrica. O nutracêutico foi administrado no dia seguinte à indução da lesão, pela via oral, a cada 24 horas (grupo tratado - GT, 24 animais), sendo comparado a animais que não receberam o produto (grupo controle - GC, de igual número de animais). Aos 15, 30, 60 e 90 dias após a cirurgia, seis animais por grupo foram anestesiados para ser realizada a coleta das amostras. Aos 15 dias, os defeitos eram macroscopicamente preenchidos por tecido de coloração rósea a avermelhada. Já a partir dos 30 dias, observou-se preenchimento por tecido de coloração esbranquiçada, tanto nos animais do GT quanto nos do GC, com consistência mais firme ao toque digital aos 60 e 90 dias de pós-operatório. A análise histológica revelou que, em ambos os grupos, houve inicialmente formação de coágulo sanguíneo que, posteriormente, foi substituído por uma rede de fibrina, com proliferação de capilares a partir da medula óssea adjacente e infiltração de células mesenquimais na periferia do coágulo. À medida que se processou a diferenciação celular, o tecido de reparação se apresentou na maioria das vezes com aspecto de fibrocartilagem e, na região mais profunda da área correspondente ao defeito, ocorreu formação de osso novo subcondral. A histomorfometria sugeriu que o nutracêutico não favoreceu o processo de reparação da cartilagem articular. Concluiu-se que o nutracêutico não influenciou consideravelmente na proliferação de condrócitos nem na restauração da arquitetura hialina.(AU)

Avaliação dos efeitos in vitro do Dimetilsulfóxido em células sinoviais de equinos e de sua utilização intra-articular como tratamento para sinovite aguda

As lesões articulares na espécie equina causam inúmeras perdas econômicas e funcionais, com objetivo de minimizá-las vários estudos sobre técnicas e terapias são realizadas e se fazem necessárias. Acredita-se que o dimetilsulfóxido (DMSO) tenha ação moduladora nos processos inflamatórios articulares agudos e ação sobre radicais livres, porém sua eficácia ainda é dúbia. Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos do DMSO sobre células sinoviais e a lavagem articular com diferentes concentrações de DMSO (5% e 10%), em um modelo experimental de indução da sinovite aguda em equinos, com LPS. Para tanto, este estudo foi dividido em duas etapas. A primeira etapa visou verificar o efeito do DMSO sobre células sinoviais, através da análise de viabilidade celular após a estimulação das células sinoviais pelo LPS e tratamento com o DMSO. Para a segunda etapa do estuo foram utilizadas 26 articulações tibiotársicas, distribuídas aletoriamente em quatro grupos. Os grupos foram tratados e organizados da seguinte forma: grupo solução de ringer lactato; grupo DMSO 5% em solução de ringer lactato; grupo DMSO 10% em solução de ringer lactato; e Grupo controle (apenas indução da sinovite). Foram realizadas coletas do líquido sinovial (LS) antes da infiltração das articulações com LPS, na dose de 0,5 ng (M0), após 1h (M1), antes das lavagens (M8), e após 24h e 48h (M24 e M48) da indução da sinovite, as amostras de LS foram utilizadas para contagem total de células nucleadas e diferenciação celular, quantificação de PGE2, interleucina-1, interleucina-6, TNF-, AH, CS, ureia, proteína total e análise do burst oxidativo. As células sinoviais estimuladas por LPS e tratadas com DMSO 5% apresentaram menor porcentagem de células viáveis após vinte e quatro horas, entretanto após 48h somente as células tratadas com ringer lactato apresentaram menor porcentagem de células viáveis. O equipamento Lameness Locator® foi utilizado para verificar a presença de dor articular, previamente a todas coletas. Todos os grupos apresentaram aumento na contagem total de células nucleadas, concentração de PGE2, IL-1, IL-6 e proteína total no M8. Sendo que os grupos DMSO 5% e DMSO 10% apresentaram diminuição da contagem total de células nucleadas após a lavagem articular. A concentração de PGE2 e IL-1 no grupo DMSO 10% foi menor no M48 em relação ao M8, e o grupo ringer lactato apresentou menor concentração de IL-1 que os grupos DMSO 5% e controle no M24. O grupo DMSO 10% apresentou menor concentração de IL-6 em relação aos grupos DMSO 5% e ringer lactato no momento 24. O TNF- apresentou aumento em todos os grupos no M1. Os grupos DMSO 10% e controle apresentaram menor concentração de TNF- nos M24 e M48 em relação ao M1. Os grupos DMSO 5% e controle não apresentaram diferença na concentração de IL-10, porém os grupos ringer lactato e DMSO 10% apresentaram maior concentração no M48. Os grupos DSMO 10% e ringer lactato apresentaram menor concentração de AH no M24. Todos os grupos apresentaram aumento da concentração de CS após as lavagens articulares. Não houve diferença na avaliação de dor articular, bem como na análise do burst oxidativo e concentração de ureia. Os diferentes grupos apresentaram similaridade de comportamento das células e citocinas estudadas no líquido sinovial ao longo do experimento, contudo o grupo DMSO 10% foi o que apresentou mais rapidamente o retorno próximo aos valores basais. Os resultados apresentados neste estudo permitem concluir que frente à necessidade de se realizar lavagens articulares a utilização de solução de ringer lactato com DMSO 10% é mais indicada que o uso de ringer lactato ou solução com DMSO a 5%. Entretanto, nenhum tratamento foi capaz de demonstrar efeito condroprotetor.

Joint injuries in the equine species cause numerous economic and functional losses, in order to minimize them, several studies on techniques and therapies are performed and are necessary. Dimethylsulfoxide (DMSO) is thought to have modulating action on acute joint inflammatory processes and action on free radicals, but its efficacy is still dubious. This study aimed to evaluate the effects of DMSO on synovial cells and joint lavage with different concentrations of DMSO (5% and 10%) in an experimental model of induction of acute synovitis in horses with LPS. Therefore, this study was divided into two steps. The first step aimed to verify the effect of DMSO on synovial cells by analyzing cell viability after stimulation of synovial cells by LPS and treatment with DMSO. For the second stage of the study, 26 tibiotarsal joints were used, divided into four groups. The groups were treated and organized as follows: ringer lactate solution group; 5% DMSO group in ringer lactate solution; 10% DMSO group in ringer lactate solution; and Control group (synovitis induction only). Synovial fluid (LS) was collected prior to infiltration of the joints with LPS at a dose of 0.5 ng (M0), after 1h (M1), before washes (M8), and after 24h and 48h (M24 and M48), from synovitis induction. LS samples were used for total nucleated cell count and cell differentiation, PGE2 quantification, interleukin-1, interleukin-6, TNF-, HA, CS, urea, total protein and burst oxidative analysis. The synovial cells stimulated by LPS and treated with DMSO 5% presented lower percentage of viable cells-after 24 hours, however after 48h only the cells treated with Ringer lactate showed lower percentage of viable cells. Lameness Locator® equipment was used to verify the presence of joint pain, prior to all collections. All groups showed an increase in total nucleated cell count, PGE2, IL-1, IL-6 and total protein in M8. The DMSO 5% and DMSO 10% groups showed a decrease in the total nucleated cell count after joint washing. The concentration of PGE2 and IL-1 in the 10% DMSO group was lower in M48 compared to M8, and the ringer lactate group presented lower IL-1 concentration than the 5% DMSO and control groups in M24. The 10% DMSO group showed lower IL-6 concentration compared to the 5% DMSO and ringer lactate groups at time 24. TNF- increased in all groups at M1. The 10% DMSO and control groups presented lower TNF- concentration in M24 and M48 in relation to M1. The 5% DMSO and control groups showed no difference in IL-10 concentration, but the ringer lactate and 10% DMSO groups showed higher concentration in M48. The DSMO 10% and ringer lactate groups presented lower HA concentration in M24. All groups showed increased concentration of CS after joint washes. There was no difference in joint pain evaluation, oxidative burst analysis and urea concentration. The different groups showed similarity of behavior of cells and cytokines studied in the synovial fluid throughout the experiment, however the 10% DMSO group showed the fastest return near basal values. The results presented in this study allow us to conclude that in view of the need to perform joint washes, the use of 10% DMSO lactated ringer's solution is better than the use of 5% DMSO lactated ringer's solution. However, no treatment was able to demonstrate chondroprotective effect

USO DE NUTRACÊUTICOS NA PREVENÇÃO DA DEGENERAÇÃO DO DISCO INTERVERTEBRAL EM CÃES DA RAÇA DACHSHUND MINIATURA

A doença do disco intervertebral é a causa mais comum de mielopatia em cães. Objetivou-se com esta pesquisa caracterizar os aspectos tomográficos de discos intervertebrais (DIV) mineralizados de cães Dachshund Miniatura com um ano de idade e verificar o efeito da suplementação com nutracêuticos na prevenção da degeneração condróide e mineralização dos DIV. Vinte filhotes com quatro meses de idade foram mantidos durante oito meses em canis com acesso à luz. Os animais foram distribuídos em dois grupos de dez, sendo submetidos a dois protocolos durante 240 dias. Grupo nutracêutico (GN) recebeu um tablete de 2 gramas, ao dia, por via oral, contendo sulfato de condroitina, sulfato de glicosamina, manganês, enxofre, DL- metionina. O grupo controle (GC) recebeu um tablete de 2 gramas, ao dia contendo apenas excipiente. Dos 70 discos avaliados do GC, 45 foram considerados como alterados. Nos classificados como alterados a localização foi determinada em oito discos (17,8%) no núcleo pulposo, em nove discos (20%) no anel fibroso e em 28 discos (62, 2%) esta alteração encontrava-se nas duas regiões. Na comparação entre os grupos, o percentual de animais classificados com mineralização foi mais elevado no GC do que no GN (64,3% x 44,3%), diferença esta que para a margem de erro fixada (5%) se mostrou significativa entre os grupos, em relação a presença de gratificação (p < 0,05 risco relativo igual a 1,45 com intervalo que exclui o valor 1,00). No GN as maiores frequências relativas de mineralização ocorreram no disco T9-10 (70,0%), T11-12 (50,0%) e T13-L1 (50,0%) e no GC nos discos T9-10 (90,0%) e T10-11 (80,0%). Este estudo propõe que o uso da associação de manganês, sulfatos de condroitina e glicosamina utilizados como nutracêuticos diminuíram a incidência de DIV mineralizados nos animais testados.

EFICÁCIA CLÍNICA DA VISCOSUPLEMENTAÇÃO COMPARATIVAMENTE AO TRATAMENTO CONSERVATIVO TRADICIONAL EM CÃES COM DISPLASIA COXOFEMORAL

A viscossuplementação é um tratamento que consiste na administração intra-articular (IA) de derivados do ácido hialurônico, cuja eficácia clínica tem sido confirmada em seres humanos. Objetivou-se comparar a eficácia clínica da viscossuplementação em relação ao tratamento conservativo convencional (TCC) em cães com displasia coxofemoral (DCF). Quinze cães foram distribuídos aleatoriamente em dois grupos: AH (n=8) tratamento IA com ácido hialurônico (5 mg a 10 mg); Controle (n=7): tratamento IA com solução salina (0,5 mL a 1,0 mL), além do TCC por via oral com condroprotetor (750-1000 mg, BID, 90 dias) e carprofeno (2,2 mg/kg BID, 15 dias). Os sinais clínicos da DCF foram avaliados de forma encoberta, antes do tratamento (basal), 15, 30, 60 e 90 dias após a injeção IA, por sistema de escore pelo pesquisador e mediante questionários respondidos pelos proprietários dos cães, empregando-se o Breve Inventário de Dor Canina (BIDC) e o Indicador de Dor Crônica de Helsinque (IDCH). Intervenção analgésica foi permitida se o somatório dos escores do BIDC e/ou IDCH excedesse 50%. Os resultados foram analisados pelo teste t não-pareado, teste de Mann-Whitney e teste de Friedman (P < 0,05). Os escores avaliados pelo médico veterinário foram inferiores (P = 0,0005) aos 30, 60 e 90 dias em relação ao basal no grupo AH, e aos 15 dias no grupo Controle (P = 0,0003). Na comparação entre grupos, escores inferiores foram observados aos 30, 60 e 90 dias no grupo AH em relação ao grupo controle, pela avaliação do pesquisador e pelo BIDC. Na comparação ao longo tempo, os escores totais do BIDC foram inferiores aos 60 e 90 dias em relação ao basal nos grupos Controle e AH, respectivamente (P= 0,0145, AH e P = 0,0291, Controle). Na avaliação pelo IDCH escores inferiores foram observados aos 15 e 90 dias em relação ao basal nos grupos Controle e AH, respectivamente (P= 0,0054, AH e P = 0,041, Controle). Intervenção analgésica não foi necessária durante o período de avaliação. Ambos os tratamentos reduziram os sinais clínicos associados à DCF, porém resultados mais expressivos foram alcançados com a viscossuplementação.

Viscosupplementation is one of the treatment modalities for osteoarthritis which consist in an intraarticular (IA) injection of hyaluronic composts. The aim of this randomized, double-blind study was to compare the clinical efficacy of viscosupplemantion with conventional conservative treatment (CCT) in dogs with hip dysplasia (HD). Fifteen dogs were distributed into two groups: HA (n=8): IA injection of hyaluronic acid (5-10 mg); Control (n=7): IA injection with saline solution (0.5-1.0 mL) in combination with a CCT using an oral nutraceutical (750-1000 mg, every 12 h, 90 days) and carprofen (2.2 mg/kg, every 12 h, 15 days). The clinical signs of HD were evaluated prior to treatment (baseline), 15, 30, 60, and 90 days after the IA injection by the veterinary using a score system and by the owners with a questionnaire about their dogs condition using the Canine Brief Pain Inventory (CBPI) and Helsinki Chronic Pain Index (HCPI). The data were analyzed using test unpaired-t, Mann-Whitney-U test and Friedman test, followed by post-hoc Dunns test (P < 0.05). The scores measured by the veterinary decreased from 30 to 90 days in relation to the baseline in the HA group (P = 0.0005), and at 15 days in the Control group (P = 0.0003). The scores evaluated by veterinary and by CBPI were significantly lower in the HA than in the Control from 30 to 90 days. Compared with baseline, both groups had lower total CBPI scores from 60 to 90 days after IA injection respectively (P= 0.0145, HA and P = 0.0291, Control). The HCPI scores were significantly lower in the Control and HA groups at 15 and 90 days after treatment, respectively (P= 0.0054, HA and P = 0.041, Control). Both treatments reduced the clinical signs of HD, however better results were reached with viscosupplementation.

Avaliação morfoquantitativa e ultraestrutural da cartilagem do processo condilar da mandíbula e da sincondrose basioccipital de ratos Wistar subnutridos e suplementados com resveratrol

subnutrição é uma doença causada pela ingestão inadequada e/ou insuficiente de energia ou de outras biomoléculas, que pode comprometer o crescimento e o desenvolvimento dos tecidos. Em conjunto, a cartilagem do processo condilar da mandíbula e a sincondrose basioccipital representam os dois centros efetivos do crescimento craniofacial, que depende, dentre outros, de fatores locais como a produção do fator de crescimento semelhante à insulina I (IGF-I) e seu receptor (IGF-IR). Alterações tanto no peptídeo quanto no receptor estão associadas a graves atrasos no crescimento e desenvolvimento ósseo. Dentre os nutrientes alternativos com a capacidade de promoção da recuperação nutricional, destaca-se o resveratrol, um polifenol contido na uva e derivados que pode promover a melhora do crescimento através de propriedades osteogênicas, além de atuar como condroprotetor. Assim, a presente pesquisa teve por objetivo avaliar os efeitos da subnutrição proteica na cartilagem do processo condilar da mandíbula (PC) e na sincondrose basioccipital (SBo) de ratos, bem como os processos de renutrição e suplementação com resveratrol nos períodos pré-púbere (21 dias) e púbere (60 dias). Os grupos nutrido (N) e subnutrido (S) foram formados por filhotes cujas mães receberam dieta normoproteica e hipoproteica, respectivamente, desde o período de acasalamento; ao completarem 21 dias de vida extrauterina, época determinada para o desmame, os filhotes foram eutanasiados. A partir do 22º dia de vida, filhotes dos grupos N e S foram mantidos com as respectivas dietas até o 60º dia de vida quando constituíram, respectivamente, os grupos NN e SS. Dois grupos considerados renutridos foram formados por animais do grupo S, que a partir do 22º dia passaram a receber, o primeiro, a dieta normoproteica com 20% de caseína (grupo RN), e o segundo, a dieta normoproteica acrescida de resveratrol (RRv). A cartilagem do PC e a SBo foram processadas através das técnicas histológicas rotineiras e posteriormente submetidas às colorações da HE, Picrossíruis e Safranina-O, para a evidenciação dos componentes celular e colágeno e imunohistoquímica para a marcação de células reativas ao IGF-I e IGFIR. Os aspectos ultraestruturais também foram analisados através da microscopia eletrônica de transmissão. Os resultados mostraram que a subnutrição foi capaz de alterar os componentes da matriz extracelular (MEC), acarretando em modificações na secreção das fibrilas colágenas e acúmulo de proteoglicanas nos tecidos; diminuição do número de células imunorreativas ao IGF-I e IGF-IR na cartilagem do PC e atraso no crescimento ósseo endocondral, comprovado através das avaliações quantitativas e morfométricas, em ambos os tecidos. A renutrição com dieta normal foi parcialmente eficaz na recuperação dos parâmetros avaliados, e pode ter provocado uma diminuição da capacidade de resposta celular ao IGF-I. Os efeitos condroprotetores do resveratrol foram fundamentados através da recuperação dos componentes da MEC e organelas dos condrócitos e uma possível diminuição da insensibilidade ao IGF-I; o atraso no crescimento ósseo endocondral foi minimizado através do seu potencial osteogênico (mais acentuado na SBo). Muito embora a recuperação dos tecidos não tenha ocorrido totalmente, diante dos dados apresentados, podese afirmar que a suplementação de resveratrol na dieta auxiliou de forma mais efetiva no restabelecimento dos parâmetros afetados pela subnutrição do que somente a recuperação proteica com dieta normal.

Undernutrition is a disease caused by inadequate and / or insufficient intake of energy or other biomolecules, which can compromise growth and development of tissues. Together, the mandibular condylar cartilage and basioccipital synchondrosis represent the two effective centers of craniofacial growth, which depends of the factors such as the local production of insulin like growth factor I (IGF-I) and receptor (IGF-IR). Changes in both the peptide and receptor are associated with serious delays in growth and bone development. Among the alternative nutrients to the promotion capacity of nutritional recovery, there is resveratrol, a polyphenol contained in grapes and derivatives that can promote improved growth through osteogenic properties, besides acting as chondroprotective. Thus, the present study aimed to evaluate in rats the effects of protein undernutrition in the mandibular condylar cartilage and basioccipital synchondrosis, as well renutrition and supplementation with resveratrol in pre pubertal periods (21 days) and pubertal (60 days). The nourished groups (N) and undernourished (S) were formed by young whose mothers received normal protein and hypoproteic diet respectively since the breeding season; to complete 21 days of extra-uterine life, given time to weaning, puppies were euthanized. From the 22nd day of life, puppies from N and S groups were kept with their diets until the 60th day of life when constituted, respectively, NN and SS groups. Two groups considered re-nourished were formed by the S group, which from day 22 began receiving, the first, the normal protein diet with 20% casein (RN group), and the second, the normal protein diet plus of resveratrol (RRv). The cartilage of PC and SBo were processed through routine histological techniques, and then subjected to HE, Sirius red and Safranin-O staining for the disclosure of cellular components and collagen and immunohistochemistry for marking cells responsive to IGF-I and IGF-IR. The ultrastructural aspects were also analyzed by transmission electron microscopy. The results showed that undernutrition was able to change the components of the extracellular matrix (ECM) leading to changes in the secretion of collagen fibrils and proteoglycans accumulation in the tissues; decrease in the number of immunoreactive cells to IGF-I and IGF-IR in PC cartilage and delayed endochondral bone growth, confirmed by quantitative and morphometric analysis in both tissues. Renutrition with normal diet was partially effective in recovering the parameters evaluated, and may have caused a decrease in cell responsiveness to IGF-I. The chondroprotective effects of resveratrol were founded by recovering the ECM components and organelles of chondrocytes and a possible decrease in the insensitivity to IGF-I; the delay in endochondral bone growth was minimized by osteogenic potential (more pronounced in SBo). Although the tissue recovery has not fully occurred, the resveratrol supplementation in the diet helped more effectively in restoring the parameters affected by undernutrition than just protein recovery with normal diet.

Estudo do efeito da injeção de PRP e concentrado de medula óssea sobre o reparo de defeitos condrais experimentalmente induzidos e tratados com microfraturas e ácido hialurônico

Defeitos de cartilagem e a mais comum doença articular, a osteoartrite, são caracterizadas pela destruição da cartilagem articular, e consequentemente na perda da função articular em humanos e animais. As estratégias atuais de tratamento, conservativas e cirúrgicas, são insuficientes: não resultam em restauração total da cartilagem hialina, e, portanto trazem um prognóstico reservado a longo prazo. O presente estudo tem por objetivo avaliar os efeitos do administração conjunta de concentrado de medula óssea, plasma rico em plaqueta sobre lesões condrais experimentalmente induzidas e tratadas com microfraturas e ácido hialuronico. Foram utilizadas as articulações metacarpofalangeana de 6 éguas, as quais foram divididas em 2 grupos aleatoriamente e cego. Foram feitos defeitos condrais totais através de artroscopia e, todos foram tratados com microfraturas e ácido hialurônico no transoperatório (M 0) sendo, esse repetido após 15 dias (M 15) e 30 dias (M 30). Grupo C (controle) e grupo T (tratado). O grupo T foi tratado com aspirado concentrado de células tronco de medula óssea adicionada ao plasma rico em plaquetas (PRP), os quais foram injetados na articulação no final da cirurgia (M0). O grupo T recebeu ainda 2 aplicações articulares adicionais de PRP em 15 dias (M 15) e 30 dias (M 30). As seguintes avaliações foram realizadas: exame clínico de claudicação, ultrassonografia, estudo radiográfico, avaliações de líquido sinovial (físico, bioquímico e citológico). As avaliações foram realizadas antes da cirurgia (M 0), com 3, 5 e 7 dias. Posteriormente a cada 15 dias (M 15, M 30, M 45 e M 60) e os 3 últimos momentos foram aos 90 (M90), 120 (M120) e 210 (M210) dias. Ao final do experimento os animais foram enviados para abate comercial. Foram verificadas diferenças estatísticas (p<0,05) entre o grupo tratado e controle para avaliação de proteínas no líquido sinovial corrigido por uréia em 3, 5 e 7 dias; para PGE2 no líquido sinovial em 3 e 5 dias onde para ambas as variáveis com maiores valores para o grupo tratado. Já a concentração de ácido hialurônico apresentou maiores valores (p<0,05) em 3, 45 e 90 dias no grupo controle. Para as demais variáveis não houve diferença estatística entre o grupo tratado e controle. Porém, notou-se medianas maiores para condroitin sulfato em 3 e 5 dias no grupo controle. Notavelmente, o grupo tratado apresentou melhor escore macroscópico na avaliação do tecido de reparo. Contudo, a administração intra-articular de concentrado de medula óssea e plasma rico em plaquetas sobre lesões condrais induzidas e tratadas com microfraturas e ácido hialurônico produziu uma reação articular transitória, principalmente nos primeiros 60 dias, e foi evidenciado pelo aumento de PGE2 e proteínas no líquido sinovial, bem como, claudicação, dor a flexão passiva, diminuição da mobilidade articular e aumento de volume articular. No entanto, o tratamento produziu um efeito condroprotetor e anabólico sobre tecido de reparo formado, uma vez que o grupo tratado apresentou menor concentração de ácido hialurônico 3, 45 e 90 dias e melhor escore macroscópico ICRS aos 210 dias.

Cartilage defects and the most common joint disease, osteoarthritis, are characterized by destruction of articular cartilage, and consequently in loss of joint function in humans and animals. Current strategies of conservative and surgical treatment are insufficient: they dont result in complete restoration of hyaline cartilage, and bring a poor prognosis on the long term. This study aims to evaluate the effects of co-administration of bone marrow concentrate, platelet rich plasma on experimentally induced chondral lesions and treated with microfractures and hyaluronic acid. The metacarpophalangeal joints of 6 mares were used, which were divided into 2 groups at random and blind. Total chondral defects were made using arthroscopy, and all were treated with microfractures and hyaluronic acid during surgery (M 0) and the hyaluronic acid was repeated after 15 days (M 15) and 30 days (M 30). Group C (control) and T group (treated). Group T was treated with concentrated aspirated bone marrow stem cells added to the platelet rich plasma (PRP), which were injected into the joint at surgery (M0). The T group had another 2 additional joint PRP applications in 15 days (M 15) and 30 days (M 30). The following evaluations were performed: clinical examination of lameness, ultrasound, radiographic studies and synovial fluid analysis (physical, biochemical and cytological). The evaluations were performed before surgery (M 0), 3, 5 and 7 days. Then, every 15 days (M 15, M 30, M 45 and M 60) and the last 3 evaluation were at 90 (M90), 120 (M120) and 210 (M210) days. At the end of the experiment the animals were sent to commercial slaughter. Statistical differences were found (p <0.05) between the treated and control group for evaluation of protein in synovial fluid corrected by urea at 3, 5 and 7 days; for PGE2 in the synovial fluid in 3 to 5 days where both variables had higher values for the treated group. The hyaluronic acid concentration was higher (p <0.05) at 3, 45 and 90 days in the control group. For the other variables there were no statistical difference between the treated and control groups. However, greater medians were noticed for chondroitin sulfate in 3 to 5 days in the control group. Notably, the treated group showed better macroscopic score in the evaluation of the repair tissue. In conclusion, intra-articular administration of bone marrow concentrate and platelet-rich plasma on induced chondral lesions and treated with microfractures and hyaluronic acid produced a transient response joint, especially during the first 60 days, and it was evidenced by the increase in PGE2 and proteins of the synovial fluid, as well as lameness, pain passive flexion, decreased joint mobility and joint swelling. Besides that, the treatment produced an anabolic chondroprotective effect on repair tissue formed once the treated group showed lower concentration of hyaluronic acid 3, 45 and 90 days, and better ICRS macroscopic scoring at 210 days.