Combination of ethylene glycol with sucrose increases survival rate after vitrification of somatic tissue of collared peccaries (Pecari tajacu Linnaeus, 1758)

ABSTRACT: The cryopreservation of somatic tissue in collared peccaries promotes an alternative source of genetic material of this specie. The solid-surface vitrification (SSV) is a great option for tissue conservation; nevertheless, the optimization of SSV requirements is necessary, especially when referred to cryoprotectants that will compose the vitrification solution. Therefore, the aim was to evaluate the effect of the presence of 0.25 M sucrose in addition to different combinations (only or association) and concentrations (1.5 M or 3.0 M) of ethylene glycol (EG) and/or dimethyl sulfoxide (DMSO) in the somatic tissue vitrification of collared peccaries. Subsequently, we tested six combinations of cryoprotectants with or without sucrose in Dulbecco modified Eagle medium (DMEM) plus 10% fetal bovine serum (FBS). Thus, 3.0 M EG with sucrose was able to maintain normal tissue characteristics compared with non-vitrified (control), especially for the volumetric ratio of epidermis (61.2 vs. 58.7%) and dermis (34.5 vs. 36.6%), number of fibroblast (90.3 vs. 127.0), argyrophilic nucleolar organizer region (AgNOR) ratio (0.09 vs. 0.17%) and nucleus area (15.4 vs. 14.5 m2) respectively. In conclusion, 3.0 M EG with 0.25 M sucrose and 10% FBS resulted in a better cryoprotectant composition in the SSV for somatic tissue of collared peccaries.

RESUMO: A criopreservação de tecido somático em catetos promove uma fonte alternativa de material genético nesta espécie. A vitrificação em superfície sólida (VSS) é uma ótima opção para a conservação do tecido; contudo, a otimização dos requerimentos da VSS é necessária, especialmente quanto aos crioprotetores que irão compor a solução de vitrificação. Portanto, o objetivo foi avaliar o efeito da presença de 0,25 M de sacarose em adição com diferentes combinações (individual ou associação) e concentrações (1,5 M ou 3,0 M) de etilenoglicol (EG) e/ou dimetilsulfóxido (DMSO) na vitrificação de tecido somático de catetos. Subsequentemente, nós testamos seis combinações de crioprotetores com ou sem sacarose em meio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) acrescido de 10% de soro fetal bovino (SFB). Assim, 3,0 M de EG com sacarose foi capaz de manter as características normais do tecido comparado com o não vitrificado (controle), especialmente para a proporção volumétrica da epiderme (61,2 vs. 58,7%) e derme (34,5 vs. 36,6%), número de fibroblastos (90,3 vs. 127,0), razão da região argirófila organizadora de nucléolo (AgNOR) (0,09 vs. 0,17%) e área do núcleo (15,4vs.14,5 m2), respectivamente. Em conclusão, 3,0 M de EG com 0,25 M de sacarose e 10% de SFB resultaram na melhor composição de crioprotetores na VSS para tecido somático de catetos.

Combination of ethylene glycol with sucrose increases survival rate after vitrification of somatic tissue of collared peccaries (Pecari tajacu Linnaeus, 1758) / Combinação de etilenoglicol com sacarose aumenta a taxa de sobrevivência após a vitrificação de tecido somático de catetos (Pecari tajacu Linnaeus, 1758)

The cryopreservation of somatic tissue in collared peccaries promotes an alternative source of genetic material of this specie. The solid-surface vitrification (SSV) is a great option for tissue conservation; nevertheless, the optimization of SSV requirements is necessary, especially when referred to cryoprotectants that will compose the vitrification solution. Therefore, the aim was to evaluate the effect of the presence of 0.25 M sucrose in addition to different combinations (only or association) and concentrations (1.5 M or 3.0 M) of ethylene glycol (EG) and/or dimethyl sulfoxide (DMSO) in the somatic tissue vitrification of collared peccaries. Subsequently, we tested six combinations of cryoprotectants with or without sucrose in Dulbecco modified Eagle medium (DMEM) plus 10% fetal bovine serum (FBS). Thus, 3.0 M EG with sucrose was able to maintain normal tissue characteristics compared with non-vitrified (control), especially for the volumetric ratio of epidermis (61.2 vs. 58.7%) and dermis (34.5 vs. 36.6%), number of fibroblast (90.3 vs. 127.0), argyrophilic nucleolar organizer region (AgNOR) ratio (0.09 vs. 0.17%) and nucleus area (15.4 vs. 14.5 µm2) respectively. In conclusion, 3.0 M EG with 0.25 M sucrose and 10% FBS resulted in a better cryoprotectant composition in the SSV for somatic tissue of collared peccaries.(AU)

A criopreservação de tecido somático em catetos promove uma fonte alternativa de material genético nesta espécie. A vitrificação em superfície sólida (VSS) é uma ótima opção para a conservação do tecido; contudo, a otimização dos requerimentos da VSS é necessária, especialmente quanto aos crioprotetores que irão compor a solução de vitrificação. Portanto, o objetivo foi avaliar o efeito da presença de 0,25 M de sacarose em adição com diferentes combinações (individual ou associação) e concentrações (1,5 M ou 3,0 M) de etilenoglicol (EG) e/ou dimetilsulfóxido (DMSO) na vitrificação de tecido somático de catetos. Subsequentemente, nós testamos seis combinações de crioprotetores com ou sem sacarose em meio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) acrescido de 10% de soro fetal bovino (SFB). Assim, 3,0 M de EG com sacarose foi capaz de manter as características normais do tecido comparado com o não vitrificado (controle), especialmente para a proporção volumétrica da epiderme (61,2 vs. 58,7%) e derme (34,5 vs. 36,6%), número de fibroblastos (90,3 vs. 127,0), razão da região argirófila organizadora de nucléolo (AgNOR) (0,09 vs. 0,17%) e área do núcleo (15,4vs.14,5 µm2), respectivamente. Em conclusão, 3,0 M de EG com 0,25 M de sacarose e 10% de SFB resultaram na melhor composição de crioprotetores na VSS para tecido somático de catetos.(AU)

Combination of ethylene glycol with sucrose increases survival rate after vitrification of somatic tissue of collared peccaries (Pecari tajacu Linnaeus, 1758) / Combinação de etilenoglicol com sacarose aumenta a taxa de sobrevivência após a vitrificação de tecido somático de catetos (Pecari tajacu Linnaeus, 1758)

The cryopreservation of somatic tissue in collared peccaries promotes an alternative source of genetic material of this specie. The solid-surface vitrification (SSV) is a great option for tissue conservation; nevertheless, the optimization of SSV requirements is necessary, especially when referred to cryoprotectants that will compose the vitrification solution. Therefore, the aim was to evaluate the effect of the presence of 0.25 M sucrose in addition to different combinations (only or association) and concentrations (1.5 M or 3.0 M) of ethylene glycol (EG) and/or dimethyl sulfoxide (DMSO) in the somatic tissue vitrification of collared peccaries. Subsequently, we tested six combinations of cryoprotectants with or without sucrose in Dulbecco modified Eagle medium (DMEM) plus 10% fetal bovine serum (FBS). Thus, 3.0 M EG with sucrose was able to maintain normal tissue characteristics compared with non-vitrified (control), especially for the volumetric ratio of epidermis (61.2 vs. 58.7%) and dermis (34.5 vs. 36.6%), number of fibroblast (90.3 vs. 127.0), argyrophilic nucleolar organizer region (AgNOR) ratio (0.09 vs. 0.17%) and nucleus area (15.4 vs. 14.5 µm2) respectively. In conclusion, 3.0 M EG with 0.25 M sucrose and 10% FBS resulted in a better cryoprotectant composition in the SSV for somatic tissue of collared peccaries.(AU)

A criopreservação de tecido somático em catetos promove uma fonte alternativa de material genético nesta espécie. A vitrificação em superfície sólida (VSS) é uma ótima opção para a conservação do tecido; contudo, a otimização dos requerimentos da VSS é necessária, especialmente quanto aos crioprotetores que irão compor a solução de vitrificação. Portanto, o objetivo foi avaliar o efeito da presença de 0,25 M de sacarose em adição com diferentes combinações (individual ou associação) e concentrações (1,5 M ou 3,0 M) de etilenoglicol (EG) e/ou dimetilsulfóxido (DMSO) na vitrificação de tecido somático de catetos. Subsequentemente, nós testamos seis combinações de crioprotetores com ou sem sacarose em meio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) acrescido de 10% de soro fetal bovino (SFB). Assim, 3,0 M de EG com sacarose foi capaz de manter as características normais do tecido comparado com o não vitrificado (controle), especialmente para a proporção volumétrica da epiderme (61,2 vs. 58,7%) e derme (34,5 vs. 36,6%), número de fibroblastos (90,3 vs. 127,0), razão da região argirófila organizadora de nucléolo (AgNOR) (0,09 vs. 0,17%) e área do núcleo (15,4vs.14,5 µm2), respectivamente. Em conclusão, 3,0 M de EG com 0,25 M de sacarose e 10% de SFB resultaram na melhor composição de crioprotetores na VSS para tecido somático de catetos.(AU)

Vitrificação: uma alternativa para a preservação de embriões e material genético de fêmeas mamíferas em criobancos / Vitrification: an alternative for preserving embryos and genetic material mammalian females in cryobanking

A vitrificação é um método de criopreservação barato, rápido e fácil de ser realizado e tem sido usado com relativo sucesso para a preservação de embriões e oócitos obtidos a partir de folículos antrais e pré-antrais. A presente revisão descreve os diferentes métodos de vitrificação, os principais resultados obtidos, bem como sua importância para a tecnologia de reprodução assistida em humanos, animais de genética superior e espécies mamíferas ameaçadas de extinção.

Vitrification is a cryopreservation method's cheap, fast and easy to perform and has been used, with relatively success, for the preservation of embryos and oocytes from preantral and antral follicles. The present review describes the different methods of vitrification, the main results obtained so far as well as its important for the assisted reproduction technologies in human, genetic superior animal and endangered mammalian species.

Ovarian cryopreservation and grafting: its potential for human reproductive biology and animal conservation

Ovarian cryobanking has considerable potential for fertility preservation and restoration and has been used to establish term pregnancies in mice, rats, sheep and humans, yet there is scope for progress towards in vitro and in vivo strategies to A) screen and improve outcomes of cryopreservation procedures and to minimize ischemic damage following grafting, B) monitor folliculogenesis and hormonal feedback, C) screen for, and remove, malignant cells, D) generate antral follicles containing normal mature fertilizable oocytes even when orthotopic autografting is not possible, and E) combine ovarian cryopreservation with more advanced reproductive technologies such as nuclear transfer (for animals only). In species such as mice a very diverse range of both cryopreservation and grafting strategies (including xenografting) has successfully generated live young. Human ovarian grafting is still a rare procedure and it is therefore encouraging that several babies have now been born. Progress has been slowest for species where compatible recipients are seldom available, such as with rare and endangered species. For these, further significant breakthroughs will be needed before cryobanked material can be reliably and efficiently used to generate new offspring.

Ovarian cryopreservation and grafting: its potential for human reproductive biology and animal conservation

Ovarian cryobanking has considerable potential for fertility preservation and restoration and has been used to establish term pregnancies in mice, rats, sheep and humans, yet there is scope for progress towards in vitro and in vivo strategies to A) screen and improve outcomes of cryopreservation procedures and to minimize ischemic damage following grafting, B) monitor folliculogenesis and hormonal feedback, C) screen for, and remove, malignant cells, D) generate antral follicles containing normal mature fertilizable oocytes even when orthotopic autografting is not possible, and E) combine ovarian cryopreservation with more advanced reproductive technologies such as nuclear transfer (for animals only). In species such as mice a very diverse range of both cryopreservation and grafting strategies (including xenografting) has successfully generated live young. Human ovarian grafting is still a rare procedure and it is therefore encouraging that several babies have now been born. Progress has been slowest for species where compatible recipients are seldom available, such as with rare and endangered species. For these, further significant breakthroughs will be needed before cryobanked material can be reliably and efficiently used to generate new offspring.(AU)

Vitrification: an alternative for preserving embryos and genetic material mammalian females in cryobanking / VITRIFICAÇÃO: UMA ALTERNATIVA PARA A PRESERVAÇÃO DE EMBRIÕES E MATERIAL GENÉTICO DE FÊMEAS MAMÍFERAS EM CRIOBANCOS

Vitrification is a cryopreservation methods cheap, fast and easy to perform and has been used, with relatively success, for the preservation of embryos and oocytes from preantral and antral follicles. The present review describes the different methods of vitrification, the main results obtained so far as well as its important for the assisted reproduction technologies in human, genetic superior animal and endangered mammalian species. Keywords: Blastocyst, oocyte, preantral follicle, cryopreservation.

A vitrificação é um método de criopreservação barato, rápido e fácil de ser realizado e tem sido usado com relativo sucesso para a preservação de embriões e oócitos obtidos a partir de folículos antrais e pré-antrais. A presente revisão descreve os diferentes métodos de vitrificação, os principais resultados obtidos, bem como sua importância para a tecnologia de reprodução assistida em humanos, animais de genética superior e espécies mamíferas ameaçadas de extinção. Palavras-Chave: Blastocisto, oócito, folículo ovariano pré-antral, criopreservação.