Phylogeography of Oligosarcus acutirostris (Characiformes: Characidae): testing biogeographic hypotheses in the Northeastern Mata Atlântica freshwater ecoregion

The Northeastern Mata Atlântica freshwater ecoregion (NMAF) is recognized for the high degree of endemism of its ichthyofauna, whose evolutionary and biogeographic histories are still poorly understood. Oligosarcus acutirostris is a freshwater fish species endemic to the NMAF, which is distributed in coastal rivers and streams draining Bahia, Espírito Santo, and part of Minas Gerais states in eastern Brazil. Its widespread distribution in currently isolated river basins along the NMAF prompted this study, which aimed to understand what scenarios would be involved in determining its current distribution pattern, and to contribute to a better understanding of the biogeographic history of the NMAF. For this, mitochondrial and nuclear DNA sequences were analyzed based on samples from different localities along the species distribution, including its type locality. Overall, phylogeographic analyses indicate a strong genetic structure within the species evidenced mainly by the non-sharing of haplotypes between most of the basins analyzed. According to the AMOVA results, the current distribution of haplotypes is better explained by the Pleistocene coastal paleodrainages. The results are also used to test and complement a biogeographic hypothesis previously proposed for the drainages of the NMAF.(AU)

A ecorregião de água doce Mata Atlântica Nordeste (NMAF) é reconhecida pelo alto grau de endemismo da sua ictiofauna, cujas histórias evolutiva e biogeográfica ainda são pouco compreendidas. Oligosarcus acutirostris é uma espécie de peixe de água doce endêmica da NMAF, que está distribuída em rios e riachos costeiros que drenam os estados da Bahia, Espírito Santo e parte de Minas Gerais, no leste do Brasil. Sua ampla distribuição em bacias atualmente isoladas ao longo da NMAF motivou este estudo, que teve como objetivos entender quais cenários estariam envolvidos na determinação do seu padrão atual de distribuição e contribuir para uma melhor compreensão da história biogeográfica da NMAF. Para isto, foram analisadas sequências de DNA nuclear e mitocondrial, a partir de amostras de diferentes localidades ao longo da distribuição da espécie, incluindo sua localidade tipo. No geral, as análises filogeográficas indicam forte estruturação genética na espécie, evidenciada principalmente pelo não compartilhamento de haplótipos entre a maioria das bacias analisadas. De acordo com os resultados da AMOVA, a distribuição atual dos haplótipos é melhor explicada pelas paleodrenagens costeiras do Pleistoceno. Os resultados obtidos também são utilizados para testar e complementar hipótese biogeográfica previamente proposta para as drenagens da NMAF.(AU)

Multiloci analyses suggest synonymy among Rhomboplites, Ocyurus and Lutjanus and reveal the phylogenetic position of Lutjanus alexandrei (Lutjanidae: Perciformes)

Lutjanidae comprises 21 genera and 135 species widespread throughout Atlantic, Indian and Pacific oceans. Nonetheless, the phylogenetic relationships of Lutjaninae remain uncertain. Furthermore, phylogenetic hypotheses for Lutjanus alexandrei, an endemic species from northeastern Brazilian coast, in Lutjanidae are absent so far. Therefore, we carried out multiloci analyses, combining both mitochondrial and nuclear DNA sequences in Lutjaninae species from Western Atlantic focusing on the controversial relationships among Lutjanus, Rhomboplites, and Ocyurus. Besides, we determined the phylogenetic position and dated the origin of L. alexandrei. The phylogenetics trees based on the 4.4 kb for 11 species corroborated the synonym among Lutjanus and the putative monotypic genera. For the dating of L. alexandrei, another nucleotide dataset (3.0 kb; 40 species) validated the genetic identity of this species that diverged from the sister taxon L. apodus between 2.5 - 6.5 Mya, probably as a result of the barrier caused by the muddy outflow from Orinoco and Amazon rivers along the coastal zone. This report is the most robust multiloci analysis to confirm the synonymy of the three genera of Lutjaninae from Western Atlantic and the first reliable inference about the phylogenetic relationships and origin of L. alexandrei.(AU)

A Família Lutjanidae compreende 21 gêneros e 135 espécies, distribuídas ao longo dos oceanos Atlântico, Índico e Pacífico. As relações filogenéticas dos Lutjaninae são incertas. Além disso, a espécie Lutjanus alexandrei, endêmica da costa nordeste do Brasil, não foi inclusa em nenhuma hipótese filogenética até o presente. Assim, realizamos uma análise integrando DNA mitocondrial e nuclear para espécies de Lutjaninae do Atlântico Ocidental, direcionada para a controversa relação entre Lutjanus, Rhomboplites e Ocyurus. Além disso, alocamos filogeneticamente L. alexandrei e datamos sua origem. As árvores filogenéticas baseadas em 4.4 kb de 11 espécies corroboraram a sinonímia entre os monotípicos e Lutjanus. Para a datação de L. alexandrei, outro banco de nuclueotídeos foi analisado (3.0 kb; 40 espécies), validando geneticamente a espécie e a colocando como irmã de L. apodus, da qual se separou entre 2.5 - 6.5 Mya, o que provavelmente foi provocado pela faixa enlameada na região costeira, influenciada pelas descargas dos rios Amazonas e Orinoco, que funciona como barreira. Este trabalho representa a mais robusta análise multiloci direcionada para a sinonimização dos três gêneros de Lutjaninae e a primeira hipótese filogenética a propor um posicionamento e origem para L. alexandrei.(AU)

Multiloci analyses suggest synonymy among Rhomboplites, Ocyurus and Lutjanus and reveal the phylogenetic position of Lutjanus alexandrei (Lutjanidae: Perciformes)

Lutjanidae comprises 21 genera and 135 species widespread throughout Atlantic, Indian and Pacific oceans. Nonetheless, the phylogenetic relationships of Lutjaninae remain uncertain. Furthermore, phylogenetic hypotheses for Lutjanus alexandrei, an endemic species from northeastern Brazilian coast, in Lutjanidae are absent so far. Therefore, we carried out multiloci analyses, combining both mitochondrial and nuclear DNA sequences in Lutjaninae species from Western Atlantic focusing on the controversial relationships among Lutjanus, Rhomboplites, and Ocyurus. Besides, we determined the phylogenetic position and dated the origin of L. alexandrei. The phylogenetics trees based on the 4.4 kb for 11 species corroborated the synonym among Lutjanus and the putative monotypic genera. For the dating of L. alexandrei, another nucleotide dataset (3.0 kb; 40 species) validated the genetic identity of this species that diverged from the sister taxon L. apodus between 2.5 - 6.5 Mya, probably as a result of the barrier caused by the muddy outflow from Orinoco and Amazon rivers along the coastal zone. This report is the most robust multiloci analysis to confirm the synonymy of the three genera of Lutjaninae from Western Atlantic and the first reliable inference about the phylogenetic relationships and origin of L. alexandrei.(AU)

A Família Lutjanidae compreende 21 gêneros e 135 espécies, distribuídas ao longo dos oceanos Atlântico, Índico e Pacífico. As relações filogenéticas dos Lutjaninae são incertas. Além disso, a espécie Lutjanus alexandrei, endêmica da costa nordeste do Brasil, não foi inclusa em nenhuma hipótese filogenética até o presente. Assim, realizamos uma análise integrando DNA mitocondrial e nuclear para espécies de Lutjaninae do Atlântico Ocidental, direcionada para a controversa relação entre Lutjanus, Rhomboplites e Ocyurus. Além disso, alocamos filogeneticamente L. alexandrei e datamos sua origem. As árvores filogenéticas baseadas em 4.4 kb de 11 espécies corroboraram a sinonímia entre os monotípicos e Lutjanus. Para a datação de L. alexandrei, outro banco de nuclueotídeos foi analisado (3.0 kb; 40 espécies), validando geneticamente a espécie e a colocando como irmã de L. apodus, da qual se separou entre 2.5 - 6.5 Mya, o que provavelmente foi provocado pela faixa enlameada na região costeira, influenciada pelas descargas dos rios Amazonas e Orinoco, que funciona como barreira. Este trabalho representa a mais robusta análise multiloci direcionada para a sinonimização dos três gêneros de Lutjaninae e a primeira hipótese filogenética a propor um posicionamento e origem para L. alexandrei.(AU)

Unexpectedly high diversity in a small basin: A taxonomic revision of Eurycheilichthys (Siluriformes: Loricariidae), with descriptions of seven new species

A taxonomic revision of Eurycheilichthys is provided, and seven new species are described in addition to the two previously known species in this genus: E. pantherinus from the upper rio Uruguay, and E. limulus from the upper rio Jacuí. The genus is diagnosed based on the uniquely derived presence of seven branched pectoral-fin rays, and on the possession of reduced filamentous gill rakers in the oral surface of the hyobranchial skeleton, and presence of a distinct fleshy flap along the posterodorsal margin of the pectoral-fin spine in adult males. The seven new species are described from tributaries to the rio Taquari basin, itself a tributary to the rio Jacuí in Rio Grande do Sul State, southern Brazil. The new species are diagnosed based on color variation, abdominal plate morphology, lip size, parieto-supraoccipital shape, the number of dermal plates, the number of teeth, and body proportions. The high diversity and degree of species endemism in a limited area are discussed and compared to other fish groups. Genetic sequences (GenSeq) of mitochondrial and nuclear DNA, distribution maps, an identification key, and illustrations are presented for all species.(AU)

Uma revisão taxonômica de Eurycheilichthys é apresentada e sete novas espécies são descritas além das duas previamente conhecidas, E. pantherinus do alto rio Uruguai e E. limulus do alto rio Jacuí. O gênero é diagnosticado com base na presença unicamente derivada de sete raios ramificados na nadadeira peitoral, bem como na presença de rastros branquiais filamentosos reduzidos na superfície oral do esqueleto hiobranquial e de abas carnosas distintas ao longo da margem posterodorsal do espinho da nadadeira peitoral em machos adultos. As sete novas espécies são descritas de tributários do alto rio Taquari, um afluente do rio Jacuí no Rio Grande do Sul, sul do Brasil. As novas espécies são diagnosticadas com base em variação de características do colorido, placas abdominais, tamanho dos lábios, forma do osso parieto-supraoccipital, número de placas dérmicas, número de dentes e proporções corporais. A alta diversidade e grau de endemismo das espécies em uma área limitada são discutidos e comparados com outros grupos de peixes. Sequências genéticas (GenSeq) de DNA nuclear e mitocondrial, mapas de distribuição, uma chave de identificação e ilustrações são fornecidas para todas as espécies.(AU)

Unexpectedly high diversity in a small basin: A taxonomic revision of Eurycheilichthys (Siluriformes: Loricariidae), with descriptions of seven new species

A taxonomic revision of Eurycheilichthys is provided, and seven new species are described in addition to the two previously known species in this genus: E. pantherinus from the upper rio Uruguay, and E. limulus from the upper rio Jacuí. The genus is diagnosed based on the uniquely derived presence of seven branched pectoral-fin rays, and on the possession of reduced filamentous gill rakers in the oral surface of the hyobranchial skeleton, and presence of a distinct fleshy flap along the posterodorsal margin of the pectoral-fin spine in adult males. The seven new species are described from tributaries to the rio Taquari basin, itself a tributary to the rio Jacuí in Rio Grande do Sul State, southern Brazil. The new species are diagnosed based on color variation, abdominal plate morphology, lip size, parieto-supraoccipital shape, the number of dermal plates, the number of teeth, and body proportions. The high diversity and degree of species endemism in a limited area are discussed and compared to other fish groups. Genetic sequences (GenSeq) of mitochondrial and nuclear DNA, distribution maps, an identification key, and illustrations are presented for all species.(AU)

Uma revisão taxonômica de Eurycheilichthys é apresentada e sete novas espécies são descritas além das duas previamente conhecidas, E. pantherinus do alto rio Uruguai e E. limulus do alto rio Jacuí. O gênero é diagnosticado com base na presença unicamente derivada de sete raios ramificados na nadadeira peitoral, bem como na presença de rastros branquiais filamentosos reduzidos na superfície oral do esqueleto hiobranquial e de abas carnosas distintas ao longo da margem posterodorsal do espinho da nadadeira peitoral em machos adultos. As sete novas espécies são descritas de tributários do alto rio Taquari, um afluente do rio Jacuí no Rio Grande do Sul, sul do Brasil. As novas espécies são diagnosticadas com base em variação de características do colorido, placas abdominais, tamanho dos lábios, forma do osso parieto-supraoccipital, número de placas dérmicas, número de dentes e proporções corporais. A alta diversidade e grau de endemismo das espécies em uma área limitada são discutidos e comparados com outros grupos de peixes. Sequências genéticas (GenSeq) de DNA nuclear e mitocondrial, mapas de distribuição, uma chave de identificação e ilustrações são fornecidas para todas as espécies.(AU)

Una especie nueva de rana del género Chiasmocleis (Microhylidae: Gastrophryninae) de la Cordillera del Cóndor, Ecuador

We describe a new species of frog of the genus Chiasmocleis from the montane forests of southeastern Ecuador, at the western slopes of Cordillera del Cَndor, between 1,2241,630 m of elevation. Based on new sequences of mitochondrial and nuclear DNA we present phylogenetic relationships of the new species and its congeners. The phylogeny shows a close relationship to C. antenori, C. carvalhoi, C. magnova and C. tridactyla. The new species is part of a clade of species that were previously assigned to the genus Syncope. This clade has a sister relationship to a clade that contains all remaining species of Chiasmocleis. The new species differs from its congeners by its reddish-brown to dark-brown (sepia) dorsum with minute yellowish-white spots. Chiasmocleis parkeri sp. nov. is similar to Chiasmocleis antenori in lacking digit I of both hands and feet but Chiasmocleis parkeri differs in coloration, arrangement and size of pale spots, and the absence of a pale line in the canthal region. We describe the calls, which are characterized by having non-pulsed notes, and we provide ecological data from the type locality and adjacent areas.

Se describe una especie nueva de rana del género Chiasmocleis de los bosques montanos del suroriente del Ecuador, en las laderas occidentales de la Cordillera del Cóndor, entre 1.025-1.630 m de altitud. En base a nuevas secuencias de ADN mitocondrial y nuclear presentamos las relaciones filogenéticas de la nueva especie y sus congéneres. La filogenia muestra una relación cercana a C. antenori, C. carvalhoi, C. magnova, y C. tridactyla. La nueva especie forma parte de un clado integrado por especies que previamente habían sido asignadas al género Syncope. Este clado es hermano de otro conformado por el resto de especies de Chiasmocleis. La nueva especie difiere de sus congéneres por su dorso café ladrillo a café obscuro (sepia) cubierto por puntos diminutos blanco-amarillentos. Chiasmocleis parkeri sp. nov. se parece a Chiasmocleis antenori por la ausencia del dedo I, tanto en las manos como en los pies, pero difiere en la coloración, la disposición y tamaño de las manchas claras y la ausencia de una línea clara en la región cantal. La especie nueva presenta algunos rasgos que le distinguen de especies similares. Describimos el canto, caracterizado por tener notas sin pulsos y aportamos datos ecológicos de la localidad típica y áreas adyacentes.

Una especie nueva de rana del género Chiasmocleis (Microhylidae: Gastrophryninae) de la Cordillera del Cóndor, Ecuador

We describe a new species of frog of the genus Chiasmocleis from the montane forests of southeastern Ecuador, at the western slopes of Cordillera del Cَndor, between 1,2241,630 m of elevation. Based on new sequences of mitochondrial and nuclear DNA we present phylogenetic relationships of the new species and its congeners. The phylogeny shows a close relationship to C. antenori, C. carvalhoi, C. magnova and C. tridactyla. The new species is part of a clade of species that were previously assigned to the genus Syncope. This clade has a sister relationship to a clade that contains all remaining species of Chiasmocleis. The new species differs from its congeners by its reddish-brown to dark-brown (sepia) dorsum with minute yellowish-white spots. Chiasmocleis parkeri sp. nov. is similar to Chiasmocleis antenori in lacking digit I of both hands and feet but Chiasmocleis parkeri differs in coloration, arrangement and size of pale spots, and the absence of a pale line in the canthal region. We describe the calls, which are characterized by having non-pulsed notes, and we provide ecological data from the type locality and adjacent areas.(AU)

Se describe una especie nueva de rana del género Chiasmocleis de los bosques montanos del suroriente del Ecuador, en las laderas occidentales de la Cordillera del Cóndor, entre 1.025-1.630 m de altitud. En base a nuevas secuencias de ADN mitocondrial y nuclear presentamos las relaciones filogenéticas de la nueva especie y sus congéneres. La filogenia muestra una relación cercana a C. antenori, C. carvalhoi, C. magnova, y C. tridactyla. La nueva especie forma parte de un clado integrado por especies que previamente habían sido asignadas al género Syncope. Este clado es hermano de otro conformado por el resto de especies de Chiasmocleis. La nueva especie difiere de sus congéneres por su dorso café ladrillo a café obscuro (sepia) cubierto por puntos diminutos blanco-amarillentos. Chiasmocleis parkeri sp. nov. se parece a Chiasmocleis antenori por la ausencia del dedo I, tanto en las manos como en los pies, pero difiere en la coloración, la disposición y tamaño de las manchas claras y la ausencia de una línea clara en la región cantal. La especie nueva presenta algunos rasgos que le distinguen de especies similares. Describimos el canto, caracterizado por tener notas sin pulsos y aportamos datos ecológicos de la localidad típica y áreas adyacentes.(AU)

Molecular identification of intergenus crosses involving catfish hybrids: risks for aquaculture production

Monitoring of the interspecific hybrid production and trade is essential for the appropriate management of these animals in fish farms. The identification of catfish hybrids by morphological analysis is unreliable, particularly of juveniles and post-F1 individuals. Therefore, in the present study, we used five molecular markers (four nuclear genes and one mitochondrial gene) to detect hybrids in the trade of pimelodid juvenile fish from different stocks purchased of five seed producers in Brazil. Samples commercialized as pintado (pure species Pseudoplatystoma corruscans ) from three fish farms were genetically identified as hybrid cachapinta ( P. reticulatum x P. corruscans ). In the stocks purchased as cachandiá (hybrid between P. reticulatum x Leiarius marmoratus ) and cachapira (hybrid between P. reticulatum x Phractocephalus hemioliopterus ), we suggested the occurrence of intergenus crosses involving the hybrid cachapinta, which was used instead of the pure species P. reticulatum . The problems involving the hybrid cachapinta production were discussed in the present study, especially because these animals have caused genetic contamination and threatened the genetic integrity of natural and cultivated populations. In order to improve the surveillance of the production and provide criteria for the correct management of catfish hybrids, genetic markers has become an excellent alternative to the morphological identification, including juveniles or post-F1 generations.(AU)

O monitoramento da produção e comércio de híbridos interespecíficos é essencial para o manejo adequado desses animais em pisciculturas. A identificação de híbridos de bagres por análise morfológica não é confiável, especialmente de juvenis e indivíduos pós-F1. Portanto, no presente estudo, cinco marcadores moleculares (quatro genes nucleares e um gene mitocondrial) foram utilizados para detectar híbridos no comércio de juvenis pimelodídeos de diferentes estoques, comprados de cinco produtores de alevinos no Brasil. As amostras comercializadas como pintado (espécie pura Pseudoplatystoma corruscans ) foram geneticamente identificadas como híbrido cachapinta ( P. reticulatum x P. corruscans ). Nos estoques comprados como cachandiá (híbrido entre P. reticulatum x Leiarius marmoratus ) e cachapira (híbrido entre P. reticulatum x Phractocephalus hemioliopterus ), sugere-se a ocorrência de cruzamentos intergêneros envolvendo o híbrido cachapinta, que foi usado ao invés da espécie pura P. reticulatum . Os problemas envolvendo a produção de cachapinta foram discutidos no presente estudo, especialmente porque estes animais têm causado contaminação genética e ameaçado a integridade genética das populações naturais e cultivadas. Com o intuito de melhorar a fiscalização da produção e fornecer critérios para o manejo correto dos híbridos de bagre, marcadores genéticos têm se tornado uma excelente alternativa para a identificação morfológica, incluindo juvenis ou gerações pós-F1.(AU)

DIVERSIDADE GENÉTICA, ANCESTRALIDADE INDIVIDUAL E PADRÕES DE INTROGRESSÕES EM RAÇAS DE GALINHAS IBERO-AMERICANAS

As raças de galinhas nativas (Gallus gallus) são importantes para o desenvolvimento da produção avícola mundial e para a subsistência. Contudo, apenas 25% destas raças estão em algum tipo de programa de conservação. Informações moleculares poderão apoiar esses programas de conservação e a utilização dessas raças, auxiliando no progresso de projetos e fornecendo informações importantes sobre esses recursos genéticos para a produção avícola comercial e para o relato da história da humanidade. Objetivou-se com este estudo avaliar, através de marcadores microssatélites e DNA mitocondrial, os níveis da diversidade genética, a relação filogenética e os padrões de introgressão existentes entre raças nativas de galinhas brasileiras e de países da Península Ibérica, para fornecer subsídios para programas de conservação e uso sustentável da diversidade genética da espécie. A pesquisa foi realizada pela UFPI em parceria com UEMA, UCO e INIAV. Foram avaliadas raças nativas do Nordeste do Brasil (3), Portugal (4), Espanha (9), Chile (1), Nigéria (1) e como grupos controles três variedades comercias, totalizando 21 grupos genéticos. Fez-se uso de vários softwares estatísticos para estimar, em nível de DNA nuclear e não nuclear, os índices de diversidade nucleotídica, diversidade haplotípica e as distâncias dentro, entre e para todas as populações incluídas nos grupos que foram formados. As análises filogenéticas mitocondriais apontam que as raças nativas de galinhas brasileiras apresentam múltiplas origens, principalmente de galinhas Europeias, indianas, africanas e chinesas. As três raças de galinhas do Brasil avaliadas pertencem a três grupos genéticos distintos. Dentre estes, a raça Canela-Preta apresenta características genéticas próprias e as raças Caneluda do Catolé e Peloco compartilham combinações gênicas. Com base nos microssatélites, as galinhas do Brasil são mais próximas geneticamente das aves de Portugal, Nigéria e Araucanas do Chile. As raças do Brasil, Portugal e Espanha contêm estruturas genéticas especificas de cada país, o que demonstra a riqueza genética da espécie Gallus gallus. Estes resultados contribuirão diretamente para conservação dessas raças e para incentivar a promoção de novas pesquisas genéticas em outros estados do Brasil, bem como em outros países. Estes são os primeiros trabalhos nessa envergadura com raças nativas de galinhas do Brasil em conjunto com raças da Península Ibérica. Isto resulta em fortalecimento, valorização e reconhecimento dessas raças no meio científico, bem como na área rural com produtores. Os dados genéticos demonstram que as raças de galinhas nativas constituem um reservatório vasto e importante de diversidade genética para a produção e conservação da espécie Gallus gallus. Portanto, estimular a produção, bem como a comercialização desses materiais genéticos se faz primordial, pois dessa forma será promovida a conservação e utilização desses patrimônios genéticos, que também devem ser mais estudados a fim de elucidar o real potencial genético dessas aves que se mostram promissoras.

Native chicken breeds are important for the development of world poultry production and livelihoods, however only 25% of the world's native chicken breeds (Gallus gallus) are in any type of conservation program. Molecular information can support these conservation programs and the use of these breeds, assisting in the progress of projects and providing important information about these valuable genetic resources for commercial poultry production and for the report of the human history. Given the above, the objective of this study was to evaluate, through microsatellite markers and mitochondrial DNA, the levels of genetic diversity, the phylogenetic relationship and the patterns of introgressions that exist between native chicken breeds from Brazil and countries of the Iberian Peninsula, in order to provide subsidies for conservation programs and sustainable use of the species' genetic diversity. The research was carried out by UFPI in partnership with UEMA, UCO and INIAV. Three native breeds from northeastern Brazil, four breeds from Portugal, nine breeds from Spain, one breed from Chile, and one breed from Nigeria were used. Also, three commercial strains were evaluated as control groups, totalling 19 genetic groups. Various statistical programs were used to estimate, at the level of nuclear and non-nuclear DNA, the indexes of nucleotide diversity, haplotypic diversity, and the distances within, between and for all populations included in the groups that were formed. Mitochondrial phylogenetic analyses indicate that the Brazilian native breeds have multiple origins, especially European, Indian, African, and Chinese. The three Brazilian chicken breeds evaluated belong to three distinct genetic groups. The Canela-Preta breed has its own genetic characteristics, whereas the Caneluda do Catolé and Peloco breeds share genetic combinations. Based on microsatellites, chickens from Brazil are genetically closer to birds from Portugal, Nigeria and Araucanas from Chile. The breeds from Brazil, Portugal and Spain contain specific genetic structures for each country, which demonstrates the genetic richness of the Gallus gallus species. These results will directly contribute to the conservation of these breeds and encourage the promotion of new genetic research in other states of Brazil, as well as in other countries. These are the first works on this scale with native breeds of chickens from Brazil in conjunction with the Iberian Peninsula. Our results will help in strengthening, valuation and recognition of these breeds in the scientific community, as well as in the rural area by producers. The genetic data demonstrate that the native chicken breeds constitute a wide and important reservoir of genetic diversity for the production and conservation of the Gallus gallus species. Thus, stimulating the production, as well as the commercialization of these genetic materials is paramount, because in this way it would be promoting the conservation and use of these genetic assets, which should also be further studied in order to elucidate the real genetic potential of these promising birds. KEYWORDS: Genetic conservation, Mitochondrial DNA, Gallus gallus, Microsatellites, Native Breeds.

Genetic structuring of Salminus hilarii Valenciennes, 1850 (Teleostei: Characiformes) in the rio Paraná basin as revealed by microsatellite and mitochondrial DNA markers

Genetic variation of Salminus hilarii was assessed by screening microsatellite loci and mitochondrial D-loop DNA across four sampling in the upper rio Paraná basin of Brazil. Genetic diversity - measured as mean expected heterozygosity (0.904) and mean number of alleles across populations (13.7) - was reasonably high. Differentiation of microsatellite allele frequencies among populations was shown to be low but significant by AMOVA Φ ST (0.0192), and high by D EST (0.185). D-loop variation was high, with haplotypic diversity of 0.950 and nucleotide diversity of 0.011. Mitochondrial DNA-based estimates for population differentiation were high, with an overall Φ ST of 0.173. The results of tests of nuclear and mitochondrial variation yielded no unequivocal inference of historical demographic bottleneck or expansion. Genetic differentiation observed among S. hilarii populations in the rio Grande may be caused by a combination of historical differentiation and recent gene-flow disruption caused by the dams followed by reproduction of isolated spawning assemblages in mid-sized tributaries of the respective reservoirs. We present spatially more intensive sampling of S. hilariipopulations across the rio Paraná basin in order to more effectively distinguish between historical and contemporary differentiation.(AU)

A variabilidade genética de Salminus hilarii foi avaliada por lócus microssatélites e sequências D-Loop do DNA mitocondrial em quatro populações da região da bacia do Alto Paraná. A diversidade genética - medida pela heterozigosidade média (0,904) e número de alelos médios das populações (13,7) - foi razoavelmente alta. A diferenciação das frequências alélicas entre as populações foi baixa, mas significativa pela AMOVA Φ ST (0,0192), e alta pelo D EST (0,185). A variação mitocondrial foi alta com uma diversidade haplotípica de 0,950 e uma diversidade nucleotídica de 0,011. Estimativas de diferenciação populacional baseadas no DNA mitocondrial foram altas, com um valor global de Φ ST de 0,173. Os resultados dos testes da variação nuclear e mitocondrial demonstram nenhuma inequívoca inferência histórica de contração e expansão demográfica. A diferenciação genética observada entre as populações de S. hilarii no rio Grande pode ter sido causada pela combinação de diferenciação histórica e interrupção recente do fluxo gênico causada pela construção de barragens seguida por um isolamento reprodutivo de populações em tributários de médio porte dos respectivos reservatórios. Nós apresentamos uma amostragem mais ampla e intensiva de populações de S. hilarii ao longo da bacia do alto rio Paraná para se efetivamente distinguir se a diferenciação genética das populações encontrada é histórica ou contemporânea.(AU)

Prospecting molecular markers to distinguish Cichla kelberi, C. monoculus and C. piquiti / Prospecção de marcadores moleculares para distinção de Cichla kelberi, Cichla monoculus e Cichla piquiti

Peacock bass, a fish of the genus Cichla, is an exotic species from the upper river Paraná floodplain in which the species Cichla kelberi and C. piquiti have been confirmed, coupled to the specie C. monoculus upstream in the Capivara and Taquaruçu dams. The introduction of this genus has caused negative impacts on the diversity of native species. Current research prospects DNA sequences capable of distinguishing the three species and provide molecular data for the taxonomic characterization of the species in the upper Paraná River basin.  Sequencing of nuclear (tmo4c4, dlx2 and bmp4) and mitochondrial (cox1, cytb) loci were done from fish of the three species of the genus Cichla reported in the literature of the upper Paraná River basin. Sequence analysis provided molecular differentiation for the species through the usage of loci cytb, dlx2 and cox1. Since the latter only distinguished C. piquiti from the other Cichla species, the loci bmp4 and tmo4c4 were not adequate to accomplish our aim.(AU)

O tucunaré é um peixe pertencente ao gênero Cichla, sendo exótico na planície de inundação do alto rio Paraná, onde foi confirmada a presença das espécies Cichla kelberi e C. piquiti e, logo a montante, C. monoculus, nas represas de Capivara e Taquaruçu. A introdução deste gênero tem ocasionado impacto negativo à diversidade de espécies nativas. Visando providenciar dados moleculares para auxiliar na caracterização taxonômica das espécies deste gênero na bacia do alto rio Paraná, os objetivos deste trabalho foram prospectar sequências de DNA capazes de distinguir as três espécies. Procedeu-se o sequenciamento de loci nucleares (tmo4c4, dlx2 e bmp4) e mitocondriais (cox1, cytb) de peixes das três espécies do gênero Cichla relatadas na literatura da bacia do alto rio Paraná. As análises das sequências possibilitaram a diferenciação molecular para estas espécies pela utilização dos loci cytb, dlx2 e cox1; este último, somente para distinguir C. piquiti das demais espécies de Cichla. A utilização dos loci bmp4 e tmo4c4 não foi adequada para este propósito.(AU)

ESTUDO DA ATIVIDADE ANTITUMORAL DO COMPOSTO MIH 2.4Bl EM LINHAGENS CELULARES DE CÂNCER DE MAMA

Os compostos mesoiônicos sintéticos, que pertencem ao grupo 1,3-tiazólio-5-tiolato, possuem capacidade de atravessar membranas celulares e interagir com diversas moléculas biológicas com afinidades distintas. Este estudo teve como objetivo a avaliar o potencial antineoplásico de um novo composto mesoiônico MIH2.4Bl do grupo 1,3tiazólio-5-tiolato em linhagens celulares de câncer de mama. Para esse estudo formam cultivadas doze linhagens de mama, duas normais (MCF10A e HMEC) e dez cancerígenas, das quais oito são linhagens de câncer humano (MCF7, 4T1, BT-20, BT-549, MDA-MB-231, MDA-MB-436, T47-D, ZR 75-1) e 2 linhagens de câncer de ratos (MM2MT e MM3MG). Pelo teste de cristal violeta determinamos que o composto MIH 2.4Bl apresentou atividade de inibição do crescimento em nove (4T-1, BT-20, MCF-7, MDA-MB 231, MDA-MB-436, MM2MT, MM3MG, T-47D e ZR-75-1) das dez das linhagens de câncer de mama testadas, porém quatro linhagens (BT-20, MCF-7, MDA-MB-436, T-47D e ZR-75-1) mostraram atividade inibitória significativamente maior do que a linhagem normal HMEC. Os valores de IC 50 foram determinados para todas as doze linhagens celulares nos tempos de 48, 72 e 96 horas. Análise adicional de citotoxicidade mediada por MIH 2.4Bl foi realizada em diferentes concentrações e tempos de tratamento utilizando a linhagem celular MCF-7, observando que essa linhagem teve sua viabilidade diminuida dependentes da dose e do tempo, com efeito citotoxico máximo em 72 e 96 horas. Três linhagens de células de câncer de mama (MCF-7, T-47D e ZR-75-1) mostraram um índice de seletividade mais potente à inibição de crescimento por MIH 2.4Bl quando comparado com a linhagem normal(HMEC) . Sendo a linhagem MCF7 a que apresentou o maoir índice de seletividade em 2 dos 3 tempos testados. Alterações no ciclo celular, também foram observadas na linhagem MCF7 após tratamento com o mesoinico, ocorrendo um aumento do número de células na fase G2/M em 34,2% em comparação com 0,1% nas células sem tratamento, para essa analise utilizamos o teste de iodeto de propídio, por citometria de fluxo. Os tipos de morte induzidas pelo composto MIH2.4Bl na linhagem MCF7, foram analisados por microscopia eletônica e ensaio de TUNEL os quais detectaram alterações na morfologia nuclear, degeneração mitocondrial e danos no DNA da célula, nas concentrações testadas (37.5 e 75 M), sugerindo uma possível morte por 15 apoptose. A morte autofágica também foi induzida, observadas pelo aumento de expressão das proteinas envolvidas no processo autofágico (Beclin 1, ATG-5 e LC3B II/I). Pelo teste de seahorse foi detectado que o tratamento com o composto MIH2.4Bl causou disfinção mitocondrial na linhagem MCF7. Com relação à análise da expressão dos genes observou-se que os genes AMIGO2 e DKK1 tiveram seus níveis de expressão significativamente dimuídos na linhagem MCF7 após tratamento com o composto quando comparados com o controle (linhagem MCF7 tratada com 0.01% DMSO) e os genes ATF3, HBEGF, RGS2, and ACRC tiveram seus níveis de expressão aumentados após o tratamento em relação ao controle (linhagem tratada com 0.01% DMSO) esses resultados foram obtidos da análise de PCR em tempo real. Portanto esses resultados sugerem que o composto MIH2.4Bl é um candidto promissor para o tratamento de câncer de mama e apoia mais invetigação in vitro e in vivo.

Synthetic mesoionic compounds, which belong to the 1,3-thiazolium-5-thiolate group, have the ability to cross cell membranes and interact with different biological molecules with different affinities. This study aimed to evaluate the antineoplastic potential of a new mesoionic compound MIH2.4Bl from the 1,3thiazolium-5-thiolate group in breast cancer cell lines. For this study formed cultured breast lines, two normal (MCF10A and HMEC) and ten breast cancers, of which eight are human cancer lines (MCF7, 4T1, BT-20, BT-549, MDA-MB-231, MDA - MB-436, T47-D, ZR 75-1) and 2 mouse cancer lines (MM2MT and MM3MG). The crystal violet test determines the compound MIH 2.4Bl which shows growth inhibition activity in nine (4T-1, BT-20, MCF-7, MDA-MB 231, MDA-MB-436, MM2MT, MM3MG, T- 47D and ZR-75-1) of the ten breast cancer lines tested, but four lines (BT-20, MCF-7, MDA-MB-436, T-47D and ZR-75-1) larger than HMEC normal strain . IC 50 values were selected for all cell lines at 48, 72 and 96 hours. The additional analysis of cytotoxicity mediated by MIH 2.4Bl was carried out in different tests and times of use of the MCF-7 cell line, noting that the line had its viability decreased depending on the dose and time, with maximum cytotoxic effect in 72 and 96 hours. Three breast cancer cell lines (MCF-7, T-47D and ZR-75-1) show a more potent selectivity index for inhibiting growth by MIH 2.4Bl when compared to a normal strain (HMEC). Being an MCF7 strain, which exhibits the highest selectivity index in 2 of the 3 times tested. Changes in the cell cycle were also observed in the MCF7 line after treatment with mesoinic, with an increase in the number of cells in the G2 / M phase by 34.2% compared to 0.1% in cells without treatment. propidium iodide test, by flow cytometry. The types of death induced by the compound MIH2.4Bl in the MCF7 line, were analyzed by electron microscopy and TUNEL assay, which changes were detected in nuclear morphology, mitochondrial degeneration and damage to the cell's DNA, in the tested tests (37.5 and 75 M), suggesting a possible death from apoptosis. Automatic death was also induced, observed by the increased expression of proteins used in the automatic process (Beclin 1, ATG-5 and LC3B II / I). The seahorse test was detected as a treatment with MIH2.4Bl caused a mitochondrial difference in the MCF7 strain. Regarding the analysis of the expression of genes subject to AMIGO2 and DKK1 genes, expression levels are decreased in the MCF7 17 line after treatment with compound or when compared to control (MCF7 line treated with 0.01% DMSO) and the ATF3, HBEGF genes , RGS2 and ACRC had their expression levels increased after treatment in relation to the control (lineage treated with 0.01% DMSO), these results were submitted to real-time PCR analysis. Therefore, these results separate MIH2.4Bl as a promising promoter for the treatment of breast cancer and further support in vitro and in vivo research.

Caracterização genética do jundiá (Rhamdia quelen) por meio do DNA barcode e marcadores microssatélites

O gênero Rhamdia é composto por espécies morfologicamente semelhantes e com ampla distribuição geográfica. O jundiá Rhamdia quelen destaca-se entre elas, com grande participação na piscicultura do Sul do Brasil. A despeito de sua relevância para o cultivo, a identificação atualmente é incerta, e comercialização é feita normalmente pela denominação jundiá. A caracterização genética através do DNA barcode e de marcadores microssatélites é de grande importância para o crescimento da piscicultura continental. O presente estudo teve como objetivo utilizar o gene COI para investigar o número de unidades taxonômicas operacionais moleculares (MOTUs), definir o ótimo threshold (OT) a partir do conjunto de dados analisados, e determinar a diversidade e a estrutura genética através de marcadores microssatélites. Para análise do gene COI foram utilizadas 85 indivíduos oriundos de cultivos comerciais de Santa Catarina (SC), Paraná (PR) e Rio Grande do Sul (RS), selvagens do rio Uruguai além de sequências referência do BOLD. Três MOTUs foram definidas a partir do OT (1,73%). O número de clados obtidos pela árvore NJK2P corroborou com o número de MOTUs obtidas. As análises dos marcadores microssatélites foram realizadas com 90 indivíduos de jundiá de cultivos comerciais e selvagens do sul do Brasil. As análises de estrutura genética populacional suportam existência de três unidades genéticas distintas, sendo uma formada por indivíduos provenientes de cultivos dos estados de SC e PR, outra de indivíduos oriundos do rio Uruguai, e uma terceira de indivíduos de cultivo oriundas do RS. A análise bayesiana indicou que alguns indivíduos analisados representam o resultado cruzamentos entre indivíduos de distintas unidades genéticas. Os resultados indicaram que R. quelen é formada por diferentes MOTUs, sugerem que ocorre intercâmbio de indivíduos correspondentes às distintas unidades moleculares dos diferentes locais de cultivo analisados e alta diversidade genética. Os marcadores moleculares utilizados neste estudo se mostraram eficientes para definição de grupos genéticos, o que possibilita que os cultivos analisados a partir dos resultados obtidos neste estudo comecem a desenvolver programas de melhoramento genético. Este trabalho sugere que não sejam feitos programas de repovoamentos com peixes oriundos de cultivos comerciais.

The Rhamdia genus is composed by morphologically similar species with wide geographic distribution. The Rhamdia quelen jundiá stands out with a great participation in fish-farm of the South of Brazil. Despite its relevance for cultivation, currently the identification is uncertain, and its commercialization is usually done just by the denomination jundiá. The genetic characterization through DNA barcode and microsatellite markers has great importance for the growth of continental fish farming. The aim of the present study was to use the Mitochondrial Cytochrome Oxidase I (COI) gene to investigate the number of molecular operational taxonomic units (MOTUs), to define the optimal threshold (OT) from the analyzed data set and to determine the diversity and the genetic structure through microsatellite markers. In order to analyze the COI gene 85 individuals were used in this study coming from commercial cultivation from states of Santa Catarina (SC), Paraná (PR) and Rio Grande do Sul (RS), savages from Uruguai river. Three MOTUs were defined from OT of 1,73%. The number of clades obtained by NJK2P tree has corroborated with the number of obtained MOTUs. The analyses of the microsatellite markers were realized with 90 individuals of jundiás from commercial cultivation and wild from the south of Brazil. The analyses of population genetic structure support the existence of three distinct genetic units, one from individuals from SC and PR cultivation, another from Uruguai river and a third composed by individuals coming from RS. The bayesian analysis has indicated that some analyzed individuals represent the result of the crossing of individuals from distinct genetic units. The results indicated that R. quelem is formed by different MOTUs and suggest that occurs an interchange of individuals coming from distinct molecular units belong to different analyzed cultivation sites and high genetic diversity. The molecular markers used in this study has proved to be efficient for definition of genetic groups, and this enables that analyzed cultures from the obtained results in this study start to develop genetic breeding programs. This paper suggests that restocking programs with fishes coming from commercial cultivations does not be done.

Aspectos morfológicos e moleculares de carrapatos do complexo Amblyomma maculatum

O objetivo do presente estudo foi comparar os aspectos morfológicos e moleculares das populações de carrapatos do complexo Amblyomma maculatum do Estado do Maranhão com de outras localidades do Brasil, depositadas na Coleção Nacional de carrapatos da Universidade de São Paulo. Foram coletados espécimes do município de Bacurituba (02° 42' 21" S 44° 44' 16" O) no Estado do Maranhão e comparadas com espécimes da Coleção 10 Nacional de Carrapatos da Universidade de São Paulo. Os carrapatos do Maranhão foram 11 coletados de suínos (Sus scrofa domesticus) criados em regime extensivo e transportados para a Universidade de São Paulo. A primeira geração de carrapatos reproduzidas em 13 laboratório foi obtida a partir de oito progenitoras nativas do Maranhão. Os carrapatos 14 foram acondicionados em potes de plásticos devidamente identificados e acondicionados 15 em estufa BOD com 27 C e 90% UR Após a eclosão, as fases imaturas foram postas para a 16 infestação em Cavia porcellus até a obtenção das fases adultas, alvo do estudo 17 comparativo. Os espécimes foram identificados por chave e foram mensurados utilizando-18 se do Microscópio Carl Zeiss modelo SteREO Discovery.V12 e seu software ZEN para 19 mensuração das variáveis: Comprimento da Coxa I e Espinho I (esquerdos e diretos), Coxa 20 IV e Espinho IV (esquerdos e direitos), Comprimento e Largura do Capítulo. A extração de 21 DNA para as análises moleculares foi realizada de acordo com o protocolo Isotiocianato de 22 Guanidina (GT). Uma vez extraído o DNA, foram submetidos a dois protocolos de reação 23 em cadeia pela polimerase (PCR). Dois marcadores foram utilizados buscando amplificar 24 fragmentos de aproximadamente 460-pb do gene mitocondrial 16S rRNA e 1200-pb do 25 segundo espaço transcrito interno (ITS2) do DNA ribossômico nuclear. Os espécimes de 26 fêmeas e machos foram avaliados morfologicamente e identificados como Amblyomma 27 triste. Indivíduos da Coleção Nacional de Carrapatos Danilo Gonçalves Saraiva foram 28 comparados com os espécimes do presente estudo. Observou-se diferença estatística 29 (P<0,05) para as dimensões (Coxa direita I/ Espinho direto I; Coxa direita IV/Espinho 30 direito IV; Coxa esquerda IV/Espinho esquerdo IV) dos Espinhos da Coxa I e Coxa IV. 31 Não houve diferença estatística (P>0,05) para a razão do Comprimento do Capitulo pela 32 Largura do Capitulo. Para as fêmeas, observou-se diferença estatística para espinho direito 33 I, coxa esquerda I, espinho esquerdo I e largura do capitulo. As sequências obtidas quando 34 comparadas, de acordo com o gene mitocondrial 16S rRNA e sequências derivadas do ITS2 35 ribossômico nuclear, observa-se que os espécimes encontrados no Maranhão apresentam 36 similaridade com Amblyomma maculatum oriundo dos Estados Unidos.

The objective of the present study was to compare the morphological and molecular aspects 6 of the tick populations of the Amblyomma maculatum complex of the State of Maranhão 7 with those of different regions of Brazil stored in Coleção Nacional de Carrapatos of 8 Universidade de São Paulo. Specimens were collected from the municipality of Bacurituba 9 (02 ° 42 '21 "S 44 ° 44' 16" W) in the State of Maranhão and compared with specimens 10 from the National Collection of Ticks of the Universidade de São Paulo. Maranhão ticks 11 were collected from swine (Sus scrofa domesticus) raised in an extensive regime and 12 transported to the Universidade de São Paulo. The ticks were stored in properly identified 13 plastic pots and placed in a BOD incubator with 27 C and 90% RH. After the ticks were 14 hatched, the immature phases were placed for infestation in Cavia porcellus until the adult 15 phases were reached, the study's target comparative. The specimens were identified by key 16 and were measured using the Carl Zeiss Microscope model SteREO Discovery.V12 and its 17 ZEN software to measure the variables: Thigh and Thigh I length (left and right), Thigh IV 18 and Thorn IV (left And rights), Chapter Length and Width. DNA extraction for the 19 molecular analyzes was performed according to the Guanidine Isothiocyanate (GT) 20 protocol. Once the DNA was extracted, they were submitted to two polymerase chain 21 reaction (PCR) protocols. Two markers were used to amplify approximately 460-bp 22 fragments of the mitochondrial 16S rRNA and 1200-bp gene from the second internal 23 transcript space (ITS2) of nuclear ribosomal DNA. The specimens of females and males 24 were morphologically evaluated and identified as Amblyomma triste. Specimens from the 25 National Collection of Ticks "Danilo Gonçalves Saraiva" were compared with the 26 specimens of the present study. Statistical difference (P <0.05) was observed for the 27 dimensions (Right thigh I / Right thigh I, Right thigh IV / Right thigh IV, Left thigh IV / 28 Left thigh IV) Thigh Thighs I and Thigh IV. There was no statistical difference (P> 0.05) 29 for the length of the Chapter Length by Chapter Width. For females, statistical difference 30 was observed for right spur I, left thigh I, left spur I and section width. Sequences obtained 31 when compared, according to the mitochondrial 16S rRNA gene and sequences derived 32 from the nuclear ribosomal ITS2, it is observed that the specimens found in Maranhão have 33 similarity to Amblyomma maculatum from the United States.

Avaliação do potencial de transmissão vetorial do Trypanosoma cruzi no estado do Rio Grande do Norte: aspectos epidemiológicos e taxonômicos de triatomíneos (Hemiptera: Reduviidae: Triatominae)

A infestação dos ecótopos artificiais por triatomíneos, as ações de controle vetorial, a infecção natural por tripanossomatídeos e a distribuição territorial desses vetores foram avaliadas nos municípios do Rio Grande do Norte, Brasil, a partir dos dados disponibilizados pela Secretaria de Estado de Saúde Pública no período de 2005 a 2015 e no município de Caraúbas no período de 2010 a 2016. A fauna triatomínica silvestre, a infecção natural por tripanossomatídeos e a sua associação com a fonte de alimentação foram avaliadas na Estação Ecológica do Seridó, em Serra Negra do Norte. Além disso, a possibilidade da existência de híbridos naturais entre Triatoma brasiliensis e Triatoma petrocchiae também foi analisada morfologicamente e por sequenciamento do DNA mitocondrial, o citocromo b (Cyt b), e nuclear, o espaçador interno transcrito (ITS-1). Os dados mostraram que 67,7% (113/167) dos municípios realizaram a busca ativa e 110 registraram a ocorrência de triatomíneos nas unidades domiciliares (UDs). Os índices de colonização foram elevados ao logo dos anos pesquisados e, apesar disso, o número de UDs borrifadas foi inferior ao de positivas. Um total de 51.569 triatomíneos foi capturado, sendo T. brasiliensis (47,20%) e Triatoma pseudomaculata (40,22%) as espécies mais capturadas. A colonização intradomiciliar e peridomiciliar foi demonstrada pelas espécies T. brasiliensis, T. pseudomaculata, Panstrongylus lutzi e Rhodnius nasutus. A infecção natural por tripanossomatídeos foi detectada em 2,4% dos espécimes, sendo mais elevada em T. brasiliensis (3,2%). Em Caraúbas, as atividades de controle ocorreram de forma descontínua, e mesmo com a presença de ninfas, as UDs não foram borrifadas em 2013, 2014 e 2016. As espécies mais capturadas nos últimos anos foram T. brasiliensis (n = 244) e T. pseudomaculata (n = 315). Os dados primários revelaram a elevada infestação dos ecótopos peridomiciliares como galinheiro, curral e pilha de telhas, onde T. brasiliensis e T. pseudomaculata apresentaram elevados percentuais de infecção pelo T. cruzi. A espécie T. brasiliensis foi a mais eclética, sendo o Homo sapiens a fonte alimentar frequentemente identificada no intradomicílio e peridomicílio, enquanto para o T. pseudomaculata a fonte mais detectada foi Gallus gallus. No ambiente silvestre, T. brasiliensis foi encontrado em afloramentos de rochas, juntamente com espécimes de Triatoma sp., e T. pseudomaculata em troncos de árvores da espécie Anadenanthera colubrina. As fontes alimentares do T. brasiliensis foram os roedores Thrichomys apereoides (30%) e Galea spixii (30%). Nesse estudo nós registramos o primeiro encontro de Psammolestes tertius no estado, aumentando a área de distribuição geográfica dessa espécie. O P. lutzi apresentou o índice de infecção pelo T. cruzi mais elevado (64,8%), e o genótipo identificado foi TcIII. O Trypanosoma rangeli foi identificado em apenas um espécime dessa espécie. T. cruzi II e III foram detectados na espécie T. brasiliensis. Na análise morfológica, Triatoma sp. apresentou semelhança com o T. petrocchiae. A similaridade genética entre essas duas espécies foi demonstrada utilizando o marcador ITS-1, as quais formaram um único clado. Entretanto, na análise das sequências do Cytb, o Triatoma sp., T. brasiliensis e T. petrocchiae formaram clados distintos, sugerindo a existência de uma nova espécie, porém, é necessário a realização de outras análises para essa comprovação. O aumento dos índices de infestação e colonização dos triatomíneos, a presença desses vetores infectados e alimentados com sangue humano e de vários animais e, a circulação de animais silvestres infectados no ambiente antrópico, alerta para a possibilidade de transmissão do T. cruzi para o homem e animais domésticos. Os dados desse estudo reforçam que a VE e o controle vetorial nos municípios são imprescindíveis para evitar o contato de espécies como, T. brasiliensis, T. pseudomaculata e P. lutzi com a população e animais.

The infestation of the artificial ecotopes by triatomines, the vector control actions, the natural infection by trypanosomatids and the territorial distribution of these vectors were evaluated in the municipalities of the State of Rio Grande do Norte, Brazil, based on the temporal analysis of the data provided by the State Secretariat of Public Health in the period from 2005 to 2015 and in the municipality of Caraúbas in the period from 2010 to 2016. The wild triatomine fauna, the natural infection by trypanosomatids and their association with the food source were evaluated at the Seridó Ecological Station, in Serra Negra do Norte. In addition, the possibility of natural hybrids between Triatoma brasiliensis and Triatoma petrocchiae, was analyzed morphologically and by sequencing of mitochondrial DNA, cytochrome b (Cyt b), and nuclear, internal transcribed spacer (ITS-1). The data showed that 67,7% (113/167) of the municipalities performed the active search and 110 municipalities registered the occurrence of triatomines in the domiciliary units (DUs). Colonization rates were high during the surveyed years, and despite that, the number of DUs sprayed was lower than the positive ones. A total of 51.569 triatomines were captured, with T. brasiliensis (47,20%) and T. pseudomaculata (40,22%) being the most captured species. The indoor and outdoor colonization was demonstrated by the species T. brasiliensis, T. pseudomaculata, Panstrongylus lutzi and Rhodnius nasutus. The natural infection by trypanosomatids was detected in 2,4% of the specimens, being higher in T. brasiliensis (3,2%). In Caraúbas, the vector control activities occurred discontinuously, and even with the presence of nymphs, the DUs were not sprayed in 2013, 2014 and 2016. The most captured species in the last years were T. brasiliensis (n = 244) and T. pseudomaculata (n = 315). The primary data revealed the high infestation of outdoors ecotopes such as chicken coop, corral and pile of shingles, where T. brasiliensis and T. pseudomaculata presented high percentages of Trypanosoma cruzi infection. T. brasiliensis was the most eclectic species, with Homo sapiens being the food source frequently identified in the intradomicile and peridomicile, while for T. pseudomaculata the food source was Gallus gallus. In the wild environment, T. brasiliensis was found in rock outcrops, along with specimens of Triatoma sp., and T. pseudomaculata on tree trunks of the species Anadenanthera colubrina. The food sources of T. brasiliensis were the rodents Thrichomys apereoides (30%) and Galea spixii (30%). In this study, we recorded the first encounter of Psammolestes tertius in the state, expanding the geographic distribution of this species. P. lutzi presented the highest T. cruzi infection rate (64,8%) and the genotype identified was TcIII. Trypanosoma rangeli was identified in only one specimen of this species. T. cruzi II and III were detected in the species T. brasiliensis. The morphological analysis of Triatoma sp. presented similarity to T. petrocchiae. The genetic similarity between both species was demonstrated using the ITS-1 marker, which formed a single clade. Nevertheless, in the analysis of Cytb sequences, Triatoma sp., T. brasiliensis and T. petrocchiae formed distinct clades, suggesting the existence of a new species, however, further analysis are necessary for this confirmation. The increase of infestation and colonization rates of triatomines, the presence of these infected vectors fed with human blood and of several animals and the circulation of infected wild animals in the anthropic environment, point out the possibility of T. cruzi transmission to humans and domestic animals. The data of this study reinforce that ES and vector control in the municipalities are essential to avoid the contact of species, such as T. brasiliensis, T. pseudomaculata and P. lutzi, with the population and animals.

VARIABILIDADE GENÉTICA EM EQUINO BAIXADEIRO COM BASE EM DNA MITOCONDRIAL E MARCADORES MICROSSATÉLITES

O cavalo Baixadeiro constituem-se em um ecótipo equino encontrado na Baixada Maranhense. Cruzamentos com outras raças, pressões seletivas de manejo e do ambiente, tem conferido a estes indivíduos características fenotípicas diferenciadas. O principal objetivo deste trabalho foi caracterizar a variabilidade genética do grupamento Baixadeiro gerando dados aplicáveis à sua conservação, através de marcadores moleculares de DNA nuclear e DNA mitocondrial. Foram utilizadas 150 amostras de sangue de cinco municípios da Baixada Maranhense. Dezessete sequencias de cavalo Baixadeiro foram utilizadas para analise DNA mitocondrial, além de 49 sequencias oriundas do Genbank de raças distintas. Para a região controladora do DNA mitocondrial foram analisados fragmentos de 516 pb, as análises indicaram a existência de 95 sítios variáveis, a partir dos quais foram definidos 31 haplótipos (Hd=0,967e =0,02037). Para estudos de microssatélite foram usadas 150 amostras e 8 loci de microssatélites, os microssatélites mostraram-se polimórficos, apresentando um total de 259 alelos. A média de alelos por município foi de 8,74 (variando de 0,83 para 1,50), o Equilíbrio de Hardy Weinberg considerando as populações e os loci separadamente, obtivemos valores de F(is) entre 1 e 0,01. Quando consideradas todas as populações, observou-se valores médio de F(st)=0,5790 e Rho(st)=0,6592 (p).

The Baixadeiro horse are in an equine ecotype found in Baixada Maranhense. Crosses with other breeds, selective pressures of management and the environment, has given these individuals differentiated phenotypic characteristics. The main objective of this study was to characterize the genetic variability of Baixadeiro grouping generating data applicable to conservation through molecular markers of nuclear DNA and mitochondrial DNA. They used 150 blood samples from five municipalities of Maranhão Lowlands. Seventeen Baixadeiro horse sequences were used to analyze mitochondrial DNA, and 49 sequences derived from Genbank of different races. To control region of the mitochondrial DNA of 516 bp fragments were analyzed, the analysis indicated the existence of 95 variable sites, from which were defined 31 haplotypes (Hd = 0,967e = 0.02037). To study microsatellites were used 150 samples and 8 microsatellite loci, microsatellites shown to be polymorphic, with 259 alleles. The average number of alleles per municipality was 8.74 (range 0.83 to 1.50), the Hardy Weinberg equilibrium considering the populations and loci separately obtained values of F (s) from 1 to 0.01, all significant (p).

Caracterização do haplótipo mitocondrial de uma amostra de touros da raça nelore, representativa das principais linhagens comercializadas no Brasil / Mitochondrial haplotype characterization of one sample of Nellore bulls representing the main lines marketed in Brazil

Os bovinos podem ser classificados em dois grandes grupos de acordo com sua origem e distribuição geográfica: o grupo Bos taurus, representado pelos bovinos europeus, e o Bos indicus ou zebuíno, que vive nas regiões tropicais. O rebanho brasileiro é constituído principalmente por raças zebuínas, das quais predomina a raça Nelore. Os mamíferos possuem, além do genoma nuclear, um genoma citoplasmático encontrado nas mitocôndrias, o DNA mitocondrial (mtDNA), que apresenta herança exclusivamente materna. Há relatos que os polimorfismos no mtDNA podem afetar a adaptação das raças bovinas a condições ambientais distintas bem como a produção animal. Provavelmente a maioria da população brasileira de animais da raça Nelore foi obtida por retrocruzamentos de vacas nativas com touros zebuínos e, portanto, abrigam mtDNA de origem Bos taurus. O objetivo deste estudo foi caracterizar o haplótipo do mtDNA de uma amostra de touros cujas genealogias são representativas das principais linhagens da raça Nelore. A investigação do haplótipo do mtDNA (Bos taurus ou Bos indicus) foi realizada por meio de PCR alelo-específica para amplificação de uma região 366 pb do gene rRNA 16S de mtDNA, no qual um polimorfismo diferencia mtDNA Bos taurus e Bos indicus. Observou-se, nesta amostragem, 76,66% dos animais com mtDNA de origem Bos taurus. Estes resultados reforçam a hipótese de que a formação da raça Nelore no Brasil provavelmente resultou do cruzamento absorvente de touros Bos indicus com matrizes Bos taurus.(AU)

The cattle can be classified into two groups according to their origin and geographic distribution: Bos taurus, represented by the European cattle, and Bos indicus, originated in Asia. The Brazilian herd consists mainly of Zebu catlle, mainly consisted of Nellore breed animals. Mammals have in addition to the nuclear genome, a cytoplasmic genome found in mitochondria, the mitochondrial DNA (mtDNA), which shows exclusively maternal inheritance. There are reports that polymorphisms in mtDNA can affect the adaptation of breeds to different environmental conditions and the animal production. Probably the majority of the Brazilian population of Nellore cattle was obtained by backcrossing of native cows with Zebu bulls and therefore harbors mtDNA of Bos taurus origin. The aim of this study was to characterize the mtDNA haplotype in a sample of bulls whose pedigrees are representative of the main lines of Nellore. The investigation of mtDNA haplotype (Bos taurus and Bos indicus) was performed by allele-specific PCR to amplify a 366 bp region of 16S rRNA gene of mtDNA, in which a mtDNA polymorphism differentiates Bos taurus from Bos indicus. In this sample, 76.66% of all animals presented mtDNA of Bos taurus origin. These results support the hypothesis that the stablishment of Nellore breed in Brazil probably resulted from backcrossing of Bos indicus bulls to Bos taurus females.(AU)

Caracterização do haplótipo mitocondrial de uma amostra de touros da raça nelore, representativa das principais linhagens comercializadas no Brasil / Mitochondrial haplotype characterization of one sample of Nellore bulls representing the main lines marketed in Brazil

Os bovinos podem ser classificados em dois grandes grupos de acordo com sua origem e distribuição geográfica: o grupo Bos taurus, representado pelos bovinos europeus, e o Bos indicus ou zebuíno, que vive nas regiões tropicais. O rebanho brasileiro é constituído principalmente por raças zebuínas, das quais predomina a raça Nelore. Os mamíferos possuem, além do genoma nuclear, um genoma citoplasmático encontrado nas mitocôndrias, o DNA mitocondrial (mtDNA), que apresenta herança exclusivamente materna. Há relatos que os polimorfismos no mtDNA podem afetar a adaptação das raças bovinas a condições ambientais distintas bem como a produção animal. Provavelmente a maioria da população brasileira de animais da raça Nelore foi obtida por retrocruzamentos de vacas nativas com touros zebuínos e, portanto, abrigam mtDNA de origem Bos taurus. O objetivo deste estudo foi caracterizar o haplótipo do mtDNA de uma amostra de touros cujas genealogias são representativas das principais linhagens da raça Nelore. A investigação do haplótipo do mtDNA (Bos taurus ou Bos indicus) foi realizada por meio de PCR alelo-específica para amplificação de uma região 366 pb do gene rRNA 16S de mtDNA, no qual um polimorfismo diferencia mtDNA Bos taurus e Bos indicus. Observou-se, nesta amostragem, 76,66% dos animais com mtDNA de origem Bos taurus. Estes resultados reforçam a hipótese de que a formação da raça Nelore no Brasil provavelmente resultou do cruzamento absorvente de touros Bos indicus com matrizes Bos taurus.

The cattle can be classified into two groups according to their origin and geographic distribution: Bos taurus, represented by the European cattle, and Bos indicus, originated in Asia. The Brazilian herd consists mainly of Zebu catlle, mainly consisted of Nellore breed animals. Mammals have in addition to the nuclear genome, a cytoplasmic genome found in mitochondria, the mitochondrial DNA (mtDNA), which shows exclusively maternal inheritance. There are reports that polymorphisms in mtDNA can affect the adaptation of breeds to different environmental conditions and the animal production. Probably the majority of the Brazilian population of Nellore cattle was obtained by backcrossing of native cows with Zebu bulls and therefore harbors mtDNA of Bos taurus origin. The aim of this study was to characterize the mtDNA haplotype in a sample of bulls whose pedigrees are representative of the main lines of Nellore. The investigation of mtDNA haplotype (Bos taurus and Bos indicus) was performed by allele-specific PCR to amplify a 366 bp region of 16S rRNA gene of mtDNA, in which a mtDNA polymorphism differentiates Bos taurus from Bos indicus. In this sample, 76.66% of all animals presented mtDNA of Bos taurus origin. These results support the hypothesis that the stablishment of Nellore breed in Brazil probably resulted from backcrossing of Bos indicus bulls to Bos taurus females.

Influência dos Métodos de Conservação Sobre a Recuperação e a Frequência de Amplificação de Marcadores Mitocondriais e Nucleares de Carrapatos das Espécies Amblyomma parvum e Amblyomma sculptum (Acari: Ixodidae)

O estudo de carrapatos e doenças transmitidas por eles é cada vez mais dependente da utilização de técnicas de biologia molecular que são empregadas na detecção de patógenos, e a acurada identificação desses artrópodes, em particular os estágios imaturos. A aplicação bem-sucedida dos métodos moleculares, principalmente, a reação em cadeia da polimerase (PCR), só pode ser alcançada se o DNA presente no carrapato foi eficazmente preservado e extraído de forma eficiente. O estudo comparou três fixadores (RNAlater, sais de zinco (ZN) e isopropanol) avaliando a sua capacidade de preservar DNA mitocondrial (mtDNA) e nuclear de larvas e ninfas de Amblyomma parvum e larvas de Amblyomma scultptum. O DNA foi extraído dos carrapatos, em tempos entre 72h e 12 meses após a fixação por meio da técnica de fenol-clorofórmio e lise alcalina (Hot Shot) e examinadas usando ensaios de PCR para sequências nucleares (espaçador interno transcrito 2; ITS2) e mitocondriais (12S rDNA, subunidade 1 do citocromo c oxidase (COI) e D-loop). A eficiência de amplificação foi analisada quantitativamente (número de amostras que produziram amplicon) e qualitativamente (intensidade relativa das bandas observadas em géis de agarose). Foi observado que a sequência ITS2 foi amplificada na maioria (93,39%, n= 283/303) das amostras em cada um dos três fixadores, embora tenham sido observadas diferenças qualitativas, particularmente com A. sculptum preservado em ZN. Em contraste, a fixação em isopropanol afetou negativamente a capacidade de amplificar as sequências dos marcadores mitocondriais de A. parvum e também resultou na amplificação inferior (qualitativa), do alvo D-loop com A. sculptum. Esses efeitos foram observados em amostras fixadas por apenas 72 horas. Os efeitos prejudiciais de isopropanol também foram observados igualmente em amostras extraídas usando um método de lise alcalina (HotShot). As amostras de larvas de A. parvum preservadas em RNAlater durante 30 meses, mostrou uma eficácia de amplificação de 100% nos ensaios para ITS2 e COI, independentemente do método de extração usado. Sequências mitocondriais são um componente central da maioria das pesquisas moleculares com carrapatos. Os resultados deste estudo indicam que isopropanol deve ser evitado como um fixador para fases imaturas de carrapatos. Em vez disso, o uso de RNAlater é recomendado, a fim de permitir a recuperação consistente de mtDNA amplificável.

The study of ticks and tick-borne disease is increasingly dependent upon the use of molecular biological techniques that are employed in pathogen detection and for the accurate identification of ticks, particularly immature stages. The successful application of molecular methods, principally the polymerase chain reaction (PCR), can only be achieved if the DNA present in the tick was effectively preserved and could be extracted efficiently. The current study compared three fixatives (RNAlater, zinc salts (ZN) and isopropanol) for the ability to preserve the nuclear and mitochondrial (mt) DNA of larvae and nymphs of Amblyomma parvum and larvae of Amblyomma scultptum. DNA was extracted from ticks at times between 72h to 12 months post fixation using a phenol-chloroform procedure and examined using PCR assays for nuclear (internal transcribed spacer 2; ITS2) and mitochondrial (12S rDNA, subunit 1 of cytochrome c oxidase (COI) and D-loop) sequences. The efficiency of amplification was analyzed quantitatively (number of samples which produced amplicon) and qualitatively (relative intensity of bands observed on agarose gels). It was observed that the ITS2 sequence could be amplified in the majority (93,39%, n= 283/303) of the samples, in each of the three fixatives, although qualitative differences were observed, particularly with A. sculptum preserved in ZN. In contrast, fixation in isopropanol effectively abolished the ability to amplify the mitochondrial marker sequences of A. parvum and also resulted in inferior amplification (qualitative), of the D-loop target with A. sculptum. Those effects were observed in samples fixed for as little as 72h. The detrimental effects of isopropanol were also observed in samples extracted using an alkaline lysis method (Hotshot). Samples of A. parvum larvae preserved in RNAlater for 30 months showed an amplification efficacy of 100% in the ITS2 and COI assays, irrespective of the extraction method. Mitochondrial sequences are a central component of the majority of molecular studies of ticks. The findings of this study indicate that isopropanol should be avoided as a fixative for immature stages of ticks. Instead, the use of RNAlater is recommended in order to permit the consistent recovery of amplifiable mtDNA.

CARACTERIZAÇÃO MORFOLÓGICA, CITOGENÉTICA E MOLECULAR DE Mazama americana (ARTIODACTYLA: CERVIDAE) A PARTIR DE UM TOPÓTIPO ATUAL

A espécie Mazama americana (veado-mateiro) é conhecida como a maior espécie pertencente ao gênero Mazama, e também um dos cervídeos mais abundantes e amplamente distribuídos na floresta Neotropical. A espécie já passou por diferentes classificações taxonômicas ao longo do tempo devido a potencial existência de diversas espécies dentro do que hoje é conhecido como M. americana. É consideradaum complexo de espécies crípticas, pois apresentaalta taxa de paralelismo morfológico entre indivíduos com uma variação cromossômica coerente em termos geográficos, sugerindo a existência de unidades evolutivamente distintas. Assim, o objetivo do trabalho foi propor um neótipo para M. americana a partir da caracterização morfológica, citogenética e molecular de um topótipo, no sentido de fazer uma descrição emendada da espécie a partir de uma visão integrativa, permitindo assim a comparação com outros padrões já descritos na literatura considerados M. americana. Para tanto, um indivíduo foi coletado na localidade tipo da espécie (Guiana Francesa), e caracterizado por técnicas de morfologia tradicional (medidas cranianas, coloração da pele, biometria corporal) e morfometria geométrica, assim como por análises citogenéticas (banda C, banda G, coloração Ag-NOR, coloração convencional de Giemsa) e moleculares (análises filogenéticas de genes mitocondriais e nucleares). Os resultados corroboram evidências da existência de um complexo de espécies dentro do que hoje se considera M. americana, já que, segundo os seus padrões citogenéticos, o topótipo não se enquadra em nenhuma variante da espécie até agora conhecida. Molecularmente, as análises indicam a existência de pelo menos duas espécies diferentes dentro deste táxon. A similaridade morfológica é clara dentro de todas as variantes, comprovando mais uma vez que as unidades taxonômicas do veado-mateiro são muito difíceis de se diferenciar só pelos caracteres morfológicos. Deste modo, no presente trabalho,é proposto um neótipo o qual é o ponto de partida para a descrição de novas espécies e possível mudança completa na nomenclatura do gênero Mazama.

The red brocket deer species, Mazamaamericana, is known as the largest species of the genus Mazama, and also one of the most abundant deer and widely distributed in Neotropical forests. This species has undergone different taxonomic classifications over time due to the potential existence of several species within what is currently known as M. americana, which is considered as a complex of cryptic species. Individuals included in this species show a high morphological convergence between them with a consistent chromosomal variation in geographical terms, suggesting the existence of different evolutionary units. The objective of this study, therefore, was to obtain the morphological, cytogenetic and molecular profile of a M. americanatopotype to gain an exact description of the species and be able to compare them with other standards already described in the literature for M. americana. For this purpose, an individual was collected at the type localityof this species (French Guiana) and characterized by traditional morphological techniques (cranial measurements, skin color, body biometrics), geometric morphometry, cytogenetic analysis (Band C, Band G Ag-NOR staining, conventional Giemsa staining) as well as molecular analysis (phylogenetic analyzes of mitochondrial and nuclear genes). Among highlights of the results, cytogenetic analysis showed a pattern that does not fit into any of the Mazamaamericana variants until now known. Similarly, the molecular analysis revealed the existence of, at least, two different species within this taxon, being clear the morphological similarity in all variants, proving once again that the red brocket variants are impossible to differentiate only by morphological characters. All these results, therefore, corroborate the existence of several species within M. americanaspecies, contributing largely to the taxonomy of this species, as well as to the description of new species within the genus Mazama and the generation of a new holotype.