Seroprevalence and risk factors associated with leukosis in cattle from Villlavicencio, Colombia / Soroprevalência e fatores de risco associados à leucose em bovinos de Villlavicencio, Colômbia

Bovine leukosis is caused by an oncogenic virus of the genus Deltaretrovirus, causing losses associated with decreased production indicators and restrictions on exports of cattle and cattle products. The disease has a prolonged incubation period of between 1-5 years and the antibodies can be detected 2-3 weeks post infection. The disease can present asymptomatically, and develop persistent lymphocytosis or lymphosarcoma. The objective of this study was to estimate the prevalence and risk factors associated with bovine leukosis in Villavicencio, Colombia. Blood samples were taken from 636 animals, and obtained randomly from 24 herds. The samples were analysed using a Competition ELISA kit for the detection of anti-gp51 antibodies. Information on possible risk factors was collected, then OR and X2 were calculated, and statistically significant with p < 0.05 variables were included in a linear regression multivariate analysis. The general seroprevalence was 24.6% and the herd seroprevalence was 83.3%. The seroprevalence was 21.3% in males and 25.0% in females. The risk factors identified were abortion, non-bearing cows, artificial insemination, and use of common needles, Creole breed and participation in cattle exhibitions. The study confirmed the presence of bovine leukosis associated with reproductive and management factors.(AU)

A leucose bovina é causada por um vírus oncogênico do gênero Deltaretrovirus, causando prejuízos associados à queda dos indicadores produtivos e restrições à exportação de bovinos e derivados.Adoença tem um período de incubação prolongado entre 1 e 5 anos e os anticorpos podem ser detectados 2 a 3 semanas após a infecção. A doença pode se apresentar de forma assintomática, e evoluir para linfocitose persistente ou linfossarcoma. O objetivo do estudo foi estimar a prevalência e os fatores de risco associados à leucose bovina em Villavicencio, Colômbia. Amostras de sangue foram coletadas de 636 animais, obtidos aleatoriamente de 24 rebanhos.As amostras foram analisadas com o kit Competition ELISA para detecção de anticorpos anti-gp51. Foram coletadas informações sobre possíveis fatores de risco, se realizo um analise univariado entre as variáveis e a presença da seropositividad a leukosis bovina mediante o cálculo do OR e X2, as variáveis estatisticamente significativas com p<0,05 foram incluídas em uma análise multivariada de regressão linear. A soroprevalência geral foi de 24,6% e a soroprevalência do rebanho foi de 83,3%.Asoroprevalência foi de 21,3% em machos e 25,0% em fêmeas. Os fatores de risco identificados foram: aborto, vacas não reprodutivas, inseminação artificial e uso de agulha comum, raça crioula e exposições de gado. O estudo confirmou a presença de leucose bovina associada a fatores reprodutivos e de manejo.(AU)

Seroprevalence and influence of bovine leukemia virus on the incidence of mastitis in dairy herds

Background: The enzootic bovine leukosis (EBL) is a viral disease with a chronic aspect and its etiological agent is anoncogenic deltaretrovirus called bovine leukemia virus (VLB). It has a wide distribution in dairy cattle herds, and it maytake several years before the first clinical manifestations occur. Animals seropositive for VLB are more susceptible todeveloping infectious diseases such as mastitis. The objective of this study was to evaluate the seroprevalence of EBL, theprevalence of mastitis, the possible association between leukosis and mastitis, and the risk factors related to leukosis inmunicipalities of the Caparaó region of Espírito Santo, Brazil.Materials, Methods & Results: The prevalence of enzootic bovine leukosis and its association with mastitis were evaluatedin an 854 clinically healthy crossbred (Bos tauros tauros x Bos taurus indicus) dairy cows were used, in different lactationphases, from farms located in the 12 municipalities that compose the Caparaó Capixaba micro-region, in the southernpart of Espírito Santo, Brazil, in the period from February to December 2015. The seroprevalence of EBL was determinedby the agar gel immunodiffusion test, the presence of clinical mastitis was ascertained by the black background mug testand of subclinical mastitis by the CMT. The reuse of needles, type of milking, reproductive management, calf mortality,presence of reproductive problems and milk yield were the risk factors assessed. The association between the variableswas estimated by the odds ratio (95% confidence interval). The significance of the associations was determined by theChi-square test. The prevalence of EBL, clinical and subclinical mastitis was 56.79%, 5.50% and 43.55%, respectively.There was a positive association between the EBL virus and the presence of...

Seroprevalence and influence of bovine leukemia virus on the incidence of mastitis in dairy herds

Background: The enzootic bovine leukosis (EBL) is a viral disease with a chronic aspect and its etiological agent is anoncogenic deltaretrovirus called bovine leukemia virus (VLB). It has a wide distribution in dairy cattle herds, and it maytake several years before the first clinical manifestations occur. Animals seropositive for VLB are more susceptible todeveloping infectious diseases such as mastitis. The objective of this study was to evaluate the seroprevalence of EBL, theprevalence of mastitis, the possible association between leukosis and mastitis, and the risk factors related to leukosis inmunicipalities of the Caparaó region of Espírito Santo, Brazil.Materials, Methods & Results: The prevalence of enzootic bovine leukosis and its association with mastitis were evaluatedin an 854 clinically healthy crossbred (Bos tauros tauros x Bos taurus indicus) dairy cows were used, in different lactationphases, from farms located in the 12 municipalities that compose the Caparaó Capixaba micro-region, in the southernpart of Espírito Santo, Brazil, in the period from February to December 2015. The seroprevalence of EBL was determinedby the agar gel immunodiffusion test, the presence of clinical mastitis was ascertained by the black background mug testand of subclinical mastitis by the CMT. The reuse of needles, type of milking, reproductive management, calf mortality,presence of reproductive problems and milk yield were the risk factors assessed. The association between the variableswas estimated by the odds ratio (95% confidence interval). The significance of the associations was determined by theChi-square test. The prevalence of EBL, clinical and subclinical mastitis was 56.79%, 5.50% and 43.55%, respectively.There was a positive association between the EBL virus and the presence of...(AU)

Influência do vírus da leucemia bovina sobre a atividade imunológica por meio da função neutrofílica / Influence of the bovine leukemia virus on the immunological activity by the neutrophilic function

Background: Bovine leukemia virus (VLB) is an oncogenic deltaretrovirus associated with the development of persistent lymphocytosis (LP) and lymphosarcomas in cattle. LP is characterized by chronic elevation of the number of circulating lymphocytes, in the case of B lymphocytes. Several studies have described functional changes in various leukocyte populations in both blood and milk in VLB-infected animals. The impact of some chronic diseases of low lethality is aggravated by the emergence of comorbidities.The objective of the present study was to evaluate the oxidative metabolism and neutrophil phagocytosis of bovines of the Holtein breed naturally infected with the bovine leukemia virus (VLB). Materials, Methods & Results: In this study, 20 cows were divided into three groups: (NG) seven non-seroreagent animals for VLB and without hematological alterations; (GAL) eight seroreagent animals for VLB and without hematological alterations; and (GLP) five seroreagent animals for VLB with persistent lymphocytosis (LP). The oxidative metabolism of neutrophils was determined by the tetrazolium nitroblast reduction test stimulated or not with Zymosan particles. The percentage of neutrophils that phagocytosed Zymosan particle (s) was also evaluated. The data were initially evaluated for normality and homoscedasticity by the Shapiro-Wilk test. Then the ANOVA test followed by the Student-Newman-Keuls test was applied for the comparison between the NG, GAL and GLP animals. Comparison between the NG animals and the seroreagent animals for the VLB (GVLB) was also performed through the unpaired Student’s t-test. The value of P < 0.05 was considered significant. No significant differences were observed in oxidative neutrophil metabolism in stimulated and non-stimulated samples with Zymosan particles nor in the percentage...

Dia Mundial do HTLV - 10 de Novembro / World HTLV Day - November 10th

O dia 10 de novembro foi instituído como Dia Mundial do HTLV pela Associação Internacional de Retrovirologia (IRVA – International Retrovirology Association). O objetivo deste ato foi de informar e mobilizar a sociedade e o poder público para o significado da infecção ocasionada pelo primeiro retrovírus humano descrito, o vírus linfotrópico de células T humanas do tipo 1 (HTLV1), as doenças a ele associadas, seu impacto na saúde pública e os meios de contê-lo. Como o Brasil é o país da América Latina com o maior número absoluto de casos desta infecção viral, foi elaborado o presente texto que traz as informações relevantes sobre o HTLV-1 para a comunidade científica.

The November 10th was instituted as the World HTLV Day by the International Retrovirology Association (IRVA), aiming informing and mobilizing the society and the public authorities on the significance of this infection caused by the first known human retrovirus, the human T-cell lymphotropic virus type 1 (HTLV-1). The associated diseases, the impact in the public health, and the means to block its transmission were reviewed. Considering that Brazil, the country in the Latin America, has been presenting the highest number of HTLV-1-infected individuals, this text was written for giving the relevant information concerning the HTLV-1 infection to the scientific community.

Dia Mundial do HTLV - 10 de Novembro / World HTLV Day - November 10th

O dia 10 de novembro foi instituído como Dia Mundial do HTLV pela Associação Internacional de Retrovirologia (IRVA International Retrovirology Association). O objetivo deste ato foi de informar e mobilizar a sociedade e o poder público para o significado da infecção ocasionada pelo primeiro retrovírus humano descrito, o vírus linfotrópico de células T humanas do tipo 1 (HTLV1), as doenças a ele associadas, seu impacto na saúde pública e os meios de contê-lo. Como o Brasil é o país da América Latina com o maior número absoluto de casos desta infecção viral, foi elaborado o presente texto que traz as informações relevantes sobre o HTLV-1 para a comunidade científica.(AU)

The November 10th was instituted as the World HTLV Day by the International Retrovirology Association (IRVA), aiming informing and mobilizing the society and the public authorities on the significance of this infection caused by the first known human retrovirus, the human T-cell lymphotropic virus type 1 (HTLV-1). The associated diseases, the impact in the public health, and the means to block its transmission were reviewed. Considering that Brazil, the country in the Latin America, has been presenting the highest number of HTLV-1-infected individuals, this text was written for giving the relevant information concerning the HTLV-1 infection to the scientific community.(AU)

Heterogeneity determination of bovine leukemia virus genome in Santa Catarina state, Brazil / Determinação da heterogeneidade do genoma do vírus da leucose enzoótica bovina no estado de Santa Catarina, Brasil

Bovine leukemia virus (BLV) is a member of Retroviridae family, genus Deltaretrovirus, and the main viral agent responsible for economic loses in dairy herds. Some studies have been carried out about BLV genotypes, and at least seven genotypes were found out in samples of different regions of the world. The objective of this study was to identify BLV samples from seropositive dairy cattle in Santa Catarina state, Brazil, using molecular techniques. Blood samples were collected (454) from dairy cattle from 31 different farms, and serology using agar gel immunodiffusion test (AGID) was performed. After that, 191 seropositive samples were submitted to DNA extraction, and in 77 samples the polymerase chain reaction (PCR) for amplification of a 440 bp fragment of the env gene was performed. Nineteen DNA samples were subjected to restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis by digestion of the PCR fragment by five restriction endonucleases - BamHI, HaeIII, Tru9I, TaqI, and MwoI. It was found 42% seropositive animals (191/454) and 68% positives of the farms (21/31). The PCR showed 80.5% (62/77) of animals positive. The RFLP analysis identified five different genotypes dispersed by Santa Catarina state, with the highest prevalence for genotype X (47.4%). Overall, our results identified the viral genotypes present in dairy cattle and the prevalence of new variants in representative farms from Santa Catarina state.(AU)

O bovine leukemia virus (BLV) é um membro da família Retroviridae, gênero Deltaretrovirus, e o principal agente viral causador de perdas econômicas em rebanhos leiteiros. Diversos estudos têm sido feitos sobre os genótipos de BLV, e foram encontrados pelo menos sete em amostras de diferentes partes do mundo. O objetivo deste estudo foi realizar a caracterização molecular de amostras de BLV de bovinos leiteiros soropositivos no estado de Santa Catarina. Foram coletadas 454 amostras de sangue de bovinos de 31 propriedades, e fez-se inicialmente a sorologia por meio do teste de imunodifusão em gel de ágar. Após a sorologia, 191 amostras soropositivas foram então submetidas à extração de DNA, e em 77 amostras se realizou a reação da polimerase em cadeia (PCR), para a amplificação de um fragmento de 440 pb do gene env. Dezenove amostras foram submetidas à análise do polimorfismo dos fragmentos de restrição por digestão do fragmento da PCR por cinco enzimas de restrição: BamHI, HaeIII, Tru9I, TaqI e MwoI. Os resultados obtidos na sorologia apontaram 42% de animais soropositivos (191/454) e 68% de propriedades positivas (21/31). Na PCR, 80,52% (62/77) dos animais apresentaram-se positivos. A análise do polimorfismo dos fragmentos de restrição identificou cinco genótipos circulantes no estado, e a maior prevalência foi observada no genótipo X (47,4%). Este estudo permite-nos conhecer alguns dos genótipos virais presentes em bovinos leiteiros do estado de Santa Catarina, bem como identificar a existência de novas variantes e sua prevalência atual, e os resultados são úteis para futuros estudos epidemiológicos.(AU)

Heterogeneity determination of bovine leukemia virus genome in Santa Catarina state, Brazil / Determinação da heterogeneidade do genoma do vírus da leucose enzoótica bovina no estado de Santa Catarina, Brasil

Bovine leukemia virus (BLV) is a member of Retroviridae family, genus Deltaretrovirus, and the main viral agent responsible for economic loses in dairy herds. Some studies have been carried out about BLV genotypes, and at least seven genotypes were found out in samples of different regions of the world. The objective of this study was to identify BLV samples from seropositive dairy cattle in Santa Catarina state, Brazil, using molecular techniques. Blood samples were collected (454) from dairy cattle from 31 different farms, and serology using agar gel immunodiffusion test (AGID) was performed. After that, 191 seropositive samples were submitted to DNA extraction, and in 77 samples the polymerase chain reaction (PCR) for amplification of a 440 bp fragment of the env gene was performed. Nineteen DNA samples were subjected to restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis by digestion of the PCR fragment by five restriction endonucleases - BamHI, HaeIII, Tru9I, TaqI, and MwoI. It was found 42% seropositive animals (191/454) and 68% positives of the farms (21/31). The PCR showed 80.5% (62/77) of animals positive. The RFLP analysis identified five different genotypes dispersed by Santa Catarina state, with the highest prevalence for genotype X (47.4%). Overall, our results identified the viral genotypes present in dairy cattle and the prevalence of new variants in representative farms from Santa Catarina state.(AU)

O bovine leukemia virus (BLV) é um membro da família Retroviridae, gênero Deltaretrovirus, e o principal agente viral causador de perdas econômicas em rebanhos leiteiros. Diversos estudos têm sido feitos sobre os genótipos de BLV, e foram encontrados pelo menos sete em amostras de diferentes partes do mundo. O objetivo deste estudo foi realizar a caracterização molecular de amostras de BLV de bovinos leiteiros soropositivos no estado de Santa Catarina. Foram coletadas 454 amostras de sangue de bovinos de 31 propriedades, e fez-se inicialmente a sorologia por meio do teste de imunodifusão em gel de ágar. Após a sorologia, 191 amostras soropositivas foram então submetidas à extração de DNA, e em 77 amostras se realizou a reação da polimerase em cadeia (PCR), para a amplificação de um fragmento de 440 pb do gene env. Dezenove amostras foram submetidas à análise do polimorfismo dos fragmentos de restrição por digestão do fragmento da PCR por cinco enzimas de restrição: BamHI, HaeIII, Tru9I, TaqI e MwoI. Os resultados obtidos na sorologia apontaram 42% de animais soropositivos (191/454) e 68% de propriedades positivas (21/31). Na PCR, 80,52% (62/77) dos animais apresentaram-se positivos. A análise do polimorfismo dos fragmentos de restrição identificou cinco genótipos circulantes no estado, e a maior prevalência foi observada no genótipo X (47,4%). Este estudo permite-nos conhecer alguns dos genótipos virais presentes em bovinos leiteiros do estado de Santa Catarina, bem como identificar a existência de novas variantes e sua prevalência atual, e os resultados são úteis para futuros estudos epidemiológicos.(AU)

Soroprevalência da leucose enzoótica bovina / Seroprevalence of enzootic bovine leukosis review

A Leucose Enzoótica dos Bovinos (LEB) é uma doença infecto-contagiosa, causada por um Deltaretrovírus, com potencial imunossupressor, caracterizado por seu curso crônico e por significativas perdas econômicas à bovinocultura. O vírus acomete principalmente bovinos, que representa a espécie mais susceptível, nestes animais a doença resulta em perdas econômicas devido à queda na produção. A doença é caracterizada por proliferação linfocitária exagerada nos órgãos hemocitopoiéticos, bem como nos órgãos ricos em tecido retículohistiocitário, e pode se desenvolver sob três formas: inaparente ou aleucêmica, linfocitose persistente, e o linfossarcoma em bovinos adultos determinando formações tumorais com proliferação e infiltração de células mononucleares. (AU)

The Enzootic Bovine Leukosis (EBL) is an infectious disease caused by a Deltaretrovirus with immunosuppressive potential, characterized by its chronic course and significant economic losses to the livestock industry. The virus primarily affects cattle, which is the species most likely, the disease in these animals results in economic losses due to the decline in production. The disease is characterized by excessive lymphocyte proliferation hemocitopoiéticos organs and tissue in organs rich in retículohistiocitário, and can develop in three forms: aleucêmica or inapparent, persistent lymphocytosis and lymphosarcoma in cattle determining adults with tumor formation and proliferation of infiltrating mononuclear cells. (AU)

Soroprevalência da leucose enzoótica bovina / Seroprevalence of enzootic bovine leukosis – review

A Leucose Enzoótica dos Bovinos (LEB) é uma doença infecto-contagiosa, causada por um Deltaretrovírus, com potencial imunossupressor, caracterizado por seu curso crônico e por significativas perdas econômicas à bovinocultura. O vírus acomete principalmente bovinos, que representa a espécie mais susceptível, nestes animais a doença resulta em perdas econômicas devido à queda na produção. A doença é caracterizada por proliferação linfocitária exagerada nos órgãos hemocitopoiéticos, bem como nos órgãos ricos em tecido retículohistiocitário, e pode se desenvolver sob três formas: inaparente ou aleucêmica, linfocitose persistente, e o linfossarcoma em bovinos adultos determinando formações tumorais com proliferação e infiltração de células mononucleares.

The Enzootic Bovine Leukosis (EBL) is an infectious disease caused by a Deltaretrovirus with immunosuppressive potential, characterized by its chronic course and significant economic losses to the livestock industry. The virus primarily affects cattle, which is the species most likely, the disease in these animals results in economic losses due to the decline in production. The disease is characterized by excessive lymphocyte proliferation hemocitopoiéticos organs and tissue in organs rich in retículohistiocitário, and can develop in three forms: aleucêmica or inapparent, persistent lymphocytosis and lymphosarcoma in cattle determining adults with tumor formation and proliferation of infiltrating mononuclear cells.

Leucose Enzoótica Bovina: uso de peptídeo sintético derivado da glicoproteína do envelope viral no imunodiagnóstico

A leucose enzoótica bovina (LEB) é uma doença linfoproliferativa infecciosa dos bovinos causada pelo vírus da leucemia bovina (BLV), um membro da família Retroviridae, gênero deltaretrovirus. A LEB é caracterizada por linfocitose persistente e linfossarcoma e tem um impacto econômico expressivo devido a perdas na exportação, tratamento de infecção secundária, redução na produção de laticínios e também devido ao manejo especial necessário. Não obstante, o DNA proviral e as proteínas estruturais do vírus foram encontradas em tecidos humanos, especialmente aqueles associados ao câncer de mama, sugerindo que este vírus pode ser transmitido naturalmente aos seres humanos. A principal forma de detecção da LEB é através do diagnóstico laboratorial, já que muitos animais infectados não apresentam sinais clínicos e os achados clínicos não são conclusivos. O diagnóstico de LEB pode ser feito por métodos moleculares e pela detecção de anticorpos específicos em amostras de soro ou leite. O animal infectado desenvolve uma resposta imune humoral contra proteínas virais, principalmente contra a gp51 (proteína de envelope), e sua identificação é crucial para a vigilância epidemiológica, certificação de áreas livres de doenças e estudos de prevalência. Este trabalho de conclusão de curso compõe-se de um capítulo de revisão de literatura e um capítulo descrevendo o desenvolvimento e padronização de um ELISA indireto usando um peptídeo sintético predito in silico como antígeno. O capítulo de revisão tem como objetivo descrever a biologia, epidemiologia, patogênese, sinais clínicos e diagnósticos para o BLV, assim como a importância da infecção na resposta imune dos animais, e apresentar os mais recentes estudos sobre a possível infecção dos humanos pelo BLV. O segundo capítulo compreende a predição in silico, a síntese química do peptídeo linear KIPDPPQPDFPQL, denominado pgp51 e posterior padronização do ELISA. O ELISA pgp51 foi eficiente para segregar amostras de soro positivas e negativas, indicando que ele tem um grande potencial para ser usado no diagnóstico sorológico de LEB. Posteriormente, o ELISA-i, recém padronizado, foi comparado a testes diagnósticos disponíveis comercialmente. O ELISA indireto utilizando peptídeo sintético pgp51 após predição de epítopos in silico obteve resultados comparáveis aos testes diagnósticos utilizados atualmente podendo também ser usado como teste diagnóstico para LEB para estudos de prevalência da doença no Brasil. Além disso, foi possível observar divergência nos resultados obtidos entre os testes comerciais disponíveis para o diagnóstico do BLV, o que leva a reconsiderações no sistema de diagnóstico usado atualmente.

Enzootic bovine leukosis (EBL) is an infectious lymphoproliferative disease of cattle caused by bovine leukemia virus (BLV), a member of the Retroviridae family, genus Deltaretrovirus. The EBL is characterized by persistent lymphocytosis and the presence of lymphosarcoma. It has an expressive economic impact due to export losses, treatment of secondary infection; decrease of dairy production and also due to a differential handling required. Nevertheless, proviral DNA and structural virus proteins have been found in human tissues, especially those associated with breast cancer, suggesting that BLV could be transmitted naturally to humans. The main form for EBL diagnosis is by laboratory methods, once infected animals show no clinical signs or they are usually inconclusive. The diagnosis of EBL can be performed by molecular techniques and by the detection of specific antibodies in serum or milk samples. The infected animal develops a humoral immune response to viral proteins, primarily to gp51 (an envelope protein), and its identification is crucial for epidemiological surveillance, certification of disease-free areas, and prevalence studies. This work consists of a literature review chapter and of another chapter describing the development and standardization of an indirect ELISA using a synthetic peptide predicted in silico as antigen. The review chapter aims to describe the biology, epidemiology, pathogenesis, clinical signs and diagnoses for BLV, as well as the importance of this infection in the immune response of the animals, and present the latest evidencies on the possible human infection by BLV. The second chapter comprises the in silico prediction, the chemical synthesis of the linear peptide KIPDPPQPDFPQL, described as pgp51, and the subsequent standardization of the ELISA. The pgp51 ELISA was efficient to segregate positive and negative serum samples, indicating that it has a great potential to be used in the serological diagnosis of EBL. Afterward, the newly standardized ELISA-i was compared to commercialized available diagnostic tests. The indirect ELISA using synthetic peptide pgp51 after prediction of in silico epitopes obtained results comparable to the currently used diagnostic tests and thus it also can be used as diagnostic test for EBL in studies of prevalence in Brazil. In addition, the commercial tests showed divergence in the results for the diagnosis of BLV, which explicit need to reconsideration in the diagnostic system used currently.

Metabolismo oxidativo de leucócitos em animais infectados pelo Vírus da Leucemia Bovina / Oxidative burst of leukocytes from bovine leukemia Virus-Infected Cattle

A infecção pelo vírus da leucemia bovina (VLB) leva ao desenvolvimento de linfocitose persistente (LP) ou linfossarcomas, principalmente em rebanhos bovinos leiteiros. Entretanto, os eventos que induzem tais manifestações ou o efeito da infecção na função das diferentes populações de leucócitos são pouco conhecidos. Avaliou-se o efeito da infecção pelo VLB na produção intracelular de peróxido de hidrogênio (H2O2) em leucócitos circulantes, mensurada pela fluorescência produzida pela diclorodihidrofluoresceína, utilizando-se de citometria de fluxo. As células foram obtidas de cinco vacas soronegativas; cinco vacas infectadas pelo VLB, alinfocitóticas; e cinco vacas infectadas, manifestando LP. Verificou-se que a infecção pelo VLB não altera a porcentagem de leucócitos circulantes produzindo H2O2, com ou sem prévio estímulo por adição in vitro: de 12-miristato 13-acetato de forbol (PMA); de lipopolissacarídeos de Escherichia coli (LPS); ou Staphylococcus aureus. Todavia, a produção de H2O2 em leucócitos de animais apresentando LP, com ou sem estímulo, foi menor que aquela verificada em leucócitos de animais soronegativos e de animais soropositivos alinfocitóticos. Os estímulos aumentaram a porcentagem de leucócitos produzindo H2O2 e a produção intracelular média em animais soronegativos ou naqueles infectados alinfocitóticos. Contudo, em leucócitos de vacas soropositivas manifestando LP, a fagocitose de S. aureus não elevou a porcentagem de leucócitos produzindo H2O2. Também, apenas a adição de PMA elevou a produção intracelular de H2O2 em leucócitos de fêmeas soropositivas manifestando LP. Concluiu-se que bovinos infectados pelo VLB, manifestando LP, apresentam menor produção intracelular de H2O2, demonstrando vulnerabilidade funcional refletida por imunossupressão.(AU)

Widespread Bovine Leukemia Virus (BLV) infection leads to persistent lymphocytosis (PL) or lymphosarcoma, mainly in dairy herds. Nevertheless, neither the sequence of events that conducts to these symptoms, nor the effect of infection on function of different leukocyte populations, is well known. We evaluated the effect of BLV infection on immune response of cows through the analysis of hydrogen peroxide (H2O2) intracellular production of circulating leukocytes after in vitro stimuli with phorbol-12-myristate-13-acetate (PMA), Escherichia coli lipopolysaccharides (LPS), or Staphylococcus aureus. Cells were obtained from five BLV-non infected cows, five BLV-infected, non-lymphocytotic cows, and five BLV-infected cows with PL, and analyzed by flow cytometry. Intracellular production of H2O2 was measured by dichlorodihydrofluorescein diacetate dependent fluorescence. Results showed that BLV infection does not alter the percentage of H2O2-producing circulating leukocytes (H2O2-PCL), with or without previous stimuli. However, the average of H2O2 intracellular production, with or without previous stimuli, in leukocytes obtained from cows with PL was smaller than those from cells obtained from BLV-negative cows and from BLV-infected, non-lymphocytotic cows. Moreover, stimuli increased H2O2 intracellular production and the percentage of H2O2-PCL obtained from BLVnegative cows and from BLV-infected, non-lymphocytotic cows. Conversely, neither phagocytosis of S. aureus and stimulus with LPS increases H2O2 intracellular production, nor phagocytosis increases the percentage of H2O2-PCL, when leukocytes were obtained from cows with PL. Thus, results show that BLV-infected cattle, with PL, have an impaired H2O2 intracellular production, demonstrating functional vulnerability reflected by immunosuppression.(AU)

Influência da leucose enzoótica bovina na atividade oxidativa de leucócitos / Influence of bovine enzootic leukosis on respiratory burst activity of leukocytes

Diferentes populações de leucócitos desempenham papeis fundamentais na eliminação de agentes invasores através da sua fagocitose e destruição, utilizando-se de mecanismos dependentes (metabolismo oxidativo) e independentes de oxigênio. Baseando-se na hipótese de que o vírus da Leucose Enzoótica Bovina, uma enfermidade crônica, que afeta, particularmente, os órgãos ricos em tecido linfóide destes animais, altera quantitativa e qualitativamente as subpopulações de leucócitos circulantes dos bovinos, influenciando na qualidade da resposta imunológica inata destes animais, o presente estudo avaliou a produção intracelular de peróxido de hidrogênio (H2O2) por leucócitos circulantes, frente estímulo in vitro com forbol 12-miristato 13-acetato (PMA), lipopolissacarídeos de Escherichia coil (LPS) e após fagocitose de Staphylococcus aureus conjugados com iodeto de propídio (Sa-PI). Para tal, células foram obtidas de cinco vacas negativas no diagnóstico para LEB, de cinco vacas naturalmente infectadas pelo vírus da leucose bovina (VLB), alinfocitóticas, e de cinco vacas infectadas, manifestando linfocitose persistente (LP), e analisadas por citometria de fluxo. Foi averiguada a normalidade da distribuição dos resultados, utilizando-se do teste de Anderson-Darling, e sua homoscedasticidade, utilizando-se do teste F ou do teste de Lavene. Para a análise das freqüências observadas, foi utilizado o teste Qui-quadrado. Para a avaliação das diferenças entre as médias dos resultados obtidos, foram feitos os testes de análise de variância (One-way ANOVA), de Tukey-Kramer, teste t de Student, de Mann-Whitney ou de Kruskal-Wallis. A porcentagem média total de células produzindo H2O2, caracterizada pela intensidade de fluorescência da 2,7-diclorofluoresceína, no ensaio sem estímulo in vitro, de 30,60%, foi menor (p=0,005) que aquela observada no ensaio com adição in vitro de LPS, de 52,00%, e que aquela obtida no ensaio com adição in vitro de PMA, de 63,13%. A porcentagem média total de células produzindo H2O2 no ensaio com estímulo por fagocitose in vitro de SaPI, de 47,47%, não diferiu da observada no ensaio sem estímulo. As porcentagens médias totais de células produzindo H2O2 não diferiram entre os ensaios em que houve prévio estímulo in vitro. Não houve diferença na porcentagem de leucócitos que estavam produzindo H2O2, entre os grupos experimentais, todavia, a produção intracelular média de H2O2, sem estímulo in vitro (p=0,007), após adição in vitro de PMA (p<0,001), de LPS (p=0,001) ou após fagocitose (p=0,002), de leucócitos obtidos de animais apresentando LP, foi menor que aquela verificada em células provenientes de animais soronegativos e de animais soropositivos alinfocitóticos. A porcentagem de leucócitos realizando fagocitose, caracterizada pela intensidade de fluorescência do iodeto de propídio, entre as células obtidas de animais com LP, de 7,20%, foi menor que aquela verificada nas amostras coletadas de animais soronegativos, de 12,90%, e soropositivos alinfocitóticos, de 14,70% (p=0,047). Além disso, as células provenientes de animais com LP apresentaram uma menor intensidade de fagocitose que aquela observada em leucócitos de animais soronegativos e soropositivos alinfocitóticos (p<0,001). Assim, os resultados obtidos demonstram uma vulnerabilidade funcional em leucócitos sangüíneos obtidos de animais infectados pelo VLB, manifestando LP

Different leukocyte populations play key roles on the elimination of foreign antigens through phagocytosis and killing by oxygen-independent and -dependent (respiratory burst) mechanisms. Assuming that Enzootic Bovine Leukosis virus (BLV), that causes a chronic disease, and affects, mainly, lymphoid tissues, alters bovine circulating leukocyte subpopulations quantitatively and qualitatively, and influences the innate immune response, this study evaluated the intracellular production of hydrogen peroxide (H2O2) of circulating leukocytes after in vitro stimuli with phorbol-12-myristate-13-acetate (PMA), Escherichia coli lipopolysaccharides (LPS), or phagocytosis of propidium iodide-labeled Staphylococcus aureus (PI-Sa). Cells were obtained from five BLV-negative cows, five naturally BLV-infected, non-lymphocytotic cows, and five BLV-positive cows with persistent lymphocytosis (PL), and analyzed by flow cytometry. Normality was tested using the Anderson-Darling test, followed by an F test or a Lavene\'s test to analyze the equality of variances. Differences among frequencies were tested using the Qui-square test. Differences among means were verified by a one way analysis of variance (ANOVA), followed by a Turkey-Kramer test, or a Student t-test, a Mann-Whitney U-test, or a Kruskal-Wallis test. Mean total percentage of H2O2-producing cells, characterized by the intensity of 2,7-dichlorofluorescein fluorescence, in the assay without in vitro stimulus (30.60%) was smaller (p=0.005) than that verified in the assay after in vitro addition of LPS (52.00%), and after addition of PMA (63.13%). Mean total percentage of H2O2-producing cells in the assay with stimulus by in vitro phagocytosis of PI-Sa (47.47%) was not different from that verified in the assay without in vitro stimulus. Mean total percentages of H2O2-producing leukocytes did not differ among assays with previous in vitro stimuli. There was no difference in the percentages of H2O2-producing leukocytes, among cells obtained from cows that belonged to different groups. However, mean intracellular H2O2-production of leukocytes obtained from BLV-infected cows, presenting PL, without in vitro stimulus (p=0.007), after in vitro addition of PMA (p<0.001), or LPS (p=0.001), or after phagocytosis (p=0.002) was smaller than that verified in leukocytes obtained from non-infected and from BLV-infected, non-lymphocytotic, cows. The percentage of leukocytes that were carrying out phagocytosis, characterized by the intensity of propidium iodide fluorescence, among cells obtained from BLV-infected cows, presenting PL (7.20%), was smaller (p=0.047) than that verified among cells obtained from non-infected and from BLV-infected (12.90%), non-lymphocytotic (14.70%), cows. Furthermore, leukocytes obtained from BLV-infected cows, presenting PL, showed smaller phagocytosis intensity (p<0.001) than leukocytes obtained from non-infected and from BLV-infected, non-lymphocytotic, cows. Therefore, results show a functional vulnerability of circulating leukocytes obtained from BLV-infected, lymphocytotic cows