The influence of Tween 80 on laccase production by Pleurotus sajor-caju and the efficiency of crude enzyme broth in the removal of bisphenol-A / Influência do Tween 80 na produção de lacases de Pleurotus sajor-caju e eficiência do caldo enzimático bruto na remoção de bisfenol-A

Bisphenol-A is currently considered an environmental pollutant, capable of interfering in the endocrine system of organisms and causing alterations in its development and reproductive system. An alternative method to the chemical treatment of this pollutant has been the use of oxidative enzymes, especially laccases produced by fungi. In order to reduce production costs, agro-industrial waste can be used in the culture medium composition. Nonionic surfactants, which are only slightly toxic to biological membranes, can be applied, as well as Tween 80, to facilitate the excretion of these enzymes into the culture medium. The objectives of this work were: a) characterize the immersion water of banana straw used in the formulation of the culture medium; b) evaluate laccase production by Pleurotus sajor-caju in culture medium with and without addition of Tween 80, through shaken flasks; c) evaluate the efficiency of the crude enzyme broth in degrading bisphenol-A. The shaken flasks were incubated at 30°C for 12 days. The immersion water had a C:N ratio of 13.8, ash percentage of 28.6%, and pH close to neutrality. The addition of Tween 80 on the culture medium (7.5%, m/v) yielded laccase activity and productivity values equal to 3,016.47 U L-1 and 502.7 U L-1 day-1, respectively. These values were 50 and 33.5 times higher than those obtained in the culture medium without addition of Tween 80 for laccase activity and productivity, respectively. The crude enzyme broth degraded 100% of bisphenol-A after 48 hours, regardless of concentration (500, 750 and 1,000 mg L-1).(AU)

O bisfenol-A é considerado um poluente ambiental capaz de interferir no sistema endócrino dos organismos, ocasionando alterações em seu desenvolvimento e sistema de reprodução. Um método alternativo ao tratamento químico desse tipo de poluente tem sido a utilização de enzimas oxidativas, especialmente as lacases, produzidas por fungos. A fim de diminuir custos de produção, resíduos agroindustriais podem compor o meio de cultivo. Assim, surfactantes não iônicos e pouco tóxicos para as membranas biológicas, como o Tween 80, podem ser utilizados para facilitar a excreção dessas enzimas para o meio de cultivo. Os objetivos deste trabalho foram: caracterizar quimicamente o resíduo água de imersão de palha de bananeira, usado na formulação do meio de cultivo; avaliar a produção de lacase por Pleurotus sajor-caju em meio de cultivo líquido (frascos Erlenmeyer) com e sem adição de Tween 80; e avaliar a eficiência do caldo enzimático bruto em degradar bisfenol-A. Os frascos foram incubados a 30°C, por 12 dias. A água de imersão apresentou relação C:N 13,8, percentual de cinzas 28,6% e pH próximo da neutralidade. O cultivo adicionado de Tween 80 (7,5%, m/v) propiciou valores de atividade e produtividade em lacase iguais a 3.016,47 U L-1 e 502,7 U L-1 dia-1, respectivamente. Esses valores são 50 e 33,5 vezes maiores que os obtidos no cultivo sem adição de Tween 80, para atividade e produtividade em lacase, respectivamente. O caldo enzimático bruto degradou 100% do bisfenol-A após 48 horas, independentemente da concentração (500, 750 e 1.000 mg L-1).(AU)

The influence of Tween 80 on laccase production by Pleurotus sajor-caju and the efficiency of crude enzyme broth in the removal of bisphenol-A / Influência do Tween 80 na produção de lacases de Pleurotus sajor-caju e eficiência do caldo enzimático bruto na remoção de bisfenol-A

Bisphenol-A is currently considered an environmental pollutant, capable of interfering in the endocrine system of organisms and causing alterations in its development and reproductive system. An alternative method to the chemical treatment of this pollutant has been the use of oxidative enzymes, especially laccases produced by fungi. In order to reduce production costs, agro-industrial waste can be used in the culture medium composition. Nonionic surfactants, which are only slightly toxic to biological membranes, can be applied, as well as Tween 80, to facilitate the excretion of these enzymes into the culture medium. The objectives of this work were: a) characterize the immersion water of banana straw used in the formulation of the culture medium; b) evaluate laccase production by Pleurotus sajor-caju in culture medium with and without addition of Tween 80, through shaken flasks; c) evaluate the efficiency of the crude enzyme broth in degrading bisphenol-A. The shaken flasks were incubated at 30°C for 12 days. The immersion water had a C:N ratio of 13.8, ash percentage of 28.6%, and pH close to neutrality. The addition of Tween 80 on the culture medium (7.5%, m/v) yielded laccase activity and productivity values equal to 3,016.47 U L-1 and 502.7 U L-1 day-1, respectively. These values were 50 and 33.5 times higher than those obtained in the culture medium without addition of Tween 80 for laccase activity and productivity, respectively. The crude enzyme broth degraded 100% of bisphenol-A after 48 hours, regardless of concentration (500, 750 and 1,000 mg L-1).(AU)

O bisfenol-A é considerado um poluente ambiental capaz de interferir no sistema endócrino dos organismos, ocasionando alterações em seu desenvolvimento e sistema de reprodução. Um método alternativo ao tratamento químico desse tipo de poluente tem sido a utilização de enzimas oxidativas, especialmente as lacases, produzidas por fungos. A fim de diminuir custos de produção, resíduos agroindustriais podem compor o meio de cultivo. Assim, surfactantes não iônicos e pouco tóxicos para as membranas biológicas, como o Tween 80, podem ser utilizados para facilitar a excreção dessas enzimas para o meio de cultivo. Os objetivos deste trabalho foram: caracterizar quimicamente o resíduo água de imersão de palha de bananeira, usado na formulação do meio de cultivo; avaliar a produção de lacase por Pleurotus sajor-caju em meio de cultivo líquido (frascos Erlenmeyer) com e sem adição de Tween 80; e avaliar a eficiência do caldo enzimático bruto em degradar bisfenol-A. Os frascos foram incubados a 30°C, por 12 dias. A água de imersão apresentou relação C:N 13,8, percentual de cinzas 28,6% e pH próximo da neutralidade. O cultivo adicionado de Tween 80 (7,5%, m/v) propiciou valores de atividade e produtividade em lacase iguais a 3.016,47 U L-1 e 502,7 U L-1 dia-1, respectivamente. Esses valores são 50 e 33,5 vezes maiores que os obtidos no cultivo sem adição de Tween 80, para atividade e produtividade em lacase, respectivamente. O caldo enzimático bruto degradou 100% do bisfenol-A após 48 horas, independentemente da concentração (500, 750 e 1.000 mg L-1).(AU)

Remediação dos efeitos do glifosato sobre Artemia salina por isoterápico.

Um dos bioindicadores de ecotoxicidade mais utilizados em ensaios de laboratório é a Artemia salina, um microcrustáceo. O glifosato é um herbicida muito utilizado na agricultura, mas apresenta toxicidade como desregulador endócrino. Na prática homeopática é comum o tratamento de intoxicações pelo uso de isoterápicos: diluições homeopáticas de uma substância tóxica usadas para tratamento de indivíduos expostos às mesmas substâncias. Objetivo: Verificar a possível proteção de Artemia salina exposta ao glifosato pela adição de isoterápicos na água, por meio da avaliação das alterações comportamentais e morfológicas, bem como das propriedades físicas da água. Métodos: 0,6g de cistos de Artemia salina foram mantidos em garrafas de cultura, em 400mL de água do mar artificial, seguindo técnica padrão de oxigenação, luminosidade e temperatura, para promover sua eclosão em 48 horas. O glifosato foi inserido na água no momento da inserção dos cistos, na concentração letal 10% - CL 10 ou 0,002%. Os isoterápicos (Gly 6cH, 30cH, 200cH) foram preparados na véspera, em água purificada, a partir de matrizes medicamentosas previamente preparadas em farmácia credenciada na ANVISA utilizando amostras de glifosato do mesmo lote e inseridos na água de forma concomitante, na proporção de 1% do volume total de água. Ao final de 48 horas, o conteúdo líquido da garrafa contendo os estágios iniciais (I a V) de náuplios foi recolhido em um Becker, seu conteúdo foi homogeneizado e 100mL foram filtrados para obtenção da água remanescente. A água reservada foi congelada em alíquotas para posterior análise físico-química (interação com corantes solvatocrômicos). A parte não filtrada dos náuplios foi distribuída em lâminas para avaliação do desenvolvimento morfológico em microscópio óptico e uma outra parte foi distribuída em tubos transparentes na quantidade de 10 náuplios por tubo (6 tubos por grupo), para análise comportamental. Os tratamentos foram feitos em cego e os códigos foram revelados após a análise estatística. Em uma segunda etapa, a eclosão dos cistos foi observada em placa de 96 poços, com diferentes graus de salinidade e concentrações de glifosato, sendo a eclosão e a mobilidade dos náuplios registradas por câmera digital e analisadas pelo software Image J, plug-in Trackmate. Ao final, as amostras de água foram congeladas para análise físico-química utilizando corantes solvatocrômicos. Resultados: Gly 6cH aumentou a vitalidade de náuplios e a proporção entre náuplios saudáveis e defeituosos, bem como reduziu e retardou a eclosão de cistos. Os efeitos sobre a eclosão foram mais evidentes em água com 80% de salinidade e quando da exposição a baixas concentrações de glifosato (CL10). Não foram observadas diferenças entre os tratamentos em relação à locomoção dos náuplios, mas houve tendência de aumento nesse parâmetro na intoxicação com CL50. A interação das amostras de água com corantes solvatocrômicos mostrou que a cumarina foi um marcador físico-químico específico do Gly 6cH. Conclusão: Gly 6cH apresentou efeitos protetores sobre o desenvolvimento da Artemia salina exposta a baixas concentrações de glifosato (CL10), sendo o corante solvatocrômico cumarina um potencial marcador físico-químico de valor preditivo, sugerindo mecanismos relacionados a mudanças de polaridade da água.

Introduction: One of the most used bio-indicators of ecotoxicity in laboratory tests is Artemia salina, a microcrustacean known as brine shrimp. Glyphosate is an herbicide widely used in agriculture but presents toxicity as an endocrine disruptor. In homeopathic practice, it is usual to treat poisonings using isotherapies: homeopathic dilutions of a toxic substance used to treat individuals exposed to the same substances. Objective: To verify the putative protection of brine shrimps exposed to glyphosate by the addition of isotherapics in the water through the evaluation of behavioral and morphological changes and the physical properties of the water. Methods: 0.6g of Artemia salina cysts were kept in culture bottles in 400mL of artificial seawater, following normal oxygenation, luminosity, and temperature techniques, to promote their hatching in 48 hours. Glyphosate was inserted into the water simultaneously to the cysts´ insertion at a lethal concentration of 10%: CL 10 or 0.002%. The isotherapics (Gly 6cH, 30cH, 200cH) were prepared the day before, in sterile purified water, from matrices previously prepared in an accredited pharmacy, using glyphosate samples from the same batch. They were inserted into the water in a proportion of 1% of the total volume. At the end of 48 hours, the liquid content of the bottle containing the initial stages (I to V) of nauplii was collected in a Becker, its content was homogenized, and 100mL were filtered to obtain the remaining water. The reserved water was frozen into aliquots for further physicochemical analysis (interaction with solvatochromic dyes). The unfiltered part of the nauplii was distributed on slides for evaluation of morphological development under an optical microscope, and another part was distributed in transparent tubes in the amount of 10 nauplii per tube (6 tubes per group) for behavioral analysis. The treatments were performed blind, and the codes were revealed after statistical analysis. In a second stage, the hatching of the cysts was observed in a 96-well plate, with different degrees of salinity and glyphosate concentrations; hatching and nauplii activity were recorded by a digital camera analyzed by the software Image J, plug-in Trackmate. In the end, water samples were frozen for physicochemical analysis using solvatochromic dyes. Results: Gly 6cH increased the vitality of nauplii and the ratio between healthy and defective nauplii and reduced and delayed the outbreak of cysts. The effects on hatching were more evident in water with 80% salinity and when exposed to low concentrations of glyphosate (CL10). There were no differences among treatments concerning locomotion of nauplii, but there was a tendency to increase it after intoxication with LC50. The interaction of water samples with solvatochromic dyes showed that coumarin was a specific physicochemical marker for Gly 6cH. Conclusion: Gly 6cH had protective effects on the development of Artemia salina exposed to low concentrations of glyphosate (CL10), being coumarin (a solvatochromic dye) a potential physicochemical marker of predictive value, suggesting mechanisms related to changes in the polarity of water.

Bisphenol A: review on its use in the food packaging, exposure and toxicity / Bisfenol A: o uso em embalagens para alimentos, exposição e toxicidade - uma Revisão

Bisphenol A is an industrial compound produced in large scale around the world. This product is used for manufacturing the synthetic polymers, including epoxy resins, which are applied for varnishing the both internal and external parts of food cans, and also for producing the polycarbonate applied on baby bottles and bottles of water. Other less significant applications are the production of polyvinyl chloride (PVC), to manufacture the thermal paper, polyurethane, polyamide, flame retardant, and to prepare the dental sealants and resins. Bisphenol A is considered as an endocrine disruptor that interferes with the production, release, transport, metabolism, binding or elimination of natural hormones responsible for maintaining balance and regulation of development processes. Among the various routes of human exposure to bisphenol A, the dietary exposure is especially worrisome as it potentially reaches higher number of persons in the different age groups, besides, it may occur during long periods in low doses and without being detected. This review aimed at addressing the routes of exposure to bisphenol A, its toxicity and the legislations concerning their limits to ensure the human health integrity(AU)

O bisfenol A é um composto industrial produzido em larga escala em todo o mundo, sendo utilizado para produzir polímeros sintéticos, inclusive as resinas epóxi, que são empregadas no envernizamento interno e externo de latas de alimentos, e na produção de policarbonato com aplicações em mamadeiras e garrafões de água. Outras aplicações menos significativas são a produção de policloreto de vinila (PVC), manufatura de papel térmico, poliuretano, poliamida e de produto para retardamento de chama, bem como na preparação de selantes e resinas dentárias. O bisfenol A é considerado como disruptor endócrino que interfere na produção, liberação, transporte, metabolismo, ligação ou eliminação dos hormônios naturais, responsáveis pela manutenção do equilíbrio e regulação dos processos de desenvolvimento. Dentre as várias vias de exposição humana ao bisfenol A, a exposição alimentar é a mais preocupante por atingir potencialmente um maior número de pessoas, em diversas faixas etárias, e que pode ocorrer durante longos períodos em pequenas doses e sem serem detectadas. Na presente revisão foram abordadas as vias de exposição ao bisfenol A, sua toxicidade e as legislações quanto aos limites para garantir a saúde humana(AU)

Resultados preliminares do efeito da água da represa Billings na tireóide das tilápias / Effect of water from the billings reservoir on tilapia thyroid glandspreliminary results

The presence of endocrine disruptors in reservoirs and water sources has been related to environmental impact and public health issues. In this context, the objective of this study is to show morphological changes in the thyroid gland of the Nile Tilapia (Oreochromisniloticus) exposed to the water from Billings Reservoir. Tilapia individuals were kept in two tanks, ten fishes in water from the Billings Reservoir and 10 fishes in mineral water (control). All specimens were sacrificed by medullary section after 5 months treatment period for thyroid collection. Histological analysis of Hematoxylin/Eosin stained glass slides and morphometric study of photomicrograph scans (1000X and 400X) of thyroid follicles (area, perimeter, circumference factor, major and minor diameter) were performed using Image J software. Preliminary study of six fishes (n = 6) from the Billings Reservoir and analysis of8 follicles per individual showed the presence of lymphocytic infiltrate and larger area and perimeter of follicles (26,969,881 ± 13,507,948, 4m2 X 10,957,141 ± 7,286,471,01m2 and 615,793 ± 387,122 ± 182.485,39m X 136.426,80m to p = 0.05). These results indicate that the Tilapia thyroid can be a biomarker for assessment of water contamination.

A presença de disruptores endócrinos em represas e mananciais e os conseqüentes problemas ambientais e de saúde pública têm sido relatados, nesse contexto o presente trabalho teve como objetivo evidenciar as alterações morfológicas na tireoide de Tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus) expostas às águas da Represa Billings. Para alcançar esse objetivo 20 tilápias foram armazenadas por 5 meses em dois aquários, sendo 10 peixes em um com a água proveniente da represa Billings e 10 peixes em um aquário com água mineral (controle). Após esse período os peixes foram sacrificados por secção medular para extração da tireóide. Foram realizadas análises histológicas das mesmas em lâminas coradas com hematoxilina/eosina e análises morfométricas de foto digitalizações (1000X e 400X), utilizando-se o programa Image J, dos folículos tireoideanos (área, perímetro, fator de circunferência, maior e menor diâmetro). Nas análises preliminares de seis peixes (n=6) expostos a água da represa Billings, observou-se em 8 folículos de cada exemplar, a presença de infiltrado linfocitário e também maior área e perímetro dos folículos (26.969.881 ± 13.507.948,4µm2 X 10.957.141 ± 7.286.471,01µm2 e 615.793 ± 182.485,39µm X 387.122 ± 136.426,80µm para p = 0,05). Esses resultados indicam que a tireóide de tilápias do Nilo pode ser um biomarcador para avaliação de águas contaminadas.

Resultados preliminares do efeito da água da represa Billings na tireóide das tilápias / Effect of water from the billings reservoir on tilapia thyroid glandspreliminary results

The presence of endocrine disruptors in reservoirs and water sources has been related to environmental impact and public health issues. In this context, the objective of this study is to show morphological changes in the thyroid gland of the Nile Tilapia (Oreochromisniloticus) exposed to the water from Billings Reservoir. Tilapia individuals were kept in two tanks, ten fishes in water from the Billings Reservoir and 10 fishes in mineral water (control). All specimens were sacrificed by medullary section after 5 months treatment period for thyroid collection. Histological analysis of Hematoxylin/Eosin stained glass slides and morphometric study of photomicrograph scans (1000X and 400X) of thyroid follicles (area, perimeter, circumference factor, major and minor diameter) were performed using Image J software. Preliminary study of six fishes (n = 6) from the Billings Reservoir and analysis of8 follicles per individual showed the presence of lymphocytic infiltrate and larger area and perimeter of follicles (26,969,881 ± 13,507,948, 4m2 X 10,957,141 ± 7,286,471,01m2 and 615,793 ± 387,122 ± 182.485,39m X 136.426,80m to p = 0.05). These results indicate that the Tilapia thyroid can be a biomarker for assessment of water contamination.(AU)

A presença de disruptores endócrinos em represas e mananciais e os conseqüentes problemas ambientais e de saúde pública têm sido relatados, nesse contexto o presente trabalho teve como objetivo evidenciar as alterações morfológicas na tireoide de Tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus) expostas às águas da Represa Billings. Para alcançar esse objetivo 20 tilápias foram armazenadas por 5 meses em dois aquários, sendo 10 peixes em um com a água proveniente da represa Billings e 10 peixes em um aquário com água mineral (controle). Após esse período os peixes foram sacrificados por secção medular para extração da tireóide. Foram realizadas análises histológicas das mesmas em lâminas coradas com hematoxilina/eosina e análises morfométricas de foto digitalizações (1000X e 400X), utilizando-se o programa Image J, dos folículos tireoideanos (área, perímetro, fator de circunferência, maior e menor diâmetro). Nas análises preliminares de seis peixes (n=6) expostos a água da represa Billings, observou-se em 8 folículos de cada exemplar, a presença de infiltrado linfocitário e também maior área e perímetro dos folículos (26.969.881 ± 13.507.948,4µm2 X 10.957.141 ± 7.286.471,01µm2 e 615.793 ± 182.485,39µm X 387.122 ± 136.426,80µm para p = 0,05). Esses resultados indicam que a tireóide de tilápias do Nilo pode ser um biomarcador para avaliação de águas contaminadas.(AU)

Efeitos do Bisfenol A (BPA) na infertilidade masculina e feminina revisão literária / Effects of bisphenol A (BPA) on male and female infertility a literature review

Bisphenol A (BPA) is found in polycarbonate plastics, epoxy resins and wastewater. Therefore, this compound readily comes into contact with humans. The objective of this work is to review the recent literature (2010 to 2014) on possible detrimental effects of BPA to human fertility and health in both sexes. The review indicated that BPA causes adverse infertility effects on men and women, besides posing environmental risks. We concluded that new public policy on its use and effects is needed.

O bisfenol A (BPA) encontra-se em plásticos policarbonatos, resinas epóxi e águas residuais. Portanto, esse composto tem contato com o ser humano. Para verificar sua possível ação prejudicial à saúde, o presente trabalho tem como objetivo analisar a literatura sobre seus efeitos na fertilidade em ambos os sexos. Após uma revisão da literatura presente em sites de artigos científicos, selecionando artigos recentes do ano de 2010 até 2014, o presente estudo indicou que o BPA causa efeitos adversos de infertilidade no homem e na mulher, além de acarretar riscos ao meio ambiente. Permitindo-se concluir que existe a necessidade de novas políticas públicas sobre seu uso e novos estudos sobre seus efeitos.

Efeitos do Bisfenol A (BPA) na infertilidade masculina e feminina revisão literária / Effects of bisphenol A (BPA) on male and female infertility a literature review

Bisphenol A (BPA) is found in polycarbonate plastics, epoxy resins and wastewater. Therefore, this compound readily comes into contact with humans. The objective of this work is to review the recent literature (2010 to 2014) on possible detrimental effects of BPA to human fertility and health in both sexes. The review indicated that BPA causes adverse infertility effects on men and women, besides posing environmental risks. We concluded that new public policy on its use and effects is needed.(AU)

O bisfenol A (BPA) encontra-se em plásticos policarbonatos, resinas epóxi e águas residuais. Portanto, esse composto tem contato com o ser humano. Para verificar sua possível ação prejudicial à saúde, o presente trabalho tem como objetivo analisar a literatura sobre seus efeitos na fertilidade em ambos os sexos. Após uma revisão da literatura presente em sites de artigos científicos, selecionando artigos recentes do ano de 2010 até 2014, o presente estudo indicou que o BPA causa efeitos adversos de infertilidade no homem e na mulher, além de acarretar riscos ao meio ambiente. Permitindo-se concluir que existe a necessidade de novas políticas públicas sobre seu uso e novos estudos sobre seus efeitos.(AU)

Evaluation of tamoxifen citrate efficiency on sexual inversion of Nile tilapia (Oreochromis niloticus) / Avaliação da eficiência do citrato de tamoxifeno na inversão sexual de tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus)

The experiment was conducted to evaluate the influence of tamoxifen on sexual inversion of Nile tilapia larvae from two days of life, the experimental desing was compounded of five treatments and three replicates, and fish were fed diets with different amounts of tamoxifen: 0, 25, 50, 75 and 100 mg kg-1 of feed. After 28 days of treatment, larvae were counted and transferred to water tanks of 500 liters and then which were fed with a diet containing 28% crude protein for more 60 days. After this period the fry were sexed by the squash. The survival 75.5 ± 5.74, 73 ± 4.76, 66 ± 11.19, 76.5 ± 4.12, 75 ± 3.46 and average percentage of male individuals 62.5 ± 5, 70 ± 8.1, 60 ± 8.2, 70 ± 0.0, 62.5 ± 9.5 for treatments 0, 25, 50, 75 and 100 mg of tamoxifenkg-1 diet, respectively, showed no statistically significant differences (p 0,05). The number of gonads in each fish experienced a significant reduction in the treatments with 75 and 100 mg of tamoxifen (89.3 and 79.3 ± 0.527 ± 0.378) when compared with treatments 0, 25 and 50 mg of tamoxifen (98, 9 ± 1.0, 97.6 ± 1.0 and 94.5 ± 1.0, respectively), the histological structure of female gonads did not differ and ovaries in all treatments showed well-defined and oocytes at several stages of maturation.(AU)

O experimento foi realizado com o objetivo de avaliar a influência do tamoxifeno na inversão sexual de larvas de tilápia a partir dos dois dias de vida. Os animais foram distribuídos em um delineamento experimental de cinco tratamentos e três repetições, recebendo dietas com diferentes quantidades de tamoxifeno: 0, 25, 50, 75 e 100 mg kg-1 de ração. Após 28 dias de tratamento, as larvas restantes em cada tratamento foram contadas e transferidas para caixas de água de 500 L onde receberam ração comercial com 28% de proteína bruta por 60 dias. Após este período, os alevinos foram sexados pelo método squash. A sobrevivência 75,5 ± 5,74; 73 ± 4,76; 66 ± 11,19; 76,5 ± 4,12; 75 ± 3,46% e a porcentagem média de indivíduos machos 62,5 ± 5; 70 ± 8,1; 60 ± 8,2; 70 ± 0,0; 62,5 ± 9,5% para os tratamentos 0, 25, 50, 75 e 100 mg de tamoxifeno kg-1 de ração, respectivamente, não apresentaram diferenças estatísticas significativas. O número de gônadas presentes em cada indivíduo apresentou redução significativa, nos tratamentos com 75 e 100 mg de tamoxifeno (89,3 ± 0,527 e 79,3 ± 0,378%) quando comparado com os tratamentos 0, 25 e 50 mg de tamoxifeno (98,9 ± 1,0; 97,6 ± 1,0 e 94,5 ± 1,0%, respectivamente), a estrutura histológica das gônadas femininas não apresentou diferenças e os ovários em todos os tratamentos apresentaram ovócitos bem definidos e em vários estádios de maturação.(AU)

EFEITOS TÓXICOS DA FINASTERIDA E TESTOSTERONA LIVRES E COMPLEXADAS A CICLODEXTRINA NA FISIOLOGIA E COMPORTAMENTO DE DANIO RERIO

A finasterida e a testosterona são hormônios que possuem ação anti-androgênica (inibição da 5-redutase) e androgênica respectivamente, que podem agir como disruptores endócrinos causando efeitos negativos aos animais aquáticos e suas proles. A finasterida foi desenvolvida inicialmente para tratar a hiperplasia prostática benigna, porém, foi apresentada como uma grande descoberta no tratamento da Alopecia androgenética (calvície), já a testosterona é o hormônio responsável pelas características sexuais secundárias e tem como metabólito mais ativo a di-hidrotestosterona, principal responsável pela calvície. Entretanto, a finasterida assim como a testosterona são comumente usadas em diversas situações, tanto por homens no tratamento contra a perda de cabelo (finasterida) ou na reversão sexual de peixes (testosterona), o que eleva as presenças desses hormônios no ambiente aquático. Uma vez no ambiente tanto a finasterida como a testosterona passam a ter ação de disruptores endócrinos, sendo um dos mais potentes poluentes aquáticos. Por possui propriedades hidrofóbicas que reduz suas biodisponibilidades, tais hormônios podem ser complexados a ciclodextrinas (CDs) o que reduzir esta limitação, logo sua utilização em complexos de inclusão aumentaria sua solubilidade e absorção, podendo alterar uma ou mais vias hormonais. Diante do exposto, o presente trabalho tem como objetivo avaliar os efeitos tóxicos do complexo de inclusão Finasterida -ciclodextrina (-CD) e Testosterona -ciclodextrina (-CD), através da exposição crônica em concentrações subletais sob os e embriões e adultos de zebrafish (Danio rerio). Os embriões foram expostos por períodos de 96 horas pós-fertilização para a avaliação da mortalidade, efeitos teratogênicos e frequência cardíaca. Os grupos foram divididos em: controle, finasterida (FIN) e testosterona (T) livres nas concentrações de 280, 560, 1120, 2240, 4480 ng/L, e finasterida (FIN--CD) e testosterona (T--CD) complexadas a -CD nas concentrações de 280 e 4480 ng/L. Os adultos foram expostos por um período de 60 dias para a avaliar alterações comportamentais e sobrevivência diária relacionadas a exposição de finasterida (FIN) e testosterona (T) livres e complexadas (-CD) nas concentrações 280 e 4480 ng/L. Os embriões, não apresentaram mortalidade nas concentrações de 280 - 4480 ng/L em todo os todos os grupos expostos. Efeitos teratogênicos, de forma semelhante também não foram observados nos grupos nas diferentes concentrações. Nas frequências cardíacas dos embriões, foram constatadas variações significativas (p < 0,05) quando comparadas ao grupo controle em todos os grupos expostos. Os adultos expostos às concentrações de finasterida e testosterona livres e complexadas apresentaram modificações (p < 0,05) na frequência de exibição de comportamentos ativos como Nadar lento e Nadar rápido, como também nos comportamentos agonísticos. Conclui-se então, que em testes com os embriões, FIN e FIN--CD assim como T e T- -CD, podem modificar suas frequências cardíacas e que a exposição dos adultos aos mesmo hormônios promoveram uma redução na sua capacidade locomotora e um aumento na agressividade dos animais.

Finasteride and testosterone are hormones that have anti-androgenic action (inhibition of 5-reductase) and androgen respectively, which can act as endocrine disruptors causing negative effects on aquatic animals and their offspring. Finasteride was initially developed to treat benign prostatic hyperplasia, however, was presented as a major discovery in the treatment of androgenetic alopecia (baldness) already the testosterone is the hormone responsible for secondary sexual characteristics and has the most active metabolite the dihydrotestosterone, main responsible for baldness. However, finasteride as well as testosterone are commonly used in various situations, both by men in the treatment against hair loss (finasteride) or sexual reversal of fish (testosterone), which increases the presence of these hormones in the aquatic environment. Once in the environment both finasteride and testosterone begin to have action of endocrine disruptors, being one of the most powerful aquatic pollutants. Because it has hydrophobic properties which reduces their bioavailability, such hormones can be complexed to cyclodextrins (CDs) to reduce this limitation, therefore its use in inclusion complexes would increase its solubility and absorption, and may change one or more hormonal pathways. In view of the foregoing, the present study aims to evaluate the toxic effects of the inclusion complex Finasteride -cyclodextrin (-CD) and Testosterone -cyclodextrin (-CD), through chronic exposure to sublethal concentrations under the embryos and adults of the zebrafish (Danio rerio). The work was aimed to evaluate the toxic effects of finasteride and testosterone free and complexed into cyclodextrin on the physiological and behavioral parameters of embryos and adults of the Danio rerio fish. The embryos were exposed for periods of 96 hours post-fertilization for the evaluation of mortality, teratogenic effects, and heart rate. The groups were divided into control, free finasteride (FIN) and testosterone (T) at the concentrations of 280, 560, 1120, 2240, 4480 ng/L, and finasteride (FIN--CD) and testosterone (T--CD) complexed into -CD at concentrations of 280 and 4480 ng/L. Adults were exposed for a period of 60 days to evaluate behavioral changes and daily survival related to exposure to free finasteride (FIN) and testosterone (T) complexed into -CD at concentrations 280 and 4480 ng/L. The embryos did not exhibit mortality at concentrations of 280 - 4480 ng/L in the all groups exposed. Similarly, it was not observed teratogenic effects in the groups exposed to different concentrations. In the heart frequencies of the embryos, significant variations were observed (p < 0 .05) when compared to the control group. Adults exposed to free and complexed finasteride and testosterone had significant alterations (p < 0.05) in the most active behaviors such as slow swim and fast swim, as well as in agonistic behaviors. It can be concluded that in tests with embryos, FIN and FIN--CD as well T and T- -CD, may interfere in the heart rate and the exposure of adults to the same hormones promoted a reduction in their locomotor capacity and can increase in the aggressiveness of the animals.

EFEITOS TÓXICOS DA TIROXINA LIVRE, COMPLEXADA À CICLODEXTRINA E LEVOTIROXINA NOS PARÂMETROS BIOLÓGICOS DO COLOSSOMA MACROSPOMUM EXPOSTO EM TESTE DE TOXICIDADE CRÔNCA

Os efeitos tóxicos da tiroxina (T4) livre, complexada à -ciclodextrina (-CD-T4) e da levotiroxina (L-T4) nos parâmetros biológicos de tambaqui (Colossoma macropomum) foram avaliados. Os animais foram expostos em testes de toxicidade crônica aos hormônios nas concentrações de água não tratada (ANT - 60 ng/L) por 2 meses e água tratada (AT - 20 ng/L e 40 ng/L) por 12 meses. Foram avaliados, o peso e comprimento, comportamento animal, taxa metabólica, consumo de oxigênio e eletrorretinografia. Os juvenis de tambaqui expostos ao -CD-T4 (ANT) apresentaram redução (p < 0,05) no peso comparado aos demais grupos (14,1% - controle e T4, e 13,21% - L-T4) e comprimento (5,71%) comparado a T4 livre. Os animais expostos a T4 livre (AT) apresentaram aumento (8,48%) no crescimento em peso (p < 0,05). Nas observações comportamentais dos animais expostos a L-T4 (ANT) foi observada redução (p < 0,05) nos eventos Nadar Lento e Permanecer Parado. Animais expostos ao -CD-T4 (ANT) reduziram a exibição do evento Nadar Lento e Fugir, mas aumentaram a exibição de Permanecer Parado. Os animais expostos ao -CD-T4 (20 ng/L - AT) aumentaram a exibição do evento Ataque Lateral. Não foram observadas diferenças na taxa metabólica, porém os animais expostos ao complexo -CD-T4 (40 e 60 ng/L) apresentaram maior consumo de O2. L-T4 e -CD-T4 promoveram redução na capacidade dos animais em responderem a estímulos nos fotorreceptores e nas células ON-bipolares de acordo com o exame fotópico. No eletroretinograma flicker não foram observadas alterações (p > 0,05) na latência e amplitude das ondas. Pode-se concluir que a complexação de T4 à -CD alterou a toxicidade do hormônio, promovendo alterações no peso, comprimento, comportamento e consumo de O2 dos animais, sugerindo que produtos disponibilizados com complexos de inclusão, devem ser submetidos a novos testes de toxicidade.

The toxic effects of free thyroxine (T4), complexed into -cyclodextrin (-CD-T4) and levothyroxine (L-T4) on the biological parameters of tambaqui (Colossoma macropomum) were evaluated. The animals were exposed in a chronic toxicity test to the compounds at the concentrations of untreated water (ANT 60 ng/L) for 2 months and treated water (AT 20 ng/L and 40 ng/L) for 12 months. Weight and length, animal behavior, metabolic rate, oxygen consumption and electroretinography were evaluated. The juvenile tambaqui were exposed to -CD-T4 in ANT had a reduction (p < 0,05) in the weight compared to the other groups (14.1% - control and T4 and 13.21% - L-T4) and length (5.71%) compared to free T4. Besides, the animals exposed to free T4 in AT had an increase (8.48%) in weight gain (p < 0.05). Behavioral observations of the animals exposed to L-T4 in ANT showed a reduction (p < 0.05) in the Slow Swimming and Staying Motionless events. The animals exposed to the -CD-T4 (ANT) reduced the display of the Slow Swimming and Escape event, but increased the Staying Motionless. The animals exposed to -CD-T4 (20 ng/L - AT) increased the Lateral Attack event. No significant differences (p > 0.05) were observed in the metabolic rate, but the animals exposed to the -CD-T4 complex (40 and 60 ng/L) had the highest O2 consumption. L-T4 and -CD-T4 promoted a reduction in the ability of the animals to respond to stimuli in the photoreceptors and ON-bipolar cells according to the photopic examination. In flicker electroretinogram, no differences (p> 0.05) were observed in the latency and wave amplitude. It can be concluded that the complexation of T4 to -CD altered the toxicity of the hormone, promoting changes in the weight, length, behavior and oxygen consumption of the exposed animals, suggesting that new toxicity tests should be performed on the hormones available containing inclusion complexes with cyclodextrins.

EFEITOS TÓXICOS DE HORMÔNIOS ESTEROIDES LIVRES E COMPLEXADOS A CICLODEXTRINAS NOS PARÂMETROS BIOLÓGICOS DE EMBRIÕES E ADULTOS DE ZEBRAFISH (DANIO RERIO)

A progesterona (P4) e o 17-estradiol (E2) são hormônios esteroides produzidos industrialmente como fármacos para terapias de reposição hormonal e métodos contraceptivos. Devido às características químicas dos hormônios esteroides como a hidrofobicidade, utiliza-se substancias para aumentar a solubilidade aquosa como os complexos de inclusão entre hormônios e ciclodextrinas (CDs). Hormônios livres ou complexados a CDs podem ser classificados como desreguladores endócrinos (DEs) que são substancias capazes de modificar o funcionamento endócrino de organismos aquáticos. É ampla a utilização de medicamentos com princípios ativos complexados a CDs, porém seus efeitos como poluente ambiental são pouco descritos na literatura. No presente estudo, foi utilizado o zebrafish (Danio rerio) devido às suas características favoráveis para estudos toxicológicos. Diante disto, o objetivo do estudo foi avaliar os efeitos de hormônios esteroides livres como P4 e E2 e complexados a ciclodextrinas (P4L e E2L), bem como os medicamentos de uso comercial, como progesterona micronizada (P4M) e estradiol transdérmico (E2T) em animais adultos e no desenvolvimento embrionário. Foram realizados testes de toxicidade aguda com os hormônios utilizando embriões de D. rerio baseado nas normas da OCDE, foi avaliada a frequência cardíaca, sobrevivência e efeitos teratogênicos. Também foram realizados testes de toxicidade crônica com animais adultos expostos aos hormônios para avaliação do comportamento animal e capacidade reprodutiva. A análise dos resultados dos testes de toxicidade aguda com embriões expostos a progestágenos e estrógenos, demonstraram que P4L e E2L causaram nos animais expostos maior percentual de teratogenicidade como, edema de pericárdio (Ep), edema de saco vitelínico (Esv) e deformação da coluna (Dcl). Na avaliação comportamental (30 - 60 dias) dos animais adultos expostos aos progestágenos e estrógenos, os animais expostos a P4M, E2L e E2T exibiram maiores frequências de exibição de comportamentos agressivos como Afugentar, Perseguição, Fuga e Ataque. Na análise da capacidade reprodutiva, os animais expostos ao E2T apresentaram aumento no número de ovos viáveis. Diante dos resultados obtidos, foi possível observar maior toxicidade dos hormônios P4L e E2L quando comparados aos hormônios complexados as ciclodextrinas (-CD-P4 e -CD-E2) indicando que a complexação reduziu a toxicidade dos hormônios em relação aos parâmetros estudados.

Progesterone (P4) and 17-estradiol (E2) are steroid hormones industrially produced as drugs for hormone replacement therapy and contraceptive methods. Due to the chemical characteristics of steroid hormones such as hydrophobicity, substances are used to increase aqueous solubility as the inclusion complexes between hormones and cyclodextrins (CDs). Free hormones or complexed into cyclodextrin can be classified as endocrine disruptors (ED), being substances capable of modifying the endocrine functioning of aquatic organisms. It is wide the use of drugs with active principles complexed into CDs, but their effects as an environmental pollutant are not well described in the literature. In the present study, the zebrafish (Danio rerio) was used due to good characteristics for toxicologic studies. The objective of this study was to evaluate the effects of free steroid hormones such as P4 and E2 and complexed into cyclodextrins (P4L and E2L) as well as commercially available drugs, such as micronized progesterone (P4M) and transdermal estradiol (E2T) in adult animals and embryonic development. Acute toxicity test was realized with hormones using D. rerio embryos according to OECD guidelines. The heart frequency, survival and teratogenic effects were evaluated. Also, chronic toxicity test was assayed with adults animals for evaluation of animal behavior and reproductive capacity. The analysis of the results of the acute toxicity tests with embryos exposed to progestins and estrogens showed the free hormones (P4L and E2L) caused in exposed animals a higher percentage of teratogenic effects such as pericardial edema (Pe), yolk sac edema (Yse) and spinal deformation (Sd). In the behavioral evaluation (30 - 60 days) of the adult animals exposed to the progestins and estrogens, the animals exposed to P4M, E2L and E2T exhibited higher frequencies of aggressive behaviors such as Chase away, Persecution, Escape and Attack. In the analysis of the reproductive capacity, the animals exposed to E2T showed an increase in the number of viable eggs. According to the results obtained, it was possible to observe higher toxicity of the hormones P4L and E2L when compared to the complexed hormones into cyclodextrins (-CD-P4 and -CD-E2) indicating that the complexation reduced the toxicity of the hormones in relation to the studied parameters.

EFEITO DO TRIBUTIL-ESTANHO (TBT) SOBRE STRAMONITA RUSTICA (NEOGASTROPODA) E LITTORARIA ANGULIFERA (MESOGASTROPODA)

O tributilestanho (TBT) é um composto organoestânico (COEs) utilizado como biocida em tintas antiincrustantes (AI) para o controle do fouling em embarcações e superfícies submersas. É altamente tóxico aos ecossistemas aquáticos e aos organismos não alvo e, apesar do banimento mundial em 2008, continua sendo amplamente utilizado no Brasil. Em gastrópodes, o TBT atua como disruptor endócrino. Em neogastrópodes provoca a sobreposição de caracteres sexuais masculinos sobre o trato reprodutivo das fêmeas, alteração conhecida por Imposex, sendo este o bioindicador mais usado para esse tipo de contaminação. Em mesogastrópodes pode ocorrer uma transformação gradual do oviduto palial das fêmeas em caracteres reprodutivos masculinos, alteração denominada de Intersex. No litoral sul da Bahia há diversas atividades náuticas potenciais de contaminação por TBT, como portos, estaleiros e marinas. Até o momento, não havia sido registrada a contaminação por TBT neste trecho do litoral. Dessa forma, este estudo teve como objetivo avaliar áreas potencialmente contaminadas por COEs, utilizando, na primeira etapa, o neogastrópode Stramonita rustica como bioindicador e sequencialmente o mesogastrópode Littoraria angulifera, espécie estritamente estuarina. Com esta última realizou-se, além de estudos in situ, bioensaios, com o fim de propor um novo protocolo para avaliação da contaminação por COEs nos estuários. As coletas, processamentos laboratoriais e ensaios foram feitos durante três anos (2014-2016), com amostragem em 30 locais e análise de um total de 1.856 exemplares (S. rustica: n = 330; L. angulifera: n = 1.526). Os animais foram anestesiados com Cloreto de Magnésio (MgCl) e as conchas foram medidas e quebradas para análise dos parâmetros sexuais de cada espécie. Foi confirmado o uso do TBT em áreas com portos, atividades de manutenção de pequenas embarcações e docas no litoral sul da Bahia, através do indicador Imposex em S. rustica. Os atributos populacionais, reprodutivos e comportamentais analisados em populações de L. angulifera, evidenciaram reprodução contínua, diferenças morfométricas entre os sexos e diferenças na altura da concha entre locais antropizados e não antropizados. Esses resultados serviram como subsídio para a avaliação do efeito do TBT nessa espécie e a utilização da mesma como organismo teste para contaminação por esse organometal. Para testar e confirmar as alterações sexuais causadas pelo TBT em fêmeas de L. angulifera através de bioensaios, foi inicialmente determinado o melhor anestésico e a concentração mais eficiente, sendo que o MgCl a 10% atendeu aos critérios (indução ao relaxamento, recuperação e sobrevivência pós anestesia), após, dois bioensaios foram conduzidos: (i) via dieta contaminada com TBT em papel A4 (utilizando duas concentrações de TBTCl e duas classes de tamanho) e (ii) via injeção com o contaminante, onde os animais foram anestesiados, inoculados com TBTCl a 4g/g do espécime. As análises morfométricas foram feitas em microscópio estereoscópico. Os resultados foram comparados aos de L. angulifera de locais contaminados por TBT (em que se fez também análise química de sedimento) e de um sítio controle. Alterações morfométricas sexuais foram confirmadas em ambos os ensaios. Os parâmetros analisados (comprimento do oviduto palial e distância entre a abertura anal e a vulva) nos animais contaminados assemelharam-se com a biometria do aparelho reprodutor masculino, evidenciando alteração sexual. Dessa forma, este estudo confirmou: (i) a utilização de tintas antincrustantes à base de TBT no litoral sul da Bahia através do bioindicador S. rustica e da análise do sedimento; (ii) que L. angulifera obedece aos critérios de escolha para organismo teste em estudos de contaminação ambiental; (iii) que L. angulifera sofre alterações sexuais em decorrência de exposição ao TBT; (iv) que o alongamento do oviduto palial, uma das alterações observadas, pode comprometer a eficiência reprodutiva das populações; (v) que novos estudos relacionados à contaminação ambiental utilizando L. angulifera e os parâmetros biométricos aqui empregados serão importantes para a proposição final desta espécie como organismo sentinela para contaminação por TBT em ambientes estuarinos.

Tributyltin (TBT) is an organostanic compound (OC) used as a biocide in antifouling paints (AI) to prevent bioincrustation in vessels and submerged surfaces. It is highly toxic to aquatic environment and to non-target organisms. Despite the worldwide ban in 2008, it still widely used in Brazil. In gastropods, TBT acts as an endocrine disruptor. In neogastropods its causes the superimposition of male sexual characters onto females reproductive tract, called Imposex, it was been the bioindicator most used for this type of contamination. In mesogastropods, occurs a gradual transformation of female palial oviduct in reproductive masculine characters, denominated Intersex. The southern coast of Bahia has a several nautical activities that are potentially source of contamination by TBT, such as ports, shipyards and marinas. To date, TBT contamination has not been recorded on this stretch of coast. In this way, this study aimed to evaluate areas potentially contaminated by OC´s, using, in the first stage, the neogastropod Stramonita rustica as bioindicator and sequentially the mesogastropod Littoraria angulifera, a strictly estuarine species. With this last one, in addition to wild studies, bioassays were carried out, in order to propose a new protocol for evaluation of OCs contamination in estuaries. The samples, laboratory procedures and bioassays were made during three years (2014-2016), in 30 stations samples where were analyzed a total of 1,856 specimens (S. rustica: n = 330; L. angulifera: n = 1,526). The animals were anesthetized with Magnesium Chloride (MgCl) and the shells were measured and broken to analyze the sexual parameters of each species. Through the indicator Imposex in S. rustica, the use of TBT in areas with ports, maintenance activities of small vessels and docks were confirmed in the southern coast of Bahia. Atributes in L. angulifera populations, such as populational, reproductive and behavioral were analyzed and showed continuous reproduction, morphometric differences between the sexes and differences in shell height between anthropized and non- anthropized sites. These results served as a subsidy for evaluating the effect of TBT in this species and its use as a test organism for contamination by this organometal. To test and confirm the sexual changes caused by TBT in L. angulifera females through bioassays, initially were determinated the best anesthetic and the most efficient concentration for L. angulifera, and the 10% MgCl met the criteria (induction to relaxation, recovery and survival after anesthesia). After, two bioassays were conducted: (i) through a contaminated diet with TBT on A4 paper (using two concentrations of TBTCl and two size classes) and (ii) through injection with contaminant, where the animals were anesthetized, inoculated with TBTC1 at 4g / g of each specimen. Morphometric analyzes were performed under a stereoscopic microscope. The results were compared to those L. angulifera from sites contaminated by TBT (in which chemical sediment analysis was also done) and from a control site. Sexual morphometric changes were confirmed in both bioassys. The analyzed parameters (palial oviduct length and distance between anal opening to vulva) in the intoxicated animals resembled the biometry of the male reproductive tract, evidencing sexual alteration. Thus, this study confirmed: (i) the use of TBT-based antifouling paints on the southern coast of Bahia confirmed through the bioindicator S. rustica and the sediment analysis; (ii) L. angulifera follows the criteria of choice for test organisms in environmental contamination studies; (iii) L. angulifera undergoes sexual changes as a result of exposure to TBT; (iv) the elongation of the palial oviduct, one of the observed changes, can compromise the reproductive efficiency of the populations; (v) and new studies related to environmental contamination using L. angulifera and the biometric parameters used here will be important for the final proposal of this species as a sentinel organism for TBT contamination in estuarine environments.

Transgenerational epigenetic actions of environmental compounds

Endocrine disrupting chemicals are known for their capacity to alter development and reproduction in mammals. One of the periods most sensitive to endocrine disruptor exposure is embryonic gonadal sex determination, when the germ line is undergoing epigenetic programming and DNA re-methylation. Epigenetic changes derived from exposure to endocrine disruptors have been described in several tissues and organisms. Endocrine disruptor induced epigenetic changes may have a wide range of phenotypic consequences, leading to disease conditions such as cancers, reproductive defects and obesity. Interestingly, the incidence of some diseases resulting from exposure to endocrine disruptors can be transgenerationally transmitted. In particular, exposure to the endocrine disruptor vinclozolin during early development is capable of inducing adult onset disease states that can be perpetuated across multiple generations. Environmental compounds such as endocrine disruptors can produce changes in the genome without altering DNA sequence. These changes are epigenetic in basis and can produce phenotypes that perpetuate transgenerationally. The suggestion that environmental factors can reprogram early development to induce epigenetic transgenerational phenotypes is a new paradigm in biology that will open new avenues for studies in disease etiology, reproduction and evolutionary biology.

Transgenerational epigenetic actions of environmental compounds

Endocrine disrupting chemicals are known for their capacity to alter development and reproduction in mammals. One of the periods most sensitive to endocrine disruptor exposure is embryonic gonadal sex determination, when the germ line is undergoing epigenetic programming and DNA re-methylation. Epigenetic changes derived from exposure to endocrine disruptors have been described in several tissues and organisms. Endocrine disruptor induced epigenetic changes may have a wide range of phenotypic consequences, leading to disease conditions such as cancers, reproductive defects and obesity. Interestingly, the incidence of some diseases resulting from exposure to endocrine disruptors can be transgenerationally transmitted. In particular, exposure to the endocrine disruptor vinclozolin during early development is capable of inducing adult onset disease states that can be perpetuated across multiple generations. Environmental compounds such as endocrine disruptors can produce changes in the genome without altering DNA sequence. These changes are epigenetic in basis and can produce phenotypes that perpetuate transgenerationally. The suggestion that environmental factors can reprogram early development to induce epigenetic transgenerational phenotypes is a new paradigm in biology that will open new avenues for studies in disease etiology, reproduction and evolutionary biology.(AU)

Tiouréia no desenvolvimento de girinos de rã- touro e no desempenho de animais pós-metamórficos

A tiouréia é um potente disruptor endócrino capaz de alterar os níveis circulates dos hormônios da tireóide. O presente estudo avaliou os efeitos da tiouréia (TU) sobre o desenvolvimento de girinos de rãs-touro (Lithobates catesbeianus), por meio do peso, crescimento, deposição de nutrientes corporais e análises morfológicas da glândula tireóide. Foram utilizados 7200 girinos, distribuídos em 12 caixas (500L), alimentados por 30 dias, com ração contendo 27% de proteína digestível e 0, 3, 5, 7 mg de TU/kg de ração. Após esse período, os animais receberam apenas ração sem TU até atingirem o clímax de metamorfose. A cada 15 dias, uma amostragem (± 35 g) foi retirada para análise dos nutrientes corporais e morfologia da tireóide e, mensalmente, uma amostragem de 10% dos animais foi pesada e medida individualmente. Os animais tratados com 7 mg TU/kg de ração apresentaram maior peso e maior comprimento total e parcial. Não houve diferenças significativas entre os tratamentos avaliados quanto à composição corporal. A deposição de nutrientes corporais, obtida durante o período experimental, encontra-se de acordo com o crescimento normal de girinos de rã-touro. A área da glândula tireóide foi maior nos animais tratados com 7 mg TU/kg de ração. A tiouréia pode ser utilizada na alimentação de girinos de rã-touro visando o maior crescimento dos mesmos, sem alterar a deposição de nutrientes corporais. Nas condições utilizadas neste trabalho, o uso de 7 mg TU/kg de ração, por um período de 30 dias, apresentou melhores resultados com relação a crescimento e ganho de peso.

Thiourea is a potent endocrine disruptor able to alter circulates levels of the thyroid hormones. This study evaluated the effects of thiourea (TU) on the development of bullfrog's tadpoles (Lithobates catesbeianus), by measurements of weight, growth, nutrients deposition on body and analyzes of the thyroid gland morphology. 7200 tadpoles were distributed in 12 boxes (500L), fed for 30 days with diets containing 27% of digestible protein and 0, 3, 5, 7 mg TU/kg of feed. After this period, animals received only diet without TU until they reach the metamorphosis climax. Every 15 days, a sampling (± 35 g) was removed for analysis of body nutrients and thyroid morphology and monthly a sampling of 10% of the animals was weighed and measured individually. At the end of this period, the animals treated with 7 mg TU/kg of feed showed greater weight and higher total and partial length. There were no significant differences among the treatments for body composition. The deposition of nutrients in the body obtained during the experimental period is in accordance with the normal growth of bullfrog tadpoles. The area of the thyroid gland was greater in animals treated with 7 mg TU/kg of feed. The thiourea can be used in bullfrog tadpoles feed aiming at further growth thereof, without changing the body's nutrient deposition. Under the conditions used in this study, using 7 mg of TU per kg of feed for a period of 30 days, showed the best results with respect to growth and weight gain.

Neurological, respiratory, behavioural and endocrine effects of tail docking in newborn dogs submitted to epidural anesthesia / Efeitos neurológicos, respiratórios, comportamentais e endocrinos decorrentes da caudectomia, em cães recém-nascidos submetidos à anestesia epidural

Tail docking is performed in some dog breeds to prevent injuries and to improve appearance. It has been forbidden in some countries for ethical reasons. The aim of this study was to investigate the behavioural, endocrine, neurological and respiratory effects produced by tail docking in newborn dogs. Fifty-two puppies ranging from 2 to 7 days of age were used. Sacrococcigeal epidural anaesthesia was performed using a 27 G x ½" needle and an insulin syringe filled with 0.2 mL of 0.5% lignocaine with adrenaline. Tail docking was performed in half of the puppies of each litter and the other half were used as controls. Plasma cortisol concentration, weight gain, respiratory rate, vocalization, defecation, urination, movement and suction, anogenital, magnum, flexor, vestibular and tactile reflexes were investigated both before and 1, 2, 3, 4, 8 and 24 hours after tail docking. Data were compared using ANOVA, followed by Student Newman Keuls, Friedman or Mann-Whitney tests where applicable. Tail docking after epidural anaesthesia did not modify respiratory rate, behaviour, neurological reflexes or plasma cortisol concentration up to 24 hours after surgery. It should be considered that epidural anaesthesia might have masked a possible harmful effect of tail docking on these variables.

A caudectomia é realizada em algumas raças de cães visando prevenir traumas, além de uma questão de estética. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos comportamentais, endócrinos, neurológicos e respiratórios produzidos pela caudectomia em cães recém-nascidos. Foram utilizados cinqüenta e dois filhotes de dois a sete dias de idade. A anestesia epidural sacrococígea foi realizada utilizando uma agulha 27 G x ½e seringa de insulina com 0.2 mL de lidocaína 0,5% com adrenalina. A caudectomia foi realizada em metade dos filhotes de cada fêmea e a outra metade foi utilizada como controle. A concentração de cortisol plasmático, ganho de peso, freqüência respiratória, vocalização, defecação, micção, movimentação, e reflexos anogenital, de sucção, magnum, flexor, vestibular e tátil foram avaliados antes e 1, 2, 3, 4, 8 e 24 horas após a caudectomia. Os resultados foram comparados utilizando ANOVA, seguidos de Student Newman Keuls, Friedman or Mann-Whitney tests. Não houve diferença em tempo ou entre os grupos em nenhuma variável. A caudectomia realizada após anestesia epidural não alterou frequência respiratória, comportamento, reflexos neurológicos e concentração de cortisol plasmático até 24 horas após a cirurgia. Deve ser considerado que a anestesia epidural pode ter mascarado um efeito prejudicial da caudectomia nestas variáveis.

A exposição ao glifosato-roundup causa atraso no início da puberdade em ratos machos / Glyphosate-roundup exposure delays puberty onset in male rats

Os efeitos causados pelas substâncias contidas nos pesticidas e adjuvantes podem ser responsáveis por inúmeras alterações no sistema reprodutivo de machos e de fêmeas. A partir do momento que o glifosato-Roundup penetra na célula ele reduz a atividade da proteína StAR e da enzima aromatase. Este trabalho avaliou a possível correlação entre o desenvolvimento das características puberais em animais expostos diariamente ao herbicida glifosato, pela observação do crescimento e desenvolvimento e do início do período púbere. Utilizou-se 32 ratos machos divididos em 4 grupos de tratamentos (0, 5, 50 e 250 mg/kgPV), dos 23 aos 53 dias de idade. Utilizou-se análise de MANCOVA para a comparação dos pesos corporais, Kruskall-Wallis para o dia e ANOVA para o peso ao descolamento do prepúcio. Não houve interferências do tratamento sobre o crescimento dos animais em nenhum grupo. A idade à puberdade foi significativamente diferente entre os grupos 50 mg/kg e 0 mg/kg (36,6±0,5; 36 dias; p<0,05), 250 mg/kg e 0 mg/kg (37,2±0,4; 36 dias; p<0,001) e 5 mg/kg e 250 mg/kg (36,5±0,53; 36 dias; p<0,05). O peso à puberdade foi maior no grupo de 250 mg/kg em relação aos grupos de 0 mg/kg e 5 mg/kg (142,7 ± 9,3; 128,9 ± 5,4; 126,1 ± 8,8 g, respectivamente; p<0,001). O peso do grupo de 50 mg/kg (134,1 ± 9,2g) não foi diferente dos outros grupos. É provável que a exposição crônica ao herbicida glifosato-Roundup cause a disrupção endócrina no eixo hipotalâmico-hipofisário-gonadal durante a maturação sexual, pela evidenciação do atraso no início da puberdade.(AU)

The effects of herbicides and it's adjuvants can be responsible for several alterations in reproductive organs of male and female. Since glyphosate-Roundup penetrates in the cell, it reduces the activity of StAR protein and aromatase enzime. This study evaluated the development of pubertal characteristics in animals receiving oral dosages of glyphosate-Roundup by gavage, by daily body weight measurement and verification of preputial separation (PPS). 32 male rats were allocated in 4 groups of treatments (0, 5, 50 e 250 mg/kg) from 23 to 53 days of age. The body weight from 23 to 53 days was compared using analysis of MANCOVA, Kruskall-Wallis was used to compare the day at PPS and ANOVA was used to compare the body weight at PPS. Age at PPS was different between groups 50 mg/kg and 0 mg/kg (36,6±0,5; 36 days; p<0,05), 250 mg/kg and 0 mg/kg (37,2±0,4; 36 days; p<0,001) and 5 mg/kg and 250 mg/kg (36,5±0,5; 36 days; p<0,05). The body weight at PPS was higher in group of 250 mg/kg n comparison to groups of 0 mg/kg and 5 mg/kg (142,7 ± 9,3; 128,9 ± 5,4; 126,1 ± 8,8 g, respectively; p<0,001). The body weight of group 50 mg/kg (134,1 ± 9,2g) wasn't differ from another groups. Probably, the daily exposure to glyphosate-Roundup causes endocrine disruption in hypothalamic-pituitary-gonad axis during sexual maturation, because it delayed the onset of puberty.(AU)

Avaliação de desreguladores endócrinos em machos: estudo dos efeitos tóxicos da Ipomoea carnea em caprinos / Evaluation of endocrine disruptors in males: study of toxic effects of Ipomoea carnea in goats

Recentemente, pesquisas vêm claramente demonstrando que xenobióticos podem apresentar efeitos deletérios sobre o sistema endócrino e passam a ser de grande importância toxicológica à medida que se tornam contaminantes ambientais. Tais substâncias passaram a ser denominadas de desreguladores endócrinos (DEs). Entre os diferentes DEs identificados, muitos são praguicidas, amplamente utilizados no meio agropecuário em todo o mundo. Atualmente, já são bem estabelecidas as metodologias para avaliação do potencial efeito DE de diferentes substâncias em roedores; porém uma busca na literatura deixa clara a falta de estudos e de protocolos para avaliação de DEs em animais de produção ruminantes, os quais certamente estão expostos a um grande número de agentes tóxicos com estas características. Assim, foi objetivo desta pesquisa dar início ao desenvolvimento de um protocolo para avaliação de efeitos DEs de xenobióticos em ruminantes. Para tal, estudou-se o bisfenol A (BPA), o qual é, classicamente, um DE para roedores. Além disto, avaliou-se o potencial efeito DE da I. carnea, uma planta tóxica de grande importância para ruminantes no Brasil e em outros países. O estudo foi realizado em duas etapas, na primeira avaliou-se os efeitos do BPA e da planta nos caprinos machos púberes; na segunda etapa propôs-se avaliar os efeitos tóxicos da exposição in utero de caprinos machos púberes a estas mesmas substâncias. Os resultados obtidos mostraram que os bodes púberes expostos ao BPA apresentaram redução significante dos níveis séricos de tiroxina, e da qualidade espermática. Também observou-se nestes mesmos animais degeneração vacuolar na rete testis. Já os caprinos machos púberes que receberam a I. carnea apresentaram aumento significante do numero de espermatozoides com alterações morfológicas e degeneração vacuolar testicular. Ainda, estes mesmos animais apresentaram diminuição estatisticamente significante dos níveis séricos dos hormônios tireoidianos (T3 e T4). O protocolo empregado para avaliação dos efeitos da exposição in utero a I. carnea ou ao BPA em machos púberes, não evidenciou nenhuma alteração hormonal e/ou reprodutiva. Conclui-se que o protocolo empregado para avaliação de possíveis efeitos DEs de xenobióticos, em ruminantes foi eficaz, no entanto, futuras metodologias deverão ser introduzidas neste protocolo, para detectar alterações mais sutis no sistema endócrino .

Recently, many studies clearly showed that xenobiotics may have deleterious effects on the endocrine system. These substances are termed endocrine disruptors (EDs), and have great toxicological significance when they become environmental contaminants. Many of EDs are identified as pesticides, which were widely used in agriculture and livestock worldwide. Currently, there are already well-established methodologies for assessing the potential effect of endocrine disruptor (ED) of different substances in rodents; however, a literature search shows clearly the lack of studies and protocols for assessing EDs in ruminant livestock, which are indubitably exposed to a large number of these substances. Thus, the objective of the present research was to start developing a protocol for evaluation of possible effects of EDs in ruminants. For this, it was studied bisphenol A (BPA), a classic ED and also I. carnea, an important toxic plant to ruminants in Brazil and other countries. The study was conducted in two stages, in the first, it was evaluated the effects of BPA and I. carnea in pubescent male goats, and in the second stage it was studied the effects in pubescent male goats from mothers exposed, during pregnancy, to BPA or the toxic plant. The pubescent male goats treated with BPA showed significant reduction in serum thyroxine levels and in the sperm quality. Those animals also presented vacuolar degeneration in the rete testis. Pubescent male goats exposed to I. carnea showed many alterations: significant increase in morphological changes in the sperm, decrease in serum levels of thyroid hormones (T3 and T4) and testicular vacuolar degeneration. The used protocol for evaluation of the effects of in utero exposure to BPA or I. carnea in pubescent male goats showed no hormonal or reproductive changes in male goats evaluated at the puberty. In conclusion, the protocol used in the present study showed to be worthy to evaluate EDs effects in ruminants; however future methodologies should be introduced to detect more subtle changes in the endocrine system .

Avaliação de desreguladores endócrinos em machos: estudo dos efeitos tóxicos da Ipomoea carnea em caprinos / Evaluation of endocrine disruptors in males: study of toxic effects of Ipomoea carnea in goats

Recentemente, pesquisas vêm claramente demonstrando que xenobióticos podem apresentar efeitos deletérios sobre o sistema endócrino e passam a ser de grande importância toxicológica à medida que se tornam contaminantes ambientais. Tais substâncias passaram a ser denominadas de desreguladores endócrinos (DEs). Entre os diferentes DEs identificados, muitos são praguicidas, amplamente utilizados no meio agropecuário em todo o mundo. Atualmente, já são bem estabelecidas as metodologias para avaliação do potencial efeito DE de diferentes substâncias em roedores; porém uma busca na literatura deixa clara a falta de estudos e de protocolos para avaliação de DEs em animais de produção ruminantes, os quais certamente estão expostos a um grande número de agentes tóxicos com estas características. Assim, foi objetivo desta pesquisa dar início ao desenvolvimento de um protocolo para avaliação de efeitos DEs de xenobióticos em ruminantes. Para tal, estudou-se o bisfenol A (BPA), o qual é, classicamente, um DE para roedores. Além disto, avaliou-se o potencial efeito DE da I. carnea, uma planta tóxica de grande importância para ruminantes no Brasil e em outros países. O estudo foi realizado em duas etapas, na primeira avaliou-se os efeitos do BPA e da planta nos caprinos machos púberes; na segunda etapa propôs-se avaliar os efeitos tóxicos da exposição in utero de caprinos machos púberes a estas mesmas substâncias. Os resultados obtidos mostraram que os bodes púberes expostos ao BPA apresentaram redução significante dos níveis séricos de tiroxina, e da qualidade espermática. Também observou-se nestes mesmos animais degeneração vacuolar na rete testis. Já os caprinos machos púberes que receberam a I. carnea apresentaram aumento significante do numero de espermatozoides com alterações morfológicas e degeneração vacuolar testicular. Ainda, estes mesmos animais apresentaram diminuição estatisticamente significante dos níveis séricos dos hormônios tireoidianos (T3 e T4). O protocolo empregado para avaliação dos efeitos da exposição in utero a I. carnea ou ao BPA em machos púberes, não evidenciou nenhuma alteração hormonal e/ou reprodutiva. Conclui-se que o protocolo empregado para avaliação de possíveis efeitos DEs de xenobióticos, em ruminantes foi eficaz, no entanto, futuras metodologias deverão ser introduzidas neste protocolo, para detectar alterações mais sutis no sistema endócrino (AU).

Recently, many studies clearly showed that xenobiotics may have deleterious effects on the endocrine system. These substances are termed endocrine disruptors (EDs), and have great toxicological significance when they become environmental contaminants. Many of EDs are identified as pesticides, which were widely used in agriculture and livestock worldwide. Currently, there are already well-established methodologies for assessing the potential effect of endocrine disruptor (ED) of different substances in rodents; however, a literature search shows clearly the lack of studies and protocols for assessing EDs in ruminant livestock, which are indubitably exposed to a large number of these substances. Thus, the objective of the present research was to start developing a protocol for evaluation of possible effects of EDs in ruminants. For this, it was studied bisphenol A (BPA), a classic ED and also I. carnea, an important toxic plant to ruminants in Brazil and other countries. The study was conducted in two stages, in the first, it was evaluated the effects of BPA and I. carnea in pubescent male goats, and in the second stage it was studied the effects in pubescent male goats from mothers exposed, during pregnancy, to BPA or the toxic plant. The pubescent male goats treated with BPA showed significant reduction in serum thyroxine levels and in the sperm quality. Those animals also presented vacuolar degeneration in the rete testis. Pubescent male goats exposed to I. carnea showed many alterations: significant increase in morphological changes in the sperm, decrease in serum levels of thyroid hormones (T3 and T4) and testicular vacuolar degeneration. The used protocol for evaluation of the effects of in utero exposure to BPA or I. carnea in pubescent male goats showed no hormonal or reproductive changes in male goats evaluated at the puberty. In conclusion, the protocol used in the present study showed to be worthy to evaluate EDs effects in ruminants; however future methodologies should be introduced to detect more subtle changes in the endocrine system (AU).