Prognostic impact of alterations in E-cadherin and P-cadherin expression in canine mammary tumors

A expressão de caderinas tem sido correlacionada ao desenvolvimento e agressividade de neoplasias epiteliais, entretanto, em tumores mamários caninos, seu prognóstico de importância é incerto. Devido a esse fato, a expressão das moléculas de adesão intracelular E e P-caderina e a correlação com a sobrevida global foram analisadas em 25 tumores de glândula mamária canina. A redução da expressão da caderina-E foi correlacionada com o tipo histológico, alto grau histológico e taxa de sobrevida global. A coloração de P-caderina foi maior em tumores malignos, sem relação com outras características clínico-patológicas de agressividade. Os resultados deste estudo sugerem uma relação entre menor expressão de E e P-caderina e pior prognóstico em tumores mamários caninos, incluindo menor sobrevida global.

Prognostic impact of alterations in E-cadherin and P-cadherin expression in canine mammary tumors

A expressão de caderinas tem sido correlacionada ao desenvolvimento e agressividade de neoplasias epiteliais, entretanto, em tumores mamários caninos, seu prognóstico de importância é incerto. Devido a esse fato, a expressão das moléculas de adesão intracelular E e P-caderina e a correlação com a sobrevida global foram analisadas em 25 tumores de glândula mamária canina. A redução da expressão da caderina-E foi correlacionada com o tipo histológico, alto grau histológico e taxa de sobrevida global. A coloração de P-caderina foi maior em tumores malignos, sem relação com outras características clínico-patológicas de agressividade. Os resultados deste estudo sugerem uma relação entre menor expressão de E e P-caderina e pior prognóstico em tumores mamários caninos, incluindo menor sobrevida global.(AU)

Sucralfate enemas reduce the oxidative tissue damage and preserves the contents of E-cadherin and Β-catenin in colonic mucosa without fecal stream

ABSTRACT Purpose: To evaluate the effects of sucralfate enemas in tissue contents of E-cadherin and ?-catenin in an experimental diversion colitis. Methods: Thirty-six male Wistar rats were submitted to a proximal colostomy and a distal mucous fistula. They were allocated into three groups: first group received daily saline enemas (2 mL/day) and the two other groups daily enemas with sucralfate at dosage of 1 or 2 g/kg/day, respectively. Six animals of each group were euthanized after two weeks and six animals after four weeks. The inflammation of the excluded mucosa was evaluated by histological analysis. The oxidative damage was quantified by measurement of malondialdehyde tissue levels. The expression of E-cadherin and ?-catenin was identified by immunohistochemistry, and its contents were quantified by computer-assisted image analysis. Results: Sucralfate enemas reduced inflammation in animals subjected to treatment with 2 g/kg/day by four weeks, and the levels of oxidative damage in mucosa without fecal stream irrespective of concentration and time of intervention. E-cadherin and ?-catenin content increased in segments without fecal stream in those animals subjected to treatment with sucralfate. Conclusions: Sucralfate reduces the inflammation and oxidative stress and increases the tissue content of E-cadherin and ?-catenin in colonic mucosa devoid to the fecal stream.

Imunomarcação da transição epitélio-mesenquima na neoplasia mamária primária de cadelas e sua metástase em linfonodo / Epithelial to mesenchymal transition immunostaining in canine primary mammary tumor and lymph node

Os carcinomas mamários em cães apresentam alta capacidade metastática o que confere menor sobrevida para os pacientes com este tipo de neoplasia. O fenótipo transição epitélio-mesênquima, caracterizado pela troca dos filamentos intermediários de citoqueratina por vimentina, além da perda da proteína de adesão entre células (E-caderina) está relacionado com a maior ocorrência de metástase. Diante disto, objetivou-se avaliar, por meio de imunomarcações, a expressão de vimentina, citoqueratina e E-caderina nos tumores mamários caninos e suas metástases em linfonodo, a fim de avaliar o comportamento celular frente a esta neoplasia. Foram analisados cinco casos de neoplasias mamárias primárias caninas e suas respectivas metástases em linfonodos. Foram comparadas as médias de imunomarcações do grupo de neoplasias primárias com as médias do grupo metástase. Não houve diferença estatística nas imunomarcações da citoqueratina (p=0,1407) e E-caderina (p= 0,312) entre os grupos, apesar da média de expressão da E-caderina ter sido maior no grupo de metástases. A expressão da vimentina foi maior nos sítios das metástases (p=0,0462). Conclui-se que a expressão de vimentina aumenta no foco da metástase em relação aos seus respectivos tumores primários mamários caninos, caracterizando alteração estrutural celular, conferindo um fenótipo transição epitélio-mesênquima. Além da E-caderina apresentar fortes indícios de aumento no foco da metástase caracterizando maior adesão.(AU)

Mammary carcinomas in dogs have a high metastatic capacity which gives a shorter survival rate for patients with this type of tumor. The epithelial-mesenchymal transition phenotype, characterized by the trade of intermediary filaments of cytokeratin by vimentin, also by the loss of the adhesion protein between cells (E-cadherin) is associated with metastasis. Due to this fact, it was aimed to evaluate, by immunostaining, the expression of vimentin, cytokeratin and E-cadherin in canine mammary tumors and the metastasis in lymph node, in order to assess the cell behavior when facing this cancer. Five cases of canine mammary tumors and metastasis in lymph node were evaluated. The averages of immunostainings of the group of primary neoplasms were compared with the averages of the lymph node group. The results showed that immunostaining for cytokeratins (p=0,1407) and E-caderina (p=0,312) were not significant between the groups, despite the expression mean of cadherin was higher in the metastase group. The expression of vimentin (p=0,04) was greater at sites of metastases. It is concluded that the expression of vimentin increases in the focus of the metastase in relation to their respective primary canine mammary tumors, characterizing cellular structural alteration, conferring a transient epithelial-mesenchymal phenotype. And cadherin present strong evidence of increased focus on metastasis characterizing increased adhesion.(AU)

Imunomarcação da transição epitélio-mesenquima na neoplasia mamária primária de cadelas e sua metástase em linfonodo / Epithelial to mesenchymal transition immunostaining in canine primary mammary tumor and lymph node

Os carcinomas mamários em cães apresentam alta capacidade metastática o que confere menor sobrevida para os pacientes com este tipo de neoplasia. O fenótipo transição epitélio-mesênquima, caracterizado pela troca dos filamentos intermediários de citoqueratina por vimentina, além da perda da proteína de adesão entre células (E-caderina) está relacionado com a maior ocorrência de metástase. Diante disto, objetivou-se avaliar, por meio de imunomarcações, a expressão de vimentina, citoqueratina e E-caderina nos tumores mamários caninos e suas metástases em linfonodo, a fim de avaliar o comportamento celular frente a esta neoplasia. Foram analisados cinco casos de neoplasias mamárias primárias caninas e suas respectivas metástases em linfonodos. Foram comparadas as médias de imunomarcações do grupo de neoplasias primárias com as médias do grupo metástase. Não houve diferença estatística nas imunomarcações da citoqueratina (p=0,1407) e E-caderina (p= 0,312) entre os grupos, apesar da média de expressão da E-caderina ter sido maior no grupo de metástases. A expressão da vimentina foi maior nos sítios das metástases (p=0,0462). Conclui-se que a expressão de vimentina aumenta no foco da metástase em relação aos seus respectivos tumores primários mamários caninos, caracterizando alteração estrutural celular, conferindo um fenótipo transição epitélio-mesênquima. Além da E-caderina apresentar fortes indícios de aumento no foco da metástase caracterizando maior adesão.(AU)

Mammary carcinomas in dogs have a high metastatic capacity which gives a shorter survival rate for patients with this type of tumor. The epithelial-mesenchymal transition phenotype, characterized by the trade of intermediary filaments of cytokeratin by vimentin, also by the loss of the adhesion protein between cells (E-cadherin) is associated with metastasis. Due to this fact, it was aimed to evaluate, by immunostaining, the expression of vimentin, cytokeratin and E-cadherin in canine mammary tumors and the metastasis in lymph node, in order to assess the cell behavior when facing this cancer. Five cases of canine mammary tumors and metastasis in lymph node were evaluated. The averages of immunostainings of the group of primary neoplasms were compared with the averages of the lymph node group. The results showed that immunostaining for cytokeratins (p=0,1407) and E-caderina (p=0,312) were not significant between the groups, despite the expression mean of cadherin was higher in the metastase group. The expression of vimentin (p=0,04) was greater at sites of metastases. It is concluded that the expression of vimentin increases in the focus of the metastase in relation to their respective primary canine mammary tumors, characterizing cellular structural alteration, conferring a transient epithelial-mesenchymal phenotype. And cadherin present strong evidence of increased focus on metastasis characterizing increased adhesion.(AU)

Histological evaluation and E-cadherin and ß-catenin expression in kidney of dogs submitted to renal ischemia and reperfusion after chlorpromazine administration / Avaliação histológica e imunomarcação de E-caderina e ß-catenina em rins de cães submetidos a isquemia e referfusão renal após administração de clorpromazina

Renal ischemia can be associated with some urological procedures, such as renovascular surgery or kidney transplantation, that are often followed by acute renal failure. The aim of this study was to verify the E-cadherin and ß-catenin localization in canine kidney in different times of renal ischemia and reperfusion after chlorpromazine application. Twelve dogs were randomly distributed equally into two groups. GroupA with ischemia and reperfusion without chlorpromazine and groupB with ischemia and reperfusion treated by chlorpromazine. GroupB received intravenous chlorpromazine, 15 min before the artery obstruction, which lasted 1 hour. After this period, the clamps in the renal arteries were released and the organ remained in reperfusion for 2 hours. In each group, anti-E-cadherin and anti-ß-catenin antibodies were made in six tissue samples from renal parenchyma. E-cadherin and ß-catenin are differentially expressed in segments from cortex and medulla in dog's kidneys and the use of chlorpromazine did not alter the expression of both proteins. Occlusion of the left renal artery in dogs causes morphological alterations mainly in proximal convoluted tubules, beginning 30min after the start of ischemia and being aggravated after two hours of reperfusion. These results reveal that chlorpromazine did not change kidneys' histological aspect nor E-cadherin and ß-catenin expression.(AU)

A lesão renal isquêmica pode estar associada a procedimentos urológicos, tais como cirurgia renovascular, cirurgia renal extracorpórea ou transplante renal. Essa injúria, muitas vezes, é seguida de insuficiência renal aguda. O objetivo deste trabalho foi observar a localização da E-caderina e da ß-catenina em rim de cães, além de relacionar a expressão dessas proteínas das junções de aderência em diferentes tempos de isquemia e reperfusão com ou sem a aplicação de clorpromazina. Para tanto, foram utilizados 12 cães, distribuídos aleatoriamente em dois grupos de seis indivíduos: grupo A, com isquemia e reperfusão sem tratamento por clorpromazina, e o grupo B, com isquemia e reperfusão tratado por clorpromazina. No procedimento cirúrgico, foi realizada uma incisão paracostal esquerda para identificação e isolamento do rim esquerdo e da artéria renal esquerda. Após o isolamento da artéria, os animais de todos os grupos tiveram o vaso ocluído. Os animais do grupo B receberam clorpromazina via endovenosa, na dose de 5mg/kg, 15min antes da clampagem do vaso, que durou uma hora. Após este período, as artérias renais foram desobstruídas e os órgãos permaneceram em reperfusão por duas horas. Em cada grupo, foram extraídas seis amostras de parênquima renal, com utilização de agulha tru-cut, para marcação com anticorpos anti-E-caderina e anti-ß-catenina por meio de imunoistoquímica. E-caderina e ß-catenina são diferencialmente expressas em segmentos do córtex e da medula em rim de cães e o uso da clorpromazina não alterou a expressão das duas proteínas.(AU)

Histological evaluation and E-cadherin and ß-catenin expression in kidney of dogs submitted to renal ischemia and reperfusion after chlorpromazine administration / Avaliação histológica e imunomarcação de E-caderina e ß-catenina em rins de cães submetidos a isquemia e referfusão renal após administração de clorpromazina

Renal ischemia can be associated with some urological procedures, such as renovascular surgery or kidney transplantation, that are often followed by acute renal failure. The aim of this study was to verify the E-cadherin and ß-catenin localization in canine kidney in different times of renal ischemia and reperfusion after chlorpromazine application. Twelve dogs were randomly distributed equally into two groups. GroupA with ischemia and reperfusion without chlorpromazine and groupB with ischemia and reperfusion treated by chlorpromazine. GroupB received intravenous chlorpromazine, 15 min before the artery obstruction, which lasted 1 hour. After this period, the clamps in the renal arteries were released and the organ remained in reperfusion for 2 hours. In each group, anti-E-cadherin and anti-ß-catenin antibodies were made in six tissue samples from renal parenchyma. E-cadherin and ß-catenin are differentially expressed in segments from cortex and medulla in dog's kidneys and the use of chlorpromazine did not alter the expression of both proteins. Occlusion of the left renal artery in dogs causes morphological alterations mainly in proximal convoluted tubules, beginning 30min after the start of ischemia and being aggravated after two hours of reperfusion. These results reveal that chlorpromazine did not change kidneys' histological aspect nor E-cadherin and ß-catenin expression.(AU)

A lesão renal isquêmica pode estar associada a procedimentos urológicos, tais como cirurgia renovascular, cirurgia renal extracorpórea ou transplante renal. Essa injúria, muitas vezes, é seguida de insuficiência renal aguda. O objetivo deste trabalho foi observar a localização da E-caderina e da ß-catenina em rim de cães, além de relacionar a expressão dessas proteínas das junções de aderência em diferentes tempos de isquemia e reperfusão com ou sem a aplicação de clorpromazina. Para tanto, foram utilizados 12 cães, distribuídos aleatoriamente em dois grupos de seis indivíduos: grupo A, com isquemia e reperfusão sem tratamento por clorpromazina, e o grupo B, com isquemia e reperfusão tratado por clorpromazina. No procedimento cirúrgico, foi realizada uma incisão paracostal esquerda para identificação e isolamento do rim esquerdo e da artéria renal esquerda. Após o isolamento da artéria, os animais de todos os grupos tiveram o vaso ocluído. Os animais do grupo B receberam clorpromazina via endovenosa, na dose de 5mg/kg, 15min antes da clampagem do vaso, que durou uma hora. Após este período, as artérias renais foram desobstruídas e os órgãos permaneceram em reperfusão por duas horas. Em cada grupo, foram extraídas seis amostras de parênquima renal, com utilização de agulha tru-cut, para marcação com anticorpos anti-E-caderina e anti-ß-catenina por meio de imunoistoquímica. E-caderina e ß-catenina são diferencialmente expressas em segmentos do córtex e da medula em rim de cães e o uso da clorpromazina não alterou a expressão das duas proteínas.(AU)

CD45+, CD68+ and E-cadherin+ expressions in skin dogs naturally infected by Leishmania infantum

Background: In canine leishmaniasis (CanL), infection occurs through phlebotomine vectors that inoculate the protozoan Leishmania infantum into the skin that infected macrophages and activated dendritic cells (CD). Dogs with CanL present variable clinical manifestations, being common the presence of cutaneous lesions. The aim of this study was to evaluate the expression of CD45+ , CD68+ and E-cadherin+ associating the skin sentinels cells and to compare the clinical-dermatological manifestations in the skin of dogs naturally infected by L. infantum. Materials, Methods & Results: Dogs infected (n = 22) by L. infantum were divided into asymptomatic group (AD, n = 9), and symptomatic group (SD, n = 13), according criteria based on the presence or absence of skin changes. Dogs non-infected (CD, n = 5) were included as control group. Samples of skin biopsies collected from scapular region were processed by routine histology and labeled by immunohistochemistry with monoclonal antibodies against CD45+ , CD68+ and E-cadherin+ , and were described as none, mild, moderate and intense. SD presented keratoconjunctivitis, onychogryphose, lichenification, depigmentation, alopecia, hypotrichosis, erythematous dermatitis, exfoliative dermatitis, ulcerative dermatitis and crusted dermatitis, and the frequency these alterations was expressed as percentage. The results of hematological and [...](AU)

CD45+, CD68+ and E-cadherin+ expressions in skin dogs naturally infected by Leishmania infantum

Background: In canine leishmaniasis (CanL), infection occurs through phlebotomine vectors that inoculate the protozoan Leishmania infantum into the skin that infected macrophages and activated dendritic cells (CD). Dogs with CanL present variable clinical manifestations, being common the presence of cutaneous lesions. The aim of this study was to evaluate the expression of CD45+ , CD68+ and E-cadherin+ associating the skin sentinels cells and to compare the clinical-dermatological manifestations in the skin of dogs naturally infected by L. infantum. Materials, Methods & Results: Dogs infected (n = 22) by L. infantum were divided into asymptomatic group (AD, n = 9), and symptomatic group (SD, n = 13), according criteria based on the presence or absence of skin changes. Dogs non-infected (CD, n = 5) were included as control group. Samples of skin biopsies collected from scapular region were processed by routine histology and labeled by immunohistochemistry with monoclonal antibodies against CD45+ , CD68+ and E-cadherin+ , and were described as none, mild, moderate and intense. SD presented keratoconjunctivitis, onychogryphose, lichenification, depigmentation, alopecia, hypotrichosis, erythematous dermatitis, exfoliative dermatitis, ulcerative dermatitis and crusted dermatitis, and the frequency these alterations was expressed as percentage. The results of hematological and [...]

CORRELAÇÃO CLÍNICO PATOLÓGICA ENTRE AS IMUNOMARCAÇÕES DE E-CADERINA E RECEPTORES DE ESTRÓGENO NOS TUMORES DE MAMA EM CADELAS

O objetivo do trabalho é estabelecer uma correlação de variáveis clínicas com as neoplasias mamárias encontradas e sua correlação sobre marcadores tumorais, podendo assim, demandar um tratamento melhor estabelecido. A relação entre o receptor de estrogênio (ER) e a expressão epitelial da caderina (E-), detectada por características clínico-patológicas e métodos imunohistoquímicos, foi avaliada em 111 tumores mamários caninos. A maioria (n = 95; 85,58%) dos tumores eram histologicamente malignos e subclassificados como grau I (n = 42), grau II (n = 31) ou grau III (n = 22). Houve uma associação estatística significativa entre malignidade grau III e imunomarcação negativa para estrogênio (p = 0,01). Nenhuma associação significativa pôde ser estabelecida entre a classificação histológica (neoplasia, benigna ou maligna) e imunomarcação para ER e caderina-E. Vinte e um (22,10 %) de 95 tumores mamários malignos metastatizaram. O carcinoma mamário simples (n = 9) foi significativamente associado à expressão ER negativa (p = 0,03), sugerindo um prognóstico ruim. Esses achados enfatizam a necessidade de melhorar os fatores prognósticos nos tumores mamários caninos

The relationship between the oestrogen receptor (ER) and epithelial (E-) cadherin expression, as detected by clinicopathological features and immunohistochemical methods, was evaluated in 111 canine mammary tumours. The majority (n = 95; 85.58%) of tumours were histologically malignant and subclassified as grade I (n = 42), grade II (n=31), or grade III (n=2022). There was a significant statistical association between grade III malignancy and negativeimmunostaining for oestrogen (p= 0.01). No significant associations could be established between histological classification (neoplasm, benign or malignant) and immunostaining for 23 ER and E-cadherin. Twenty-one (22.10%) of 95 malignant mammary tumours had metastasized. Twenty-four simple mammary carcinoma (n = 9) was significantly associated with negative ER expression (p = 0.03), suggesting a poor prognosis. These findings emphasize the necessity of improving prognostic factors in canine mammary tumours.

ESTUDO ULTRASSONOGRÁFICO DA PERFUSÃO RENAL EM CADELAS COM CARCINOMA MAMÁRIO TRATADAS COM CARPROFENO POR LONGOS PERÍODOS

A córnea atua como principal elemento refrativo do olho, para tal tem que manter-se transparente. O endotélio corneal é um peça chave para essa manutenção, possuindo mecanismos como a bomba de Na+ e K+ que ajudam a garantir a desturgescência corneal. Descompensações endoteliais constituem uma importante indicação de transplante da córnea, uma vez que as células endoteliais corneais apresentam limitada capacidade proliferativa. Entretanto, transplantes são procedimentos cirúrgicos complicados e de elevado custo. Alternativas e coadjuvantes medicamentosos vêm sendo estudadas. O fucoidam é uma substância que, dentre outras propriedades, promove migração e proliferação celular, portanto objetivou-se, com a presente pesquisa, avaliar seus efeitos sobre a morfologia, a ploidia e o metabolismo de células endoteliais da córnea de coelhos, após criolesão experimental. Para tal, foram realizadas avaliações quanto à morfologia e viabilidade celular empregando-se dupla marcação com corantes vitais (alizarina vermelha e azul de tripan) e ultraestrutural pela microscopia eletrônica de transmissão e de varredura. Outrossim, avaliou-se a morfometria in vivo e in vitro de seguintes parâmetros: número de células, densidade, hexagonalidade e coeficiente de variação celulares. Estudou- se o metabolismo dessas células empregando-se a imunofluorescência com observação em confocal dos anticorpos Ki-67, Na+K+/ATPase, n-Caderina e Zo-1, conjugados com Alexafluor-488. Visando-se a conseguirem conhecimentos adicionais relativos à atividade nuclear durante o processo de cicatrização do endotélio corneal na presença de fucoidam foram analisados, a partir da reação de feulgen, perímetro e área nucleares, além da supraorganização da cromatina. A criolesão ensejou piora de todos parâmetros morfométricos, com diminuição das células, densidade celular, do percentagem de células padrão com 6 lados e aumento no coeficiente de variação, a retomada aos valores normais com o decorrer do tempo foi melhor em olhos tratados com fucoidam. Nas córneas que não receberam fucoidam observou-se células desvitalizadas em todo decorer do tempo de avaliação. Houve diminuição da expressão das proteínas de junção celular (n-Caderina e Zo-1) logo após a lesão e aumento progressivo no decorrer do tempo, em contrapartida o contrário ocorreu com Ki-67, revelando aumento na proliferação celular após lesão e baixa das expressão das demais proteínas, com notável estimulação na presença do fucoidam. As características do comportamento nuclear, como descompactação da cromatina na presença do fucoidam puderam ratificar essa proliferação. O fucoidam atuou na modulação à reparação cicatricial, revelando cicatrizes menos opacas, estimulando a proliferação celular e mediando a expressão das proteínas de ligação e atuando na proteção contra morte celular.

The cornea as the main refractive element of the eye, which has to remain transparent. The corneal endothelium is a key piece for this maintenance, having mechanisms such as the Na + and K + pump that help to ensure corneal dysurgescence. Endothelial decompensations are an important indication for corneal transplantation, since the corneal endothelial cells have limited proliferative capacity. However, transplants are complicated and expensive surgical procedures. Alternatives and drug coadjuvants have been studied. Fucoidam is a substance that, among other properties, promotes cell migration and proliferation, therefore, the objective of this research was to evaluate its effects on the morphology, ploidy and metabolism of rabbit cornea endothelial cells after experimental cryoinjury. For this, evaluations were made for morphology and cell viability using double labeling with vital dye (alizarin red and tripan blue) and ultrastructural analysis by transmission and scanning electron microscopy. Morphometry (in vivo and in vitro) of the following parameters were also evaluated: cell number, cell density, hexagonality and coefficient of variation. The metabolism of these cells was studied using immunofluorescence with confocal observation of the Ki-67, Na + K + / ATPase, n- Caderin and Zo-1 antibodies, conjugated to Alexafluor-488. In order to obtain additional knowledge regarding the nuclear activity during the healing process of the corneal endothelium in the presence of fucoidam were analyzed, from the feulgen reaction, nuclear perimeter and area, in addition to the chromatin supraorganization. Cryoinjury resulted in worsening of all morphometric parameters, with cell decrease, cell density, the percentage of standard cells with 6 sides and increase in coefficient of variation, the recovery to normal values with time was better in eyes treated with fucoidam. In the corneas that did not receive fucoidam devitalised cells were observed throughout the evaluation time. There was a decrease in the expression of the cellular junction proteins (n-Caderin and Zo-1) shortly after injury and progressive increase over time, whereas the opposite occurred with Ki-67, revealing increased cell proliferation after injury and low expression of the other proteins, with remarkable stimulation in the presence of fucoidam. The characteristics of nuclear behavior, such as the decomposition of chromatin in the presence of fucoidam, could confirm this proliferation. Fucoidam has been involved in modulation of scar repair, revealing less opaque scars, stimulating cell proliferation and mediating the expression of binding proteins, and acting to protect against cell death.

Avaliação da concordância interobservadores de critérios morfológicos no diagnóstico de tumores de glândula hepatoide em cães e determinação do valor prognóstico de aspectos clínico-patológicos e marcadores imuno-histoquímicos

Diferentes estudos têm demonstrado uma variação importante na frequência diagnóstica dos tumores de glândula hepatoide em cães, possivelmente devido à ausência de critérios morfológicos claros e bem estabelecidos em seu diagnóstico. Não estão bem definidos os critérios clínico-patológicos associados ao comportamento biológico destas neoplasias. Alguns estudos levantam a hipótese de participação do mecanismo de transição epitélio-mesenquimal devido à frequente imunoexpressão de vimentina em tumores de glândula hepatoide, porém esta hipótese permanece sem comprovação. O objetivo deste trabalho foi avaliar a concordância diagnóstica entre patologistas, assim como investigar o mecanismo de transição epitélio-mesenquimal e a taxa de proliferação celular por marcadores imuno-histoquímicos e, por fim, correlacioná-los com sobrevida para investigação de possíveis valores prognósticos. Cinco patologistas avaliaram 57 tumores de glândula hepatoide quanto ao diagnóstico e quanto a diversos critérios morfológicos e, com base nestes critérios, foram desenvolvidos algoritmos diagnósticos por meio de árvores de regressão por partição recursiva. Adicionalmente, foram investigadas as imunoexpressões de vimentina, pancitoqueratina, E-caderina e Ki-67 em 78 lesões, comparando-as entre glândulas normais, tumores benignos, tumores malignos e tumores malignos vasculoinvasivos/metastáticos. A sobrevida livre de recorrência local, recorrência da doença, sobrevida global e sobrevida doença-específica foram investigadas em 33 pacientes. Houve concordância média razoável em análise interobservador quanto ao diagnóstico (=0,54), com potencial de melhora para concordância média boa após aplicação de dois novos algoritmos diagnósticos (=0,64 e 0,65, respectivamente). Em relação aos marcadores imuno-histoquímicos, foram observadas maior expressão de vimentina e menor expressão de E-caderina em tumores malignos em comparação aos tumores benignos. Adicionalmente, observou-se uma forte correlação negativa entre a expressão de vimentina em células de reserva e expressão de pancitoqueratina em células diferenciadas (=-0,65, p<0,0001), além de maiores taxas de proliferação celular (Ki-67) e contagem de mitoses em tumores malignos em comparação com tumores benignos. Em análise univariada de sobrevida doença-específica, os fatores prognósticos foram a presença de invasão vascular ou metástase no momento do diagnóstico, o escore de E-caderina em células de reserva e diferenciadas, e o tamanho tumoral. Em relação ao tempo de sobrevida livre de doença, os fatores prognósticos foram a presença de invasão vascular ou metástase no momento do diagnóstico, escore de E-caderina em células de reserva e diferenciadas, perda de polaridade celular, grau de infiltração, histórico de doença recorrente, escore de morfologia fusiforme e proporção de células de reserva. Os resultados do presente estudo confirmaram que existe um grau de discordância diagnóstica entre patologistas que poderia explicar parte da variação observada na prevalência de carcinomas de glândula hepatoide em literatura, e de que existe potencial para melhora da concordância diagnóstica por meio dos algoritmos propostos. Ainda, os achados reforçaram a hipótese de que o mecanismo de transição epitélio-mesenquimal participa na progressão tumoral em neoplasias hepatoides em cães, explicando a frequente imunoexpressão de vimentina observada nestes tumores. Por fim, foi demonstrado que a presença de invasão vascular ou metástase no momento do diagnóstico tem impacto significativo na sobrevida dos animais, assim como há outras características clínicas, morfológicas e imuno-histoquímicas com valor prognóstico para recorrência da doença e sobrevida.

An important variation in the prevalence of canine hepatoid gland carcinoma is currently reported, likely due to lack of consistent and well-defined criteria. Additionally, clinical and pathological features predictive of biological behavior are not well defined. The epithelial-mesenchymal transition mechanism has been proposed as a possible explanation for the frequent expression of vimentin by neoplastic hepatoid gland cells, but this hypothesis remains elusive. The present study aimed to define the level of diagnostic agreement between different pathologists, investigate immunohistochemical and morphological features indicative of epithelial-mesenchymal transition, and to evaluate candidate features that might be predictive of biological behavior. Five pathologists diagnosed and classified morphological features for 57 hepatoid gland tumors, and diagnostic algorithms were built with recursive partitioning analysis. Additionally, vimentin, pancytokeratin, E-cadherin and ki-67 immunohistochemical expression were evaluated for 78 lesions, and expression levels were compared between normal glands, benign tumors, malignant tumors, and vasculo-invasive/metastatic tumors. Local recurrence free survival, disease free survival, overall survival and disease-specific survival were evaluated for 33 cases. There was a fair mean interobserver agreement for diagnosis (=0,54), that could potentially be improved to a good mean agreement with the use of two novel diagnostic algorithms (=0,64 and 0,65). Additionally, higher levels of vimentin expression and lower levels of E-cadherin expression were noted in malignant tumors, as compared to benign tumors, and there was a strong negative correlation between vimentin expression in reserve cells and pancytokeratin expression in differentiated cells (=-0,65, p<0,0001). Proliferation index (ki67) and mitotic count were higher for malignant tumors when compared to benign tumors. In univariate survival analysis, vascular invasion or metastasis at the time of diagnosis, E-cadherin score in differentiated and reserve cells and tumor size were predictive of disease-specific survival. Vascular invasion or metastasis at the time of diagnosis, E-cadherin score in differentiated and reserve cells, loss of cell polarity, grade of invasiveness, history of recurrent disease, spindle cell morphology score and proportion of reserve cells were predictive of disease-free survival. The results of this study demonstrate a level of diagnostic disagreement between pathologists that might explain, at least partially, the variation of prevalence of hepatoid gland carcinoma in current literature, and that this diagnostic agreement could potentially be improved. Also, these findings support the role of epithelial-mesenchymal transition in the progression of canine hepatoid gland tumors, and this mechanism could explain the frequent expression of vimentin in this particular neoplasia. Finally, it was shown that vascular invasion or metastasis at the time of diagnosis has a significant impact on survival, and that additional clinical, morphological and immunohistochemical features might also have predictive value for disease recurrence and survival.

EFEITOS DA FUMONISINA B1, DESOXINIVALENOL E ÁCIDO FÍTICO SOBRE EXPLANTES JEJUNAIS DE SUÍNOS: avaliação morfológica, imuno-histoquímica, expressão de citocinas e estresse oxidativo

O objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos tóxicos das micotoxinas desoxinivalenol (DON) e fumonisina B1 (FB1) sobre o intestino e investigar a ação moduladora do ácido fítico (IP6) por meio de um modelo ex vivo, analisando a morfologia, proliferação celular, apoptose, expressão de E-caderina e ciclooxigenase-2 (cox-2), estresse oxidativo e expressão de citocinas em jejuno de suínos. Para tal, no primeiro experimento, foram utilizados cinco suínos com 24 dias de idade, os quais foram eutanasiados, o jejuno foi excisado, os explantes colhidos (40 explantes/animal) com um punch de 8 mm de diâmetro e submetidos a oito tratamentos (seis explantes/tratamento) : controle (somente meio de cultura), IP6 5mM, FB1 70µM, DON 10 µM, DON 10 µM+ FB1 70 µM, DON 10µM + IP6 5 mM, FB1 70 µM+IP6 5 mM e DON 10 µM+ FB1 70 µM+IP6 5 mM, incubados durante quatro horas sob agitação constante em estufa a 37°C. Após esse período, três explantes de cada tratamento foram fixados em solução de formalina tamponada a 10% e processados para realização do exame histológico e imuno-histoquímico para os anticorpos anti-ki-67, anti-caspase-3, anti-E-caderina e anti-cicloxigenase-2. Para a análise do estresse oxidativo, três explantes foram congelados em nitrogênio líquido, armazenados a -80C° e posteriormente processados para a avaliação dos níveis de glutationa reduzida (GSH), substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e capacidade da atividade antioxidante por meio dos testes de 2, 2azinobis-3-etilbenzotiazolina-6-ácido sulfônico (ABTS) e poder de redução do ferro (FRAP). Alterações morfológicas, diminuição da expressão de E-caderina, aumento da proliferação celular, apoptose, expressão de cox-2 e ocorrência de estresse oxidativo foram mais evidentes nos explantes expostos aos tratamentos com DON. A presença de IP6 reduziu significativamente as alterações morfológicas, proliferação celular, apoptose, expressão de cox-2 e estresse oxidativo, e aumentou a expressão de E-caderina nos explantes jejunais expostos às micotoxinas. Para avaliação da expressão de citocinas e peptídeos antimicrobianos, um segundo experimento com metodologia similar ao primeiro foi realizado. Explantes jejunais foram colhidos (21 explantes/animal) e submetidos aos seguintes tratamentos (três explantes/tratamento): controle (somente meio de cultura), FB1 70µM, FB1 70 µM+IP6 2,5 mM, FB1 70 µM+IP6 5 mM, DON 10 µM, DON 10µM + IP6 2,5 mM e DON 10µM + IP6 5 mM. Após a incubação, os explantes foram congelados em nitrogênio liquido e armazenados a - 80°C para avaliação da expressão das citocinas pró-inflamatórias (IL-1, IL-6, IL-8, IL-10, IFN-, TNF-) e anti-inflamatórias (IL-10) e -defensinas 1 (pBD-1) e 2 (pBD-2) por meio da reação em cadeia pela polimerase em tempo real. A exposição às micotoxinas induziu a alterações na expressão das citocinas e -defensinas. A presença de IP6, principalmente na dose de 5mM modulou os efeitos das micotoxinas, tornando a expressão da resposta inflamatória e antimicrobiana similar aos explantes controle. Os resultados do presente estudo evidenciaram os efeitos tóxicos da FB1 e DON sobre o jejuno de suínos, assim como o efeito protetor do IP6 em modular as alterações morfológicas, imunológicas e do estresse oxidativo induzido por tais micotoxinas.

The aim of the present study was to evaluate the toxic effects of mycotoxins fumonisin B1 (FB1) and deoxynivalenol (DON) on the intestine, and investigate the modulatory action of phytic acid (IP6) through of ex vivo model and assessment of morphology, cell proliferation, apoptosis, E-cadherin and cyclooxygenase-2 (cox-2) expression, oxidative stress and cytokines and antimicrobial peptides in jejune of swine. In the first experiment, five pigs 24-days-old were euthanized and the jejunal explants were collected (40 explants/animal) using a punch of 8 mm in diameter and submitted to eight treatments (six explants/treatment): control (culture medium), IP6 5mM, FB1 70µM, DON 10 µM, DON 10 µM+ FB1 70 µM, DON 10µM + IP6 5 mM, FB1 70 µM+IP6 5 mM and DON 10 µM+ FB1 70 µM+IP6 5 mM, and incubated at 37°C under orbital shaking. After the incubation period, three explants per treatment were fixed in 10% neutral buffered formalin and processed for the histological examination and immunohisotchemistry assay using antibodies against ki-67, cleaved caspase-3, e-cadherin and cox-2. Three explants were immediately frozen in liquid nitrogen and posteriorly stored at -80°C to the assessment of reduced glutathione (GSH), thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), 2,2'-azino-bis-3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid (ABTS) and ferric reducing antioxidant power (FRAP) levels. Morphological changes, decrease of E-cadherin expression and increase of cell proliferation, apoptosis, cox-2 expression and oxidative stress were more evident in the explants exposed to DON treatments. The presence of IP6 significantly decreased the morphological changes, cell proliferation, apoptosis, cox-2 expression and oxidative stress, and increased the E-cadherin expression in the jejunal explants exposed to mycotoxins in all treatments. A second experiment with similar methodology was performed to evaluate the cytokines and antimicrobial peptides expression. The jejunal explants without serosa were collected (21 explants/animal) and submitted to treatments (three explants/treatment): control (medium culture), FB1 70µM, FB1 70 µM+IP6 2.5 mM, FB1 70 µM+IP6 5 mM, DON 10 µM, DON 10µM + IP6 2.5 mM and DON 10µM + IP6 5 mM. After incubation, the explants were frozen in liquid nitrogen and posteriorly stored at -80°C to the assessment of pro- (IL-1, IL-6, IL-8, IL-10, IFN-, TNF-) and anti-inflammatory (IL-10), and -defensins 1 (pBD-1) and 2 (pBD-2) by the reverse transcription polymerase chain reaction quantitative real time assay. The exposition to mycotoxins induced to changes in the cytokines and -defensins expression. The presence of IP6, mainly in the 5 mM concentration, modulated the mycotoxins effects, becoming the expression of inflammatory and antimicrobial response similar to the control explants. The results of present study evidenced the toxic effects of FB1 and DON on the swine jejune, and the protective effect of IP6 in modulate the morphological and immunological changes, and the oxidative stress induced by these mycotoxins.

Histomorphological and immunohistochemical characterization of 172 cutaneous round cell tumours in dogs / Caracterização histomorfológica e imuno-histoquímica de 172 neoplasias cutâneas de células redondas em cães

This paper describes the use of a panel of antibodies (CD117, CD3, CD79a, CD45, cytokeratin, vimentin and E-cadherin) on formalin-fixed, paraffin-embedded sections of canine cutaneous round cell tumours. Neoplastic tumours were diagnosed by histology and histochemical stains and included 107 mast cell tumours, 31 cutaneous histiocytomas, two localized histiocytic sarcomas, 21 cutaneous lymphomas, three plasma cell tumours, one transmissible venereal tumour and seven unclassified round cell tumours. The histologic diagnosis was modified in 39.5% of the total 172 neoplasms. The staining for CD45 and Ecadherin were variable, and therefore, the final diagnoses of cutaneous histiocytoma and localized histiocytic sarcoma were made based on histology in association with negative results for CD3, CD79a, CD117 and cytokeratin. The cellular origin of unclassified round cell tumours was defined in all cases. Cutaneous B-cell lymphoma and plasma cell tumours were CD79a-positive and could be distinguished from each other by the morphological characteristics. Mast cell tumours and T cell lymphoma were CD117 and CD3 positive, respectively. The positive staining for vimentin and the negative staining for CD3, CD79a, CD117 and cytokeratin favoured the diagnosis of transmissible venereal tumours. Thus, the final diagnosis of cutaneous round cell tumours should be based on the interpretation of immunohistochemical results together with the cellular morphology observed by histology. Therefore, more studies to optimize the specific markers in formalin-fixed, paraffinembedded tissues (especially for histiocytes) are required for definitive diagnosis of round cell tumours in dogs.(AU)

Este trabalho descreve o uso de um painel de anticorpos (CD117, CD3, CD79a, CD45, citoqueratina, vimentina e e-caderina em tecidos formalizados e parafinizados para o diagnóstico de neoplasias de células redondas em cães. Os tumores foram diagnosticados usando-se a histopatologia e a marcação imuno-histoquímica. Foram incluídos 107 mastocitomas, 31 histiocitomas cutâneos, 2 sarcomas histiocíticos localizados, 21 linfomas cutâneos, 3 plasmocitomas, 1 tumor venéreo transmissível e 7 tumores de células redondas não classificados. O diagnóstico histológico foi modificado em 39,5% do total de 172 neoplasias. A marcação do anticorpo CD45 e E-caderina foi variável e, nesse sentido, o diagnóstico final de histiocitoma cutâneo e sarcoma histiocítico localizado foi baseado na histologia em associação com os resultados negativos para CD3, CD79a, CD117 e citoqueratina. A origem celular dos tumores de células redondas não classificados foi definida em todos os casos. Linfoma cutâneo de célula B e plasmocitoma foram positivos para CD79a e foram distinguidos entre si pelas características morfológicas. Marcação positiva para vimentina e negativa para CD3, CD79a, CD117 e citoqueratina favoreceram o diagnóstico dos tumores venereos transmissíveis. Assim, o diagnóstico final dos tumores de células redondas foram baseados na interpretação dos resultados da imuno-histoquímica em conjunto com a avaliação das características morfológicas observadas na histologia. Finalmente, mais estudos em relação à padronização de marcadores específicos para tecidos parafinizados (especialmente para histiócitos) são necessários para o diagnóstico definitivo das neoplasias de células redondas em cães.(AU)

Expressão da E-caderina em carcinoma de células escamosas e no tumor de células basais de cães

The cadherins are a group of cellular adhesion molecules that are expressed on the surface of all epidermic layer. The E-cadherin is the main cadherin involved in epithelial cellular adhesion; the decrease in its expression is related to the progression of some types of cancer, to its metastatic characteristics, and to the prognosis, specially carcinomas. The squamous cell carcinoma and the basal cells tumors are a malignant epithelial neoplasm which affects dogs. The goal of this study was to evaluate E-cadherin's expression in canine tissues that were classified as squamous cell carcinoma or basal cell tumor, and to find a correlation with the biological behavior of the tumors. The squamous cell carcinomas showed significantly decreased expression of the molecule compared to the basal cell tumors when evaluated by Fisher's test (P=0.0039). Also, the more differentiated neoplastic cells had a higher intensity of color than the less differentiated ones. In conclusion, it is suggested that the reduced expression of E-cadherin in skin tumors may indicate greater power infiltrative and consequently poor prognosis in dogs.

As caderinas compreendem uma classe de moléculas de adesão celular expressa na superfície de todas as camadas epidérmicas. A E-caderina é a principal caderina envolvida na adesão celular epitelial. A redução de sua expressão está envolvida na progressão de alguns tipos de câncer, no potencial metastático e ainda na definição do prognóstico, principalmente nos carcinomas. O carcinoma de células escamosas e o tumor de células basais são neoplasias cutâneas malignas que afetam os cães. O objetivo deste estudo foi avaliar a expressão da E-caderina no carcinoma de células escamosas (n=20) e no tumor de células basais (n=15), buscando-se relacionar sua expressão ao comportamento biológico desses tumores. Os carcinomas de células escamosas apresentaram significativa redução da expressão da molécula comparado aos tumores de células basais, quando avaliado pelo teste de Fisher (P=0,0039). Também foi observado que células neoplásicas mais diferenciadas apresentaram coloração mais intensa que as menos diferenciadas. Em conclusão, sugere-se que a expressão reduzida da E-caderina em tumores cutâneos pode indicar maior poder infiltrativo e consequentemente mau prognóstico na espécie canina.

Expressão da E-caderina em carcinoma de células escamosas e no tumor de células basais de cães

The cadherins are a group of cellular adhesion molecules that are expressed on the surface of all epidermic layer. The E-cadherin is the main cadherin involved in epithelial cellular adhesion; the decrease in its expression is related to the progression of some types of cancer, to its metastatic characteristics, and to the prognosis, specially carcinomas. The squamous cell carcinoma and the basal cells tumors are a malignant epithelial neoplasm which affects dogs. The goal of this study was to evaluate E-cadherin's expression in canine tissues that were classified as squamous cell carcinoma or basal cell tumor, and to find a correlation with the biological behavior of the tumors. The squamous cell carcinomas showed significantly decreased expression of the molecule compared to the basal cell tumors when evaluated by Fisher's test (P=0.0039). Also, the more differentiated neoplastic cells had a higher intensity of color than the less differentiated ones. In conclusion, it is suggested that the reduced expression of E-cadherin in skin tumors may indicate greater power infiltrative and consequently poor prognosis in dogs.

As caderinas compreendem uma classe de moléculas de adesão celular expressa na superfície de todas as camadas epidérmicas. A E-caderina é a principal caderina envolvida na adesão celular epitelial. A redução de sua expressão está envolvida na progressão de alguns tipos de câncer, no potencial metastático e ainda na definição do prognóstico, principalmente nos carcinomas. O carcinoma de células escamosas e o tumor de células basais são neoplasias cutâneas malignas que afetam os cães. O objetivo deste estudo foi avaliar a expressão da E-caderina no carcinoma de células escamosas (n=20) e no tumor de células basais (n=15), buscando-se relacionar sua expressão ao comportamento biológico desses tumores. Os carcinomas de células escamosas apresentaram significativa redução da expressão da molécula comparado aos tumores de células basais, quando avaliado pelo teste de Fisher (P=0,0039). Também foi observado que células neoplásicas mais diferenciadas apresentaram coloração mais intensa que as menos diferenciadas. Em conclusão, sugere-se que a expressão reduzida da E-caderina em tumores cutâneos pode indicar maior poder infiltrativo e consequentemente mau prognóstico na espécie canina.

Expressão Gênica e Proteica de APC, E-caderina, ß-catenina e Caveolina-1 no Processo Carcinogênico da Próstata Canina e suas Metástases

As alterações na expressão de E-caderina, -catenina, APC e Caveolina-1 nas células epiteliais prostáticas têm sido estudados em humanos como mecanismos relacionados com progressão tumoral, invasão e metástase. Estas proteínas estão envolvidas no processo de adesão celular e ativação da via WNT canônica. No cão, a perda da expressão proteica de E-caderina e a translocação da -catenina da membrana para o citoplasma/núcleo foram descritas anteriormente em lesões prostáticas caninas. No entanto, nenhum estudo correlacionou alterações de expressão dessas proteínas com as proteínas APC e Caveolina-1. Devido ao prognóstico desfavorável do carcinoma prostático (CaP) no cão e a importância da identificação de novos marcadores prognósticos e preditivos, o presente estudo visou avaliar as expressões gênica e proteica de E-caderina, -catenina, APC e Caveolina-1 em diferentes lesões prostáticas caninas, além de avaliar o padrão de metilação do gene APC. Foram utilizados neste estudo 10 CaPs, 4 metástases de carcinoma prostático, 10 amostras de atrofia inflamatória proliferativa (PIA) e 10 próstatas normais de cães para análise imuno-histoquímica. Para a técnica de RT-qPCR forma utilizados 11 próstatas normais, 11 PIA, 17 CaPs e 3 metástases. Para análise de metilacão foram utilizadas seis próstatas normais, seis próstatas com PIA e 13 CaPs. Este estudo revelou aumento de expressão gênica e proteica de Caveolina-1 nas amostras de CaP e metástases, além de menor expressão nas amostras de carcinoma com escore de Gleason mais baixos. Identificou-se marcação membranosa de E-caderina e - catenina nas próstatas normais e perda heterogênea nas lesões estudadas. A expressão de - catenina apresentou diferença estatística (P<0,05) entre os grupos, e somente as amostras de carcinoma prostático e metástases apresentaram marcação citoplasmática e/ou nuclear. Discreta perda na expressão proteica de APC foi observada nos CaP, porém não houve alteração na análise de metilação da ilha CpG da região promotora do gene APC, sugerindo mecanismos diferentes de regulação do APC no homem e no cão. Estes resultados sugerem uma participação e interação das referidas proteínas durante a carcinogênese e metástase prostática.

Altered expressions of E-cadherin, -catenin, APC and Caveolin-1 in prostate epithelial cells has been studied in humans as mechanisms related with tumor progression, invasion and metastasis. These proteins are envolved in cell-cell cohesion and participate in the activation of the canonical WNT pathway. In dogs, membranous E-cadherin loss and translocation of -catenin from the membrane to cytoplasm/nucleus were described previously in canine prostatic lesions. However, no previous researches correlated these genes and their proteins with APC and Caveolin-1 expressions in canine prostatic lesions. Due to poor prognosis in canine prostate carcinoma (PC) and the need to develop new prognostic and predictive biomarkers, this study aims to evaluate gene and protein expression of E-cadherin, -catenin, APC and Caveolin-1 in different canine prostatic lesions, besides the methylation analysis of APC gene. We used 10 PC, 4 prostate metastasis, 10 proliferative inflammatory atrophy(PIA) and 10 canine normal prostates for immunohistochemistry. For RT-qPCR we used 11 normal prostate, 11 PIA, 17 PC and 4 metastasis. For methylation analysis, we used six normal prostates, 6 PIA and 13 PC. This study revealed increased Caveolin-1 gene and protein expression in PC and metastasis and lower expression were found in Gleason score lower grade. Membranous E-cadherin and - catenin staining was observed in normal prostates samples and heterogenous loss in other samples. - catenin expressions revealed statistical difference (P<0,05) between the groups, only PC and metastasis had cytoplasmic and/or nuclear pattern. Discrete loss of protein expression of APC in prostate carcinomas, there were no alteration in methylation analysis of APC promoter CpGs islands, suggesting men and dogs have different regulatory mechanisms of APC. These results suggests a participation and interaction of the proteins in carcinogenesis and prostate metastasis.

AVALIAÇÃO EPIGENÉTICA DOS GENES NKX3 E CDH1 E EXPRESSÃO DO C-MYC, NKX3, E E-CADERINA POR IMUNO-HISTOQUÍMICA EM MICROARRANJO DE TECIDO (TMA) DE LESÕESN PRÉ-NEOPLÁSICAS E NEOPLÁSICAS NA PRÓSTATA DE CÃES

A próstata canina é um bom modelo para estudos comparados entre o cão e o homem, uma vez que essas duas espécies desenvolvem espontaneamente carcinoma de próstata (CP). Para melhor caracterização do CP canino, a presente pesquisa foi dividia em quatro capítulos que avaliam diferentes aspectos dos CPs em cães. A atrofia inflamatória proliferativa (PIA) é uma lesão pré-neoplásica descritas em humanos e pouco estuda em cães. Nós caracterizamos essa lesão em cães e identificamos uma forte relação entre a localização topográfica da PIA com os CPs. Além disso, foi identificada a perda de expressão gênica e proteica de PTEN e AR na PIA. Esses fatores associados corroboram com o potencial pré-neoplásico desta lesão em cães. Um achado interessante foi a alta expressão de P63 na PIA e em um grupo de CP caninos. Para melhor caracterizar este grupo, foi avaliada a expressão imuno-histoquímica de diferentes citoqueratinas e outras proteínas relacionadas ao desenvolvimento do CP em humanos. Os carcinomas que apresentam expressão de P63 apresentaram padrões morfológicos com escore de Gleason alto e um fenótipo mais agressivo quando comparado à tumores que não apresentação expressão de P63. Posteriormente, a expressão gênica e proteica de E-caderina, NKX3.1 e C-MYC foi avaliada em CP como marcadores nas diferentes lesões. Além disso, nós avaliamos a metilação como mecanismo regulatórios dos genes CDH1 e NKX3.1. Foi possível identificar a perda de E-caderina e NKX3.1 nos tumores, comparado à próstata normal bem como o aumento da expressão de C-MYC. A expressão de E-caderina teve relação com a sobrevida dos pacientes e a hipermetilação do gene CDH1 é o possível mecanismo regulatório deste gene. Não foram encontradas alterações de metilação no promotor do gene NKX3.1, indicando outro mecanismo na regulação deste gene.

The canine prostate gland can be used as a model to human prostatic disease since dogs and men are the only species that spontaneously develop prostate carcinoma (PC). To better characterize the canine PC, this research was divided into four chapters that evaluated different aspects of the PC in dogs. The proliferative inflammatory atrophy (PIA) is a pre-neoplastic lesion described in humans and few studies in dogs describe it as a preneoplastic lesion. This study characterized PIA in dogs and identified a strong relationship between the PIA topography with PC. In addition, we identified the loss of PTEN and AR expression in PIA. These findings demonstrated the potential of PIA as a pre-neoplastic lesion in dogs. An interesting finding in this research was the high expression of P63 in PIA and a group of PC. This study found a group of PC showing P63 positive expression in neoplastic epithelial cells. Thus, these tumors were selected to better characterize them using immunohistochemistry. These tumors had an aggressive phenotype and presented high expression of AKT and C-MYC and loss of NKX3.1. Further, we selected a usual group of PC and evaluate the expression of E-cadherin, NKX3.1 and C-MYC. In addition, we evaluated the methylation as a regulatory mechanism of CDH1 and NKX3.1 genes. We have identified loss of E-cadherin and NKX3.1 in PC compared to normal prostate and C-MYC overexpression. The expression of E-cadherin was related to overall survival and Gleason score. The hypermethylation of CDH1can be the protein regulatory mechanism in canine PC. We did not find methylation alterations in NKX3.1 promoter gene. ¨¨

AVALIAÇÃO DA EXPRESSÃO DOS IMUNOMARCADORES CD44, E-CADERINA E ALDH-1 EM CÉLULAS NEOPLÁSICAS DE CARCINOMAS DE CÉLULAS ESCAMOSAS EM CANINOS, BOVINOS E EQUINOS

O carcinoma de células escamosas (CCE) é um tumor maligno de ocorrência relativamente comum nos animais domésticos, ocasionalmente metastáticos e caracterizados por crescimento lento e invasivo. Os anticorpos CD44 e ALDH-1 têm sido amplamente utilizados como marcadores específicos para células tronco tumorais (CTTs) em neoplasias, e a expressão dos mesmos tem demonstrado ser um marcador prognóstico relevante. E-caderinas são glicoproteínas essenciais para a manutenção da integridade tecidual, e a perda de sua expressão tem sido associada com a incidência de metastáses, podendo estar relacionada a um mau prognóstico e menor taxa de sobrevida. Os objetivos desse estudo foram avaliar e quantificar as imunomarcações de células neoplásicas para os imunomarcadores de CTTs (CD44 e ALDH-1) e de adesão celular (E-caderina) em CCE de bovinos, equinos e cães, além de comparar características clínico-histopatológicas dos tumores entre as espécies. Foram selecionados 11 tumores para cães e bovinos e 14 para a espécie equina diagnosticados como CCE. Foram coletadas informações histopatológicas de todos os tumores. Para a análise imuno-histoquímica (IHQ) foram utilizados cortes de tecidos incluídos em parafina para todos os anticorpos, e a técnica empregada foi a do método polímero, REVEAL livre de biotina. A imunomarcação de CD44 e o índice mitótico em CCE foi significativamente maior na espécie canina do que nas espécies bovinas e equinas, sendo esse marcador relacionado com proliferação celular. O ALDH-1 apresentou maior imunomarcação em bovinos e equinos em relação aos caninos, sugerindo maior incidência de células tronco tumorais nessas espécies. A E-caderina foi significativamente maior em bovinos em relação aos equinos, sendo os tumores de equinos caracterizados com pior prognóstico. Informações como queratinização, pleomorfismo celular e incidência de ulceração se mostraram iguais nas três espécies. Conclui-se que em cães há uma alta proliferação celular caracterizando invasão local e recidiva tumoral enquanto em bovinos e equinos uma maior quantidade de células-tronco tumorais concordando com a alta incidência de metástase dessa neoplasia nessas espécies. A e-caderina foi menor nos equinos caracterizando uma evolução rápida da doença.

Squamous cell carcinomas (SCC) are malignant tumors of the spinous layer of the epithelium, common to all species, characterized by slow, invasive and occasionally metastatic growth. The ALDH-1 and CD44 antibodies have been widely used as specific markers for cancer stem cells (CTCs) in tumors and the expression has been shown to be an important prognostic marker. E-cadherins are essential glycoproteins for the maintenance of tissue integrity, and the loss of its expression has been associated with the incidence of metastases, which can be associated with a poor prognosis and shorter survival rate. The aims of this study were to evaluate and quantify the immunostaining of neoplastic cells for immunomarkers of CTCs (CD44 and ALDH-1) and cell adhesion (E-cadherin) in SCC cattle, horses and dogs and to compare clinical and histopathologic features tumor between species. We were selectes 11 tumors for dogs and cattle and 14 for equine species diagnosed as CCE. Histopathological information of all tumors were collected. For immunohistochemistry tissue sections were embedded in paraffin used for all the antibodies, and the technique used was the polymer method, biotin-free REVEAL. The CD44 immunostaining was significantly higher in dogs than in bovines and equines species. This marker is related to cell proliferation. The ALDH-1 has shown higher immunostaining in bovine and equines species comparing to dogs, which suggests that cancer stem cells occurs more often in those species. The E-cadherins was significantly higher in bovine comparing with equine, being the equine tumors characterized with worst prognostic. Data as keratinization, cell pleomorphism and incidence of ulceration have shown equal in the three species. It was concluded that dogs have higher cell proliferation featuring local invasion and tumor recurrence while in cattle and horses there is an increased amount of tumor stem cells associated with the high incidence of metastases of this tumor in these species. The E-cadherins was lower in equine, showing a fast evolution of the disease.

EXPRESSÕES DE CD45+, CD68+ e E-CADERINA+ NA PELE DE CÃES NATURALMENTE INFECTADOS POR Leishmania infantum

A pele é composta por um sistema imune cutâneo responsável pela primeira linha de defesa aos insultos ambientais e patogênicos. Na leishmaniose canina, a infecção inicia-se nesse órgão através da picada de vetores flebotomíneos que inoculam na derme o protozoário Leishmania infantum, parasita intracelular do sistema fagocítico mononuclear. O objetivo deste trabalho foi avaliar a expressão de CD45+, CD68 + e E-caderina+ associando às células sentinelas da pele e caracterizar o padrão celular inflamatório correlacionando as lesões cutâneas de cães naturalmente infectados por L.infantum. Para tanto, cães infectados (n = 22) por L.infantum foram divididos em grupo assintomático (AD) e grupo sintomático (SD), baseados na presença ou ausência de alterações cutâneas. Cães não infectados (CD, n = 5) foram incluídos como grupo controle. Amostras de biópsias de pele foram coletadas de áreas da região escapular e do terço superior da orelha. Histologia de rotina, coloração HE e azul de toluidina, e imuno-histoquímica com anticorpos monoclonais contra CD45+, CD68 + e Ecaderina+ foram realizadas. Todo o protocolo experimental foi submetido ao Comitê de Ética em Uso de Animais (CEUA) da Universidade Estadual do Ceará (UECE) sob protocolo nº6459434/2015. Alterações cutâneas como ceratoconjuntivite, onicogrifose, liquenificação, despigmentação, alopecia, hipotricose, dermatite eritematosa, dermatite esfoliativa, dermatite ulcerativa e dermatite crostosa foram observadas no SD, destacando-se a dermatite ulcerativa e a alopecia. Além disso, no grupo SD, observou-se uma freqüência significativa de infiltração celular cutânea na derme superficial e profunda em relação à AD, composta por macrófagos, plasmócitos, linfócitos e neutrófilos. Houve maior expressão dos mastócitos em SD com infiltrado intenso e AD quando comparado aos outros animais, enquanto CD68+, CD45+ e E-caderina+ foram mais expressos apenas em SD. Nesse contexto, concluiu-se que as expressões de CD45+, CD68 + e E-caderina+ caracterizam a ativação das células imunitárias sentinelas que promovem o recrutamento do infiltrado celular, que por sua vez influencia diretamente no aparecimento das lesões cutâneas, tais como dermatite ulcerativa e alopecia. Por outro lado, não foi possível observar associação entre os mastócitos e a evolução clínica. Diante disso, esses dados podem contribuir para o acompanhamento da progressão da leishmaniose canina na pele.

The skin is composed of a cutaneous immune system responsible for the first line of defense to environmental and pathogenic insults. In canine leishmaniasis, infection begins in this organ through the bite of phlebotomine vectors that inoculate the protozoan Leishmania infantum, an intracellular parasite of the mononuclear phagocytic system. The objective of this work was to evaluate the expression of CD45+, CD68 + and E-caderina+ by associating with the sentinel cells of the skin and characterize the inflammatory cellular pattern correlating the skin lesions of dogs naturally infected by L.infantum. For this, infected dogs (n = 22) by L.infantum were divided into asymptomatic group (AD) and symptomatic group (SD), based on the presence or absence of cutaneous alterations. Dogs non-infected (CD, n = 5) were included as control group. Samples of skin biopsies were collected from areas of the scapular region and the upper third of the ear. Routine histology, HE staining and toluidine blue, and immunohistochemistry with monoclonal antibodies against CD45+, CD68 + and Ecaderina+ were performed. The entire experimental protocol was submitted to the Committee on Ethics in Animal Use (CEUA) of the State University of Ceará (UECE) under protocol nº6459434/2015. Cutaneous alterations such as keratoconjunctivitis, onychogrifosis, lichenification, depigmentation, alopecia, hypotrichosis, erythematous dermatitis, exfoliative dermatitis, ulcerative dermatitis and crustal dermatitis were observed in SD, including ulcerative dermatitis and alopecia. In addition, in the SD group, a significant frequency of cutaneous cell infiltration in the superficial and deep dermis was observed in relation to AD, composed of macrophages, plasma cells, lymphocytes and neutrophils. There was greater expression of mast cells in SD with intense infiltrate and AD when compared to the other animals, whereas CD45+, CD68 + and E-caderina+ were more expressed only in SD. In this context, it was concluded that in CanL the expressions of CD45+, CD68 + and E-caderina+, characterize the activation of sentinel immune cells that promote the recruitment of cellular infiltrate, which in turn directly influences the appearance of cutaneous lesions, such as ulcerative dermatitis and alopecia. On the other hand, it was not possible to observe association between the mast cells and the clinical evolution. Therefore, these data may contribute to the monitoring of the progression of canine leishmaniasis in the skin.