Genotypical characterization of thermotolerant coliforms isolated from food produced by a Solidarity Economic Venture of Bahia (Brazil) / Caracterização genotípica de coliformes termotolerantes isolados de alimentos produzidos por um Empreendimento Econômico Solidário

Many Solidarity Economic Venture (SEV) are family farmers who seek to add value to production through artisanal processing, which can lead to food contamination. Thus, this study aimed to genotypically characterize thermotolerant coliforms (TtC) strains from food produced by local agribusinesses of SEV during January to April 2019. Samples from thirteen production units (PU) from the SEV were submitted to a microbiological analysis of thermotolerant coliforms (AFNOR 3M1/2 09/89), using a fast count method in Petrifilm dishes. The Polymerase Chain Reaction (PCR) technique was used to verify the following virulence genes (VGs) associated with Escherichia coli: stx, typical from enterohemorrhagic E. coli (EHEC); bfpA typical from entheropathogenic E. coli (EPEC) and elt and slt, typical from entherotoxigenic E. coli (ETEC). The results showed that two samples of queijadinha (typical Brazilian candy made with eggs and coconut) and one sample of cassava cake presented characteristic colonies TtC. This way, three strains were isolated in order to perform the PCR technique. However, the genes used in the reaction were not detected in the isolated strains. Therefore, it is suggested that the isolated strains are from E. coli pathotypes with different virulence genes than the ones analyzed belong other types of TtC, such as Enterobacter and Klebsiella. Although the virulence of genes has not been confirmed, the presence of TtC on food indicates hygiene flaws during production and, therefore, measurements to control and prevent contamination should be taken.(AU)

Muitos Empreendimentos Econômicos Solidários (EES) são formados por agricultores familiares que buscam agregar valor à produção por meio do beneficiamento artesanal, que pode ocasionar a contaminação dos alimentos. Desta forma, este estudo objetivou caracterizar genotipicamente coliformes termotolerantes (CT) isolados em alimentos produzidos por agroindústrias de um EES no período de janeiro a abril de 2019. Então, foi realizada análise microbiológica de coliformes termotolerantes (AFNOR 3M1/2 09/89), utilizando um método contagem de contagem rápida em placas Petrifilm, em amostras de alimentos de treze Unidades de Produção (UP) do EES. Foram coletadas assepticamente cinco amostras de cada UP, totalizando 65 amostras. Utilizou-se a técnica de Reação em Cadeia de Polimerase (PCR) para verificação dos seguintes genes de virulência de Escherichia coli: stx, característico de E. coli enterohemorrágica (EHEC), bfpA, característico de E. coli enteropatogênica (EPEC) e elt e stI, característicos de E. coli enterotoxigênica (ETEC). Os resultados demonstraram que duas amostras de queijadinha e uma amostra do bolo de aipim apresentaram colônias características de coliformes termotolerantes. Desta forma, foram isoladas três cepas para a realização da PCR, no entanto os genes utilizados nas reações não foram identificados nas cepas isoladas. Portanto, sugere-se que as cepas isoladas sejam de patótipos de E. coli com genes de virulência diferentes dos analisados ou de outro membro dos CT, como Enterobacter e Klebsiella. Apesar de não serem confirmados os genes de virulência analisados, a detecção dos CT nos alimentos indica falhas na higiene durante a produção, portanto medidas para controlar e prevenir a contaminação dos produtos devem ser tomadas.(AU)

Genotypical characterization of thermotolerant coliforms isolated from food produced by a Solidarity Economic Venture of Bahia (Brazil)

Abstract Many Solidarity Economic Venture (SEV) are family farmers who seek to add value to production through artisanal processing, which can lead to food contamination. Thus, this study aimed to genotypically characterize thermotolerant coliforms (TtC) strains from food produced by local agribusinesses of SEV during January to April 2019. Samples from thirteen production units (PU) from the SEV were submitted to a microbiological analysis of thermotolerant coliforms (AFNOR 3M1/2 09/89), using a fast count method in Petrifilm dishes. The Polymerase Chain Reaction (PCR) technique was used to verify the following virulence genes (VGs) associated with Escherichia coli: stx, typical from enterohemorrhagic E. coli (EHEC); bfpA typical from entheropathogenic E. coli (EPEC) and elt and slt, typical from entherotoxigenic E. coli (ETEC). The results showed that two samples of queijadinha (typical Brazilian candy made with eggs and coconut) and one sample of cassava cake presented characteristic colonies TtC. This way, three strains were isolated in order to perform the PCR technique. However, the genes used in the reaction were not detected in the isolated strains. Therefore, it is suggested that the isolated strains are from E. coli pathotypes with different virulence genes than the ones analyzed belong other types of TtC, such as Enterobacter and Klebsiella. Although the virulence of genes has not been confirmed, the presence of TtC on food indicates hygiene flaws during production and, therefore, measurements to control and prevent contamination should be taken.

Resumo Muitos Empreendimentos Econômicos Solidários (EES) são formados por agricultores familiares que buscam agregar valor à produção por meio do beneficiamento artesanal, que pode ocasionar a contaminação dos alimentos. Desta forma, este estudo objetivou caracterizar genotipicamente coliformes termotolerantes (CT) isolados em alimentos produzidos por agroindústrias de um EES no período de janeiro a abril de 2019. Então, foi realizada análise microbiológica de coliformes termotolerantes (AFNOR 3M1/2 09/89), utilizando um método contagem de contagem rápida em placas Petrifilm, em amostras de alimentos de treze Unidades de Produção (UP) do EES. Foram coletadas assepticamente cinco amostras de cada UP, totalizando 65 amostras. Utilizou-se a técnica de Reação em Cadeia de Polimerase (PCR) para verificação dos seguintes genes de virulência de Escherichia coli: stx, característico de E. coli enterohemorrágica (EHEC), bfpA, característico de E. coli enteropatogênica (EPEC) e elt e stI, característicos de E. coli enterotoxigênica (ETEC). Os resultados demonstraram que duas amostras de queijadinha e uma amostra do bolo de aipim apresentaram colônias características de coliformes termotolerantes. Desta forma, foram isoladas três cepas para a realização da PCR, no entanto os genes utilizados nas reações não foram identificados nas cepas isoladas. Portanto, sugere-se que as cepas isoladas sejam de patótipos de E. coli com genes de virulência diferentes dos analisados ou de outro membro dos CT, como Enterobacter e Klebsiella. Apesar de não serem confirmados os genes de virulência analisados, a detecção dos CT nos alimentos indica falhas na higiene durante a produção, portanto medidas para controlar e prevenir a contaminação dos produtos devem ser tomadas.

Virulence genes in Escherichia coli isolates from commercialized saltwater mussels Mytella guyanensis (Lamarck, 1819) / Presença de genes de virulência em isolados de Escherichia coli provenientes de sururu Mytella guyanensis (Lamarck, 1819) comercializado

The isolation of Escherichia coli from food is a major concern. Pathogenic strains of these bacteria cause diseases which range from diarrhea to hemolytic-uremic syndrome. Therefore the virulence genes in E. coli isolates from the mussel ( Mytella guyanensis) commercialized in Cachoeira, Bahia, Brazil were investigated. Samples were purchased from four vendors: two from supermarkets and two from fair outlets. They were conditioned into isothermal boxes with reusable ice and transported to the laboratory for analysis. E. coli strains were isolated in eosin methylene blue agar, preserved in brain-heart infusion medium with 15% glycerol and stored at -20 °C, after microbiological analysis. Virulence genes in the isolated strains were identified by specific primers, with Polymerase Chain Reaction. Twenty-four isolates were obtained, with a prevalence of elt gene, typical from enterotoxigenic infection, in 75% of the isolates. The stx and bfpA genes, prevalent in enterohemorragic and enteropathogenic E. coli, respectively, were not detected. The occurrence of elt virulence-related gene in the E. coli isolates of Mytella guyanensis reveals urgent improvement in food processing, including good handling practices, adequate storage and cooking before consumption, to ensure consumers health.(AU)

O isolamento de Escherichia coli a partir de alimentos é uma grande preocupação, pois cepas patogênicas desta bactéria podem causar desde diarreia até síndrome hemolítico-urêmica. Diante do exposto, o objetivo do trabalho foi pesquisar genes de virulência em isolados de Escherichia coli provenientes do sururu Mytella guyanensis comercializado na cidade de Cachoeira, Bahia, Brasil. As amostras foram adquiridas de quatro comerciantes, sendo duas de mercados e duas em pontos de venda na feira livre da cidade de Cachoeira, acondicionadas em caixas isotérmicas com gelo reutilizável e transportadas até o laboratório para a análise. Após a análise microbiológica, as cepas de Escherichia coli foram isoladas em ágar Eosina Azul de Metileno e preservadas em caldo Brian Heart Infusion e glicerol a 15% e mantidas a - 20° C. A identificação dos genes de virulência nas cepas isoladas foi realizada utilizando primers específicos, por meio da Reação em Cadeia da Polimerase. Foram obtidos 24 isolados de Escherichia coli, destes a prevalência do gene elt , característico de Escherichia coli enterotoxigênica, foi de 75% dos isolados. Não houve a detecção dos genes stx e bfpA nos isolados, os quais são prevalentes nas cepas de Escherichia coli enterohemorrágica e Escherichia coli enteropatogênica, respectivamente. A presença do gene elt relacionado à virulência de Escherichia coli nos isolados de Mytella guyanensis revela a necessidade da melhoria no processamento, incluindo boas práticas de manipulação, armazenamento adequado e cocção previa ao consumo, visando a garantia da saúde do consumidor.(AU)

Detection of virulence genes and antimicrobial resistance profiles of Escherichia coli isolates from raw milk and artisanal cheese in Southern Brazil / Detecção de genes de virulência e perfis de resistência antimicrobiana de Escherichia coli isoladas de leite cru e queijo artesanal no Sul do Brasil

The serrano artisanal cheese is a typical product from South region of Brazil, which is produced by skilled cheesemakers using raw milk. The contamination of this food by Escherichia coli has a great impact on public health, since it could threat the consumers health. The study evaluated the presence of virulence genes, antimicrobial susceptibility profiles and bofilm-production ability of Escherichia coli isolates obtained from raw milk and artisanal cheese produced in Southern Brazil. A total of 117 isolates of E. coli were characterized by multiplex PCR to detect the following virulence genes: eae for enteropatogenic E. coli (EPEC), lt and st for enterotoxigenic E. coli (ETEC), stx for shiga toxin-producing E. coli (STEC), stx and eae for enterohemorrhagic E. coli (EHEC), ipaH for enteroinvasive E. coli (EIEC) and aggR for enteroaggregative E. coli (EAEC). In addition, antimicrobial susceptibility profile to 22 antimicrobial agents was also performed by disk diffusion method, and we searched for extended-spectrum beta-lactamases (ESBL) and/or carbapenemase- producing isolates. Isolates that were positive for ESBL and carbapenemase were further investigated for the presence of the genes: bla(TEM), bla(SHV), bla(OXA), bla(CTX-M), for ESBL and bla(OXA-48) for carbapenemase. Further, isolates had their ability to form biofilms investigated by the red Congo agar method. Virulence genes of E. coli were identified in 21.37% of the tested isolates, which were classified as EPEC (the most prevalent pathotype) and ETEC or EAEC. Ten (8.55%) of the total studied E. coli isolates revealed a multidrug-resistant profile, since they were resistant to three or more antimicrobial classes; whereas four isolates (3.42%) were classified as ESBL-producers and showed the presence of bla(TEM) gene. None of the isolates exhibited carbapenemase activity nor did they carry carbapenemase genes. From the total of E. coli isolates, 79 (67.52%) were considered potential biofilm...(AU)

O queijo artesanal serrano é um produto típico da região sul do Brasil e se caracteriza por ser produzido a partir de leite cru. A contaminação desse alimento por Escherichia coli assume grande relevância para a saúde pública, pois oferece risco a saúde dos consumidores. Esse estudo avaliou a presença de genes de virulência, os perfis de susceptibilidade antimicrobiana e a capacidade de produção de biofilme de isolados de E. coli obtidos a partir de leite cru e queijo artesanal produzido no Sul do Brasil. Um total de 117 isolados de E. coli foram caracterizados por multiplex PCR para detecção dos seguintes genes de virulência: eae para E. coli enteropatogênica (EPEC), lt e st para E. coli enterotoxigênica (ETEC), stx para E. coli produtora da toxina shiga (STEC), stx e eae para E. coli enterohemorrágica (EHEC), ipaH para E. coli enteroinvasiva (EIEC) e aggR para E. coli enteroagregativa (EAEC). Adicionalmente, o perfil de susceptibilidade antimicrobiana a 22 agentes antimicrobianos foi determinado pelo método de disco difusão e a busca de isolados produtores de beta-lactamases de espectro estendido (ESBL) e carbapenemase foram realizadas. Os isolados positivos para ESBL e carbapenemase foram investigados quanto a presença dos genes: bla(TEM), bla(SHV), bla(OXA), bla(CTX-M) para ESBL e bla(OXA-48) para carbapenemase. Além disso, a potencial capacidade dos isolados de E. coli em produzir biofilme foi determinada pela técnica do ágar vermelho Congo. Os genes de virulência de E. coli foram identificados em 21,37% dos isolados testados, que foram classificados como EPEC (patótipo mais prevalente), ETEC ou EAEC. Dez (8,55%) isolados de E. coli apresentaram perfil de multirresistência, pois foram resistentes a três ou mais classes de antimicrobianos; enquanto que quatro isolados (3,42%) foram classificados como produtores de ESBL, sendo identificado o gene blaTEM. Nenhum isolado foi classificado como produtor de carbapenemase. Do total de...(AU)

Virulence genes in Escherichia coli isolates from commercialized saltwater mussels Mytella guyanensis (Lamarck, 1819)

Abstract The isolation of Escherichia coli from food is a major concern. Pathogenic strains of these bacteria cause diseases which range from diarrhea to hemolytic-uremic syndrome. Therefore the virulence genes in E. coli isolates from the mussel ( Mytella guyanensis) commercialized in Cachoeira, Bahia, Brazil were investigated. Samples were purchased from four vendors: two from supermarkets and two from fair outlets. They were conditioned into isothermal boxes with reusable ice and transported to the laboratory for analysis. E. coli strains were isolated in eosin methylene blue agar, preserved in brain-heart infusion medium with 15% glycerol and stored at -20 °C, after microbiological analysis. Virulence genes in the isolated strains were identified by specific primers, with Polymerase Chain Reaction. Twenty-four isolates were obtained, with a prevalence of elt gene, typical from enterotoxigenic infection, in 75% of the isolates. The stx and bfpA genes, prevalent in enterohemorragic and enteropathogenic E. coli, respectively, were not detected. The occurrence of elt virulence-related gene in the E. coli isolates of Mytella guyanensis reveals urgent improvement in food processing, including good handling practices, adequate storage and cooking before consumption, to ensure consumers health.

Resumo O isolamento de Escherichia coli a partir de alimentos é uma grande preocupação, pois cepas patogênicas desta bactéria podem causar desde diarreia até síndrome hemolítico-urêmica. Diante do exposto, o objetivo do trabalho foi pesquisar genes de virulência em isolados de Escherichia coli provenientes do sururu Mytella guyanensis comercializado na cidade de Cachoeira, Bahia, Brasil. As amostras foram adquiridas de quatro comerciantes, sendo duas de mercados e duas em pontos de venda na feira livre da cidade de Cachoeira, acondicionadas em caixas isotérmicas com gelo reutilizável e transportadas até o laboratório para a análise. Após a análise microbiológica, as cepas de Escherichia coli foram isoladas em ágar Eosina Azul de Metileno e preservadas em caldo Brian Heart Infusion e glicerol a 15% e mantidas a - 20° C. A identificação dos genes de virulência nas cepas isoladas foi realizada utilizando primers específicos, por meio da Reação em Cadeia da Polimerase. Foram obtidos 24 isolados de Escherichia coli, destes a prevalência do gene elt , característico de Escherichia coli enterotoxigênica, foi de 75% dos isolados. Não houve a detecção dos genes stx e bfpA nos isolados, os quais são prevalentes nas cepas de Escherichia coli enterohemorrágica e Escherichia coli enteropatogênica, respectivamente. A presença do gene elt relacionado à virulência de Escherichia coli nos isolados de Mytella guyanensis revela a necessidade da melhoria no processamento, incluindo boas práticas de manipulação, armazenamento adequado e cocção previa ao consumo, visando a garantia da saúde do consumidor.

Virulence factors and antimicrobial resistance profile of Escherichia coli isolated from nursery piglets and drinking water

Background: One of the most frequent health problems in the swine industry is the post-weaning diarrhea in nursery pigs, which leads to significant losses due to weight loss, dehydration, cost of medication and mortality. Escherichia coli (E. coli) is one of the main bacterial agents of the post-weaning diarrhea. To investigate the possibility of enterotoxigenic E. coli (ETEC) transmission through drinking water to nursery piglets, the objective of this study was to isolate, characterize by virulence factors, and compare the antimicrobial resistance profiles of E. coli from drinking water samples in nurseries and from rectal swabs of their piglets presenting post-weaning colibacillosis.Materials, Methods & Results: Fifteen rectal swabs from diarrheic piglets in their first three weeks after weaning and one water sample were collected from each of ten nurseries located in Rio Grande do Sul State, south of Brazil. After enrichment with a commercial broth medium, water samples were cultured in blood agar, as well as the rectal swab samples, and the characteristic colonies were identified by standard biochemical analysis. Following isolation and identification of E. coli, the colonies from water samples and their corresponding piglets’ samples were characterized by multiplex PCR in order to determine specific ETEC fimbria and toxin genes. Finally, all E. coli isolates were submitted to antimicrobial susceptibility testing. Virulence factors and antimicrobial sensitivity could then be compared between water and piglets’ samples. The difference in the antimicrobial resistance frequency for each of the sample groups were compared using the multi comparison test. E. coli was isolated in four out of the ten water samples, although none of the water samples presented ETEC virulence factors.[...]

Virulence factors and antimicrobial resistance profile of Escherichia coli isolated from nursery piglets and drinking water

Background: One of the most frequent health problems in the swine industry is the post-weaning diarrhea in nursery pigs, which leads to significant losses due to weight loss, dehydration, cost of medication and mortality. Escherichia coli (E. coli) is one of the main bacterial agents of the post-weaning diarrhea. To investigate the possibility of enterotoxigenic E. coli (ETEC) transmission through drinking water to nursery piglets, the objective of this study was to isolate, characterize by virulence factors, and compare the antimicrobial resistance profiles of E. coli from drinking water samples in nurseries and from rectal swabs of their piglets presenting post-weaning colibacillosis.Materials, Methods & Results: Fifteen rectal swabs from diarrheic piglets in their first three weeks after weaning and one water sample were collected from each of ten nurseries located in Rio Grande do Sul State, south of Brazil. After enrichment with a commercial broth medium, water samples were cultured in blood agar, as well as the rectal swab samples, and the characteristic colonies were identified by standard biochemical analysis. Following isolation and identification of E. coli, the colonies from water samples and their corresponding piglets samples were characterized by multiplex PCR in order to determine specific ETEC fimbria and toxin genes. Finally, all E. coli isolates were submitted to antimicrobial susceptibility testing. Virulence factors and antimicrobial sensitivity could then be compared between water and piglets samples. The difference in the antimicrobial resistance frequency for each of the sample groups were compared using the multi comparison test. E. coli was isolated in four out of the ten water samples, although none of the water samples presented ETEC virulence factors.[...](AU)

Detection of virulence genes and the phylogenetic groups of Escherichia coli isolated from dogs in Brazil / Detecção de genes de virulência e grupos filogenéticos de amostras Escherichia coli isoladas de cães no Brasil

This study identified the virulence genes, pathovars, and phylogenetic groups of Escherichia coli strains obtained from the feces of dogs with and without diarrhea. Virulence genes and phylogenetic group identification were studied using polymerase chain reaction. Thirty-seven E. coli isolates were positive for at least one virulence factor gene. Twenty-one (57.8%) of the positive isolates were isolated from diarrheal feces and sixteen (43.2%) were from the feces of non-diarrheic dogs. Enteropathogenic E. coli (EPEC) were the most frequently (62.2%) detected pathovar in dog feces and were mainly from phylogroup B1 and E. Necrotoxigenic E. coli were detected in 16.2% of the virulence-positive isolates and these contained the cytotoxic necrotizing factor 1 (cnf1) gene and were classified into phylogroups B2 and D. All E. coli strains were negative for the presence of enterotoxigenic E. coli (ETEC) enterotoxin genes, but four strains were positive for ETEC-related fimbriae 987P and F18. Two isolates were Shiga toxin-producing E. coli strains and contained the toxin genesStx2 or Stx2e, both from phylogroup B1. Our data showed that EPEC was the most frequent pathovar and B1 and E were the most common phylogroups detected in E. coli isolated from the feces of diarrheic and non-diarrheic dogs.(AU)

Este estudo pesquisou genes de virulência, patovares e grupos filogenéticos de amostras de E. coli isoladas de fezes de cães com e sem diarreia. Os genes de virulência e a identificação de grupos filogenéticos foram estudados pela técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR). 37 isolados de E. coli foram positivos para pelo menos um fator de virulência na análise de PCR. Destes, 21 (57,8%) foram isolados de fezes de cães com diarreia e 16 (43,2%) de fezes de cães não diarreicos. E. coli enteropatogênica (EPEC) (23/37, 62,2%) foi o patovar mais frequente detectado em fezes de cães e foram classificados principalmente como filogrupos B1 e E. E. coli necrotoxigênica (NTEC) positivos para CNF1 foram detectados (6/37, 16,2%) e classificados como B2 e D. Todas as amostras de E. coli foram negativas quanto à presença de genes de enterotoxinas de E. coli enterotoxigênica (ETEC), mas quatro amostras foram positivas para fimbrias relacionadas ao ETEC, 987P (2) e F18 (2). As amostras de E. coli (STEC) produtora de toxina Shiga foram positivas para a toxina Stx2 (1/37) e Stx2e (1/37), ambas do filogrupo B1. Nossos resultados indicaram que EPEC foi o patovar mais frequente e B1 e E foram os filogrupos mais comuns detectados em amostras E. coli isoladas de fezes de cães diarreicos e não diarreicos.(AU)

Molecular diagnosis of diarrheagenic Escherichia coli isolated from Psittaciformes of illegal wildlife trade / Diagnóstico molecular de Escherichia coli diarreiogênicas isoladas de Psittaciformes do tráfico ilegal de animais silvestres

Diarrheagenic Escherichia coli (DEC) are considered one of the major causes of human diarrhea in developing countries. Some studies have pointed wild birds as important reservoirs for these pathogens. However, scarce species from the Psittaciformes order have been investigated. This study aimed to evaluate the presence of DEC strains in Psittaciformes from illegal wildlife trade. A total of 78 E. coli strains isolated from cloacal swab samples of 167 Psittaciformes in the Ceará State, Brazil, were evaluated regarding the presence of the following DEC virulence genes by polymerase chain reaction (PCR): eaeA and bfpA genes (Enteropathogenic E. coli - EPEC); stx1 and stx2 (Shiga toxin-producing E. coli - STEC); estA and eltB (Enterotoxigenic E. coli - ETEC); ipaH (Enteroinvasive E. coli - EIEC); aatA and aaiC (Enteroaggregative E. coli - EAEC). Positive strains for eaeA and bfpA genes were considered typical EPEC, while strain positive exclusively for the eaeA gene were classified as atypical EPEC. The eaeA gene was identified in 20 E. coli strains and bfpA in 22 isolates. In addition, 11 and 9 belonged to tEPEC and aEPEC, respectively. No strain was positive for stx1 or stx2. A total of 47 (60.3%) strains and a total of 136 birds (81.4%) were negative for the remaining DEC pathotypes investigated. In conclusion, psittacine from illegal wildlife trade in Ceará State, Brazil, presented a relevant prevalence of typical and atypical EPEC, potentially playing a role as reservoirs of DEC strains in the environment. Thus, proper control measures must be adopted to block the spread of these pathogens.(AU)

Escherichia coli diarreiogênicas (DEC) são consideradas uma das causas mais importantes de diarreia em países em desenvolvimento. Alguns estudos têm apontado aves silvestres como importantes reservatórios destes patógenos, entretanto, poucas espécies da ordem Psittaciformes têm sido investigada. O objetivo deste estudo foi analisar a presença de cepas de E. coli diarreiogênicas em Psittaciformes do tráfico de animais silvestres. Um total de 78 amostras de E. coli isoladas de suabes cloacais provenientes de 167 de Psittaciformes do Ceará, Brasil, foram avaliadas quanto a presença dos seguintes genes de virulência DEC por meio de reação em cadeia de polimerase (PCR): eaeA e bfpA (E. coli Enteropatogênica - EPEC); stx1 e stx2 (E. coli produtora de Shiga - STEC); estA e eltB (E. coli Enterotoxigênica - ETEC); ipaH (E. coli Enteroinvasiva - EIEC); aatA e aaiC (E. coli Enteroagregativa - EAEC). As cepas positivas para os genes eaeA e bfpA foram consideradas EPEC típicas, enquanto que as positivas exclusivamente para o gene eaeA foram classificadas como EPEC atípicas. O gene eaeA foi identificado em 20 cepas de E. coli e o gene bfpA em 22 dos isolados. Adicionalmente, 11 e 9 cepas foram classificadas como EPEC típicas e atípicas, respectivamente. Nenhuma cepa foi positiva para os genes stx1 e stx2. Um total de 47 cepas (60,3%) e um total de 136 aves (81,4%) foram negativas para os demais patotipos DEC pesquisados. Em conclusão, psitacídeos provenientes do tráfico de aves silvestres do estado do Ceará, Brasil, apresentaram relevante prevalência de EPEC típicas e atípicas, potencialmente participando como reservatórios de cepas DEC no ambiente. Portanto, medidas de controle devem ser adotadas para inibir a disseminação destes patógenos.(AU)

Molecular diagnosis of diarrheagenic Escherichia coli isolated from Psittaciformes of illegal wildlife trade / Diagnóstico molecular de Escherichia coli diarreiogênicas isoladas de Psittaciformes do tráfico ilegal de animais silvestres

Diarrheagenic Escherichia coli (DEC) are considered one of the major causes of human diarrhea in developing countries. Some studies have pointed wild birds as important reservoirs for these pathogens. However, scarce species from the Psittaciformes order have been investigated. This study aimed to evaluate the presence of DEC strains in Psittaciformes from illegal wildlife trade. A total of 78 E. coli strains isolated from cloacal swab samples of 167 Psittaciformes in the Ceará State, Brazil, were evaluated regarding the presence of the following DEC virulence genes by polymerase chain reaction (PCR): eaeA and bfpA genes (Enteropathogenic E. coli - EPEC); stx1 and stx2 (Shiga toxin-producing E. coli - STEC); estA and eltB (Enterotoxigenic E. coli - ETEC); ipaH (Enteroinvasive E. coli - EIEC); aatA and aaiC (Enteroaggregative E. coli - EAEC). Positive strains for eaeA and bfpA genes were considered typical EPEC, while strain positive exclusively for the eaeA gene were classified as atypical EPEC. The eaeA gene was identified in 20 E. coli strains and bfpA in 22 isolates. In addition, 11 and 9 belonged to tEPEC and aEPEC, respectively. No strain was positive for stx1 or stx2. A total of 47 (60.3%) strains and a total of 136 birds (81.4%) were negative for the remaining DEC pathotypes investigated. In conclusion, psittacine from illegal wildlife trade in Ceará State, Brazil, presented a relevant prevalence of typical and atypical EPEC, potentially playing a role as reservoirs of DEC strains in the environment. Thus, proper control measures must be adopted to block the spread of these pathogens.(AU)

Escherichia coli diarreiogênicas (DEC) são consideradas uma das causas mais importantes de diarreia em países em desenvolvimento. Alguns estudos têm apontado aves silvestres como importantes reservatórios destes patógenos, entretanto, poucas espécies da ordem Psittaciformes têm sido investigada. O objetivo deste estudo foi analisar a presença de cepas de E. coli diarreiogênicas em Psittaciformes do tráfico de animais silvestres. Um total de 78 amostras de E. coli isoladas de suabes cloacais provenientes de 167 de Psittaciformes do Ceará, Brasil, foram avaliadas quanto a presença dos seguintes genes de virulência DEC por meio de reação em cadeia de polimerase (PCR): eaeA e bfpA (E. coli Enteropatogênica - EPEC); stx1 e stx2 (E. coli produtora de Shiga - STEC); estA e eltB (E. coli Enterotoxigênica - ETEC); ipaH (E. coli Enteroinvasiva - EIEC); aatA e aaiC (E. coli Enteroagregativa - EAEC). As cepas positivas para os genes eaeA e bfpA foram consideradas EPEC típicas, enquanto que as positivas exclusivamente para o gene eaeA foram classificadas como EPEC atípicas. O gene eaeA foi identificado em 20 cepas de E. coli e o gene bfpA em 22 dos isolados. Adicionalmente, 11 e 9 cepas foram classificadas como EPEC típicas e atípicas, respectivamente. Nenhuma cepa foi positiva para os genes stx1 e stx2. Um total de 47 cepas (60,3%) e um total de 136 aves (81,4%) foram negativas para os demais patotipos DEC pesquisados. Em conclusão, psitacídeos provenientes do tráfico de aves silvestres do estado do Ceará, Brasil, apresentaram relevante prevalência de EPEC típicas e atípicas, potencialmente participando como reservatórios de cepas DEC no ambiente. Portanto, medidas de controle devem ser adotadas para inibir a disseminação destes patógenos.(AU)

Molecular diagnosis of diarrheagenic Escherichia coli isolated from Psittaciformes of illegal wildlife trade

ABSTRACT: Diarrheagenic Escherichia coli (DEC) are considered one of the major causes of human diarrhea in developing countries. Some studies have pointed wild birds as important reservoirs for these pathogens. However, scarce species from the Psittaciformes order have been investigated. This study aimed to evaluate the presence of DEC strains in Psittaciformes from illegal wildlife trade. A total of 78 E. coli strains isolated from cloacal swab samples of 167 Psittaciformes in the Ceará State, Brazil, were evaluated regarding the presence of the following DEC virulence genes by polymerase chain reaction (PCR): eaeA and bfpA genes (Enteropathogenic E. coli - EPEC); stx1 and stx2 (Shiga toxin-producing E. coli - STEC); estA and eltB (Enterotoxigenic E. coli - ETEC); ipaH (Enteroinvasive E. coli - EIEC); aatA and aaiC (Enteroaggregative E. coli - EAEC). Positive strains for eaeA and bfpA genes were considered typical EPEC, while strain positive exclusively for the eaeA gene were classified as atypical EPEC. The eaeA gene was identified in 20 E. coli strains and bfpA in 22 isolates. In addition, 11 and 9 belonged to tEPEC and aEPEC, respectively. No strain was positive for stx1 or stx2. A total of 47 (60.3%) strains and a total of 136 birds (81.4%) were negative for the remaining DEC pathotypes investigated. In conclusion, psittacine from illegal wildlife trade in Ceará State, Brazil, presented a relevant prevalence of typical and atypical EPEC, potentially playing a role as reservoirs of DEC strains in the environment. Thus, proper control measures must be adopted to block the spread of these pathogens.

RESUMO: Escherichia coli diarreiogênicas (DEC) são consideradas uma das causas mais importantes de diarreia em países em desenvolvimento. Alguns estudos têm apontado aves silvestres como importantes reservatórios destes patógenos, entretanto, poucas espécies da ordem Psittaciformes têm sido investigada. O objetivo deste estudo foi analisar a presença de cepas de E. coli diarreiogênicas em Psittaciformes do tráfico de animais silvestres. Um total de 78 amostras de E. coli isoladas de suabes cloacais provenientes de 167 de Psittaciformes do Ceará, Brasil, foram avaliadas quanto a presença dos seguintes genes de virulência DEC por meio de reação em cadeia de polimerase (PCR): eaeA e bfpA (E. coli Enteropatogênica - EPEC); stx1 e stx2 (E. coli produtora de Shiga - STEC); estA e eltB (E. coli Enterotoxigênica - ETEC); ipaH (E. coli Enteroinvasiva - EIEC); aatA e aaiC (E. coli Enteroagregativa - EAEC). As cepas positivas para os genes eaeA e bfpA foram consideradas EPEC típicas, enquanto que as positivas exclusivamente para o gene eaeA foram classificadas como EPEC atípicas. O gene eaeA foi identificado em 20 cepas de E. coli e o gene bfpA em 22 dos isolados. Adicionalmente, 11 e 9 cepas foram classificadas como EPEC típicas e atípicas, respectivamente. Nenhuma cepa foi positiva para os genes stx1 e stx2. Um total de 47 cepas (60,3%) e um total de 136 aves (81,4%) foram negativas para os demais patotipos DEC pesquisados. Em conclusão, psitacídeos provenientes do tráfico de aves silvestres do estado do Ceará, Brasil, apresentaram relevante prevalência de EPEC típicas e atípicas, potencialmente participando como reservatórios de cepas DEC no ambiente. Portanto, medidas de controle devem ser adotadas para inibir a disseminação destes patógenos.

Antimicrobial susceptibility and diarrheagenic diagnosis of Escherichia coli and Salmonella enterica isolated from feral pigeons (Columba livia) captured in Fortaleza, Brazil / Isolamento, sensibilidade antimicrobiana e diagnóstico de cepas diarreiogênicas de Escherichia coli e Salmonella enterica isoladas de pombos urbanos (Columba livia) capturados em Fortaleza, Brasil

This study aimed to isolate Escherichia coli and Salmonella enterica from captured feral pigeons in Fortaleza, Brazil, and, in addition to evaluate the antimicrobial susceptibility profiles and diagnose diarrheagenic E. coli strains. Pigeons were captured in four public locations in Fortaleza with three techniques. Individual cloacal swab samples were collected and submitted to bacterial isolation, biochemical identification and antimicrobial susceptibility test. Disk diffusion technique was used with twelve antibiotics. E. coli strains were submitted to DNA extraction followed by PCR to diagnose five diarrheagenic pathotypes. A total of 124 birds were captured. One bird was positive for Salmonella enterica (0.81%) and 121 (97.58%) were positive for E. coli. Among these, 110 isolates were submitted to antimicrobial susceptibility test and 28.18% (31/110) presented resistance to at least one antibiotic. Resistance to azithromycin was the most frequent (21.82%), followed by tetracycline (10.91%) and sulfamethoxazole with trimethoprim (8.9%). Multidrug resistance, calculated as a resistance to at least 3 antimicrobial classes, was identified in 3.64% (4/110) of strains. The maximum number of antimicrobial classes to which one strain was resistant was seven. Results demonstrated nine different resistance profiles and the most frequent was tetracycline and sulfamethoxazole with trimethoprim (4 strains), followed by chloramphenicol, azithromycin, tetracycline and sulfamethoxazole with trimethoprim (3 strains). Amoxicillin with clavulanic acid and tobramycin presented lowest levels of antimicrobial resistance, to which none of the tested strains were resistant. A single strain was positive for the eltB gene, which is a diagnostic tool to identify the Enterotoxigenic E. coli (ETEC) pathotype. None of the other investigated genes (stx1, stx2, estA, eaeA, ipaH, aatA and aaiC) were identified. The single isolate of S. enterica was a rough strain of Salmonella enterica subsp. enterica, but serotype identification was not possible. However, this isolate presented resistance to amoxicillin, amoxicillin with clavulanic acid, tetracycline and sulfamethoxazole with trimethoprim. Therefore, captured feral pigeons of Fortaleza presented a low prevalence of S. enterica and diarrheagenic E. coli. Considering the investigated pathogens, our results suggest a good health status and a low public health risk. However, important antimicrobial resistance profiles were identified.(AU)

O objetivo deste estudo foi isolar cepas de Escherichia coli e Salmonella enterica de pombos urbanos capturados em Fortaleza, Brasil, e avaliar os perfis de resistência antimicrobiana dos isolados, bem como diagnosticar patotipos diarreiogênicos de E. coli. Pombos foram capturados em quatro locais públicos de Fortaleza utilizando três técnicas. Amostras individuais de suabes cloacais foram coletadas e submetidas a isolamento bacteriano, seguido de identificação bioquímica e teste de susceptibilidade a antimicrobianos. A técnica de disco difusão foi utilizada para avaliar resistência antimicrobiana a doze antibióticos. Cepas de E. coli foram submetidas à extração de DNA seguido de PCR para o diagnóstico de cinco patotipos diarreiogênicos. Um total de 124 aves foram capturadas, a partir das quais em uma houve isolamento de Salmonella enterica (0,81%) e em 121 (97,58%) houve isolamento de E. coli. Destas, 110 isolados foram submetidos a teste de suscetibilidade a antimicrobianos e 28,18% (31/110) apresentaram resistência a pelo menos um antibiótico. Resistência a azitromicina foi a mais frequente (21,82%), seguida por tetraciclina (10,91%) e sulfametoxazol com trimetoprim (8,9%). Resistência a múltiplas drogas foi identificada em 3,64% (4/110) dos isolados e o número máximo de antibióticos aos quais uma única cepa foi resistente foi sete. Resultados demonstraram nove diferentes perfis de resistência e o mais frequente foi tetraciclina e sulfametoxazol com trimetoprim (4 cepas), seguido por cloranfenicol, azitromicina, tetraciclina e sulfametoxazol com trimetoprim (3 cepas). Amoxicilina com ácido clavulânico e tobramicina foram os antibióticos com menor resistência antimicrobiana, aos quais nenhuma cepa apresentou resistência. Uma única cepa foi positiva para o gene eltB que é usado para diagnóstico do patotipo E. coli enterotoxigênica (ETEC), enquanto que os demais genes investigados (stx1, stx2, estA, eaeA, ipaH, aatA e aaiC) não foram identificados. A única cepa de S. enterica isolada foi identificada como uma cepa rugosa de Salmonella enterica subsp. enterica e, portanto, a identificação do sorotipo não foi possível. Entretanto, este isolado apresentou resistência a amoxicilina, amoxicilina com ácido clavulânico, tetraciclina e sulfametoxazol com trimetoprim. Portanto, pombos urbanos capturados em Fortaleza apresentaram baixa prevalência de cepas de S. enterica e E. coli diarreiogênicas. Considerando os patógenos investigados, os resultados encontrados sugerem um bom status sanitário destas aves e um baixo risco à saúde pública. Entretanto, importantes perfis de resistência antimicrobiana foram identificados.(AU)

Antimicrobial susceptibility and diarrheagenic diagnosis of Escherichia coli and Salmonella enterica isolated from feral pigeons (Columba livia) captured in Fortaleza, Brazil / Isolamento, sensibilidade antimicrobiana e diagnóstico de cepas diarreiogênicas de Escherichia coli e Salmonella enterica isoladas de pombos urbanos (Columba livia) capturados em Fortaleza, Brasil

This study aimed to isolate Escherichia coli and Salmonella enterica from captured feral pigeons in Fortaleza, Brazil, and, in addition to evaluate the antimicrobial susceptibility profiles and diagnose diarrheagenic E. coli strains. Pigeons were captured in four public locations in Fortaleza with three techniques. Individual cloacal swab samples were collected and submitted to bacterial isolation, biochemical identification and antimicrobial susceptibility test. Disk diffusion technique was used with twelve antibiotics. E. coli strains were submitted to DNA extraction followed by PCR to diagnose five diarrheagenic pathotypes. A total of 124 birds were captured.One bird was positive for Salmonella enterica (0.81%) and 121 (97.58%) were positive for E. coli. Among these, 110 isolates were submitted to antimicrobial susceptibility test and 28.18% (31/110) presented resistance to at least one antibiotic. Resistance to azithromycin was the most frequent (21.82%), followed by tetracycline (10.91%) and sulfamethoxazole with trimethoprim (8.9%). Multidrug resistance, calculated as a resistance to at least 3 antimicrobial classes, was identified in 3.64% (4/110) of strains. The maximum number of antimicrobial classes to which one strain was resistant was seven. Results demonstrated nine different resistance profiles and the most frequent was tetracycline and sulfamethoxazole with trimethoprim (4 strains), followed by chloramphenicol, azithromycin, tetracycline and sulfamethoxazole with trimethoprim (3 strains). Amoxicillin with clavulanic acid and tobramycin presented lowest levels of antimicrobial resistance, to which none of the tested strains were resistant. A single strain was positive for the eltB gene, which is a diagnostic tool to identify the Enterotoxigenic E. coli (ETEC) pathotype. None of the other investigated genes (stx1, stx2, estA, eaeA, ipaH, aatA and aaiC) were identified...(AU)

O objetivo deste estudo foi isolar cepas de Escherichia coli e Salmonella enterica de pombos urbanos capturados em Fortaleza, Brasil, e avaliar os perfis de resistência antimicrobiana dos isolados, bem como diagnosticar patotipos diarreiogênicos de E. coli. Pombos foram capturados em quatro locais públicos de Fortaleza utilizando três técnicas. Amostras individuais de suabes cloacais foram coletadas e submetidas a isolamento bacteriano, seguido de identificação bioquímica e teste de susceptibilidade a antimicrobianos. A técnica de disco difusão foi utilizada para avaliar resistência antimicrobiana a doze antibióticos. Cepas de E. coli foram submetidas à extração de DNA seguido de PCR para o diagnóstico de cinco patotipos diarreiogênicos. Um total de 124 aves foram capturadas, a partir das quais em uma houve isolamento de Salmonella enterica (0,81%) e em 121 (97,58%) houve isolamento de E. coli. Destas, 110 isolados foram submetidos a teste de suscetibilidade a antimicrobianos e 28,18% (31/110) apresentaram resistência a pelo menos um antibiótico. Resistência a azitromicina foi a mais frequente (21,82%), seguida por tetraciclina (10,91%) e sulfametoxazol com trimetoprim (8,9%). Resistência a múltiplas drogas foi identificada em 3,64% (4/110) dos isolados e o número máximo de antibióticos aos quais uma única cepa foi resistente foi sete. Resultados demonstraram nove diferentes perfis de resistência e o mais frequente foi tetraciclina e sulfametoxazol com trimetoprim (4 cepas), seguido por cloranfenicol, azitromicina, tetraciclina e sulfametoxazol com trimetoprim (3 cepas). Amoxicilina com ácido clavulânico e tobramicina foram os antibióticos com menor resistência antimicrobiana, aos quais nenhuma cepa apresentou resistência. Uma única cepa foi positiva para o gene eltB que é usado para diagnóstico do patotipo E. coli enterotoxigênica (ETEC), enquanto que os demais genes investigados (stx1, stx2, estA, eaeA, ipaH, aatA e aaiC) não foram identificados...(AU)

Virulence genes in Escherichia coli isolates from commercialized saltwater mussels Mytella guyanensis (Lamarck, 1819)

Abstract The isolation of Escherichia coli from food is a major concern. Pathogenic strains of these bacteria cause diseases which range from diarrhea to hemolytic-uremic syndrome. Therefore the virulence genes in E. coli isolates from the mussel ( Mytella guyanensis) commercialized in Cachoeira, Bahia, Brazil were investigated. Samples were purchased from four vendors: two from supermarkets and two from fair outlets. They were conditioned into isothermal boxes with reusable ice and transported to the laboratory for analysis. E. coli strains were isolated in eosin methylene blue agar, preserved in brain-heart infusion medium with 15% glycerol and stored at -20 °C, after microbiological analysis. Virulence genes in the isolated strains were identified by specific primers, with Polymerase Chain Reaction. Twenty-four isolates were obtained, with a prevalence of elt gene, typical from enterotoxigenic infection, in 75% of the isolates. The stx and bfpA genes, prevalent in enterohemorragic and enteropathogenic E. coli, respectively, were not detected. The occurrence of elt virulence-related gene in the E. coli isolates of Mytella guyanensis reveals urgent improvement in food processing, including good handling practices, adequate storage and cooking before consumption, to ensure consumers health.

Resumo O isolamento de Escherichia coli a partir de alimentos é uma grande preocupação, pois cepas patogênicas desta bactéria podem causar desde diarreia até síndrome hemolítico-urêmica. Diante do exposto, o objetivo do trabalho foi pesquisar genes de virulência em isolados de Escherichia coli provenientes do sururu Mytella guyanensis comercializado na cidade de Cachoeira, Bahia, Brasil. As amostras foram adquiridas de quatro comerciantes, sendo duas de mercados e duas em pontos de venda na feira livre da cidade de Cachoeira, acondicionadas em caixas isotérmicas com gelo reutilizável e transportadas até o laboratório para a análise. Após a análise microbiológica, as cepas de Escherichia coli foram isoladas em ágar Eosina Azul de Metileno e preservadas em caldo Brian Heart Infusion e glicerol a 15% e mantidas a - 20° C. A identificação dos genes de virulência nas cepas isoladas foi realizada utilizando primers específicos, por meio da Reação em Cadeia da Polimerase. Foram obtidos 24 isolados de Escherichia coli, destes a prevalência do gene elt , característico de Escherichia coli enterotoxigênica, foi de 75% dos isolados. Não houve a detecção dos genes stx e bfpA nos isolados, os quais são prevalentes nas cepas de Escherichia coli enterohemorrágica e Escherichia coli enteropatogênica, respectivamente. A presença do gene elt relacionado à virulência de Escherichia coli nos isolados de Mytella guyanensis revela a necessidade da melhoria no processamento, incluindo boas práticas de manipulação, armazenamento adequado e cocção previa ao consumo, visando a garantia da saúde do consumidor.

Genotypical characterization of thermotolerant coliforms isolated from food produced by a Solidarity Economic Venture of Bahia (Brazil)

Abstract Many Solidarity Economic Venture (SEV) are family farmers who seek to add value to production through artisanal processing, which can lead to food contamination. Thus, this study aimed to genotypically characterize thermotolerant coliforms (TtC) strains from food produced by local agribusinesses of SEV during January to April 2019. Samples from thirteen production units (PU) from the SEV were submitted to a microbiological analysis of thermotolerant coliforms (AFNOR 3M1/2 09/89), using a fast count method in Petrifilm dishes. The Polymerase Chain Reaction (PCR) technique was used to verify the following virulence genes (VGs) associated with Escherichia coli: stx, typical from enterohemorrhagic E. coli (EHEC); bfpA typical from entheropathogenic E. coli (EPEC) and elt and slt, typical from entherotoxigenic E. coli (ETEC). The results showed that two samples of queijadinha (typical Brazilian candy made with eggs and coconut) and one sample of cassava cake presented characteristic colonies TtC. This way, three strains were isolated in order to perform the PCR technique. However, the genes used in the reaction were not detected in the isolated strains. Therefore, it is suggested that the isolated strains are from E. coli pathotypes with different virulence genes than the ones analyzed belong other types of TtC, such as Enterobacter and Klebsiella. Although the virulence of genes has not been confirmed, the presence of TtC on food indicates hygiene flaws during production and, therefore, measurements to control and prevent contamination should be taken.

Resumo Muitos Empreendimentos Econômicos Solidários (EES) são formados por agricultores familiares que buscam agregar valor à produção por meio do beneficiamento artesanal, que pode ocasionar a contaminação dos alimentos. Desta forma, este estudo objetivou caracterizar genotipicamente coliformes termotolerantes (CT) isolados em alimentos produzidos por agroindústrias de um EES no período de janeiro a abril de 2019. Então, foi realizada análise microbiológica de coliformes termotolerantes (AFNOR 3M1/2 09/89), utilizando um método contagem de contagem rápida em placas Petrifilm, em amostras de alimentos de treze Unidades de Produção (UP) do EES. Foram coletadas assepticamente cinco amostras de cada UP, totalizando 65 amostras. Utilizou-se a técnica de Reação em Cadeia de Polimerase (PCR) para verificação dos seguintes genes de virulência de Escherichia coli: stx, característico de E. coli enterohemorrágica (EHEC), bfpA, característico de E. coli enteropatogênica (EPEC) e elt e stI, característicos de E. coli enterotoxigênica (ETEC). Os resultados demonstraram que duas amostras de queijadinha e uma amostra do bolo de aipim apresentaram colônias características de coliformes termotolerantes. Desta forma, foram isoladas três cepas para a realização da PCR, no entanto os genes utilizados nas reações não foram identificados nas cepas isoladas. Portanto, sugere-se que as cepas isoladas sejam de patótipos de E. coli com genes de virulência diferentes dos analisados ou de outro membro dos CT, como Enterobacter e Klebsiella. Apesar de não serem confirmados os genes de virulência analisados, a detecção dos CT nos alimentos indica falhas na higiene durante a produção, portanto medidas para controlar e prevenir a contaminação dos produtos devem ser tomadas.

Virulence profiles of enterotoxigenic Escherichia coli isolated from piglets with post-weaning diarrhea and classification according to fecal consistency / Perfis de virulência de Escherichia coli enterotoxigênica isoladas de leitões desmamados com diarreia do Sul do Brasil e classificação das amostras de acordo com a consistência fecal

The aim of this study was to assess the frequency and association of virulence factors of Escherichia (E.) coli isolated from weaned piglets with diarrhea and to correlate it with fecal consistency. A total of 152 rectal swabs were collected from 25-40 day-old piglets with diarrhea, in farms of Southern Brazil. Phenotypical and molecular techniques were used for bacterial isolation, characterization and classification of enterotoxigenic E. coli (ETEC) pathotypes. Statistical analysis was carried out to determine the frequency of virulence factors and virotypes, of fimbriae F4, F5, F6, F18, F41 and toxins LT, STa, STb and STx2e. Out of 456 E. coli isolates, 287 (62.9%) samples showed significant growth of E. coli. Among them, 194 (67.6%) samples showed at least one virulence factor, indicating that ETEC is an important etiological agent of diarrhea in weaned piglets. Higher frequencies were found of fimbria F4 and F18 and enterotoxins LT, STa and STb. Significant association was found to F4, LT, STa and STb; between F18 and STa and STx2e; between F5 and LT, STa and STb. The most frequent virotypes were F18-STa, F4-LT-STa-STb, F4-STa, F4-LT-STb and F18-STa-STx2e. Beta-hemolysis was observed in 47.4% of samples and there was significant association between hemolytic samples and virulence factors F4, F18, STa and STx2e. Regarding fecal consistency, there was significant association of liquid feces and F4 fimbria, STa toxin and virotypes F4-STa and F4-F5-LT-STa-STb. Since there was significant association of ETEC and liquid feces in nursery piglets, it is important to prioritize the sampling of liquid feces for the diagnosis etiologic cause of diarrhea.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar a frequência e associação de fatores de virulência de Escherichia (E.) coli isoladas de leitões desmamados com diarreia e correlacioná-la com consistência fecal. Suabes retais foram coletados em leitões com 25-40 dias de idade com sinal clínico de diarreia, em granjas do Sul do Brasil, totalizando 456 amostras. Foram utilizadas técnicas fenotípicas e moleculares para isolamento bacteriano, caracterização e classificação de patotipos de E. coli enterotoxigênica (ETEC). A análise estatística foi realizada para determinar a frequência de fatores de virulência e virotipos, de fímbrias F4, F5, F6, F18, F41 e toxinas LT, STa, STB e STx2e. Duzentas e oitenta e sete (62,9%) amostras apresentaram crescimento significativo de E. coli. Entre os quais, 194 (67,6%) amostras apresentaram pelo menos um fator de virulência, indicando que ETEC é um importante agente etiológico de diarreia em leitões desmamados. As frequências mais elevadas foram encontradas para as fímbrias F4 e F18 e enterotoxinas LT, STa e STb. Associação significativa foi encontrada para F4, LT, STa e STb; entre F18 e STa e STx2e; entre F5 e LT, STa e STb. Os virotipos mais frequentes foram F18-STa, F4-LT-STa-STb, F4-STa, F4-LT-STb e F18-STa-STx2e. Beta-hemólise foi observada em 47,4% das amostras e houve associação significativa entre amostras hemolíticas e fatores de virulência F4, F18, STa e STx2e. Quanto consistência fecal, houve associação significativa de fezes líquidas e fímbria F4, toxina STa e virotipos F4-STa e F4-F5-LT-STa-STb. A associação significativa da ETEC e fezes líquidas em leitões de creche, é importante para priorizar a amostragem de fezes com essa consistência para no diagnóstico etiológico da diarreia.(AU)

PESQUISA DE Escherichia coli DIARREIOGÊNICA EM ÁGUA DE MÚLTIPLOS USOS COMO MODELO DE VIGILÂNCIA EM SAÚDE ÚNICA

A Bacia Hidrográfica do Rio Mearim se destaca por sua importância social, econômica, ambiental, energética e cultural, sobretudo, para pequenos produtores rurais que utilizam essa fonte de água em atividades agroprodutivas e para pescadores artesanais que retiram desse recurso hídrico seu alimento e sustento. Nesse sentido, objetivou-se pesquisar Escherichia coli diarreiogênica em água de múltiplos usos como modelo de vigilância em saúde única. Para a realização do estudo coletou-se amostras de água em cinco pontos previamente selecionados para os municípios de Arari e Vitória do Mearim, estado do Maranhão, o que correspondeu a uma área do baixo curso do rio Mearim. De cada ponto foram coletadas amostras em triplicata, totalizando 30 amostras, sendo 15 amostras por município. As amostras foram coletadas em frascos estéreis de vidro borosilicato, com capacidade de 500 mL, de maneira asséptica e acondicionadas ao abrigo de luz solar em caixas isotérmicas com gelo reciclável. Para a quantificação de coliformes totais e E. coli utilizou-se o sistema cromogênico enzimático (Colilert, Idexx, USA) e das amostras positivas nesse teste procedeu-se ao isolamento e confirmação da bactéria em estudo por meio de metodologia convencional (enriquecimento das amostras e identificação bioquímica das colônias isoladas). A extração do DNA das culturas puras de E. coli foi realizada por aquecimento seguido da caracterização por meio da reação em cadeia da polimerase (PCR) utilizando o Kit GoTaq® Colorless Master Mix (Promega®) de acordo com as recomendações do fabricante. Das amostras analisadas, 100% (n=30) apresentaram coliformes totais com populações bacterianas que variaram de 7.701 a 24.196 NMP/100 mL para o município de Arari e 3.524 a 24.196 NMP/100 mL para Vitória do Mearim. Em seis pontos amostrados, sendo um ponto no município de Arari (P3) e todos os pontos em Vitória do Mearim (P1 a P5), totalizando 60% (n= 18) das amostras analisadas, podese constatar valores médios de E. coli acima do limite máximo estabelecido na legislação ambiental brasileira. Dos 10 pontos amostrados, foram isoladas de cada amostra dois morfotipos bacterianos diferentes caracterizados por colônias róseas e colônias incolores/transparentes. Os morfotipos bacterianos diferentes foram transferidos para testes bioquímicos em que foi possível constatar as características bioquímicas de 20 isolados compatíveis com a bactéria E. coli. Destes, foram detectados genes de virulência característicos de E. coli enterotoxigênica (ETEC) e E. coli enteropatogênica típica (EPEC-t) e atípica (EPECa). Os genes Stx1 e Stx2 não foram identificados no período de execução do estudo. Conclui-se que a qualidade microbiológica da água no trecho do baixo curso do rio Mearim pertencente a Bacia Hidrográfica do Rio Mearim sofre deterioração caracterizada por elevadas concentrações de coliformes totais, E. coli e diversificados patótipos diarreiogênicos (ETEC, EPEC-t e EPECa). A confirmação desse grupo de micro-organismos patogênicos representa risco epidemiológico, comprometendo diversos usos desse recurso hídrico, como a irrigação de frutas e hortaliças ingeridas cruas, pesca, dessedentação animal e recreação. Investimentos estruturais em saneamento básico são fundamentais para minimizar a degradação ambiental resultante das atividades antrópicas e para atuar preventivamente na saúde única. Adicionalmente, a recuperação das matas ciliares ao longo da bacia hidrográfica e manutenção da vegetação nestas áreas são medidas efetivas na redução do transporte de partículas do solo para os cursos dágua, e em consequência, acarreta a melhoria das características qualiquantitativas da água.

The Mearim River Basin stands out for its social, economic, environmental, energetic and cultural importance, especially for small rural producers who use this water source in agroproductive activities and for artisanal fishermen who withdraw their food and sustenance from this water resource. In this sense, the objective was to research diarrheagenic Escherichia coli in water of multiple uses as a model of single health surveillance. To carry out the study, water samples were collected at five points previously selected for the municipalities of Arari and Vitória do Mearim, state of Maranhão, which corresponded to an area of the lower course of the Mearim River. Samples were collected in triplicate from each point, totaling 30 samples, 15 samples per municipality. The samples were collected in sterile borosilicate glass bottles, with a capacity of 500 mL, in an aseptic manner and stored under sunlight in isothermal boxes with recyclable ice. For the quantification of total coliforms and E. coli, the enzymatic chromogenic system (Colilert, Idexx, USA) was used and the positive samples in this test proceeded to isolate and confirm the bacterium under study by means of conventional methodology (enrichment of the samples and biochemical identification of isolated colonies). DNA extraction from pure E. coli cultures was performed by heating followed by characterization using polymerase chain reaction (PCR) using the GoTaq® Colorless Master Mix Kit (Promega®) according to the manufacturer's recommendations. Of the analyzed samples, 100% (n = 30) had total coliforms with bacterial populations that varied from 7,701 to 24,196 NMP/100 mL for the municipality of Arari and 3,524 to 24,196 NMP/100 mL for Vitória do Mearim. In six sampled points, one point in the municipality of Arari (P3) and all points in Vitória do Mearim (P1 to P5), totaling 60% (n = 18) of the analyzed samples, one can verify average values of E. coli above the maximum limit established in Brazilian environmental legislation. Of the 10 sampled points, two different bacterial morphotypes were isolated from each sample, characterized by pink and colorless / transparent colonies. The different bacterial morphotypes were transferred to biochemical tests in which it was possible to verify the biochemical characteristics of 20 isolates compatible with the E. coli bacterium. Of these, virulence genes characteristic of E. coli enterotoxigenic (ETEC) and typical E. coli enteropathogenic (EPEC-t) and atypical (EPEC-a) were detected. The Stx1 and Stx2 genes were not identified at the time of the study. It is concluded that the microbiological quality of the water in the stretch of the low course of the Mearim River belonging to the Mearim River Basin suffers deterioration characterized by high concentrations of total coliforms, E. coli and diverse diarrhogenic genotypes (ETEC, EPEC-t and EPEC- The). The confirmation of this group of pathogenic microorganisms represents an epidemiological risk, compromising several uses of this water resource, such as irrigation of raw ingested fruits and vegetables, fishing, animal drinking and recreation. Structural investments in basic sanitation are fundamental to minimize the environmental degradation resulting from human activities and to act preventively in unique health. Additionally, the recovery of riparian forests along the hydrographic basin and the maintenance of vegetation in these areas are effective measures in reducing the transport of soil particles to water courses, and consequently, lead to the improvement of the qualitative and quantitative characteristics of the water

Escherichia coli POTENCIALMENTE PATOGÊNICA NA CADEIA DE PRODUÇÃO DE QUEIJO ELABORADO A PARTIR DE LEITE CRU

Escherichia coli em alimentos pode indicar contaminação microbiana de origem fecal e, portanto condições sanitárias insatisfatórias. Diversas linhagens são comprovadamente patogênicas aos seres humanos e animais. Assim, a pesquisa laboratorial de Escherichia coli auxilia na detecção do real risco de uma toxinfecção alimentar. Objetivou-se avaliar a presença de E. coli na cadeia produtiva de queijos elaborados a partir de leite cru. Para isso, colheu-se amostras em cinco pequenas propriedades leiteiras, produtoras de queijos elaborados a partir de leite cru, da região do Município de Jaboticabal, nordeste do Estado de São Paulo. Foram analisadas amostras de fezes bovinas, água da sala de ordenha e de manipulação dos queijos, leite, mão do ordenhador, balde ou superfície interna da teteira utilizada na ordenha mecânica, utensílios de produção do queijo, superfície de manipulação, mão do manipulador do queijo, soro do queijo e queijo. Através da reação em cadeia da polimerase (PCR) buscou-se 20 genes de virulência para diferentes E. coli patogênicas: patogênica extra intestinal (ExPEC), shigatoxigênica (STEC), enteropatogênica (EPEC), enterotoxigênica (ETEC), enteroinvasiva (EIEC) e enteroagregativa (EAEC). Após análise de 100 amostras (20 amostras de cada propriedade), detectou-se isolados potencialmente ExPEC em leite, fezes, balde, água, tubulação de ordenha mecânica, superfíc

Escherichia coli POTENCIALMENTE PATOGÊNICA NA CADEIA DE PRODUÇÃO DE QUEIJO ELABORADO A PARTIR DE LEITE CRU

Escherichia coli em alimentos pode indicar contaminação microbiana de origem fecal e, portanto condições sanitárias insatisfatórias. Diversas linhagens são comprovadamente patogênicas aos seres humanos e animais. Assim, a pesquisa laboratorial de Escherichia coli auxilia na detecção do real risco de uma toxinfecção alimentar. Objetivou-se avaliar a presença de E. coli na cadeia produtiva de queijos elaborados a partir de leite cru. Para isso, colheu-se amostras em cinco pequenas propriedades leiteiras, produtoras de queijos elaborados a partir de leite cru, da região do Município de Jaboticabal, nordeste do Estado de São Paulo. Foram analisadas amostras de fezes bovinas, água da sala de ordenha e de manipulação dos queijos, leite, mão do ordenhador, balde ou superfície interna da teteira utilizada na ordenha mecânica, utensílios de produção do queijo, superfície de manipulação, mão do manipulador do queijo, soro do queijo e queijo. Através da reação em cadeia da polimerase (PCR) buscou-se 20 genes de virulência para diferentes E. coli patogênicas: patogênica extra intestinal (ExPEC), shigatoxigênica (STEC), enteropatogênica (EPEC), enterotoxigênica (ETEC), enteroinvasiva (EIEC) e enteroagregativa (EAEC). Após análise de 100 amostras (20 amostras de cada propriedade), detectou-se isolados potencialmente ExPEC em leite, fezes, balde, água, tubulação de ordenha mecânica, superfíc

Associação entre fatores de virulência e resistência antimicrobiana de Escherichia coli enterotoxigênicas isoladas de leitões com diarreia no Brasil / Association between virulence factors and antimicrobial resistance from enterotoxigenic Escherichia coli isolated from pigs with diarrhea in Brazil

Background: Enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) is the etiologic agent of post weaning colibacillosis, one of the most important diseases in pig farming. The pathogenesis of the disease is associated with two virulence factors (VF), fimbriae and enterotoxins. In veterinary medicine, the use of antibiotics can lead to the selection of resistant bacteria. The association of VF and antibiotic resistance is an important mechanism for bacterial survival under adverse conditions. This study aimed to determine the VF and antimicrobial susceptibility of ETEC isolates from piglets with diarrhea and analyze the association between these factors.Materials, Methods & Results: A total of 185 rectal swabs were collected from weaned piglets in Brazilian farms of the states of Rio Grande do Sul, Santa Catarina, Paraná, Minas Gerais and Goiás. The isolation of ETEC was carried out on blood and MacConkey Agar and characterization by biochemical tests and detection by PCR of fimbrial genes F4, F45, F6, F18 and F41, and toxins genes LT, STa, STb and STx2e. Antimicrobial susceptibility profiles were determined by Agar diffusion test for amoxicillin, ampicillin, ceftiofur, ciprofloxacin, colistin, doxycycline, enrofloxacin, florfenicol, gentamicin, neomycin, norfloxacin, oxytetracycline, streptomycin, tetracycline, lincomycin + spectinomycin and sulfamethoxazole + trimethoprim. The association between VF and antimicrobials resistance results was determined by Chi-square and Fisher test (P ≤ 0.05). A total of 376 isolates were analyzed. The frequencies of fimbriae and toxins amplified were: F4 (31.6%), F18 (18.9%), F5 (4.2%) and toxins STa (43.1%), STb (24.7%), LT (21.8%) and STx2e (5.3%). Antibiotic resistance was higher to tetracycline (96.3%), florfenicol (95.2%), oxytetracycline (93.62%) and doxycycline (90.7%). Lowest levels of resistance were to ceftiofur (2.1%), colistin (9.8%), lincomycin + spectinomicin (15.4%) and neomycin (23.1%).[...](AU)