Resumo
PURPOSE: To evaluate the bowel lesions of rats after immunization against self intestinal proteins. METHODS: A 40% colonic solution was made in pH 7,4 PBS, followed by maceration, purification, inactivation and SDS-PAGE electrophoresis. Twenty Wistar rats were submitted to the following immunization schedule: Subcutaneous and intramuscular sensibilization with antigen solution emulsified in Freund's complete adjuvant. Intramuscular booster with pure antigen suspension. In this phase, were investigated anti-intestinal antibodies by single radial immunodiffusion and histologic evaluation of colon samples. Challenge by intraperitoneal route with antigenic solution and clinical observation. The animals were sacrificed and had collected colon samples for histologic evaluation. RESULTS: The antigenic suspension presented eight protein with molecular weight between 80 and 420 kD. After six days of the intraperitoneal challenge they had presented: blepharitis, diarrhea, alopecia, apathy and hematochezia. Histological evaluation of this immunological IBD animal model showed ulceration of distal colon, mucosa leucocyte infiltration, edema in submucosa layer and significant crypts degeneration. Anti-intestinal antibodies were present in all of animals. CONCLUSION: It was concluded that was possible to reproduce IBD in rats, as well as the presence of anti-intestinal antibodies was related to histologic features of colon in immunizated rats.
OBJETIVO: Avaliar as lesões intestinais em ratos imunizados com proteínas intestinais murinas. MÉTODOS: Preparou-se suspensão a 40% de cólon de ratos normais em PBS pH7,4, seguida de maceração, purificação, inativação e eletrofocalização de proteínas. Com esta suspensão 20 ratos Wistar foram imunizados conforme as seguintes fases: sensibilização via SC e IM com antígeno emulsificado em adjuvante completo de Freund. Reforços via IM com suspensão antigênica pura. Nesta fase foram pesquisados anticorpos séricos anti-tecido colônico por imunodifusão e face à positividade, dez ratos foram submetidos à avaliação histológica do cólon e em outros dez, inoculação via IP com suspensão antigênica pura. Após seis dias apresentaram: blefarite, diarréia, apatia, hematoquesia e então submetidos à coleta de amostras do cólon para avaliação histológica. RESULTADOS: A suspensão antigênica apresentou oito bandas de proteínas, entre 100 a 420 kD. Nas amostras de cólon observaram-se histologicamente perda de criptas, edema da camada sub-mucosa e inflamação aguda. CONCLUSÃO: Foi possível reproduzir doença inflamatória intestinal em ratos a partir de imunização com antígenos protéicos intestinais da própria espécie. A presença de anticorpos séricos anti-intestino foi relacionada com as alterações histológicas encontradas no cólon de ratos imunizados.
Resumo
SUMMARY The qualitative analyse of Bohr effect by isoelectric focusing on polyacrilamide gel from hemolysed of the seven species hemoglobins of Loricariidae and Callicthidae family of Amazon River have a heterogeneous effect. Some of them have shown hemoglobins with isoelectric point which increase when the protein is in deoxygenated state in comparison to the carboxy state, likely human hemoglobin. Others presented its hemoglobins in the deoxy state without any change in the PI or have presented an decrease in such as value. The changes in isoelectric point when the carboxyhemoglobin was comproved with the deoxyhemoglobin have been used as Bohr effect's indicator. Thus, Pterygoplychthis pardalis presents a reverse Bohr effect that was confirmed by oxygen equilibrium analysis. Plecostomus; Canthoporus and Hoplosternum throcatum showed hemoglobins with normal Bohr effect. On the other hand Sturisoma robustum presented one hemoglobin component with normal and others with reverse Bohr effects. A close relationship between Bohr effect analysed by this methodology and that usually done by equilibrium studies could be observed. The heterogeneous Bohr effect could be correlated with the habitat or their ability to survive in hypoxic environment.
Resumo A análise qualitativa do efeito Bohr por eletrofocalização em gel de poliacrilamida dos hemolisados de sete espécies das famílias Loricariidae e Callicthidae da Amazônia Central nos revelou uma natureza diversa deste efeito. Algumas hemoglobinas destas espécies mostraram um incremento no ponto isoelétrico (PI) da forma deoxigenada em comparação à forma carboxy, como ocorre com a hemoglobina humana. Outras espécies contudo tiveram suas hemoglobinas com PI diminuído e ainda em outras espécies foi observado alteração no PI de somente um dos componentes. A modificação no PI das forma deoxy da hemoglobina correlacionada com a presença ou não de efeito Bohr normal ou ainda com efeito Bohr reverso. Pterygoplichtys pardalis apresenta efeito Bohr reverso por este método o qual foi comprovado por estudos de equilíbrio de oxigenação de suas hemoglobinas. Plecostomus e Hoplosternum thorocatum apresentaram componentes com efeito Bohr normal. Já em Sturisoma robustum observou-se a presença de alguns componentes com efeito Bohr reverso e de outros com efeito Bohr normal; enquanto que em Canthoporus genibarbis somente a presença de efeito Bohr normal pode ser encontrado. Esta variabilidade de efeitos Bohrs achados poderiam relacionar-se com o habitat destas espécies ou com sua habilidade para sobreviver em ambientes hipóxicos.
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SUMMARY The qualitative analyse of Bohr effect by isoelectric focusing on polyacrilamide gel from hemolysed of the seven species hemoglobins of Loricariidae and Callicthidae family of Amazon River have a heterogeneous effect. Some of them have shown hemoglobins with isoelectric point which increase when the protein is in deoxygenated state in comparison to the carboxy state, likely human hemoglobin. Others presented its hemoglobins in the deoxy state without any change in the PI or have presented an decrease in such as value. The changes in isoelectric point when the carboxyhemoglobin was comproved with the deoxyhemoglobin have been used as Bohr effect's indicator. Thus, Pterygoplychthis pardalis presents a reverse Bohr effect that was confirmed by oxygen equilibrium analysis. Plecostomus; Canthoporus and Hoplosternum throcatum showed hemoglobins with normal Bohr effect. On the other hand Sturisoma robustum presented one hemoglobin component with normal and others with reverse Bohr effects. A close relationship between Bohr effect analysed by this methodology and that usually done by equilibrium studies could be observed. The heterogeneous Bohr effect could be correlated with the habitat or their ability to survive in hypoxic environment.
Resumo A análise qualitativa do efeito Bohr por eletrofocalização em gel de poliacrilamida dos hemolisados de sete espécies das famílias Loricariidae e Callicthidae da Amazônia Central nos revelou uma natureza diversa deste efeito. Algumas hemoglobinas destas espécies mostraram um incremento no ponto isoelétrico (PI) da forma deoxigenada em comparação à forma carboxy, como ocorre com a hemoglobina humana. Outras espécies contudo tiveram suas hemoglobinas com PI diminuído e ainda em outras espécies foi observado alteração no PI de somente um dos componentes. A modificação no PI das forma deoxy da hemoglobina correlacionada com a presença ou não de efeito Bohr normal ou ainda com efeito Bohr reverso. Pterygoplichtys pardalis apresenta efeito Bohr reverso por este método o qual foi comprovado por estudos de equilíbrio de oxigenação de suas hemoglobinas. Plecostomus e Hoplosternum thorocatum apresentaram componentes com efeito Bohr normal. Já em Sturisoma robustum observou-se a presença de alguns componentes com efeito Bohr reverso e de outros com efeito Bohr normal; enquanto que em Canthoporus genibarbis somente a presença de efeito Bohr normal pode ser encontrado. Esta variabilidade de efeitos Bohrs achados poderiam relacionar-se com o habitat destas espécies ou com sua habilidade para sobreviver em ambientes hipóxicos.