Histology and histochemistry of the accessory gland of the female reproductive tract of Rhodnius neglectus Lent, 1954 (Hemiptera: Reduviidae) / Histologia e histoquímica das glândulas acessórias do sistema reprodutor feminino de Rhodnius neglectus Lent, 1954 (Hemiptera: Reduviidae)

Rhodnius neglectus is a wild triatomine, vector of the protozoan Trypanosoma cruzi, which causes Chagas' disease, and feeds on the blood of small mammals, being essential for its growth and reproduction. Accessory glands of the female reproductive tract are important in insect reproduction, but their anatomy and histology in R. neglectus are poorly studied. The aim of this work was to describe the histology and histochemistry of the accessory gland of the female reproductive tract of R. neglectus. The reproductive tract of five females of R. neglectus was dissected and the accessory glands transferred to Zamboni's fixative solution, dehydrated in a crescent series of ethanol, embedded in historesin, sectioned at 2 µm thick, stained with toluidine blue for histological analysis or mercury bromophenol blue for detection of total proteins. The accessory gland R. neglectus is tubular, without branches, opening in the dorsal region of the vagina and differing along its length in proximal and distal regions. In the proximal region, the gland is lined by the cuticle with a layer of columnar cells associated with muscle fibers. In the distal region of the gland, the epithelium has spherical secretory cells with terminal apparatus and conducting canaliculi opening in the lumen through pores in the cuticle. Proteins were identified in the gland lumen, terminal apparatus, nucleus and cytoplasm of secretory cells. The histology of the R. neglectus gland is similar to that found in other species of this genus, but with variations in the shape and size of its distal region.

Rhodnius neglectus é um triatomíneo silvestre, vetor do protozoário Trypanosoma cruzi, causador da doença de Chagas. Este inseto se alimenta do sangue de pequenos mamíferos, que é essencial para o seu crescimento e reprodução. As glândulas acessórias do sistema reprodutor feminino são importantes na reprodução de insetos, mas sua anatomia e histologia em R. neglectus são pouco conhecidas. O objetivo deste trabalho foi descrever a histologia e histoquímica da glândula acessória do aparelho reprodutor feminino de R. neglectus. O sistema reprodutor de cinco fêmeas de R. neglectus foi dissecado e as glândulas acessórias transferidas para solução fixadora de Zamboni, desidratadas em série crescente de etanol, embebidas em historesina, seccionadas com 2 µm de espessura, coradas com azul de toluidina para análise histológica ou submetidas ao teste de mercúrio-bromofenol para detecção de proteínas totais. O sistema reprodutor de R. neglectus tem uma glândula acessória tubular, sem ramificações, abrindo-se na região dorsal da vagina, sendo diferenciada em regiões proximal e distal. Na região proximal, a glândula é revestida internamente pela cutícula com uma camada de células colunares associadas a fibras musculares. Na região distal ocorrem células secretoras esféricas com aparato terminal e canalículos condutores que se abrem no lúmen da glândula através de poros na cutícula. O teste histoquímico revelou a presença de proteínas no lúmen da glândula e no aparato terminal, núcleo e citoplasma das células secretoras. A histologia da glândula de R. neglectus é semelhante à das espécies desse gênero, mas com variações na forma e no tamanho de sua região distal.

Urethral obstruction due to seminal vesiculitis in a sheep: case report / Obstrução uretral por vesiculite seminal em ovino: relato de caso

We report a case of urethral obstruction due to seminal vesiculitis in a Dorper sheep, with symptoms of anuria, rectal prolapse, orchitis/epididymitis, and uroperitoneum and biochemical tests indicating severe azotemia. The animal died due to advanced azotemia, and necropsy revealed kidneys with cortical and medullary necrosis, pyelonephritis of renal calyces, hydronephrosis, ruptured and necrotic bladder, and vesicular, bulbourethral, and ampoule accessory sex glands. There was prostate hyperplasia that revealed a large amount of pus in the cross section, which was also observed bilaterally in the epididymis and right testis. Morphotintorial and biochemical analyses of bacteria obtained from microbiological culture revealed Corynebacterium sp. and Escherichia coli. Infection, hyperplasia, and abscessation of accessory sex glands caused urethral compression, resulting in an obstructive condition, similar to urolithiasis, in addition to bacteremia. Hyperplastic seminal vesiculitis, although rare, must be included among the differential diagnoses of obstructive processes in the urinary tract of sheep.

Relata-se um caso de obstrução uretral decorrente de vesiculite seminal em carneiro da raça Dorper, com quadro de anúria, prolapso retal, orquite/epididimite e uroperitôneo, com exames bioquímicos indicativos de severa azotemia. Devido ao quadro avançado de azotemia, o animal faleceu e, na necropsia, foi observado:: rins com necrose de cortical e medular, pielonefrite dos cálices renais e hidronefrose, bexiga rompida e necrosada, assim como glândulas sexuais acessórias vesiculares, bulbouretrais e ampola. Havia hiperplasia de próstata que, ao corte transversal, revelou grande quantidade de pus, que também foi observado bilateralmente no epidídimo e no testículo direito. As análises morfotintoriais e bioquímicas das bactérias obtidas a partir do cultivo microbiológico foram compatíveis com Corynebacterium sp. e Escherichia coli. A infecção, a hiperplasia e a abscedação das glândulas sexuais acessória, causaram compressão uretral, levando a um quadro obstrutivo, semelhante à urolitíase, somado à bacteremia. A vesiculite seminal hiperplásica, apesar de rara, deve ser incluída entre os diagnósticos diferenciais dos processos obstrutivos do trato urinário de carneiros.

Avaliação andrológica no garanhão: ênfase no exame interno do sistema genital / Breeding soundness examination in stallions: emphasis on internal assessment of the genital system

A avaliação do sistema genital interno no garanhão é uma importante etapa do exame andrológico, mas ainda é negligenciada na clínica reprodutiva dessa espécie. A maioria das enfermidades que acometem as glândulas sexuais acessórias e a uretra são descritas na literatura como pouco frequentes e até mesmo raras, no entanto a falta de diagnóstico, em muitos casos, contribui para essa estatística. Dentre as enfermidades mais recorrentes se destacam a vesiculite seminal, obstrução de ampola e fistula uretral que podem levar a prejuízos na qualidade seminal e baixa fertilidade. Dessa forma, o objetivo desta revisão é abordar as principais ferramentas de avaliação dos órgãos genitais internos nos machos equinos, visando contribuir para o correto diagnóstico e tratamento das principais afecções que os acometem.(AU)

The evaluation of the internal genital system in stallions is an important step in the breeding soundness exam that is still neglected in the reproductive clinic of this species. Most diseases that affect the accessory sex glands and the urethra are described in the literature as infrequent and even rare, however the lack of diagnosis, in many cases, contributes to this statistic. Among the most recurrent diseases are seminal vesiculitis, plugged ampullae and urethral rent that can lead to decreased seminal quality and low fertility. Thus, the objective of this review is to highlight the main tools for evaluating the internal genitalia in stallions, aiming to contribute to the diagnosis and treatment of the main conditions that affect them.(AU)

Anatomy of soft body of Pugilina cochlidium (Linnaeus, 1758) and P. erecta (Vermeij & Raben, 2009) (Neogastropoda: Melongenidae) from Thondi Coast-Palk Bay in Tamil Nadu, India / Anatomia do corpo mole de Pugilina cochlidium (Linnaeus, 1758) e P. erecta (Vermeij & Raben, 2009) (Neogastropoda: Melongenidae) de Thondi Coast-Palk Bay em Tamil Nadu, na Índia

The species of Pugilina cochlidium (Linnaeus, 1758) and P. erecta (Vermeij & Raben, 2009) has been studied in the present study. The female can be differentiated from the male by the absence of the cephalic penis and a complicated genital aparatus visible through the mantle skirt in both the sexes. In other aspects of the external features of female are quite to males. In both species the digestive system was similar with few differences in structure between each other. It consists of buccal mass, proboscis, salivary glands, accessory salivary glands, oesophagus, stomach, intestine, rectum and anus. The nervous system in both P. cochlidium and P. erecta is constituted by six ganglia which forms the circumoesophgeal ganglionic ring. Among the neogastropods there is a similarity in the organization of the reproductive systems. The female reproductive system is more complicated than that of male. The sexes are separated in these two species. The gross morphology of the reproductive system of P. cochlidium and P. erecta was almost similar. The present study aims to describe the digestive system, nervous system and reproductive system of two gastropods species P. cochlidium and P. erecta.

As espécies de Pugilina cochlidium (Linnaeus, 1758) e P. erecta (Vermeij & Raben, 2009) foram tomadas no presente estudo. A fêmea pode ser diferenciada do macho pela ausência do pênis cefálico e um complicado complexo genital visível através da saia do manto em ambos os sexos. Em outros aspectos das características externas da fêmea são bastante semelhantes aos dos machos. Em ambas as espécies, o sistema digestivo era semelhante, com poucas diferenças de estrutura entre si. Consiste em massa bucal, probóscide, glândulas salivares, glândulas salivares acessórias, esôfago, estômago, intestino, reto e ânus. O sistema nervoso em P. cochlidium e P. erecta é constituído por seis gânglios que formam um anel ganglionar circunoesofágico. Entre os neogastrópodes, há uma semelhança na organização dos sistemas reprodutivos. O sistema reprodutivo feminino é mais complicado que o masculino. Os sexos são separados nessas duas espécies. A morfologia macroscópica do sistema reprodutivo de P. cochlidium e P. erecta foi quase similar. O presente estudo tem como objetivo descrever o sistema digestivo, sistema nervoso e sistema reprodutivo de duas espécies, P. cochlidium e P. erecta.

Influência da orquiectomia na avaliação ultrassonográfica das glândulas anexas de equinos / Influence of orchiectomy on ultrasound assessment of equine accessory glands

A ultrassonografia confere uma avaliação minuciosa do trato reprodutivo de equinos, conferindo relevância no exame andrológico para percepção de higidez ou diagnóstico antecipado de afecções. Portanto, objetivou-se descrever e determinar as mensurações e alterações das glândulas anexas de equinos submetidos à orquiectomia. Garanhões da raça Quarto de Milha (n = 5), com idade de 4-6 anos, foram avaliados por meio de palpação e ultrassonografia transretal previamente à orquiectomia e após, com intervalo de 30, 60 e 90 dias do procedimento. As glândulas bulbouretrais, vesículas seminais e ampolas foram palpadas e delimitadas quanto ao tamanho e higidez. Além disso, procedeu-se o escaneamento e mensuração através da ultrassonografia modo-B, por via transretal. A orquiectomia foi realizada de forma independente ao estudo. Para comparação dos dados utilizou-se o teste T-Student e de Variância (ANOVA). A ultrassonografia mostrou-se eficiente para avaliação e mensuração das ampolas dos ductos deferentes, glândulas vesiculares, bulbouretrais e a próstata de equinos. Considerando as consequências da orquiectomia nas estruturas supracitadas, sugere-se que a mesma não promove hipoplasia das glândulas anexas durante o período de 90 dias após cirurgia. No entanto, apenas as ampolas dos ductos deferentes demonstraram mensurações distintas nesse período, com diminuição significativa associada à orquiectomia.(AU)

Ultrasonography provides a thorough assessment of the reproductive tract of horses, giving relevance to the andrological examination for the perception of health or early diagnosis of conditions. Thus, the objective is to describe the assessment and measurement of the attached glands of horses submitted to orchiectomy. Quarter Horses (n = 5), aged 4-6 years, were assessed by palpation and transrectal ultrasound prior to orchiectomy and after 30, 60 and 90 days after the procedure. Bulbourethral glands, seminal vesicles and ampoules were palpated and delimited in terms of size and health. In addition, scanning and measurement was carried out using B-mode ultrasound, linear probe, frequency of 7.5 Hz, by transrectal approach. Orchiectomy was performed independently from the study. To compare the data, was used T-Student and Variance test (ANOVA). The ultrasonography proved to be efficient for evaluating and measuring the ampoules of the vas deferens, vesicular gland, bulbourethral and the prostate of horses. Considering the consequences of orchiectomy on the aforementioned structures, it is suggested that it does not promote hypoplasia of the attached glands during the period of 90 days after surgery. However, only the ampoules of the vas deferens showed different measurements during this period, with a significant decrease associated with orchiectomy.(AU)

Influência da orquiectomia na avaliação ultrassonográfica das glândulas anexas de equinos / Influence of orchiectomy on ultrasound assessment of equine accessory glands

A ultrassonografia confere uma avaliação minuciosa do trato reprodutivo de equinos, conferindo relevância no exame andrológico para percepção de higidez ou diagnóstico antecipado de afecções. Portanto, objetivou-se descrever e determinar as mensurações e alterações das glândulas anexas de equinos submetidos à orquiectomia. Garanhões da raça Quarto de Milha (n = 5), com idade de 4-6 anos, foram avaliados por meio de palpação e ultrassonografia transretal previamente à orquiectomia e após, com intervalo de 30, 60 e 90 dias do procedimento. As glândulas bulbouretrais, vesículas seminais e ampolas foram palpadas e delimitadas quanto ao tamanho e higidez. Além disso, procedeu-se o escaneamento e mensuração através da ultrassonografia modo-B, por via transretal. A orquiectomia foi realizada de forma independente ao estudo. Para comparação dos dados utilizou-se o teste T-Student e de Variância (ANOVA). A ultrassonografia mostrou-se eficiente para avaliação e mensuração das ampolas dos ductos deferentes, glândulas vesiculares, bulbouretrais e a próstata de equinos. Considerando as consequências da orquiectomia nas estruturas supracitadas, sugere-se que a mesma não promove hipoplasia das glândulas anexas durante o período de 90 dias após cirurgia. No entanto, apenas as ampolas dos ductos deferentes demonstraram mensurações distintas nesse período, com diminuição significativa associada à orquiectomia.

Ultrasonography provides a thorough assessment of the reproductive tract of horses, giving relevance to the andrological examination for the perception of health or early diagnosis of conditions. Thus, the objective is to describe the assessment and measurement of the attached glands of horses submitted to orchiectomy. Quarter Horses (n = 5), aged 4-6 years, were assessed by palpation and transrectal ultrasound prior to orchiectomy and after 30, 60 and 90 days after the procedure. Bulbourethral glands, seminal vesicles and ampoules were palpated and delimited in terms of size and health. In addition, scanning and measurement was carried out using B-mode ultrasound, linear probe, frequency of 7.5 Hz, by transrectal approach. Orchiectomy was performed independently from the study. To compare the data, was used T-Student and Variance test (ANOVA). The ultrasonography proved to be efficient for evaluating and measuring the ampoules of the vas deferens, vesicular gland, bulbourethral and the prostate of horses. Considering the consequences of orchiectomy on the aforementioned structures, it is suggested that it does not promote hypoplasia of the attached glands during the period of 90 days after surgery. However, only the ampoules of the vas deferens showed different measurements during this period, with a significant decrease associated with orchiectomy.

Vesiculite seminal em garanhões / Seminal vesiculitis in stallions / Vesiculitis seminal en padrillos

Os garanhões possuem um conjunto completo de glândulas sexuais acessórias, compostas pelas bulbouretrais, a próstata, vesículas seminais e ampolas dos ductos deferentes. Dentre as afecções que acometem essas estruturas, a vesiculite seminal é a de maior ocorrência, consistindo na colonização de uma ou ambas as vesículas por bactérias, sendo a Pseudomonas aeruginosaa mais frequente. No ejaculado é observada uma grande percentagem de neutrófilos e, eventualmente, hemácias podem estar presentes, caracterizando os quadros de piospermia e hemospermia, respectivamente. O diagnóstico definitivo é realizado por meio da endoscopia transuretral das vesículas, onde é possível visualizar o conteúdo purulento, associado à cultura bacteriana do lavado da glândula. O tratamento é desafiador, pois a antibioticoterapia apresenta baixa eficácia, com altas taxas de recidiva.

Stallions have a complete set of accessory sex glands, composed of the bulbourethral, prostate gland, seminal vesicles and ampullae. Among the conditions that affect these structures, seminal vesiculitis is the most common, consisting the colonization of one or both vesicles by bacteria, whose Pseudomonas aeruginosa is the most frequent. In ejaculate, a large percentage of neutrophils and, eventually, red blood cells may be present, characterizing piospermia and hemospermia, respectively. The definitive diagnosis is made through the transurethral endoscopy evaluation of the seminal vesicles, where it is possible to visualize the purulent content, associated to gland lavage and bacterial culture. Treatment is challenging because antibiotic therapy has low efficacy, with a high relapse rate.

Los padrillos tienen un conjunto completo de glándulas sexuales accesorias, compuestas por las bulbouretrales, la próstata, las vesículas seminales y las ampollas del conducto deferente. Entre las condiciones que afectan estas estructuras, la vesiculitis seminales la más común, que consiste en la colonización de una o ambas vesículas por bacterias, siendo Pseudomonas aeruginosala más frecuente. En la eyaculación del eyaculado, puede estar presente un gran porcentaje de neutrófilos y, eventualmente, glóbulos rojos, caracterizando la piospermia y la hemospermia, respectivamente. El diagnóstico definitivo se realiza a través de la endoscopia transuretral de las vesículas, donde es posible visualizar el contenido purulento asociado con el cultivo bacteriano del lavado de la glándula. El tratamiento es desafiante porque la terapia con antibióticos tiene baja eficácia, con altas tasas de recaída.

Vesiculite seminal em garanhões / Seminal vesiculitis in stallions / Vesiculitis seminal en padrillos

Os garanhões possuem um conjunto completo de glândulas sexuais acessórias, compostas pelas bulbouretrais, a próstata, vesículas seminais e ampolas dos ductos deferentes. Dentre as afecções que acometem essas estruturas, a vesiculite seminal é a de maior ocorrência, consistindo na colonização de uma ou ambas as vesículas por bactérias, sendo a Pseudomonas aeruginosaa mais frequente. No ejaculado é observada uma grande percentagem de neutrófilos e, eventualmente, hemácias podem estar presentes, caracterizando os quadros de piospermia e hemospermia, respectivamente. O diagnóstico definitivo é realizado por meio da endoscopia transuretral das vesículas, onde é possível visualizar o conteúdo purulento, associado à cultura bacteriana do lavado da glândula. O tratamento é desafiador, pois a antibioticoterapia apresenta baixa eficácia, com altas taxas de recidiva.(AU)

Stallions have a complete set of accessory sex glands, composed of the bulbourethral, prostate gland, seminal vesicles and ampullae. Among the conditions that affect these structures, seminal vesiculitis is the most common, consisting the colonization of one or both vesicles by bacteria, whose Pseudomonas aeruginosa is the most frequent. In ejaculate, a large percentage of neutrophils and, eventually, red blood cells may be present, characterizing piospermia and hemospermia, respectively. The definitive diagnosis is made through the transurethral endoscopy evaluation of the seminal vesicles, where it is possible to visualize the purulent content, associated to gland lavage and bacterial culture. Treatment is challenging because antibiotic therapy has low efficacy, with a high relapse rate.(AU)

Los padrillos tienen un conjunto completo de glándulas sexuales accesorias, compuestas por las bulbouretrales, la próstata, las vesículas seminales y las ampollas del conducto deferente. Entre las condiciones que afectan estas estructuras, la vesiculitis seminales la más común, que consiste en la colonización de una o ambas vesículas por bacterias, siendo Pseudomonas aeruginosala más frecuente. En la eyaculación del eyaculado, puede estar presente un gran porcentaje de neutrófilos y, eventualmente, glóbulos rojos, caracterizando la piospermia y la hemospermia, respectivamente. El diagnóstico definitivo se realiza a través de la endoscopia transuretral de las vesículas, donde es posible visualizar el contenido purulento asociado con el cultivo bacteriano del lavado de la glándula. El tratamiento es desafiante porque la terapia con antibióticos tiene baja eficácia, con altas tasas de recaída.(AU)

Ocorrência de alterações das glândulas sexuais acessórias de touros de rodeio através do exame ultrassonográfico / Occurrence of alterations in the accessory sex glands of rodeo bulls accessed by ultrasound examination

Objetivou-se com o presente estudo determinar a ocorrência de alterações das glândulas sexuais acessórias de touros de rodeio através da ultrassonografia transretal. Touros mestiços (n = 118) foramavaliados através da palpação e ultrassonografia transretal. As glândulas sexuais acessórias (próstata, ampolas dos ductos deferentes e vesículas seminais) foram palpadas e delimitadas quanto ao tamanho e higidez. Após, tais glândulas foram avaliadas e mensuradas de ponta a ponta com ultrassom (Sonoscape®, China), probe linear, modo-B, com frequência de 7,5 Hz, por via transretal. A ocorrência de alterações das vesículas seminais direita e esquerda foi de 44,91 %. A assimetria vesicular leve obteve a prevalência de 47,17 %, a moderada de 5,66 % e grave cerca de 47,17 %. A medida média da ampola foi de 9 mm. A ocorrência de alterações das ampolas direita e esquerda foi de 6,78 %, nos quais as alterações na próstata foi de 17,8 %. Assim, cerca de 10,17 % dos touros apresentaram redução da sensibilidade da próstata e no que diz respeito a ausência de sensibilidade dessa glândula, cerca de 7,63%. Conclui-se que o exame ultrassonográfico pode auxiliar em melhor acuidade no exame das glândulas sexuais acessórias em touros de rodeio.(AU)

The objective of this study was to determine the occurrence of alterations of the rodeo bull accessory sex glands by transrectal ultrasound. Crossbred bulls (n = 118) were evaluated by palpation and transrectal ultrasound. The accessory sex glands (prostate, ampoules and seminal vesicles) were palpated and delimited for size and higidity. Afterwards, these glands were scanned and measured from end to end with ultrasound (Sonoscape®, China), linear probe, B-mode, with frequency of 7.5 Hz, transrectally. The occurrence of right and left seminal vesicle alterations was 44.91%. Mild vesicularasymmetry was prevalent at 47.17%, moderate at 5.66% and severe at 47.17%. The mean ampoule measurement was 9 mm. Changes in right and left ampoules were 6.78%, in which prostate changes were 17.8%. Besides, about 10.17% of bulls had reduced prostate sensitivity and about 7.63% lack of sensitivity of this gland. It is concluded that the ultrasound examination may help in better accuracy in the examination of the accessory sex glands in rodeo bulls.(AU)

Ocorrência de alterações das glândulas sexuais acessórias de touros de rodeio através do exame ultrassonográfico / Occurrence of alterations in the accessory sex glands of rodeo bulls accessed by ultrasound examination

Objetivou-se com o presente estudo determinar a ocorrência de alterações das glândulas sexuais acessórias de touros de rodeio através da ultrassonografia transretal. Touros mestiços (n = 118) foramavaliados através da palpação e ultrassonografia transretal. As glândulas sexuais acessórias (próstata, ampolas dos ductos deferentes e vesículas seminais) foram palpadas e delimitadas quanto ao tamanho e higidez. Após, tais glândulas foram avaliadas e mensuradas de ponta a ponta com ultrassom (Sonoscape®, China), probe linear, modo-B, com frequência de 7,5 Hz, por via transretal. A ocorrência de alterações das vesículas seminais direita e esquerda foi de 44,91 %. A assimetria vesicular leve obteve a prevalência de 47,17 %, a moderada de 5,66 % e grave cerca de 47,17 %. A medida média da ampola foi de 9 mm. A ocorrência de alterações das ampolas direita e esquerda foi de 6,78 %, nos quais as alterações na próstata foi de 17,8 %. Assim, cerca de 10,17 % dos touros apresentaram redução da sensibilidade da próstata e no que diz respeito a ausência de sensibilidade dessa glândula, cerca de 7,63%. Conclui-se que o exame ultrassonográfico pode auxiliar em melhor acuidade no exame das glândulas sexuais acessórias em touros de rodeio.

The objective of this study was to determine the occurrence of alterations of the rodeo bull accessory sex glands by transrectal ultrasound. Crossbred bulls (n = 118) were evaluated by palpation and transrectal ultrasound. The accessory sex glands (prostate, ampoules and seminal vesicles) were palpated and delimited for size and higidity. Afterwards, these glands were scanned and measured from end to end with ultrasound (Sonoscape®, China), linear probe, B-mode, with frequency of 7.5 Hz, transrectally. The occurrence of right and left seminal vesicle alterations was 44.91%. Mild vesicularasymmetry was prevalent at 47.17%, moderate at 5.66% and severe at 47.17%. The mean ampoule measurement was 9 mm. Changes in right and left ampoules were 6.78%, in which prostate changes were 17.8%. Besides, about 10.17% of bulls had reduced prostate sensitivity and about 7.63% lack of sensitivity of this gland. It is concluded that the ultrasound examination may help in better accuracy in the examination of the accessory sex glands in rodeo bulls.

Colheita Fracionada E Seus Principais Benefícios Na Criopreservação Do Sêmen De Garanhões / Fractionated Collection And Their Main Benefits In The Stallion Sperm Cryopreservation / Cosecha Fraccionada Y Sus Principales Beneficios En La Criopreservación De Semen De Caballos

As colheitas de sêmen em equinos são realizadas de forma convencional, com vagina artificial fechada, em que todas as frações se misturam. No entanto, a colheita de sêmen de forma fracionada, separa as diferentes frações do ejaculado, cada uma dessas frações possuem uma maior ou menor quantidade de plasma seminal, sendo as glândulas sexuais acessórias responsáveis por sua produção. Cada garanhão possui características individuais com relação à manutenção das células espermáticas durante a criopreservação, essas características podem estar relacionadas à produção do plasma seminal, assim como dos vários componentes. Sabe-se que existe um efeito deletério desempenhado pelos componentes do plasma seminal produzido principalmente pelas vesículas seminais, aos espermatozoides durante o processo de criopreservação, porém, esses fatores ainda são desconhecidos. Várias hipóteses são sugeridas, tais como, a redução na produção de lipídeos e os tipos de proteínas e íons presentes em cada uma das frações do ejaculado. Sabendo disso, a colheita fracionada pode trazer benefícios aos espermatozoides, de forma que as primeiras frações não tenham contato com o plasma seminal produzido pelas vesículas seminais, possibilitando uma melhor manutenção espermática durante a criopreservação.(AU)

Equine semen is collected by conventional way, with a closed artificial vagina, where all the fractions are mixed. However, semen collection discontinuously, separating the different fractions of the ejaculate, each of these fractions have a greater or lesser amount of seminal plasma, being the sex accessory glands responsible for their production. Each stud has individual characteristics with respect to the maintenance of sperm cells during the cryopreservation, these characteristics may be related to production of seminal plasma as well as the various components making up. It is known that there is a deleterious effect played by components of seminal plasma mainly produced by the seminal vesicles, the sperm cells during the cryopreservation process, however, these factors are still unknown. Several hypotheses are suggested such as reducing the production of lipids and proteins and the types of ions present in each fraction of the ejaculate. Knowing this, the fractional harvest can be beneficial to sperm, so that the first fraction have no contact with seminal plasma produced by the seminal vesicles, allowing for better maintenance sperm during cryopreservation.(AU)

Las cosechas convencionales de semen equino, son realizadas con vagina artificial cerrada, donde todas las fracciones seminales quedan mescladas. No obstante, la colecta de semen de forma dividida o fraccionada, separa las diferentes “fracciones” del eyaculado. Fracciones que contiene una mayor o menor cantidad de plasma seminal, siendo las glándulas sexuales accesorias responsables por su producción. Cada reproductor posee características individuales con relación al mantenimiento de las células espermáticas durante la criopreservación, características que pueden estar relacionadas a la producción del plasma seminal, o a alguno de sus componentes. Es conocido la existencia de un efecto deletéreo desempeñado por los componentes del plasma seminal, producido principalmente por las vesículas seminales a los espermatozoides durante el proceso de criopreservación. Sin embargo, esos factores se desconocen. Varias hipótesis son sugeridas, tales como, reducción en la producción de lípidos y los tipos de proteínas e iones presentes en cada una de las fracciones del eyaculado. Sabiendo esto, la cosecha fraccionada puede traer beneficios a los espermatozoides, de forma que las primeras fracciones no tengan contacto con el plasma seminal producido por las vesículas seminales, posibilitando una mejor manutención espermática durante la criopreservación.(AU)

Colheita Fracionada E Seus Principais Benefícios Na Criopreservação Do Sêmen De Garanhões / Fractionated Collection And Their Main Benefits In The Stallion Sperm Cryopreservation / Cosecha Fraccionada Y Sus Principales Beneficios En La Criopreservación De Semen De Caballos

As colheitas de sêmen em equinos são realizadas de forma convencional, com vagina artificial fechada, em que todas as frações se misturam. No entanto, a colheita de sêmen de forma fracionada, separa as diferentes frações do ejaculado, cada uma dessas frações possuem uma maior ou menor quantidade de plasma seminal, sendo as glândulas sexuais acessórias responsáveis por sua produção. Cada garanhão possui características individuais com relação à manutenção das células espermáticas durante a criopreservação, essas características podem estar relacionadas à produção do plasma seminal, assim como dos vários componentes. Sabe-se que existe um efeito deletério desempenhado pelos componentes do plasma seminal produzido principalmente pelas vesículas seminais, aos espermatozoides durante o processo de criopreservação, porém, esses fatores ainda são desconhecidos. Várias hipóteses são sugeridas, tais como, a redução na produção de lipídeos e os tipos de proteínas e íons presentes em cada uma das frações do ejaculado. Sabendo disso, a colheita fracionada pode trazer benefícios aos espermatozoides, de forma que as primeiras frações não tenham contato com o plasma seminal produzido pelas vesículas seminais, possibilitando uma melhor manutenção espermática durante a criopreservação.

Equine semen is collected by conventional way, with a closed artificial vagina, where all the fractions are mixed. However, semen collection discontinuously, separating the different fractions of the ejaculate, each of these fractions have a greater or lesser amount of seminal plasma, being the sex accessory glands responsible for their production. Each stud has individual characteristics with respect to the maintenance of sperm cells during the cryopreservation, these characteristics may be related to production of seminal plasma as well as the various components making up. It is known that there is a deleterious effect played by components of seminal plasma mainly produced by the seminal vesicles, the sperm cells during the cryopreservation process, however, these factors are still unknown. Several hypotheses are suggested such as reducing the production of lipids and proteins and the types of ions present in each fraction of the ejaculate. Knowing this, the fractional harvest can be beneficial to sperm, so that the first fraction have no contact with seminal plasma produced by the seminal vesicles, allowing for better maintenance sperm during cryopreservation.

Las cosechas convencionales de semen equino, son realizadas con vagina artificial cerrada, donde todas las fracciones seminales quedan mescladas. No obstante, la colecta de semen de forma dividida o fraccionada, separa las diferentes “fracciones” del eyaculado. Fracciones que contiene una mayor o menor cantidad de plasma seminal, siendo las glándulas sexuales accesorias responsables por su producción. Cada reproductor posee características individuales con relación al mantenimiento de las células espermáticas durante la criopreservación, características que pueden estar relacionadas a la producción del plasma seminal, o a alguno de sus componentes. Es conocido la existencia de un efecto deletéreo desempeñado por los componentes del plasma seminal, producido principalmente por las vesículas seminales a los espermatozoides durante el proceso de criopreservación. Sin embargo, esos factores se desconocen. Varias hipótesis son sugeridas, tales como, reducción en la producción de lípidos y los tipos de proteínas e iones presentes en cada una de las fracciones del eyaculado. Sabiendo esto, la cosecha fraccionada puede traer beneficios a los espermatozoides, de forma que las primeras fracciones no tengan contacto con el plasma seminal producido por las vesículas seminales, posibilitando una mejor manutención espermática durante la criopreservación.

Distribution of lymphocytes, immunoglobulin-containing cells, macrophages, and dendritic cells in the accessory sex glands of rams experimentally infected with Actinobacillus seminis / Distribuição de linfócitos, células carreadoras de imunoglobulinas, macrófagos e células dendríticas em glândulas sexuais acessórias de carneiros infectados experimentalmente com Actinobacillus seminis

The distribution of cells involved in the immune response in accessory sex glands of rams experimentally infected with Actinobacillus seminis was studied. Twelve one-year old rams were experimentally infected by intraurethral (IU) (n=4) and intraepididymal (IE) (n=4) route, and four control (CON) animals were used. The animals were slaughtered 35 days post-inoculation, samples were taken from accessory sex glands, and bacteriology and histopathology tests were performed. The presence of CD4, CD8 and TCRγδ (WC1) lymphocytes, CD45RO cells, macrophages (CD14), dendritic cells (CD1b), IgA-, IgG- and IgM-containing cells (IgCC) was determined. Animals of the IE group developed clinical epididymitis. No lesions were seen in rams of the IU group; two of the intraepididymal inoculated CON developed small lesions in the epididymis. A. seminis isolates were achieved from 6:16 (37.5%) accessory sex glands in the IE group, but not in the IU and CON groups. In the CON group, IgA- and IgM- containing cells predominated in the bulbourethral glands and the disseminated prostate, and they were scarce or null in the vesicles and ampullae. A significant increase of IgA-, IgG- and IgM- containing cells was confirmed in the seminal vesicles, the ampullae and the bulbourethral glands in the IE group. In the IE and IU groups, an increase in CD4, CD8, WC1, CD45RO and CD14 was evidenced in the vesicles and ampullae. CD1b dendritic cells were present in the ampullae and vesicles with inflammatory processes. A. seminis triggered a local immune response in the IE and IU groups. These results indicate a different pattern of infiltrating immune cells in the accessory sex glands of infected A. seminis rams.(AU)

A distribuição das células envolvidas na resposta imune em glândulas sexuais acessórias de carneiros experimentalmente infectados com Actinobacillus seminis foi estudada. Doze carneiros de um ano de idade foram experimentalmente infectados via intrauretral (IU) (n=4) e via intraepididimal (IE) (n=4) e quatro animais controles (CON) foram utilizados. Os animais foram abatidos 35 dias após a inoculação, amostras foram retiradas das glândulas sexuais acessórias e testes bacteriológicos e histopatológicos foram realizados. A presença de linfócitos CD4, CD8 e TCRγδ (WC1), células CD45RO, macrófagos (CD14), células dendríticas (CD1b) e células contendo IgA, IgG and IgM (IgCC) foi determinada. Os animais do grupo IE desenvolveram epididimite clínica. Não foram visualizadas lesões nos carneiros do grupo IU, dois dos CON inoculados intraepididimalmente desenvolveram pequenas lesões no epidídimo. Isolados de A. seminis foram obtidos de 6:16 (37,5%) nas glândulas sexuais acessórias no grupo IE mas não nos grupos IU e CON. No grupo CON células contendo IgA and IgM predominaram nas glândulas bulbouretrais e na próstata e foram escassas ou ausentes nas vesículas e na ampola. Um incremento significativo de células contendo IgA, IgG and IgM foi confirmado nas vesículas seminais, na ampola e nas glândulas bulbouretrais no grupo IE. Nos grupos IE e IU foi evidenciado um aumento em CD4, CD8, WC1, CD45RO e CD14 nas vesículas e ampola. As células dendríticas CD1b estavam presentes na ampola e nas vesículas com processo inflamatório. A. seminis induziu uma resposta imune local nos grupos IE e IU. Estes resultados indicam um padrão diferente de células imunes infiltrantes nas glândulas sexuais acessórias de carneiros infectados por A. seminis.(AU)

Morfologia e histoquímica das glândulas sexuais acessórias de Metachirus nudicaudatus, Didelphidae-Marsupialia / Morphology and histochemistry of accessory sex glands of Metachirus nudicaudatus, Didelphidae-Marsupialia

São descritas a morfologia e a distribuição de glicogênio e mucossubstâncias na próstata e nas glândulas bulbouretrais de Metachirus nudicaudatus (Geoffroy, 1803), única espécie do gênero. A próstata é envolvida pelas túnicas adventícia e muscular, e o estroma é formado pelo conjuntivo da mucosa uretral. O parênquima é constituído pelos túbulos secretores, disseminados na mucosa uretral, e que diferem histológica e histoquimicamente nos segmentos cranial, médio e caudal. Essas diferenças morfo-histoquímicas também são observadas nas partes externa, média e interna de cada túbulo. De um modo geral, os três segmentos prostáticos secretam mucossubstâncias neutras, porém o segmento caudal produz também glicogênio. Os três pares de glândulas bulbouretrais (laterais, intermédias e mediais) do Metachirus são envolvidas por uma cápsula conjuntiva e músculo estriado esquelético. O maior par é a bulbouretral lateral que é constituída por longos túbulos secretores de mucossubstâncias neutras. As bulbouretrais intermédias são formadas por túbulos ramificados, que produzem mucossubstâncias neutras, ácidas carboxiladas e ácidas sulfatadas. Os túbulo-ácinos ramificados das bulbouretrais mediais secretam mucossubstâncias neutras. O Metachirus não possui glândulas ampulares, vesículas seminais nem glândulas de coagulação.(AU)

This paper describes the morphology and distribution of glycogen and mucous substances in the prostate and the bulbourethral glands of Metachirus nudicaudatus (Geoffroy, 1803), the only species of the genus. The prostate is surrounded by the tunica adventitia, and muscle and stroma is formed by connective urethral mucosa. The glandular parenchyma consists of secretory tubules, scattered throughout the connective tissue of the urethral mucosa which differs histologically and histochemically in cranial, middle, and caudal segments of the prostate. These morpho-histochemical differences are also observed in the outer, middle and inner parts of the tubular epithelium of each prostatic segment. In general, prostatic segments secrete neutral mucous substances, and the caudal segment also produces glycogen. The three pairs of bulbourethral glands (lateral, intermediate and medial) are surrounded by a capsule of dense connective tissue and skeletal striated muscle. The glandular parenchyma is formed by tubules or branched tubuloacinar, covered by simple epithelium which is characteristic for each pair of glands. The lateral bulbourethral glands and the medial bulbourethral glands produce neutral mucous substances and the secretion of the intermediate bulbourethral glands consists of neutral mucous substances, carboxylated acids, and sulfated acids. The M. nudicaudatus does not have ampullary glands, seminal vesicles or coagulating glands.(AU)

Morfologia e histoquímica das glândulas sexuais acessórias de Metachirus nudicaudatus, Didelphidae-Marsupialia / Morphology and histochemistry of accessory sex glands of Metachirus nudicaudatus, Didelphidae-Marsupialia

This paper describes the morphology and distribution of glycogen and mucous substances in the prostate and the bulbourethral glands of Metachirus nudicaudatus (Geoffroy, 1803), the only species of the genus. The prostate is surrounded by the tunica adventitia, and muscle and stroma is formed by connective urethral mucosa. The glandular parenchyma consists of secretory tubules, scattered throughout the connective tissue of the urethral mucosa which differs histologically and histochemically in cranial, middle, and caudal segments of the prostate. These morpho-histochemical differences are also observed in the outer, middle and inner parts of the tubular epithelium of each prostatic segment. In general, prostatic segments secrete neutral mucous substances, and the caudal segment also produces glycogen. The three pairs of bulbourethral glands (lateral, intermediate and medial) are surrounded by a capsule of dense connective tissue and skeletal striated muscle. The glandular parenchyma is formed by tubules or branched tubuloacinar, covered by simple epithelium which is characteristic for each pair of glands. The lateral bulbourethral glands and the medial bulbourethral glands produce neutral mucous substances and the secretion of the intermediate bulbourethral glands consists of neutral mucous substances, carboxylated acids, and sulfated acids. The M. nudicaudatus does not have ampullary glands, seminal vesicles or coagulating glands.(AU)

São descritas a morfologia e a distribuição de glicogênio e mucossubstâncias na próstata e nas glândulas bulbouretrais de Metachirus nudicaudatus (Geoffroy, 1803), única espécie do gênero. A próstata é envolvida pelas túnicas adventícia e muscular, e o estroma é formado pelo conjuntivo da mucosa uretral. O parênquima é constituído pelos túbulos secretores, disseminados na mucosa uretral, e que diferem histológica e histoquimicamente nos segmentos cranial, médio e caudal. Essas diferenças morfo-histoquímicas também são observadas nas partes externa, média e interna de cada túbulo. De um modo geral, os três segmentos prostáticos secretam mucossubstâncias neutras, porém o segmento caudal produz também glicogênio. Os três pares de glândulas bulbouretrais (laterais, intermédias e mediais) do Metachirus são envolvidas por uma cápsula conjuntiva e músculo estriado esquelético. O maior par é a bulbouretral lateral que é constituída por longos túbulos secretores de mucossubstâncias neutras. As bulbouretrais intermédias são formadas por túbulos ramificados, que produzem mucossubstâncias neutras, ácidas carboxiladas e ácidas sulfatadas. Os túbulo-ácinos ramificados das bulbouretrais mediais secretam mucossubstâncias neutras. O Metachirus não possui glândulas ampulares, vesículas seminais nem glândulas de coagulação.(AU)

EFEITO PREVENTIVO DO ÁCIDO ALFA-LIPÓICO NA DEGENERAÇÃO TESTICULAR POR CHOQUE TÉRMICO AGUDO EM CAMUNDONGOS

A temperatura testicular em mamíferos deve ser inferior à temperatura corpórea para manter as funções de produção espermática adequada. O aumento da temperatura intratesticular pode ocasionar a degeneração testicular que culmina na queda da fertilidade e pode ter impacto negativo na produção de testosterona, em decorrência da apoptose nas células de Leydig e maior liberação de ROS, compondo um quadro associado de estresse oxidativo. Para combater esse efeito negativo existem fisiologicamente antioxidantes enzimáticos e não enzimáticos, porém, a depender da intensidade e continuidade da agressão, esses nem sempre conseguem cumprir sua tarefa antioxidativa. O ácido alfa-lipóico (ALA) vem conquistando espaço e bons resultados como suplemento antioxidante capaz de tratar, atenuar e até prevenir diversas alterações no organismo. Seus efeitos na reprodução animal já foram descritos para melhoria da motilidade, viabilidade, concentração espermática em casos de varicocele, isquemia/reperfusão, criopreservação e aumento na taxa de prenhez. Portanto, objetivou-se avaliar a capacidade preventiva do ALA na degeneração testicular induzida por choque térmico em camundongos maduros sexualmente. Para isso, 36 camundongos foram divididos nos seguintes grupos: Controle Negativo (CN; n = 6) como parâmetro local do biotério; Controle Positivo (CP; n = 10) que foram suplementados com placebo; ALA 200mg (A2P; n = 10) que foram suplementados com 200mg/Kg/dia; ALA 400mg (A4P; n = 10) que foram suplementados com o dobro da dose anterior. Excetuando o CN, os demais grupos foram suplementados durante 30 dias, foram submetidos ao esgotamento das reservas epididimárias com fêmeas por, no mínimo, 8 dias e, então, foram levados ao choque térmico testicular para induzir a degeneração testicular, sendo eutanasiados 48h depois. Os indivíduos passaram por biometria testicular (LET), passaram por avaliação macroscópica post morten, coleta das gônadas e glândulas sexuais acessórias para avaliação geral dos efeitos do ALA nos indivíduos, avaliação do sêmen pelo Sperm Class Analyser® e demais parâmetros que avaliam morfologia, concentração, integridade funcional e estrutural das membranas espermáticas, oIX comportamento da condensação da cromatina, e a análise histológica e histomorfometria em lâminas coradas em H&E. Nesse estudo observou-se a capacidade anti-inflamatória do ALA ao detectar edema na bolsa escrotal apenas no CP. Quanto a estrutura histológica, geralmente a dose do grupo A4P mostrou uma melhor capacidade de preservá-la, acentuando seu potencial preventivo em lesões teciduais severas no parênquima testicular. Por outro lado, os grupos que receberam ALA apresentaram taxa de mortalidade de 35% em média, enquanto os demais resultados não demonstraram relevância. Diante da potencial capacidade preventiva do ALA em caso de degeneração causada por choque térmico agudo, faz-se necessário investigar sua capacidade de reverter os danos teciduais.

The testicular temperature in mammals must be lower than the body temperature to maintain proper sperm production functions. The increase in intratesticular temperature can cause testicular degeneration that culminates in the fall of fertility and can have a negative impact on the production of testosterone, due to apoptosis in Leydig cells and greater release of ROS, composing an associated picture of oxidative stress. To combat this negative effect there are physiologically enzymatic and nonenzymatic antioxidants, however, depending on the intensity and continuity of the aggression, they are not always able to fulfill their antioxidative task. Alpha-lipoic acid (ALA) has been reaching space and good results as an antioxidant supplement capable of treating, attenuating and even preventing various changes in the organism. Its effects on animal reproduction have already been described to improve motility, viability, sperm concentration in cases of varicocele, ischemia / reperfusion, cryopreservation and increased pregnancy rate. Therefore, the objective was to evaluate the preventive capacity of ALA in testicular degeneration induced by thermal shock in sexually mature mice. For this, 36 mice were placed into the following groups: Negative Control (CN; n = 6) as a local parameter of the vivarium; Positive Control (CP; n = 10) supplemented with placebo; 200mg ALA (A2P; n = 10) supplemented with 200mg / kg / day; ALA 400mg (A4P; n = 10) supplemented with twice the previous dose. Except for the CN, the other groups were supplemented for 30 days, underwent depletion of epididymal reserves with females for at least 8 days, and then they were taken to testicular thermal shock to induce testicular degeneration, being euthanized 48h later. Individuals underwent testicular biometry (LET), underwent macroscopic post morten evaluation, collection of gonads and accessory sexual glands for general evaluation of ALA effects on individuals, semen evaluation by Sperm Class Analyzer® and other parameters that evaluate morphology, concentration , functional and structural integrity of sperm membranes, chromatin condensation behavior, and histological analysis and histomorphometry in slides stained in H&E. In this study, the anti-inflammatory capacity of ALA was observed by detecting edema in the scrotum ofXI CP, only. As for the histological structure, the A4P group dose generally showed a better ability to preserve it, accentuating its preventive potential in severe tissue lesions in the testicular parenchyma. On the other hand, the groups that received ALA had an average mortality rate of 35%, while the other results did not demonstrate relevance. In view of the potential preventive capacity of ALA in the degeneration event caused by acute thermal shock, it is necessary to investigate its ability to reverse tissue damage.

AVALIAÇÃO ANDROLÓGICA DE CARNEIROS DA RAÇA SANTA INÊS SUBMETIDOS A DOSES BASAIS DE ACETATO DE BUSERELINA NA ESTAÇÃO DE TRANSIÇÃO

O uso de buserelina (agonista do GnRH) pode melhorar a qualidade do sêmen em ovinos. No entanto, sua dosagem, frequência e momento de aplicação vêm sendo estudados. Alguns estudos demonstram que a droga pode causar feedback negativo subsequente à produção endógena de testosterona. Sendo assim, este estudo teve como objetivo propor um novo protocolo de aplicação de buserelina com o intuito de melhorar a qualidade espermática em carneiros da raça Santa Inês. Quinze carneiros da raça Santa Inês foram divididos em dois grupos experimentais: No grupo GGnRH (n = 8) foi aplicado 2,5 µg de acetato de buserelina e no grupo controle GCON (n = 7) foi aplicada solução salina. Ambos os grupos receberam aplicações por 21 dias em intervalos de aplicação de seis horas, totalizando quatro aplicações hormonais ou solução salina /dia. Em todos os animais, as características seminais macroscópicas e microscópicas, congelabilidade, concentração de testosterona plasmática, número de pixels e análise biométrica das glândulas sexuais testiculares e acessórias por ultrassom foram avaliadas ao longo do período de aplicação hormonal. O grupo GGnRH mostrou um pico de testosterona após a primeira semana (D7) de aplicação, com queda nos valores do hormônio em D14, seguido de feedback negativo em D21 e retorno às concentrações basais em D28. O grupo também mostrou melhora de índices cinéticos como VSL (GGnRH: 51,5 ± 1,5 GCON: 46,6 ± 1,6) e LIN (GGnRH: 53,5 ± 1,8 GCON: 47,5 ± 1,9). Parâmetros de ultrassom, número de pixels e congelabilidade não foram afetados pelo tratamento. A administração de buserelina foi capaz de melhorar alguns parâmetros da cinética espermática. As doses basais deste análogo de GnRH podem ser usadas para melhorar qualidade espermática, embora ainda sejam necessários ajustes no protocolo hormonal para obter uma melhoria efetiva na qualidade do esperma.

Use of buserelin (GnRH agonist) can improve seminal quality. Nevertheless, its dosage, frequency and time of application are still being studied due to the subsequent negative feedback on endogenous production of testosterone described so far. Thus, this study aimed to propose a new buserelin application protocol for sperm improvement in Santa Inês rams. Fifteen Santa Inês rams were divided into two experimental groups: GGnRH (n=8) received 2.5 µg of buserelin acetate and GCON (n=7) received saline solution for 21 days in intervals of application of six hours, totaling four hormonal or saline applications/day. In all animals, macroscopic and microscopic seminal characteristics, freezability, plasma testosterone, pixels and biometric analysis of testicular and accessory sex glands by ultrasound were evaluated throughout period of hormonal application. GGnRH showed a peak of testosterone after the first week (D7) of application with drop in values in D14, followed by negative feedback in D21 and return to basal concentrations in D28. GGnRH showed improvement of kinetic indices such as VSL (GGnRH: 51.5 ± 1.5 GCON: 46.6 ± 1.6) and LIN (GGnRH: 53.5 ± 1.8 GCON: 47.5 ± 1.9). Ultrasound parameters, pixels and freezability were not affected by treatment. In conclusion, the administration of buserelin was able to improve some sperm kinetics parameters. Basal doses of this GnRH analogue can be used, although adjustments in the hormonal protocol still be needed to obtain an effective improvement on sperm quality.

ANÁLISE PROTEÔMICA E METABOLÔMICA DOS FLUIDOS DO TRATO REPRODUTIVO E CÉLULAS ESPERMÁTICAS DE CARNEIROS MORADA NOVA

O objetivo do estudo foi identificar por meio da proteômica e da metabolômica as moléculas presentes no plasma seminal, fluidos das glândulas sexuais acessórias e epidídimos, e membranas espermáticas de carneiros Morada Nova. No estudo 1 foram coletadas amostras de sêmen de seis carneiros (utilizando-se vagina artificial) para obter o plasma seminal e espermatozoides. Posteriormente, os animais foram vasectomizados e o fluido das glândulas acessórias coletado por vagina artificial. Em seguida, os animais foram abatidos e os epidídimos, vesículas seminais e glândulas bulbouretrais foram coletados para a recuperação dos fluidos reprodutivos e espermatozoides epididimários. Por meio de eletroforese bidimensional, espectrometria de massas e ferramentas de bioinformática foi avaliado o proteoma das secreções obtidas do trato reprodutivo e membranas espermáticas. As proteínas mais abundantes no plasma seminal foram binder of sperm 1 (BSP1), binder of sperm 5 (BSP5), bodesina-2 e espermadesina Z13. Proteínas do fluido das glândulas sexuais acessórias que contribuem para a composição do plasma seminal incluem BSPs, bodesinas, 72kDa colagenase tipo IV, BPI fold-containing family A member 1, clusterina, proteína semelhante à ribonuclease inativa 9, inibidor da anidrase carbônica isoforma X2 e albumina. O fluido da cauda do epidídimo contribui para o plasma seminal com proteínas específicas como a lipocalina-5-específica do epidídimo, proteína secretora epididimal E1, prostaglandina-H2 D-isomerase e a espermadesina-1. Comparando os mapas 2-D das proteínas de membrana do espermatozoide ejaculado e da cauda do epidídimo, há um aumento na intensidade e número de spots nos mapas da membrana do espermatozoide ejaculado. Estas proteínas são oriundas do fluido das glândulas acessórias. Futuras pesquisas sobre as proteínas identificadas em nosso estudo podem contribuir para investigações de marcadores para a qualidade espermática e fertilidade. No estudo 2 cinco carneiros adultos da raça Morada Nova foram vasectomizados e o fluido das glândulas acessórias (FGA) foi coletado por vagina artificial. Metabólitos foram extraídos e identificados por GC/MS e LC/MS. Os metabólitos obtidos foram analisados pelos bancos de dados Human Metabolome Database (HMDB), PubChem e LIPID Metabolites and Pathways Strategy. A análise das vias foi realizada utilizando o MetaboAnalyst 3.0. O uso combinado de GC e LC/MS permitiu a identificação de 371 compostos do FGA de carneiros. Estas técnicas apresentaram uma sobreposição de um único metabólito, confirmando a complementaridade das abordagens utilizadas. Lipídios e moléculas semelhantes a lipídios foi a classe mais abundantes no FGA de carneiros, seguida por aminoácidos ácidos, peptídeos e análogos. Os metabólitos mais abundantes foram frutose, glicerol, ácido cítrico, D-manitol, D-glicose e ácido L-(+)-lático. Metabólitos identificados no FGA de carneiros estavam envolvidos em 52 diferentes vias. Os metabólitos do FGA atuam como moduladores da função espermática, portanto, a análise química do fluido das glândulas sexuais acessórias é valiosa para melhor entender a reprodução animal bem como para a investigação de biomarcadores da fertilidade.

The objective of the present study was to identify and characterize, through omics technologies (proteomics and metabolomics), the components present in the secretions of the genital tract and sperm cells of Morada Nova rams. In study 1, Fresh semen samples were collected from six adult rams (using an artificial vagina) and then obtained whole seminal plasma and ejaculated sperm. After, rams were vasectomized and fluid of accessory sex glands was collected (also using an artificial vagina). Next, animals were slaughtered and the epididymides, seminal vesicles and bulbourethral glands were properly collected for recovery of reproductive fluids and epididymal sperm. Two-dimensional electrophoresis, mass spectrometry and bioinformatics tools were used to map the major proteome of secretions from reproductive tract and sperm membranes. The most abundant proteins in the seminal plasma gels appeared as binder of sperm 1 (BSP1), binder of sperm 5 (BSP5), bodhesin-2 and spermadhesin Z13-like. Proteins from composite accessory sex gland fluid that contribute to seminal plasma composition include BSPs, bodhesins, 72kDa type IV collagenase, BPI fold-containing family A member 1, clusterin, inactive ribonuclease-like protein 9, inhibitor of carbonic anhydrase-like isoform X2 and albumin. Cauda epididymal fluid contributes to seminal plasma with specific proteins, such as epididymal-specific lipocalin-5-like isoform X1 and epididymal secretory protein E1, prostaglandin-H2 D-isomerase and spermadhesin-1-like. Comparing 2-D maps of membrane proteins from ejaculated and cauda epididymal sperm membranes, there is an increase in the intensity and number of spots in the ejaculated sperm maps. Those proteins are originated from accessory sex gland fluids. Further research into the proteins identified in our study can contribute to investigations of markers for sperm quality and fertility. In the study 2, five adult Morada Nova rams were vasectomized and accessory sex gland fluid (AGF) was collected by artificial vagina. Metabolites were extracted and identified by GC/MS and LC/MS. Metabolites obtained were analyzed by Human Metabolome Database (HMDB), PubChem, and LIPID Metabolites and Pathways Strategy databases. Pathway analysis was performed using MetaboAnalyst 3.0. Combined use of GC and LC/MS allowed the identification of 371 compounds from AGF of rams. These techniques presented an overlap of one single metabolite, thus confirming the complementarity of the approaches used. Lipids and lipid-like molecules were the most abundant classes in the ram AGF, followed by amino acids, peptides, and analogues. The most abundant metabolites were fructose, glycerol, citric acid, D-mannitol, D-glucose and L-(+)-lactic acid. Metabolites identified in the ram AGF were involved in 52 different pathways. AGF metabolites are modulators of sperm function, thus chemical analysis of the accessory sex gland fluid is valuable to better understand animal reproduction and to search for biomarkers of fertility.

EFEITO DO EXTRATO HIDROSSOLÚVEL DE SOJA OU CASTANHA-DO-BRASIL EM RATOS IDOSOS

O objetivo foi analisar os efeitos da suplementação do extrato hidrossolúvel de soja (EHS) ou castanha-do-Brasil nos fêmures de ratos Wistar idosos. Foram utilizados 27 ratos, com 570 dias, distribuídos em 3 grupos: grupo controle (C) (n=8) recebeu dieta padrão; grupo suplementado com extrato hidrossolúvel de soja (S) (n=9) (300 mL/dia); grupo (B) (n=10), oferecida 1 unidade de castanha-do-Brasil (±3,7g) por animal/dia. O experimento teve duração de 30 dias e ao final os ratos foram eutanasiados com 600 dias de idade. Foram analisadas: a massa corporal semanalmente (g), a ingestão de ração (g) e de água (mL) diariamente, foram feitas análises biofísicas, bioquímicas e hormonais das amostras (sangue, fêmur, gordura visceral, testículos e glândulas sexuais acessórias) colhidas no pós-morte. Os animais do grupo S e B consumiram menos ração quando comparados com o C. O grupo S consumiu menos água em relação ao controle. Em relação as concentrações dos hormônios (insulina, leptina, LH, testosterona) entre os grupos, estes não apresentaram diferença estatística significativa. Não houve diferença na densitometria e microtomografia óssea, mas a região da cabeça do fêmur dos ratos do grupo B apresentaram maior resistência (p=0,04) (B 151±15N, C 112±37N, S 137±37N). Os fêmures do grupo controle possuíram menor concentração de fosforo (p=0,03; 15±1%) comparados com os do S 16±1% e B 16±1%. Conclui-se que a ingestão de EHS não interferiu no metabolismo ósseo, mas o consumo da castanhado-Brasil resultou em maior resistência óssea da região da cabeça do fêmur, concentração de fósforo e hipertrofia das glândulas sexuais acessórias.

The objective was to analyze the effects of soybean or Brazil nut supplementation on the femurs of elderly Wistar rats. Twenty-seven rats with 570 days of age were used, distributed in 3 groups: control group (n=8, C) with standard diet; group S (n=9) supplemented with soy milk (300 mL/day); group B (n=10), added 1 unit of Brazil nut (± 3.7g) per animal/day. The experiment lasted for 30 days, and at the end, the rats were euthanized with 600 days of age. Were measured: body mass weekly (g); feed intake (g) and water intake (mL) daily, as well as biophysical, biochemical and hormonal analysis of postmortem samples (blood, femur, visceral fat, testicles and sexual accessories glands) were analyzed. The animals of group S and B consumed less ration when compared to group C. The group S ingested less water compared to the control. Regarding the applications of hormone concentrations (insulin, leptin, LH, testosterone) between groups, these are not relevant. There were no differences on bone densitometry and microtomography but femoral head from the group B rats presented greater shear resistance (p = 0.04; B 151 ± 15N, C 112 ± 37N, S 137 ± 37N) than the other groups. Bones from control rats had lower phosphorus concentration (p=0.03; 15±1%) compared to S 16±1% and B 16±1%. It was possible to concluded that soy milk intake did not interfere on the bone metabolism, but the Brasil nut consumption resulted in greater bone strength and phosphorus concentration on the femoral head and accessory sex glands hypertrophy.

VESICULITE SEMINAL EM GARANHÕES: DIAGNÓSTICO, EVOLUÇÃO E TRATAMENTO COM SUBSTÂNCIA CAUTERIZANTE

Os garanhões possuem um conjunto completo de glândulas sexuais acessórias, compostas pelas bulbouretrais, a próstata, vesículas seminais e ampolas dos ductos deferentes. Dentre as afecções que acometem essas estruturas, a vesiculite seminal é a de maior ocorrência, consistindo na colonização de uma ou ambas as vesículas por bactérias, sendo a Pseudomonas aeruginosa a mais frequente. No ejaculado é observada uma grande percentagem de neutrófilos e hemácias podem estar presentes, caracterizando os quadros de piospermia e hemospermia, respectivamente. O diagnóstico definitivo é realizado por meio da endoscopia das vesículas, onde é possível visualizar o conteúdo purulento, associado à cultura bacteriana do lavado da glândula. O tratamento é desafiador, pois a antibioticoterapia apresenta baixa eficácia. Visto a importância desta enfermidade e a dificuldade do tratamento, este estudo teve como objetivo abordar os principais aspectos e avaliar a eficácia do ácido metacresolsulfônico e formaldeído para o tratamento da vesiculite seminal em garanhões, considerando os parâmetros seminais e características histopatológicas das vesículas seminais. Três garanhões adultos (n=3), com aspectos reprodutivos normais, tiveram a vesiculite seminal induzida por Pseudomonas aeruginosa através da endoscopia. Após 8 semanas de infecção, foi realizado tratamento local utilizando solução a 30% do ácido metacresolsulfônico e formaldeído (Lotagen®). O experimento consistiu em avaliações semanais, antes e após infecção experimental e após tratamento. Foram avaliadas as características do sêmen e das vesículas seminais, e cultura bacteriana do ejaculado e lavado vesicular. Alterações na coloração do sêmen foram observadas (3/3), enquanto que volume do ejaculado, concentração e motilidade espermática apresentaram variações fisiológicas (2/3), com redução no percentual de neutrófilos no sêmen e oscilações na integridade de membrana plasmática e acrossomal (3/3). A cultura bacteriana do sêmen após tratamento foi negativa (2/3), e um garanhão apresentou cultura positiva para Streptococcus equi subsp zooepidemicus, que desenvolveu epididimite bilateral. A ultrassonografia das vesículas mostrou variações no tamanho, quantidade e característica do conteúdo, com valores dentro da normalidade. Na endoscopia após infecção, as vesículas continham conteúdo purulento e posteriormente ao tratamento verificou-se a oclusão parcial das glândulas (2/3) e a mucosa mostrou-se fibrosada (1/3). As vesículas sadias apresentaram epitélio colunar simples, que após a infecção sofreu atrofia associado a intenso infiltrado inflamatório(3/3). Após 4 semanas do tratamento, observou-se um estroma fibromuscular com discreta inflamação (2/3) e displasia epitelial com infiltrado inflamatório misto (1/3). A cultura do lavado vesicular foi negativo após tratamento (3/3). A solução com ácido metacresolsulfônico e formaldeído à 30% foi eficaz para o tratamento da vesiculite seminal em garanhões, evitando o crescimento bacteriano de P.aeruginosa, diminuindo a porcentagem de neutrófilos no ejaculado e mantendo a qualidade seminal dos garanhões (2/3).

Stallions have a complete set of accessory sex glands, composed of the bulbourethral, prostate gland, seminal vesicles and ampullae. Among the diseases that affect these structures, seminal vesiculitis is the most frequent, consisting the colonization of one or both vesicles by bacteria, whose Pseudomonas aeruginosa is the most frequent. In ejaculate is observed a large percentage of neutrophils and erythrocytes may be present, characterizing piospermia and hemospermia, respectively. The definitive diagnosis is made through the endoscopical evaluation of the seminal vesicles, where it is possible to visualize the purulent contents, associated to gland lavage and bacterial culture. Treatment is challenging because antibiotic therapy is ineffective. Considering the importance of this disease and the difficulty of treatment, this study aims to address the most important aspects and evaluate the efficacy of metacresolsulfonic acid and formaldehyde for the treatment of vesiculitis in stallions, considering seminal parameters and histopathological characteristics. Three adult stallions (n = 3), with normal reproductive aspects, had seminal vesiculitis induced by Pseudomonas aeruginosa through endoscopy. After 8 weeks of infection, local treatment was performed using 30% solution of metacresolsulfonic acid and formaldehyde (Lotagen®). The experiment consisted of weekly evaluations, before and after experimental infection and after treatment. The characteristics of semen and seminal vesicles, and bacterial culture of ejaculate and vesicular lavage were evaluated. Changes in semen color were observed (3/3), while ejaculate volume, concentration and sperm motility presented physiological variations (2/3), with reduction in the percentage of neutrophils in the semen and oscillations in plasma and acrosomal membrane integrity (3/3). The bacterial culture of semen after treatment was negative (2/3), and a stallion presented a positive culture for Streptococcus equi subsp zooepidemicus, which developed bilateral epididymitis. Ultrasonography of the vesicles showed variations in the size, quantity and characteristic of the contents, with values within normality. In endoscopy after infection, the vesicles contained purulent contents and after treatment the partial occlusion of the glands (2/3) was verified and the mucosa was fibrosed (1/3). The healthy vesicles presented simple columnar epithelium, which after the infection suffered atrophy associated with intense inflammatory infiltrate (3/3). After 4 weeks of treatment, a fibromuscular stroma with mild inflammation (2/3) and epithelial dysplasia with mixed inflammatory infiltrate (1/3) was observed. Vesicular lavage culture was negative after treatment (3/3). The solution with 30% of metacresolsulfonic and formaldehyde was effective for the treatment of seminal vesiculitis in stallions, avoiding the bacterial growth of P.aeruginosa, reducing the percentage of neutrophils in the ejaculate and maintaining the seminal quality of stallions (2/3).