ß-micrustoxin (Mlx-9), a PLA2 from Micrurus lemniscatus snake venom: biochemical characterization and anti-proliferative effect mediated by p53

Background: Endogenous phospholipases A2 (PLA2 ) play a fundamental role in inflammation, neurodegenerative diseases, apoptosis and cellular senescence. Neurotoxins with PLA2 activity are found in snake venoms from the Elapidae and Viperidae families. The mechanism of action of these neurotoxins have been studied using hippocampal and cerebellar neuronal cultures showing [Ca2+]i increase, mitochondrial depolarization and cell death. Astrocytes are rarely used as a model, despite being modulators at the synapses and responsible for homeostasis and defense in the central nervous system. Preserving the cell division ability, they can be utilized to study the cell proliferation process. In the present work cultured astrocytes and glioblastoma cells were employed to characterize the action of ß-micrustoxin (previously named Mlx-9), a PLA2 isolated from Micrurus lemniscatus snake venom. The ß-micrustoxin structure was determined and the cell proliferation, cell cycle phases and the regulatory proteins p53, p21 and p27 were investigated. Methods: ß-micrustoxin was characterized biochemically by a proteomic approach. Astrocytes were obtained by dissociation of pineal glands from Wistar rats; glioblastoma tumor cells were purchased from ATCC and Sigma and cultured in DMEM médium. Cell viability was evaluated by MTT assay; cell proliferation and cell cycle phases were analyzed by flow cytometry; p53, p21 and p27 proteins were studied by western blotting and immunocytochemistry. Results: Proteomic analysis revealed fragments on ß-micrustoxin that aligned with a PLA2 from Micrurus lemniscatus lemniscatus previously identified as transcript ID DN112835_C3_g9_i1/m.9019. ß-micrustoxin impaired the viability of astrocytes and glioblastoma tumor cells. There was a reduction in cell proliferation, an increase in G2/M phase and activation of p53, p21 and p27 proteins in astrocytes. Conclusion: These findings indicate that ß-micrustoxin from Micrurus lemniscatus venom could inhibit cell proliferation through p53, p21 and p27 activation thus imposing cell cycle arrest at the checkpoint G2/M.(AU)

Antiproliferative activity of essential oils from three plants of the Brazilian Cerrado: Campomanesia adamantium (Myrtaceae), Protium ovatum (Burseraceae) and Cardiopetalum calophyllum (Annonaceae)

Essential oils, which may be extracted from several parts of plants, have different biological activities. The Brazilian Cerrado has a large variety of plants that yield essential oils, even though many have not been studied yet. Taking into account the biodiversity of this biome, this study aimed at evaluating the antiproliferative activity of essential oils extracted from three species of plants of the Cerrado in Goiás state: Campomanesia adamantium (Cambess.) O. Berg, Protium ovatum (Engl. in Mart.) and Cardiopetalum calophyllum (Schltdl.). Essential oils were extracted from both C. adamantium and C. calophyllum leaves and from P. ovatum leaves and green fruits by hydrodistillation carried out by a Clevenger-type apparatus. The chemical composition of the essential oils was determined by Gas Chromatography coupled to Mass Spectrometry (GC-MS). The following major chemical constituents were identified in the essential oils under investigation: -myrcene (62.00%), spathulenol (28.78%), germacrene-B (18.27%), -caryophyllene oxide (16.40%), -caryophyllene (14.00%), -pinene (11.30%), viridiflorol (9.99%), limonene (7.30%) and (Z,E)-pharnesol (6.51%). The antiproliferative activity was evaluated in different human tumor cell lines: breast adenocarcinoma (MCF-7), cervical adenocarcinoma (HeLa) and glioblastoma (M059J). A normal human cell line was included (GM07492A, lung fibroblasts). Results showed that essential oils from C. adamantium leaves got the lowest values of IC50 in all strains of tumor cells under evaluation. They were significantly lower than the ones of the normal cell line, an evidence of selectivity. It is worth mentioning that this is the first report of the antiproliferative activity of essential oils from C. adamantium , P. ovatum and C. calophyllum against human tumor cells.(AU)

Os óleos essenciais podem ser extraídos de várias partes das plantas e apresentam diversas atividades biológicas. O Cerrado brasileiro possui uma grande variedade de plantas produtoras de óleos essenciais muitas delas ainda não estudadas. Levando-se em consideração a biodiversidade desse bioma, o objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antiproliferativa dos óleos essenciais extraídos de três espécies de plantas ocorrentes no Cerrado do estado de Goiás: Campomanesia adamantium (Cambess.) O. Berg, Protium ovatum (Engl. in Mart.) e Cardiopetalum calophyllum (Schltdl.). Os óleos essenciais foram obtidos das folhas de C. adamantium e C. calophyllum e das folhas e frutos verdes de P. ovatum por hidrodestilação, usando o aparelho do tipo Clevenger. A composição química dos óleos essenciais foi determinada pelo método de Cromatografia Gasosa acoplada à Espectrometria de Massas (CG-EM). Os constituintes químicos majoritários identificados nos óleos essenciais estudados foram: -mirceno (62,00%), espatulenol (28,78%), germacreno-B (18,27%), óxido de -cariofileno (16,40%), -cariofileno (14,00%), -pineno (11,30%), viridiflorol (9,99%), limoneno (7,30%) e (Z,E)-farnesol (6,51%). A atividade antiproliferativa foi avaliada em diferentes linhagens de células tumorais humanas: adenocarcinoma de mama (MCF-7), adenocarcinoma cervical (HeLa) e gliobastoma (M059J), além de, uma linhagem celular humana normal (GM07492A, fibroblastos pulmonares). O óleo essencial das folhas de C. adamantium exibiu menores valores de CI50 em todas as linhagens celulares tumorais avaliadas, sendo menores que aquele obtido na linhagem celular normal, indicando seletividade. Este é o primeiro relato da atividade antiproliferativa dos óleos essenciais de C. adamantium , P. ovatum e C. calophyllum contra células tumorais humanas.(AU)

Antiproliferative activity of essential oils from three plants of the Brazilian Cerrado: Campomanesia adamantium (Myrtaceae), Protium ovatum (Burseraceae) and Cardiopetalum calophyllum (Annonaceae)

Abstract Essential oils, which may be extracted from several parts of plants, have different biological activities. The Brazilian Cerrado has a large variety of plants that yield essential oils, even though many have not been studied yet. Taking into account the biodiversity of this biome, this study aimed at evaluating the antiproliferative activity of essential oils extracted from three species of plants of the Cerrado in Goiás state: Campomanesia adamantium (Cambess.) O. Berg, Protium ovatum (Engl. in Mart.) and Cardiopetalum calophyllum (Schltdl.). Essential oils were extracted from both C. adamantium and C. calophyllum leaves and from P. ovatum leaves and green fruits by hydrodistillation carried out by a Clevenger-type apparatus. The chemical composition of the essential oils was determined by Gas Chromatography coupled to Mass Spectrometry (GC-MS). The following major chemical constituents were identified in the essential oils under investigation: -myrcene (62.00%), spathulenol (28.78%), germacrene-B (18.27%), -caryophyllene oxide (16.40%), -caryophyllene (14.00%), -pinene (11.30%), viridiflorol (9.99%), limonene (7.30%) and (Z,E)-pharnesol (6.51%). The antiproliferative activity was evaluated in different human tumor cell lines: breast adenocarcinoma (MCF-7), cervical adenocarcinoma (HeLa) and glioblastoma (M059J). A normal human cell line was included (GM07492A, lung fibroblasts). Results showed that essential oils from C. adamantium leaves got the lowest values of IC50 in all strains of tumor cells under evaluation. They were significantly lower than the ones of the normal cell line, an evidence of selectivity. It is worth mentioning that this is the first report of the antiproliferative activity of essential oils from C. adamantium , P. ovatum and C. calophyllum against human tumor cells.

Resumo Os óleos essenciais podem ser extraídos de várias partes das plantas e apresentam diversas atividades biológicas. O Cerrado brasileiro possui uma grande variedade de plantas produtoras de óleos essenciais muitas delas ainda não estudadas. Levando-se em consideração a biodiversidade desse bioma, o objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antiproliferativa dos óleos essenciais extraídos de três espécies de plantas ocorrentes no Cerrado do estado de Goiás: Campomanesia adamantium (Cambess.) O. Berg, Protium ovatum (Engl. in Mart.) e Cardiopetalum calophyllum (Schltdl.). Os óleos essenciais foram obtidos das folhas de C. adamantium e C. calophyllum e das folhas e frutos verdes de P. ovatum por hidrodestilação, usando o aparelho do tipo Clevenger. A composição química dos óleos essenciais foi determinada pelo método de Cromatografia Gasosa acoplada à Espectrometria de Massas (CG-EM). Os constituintes químicos majoritários identificados nos óleos essenciais estudados foram: -mirceno (62,00%), espatulenol (28,78%), germacreno-B (18,27%), óxido de -cariofileno (16,40%), -cariofileno (14,00%), -pineno (11,30%), viridiflorol (9,99%), limoneno (7,30%) e (Z,E)-farnesol (6,51%). A atividade antiproliferativa foi avaliada em diferentes linhagens de células tumorais humanas: adenocarcinoma de mama (MCF-7), adenocarcinoma cervical (HeLa) e gliobastoma (M059J), além de, uma linhagem celular humana normal (GM07492A, fibroblastos pulmonares). O óleo essencial das folhas de C. adamantium exibiu menores valores de CI50 em todas as linhagens celulares tumorais avaliadas, sendo menores que aquele obtido na linhagem celular normal, indicando seletividade. Este é o primeiro relato da atividade antiproliferativa dos óleos essenciais de C. adamantium , P. ovatum e C. calophyllum contra células tumorais humanas.

Antiproliferative activity of essential oils from three plants of the Brazilian Cerrado: Campomanesia adamantium (Myrtaceae), Protium ovatum (Burseraceae) and Cardiopetalum calophyllum (Annonaceae)

Abstract Essential oils, which may be extracted from several parts of plants, have different biological activities. The Brazilian Cerrado has a large variety of plants that yield essential oils, even though many have not been studied yet. Taking into account the biodiversity of this biome, this study aimed at evaluating the antiproliferative activity of essential oils extracted from three species of plants of the Cerrado in Goiás state: Campomanesia adamantium (Cambess.) O. Berg, Protium ovatum (Engl. in Mart.) and Cardiopetalum calophyllum (Schltdl.). Essential oils were extracted from both C. adamantium and C. calophyllum leaves and from P. ovatum leaves and green fruits by hydrodistillation carried out by a Clevenger-type apparatus. The chemical composition of the essential oils was determined by Gas Chromatography coupled to Mass Spectrometry (GC-MS). The following major chemical constituents were identified in the essential oils under investigation: -myrcene (62.00%), spathulenol (28.78%), germacrene-B (18.27%), -caryophyllene oxide (16.40%), -caryophyllene (14.00%), -pinene (11.30%), viridiflorol (9.99%), limonene (7.30%) and (Z,E)-pharnesol (6.51%). The antiproliferative activity was evaluated in different human tumor cell lines: breast adenocarcinoma (MCF-7), cervical adenocarcinoma (HeLa) and glioblastoma (M059J). A normal human cell line was included (GM07492A, lung fibroblasts). Results showed that essential oils from C. adamantium leaves got the lowest values of IC50 in all strains of tumor cells under evaluation. They were significantly lower than the ones of the normal cell line, an evidence of selectivity. It is worth mentioning that this is the first report of the antiproliferative activity of essential oils from C. adamantium , P. ovatum and C. calophyllum against human tumor cells.

Resumo Os óleos essenciais podem ser extraídos de várias partes das plantas e apresentam diversas atividades biológicas. O Cerrado brasileiro possui uma grande variedade de plantas produtoras de óleos essenciais muitas delas ainda não estudadas. Levando-se em consideração a biodiversidade desse bioma, o objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antiproliferativa dos óleos essenciais extraídos de três espécies de plantas ocorrentes no Cerrado do estado de Goiás: Campomanesia adamantium (Cambess.) O. Berg, Protium ovatum (Engl. in Mart.) e Cardiopetalum calophyllum (Schltdl.). Os óleos essenciais foram obtidos das folhas de C. adamantium e C. calophyllum e das folhas e frutos verdes de P. ovatum por hidrodestilação, usando o aparelho do tipo Clevenger. A composição química dos óleos essenciais foi determinada pelo método de Cromatografia Gasosa acoplada à Espectrometria de Massas (CG-EM). Os constituintes químicos majoritários identificados nos óleos essenciais estudados foram: -mirceno (62,00%), espatulenol (28,78%), germacreno-B (18,27%), óxido de -cariofileno (16,40%), -cariofileno (14,00%), -pineno (11,30%), viridiflorol (9,99%), limoneno (7,30%) e (Z,E)-farnesol (6,51%). A atividade antiproliferativa foi avaliada em diferentes linhagens de células tumorais humanas: adenocarcinoma de mama (MCF-7), adenocarcinoma cervical (HeLa) e gliobastoma (M059J), além de, uma linhagem celular humana normal (GM07492A, fibroblastos pulmonares). O óleo essencial das folhas de C. adamantium exibiu menores valores de CI50 em todas as linhagens celulares tumorais avaliadas, sendo menores que aquele obtido na linhagem celular normal, indicando seletividade. Este é o primeiro relato da atividade antiproliferativa dos óleos essenciais de C. adamantium , P. ovatum e C. calophyllum contra células tumorais humanas.

Ellagic acid inhibits proliferation and induces apoptosis in human glioblastoma cells

PURPOSE:To investigate the anticancer activity of ellagic acid (EA) in U251 human glioblastoma cells and its possible molecular mechanism.METHODS:The cells were treated with EA at various concentrations for different time periods. Cell viability and cell proliferation were detected by cell counting kit-8(CCK-8) assay and live/dead assay respectively. Cell apoptosis were measured with Annexin V-FITC/PI double staining method by flow cytometry and Mitochondrial membrane potential assay separately. Cell cycle was measured with PI staining method by flow cytometry. The expressions of Bcl-2, Survivin, XIAP, Caspase-3, Bax, JNK, p-JNK, ERK1/2, p-ERK1/2, p38, p-p38, DR4, DR5, CHOP and GRP78-related proteins were detected by western blot after EA treatment.RESULTS:Cell viability and proliferation of glioblastoma cells treated with EA were significantly lower than the control group. EA caused robust apoptosis of the glioblastoma cells compared to the control group. EA significantly decreased the proportion at G0/G1 phases of cell cycling accompanied by increased populations at S phase in U251 cell lines. And the expressions of anti-apoptotic proteins were dramatically down-regulated.CONCLUSION:Ellagic acid potentially up-regulated DR4, DR5 and MAP kinases (JNK, ERK1/2 and p38). EA also caused significant increase in the expressions of CHOP and GRP78. Our findings suggest that EA would be beneficial for the treatment of glioblastoma.(AU)

Toxicidad del veneno de Crotalus durissus cascavella en células de mamíferos / Crotalus durissus cascavella venom toxicity to mammalian cells / Toxicidade do veneno de Crotalus durissus cascavella em células de mamíferos

Las serpientes del género Crotalus ganaron espacio significativo en el campo científico desde el desarrollo de investigaciones con su veneno que involucran la actividad citotóxica. Crotalus durissus cascavella es la única subespecie grabadas del bioma de la Caatinga del nordeste de Brasil y los estudios carecen en sus propiedades del veneno. El presente estudio evaluó el veneno crudo de C. d. cascavella por su actividad citotóxica in vitro contra líneas celulares tumorales y las células normales. El mecanismo de la muerte celular inducida por este veneno también se investigó. C. d. cascavella mostró una alta citotoxicidad (valores de IC50 que oscila desde 2,7 hasta 6,9 g/mL) contra cinco líneas de células tumorales, entre las cuales: OVCAR - 8 y SKOV3 (carcinoma de ovario), PC-3M (carcinoma metastásico de próstata), MCF-7 (carcinoma de mama), SF - 268 (glioblastoma) y PBMC también. Las células tratadas con C. d. cascavella disparó la cascada apoptótica, según lo confirmado por diversos métodos que se muestran en este trabajo. Estos resultados refuerzan así el potencial biomédico y farmacológico de las toxinas del veneno de esta especie.(AU)

Snakes from the genus Crotalus gained significant space in the scientific field since the development of researches with their venom involving cytotoxic activity. Crotalus durissus cascavella is the only subspecies recorded of the Caatinga biome of Northeastern Brazil and its noticed a lack of studies on its venom properties. The present study evaluated the crude venom of C. d. cascavella for its cytotoxic activity in vitro against both tumor cell lines and normal cells. The mechanism of cell death induced by this venom was also investigated. C. d. cascavella venom presented high cytotoxicity (IC50 values ranging from 2.7 to 6.9 µg/mL) against five tumor cells lines: OVCAR-8 and SKOV3 (ovarian carcinomas), PC-3M (metastatic prostate carcinoma), MCF-7 (breast carcinoma), and SF-268 (glioblastoma) and PBMC as well. The cells treated with C. d. cascavella venom triggered the apoptotic pathway as confirmed by several methods. These results underline the biomedical potential of toxins from the venom from this species.(AU)

Serpentes do Gênero Crotalus ganhou espaço significativo no campo científico, desde o desenvolvimento de pesquisas com seu veneno envolvendo atividade citotóxica. A Crotalus durissus cascavella (C.d.cascavella) é uma subespécie característica da Caatinga do Nordeste do Brasil e faltam estudos sobre as propriedades de seu veneno. O presente estudo avaliou o veneno bruto de C. d. cascavella para a sua atividade citotóxica in vitro contra as linhagens de células tumorais e células normais. O mecanismo de morte celular induzida por este veneno também foi investigado. Observou-se alta citotoxicidade (valores de IC50 entre 2,7-6,9 µg/mL) contra cinco linhagens de células tumorais, dentre elas: OVCAR - 8 e SKOV3 (carcinoma ovariano), PC-3M (carcinoma metastático de próstata), MCF-7 (carcinoma mamário), SF - 268 (glioblastoma) e PBMC. As células tratadas dispararam a cascata apoptótica, como confirmado por vários métodos demonstrados neste trabalho. Esses resultados reforçam, assim, o potencial biomédico e farmacológico das toxinas do veneno dessa espécie.(AU)

Toxicidad del veneno de Crotalus durissus cascavella en células de mamíferos / Crotalus durissus cascavella venom toxicity to mammalian cells / Toxicidade do veneno de Crotalus durissus cascavella em células de mamíferos

Las serpientes del género Crotalus ganaron espacio significativo en el campo científico desde el desarrollo de investigaciones con su veneno que involucran la actividad citotóxica. Crotalus durissus cascavella es la única subespecie grabadas del bioma de la Caatinga del nordeste de Brasil y los estudios carecen en sus propiedades del veneno. El presente estudio evaluó el veneno crudo de C. d. cascavella por su actividad citotóxica in vitro contra líneas celulares tumorales y las células normales. El mecanismo de la muerte celular inducida por este veneno también se investigó. C. d. cascavella mostró una alta citotoxicidad (valores de IC50 que oscila desde 2,7 hasta 6,9 g/mL) contra cinco líneas de células tumorales, entre las cuales: OVCAR - 8 y SKOV3 (carcinoma de ovario), PC-3M (carcinoma metastásico de próstata), MCF-7 (carcinoma de mama), SF - 268 (glioblastoma) y PBMC también. Las células tratadas con C. d. cascavella disparó la cascada apoptótica, según lo confirmado por diversos métodos que se muestran en este trabajo. Estos resultados refuerzan así el potencial biomédico y farmacológico de las toxinas del veneno de esta especie.

Snakes from the genus Crotalus gained significant space in the scientific field since the development of researches with their venom involving cytotoxic activity. Crotalus durissus cascavella is the only subspecies recorded of the Caatinga biome of Northeastern Brazil and its noticed a lack of studies on its venom properties. The present study evaluated the crude venom of C. d. cascavella for its cytotoxic activity in vitro against both tumor cell lines and normal cells. The mechanism of cell death induced by this venom was also investigated. C. d. cascavella venom presented high cytotoxicity (IC50 values ranging from 2.7 to 6.9 µg/mL) against five tumor cells lines: OVCAR-8 and SKOV3 (ovarian carcinomas), PC-3M (metastatic prostate carcinoma), MCF-7 (breast carcinoma), and SF-268 (glioblastoma) and PBMC as well. The cells treated with C. d. cascavella venom triggered the apoptotic pathway as confirmed by several methods. These results underline the biomedical potential of toxins from the venom from this species.

Serpentes do Gênero Crotalus ganhou espaço significativo no campo científico, desde o desenvolvimento de pesquisas com seu veneno envolvendo atividade citotóxica. A Crotalus durissus cascavella (C.d.cascavella) é uma subespécie característica da Caatinga do Nordeste do Brasil e faltam estudos sobre as propriedades de seu veneno. O presente estudo avaliou o veneno bruto de C. d. cascavella para a sua atividade citotóxica in vitro contra as linhagens de células tumorais e células normais. O mecanismo de morte celular induzida por este veneno também foi investigado. Observou-se alta citotoxicidade (valores de IC50 entre 2,7-6,9 µg/mL) contra cinco linhagens de células tumorais, dentre elas: OVCAR - 8 e SKOV3 (carcinoma ovariano), PC-3M (carcinoma metastático de próstata), MCF-7 (carcinoma mamário), SF - 268 (glioblastoma) e PBMC. As células tratadas dispararam a cascata apoptótica, como confirmado por vários métodos demonstrados neste trabalho. Esses resultados reforçam, assim, o potencial biomédico e farmacológico das toxinas do veneno dessa espécie.

AVALIAÇÃO CITOTÓXICA DA MAMMEA A/BB EM LINHAGENS DE CÉLULAS DE GLIOMA

COSTA, I. B. Avaliação citotoxica da mammea A/BB em linhagens de células de glioma. 2019. 80 p. Dissertação (Mestre em Ciência Animal nos Trópicos) Escola de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal da Bahia, Salvador, 2019. O glioblastoma é a forma mais agressiva dentre os gliomas os recursos terapêuticos disponíveis são limitados e envolvem ressecção cirúrgica, radioterapia e quimioterapia. Nesse ínterim, a busca por alternativas farmacológicas mais eficazes e menos agressivas coloca a mammea A/BB em análise. Esse metabólito vegetal é encontrado na casca das raízes da família botânica Calophyllaceae, do gênero Kielmeyera. Objetiva-se a partir da realização deste estudo avaliar o potencial citotóxico da mammea A/BB em células de glioblastoma humano U251 e de glioma de rato C6. A ação farmacológica da mammea A/BB foi testada em ambas linhagens, por meio dos ensaios de viabilidade celular por MTT, teste de migração, quantificação de cariopicnose e da expressão de glicoproteína-p. Analisou-se também o efeito da droga em células normais astrocitárias de rato e uma comparação da viabilidade celular entre a droga teste e o quimioterápico de primeira linha, a temozolomida. Os experimentos desenvolvidos indicaram que as linhagens U251 e C6 apresentaram, em todas as amostras analisadas, uma sensibilidade concentração dependente à mammea A/BB e resistência à temozolomida no intervalo de concentração de 2 M a 200 M. As concentrações de 27 ± 2,31M e 56,85 ± 14,17 M da mammea A/BB foram capazes de inibir a população celular em 50% nas linhagens U251 e C6, respectivamente, bem como o potencial migratório das referidas linhagens. A droga teste não apresenta ação citotóxica em células astrocitárias de rato. Foram encontrados núcleos picnóticos em maior quantidade no tratamento com a mammea A/BB quando comparado com as condições controle e DMSO. A mammea A/BB não apresentou diferença significativa na indução da expressão da glicoproteína P. Os resultados obtidos indicam uma ação farmacológica potencial na indução da citotoxicidade da droga nas tipologias celulares tumorais e não citotóxica nas células normais avaliadas.

COSTA, I. B. Cytotoxic evaluation of the mammea A/BB to glioma cells. 2019. 80 p. MSc Thesis (Mestre em Ciência Animal nos Trópicos) Escola de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal da Bahia, Salvador, 2019. Glioblastoma is the most aggressive form of gliomas and the available therapeutic resources are limited and involve surgical resection, radiotherapy and chemotherapy. The search for more effective and less aggressive pharmacological alternatives places mammea A/BB under analysis. This plant metabolite is found in the bark of roots of the botanical family Calophyllaceae, of the genus Kielmeyera. The objective of this study was to evaluate the cytotoxic potential of mammea A/BB in human glioblastoma U251 and C6 rat glioma cells. The pharmacological action of mammea A/BB was tested in both strains by cell viability assays by MTT, migration test, cariopnosis quantification and p-glycoprotein expression.The effect of the drug on normal murine astrocytic cells and a comparison of cell viability between the test drug and the first-line chemotherapy, temozolomide, were also analyzed. The experiments showed that the U251 and C6 cell lines had a concentration dependent sensitivity to mammae A/BB and resistance to temozolomide in the concentration range of 2 M to 200 M in all the analyzed samples. The concentrations of 27 ± 2.31 M and 56.85 ± 14.17 M of mammea A/BB were able to inhibit the cell population in 50% in the lines U251 and C6, respectively, as well as the migratory potential of these lines. The test drug shows no cytotoxic action on murine astrocyte cells. Pinocytic nuclei were found in greater quantity in the treatment with mammea A/BB when compared to the control and DMSO conditions. Mammea A/BB showed no significant difference in the induction of P-glycoprotein expression. The results indicate a potential pharmacological action in the induction of cytotoxicity of the drug in tumor cell types and non-cytotoxic in the normal cells evaluated.

Combination hyperbaric oxygen and temozolomide therapy in c6 rat glioma model / Terapia combinada de oxigênio hiperbárico e temozomida no modelo C6 de glioma em ratos

PURPOSE: Temozolomide (TMZ) has anti-tumor activity in patients with malignant glioma. Hyperbaric oxygen (HBO) may enhance the efficacy of certain therapies that are limited because of the hypoxic tumor microenvironment. We examined the combined effects of TMZ-HBO in a rat glioma model. METHODS: After stereotactic injection of C6/LacZ rat glioma cells into the Wistar rats brain, the rats were randomly assigned to three treatment groups [group 1, control treatment; group 2, TMZ alone; group 3, a combination of TMZ and HBO]. Rats were sacrificed 18 days after treatment, and number of intra-/peri-tumoral vessels, microendothelial proliferations, immunohistochemistry and necrotic area were evaluated. RESULTS: Tumoral tissue was stained only sparsely with GFAP. Temozolomide treatment was significantly decreased in tumor tissue intratumoral vessel number / total tumor area level. The level of Ki67 was significantly decreased in the tumor tissue of the group 3. Additionally, the total necrotic area / total tumor volume (%) was decreased significantly in tumor tissue of the group 3 rats compared to group1 and 2. CONCLUSION: The combination of hyperbaric oxygen with temozolomide produced an important reduction in glioma growth and effective approach to the treatment of glioblastoma.(AU)

OBJETIVO: A temozolomida (TMZ) tem atividade anti-tumoral em pacientes com glioma maligno. Oxigênio hiperbárico (HBO) pode aumentar a eficácia de terapias que são limitadas devido a um microambiente do tumor hipóxico. Foram examinados os efeitos combinados de TMZ-HBO em um modelo de glioma em rato. MÉTODOS: Após a injeção estereotáxica de células de glioma de rato C6/LacZ no cérebro de ratos Wistar, os ratos foram distribuídos aleatoriamente em três grupos de tratamento: Grupo 1: tratamento de controle. Grupo 2: TMZ sozinho. Grupo 3: uma combinação de TMZ e HBO. Os ratos foram sacrificados 18 dias após o tratamento. Foram avaliados o número de vasos intra-/peri-tumoral, proliferação microendotelial, imunohistoquímica e área necrótica . RESULTADOS: O tecido tumoral foi marcado apenas esparsamente com GFAP. O tratamento com temozolomida diminuiu significativamente o tecido intratumoral e a área total do tumor. O nível de Ki67 foi significativamente diminuído no tecido do tumor do grupo 3. Além disso, a superfície necrótica total / volume total do tumor (%) diminuiu significativamente no tecido do tumor do grupo 3 em comparação com grupo 1 e 2. CONCLUSÃO: A combinação de oxigênio hiperbárico com temozolomida produziu uma redução importante no crescimento do glioma podendo ser abordagem eficaz para o tratamento do glioblastoma.(AU)

Tumor cytotoxicity of leucurolysin-B, a P-III snake venom metalloproteinase from Bothrops leucurus

Although it has been demonstrated that venoms and toxins from some snakes are able to influence the growth of tumor cells, few antitumoral compounds from Bothrops leucurus venom have been characterized. Leucurolysin-B (leuc-B) is a metalloproteinase class P-III isolated from B. leucurus which possesses an ECD-disintegrin domain. Both ECD-disentegrin and RGD-disintegrin are able to bind to cell surface integrins and inhibit their adherence to their natural ligands. In the present study, the potential efficacy and the cytotoxic effects of leuc-B on glioblastoma, breast cancer and melanoma cell lines were analyzed. The effect of leuc-B on cancer cell survival was evaluated and its 50 percent inhibitory concentration (IC50) was determined. Morphological alterations were monitored by contrast phase and fluorescent microscopy. The results demonstrated that leuc-B has potent cytotoxic effect in a micromolar range against all evaluated cancer cell lines. Morphologically, dying cells showed fragmentation, condensation of their contents concomitant with shrinkage and appearance of vacuoles. This study reports for the first time the cytotoxic effect of leuc-B from B. leucurus snake venom on tumor cells.(AU)

Biologia do glioblastoma multiforme da dinâmica de ativação microglial ao papel do canal de potássio Kv 10.1

O glioblastoma multiforme é o tumor cerebral mais agressivo. Já a micróglia representa 30% da massa tumoral e desempenha um importante papel na tumorigênese. Este trabalho buscou estudar o padrão de infiltração e alteração morfológica da micróglia no tecido tumoral formado por células da linhagem GL261mCherry implantadas ortotopicamente. Além disto, buscou-se examinar o papel do canal de potássio Kv 10.1, correlacionado ao crescimento tumoral, primeiro na interação da micróglia com as células tumorais e, segundo, frente à lesão celular causada pelo fármaco de escolha ao tratamento do glioma, a temozolomida. Camundongos CX3CR1-EGFP receberam injeções intracorticais de células de glioblastoma multiforme capazes de expressar a proteína fluorescente mCherry. Microscopia de epifluorescência e confocal foram empregadas nas análises morfométricas, ao passo que a microscopia do tipo 2-photon (2P-LSM) foi usada para visualizar as células tumorais e microgliais no cérebro de animais vivos. Os resultados deste estudo revelaram uma microgliose intensa em áreas cerebrais logo após a implantação do tumor, isto é, aos 30 minutos. Nos primeiros três dias, a micróglia tende a formar aglomerados de células em torno dos tumores. Para, em seguida, infiltrar no centro tumoral, onde permanece durante todos os pontos de tempo estudados, de 6 a 18 dias. Com o aumento da massa tumoral, as células tumorais perdem progressivamente a sua forma original, assumindo uma morfologia heterogênea e difusa; o tamanho do corpo celular (perímetro) passou de 10 µm, três dias após o implante, para 52 µm aos 18 dias. Em contato com o glioma, a micróglia também muda sua morfologia. A forma tornou-se amebóide, com corpos celulares alargados. O corpo celular (área) cresceu de 366±0.0 µm2, na micróglia em vigilância, para 1310±146.0 µm2 e ramificações curtas, ou mesmo ausência de ramificações no fenótipo ativado. Aos 12 dias após o implante, foi notada a presença de células multinucleadas de glioma, os policariócitos, em contato íntimo com a micróglia ativada. Sobre o canal Kv-10.1, este foi expresso em células cultivadas de glioma, de micróglia (linhagem BV-2) e também em tecido tumoral de camundongos implantados com o tumor. A supressão deste canal, em células de glioma, potencializou a injúria por TMZ em 29%, conforme ensaio de MTT. Em conclusão, a micróglia apresentou um padrão espaço-temporal de infiltração no glioma, o que favorece influências recíprocas e pró-tumorigênicas. Já o canal Kv-10.1, pode tanto representar uma via de comunicação entre estes tipos celulares, quanto ser um potencial alvo para a terapêutica do glioma, já que foi capaz de potencializar os efeitos da temozolomida na morte celular de linhagens de glioma.

Glioblastoma multiforme is the most aggressive brain tumor. Microglia represents 30% of the tumor mass, and plays a role in tumorigenesis. This work studied the pattern of microglial growth into brain tumor tissue formed by orthotopically implanted glioma cells of the established GL261 cell line. In addition, we examined the expression of the Kv 10.1 potassium channel that frequently correlates with tumor growth. CX3CR1-EGFP mice received intracortical injections of GL261 tumor cells with stable expression of the red fluorescent protein mCherry. Epifluorescence - and confocal laser-scanning microscopy were employed in the analysis of tissue sections, whereas two-photon laser-scanning microscopy (2P-LSM) was used to visualize tumor cells and microglia in the brain of living animals. Our results revealed an intense microgliosis in brain areas already shortly after tumor implantation, i.e. at 30 minutes. In the first three days, microglia formed clusters of cells around tumors mass. Then cells infiltrated the tumor area, where they remained during all the time points studied, from 6 to 18 days. As tumor increased in size, GL261 cells progressively lost their original shape, assuming a heterogeneous and diffuse morphology. Soma size increased from 10 to 52 µm. In contact with the glioma, microglia also changed its morphology. Cell bodies enlarged from 366±0.0 µm2, in quiescent microglia, to 1310±146.0 µm2. The shape became amoeboid, with enlarged cell bodies and short processes (or even absence of them). Remarkably, we found microglial processes that closely surrounded glioma cells. Microglia also grew around multinucleated polycariocytes, found in tumors at 12 days. The Kv 10.1 channel was expressed in cultured GL261 cells, microglia cell line (BV-2) and also in mouse tumors. Suppression of Kv10.1 caused a 29% decrease in the viability of glioma cells injured by TMZ. In conclusion, microglia presented a temporal and spatial pattern of infiltration in glioma tumors, which favors reciprocal and protumorigenic influences. Kv 10.1 expressed by glioma cells in close contact with microglia may represent a communication pathway between microglia and cancer cells and, could be a potential target for antiglioma gene therapy, since it potentiated the effects of temozolomide in glioma cell lines.

Horner’s Syndrome Associated with Glioblastoma Multiforme in a Dog

A 7-year-old, intact female Bulldog was presented to the veterinarian with ocular signs characteristic of Horner’s Syndrome: bilateral conjunctival hyperemia, enophthalmos, miosis, and protrusion of the third eyelid of left eye. A month later, the dog returned for recheck with marked neurologic signs: lethargy, circling, constant vocalizing, depressed mentation, and hyperesthesia. A neoplasm in the brain was suspected. Treatment was implemented in an attempt to reduce clinical signs. After initial clinical remission, the clinical condition got worse and the owner elected euthanasia. Necropsy revealed a large intracranial neoplasm affecting an extensive portion of the cerebral parenchyma.The neoplasm was histologically diagnosed as glioblastoma multiforme. Determination of the extent of the affected cerebral regions based on neurologic exam was useful in establishing the presumptive clinical diagnosis of intracranial neoplasm. Horner’s syndrome preceded the neurologic signs in this dog. Although intracranial neoplasms such as glioblastomas multiformes are a rare cause of this syndrome, it is important to include them in the list of differential diagnoses in dogs in which this syndrome is seen in conjunction with neurologic signs.

Horners Syndrome Associated with Glioblastoma Multiforme in a Dog

A 7-year-old, intact female Bulldog was presented to the veterinarian with ocular signs characteristic of Horners Syndrome: bilateral conjunctival hyperemia, enophthalmos, miosis, and protrusion of the third eyelid of left eye. A month later, the dog returned for recheck with marked neurologic signs: lethargy, circling, constant vocalizing, depressed mentation, and hyperesthesia. A neoplasm in the brain was suspected. Treatment was implemented in an attempt to reduce clinical signs. After initial clinical remission, the clinical condition got worse and the owner elected euthanasia. Necropsy revealed a large intracranial neoplasm affecting an extensive portion of the cerebral parenchyma.The neoplasm was histologically diagnosed as glioblastoma multiforme. Determination of the extent of the affected cerebral regions based on neurologic exam was useful in establishing the presumptive clinical diagnosis of intracranial neoplasm. Horners syndrome preceded the neurologic signs in this dog. Although intracranial neoplasms such as glioblastomas multiformes are a rare cause of this syndrome, it is important to include them in the list of differential diagnoses in dogs in which this syndrome is seen in conjunction with neurologic signs.(AU)

Crotalus durissus terrificus venom as a source of antitumoral agents

The basic knowledge on neoplasms is increasing quickly; however, few advances have been achieved in clinical therapy against tumors. For this reason, the development of alternative drugs is relevant in the attempt to improve prognosis and to increase patients survival. Snake venoms are natural sources of bioactive substances with therapeutic potential. The objective of this work was to identify and characterize the antitumoral effect of Crotalus durissus terrificus venom (CV) and its polypeptide, crotoxin, on benign and malignant tumors, respectively, pituitary adenoma and glioblastoma. The results demonstrated that CV possess a powerful antitumoral effect on benign (pituitary adenoma) and malignant (glioblastoma multiforme) tumors with IC50 values of 0.96 ± 0.11 ìg/mL and 2.15 ± 0.2 ìg/mL, respectively. This antitumoral effect is cell-cycle-specific and dependent on extracellular calcium, an important factor for crotoxin phospholipase A2 activity. The CV antitumoral effect can be ascribed, at least partially, to the polypeptide crotoxin that also induced brain tumor cell death. In spite of the known CV nephrotoxicity and neurotoxicity, acute treatment with its antitumoral dose established in vitro was not found to be toxic to the analyzed animals. These results indicate the biotechnological potential of CV as a source of pharmaceutical templates for cancer therapy.(AU)

Atividade antioxidante e citotóxica de extratos de plantas do semiárido brasileiro com potencial para o desenvolvimento de fitoterápicos

O bioma caatinga situado na região semiárida brasileira se destaca com um número considerável de espécies vegetais utilizadas empiricamente por suas propriedades terapêuticas. Partindo dessa informação esse trabalho teve como objetivo investigar a atividade antioxidante e o potencial citotóxico de amostras obtidas a partir de plantas endêmicas da região semiárida brasileira. No estudo inícial de revisão, concluiu-se que poucas são as espécies que foram e/ou estão sendo pesquisadas com vista ao seu potencial antineoplásico apesar da gama de espécies presente na região em estudo. No ensaio antioxidante utilizando o radical 2,2-azobis-(3-etilbenzotiazolina-6-sulfonato) (ABTS+), os extratos etanólicos das folhas das espécies Combretum mellifluum e Terminalia actinophylla apresentaram os melhores resultados, com capacidade antioxidante equivalente ao Trolox (TEAC) igual a 31,4 mM de Trolox/g. No ensaio utilizando o radical 2,2-difenil-1picril-hidrazil (DPPH), a fração aquosa dos galhos da espécie Oxandra sessiliflora apresentou maior valor TEAC com 3,5 mM de Trolox/g. No estudo da toxicidade aguda com Artemia salina, a fração diclorometâno das folhas da espécie Anadenanthera colubrina revelou uma CL50 de 23,75 µg/mL. A fração diclorometano da casca da espécie Mimosa caesalpiniifolia se mostrou a mais promissora nos ensaios citotóxicos, apresentando CI50 variando entre 4,7 a 7,1 g/mL para as linhagens humanas SF-295 (glioblastoma), OVCAR-8 (carcinoma do ovário), HL-60 (leucemia promielocítica) e HCT-116 (carcinoma colorretal) no teste de MTT, no teste utilizando células vegetais de Allium cepa essa fração também apresentou toxicidade, citotocixidade e genotixicidade significativa, já a análise da cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) dessa fração revelou a presença significativa do ácido betulínico. Apenas três amostras exibiram atividade hemolítica, apresentando uma CE50 entre 13,2 a 48,5 µg/mL, para a fração hexânica da casca da espécie Platonia insignis e para os extratos etanólicos das folhas das espécies Combretum mellifluum e Terminalia actinophylla. O extrato etanólico da folha da espécie Combretum duarteanum, apresentou melhor atividade antioxidante in vitro por meio da capacidade de remoção de radicais hidroxila, do óxido nítrico e redução do ácido tiobarbitúrico. A espectroscopia de varredura (UV-Vis) e a análise por cromatografia em camada delgada analítica (CCDA) se mostraram como uma ferramenta útil na identificação inicial de algumas classes de metabólitos secundários, como terpenoides e flavonoides. O levantamento prospectivo sobre espécie Mimosa caesalpiniifolia mostrou que as patentes foram depositadas em maior número nas bases WIPO (Word Intellectual Property Organization) e EPO (European Patent Office), com classificação internacional principalmente do tipo A61K (ciência médica ou veterinária e higiene) e A23L (alimentos, produtos alimentícios ou bebidas não alcoólicas). As produções científicas estão alocadas principalmente nas áreas da medicina, farmacologia, toxicologia e farmacêutica e bioquímica, genética e biologia molecular, com ápice de publicações a partir de 2010.

O bioma caatinga situado na região semiárida brasileira se destaca com um número considerável de espécies vegetais utilizadas empiricamente por suas propriedades terapêuticas. Partindo dessa informação esse trabalho teve como objetivo investigar a atividade antioxidante e o potencial citotóxico de amostras obtidas a partir de plantas endêmicas da região semiárida brasileira. No estudo inícial de revisão, concluiu-se que poucas são as espécies que foram e/ou estão sendo pesquisadas com vista ao seu potencial antineoplásico apesar da gama de espécies presente na região em estudo. No ensaio antioxidante utilizando o radical 2,2-azobis-(3-etilbenzotiazolina-6-sulfonato) (ABTS+), os extratos etanólicos das folhas das espécies Combretum mellifluum e Terminalia actinophylla apresentaram os melhores resultados, com capacidade antioxidante equivalente ao Trolox (TEAC) igual a 31,4 mM de Trolox/g. No ensaio utilizando o radical 2,2-difenil-1picril-hidrazil (DPPH), a fração aquosa dos galhos da espécie Oxandra sessiliflora apresentou maior valor TEAC com 3,5 mM de Trolox/g. No estudo da toxicidade aguda com Artemia salina, a fração diclorometâno das folhas da espécie Anadenanthera colubrina revelou uma CL50 de 23,75 µg/mL. A fração diclorometano da casca da espécie Mimosa caesalpiniifolia se mostrou a mais promissora nos ensaios citotóxicos, apresentando CI50 variando entre 4,7 a 7,1 g/mL para as linhagens humanas SF-295 (glioblastoma), OVCAR-8 (carcinoma do ovário), HL-60 (leucemia promielocítica) e HCT-116 (carcinoma colorretal) no teste de MTT, no teste utilizando células vegetais de Allium cepa essa fração também apresentou toxicidade, citotocixidade e genotixicidade significativa, já a análise da cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) dessa fração revelou a presença significativa do ácido betulínico. Apenas três amostras exibiram atividade hemolítica, apresentando uma CE50 entre 13,2 a 48,5 µg/mL, para a fração hexânica da casca da espécie Platonia insignis e para os extratos etanólicos das folhas das espécies Combretum mellifluum e Terminalia actinophylla. O extrato etanólico da folha da espécie Combretum duarteanum, apresentou melhor atividade antioxidante in vitro por meio da capacidade de remoção de radicais hidroxila, do óxido nítrico e redução do ácido tiobarbitúrico. A espectroscopia de varredura (UV-Vis) e a análise por cromatografia em camada delgada analítica (CCDA) se mostraram como uma ferramenta útil na identificação inicial de algumas classes de metabólitos secundários, como terpenoides e flavonoides. O levantamento prospectivo sobre espécie Mimosa caesalpiniifolia mostrou que as patentes foram depositadas em maior número nas bases WIPO (Word Intellectual Property Organization) e EPO (European Patent Office), com classificação internacional principalmente do tipo A61K (ciência médica ou veterinária e higiene) e A23L (alimentos, produtos alimentícios ou bebidas não alcoólicas). As produções científicas estão alocadas principalmente nas áreas da medicina, farmacologia, toxicologia e farmacêutica e bioquímica, genética e biologia molecular, com ápice de publicações a partir de 2010.

Estudo do potencial citotóxico do veneno da serpenteCrotalus Durissus Cascavella em adenocarcinoma ovariano – OVCAR-88

Nas últimas décadas o câncer alcançou grande dimensão, sendo considerado um problema de saúde publica a nível mundial, representando uma das principais causas de morte no mundo. As serpentes do gênero Crotalus vêm ganhando espaço significativo no campo científico, pois pesquisas realizadas com seu veneno estão demostrando que este apresenta mecanismos envolvidos em atividades citotóxicas em linhagens tumorais. Logo, o objetivo deste trabalho foi analisar o efeito citotóxico do veneno bruto da serpente Crotalus durissus cascavella (Cdcasca), in vitro, em linhagens tumorais, bem como, os mecanismos de morte celular induzidos por este veneno. Os efeitos citotóxicos da Cdcasca foram avaliados nas linhagens de carcinoma ovariano, carcinoma de próstata, carcinoma de mama e glioblastoma. Foram realizados também avaliação de alterações no DNA, integridade da membrana celular, ciclo celular e atividade das Caspases 3 e 7. Os resultados demostraram relevante citotoxicidade apresentando valores de CI50 de 2.4 até 6.7 ?g/mL, para as cinco linhagens testadas. As células tratadas com o Cdcasca demostraram alterações morfológicas de forma dosedependente, apresentando redução no volume celular, fragmentação nuclear e formação de corpos apoptóticos. A atividade anti-proliferativa e integridade de membrana celular foi confirmada, com uma significante redução do número de células para a concentração do veneno de 4 ?g/mL. A ocorrência de apoptose foi confirmada através da ativação de Caspases 3 e 7. Em conclusão, o veneno da Crotalus durissus cascavella demostrou efeito citotóxico dose-dependente em diversas linhagens tumorais, demonstrando diversas alterações morfológicas em especial as células de linhagem de carcinoma ovariano, causando morte celular.

In the last decades cancer has reached a great dimension being considered a worldwide public health problem, representing a major cause of death in world. Snakes from the genus Crotalus has gained significant space in the scientific field, since researches with their venom show that its mechanisms are involved in the cytotoxic activity.Therefore, the aim of the present study was to analyze the crude venom of Crotalus durissus cascavella (Cdcasca) cytotoxic activity in vitro against tumor cell lines, as well as, the mechanism of cell death induced by this venom. . The cytotoxic effects of Cdcasca were evaluated on ovarian cell carcinoma, prostate carcinoma, breast carcinoma and glioblastoma. Evaluations to DNA fragmentation, cell membrane integrity, cell cycle and the activity of Caspases 3 and 7 were also present in this study. Results showed relevant cytotoxicity presenting values of CI50 of 2.4 to 6.7 μg/mL on the five lineages tested. The cells treated with Cdcasca showed morphologic alterations in a dose - dependent way, presenting reduction on the cell volume, nuclear fragmentation and presence of apoptotic bodies. The antiprolifer active activity and the membrane integrity were confirmed, with a significant reduction of the number of cells to the concentration of the venom of μg/mL. The occurrence of apoptosis was confirmed trough the activation of Caspases 3 and 7. In conclusion, the venom of Crotalus durissus cascavella showed a dose-dependent cytotoxic effect in several tumor cell lines, presenting several morphological alterations, especially to the ovarian cell carcinoma, causing cell death.

Estudo do potencial citotóxico do veneno da serpenteCrotalus Durissus Cascavella em adenocarcinoma ovariano OVCAR-88

Nas últimas décadas o câncer alcançou grande dimensão, sendo considerado um problema de saúde publica a nível mundial, representando uma das principais causas de morte no mundo. As serpentes do gênero Crotalus vêm ganhando espaço significativo no campo científico, pois pesquisas realizadas com seu veneno estão demostrando que este apresenta mecanismos envolvidos em atividades citotóxicas em linhagens tumorais. Logo, o objetivo deste trabalho foi analisar o efeito citotóxico do veneno bruto da serpente Crotalus durissus cascavella (Cdcasca), in vitro, em linhagens tumorais, bem como, os mecanismos de morte celular induzidos por este veneno. Os efeitos citotóxicos da Cdcasca foram avaliados nas linhagens de carcinoma ovariano, carcinoma de próstata, carcinoma de mama e glioblastoma. Foram realizados também avaliação de alterações no DNA, integridade da membrana celular, ciclo celular e atividade das Caspases 3 e 7. Os resultados demostraram relevante citotoxicidade apresentando valores de CI50 de 2.4 até 6.7 ?g/mL, para as cinco linhagens testadas. As células tratadas com o Cdcasca demostraram alterações morfológicas de forma dosedependente, apresentando redução no volume celular, fragmentação nuclear e formação de corpos apoptóticos. A atividade anti-proliferativa e integridade de membrana celular foi confirmada, com uma significante redução do número de células para a concentração do veneno de 4 ?g/mL. A ocorrência de apoptose foi confirmada através da ativação de Caspases 3 e 7. Em conclusão, o veneno da Crotalus durissus cascavella demostrou efeito citotóxico dose-dependente em diversas linhagens tumorais, demonstrando diversas alterações morfológicas em especial as células de linhagem de carcinoma ovariano, causando morte celular. (AU)

In the last decades cancer has reached a great dimension being considered a worldwide public health problem, representing a major cause of death in world. Snakes from the genus Crotalus has gained significant space in the scientific field, since researches with their venom show that its mechanisms are involved in the cytotoxic activity.Therefore, the aim of the present study was to analyze the crude venom of Crotalus durissus cascavella (Cdcasca) cytotoxic activity in vitro against tumor cell lines, as well as, the mechanism of cell death induced by this venom. . The cytotoxic effects of Cdcasca were evaluated on ovarian cell carcinoma, prostate carcinoma, breast carcinoma and glioblastoma. Evaluations to DNA fragmentation, cell membrane integrity, cell cycle and the activity of Caspases 3 and 7 were also present in this study. Results showed relevant cytotoxicity presenting values of CI50 of 2.4 to 6.7 μg/mL on the five lineages tested. The cells treated with Cdcasca showed morphologic alterations in a dose - dependent way, presenting reduction on the cell volume, nuclear fragmentation and presence of apoptotic bodies. The antiprolifer active activity and the membrane integrity were confirmed, with a significant reduction of the number of cells to the concentration of the venom of μg/mL. The occurrence of apoptosis was confirmed trough the activation of Caspases 3 and 7. In conclusion, the venom of Crotalus durissus cascavella showed a dose-dependent cytotoxic effect in several tumor cell lines, presenting several morphological alterations, especially to the ovarian cell carcinoma, causing cell death.(AU)

Cytotoxic effects of an extract containing alkaloids obtained from Prosopis juliflora Sw. D.C. (Algaroba) pods on glioblastoma cells

Estudos têm revelado que o consumo predominante de vagens de Prosopis juliflora desenvolve doença de caráter neurotóxico em animais de produção. No sistema nervoso central, as células gliais desempenham funções essenciais que têm impacto na fisiologia e integridade neuronal. Neste estudo, investigamos os efeitos de citotoxicidade, modificações fenotípicas e expressão de GFAP, proteína marcadora de reatividade astrocitária, do extrato alcaloidal (EA), obtido das vagens de P. juliflora, sobre células gliais da linhagem GL-15. Concentrações entre 0,03-30µg/ml do EA foram avaliadas por 24-72 h. O teste do MTT, LDH e coloração com Azul de Tripan mostraram citotoxicidade dose-dependente do EA, atingindo efeito máximo a 30µg/ml em 24 h. Curvas de crescimento avaliadas pela coloracao com Azul de Tripan revelaram redução significativa do número de células viáveis (p

Cytotoxic effects of an extract containing alkaloids obtained from Prosopis juliflora Sw. D.C. (Algaroba) pods on glioblastoma cells

Estudos têm revelado que o consumo predominante de vagens de Prosopis juliflora desenvolve doença de caráter neurotóxico em animais de produção. No sistema nervoso central, as células gliais desempenham funções essenciais que têm impacto na fisiologia e integridade neuronal. Neste estudo, investigamos os efeitos de citotoxicidade, modificações fenotípicas e expressão de GFAP, proteína marcadora de reatividade astrocitária, do extrato alcaloidal (EA), obtido das vagens de P. juliflora, sobre células gliais da linhagem GL-15. Concentrações entre 0,03-30µg/ml do EA foram avaliadas por 24-72 h. O teste do MTT, LDH e coloração com Azul de Tripan mostraram citotoxicidade dose-dependente do EA, atingindo efeito máximo a 30µg/ml em 24 h. Curvas de crescimento avaliadas pela coloracao com Azul de Tripan revelaram redução significativa do número de células viáveis (p

Análise dos efeitos da fração de alcalóides totas extraida das vagens de Prosopis juliflora Sw.D.C. (Algaroba) sobre células gliais do sistema nervoso central

A Prosopis juliflora é amplamente utilizada na alimentação humana e de várias espécies animais, especialmente bovinos. Quadros de intoxicação por esta planta, nesta espécie, têm sido relatados, principalmente quando a mesma é oferecida como única fonte alimentar, desencadeando uma doença de sintomatologia nervosa. Neste estudo, objetivou-se avaliar os efeitos in vitro da fração de alcalóides totais (FAT) extraída das vagens da Prosopis juliflora utilizando modelos de cultura primária de astrócitos obtidos do córtex cerebral de ratos e de células gliais transformadas da linhagem GL-15, derivada de um glioblastoma multiforme humano. Concentrações entre 0,03 a 30 µg/ml da FAT foram avaliadas no período de 24 e 72 h. Em astrócitos, o teste do MTT não mostrou toxicidade da FAT após 24 h de exposição em concentrações até 3 µg/ml. Após 72 h, a FAT também não apresentou toxicidade, podendo-se observar um aumento da atividade das desidrogenases mitocondriais nas concentrações entre 0,3 e 3 µg/ml. Nestas concentrações foi observado aumento na permeabilidade da membrana após 72 h de exposição à FAT, quando avaliada através da coloração com o corante de exclusão Azul de Tripan. Nas células GL-15, o teste do MTT e a atividade da LDH mostraram uma citotoxicidade dose-dependente do composto em concentrações a partir de 0,3 µg/ml desde 24 h de exposição à FAT. Para estas células, após 72 h, a FAT iniciou seu efeito tóxico na concentração de 0,03 µg/ml. À concentração de 30 µg/ml a FAT foi citotóxica desde 24 h de exposição para ambos tipos celulares. Em células GL-15 foi observada uma parada do crescimento quando analisada a taxa de incorporação de [3H]-timidina em células em divisão. A taxa de incorporação de foi reduzida em cerca de 20 % após 24 h e em cerca de 38 % após 72 h em relação às condições controle. As curvas de crescimento avaliadas por Azul de Tripan mostraram uma forte redução do número de células GL-15 atingindo efeito máximo no tratamento com 30 µg/ml da FAT após 24 e 72 h. Análises por imunocitoquímica e western blotting (WB) foram realizadas para as proteínas do citoesqueleto vimentina e GFAP em ambos tipos celulares. Na imunocitoquímica avaliada em astrócitos foi observado alterações nas concentrações de 0,3 e 3 µg/ml da FAT após 72 h, concentrações nas quais as células apresentaram processos multipolares por toda a placa. Estes resultados corroboram com os obtidos por WB, nos quais observou-se uma regulação positiva da expressão de GFAP nas células tratadas com 0,3 e 3 µg/ml, após 72 h de exposição ao composto. A expressão de vimentina apresentou-se elevada, porém sem alterações significativas nas concentrações de 0,03 a 3 µg/ml. Por outro lado, na presença da mais baixa concentração (0,03 µg/ml), as células GL-15 expressaram vimentina e modificaram sua morfologia com um aumento do número de células GFAP positivas. Análises por WB demonstram que as células GL-15 expostas às mais altas concentrações (3 e 30 µg/ml) apresentaram muito pouca expressão de vimentina e GFAP. Os resultados obtidos neste estudo sugerem que os alcalóides da P. juliflora podem estar envolvidos nos efeitos neurotóxicos induzidos pela planta. Avaliações com a utilização de alcalóides purificados poderão permitir maiores esclarecimentos sobre a identificação daquele(s) mais ativo(s), possibilitando sua possível aplicação no tratamento de gliomas