The Effect of Dietary Glucose Oxidase Supplementation on Production Performance, Egg Quality and Nutrient Digestibility in Laying Hens

The study was conducted to investigate the effect of GOX on performance, egg quality, and nutrient digestibility in laying hens. In total, 432, 50-week-old Hy-Line brown breeder hens were assigned into four treatments, and fed a basal diet with GOX at 0, 100, 200 and 300 units for 10 weeks, respectively. A Quadratic decrease in FI in week 3 (p<0.05) and linear increase in egg production in week 6 to 10 and overall experiment period (p<0.05) and Quadratic increase in egg production in week 7 (p<0.05), a linear decrease in broken egg rate in week 6 (p<0.05) a quadratic increase in egg weight on day 14 (p<0.05), alinear increase in egg weight on day 28 (p<0.05), and linear decrease in yolk color on day 7 (p<0.05), a linear increase in yolk color on day 42 and day 70 (p<0.05), and linear increase in haugh unit on day 28 and 70 (p<0.05), a linear increase albumen height on day 28 and day 56 (p<0.05), and linear decrease in shell color on day 14 (p<0.05) and day 28(p<0.05), a linear and quadratic increases in eggshell strength and eggshell thickness on day 56 (p<0.05), and linear increase in eggshell strength and eggshell thickness on day 70 (P0.05) were observed with the addition of GOX the the diet. Conclusion: This study suggested that the supplementation of GOX may have beneficial effects on feed intake and egg quality in laying hens.(AU)

interferência do hematócrito sobre o desempenho de dois glicosímetros veterinários em cães / interference of haematocrit in the performance of two veterinary glucometers in dogs

Os glicosímetros (GT) são uma ferramenta muito utilizada no monitoramento da glicemia em cães e o hematócrito (HT) é um dos fatores que pode alterar sua acurácia, possivelmente devido a modificação da viscosidade do sangue, ao impedimento da reação com o plasma na superfície da tira, à alteração da cinética de difusão e/ou da modificação do volume plasmático, resultando em volume insuficiente de plasma para o teste dos GT. Este estudo avaliou o efeito do HT sobre o desempenho de dois GT veterinários para uso em cães em comparação a dois métodos laboratoriais de referência: glicose hexoquinase (Hx) e glicose oxidase (GOx). Ambos os GT apresentaram boa performance em amostras com HT inferior à 37%: GT1 r=0,90 com MLab Hx e r=0,94para GOx. Por sua vez, GT2 apresentou r=0,84 tanto para Hx quanto para GOx. Entretanto, apenas GT1 demonstrou desempenho adequado em amostras com HT (entre 37% e 55% (r=0,90 para Hx) e nenhum GT ofereceu atuação apropriada em amostras com HT superior à 55%. Conclui-se que o resultado apresentado por ambos GT altera de acordo com o hematócrito do animal. Deve-se considerar que pacientes com disglicemias estão frequentemente expostos às alterações clínico-patológicas, e a adoção destes GT específicos como estratégia de monitoramento pode não ser adequada, por isso a importância de outros procedimentos de medição da glicose serem empregados.

Glucometers (GT) are widely used as tools for monitoring blood glucose in dogs and hematocrit (HT) is one of the factors that can change its accuracy, possibly due to the change in blood viscosity, preventing the reaction with plasma on the surface of the strip, alteration of the diffusion kinetics and / or modification of the plasma volume, resulting in insufficient plasma volume for the GT test. This study evaluated the effect of HT on the performance of two veterinary GT for use in dogs compared to two reference laboratory methods (MLab): glucose hexokinase (Hx) and glucose oxidase (GOx). Both GT showed good performance in samples with HT below 37%: GT1 r = 0.90 with MLab Hx and r = 0.94 for GOx. In turn, GT2 presented r = 0.84 for both Hx and GOx. However, only GT1 demonstrated adequate performance in samples with HT between 37% and 55% (r = 0.90 for Hx) and no GT offered adequate performance in samples with HT greater than 55%. It can be concluded that the result presented by both GT changes according to the animal's hematocrit. It should be considered that patients with dysglycemias are frequently exposed to clinical-pathological changes, and the adoption of these specific GT as a monitoring strategy may not be adequate, so the importance of other procedures glucose measurement devices are employed.

interferência do hematócrito sobre o desempenho de dois glicosímetros veterinários em cães / interference of haematocrit in the performance of two veterinary glucometers in dogs

Os glicosímetros (GT) são uma ferramenta muito utilizada no monitoramento da glicemia em cães e o hematócrito (HT) é um dos fatores que pode alterar sua acurácia, possivelmente devido a modificação da viscosidade do sangue, ao impedimento da reação com o plasma na superfície da tira, à alteração da cinética de difusão e/ou da modificação do volume plasmático, resultando em volume insuficiente de plasma para o teste dos GT. Este estudo avaliou o efeito do HT sobre o desempenho de dois GT veterinários para uso em cães em comparação a dois métodos laboratoriais de referência: glicose hexoquinase (Hx) e glicose oxidase (GOx). Ambos os GT apresentaram boa performance em amostras com HT inferior à 37%: GT1 r=0,90 com MLab Hx e r=0,94para GOx. Por sua vez, GT2 apresentou r=0,84 tanto para Hx quanto para GOx. Entretanto, apenas GT1 demonstrou desempenho adequado em amostras com HT (entre 37% e 55% (r=0,90 para Hx) e nenhum GT ofereceu atuação apropriada em amostras com HT superior à 55%. Conclui-se que o resultado apresentado por ambos GT altera de acordo com o hematócrito do animal. Deve-se considerar que pacientes com disglicemias estão frequentemente expostos às alterações clínico-patológicas, e a adoção destes GT específicos como estratégia de monitoramento pode não ser adequada, por isso a importância de outros procedimentos de medição da glicose serem empregados.(AU)

Glucometers (GT) are widely used as tools for monitoring blood glucose in dogs and hematocrit (HT) is one of the factors that can change its accuracy, possibly due to the change in blood viscosity, preventing the reaction with plasma on the surface of the strip, alteration of the diffusion kinetics and / or modification of the plasma volume, resulting in insufficient plasma volume for the GT test. This study evaluated the effect of HT on the performance of two veterinary GT for use in dogs compared to two reference laboratory methods (MLab): glucose hexokinase (Hx) and glucose oxidase (GOx). Both GT showed good performance in samples with HT below 37%: GT1 r = 0.90 with MLab Hx and r = 0.94 for GOx. In turn, GT2 presented r = 0.84 for both Hx and GOx. However, only GT1 demonstrated adequate performance in samples with HT between 37% and 55% (r = 0.90 for Hx) and no GT offered adequate performance in samples with HT greater than 55%. It can be concluded that the result presented by both GT changes according to the animal's hematocrit. It should be considered that patients with dysglycemias are frequently exposed to clinical-pathological changes, and the adoption of these specific GT as a monitoring strategy may not be adequate, so the importance of other procedures glucose measurement devices are employed.(AU)

Cultivation of Pichia pastoris carrying the scFv anti LDL (-) antibody fragment. Effect of preculture carbon source

Antibodies and antibody fragments are nowadays among the most important biotechnological products, and Pichia pastoris is one of the most important vectors to produce them as well as other recombinant proteins. The conditions to effectively cultivate a P. pastoris strain previously genetically modified to produce the single-chain variable fragment anti low density lipoprotein (-) under the control of the alcohol oxidase promoter have been investigated in this study. In particular, it was evaluated if, and eventually how, the carbon source (glucose or glycerol) used in the preculture preceding cryopreservation in 20% glycerol influences both cell and antibody fragment productions either in flasks or in bioreactor. Although in flasks the volumetric productivity of the antibody fragment secreted by cells precultured, cryopreserved and reactivated in glycerol was 42.9% higher compared with cells precultured in glucose, the use of glycerol in bioreactor led to a remarkable shortening of the lag phase, thereby increasing it by no less than thrice compared to flasks. These results are quite promising in comparison with those reported in the literature for possible future industrial applications of this cultivation, taking into account that the overall process time was reduced by around 8h.(AU)

Interaction between xylanase, glucose oxidase and ascorbic acid on the technological quality of whole wheat bread / Interação entre xilanase, glicose oxidase e ácido ascórbico na qualidade tecnológica de pão elaborado com farinha do trigo integral

This study aimed to verify the performance of xylanase and its interaction with oxidants agents (glucose oxidase and ascorbic acid) on the quality of whole wheat bread. The experiment was based on a central composite rotational design and the Response Surface Methodology was used to analyze the results. None of the xylanase, glucose oxidase or ascorbic acid concentrations within the studied range led to a significant difference in the specific volume. The highest moisture content and the lowest firmness values were reported in the bread with lower and intermediate levels of xylanase and larger amounts of glucose oxidase and ascorbic acid. This effect was observed mainly at the end of the storage period. A minimum amount of xylanase (from 33 to 63 EDX kg-¹ flour) showed to be essential for obtaining best results. Levels of ascorbic acid above 63mg kg-¹ and glucose oxidase above 91 SRU kg-¹ proved to be necessary to offer the beneficial effect of xylanase.(AU)

O objetivo deste estudo foi verificar o desempenho da xilanase e sua interação com agentes oxidantes (glicose oxidase e ácido ascórbico) na qualidade de pão elaborado com farinha do trigo integral. O experimento foi baseado em um delineamento composto central rotacional (DCCR) e a Metodologia de Superfície de Resposta foi utilizada para analisar os resultados. Nenhuma das concentrações de xilanase, glicose oxidase e ácido ascórbico, dentro da faixa estudada, levaram a uma diferença significativa no volume específico. Mais alto conteúdo de umidade e menor firmeza foram encontrados nos pães com concentrações menores e intermediárias de xilanase e concentrações maiores de glicose oxidase e ácido ascórbico. Este efeito foi observado principalmente no final do período de estocagem. Uma quantidade mínima de xilanase (de 33 a 63 EDX kg-¹ farinha) mostra ser essencial na obtenção dos melhores resultados. Concentrações de ácido ascórbico acima de 63mg kg-¹ e glicose oxidase acima de 91 SRU kg-¹ mostraram ser necessárias para que o efeito benéfico da xilanase fosse observado.(AU)

Avaliação de três glicosímetros portáteis para mensuração de glicemia em cães

Glicosímetros ou sensores portáteis são dispositivos utilizados para mensuração da glicemia de forma rápida e com baixo custo. Os sensores portáteis são amplamente utilizados na rotina veterinária e por tutores que necessitam destes aparelhos para o monitoramento de enfermidades que exigem acompanhamento contínuo das glicemias, principalmente pacientes com diagnóstico de diabetes mellitus. Entretanto, nem todos os glicosímetros (humanos e veterinários) disponíveis no mercado são acurados para esta finalidade. O objetivo deste trabalho foi avaliar a precisão analítica e clínica de três glicosímetros portáteis por meio de análise estatística descritiva e comparativa, correlações entre os três glicosímetros e o método padrão, avaliações conforme as normativas ISO 15197:2003 e ISO 15197:2013 e análise da grade de erros. Os glicosímetros portáteis avaliados (FreeStyle Freedom Lite®; FreeStyle Optium Neo® e On Call Plus®) foram calibrados com soluções-controle disponibilizadas pelos fabricantes e manuseados conforme os manuais de cada modelo. O trabalho avaliou 115 amostras de 82 cães em diferentes faixas glicêmicas (hipoglicemia, normoglicemia e hiperglicemia) em pacientes com hematócrito normal. Os resultados obtidos com os glicosímetros foram comparados com o método laboratorial de referência enzimático colorimétrico glicose oxidase. Conclui-se que o glicosímetro FreeStyle Optium Neo® obteve o melhor desempenho, sendo a melhor opção a ser utilizada para mensuração da glicemia em cães, entre os glicosímetros avaliados neste estudo.

Glucometers or portable sensors are devices used to measure blood glucose quickly and at a low cost. Portable sensors are widely used in the veterinary routine and by animal owners who need these devices to monitor diseases that require continuous monitoring of blood glucose, especially patients diagnosed with diabetes mellitus. However, not all commercially available (human and veterinary) glucometers are accurate for this purpose. The goal of this study was to evaluate the analytical and clinical accuracy of three portable glucometers through descriptive and comparative statistical analysis, correlations between the three glucometers and the standard method, evaluations according to ISO 15197:2003 and ISO 15197:2013 standards, and error grid analysis. The portable glucometers evaluated (FreeStyle Freedom Lite®; FreeStyle Optium Neo®, and On Call Plus®) were calibrated with control solutions made available by the manufacturers, and handled according to the manuals of each model. The study evaluated 115 samples from 82 dogs in different glycemic ranges (hypoglycemia, normoglycemia, and hyperglycemia) in patients with normal hematocrit. The results obtained with the glucometers were compared with the enzymatic colorimetric glucose oxidase laboratory method of reference. It is concluded that the FreeStyle Optium Neo® glucometer had the best performance, being the best option to be used in the measurement of dogs blood glucose, among the glucometers evaluated in this study.

Identification of Brucella sp. isolated in Brazil from 1976 to 2013 by Bruce-Ladder PCR

Background: Brucella sp. are the causative agents of brucellosis, an infectious disease that affects various species ofanimals and can be transmitted to humans through direct contact with infected animals, indirectly by the ingestion of rawmilk products, and during the handling of strains or infected material in the laboratory. Being a zoonosis, the detectionof Brucella species in animals is essential for the prevention of the disease in humans and to perform a good program ofcontrol in infected herds. This study aimed at identifying Brucella field strains isolated from 1976 to 2013 in Brazil, usingthe modified Bruce-Ladder method, to evaluate the performance of this technique.Materials, Methods & Results: Eighty-three strains of Brucella sp. were included in the study, i.e. 21 reference strains(nine B. abortus, one B. canis, four B. melitensis, two B. ovis and five B. suis) and 62 field strains (six B. canis, oneB. suis and 55 B. abortus). For the identification of the genus and/or species of Brucella, biochemical and physiologicaltests, including MacConkey-agar growth, glucose fermentation, haemolysis, catalase, oxidase and urease tests, nitratereduction, citrate utilization, H2S production and CO2 requirement, were performed. Genomic DNA was extracted frompure cultures through heat-lysis of bacterial cultures and the genus was confirmed by a genus-specific PCR (bcsp31 targetgene), before performing the modified Bruce-Ladder PCR for the confirmation of the Brucella species. No problems ofspecificity were observed with the Bruce-Ladder PCR. However, the 1,682 bp fragment was not systematically amplified,even after several modifications such as the concentration of mix components, annealing temperatures and time. Therefore,an individual PCR using primers specific to this fragment was needed for complete identification of some strains. Also,only one kind of Polymerase gave the best results...(AU)

Identification of Brucella sp. isolated in Brazil from 1976 to 2013 by Bruce-Ladder PCR

Background: Brucella sp. are the causative agents of brucellosis, an infectious disease that affects various species ofanimals and can be transmitted to humans through direct contact with infected animals, indirectly by the ingestion of rawmilk products, and during the handling of strains or infected material in the laboratory. Being a zoonosis, the detectionof Brucella species in animals is essential for the prevention of the disease in humans and to perform a good program ofcontrol in infected herds. This study aimed at identifying Brucella field strains isolated from 1976 to 2013 in Brazil, usingthe modified Bruce-Ladder method, to evaluate the performance of this technique.Materials, Methods & Results: Eighty-three strains of Brucella sp. were included in the study, i.e. 21 reference strains(nine B. abortus, one B. canis, four B. melitensis, two B. ovis and five B. suis) and 62 field strains (six B. canis, oneB. suis and 55 B. abortus). For the identification of the genus and/or species of Brucella, biochemical and physiologicaltests, including MacConkey-agar growth, glucose fermentation, haemolysis, catalase, oxidase and urease tests, nitratereduction, citrate utilization, H2S production and CO2 requirement, were performed. Genomic DNA was extracted frompure cultures through heat-lysis of bacterial cultures and the genus was confirmed by a genus-specific PCR (bcsp31 targetgene), before performing the modified Bruce-Ladder PCR for the confirmation of the Brucella species. No problems ofspecificity were observed with the Bruce-Ladder PCR. However, the 1,682 bp fragment was not systematically amplified,even after several modifications such as the concentration of mix components, annealing temperatures and time. Therefore,an individual PCR using primers specific to this fragment was needed for complete identification of some strains. Also,only one kind of Polymerase gave the best results...

DHEA and non-alcoholic fat liver disease: increased gene expression of peroxisome proliferation-activated receptor (PPAR) and fatty acid synthase (FAS) / DHEA e doença gordurosa hepática não-alcoólica: aumento na expressão gênica do peroxisome proliferation-activated receptor (PPAR) e ácido graxo sintase (FAS)

Dehydroespiandrosterone (DHEA) is associated with improvements in chronic degenerative diseases, including obesity, insulin resistance, and cardiovascular diseases. Nevertheless, it is observed an increase in its concentration in individuals with liver lipid infiltration, but it is not precise if this condition emerges as a cause or a consequence. In this way, we aimed to identify gene expression alterations in lipid and glucose liver metabolism markers, as well as oxidative stress markers. For this purpose, male Wistar rats, 12-14 months old were treated with subcutaneous injections of DHEA (only dose of 10 mg kg-1); and after 7 days, hepatic gene expression by PCR real time were performed for the following genes:  G6Pase, PEPCK, FAS, PPAR, malic enzyme, ChREBP, LXR, catalase, GPx, iNOS, NADPH oxidase subunits and PCNA. We observed a tendency of reduction in G6Pase gene expression in treated group (p = 0.08). In addition, it was identified an increase in liver PPAR and FAS gene expressions, two markers of increased activity of lipogenic pathway. We also observed an increase in iNOS gene expression, a known inductor of systemic and hepatic insulin resistance. In conclusion, our data indicates that the treatment with DHEA can be associated with the development of liver lipid infiltration and hepatic insulin resistance.(AU)

A deidroepiandrosterona (DHEA) encontra-se associada a melhorias em quadros de obesidade, resistência à insulina e doenças cardiovasculares. Porém, observa-se um aumento na sua concentração em indivíduos portadores de infiltração lipídica hepática, mas sem saber precisar se o mesmo surge como causa ou consequência. Assim, objetivamos identificar alterações na expressão gênica hepática de marcadores relacionados ao metabolismo lipídico e glicídico e de estresse oxidativo. Para tanto, ratos machos com 12-14 meses de idade foram tratados com injeção subcutânea de DHEA (dose única 10 mg kg-1), e após 7 dias foram feitas análises da expressão gênica hepática por PCR em tempo real das seguintes proteínas: G6Pase, PEPCK, FAS, PPAR, enzima málica, ChREBP, LXR, catalase, GPx, iNOS, subunidades da NADPHoxidase e PCNA. Observamos uma tendência à redução da expressão gênica da G6Pase no grupo tratado (p = 0,08). Também identificamos um aumento na expressão gênica hepática do PPAR e FAS, dois indicadores de aumento da atividade das vias de lipogênese. Observamos um aumento na expressão gênica da iNOS, um conhecido agente indutor de resistência à insulina sistêmica e hepática. Em conclusão, nossos dados indicam que o tratamento com DHEA pode estar associado com o desenvolvimento de um quadro de infiltração lipídica hepática e resistência à insulina hepática.(AU)

EFEITO METAFILÁTICO DE MINERAIS SOBRE SAÚDE, DESEMPENHO, COMPOSIÇÃO QUÍMICO- FISICA E QUALIDADE DA CARNE DE CORDEIROS

O objetivo desse estudo foi avaliar se existe um efeito metafilático de minerais (zinco, cobre, selênio e manganês) sobre desempenho, qualidade de carne, respostas imunológicas e antioxidantes, bem como se aplicação do mineral é capaz de prevenir a coccidiose. Cento e dez cordeiros da raça Lacaune recém-nascidos foram divididos em dois grupos: controle (não tratados n=55) e tratados (n=55) com três doses de 0,33 ml/kg de complexo mineral nos dias de vida 1, 30 e 60. A dieta oferecida aos animais foi a mesma e o consumo não diferiram entre os grupos (P> 0,05). Todos os animais foram pesados no dia de vida 1, 30, 60, 90 e 150. Foram coletadas amostras de sangue para a avaliação da resposta imune, níveis de antioxidantes e parâmetros bioquímicos séricos (modulação hepática, lipídica e proteica). Concomitante às coletas de sangue foram realizadas coletas de fezes dos animais para pesquisa de oocistos de parasitos gastrointestinais a fim mensurar o nível de infecção dos animais. Os cordeiros tratados foram mais pesados (P<0,05) nos dias 15, 45, 60 e 90 de experimento. No dia 30 não houve diferença no peso, período que coincidiu com surto de coccidiose que foi mais severo nos animais do grupo controle. A atividade da catalase não diferiu entre os grupos (10/grupo), enquanto as atividades de superóxido dismutase e xantina oxidase foram maiores (P<0,05) nos cordeiros tratados em comparação ao controle. Os níveis séricos de proteína total e globulinas foram maiores (P<0,05) nos animais suplementados nos dias 15, 30 e 45, o que configura uma estimulação da resposta imunologica. Essa hipótese foi confirmada com aumento de linfócitos (dia 45), bem como níveis séricos de imunoglobulinas (IgM e IgG) nos animais tratados (dias 15 e 30) comparado ao controle. Níveis séricos de glicose foram maiores no grupo tratado no dia 15 e 30. A mortalidade dos animais tratados foi 7,27% menor que a do controle. Aos 150 dias de vida, 12 animais foram abatidos para análise físico-química da carne, status oxidante e antioxidante, e para análise alométrica. Houve um aumento na espessura de gordura (P<0,004), assim como o pH (P<0,002) foi menor na carne dos animais do grupo tratado comparado ao controle. No grupo controle, a carne foi mais clara (de acordo com a luminosidade (cor L)) (P<0,04), assim como houve maior perda de peso por cozimento (P<0,004). A força de cisalhamento foi menor na carne de cordeiros tratados (P<0,008), sugerindo que a aplicação de minerais foi associada ao aumento da maciez da carne. Além disso, as atividades de catalase e superóxido dismutase foram maiores (P<0,01) em animais do grupo tratado, associadas a uma redução nos níveis de espécies reativas de oxigênio (P<0,01) e produtos de peroxidação lipídica (P=0,02). Concluímos que o efeito metafilático de minerais é benéfico a saúde do cordeiro, aumentando as defesas antioxidantes e imunológicas, refletidas pelo maior ganho de peso e minimizando a coccidiose. Além disso, esses dados sugerem que os minerais tiveram um efeito nutraceutico devido modular o status oxidante e antioxidante, refletindo melhor qualidade da carne.

The objective of this study was to evaluate if there is a metaphylactic effect of minerals (zinc, copper, selenium and manganese) on performance, meat quality, immune responses and antioxidants, as well as if mineral application is able to prevent coccidiosis. One hundred and ten newborn Lacaune lambs were divided into two groups: control (untreated - n = 55) and treated (n = 55) with three doses of 0.33 ml/kg of mineral complex in days of life 1, 30 and 60. The diet offered to the animals was the same and the consumption did not differ between groups (P > 0.05). All animals were weighed at day 1, 30, 60, 90 and 150. Blood samples were collected for the evaluation of immune response, antioxidant levels and serum biochemical parameters (hepatic, lipid and protein modulation). Concomitant to the blood collections were collected from animals feces to investigate oocysts of gastrointestinal parasites in order to measure the level of infection of the animals. The treated lambs were heavier (P < 0.05) on days 15, 45, 60 and 90 of the experiment. On day 30 there was no difference in weight, a period that coincided with a coccidiosis outbreak that was more severe in the control group. Catalase activity did not differ between groups (10/group), while superoxide dismutase and xanthine oxidase activities were higher (P < 0.05) in treated lambs compared to control. Serum levels of total protein and globulins were higher (P < 0.05) in animals supplemented on days 15, 30 and 45, which constitutes a stimulation of the immune response. This hypothesis was confirmed by increased lymphocytes (day 45) as well as serum levels of immunoglobulins (IgM and IgG) in treated animals (days 15 and 30) compared to control. Serum glucose levels were higher in the treated group on day 15 and 30. The mortality of treated animals was 7.27% lower than that of the control. At 150 days of life, 12 animals were slaughtered for physical-chemical analysis of meat, oxidant and antioxidant status, and for allometric analysis. There was an increase in the fat thickness (P <0.004), as well as the pH (P < 0.002) was lower in the meat of the treated group than in the control group. In the control group, the meat was lighter (according to the luminosity (color L)) (P < 0.04), as there was greater weight loss per cooking (P < 0.004). The shear force was lower in the meat of treated lambs (P < 0.008), suggesting that the application of minerals was associated with an increase in meat tenderness. In addition, catalase and superoxide dismutase activity were higher (P < 0.01) in animals in the treated group, associated with a reduction in the levels of reactive oxygen species (P < 0.01) and lipid peroxidation products (P = 0.02). We conclude that the metaphoric effect of minerals is beneficial to the health of the lamb, increasing the antioxidant and immune defenses, reflected by greater weight gain and minimizing coccidiosis. Furthermore, these data suggest that the minerals had a nutraceutical effect due to modulating oxidant and antioxidant status, reflecting better meat quality.

PROTEOMA DO PLASMA SEMINAL, FLUIDO EPIDIDIMÁRIO E DOS ESPERMATOZOIDES COLHIDOS DO EJACULADO E DA CAUDA DO EPIDÍDIMO DE TOUROS

As proteínas dos fluido e células do sitema reprodutor são constantes objetos de estudo, a fim de elucidar eventos fisiológicos e buscar biomarcadores das funções reprodutivas, facilitando a escolha de reprodutores. Em vista disso, este estudo objetivou caracterizar as proteínas dos espermatozoides do ejaculado e da cauda do epidídimo, do plasma seminal e do fluido epididimário de touros. Foram utilizados 10 touros adultos da raça Brangus. O sêmen foi colhido por eletroejaculação e, posteriormente os machos foram orquiectomizados para a colheita dos espermatozoides e fluido do epidídimo. As células do ejaculado e da cauda do epidídimo foram analisadas subjetivamente após a colheita, e o plasma seminal e fluido do epidídimo foram separados por centrifugação. Então, as amostras foram preparadas para a espectrometria de massas (ESI-QTof MS/MS), com um pool de cada grupo. A concentração de proteínas totais não diferiu entre os grupos. Foram encontradas 67 e 66 proteínas nos espermatozoides do ejaculado e da cauda do epidídimo, e 20 e 16 no plasma seminal e líquido epididimário, respectivamente. Além disso, 52 proteínas foram comuns entre os espermatozoides obtidos do ejaculado e epidídimo, e 9 entre o plasma seminal e fluido epididimário. Atividade catalítica foi a principal função molecular nas células espermáticas; já no plasma seminal foi de ligação e no fluido epididimário, atividade catalítica. As proteínas que se destacaram foram: 14-3-3 protein zeta/delta, A-kinase anchor protein, Calmodulin, Cytochrome c oxidase subunit 5A, mitochondrial, Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 2, Fibronectin type III domain-containing protein 8, Glucose-6-phosphate isomerase, L-amino-acid oxidase, Phosphoglycerate mutase 2, Ropporin-1, Seminal ribonuclease, T-complex protein 1 subunit epsilon, Clusterin, Epididymal secretory protein E1, Serum albumin. Com base nos resultados, conclui-se que há uma importante contribuição das proteínas do plasma seminal para a célula espermática, fornecendo macromoléculas essenciais para a capacitação espermática, reação do acrossomo, ligação espermatozoide-oócito e fertilização; já o fluido epididimário apresenta como principal função manter a integridade e imobilidade dos espermatozoides.

Proteins of fluid and cells from reproductive system are constant objects of study, in order to elucidate physiological events and to search biomarkers of the reproductive functions, facilitating the breeding selection. Thus, this study aimed to characterize the proteins of the ejaculate and epididymis spermatozoa, the seminal plasma and the epididymal fluid of bulls. Ten adult Brangus bulls were used. The semen was collected by electroejaculation and then, the males were orchiectomized for collection of spermatozoa and fluid from the epididymis. The ejaculate and epididymis cells were subjectively analyzed after collection, and the seminal plasma and epididymis fluid were separated by centrifugation. The samples were prepared for mass spectrometry (ESI-QTOF MS/MS), with a pool of each group. Total protein concentration did not differ between groups. We found 67 and 66 proteins in the ejaculate and epididymis spermatozoa, and 20 and 16 in the seminal plasma and epididymal fluid, respectively. Moreover, 52 proteins were common in the spermatozoa obtained from ejaculate and epididymis, and 9 in the seminal plasma and epididymal fluid. Catalytic activity was the main molecular function in sperm cells and epididymal fluid; in the seminal plasma was binding. The main proteins found were: 14-3-3 protein zeta/delta, A-kinase anchor protein, Calmodulin, Cytochrome c oxidase subunit 5A, mitochondrial, Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 2, Fibronectin type III domain-containing protein 8, Glucose-6-phosphate isomerase, L-amino-acid oxidase, Phosphoglycerate mutase 2, Ropporin-1, Seminal ribonuclease, T-complex protein 1 subunit epsilon, Clusterin, Epididymal secretory protein E1, Serum albumin. Based on the results, we concluded that there is an important contribution of seminal plasma proteins to the sperm cell, providing macromolecules essential for sperm capacitation, acrosome reaction, spermatozoa-oocyte binding and fertilization; whereas the epididymal fluid has main function maintained the integrity and nonmotile sperm cells.

Avaliação de dois glicosímetros veterinários para uso em cães.

Os glicosímetros são ferramentas importantes para o monitoramento e triagem da glicemia de cães em ambientes clínicos e domiciliares. Seus procedimentos de teste são pouco invasivos e fornecem resultados rápidos, possibilitando a pronta instituição de medidas terapêuticas adequadas às demandas reais do paciente. Contudo, fatores inerentes aos procedimentos de teste se configuram como potenciais fontes de inacurácia nas aferições, sejam decorrentes do manuseio e sistema de funcionamento do aparelho, bem como das condições fisiopatológicas do paciente. A normativa da ISO 15197:2013 estabelece padrões para avaliação da acurácia dos glicosímetros, sugerindo limites para a variação da glicemia fornecida pelo aparelho em comparação à fornecida por métodos laboratoriais de referência. O presente estudo avaliou a acurácia de dois glicosímetros veterinários (AlphaTrak 2, GT1, e IPet, GT2) para mensuração da glicemia de 100 pacientes caninos atendidos na rotina do hospital da escola de veterinária da UFMG. A acurácia foi abordada através da comparação entre os resultados obtidos pelos glicosímetros em amostras capilares, com os obtidos em amostras venosas pelos métodos laboratoriais de hexoquinase e glicose oxidase. Avaliou-se a influência dos parâmetros hematócrito e concentração de proteínas plasmáticas totais sobre o desempenho dos glicosímetros. Não foi encontrada diferença significativa entre as médias de glicemia fornecidas pelos dois glicosímetros transformadas para plasma equivalente e ambos foram identificados como diferentes de ambos os métodos laboratoriais. A variação do hematócrito foi inversamente proporcional à glicemia mensurada pelo GT1 e, por outro lado, a concentração de proteínas plasmáticas totais variou de forma diretamente proporcional aos valores de glicemia fornecidos pelo GT2. Os glicosímetros alcançaram 99% de acurácia conforme o padrão pretendido pela normativa ISO 15197:2013.

Glucometers are important tools to monitoring and screening glycaemia in dogs both in clinic and home environment. The test procedures are almost non-invasive and lead fast results enabling prompt institution of therapeutic measures suitable to the actual patients clinical condition. However, there are inherent factors of test procedures which may be configured as potential sources of inaccuracy in measurements. Those factors are due to handling and operation system of glucometers, and could also be due to the actual patients physiopathological condition. The ISO 15197:2013 establish standards to evaluate the glucometers accuracy, suggesting limits of glycaemia measured by the device in comparison to that provided by laboratory reference methods. The present study has evaluated performance of two veterinary glucometers (AlphaTrak 2, GT1, and IPet, GT2) in measuring glycaemia of 100 patients admitted at clinical routine of UFMGs veterinary school hospital. The accuracy was assessed with comparison between the results obtained using those glucometers in capillary samples, and glycaemia obtained in plasma samples by the laboratorial methods of hexoquinase and glucose oxidase. It was evaluated the influence of parameters of hematocrit and plasmatic proteins in the glucometers performance. No significant difference was found between the blood glucose averages provided by the two glucometers in transformed plasma equivalent values, and both were identified as different of both laboratorial methods. The haematocrit variation was inversely proportional to the glycaemia measured by GT1 and, on the hand, the variation of total plasma proteins concentration was direct proportion of glucose values provided by GT2. Both glucometers reached 99% of accuracy according to the standards intended by ISO15197:2013.

Consequences of Mesobuthus tamulus gangeticus (Pocock, 1900) envenomation in albino mice

The present study aimed to investigate the effects of Mesobuthus tamulus gangeticus Pocock (Buthidae) venom on albino mice (NIH strain). Whole venom was obtained by electrical stimulation and its toxicity was determined in albino mice by subcutaneous envenomation. The venom LD50 was 2.5 mg kg-1 of mouse body weight. Toxic effects on different biochemical and enzymatic parameters in blood serum and other tissues of albino mice were determined after experimental envenomation with sublethal doses of M. tamulus gangeticus venom. Increased levels of glucose, uric acid and cholesterol, as well as decreased serum total proteins, were observed at 2 and 4 hours after the envenomation. In the liver and muscles, glycogen content dropped after venom injection. Moreover, M. tamulus gangeticus venom elevated the enzymatic activity of acid phosphatase (ACP), lactic dehydrogenase (LDH) and alanine aminotransferase (ALT) in the serum of albino mice. In conclusion, M. tamulus gangeticus can be considered a lethal scorpion species.(AU)

Antivenom reversal of biochemical alterations induced by black scorpion Heterometrus fastigiousus Couzijn venom in mice

In the present study, Heterometrus fastigiousus venom (HFV) was employed as antigen to produce species-specific scorpion antivenom (SAV) in albino mice (NIH) strain. To determine SAV efficacy, it was pre-incubated with 10 LD50 of HFV and then injected subcutaneously into mice. Subsequently, mortality was observed after 24 hours. Minimum effective dose (MED) was 12.5 LD50 of HFV/mL of SAV. SAV effectiveness to reverse HFV-induced biochemical alterations in mice was analyzed by challenge method. Simultaneously, mice received subcutaneously 40 percent of 24-hour-LD50 of HFV and intravenously SAV. After four hours, changes in serum glucose, free amino acids, uric acids, pyruvic acid, cholesterol, total protein, alkaline phosphatase, acid phosphatase, lactic dehydrogenase and glutamate-pyruvate transaminase enzyme level were determined. Treatment with species-specific SAV resulted in the reversal of HFV-induced biochemical alterations.(AU)

Avaliação de dois sensores portáteis para mensuração da glicemia em cães / Evaluation of two portable meters for blood glucose measurements in dogs

Avaliou-se a precisão analítica e clínica de dois sensores portáteis para mensuração da glicemia em cães. Os valores da mensuração da glicemia obtidos com os sensores foram comparados com aqueles obtidos pelo método padrão da glicose oxidase, por meio da análise de correlação e da análise da grade de erros. Os resultados gerados pelos sensores não foram diferentes do método padrão. Conclui-se que ambos os sensores são adequados para mensuração da glicemia em cães(AU)

The clinical and analytical accuracy of two portable meters for glucose measurement in dogs was evaluated. Blood glucose values obtained by the use of portable meters were compared to those obtained using the glucose oxidase reference method, by means of correlation and error analysis. Results obtained with the blood glucose meters were not different from those obtained with the reference method. Both apparatus evaluated are adequate for use in dogs(AU)

Comparação da vida de prateleira do mel de abelhas Melipona fasciculata sem tratamento, pasteurizado e desumidificado / Comparison of shelf life of honey bees Melipona fasciculata untreated, pasteurized and dehumidified

O mel de abelhas Melipona fasciculata apresenta elevado teor de umidade, o que contribui para uma rápida deterioração do mel. O elevado teor de água presente no mel dessa espécie provoca uma maior ação da enzima glicose oxidase deixando o mel ácido. Este trabalho foi conduzido com o objetivo de comparar o processo de pasteurização e desumidificação sobre o mel de abelhas Melípona fasciculata durante nove meses de estocagem. Foram utilizadas amostras de mel de abelhas Melípona fasciculata coletadas no município de São Cristóvão do Estado de Sergipe no mês de março de 2009. As análises físico-químicas foram realizadas antes do armazenamento do mel e a cada mês, durante os nove meses em que as amostras permaneceram armazenadas á temperatura ambiente na presença de luz. Os processos de pasteurização e de desumidificação demonstraram que são alternativas viáveis para aumentar a vida de prateleira do mel de abelhas Melípona fasciculata. O processo de desumidificação produziu uma menor acidez e um menor teor de hidroximetilfurfural após nove meses de armazenamento.(AU)

The Melipona fasciculata honeybee has a high moisture content whichcontributes to its rapid deterioration.The high water content presented canincreased glucose oxidase activitymaking the honey acid. This study wasconducted to compare pasteurizationand dehumidification process appliedto Melipona fasciculata honey bee duringnine months of storage. Samples ofMelipona fasciculate honey bee werecollected in São Cristóvão city, SergipeState, in March 2009. Honey was collectedin accordance with good handlingpractices and divided into three parts(one part was not subjected any preservationprocess and the two remainingparts were subjected to pasteurization ordesumifdification). The flowing physicaland chemical analyses were analysedmonthy: pH, moisture, acidity, freeacidity, lactone, total acidity, reducingsugars, sucrose, HMF, total solids andash. The physical and chemical analysiswere performed before the storage ofhoney and every month during the ninemonths where the flasks were stored atroom temperature. Pasteurization anddehumidification process revealed a tobe viable alternative to increase the shelflife of Melipona fasciculate honey. Thedehumidification process gave betterresults, because lower acidity and lowerHMF content after nine months ofstorage were determined. (AU)

Screening of filamentous fungi for production of enzymes of biotechnological interest

Many enzymes produced by fungi have relevant biotechnological applications in several industrial areas. The purpose of this study was to collect and isolate filamentous fungi from soil and humus, plants and sugar cane bagasse of different regions of the São Paulo state. Forty isolates were examined for their ability to produce xylanase, glucose-oxidase, alkaline phosphatase, acid phosphatase, phytase, pectinase and amylase. Among these, twenty three isolates exhibited enzymatic potential. The xylanases produced by two of these isolates (Aspergillus caespitosus and A. phoenicis) showed good potential for pulp bleaching. Among seventeen isolates, at least three produced high levels of glucose-oxidase, being Rhizopus stolonifer and A. versicolor the best producer strains. A. caespitosus, Mucor rouxii, and nine others still not identified were the best producers of phosphatases in submerged fermentation. Pectinase was best produced by IF II and C-8 belong R. stolonifer. Significant levels of amylase were produced by Paecilomyces variotii and A. phoenicis. A remarkable enzyme producer was Rhizopus microsporus var. rhizopodiformis that produced high levels of amylase, alkaline and acid phosphatases, and pectinase. Some morphological structures of this fungus were illustrated using light microscopy (LM) and scanning electron microscopy (SEM). This study contributes to catalogue soil fungi isolated in the state of São Paulo, and provides additional information to support future research about the industrial potential of these microorganisms that may produce enzymes and, eventually, also secondary metabolites with anti-microbial or anti-parasitic activities.

Muitas enzimas produzidas por fungos têm relevantes aplicações em diferentes áreas industriais. O objetivo desse trabalho foi coletar e isolar fungos filamentosos do solo e humus, plantas e bagaço de cana de açúcar de diferentes regiões do Estado de São Paulo. Quarenta isolados foram examinados quanto à sua capacidade de produzir xilanase, glicose-oxidase, fosfatase alcalina, fosfatase ácida, fitase, pectinase e amilase. Entre estes, vinte e três isolados exibiram potencial enzimático. Xilanases produzidas por dois destes isolados (Aspergillus caespitosus e A. phoenicis) mostraram bons resultados no biobranqueamento da polpa de celulose. Entre dezessete isolados, pelo menos três produziram altos níveis de glicose oxidase, sendo Rhizopus stolonifer e Aspergillus. versicolor os melhores produtores. Aspergillus caespitosus, Mucor rouxii e nove outros ainda não identificados foram os melhores produtores de fosfatases em fermentação submersa. Pectinase foi produzida preferencialmente por IF II e C-8 seguida por Rhizopus stolonifer. Níveis significantes de amilases foram produzidos por Paecilomyces variotii e Aspergillus phoenicis. Um notável produtor de diversas enzimas foi Rhizopus microsporus var. rhizopodiformis, que produziu altos níveis de amilase, fosfatase alcalina e ácida e pectinase. Algumas estruturas morfológicas deste fungo estão sendo ilustradas por microscopia de luz e microscopia eletrônica de varredura. Esse estudo contribui para catalogar fungos isolados do estado de São Paulo e fornece informações adicionais para pesquisas futuras sobre o potencial industrial destes microrganismos produtores de enzima e eventualmente também metabólitos secundários com atividade antimicrobiana e antiparasitária.

Gordonia polyisoprenivorans from groundwater contaminated with landfill leachate in a subtropical area: characterization of the isolate and exopolysaccharide production

A strain of Gordonia sp. (strain Lc), from landfill leachate-contaminated groundwater was characterized by polyphasic taxonomy and studied for exopolysaccharide (EPS) production. The cells were Gram-positive, catalase-positive, oxidase-negative and non-motile. The organism grew both aerobically and, in anoxic environment, in the presence of NaNO3. Rods occured singly, in pairs or in a typical coryneform V-shaped. The organism had morphological, physiological and chemical properties consistent with its assignment to the genus Gordonia and mycolic and fatty acid pattern that corresponded to those of G. polyisoprenivorans DSM 44302T. The comparison of the sequence of the first 500 bases of the 16S rDNA of strain Lc gave 100% similarity with the type strain of Gordonia polyisoprenivorans DSM 44302T. Experiments conducted in anaerobic conditions in liquid E medium with either glucose or sucrose as the main carbon source showed that sucrose did not support the growth of Lc strain and that on glucose the maximum specific growth rate was 0.17h-1, representing a generation time of approximately 4 hours. On glucose, a maximum of total EPS was produced during the exponential phase (126.17 ± 15.63 g l-1). The production of free EPS exceeded that of capsular and the free/capsular EPS ratio increased from 1.9 during the exponential phase to 7.8 during the stationary phase. At present, six strains of G. polyisoprenivorans have been isolated from various environments. Lc is the sixth strain of G. polyisoprenivorans described, the second strain detected in the landfill leachate-contaminated groundwater and the first that is being studied for EPS production.

Uma linahgem de Gordonia sp. (linhagem Lc), proveniente de águas subterrâneas contaminadas por chorume, foi caracterizada por taxonomia polifásica e estudada quanto à produção de exopolissacarídeos (EPS). As células, bastonetes agregados, isolados ou aos pares em formato de V, típico de bactérias corineformes, apresentaram reação Gram positiva, catalase positiva, oxidase negativa, não apresentaram motilidade. O organismo cresceu em aerobiose e em ambiente anóxico na presença de NaNO3. A linhagem apresentou características morfológicas, bioquímicas e propriedades quimiotaxônomicas típicas do gênero Gordonia e perfil de ácidos micólicos e ácidos graxos correspondentes aos de G. polyisoprenivorans DSM44302T. A análise do seqüenciamento dos primeiros 500 pares de bases do rDNA16S da linhagem mostrou 100% de similaridade com Gordonia polyisoprenivorans DSM44302T. Experimentos conduzidos em condições anaeróbias em meio E com sacarose ou glicose como principal fonte de carbono, mostraram que a linhagem não cresceu quando cultivada com sacarose. Entretanto, utilizando-se glicose, a velocidade específica máxima de crescimento foi 0,17h-1, o tempo de geração de aproximadamente 4 horas e o máximo de produção de EPS total ocorreu durante a fase exponencial (126,17 ± 15,63 g l-1). A produção de EPS livre excedeu à de capsular e a relação EPS livre/EPS capsular aumentou de 1,9, durante a fase exponencial para 7,8 durante a fase estacionária. Até então, foram isoladas seis linhagens de G. polyisoprenivorans de diferentes ambientes. A linhagem Lc é a sexta linhagem de G. polyisoprenivorans descrita, a segunda detectada nas águas subterrâneas em questão e a primeira cuja produção de EPS está sendo estudada.

Valorização do diagnóstico laboratorial, na identificação de Rhodococcus equi isolado do escarro de pacientes suspeitos de tuberculose

As bactérias Gram-positivas que contêm ácidos micólicos na parede celular estão classificadas no grupo dos actinomicetos aeróbios ou bactérias corineformes e nocardioformes. Nesse grupo encontra-se o Rhodococcus equi, o qual é relevante à medicina veterinária e humana tal como as micobactérias, causando doença pulmonar que pode mimetizar casos de tuberculose. R. equi é considerado como agente patogênico em potros e tem emergido como oportunista em humanos, especialmente, associado à infecção pelo vírus da imunodeficiência humana. Assim como nos animais, a rodococose humana afeta principalmente, os pulmões, com características clínicas e patológicas, similares à tuberculose pulmonar, em pacientes imunocomprometidos ou não. A identificação de Rhodococcus equi pode ser realizada com base numa variedade de características, fenotípicas, genotípicas e técnicas cromatográficas. Morfologia das colônias, morfologia celular e resistência parcial ao álcool ácido são características chaves para a caracterização inicial. R. equi não oxida ou fermenta carboidratos e nem utiliza acetato, citrato e malonato, como única fonte de carbono, produz catalase, o fator equi (teste de CAMP) e lipase. Não produz amilase, b-galactosidase (ONPG), casease, DNase, esculinase, gelatinase, H2S, indol, lecitinase e oxidase. Demonstra comportamento variável para as provas de nitrato redutase, urease e redução do hipurato, decompõe a adenina, mas não hipoxantina, tirosina e xantina. O método molecular para a identificação de R. equi utiliza a PCR para amplificar um fragmento de 959 pares de base do gene choE, o qual codifica a enzima cholesterol oxidase (COX). Na identificação química, semelhante às espécies do gênero Mycobacterium, membros do gênero Rhodococcus contêm ácidos micólicos plausíveis de serem identificados pela cromatografia...

Gram-positive bacteria, containing mycolic acids in the cellular wall are classified in aerobic actinomycetes or corineform and nocardioform bacteria group. Rhodococcus equi is included in this group, and it is very important to the veterinary and human medicine. Rhodococcus equi is a well-recognized bacterial pathogen in veterinary medicine. First isolated from foals, it causes an important chronic granulomatous pneumonia and lung abscesses. The infection also occurs in humans, often following immunosuppression of various causes. The increased number of human cases reported recently is partly the result of the spread of AIDS but may also reflect the increasing awareness by medical laboratories of this opportunistic pathogen and their improved ability to identify it rather than to dismiss it as a contaminating "micrococcus" or "diphtheroid." R. equi can be identified on the basis of a variety of conventional phenotypic characteristics including microscopic (Gram and acidfast staining) and macroscopic morphologies, growth requirements, metabolism of glucose, and phenotypic molecular characteristics including the presence of mycolic acid composition, which is detected by thin-layer chromatography. The colonial morphology of R. equi is diverse and consists of three major varieties: pale pink and slimy, coral and non-slimy, and pale yellow in color, non-slimy. Colorless colonial variants may also occur. R. equi is a non-motile gram-positive pleomorphic coccobacillus, varying from distinctly coccoid to bacillary depending on growth conditions. All of the rhodococci from clinical specimens are generally weakly acid fast when stained either by the modified Kinyoun method or by the Ziehl-Neelsen method. Regarding biochemical characteristics, the organism is generally biochemically unreactive. It fails to oxidize or ferment carbohydrates, neither uses sodium...

Efeito da glucose-oxidase sobre a produção de celulase / Efeito da glucose-oxidase sobre a produção de celulase

With the object to decrease the glucose inhibitory effect over cellulose, Trichoderma reesei QM 9414 was cultivated in the presence of 72,000 units (4g) of glucose-oxidase per liter culture media. Measurements were made for enzyme activity, protein and residual cellulose for all the fermentations in the presence or in the absence of glucose-oxidase. Analysis of va­riance (F-testj had shown that the enzyme activity and specific activity were not statistically significant at 5% level (p

A produção de celulose, especificamente a de origem fúngica, é de grande interesse econômico uma vez que ela representa uma alternativa viável para obtenção de alimentos e energia. Bons resultados têm sido conseguidos utilizando-se mutantes do Trichoderma reesei, meios enriquecidos, controle de pH e elevando-se os níveis de celulose no meio de cultivo. A biossíntese da celulase, apesar de intensamente estudada, ainda é limitada pelo efeito de repressão catabólica. Visando-se a diminuir o efeito inibitório da glucose sobre a celulase, cultivou-se o microorganismo Trichoderma reesei QM-9414 em presença de 72.000 unidades (4g) de glucose-oxidase por litro de cultura. Determinações de atividade enzimática, proteína, atividade específica e celulose residual foram feitas em todas as preparações obtidas de fermentações em presença e ausência de glucose-oxidase. Análise de variança (teste F) aplicado aos dados obtidos para atividade enzimática e específica, mostrou que não há diferença significativa, ao nível de 5% de probabilidade, nas duas diferentes condições de fermentação. Propõe-se adicionar, em estudos posteriores, outras enzimas, entre elas a glucose-isomerase com a finalidade de converter a glucose, liberada durante a hidrólise da celulose, em frutose para diminuir o efeito inibitório sobre a celulase.