Effects of neutrophil extracellular traps during human respiratory syncytial virus infection in vitro

Abstract The human respiratory syncytial virus (hRSV) is the most common cause of severe lower respiratory tract diseases in young children worldwide, leading to a high number of hospitalizations and significant expenditures for health systems. Neutrophils are massively recruited to the lung tissue of patients with acute respiratory diseases. At the infection site, they release neutrophil extracellular traps (NETs) that can capture and/or inactivate different types of microorganisms, including viruses. Evidence has shown that the accumulation of NETs results in direct cytotoxic effects on endothelial and epithelial cells. Neutrophils stimulated by the hRSV-F protein generate NETs that are able to capture hRSV particles, thus reducing their transmission. However, the massive production of NETs obstructs the airways and increases disease severity. Therefore, further knowledge about the effects of NETs during hRSV infections is essential for the development of new specific and effective treatments. This study evaluated the effects of NETs on the previous or posterior contact with hRSV-infected Hep-2 cells. Hep-2 cells were infected with different hRSV multiplicity of infection (MOI 0.5 or 1.0), either before or after incubation with NETs (0.516 g/mL). Infected and untreated cells showed decreased cellular viability and intense staining with trypan blue, which was accompanied by the formation of many large syncytia. Previous contact between NETs and cells did not result in a protective effect. Cells in monolayers showed a reduced number and area of syncytia, but cell death was similar in infected and non-treated cells. The addition of NETs to infected tissues maintained a similar virus-induced cell death rate and an increased syncytial area, indicating cytotoxic and deleterious damages. Our results corroborate previously reported findings that NETs contribute to the immunopathology developed by patients infected with hRSV.

Resumo O vírus sincicial respiratório humano (hRSV) é a causa mais comum de doenças graves do trato respiratório inferior em crianças pequenas em todo o mundo, resultando em grande número de hospitalizações e gastos significativos para os sistemas de saúde. Neutrófilos são recrutados em massa para o tecido pulmonar de pacientes com doenças respiratórias agudas. No local da infecção, eles liberam armadilhas extracelulares de neutrófilos (NETs) que podem capturar e/ou inativar diferentes tipos de microrganismos, incluindo vírus. Evidências demonstraram que o acúmulo de NETs resulta em efeitos citotóxicos diretos nas células endoteliais e epiteliais. Os neutrófilos estimulados pela proteína F do vírus sincicial respiratório (hRSV-F) geram NETs que são capazes de capturar partículas virais, reduzindo assim sua transmissão. No entanto, a produção maciça de NETs obstrui as vias aéreas e aumenta a gravidade da doença. Assim, um maior conhecimento sobre os efeitos das NETs durante as infecções por hRSV é essencial para o desenvolvimento de novos tratamentos específicos e eficazes. Este estudo avaliou os efeitos das NETs no contato prévio ou posterior à infecção de células Hep-2 com hRSV. As células Hep-2 foram infectadas com diferentes quantidades de hRSV (multiplicidade de infecção ou MOI 0,5 ou 1,0), antes ou após a incubação com NETs (0,516 g/mL). Células infectadas e não tratadas mostraram redução da viabilidade celular e intensa coloração com azul de tripano, que foi acompanhada pela formação de sincícios numerosos e grandes. O contato prévio entre as NETs e as células não resultou em efeito protetor. As células em monocamadas mostraram um número e área de sincícios reduzidos, mas a morte celular foi semelhante àquela apresentada por células infectadas e não tratadas. A adição de NETs aos tecidos infectados manteve taxa de morte celular e formação de sincícios semelhantes àqueles induzidos pelo vírus em células não tratadas, indicando danos citotóxicos e deletérios. Nossos resultados corroboram achados relatados anteriormente de que as NETs contribuem para a imunopatologia desenvolvida por pacientes infectados com hRSV.

Clinical, histopathological, and hematological changes due to isoimmune thrombocytopenic purpura in piglets / Alterações clínicas, histopatológicas e hematológicas decorrentes de púrpura trombocitopenica isoimune em leitões

ABSTRACT: Isoimmune thrombocytopenic purpura (ITP) is an immune-mediated disease that causes severe hemorrhagic lesions and high mortality in piglets. The disease can occur early in newborn piglets (EITP) or late in 2- to 3-week old piglets (LITP). In this study, we analysed the clinical, pathological, and hematological aspects of 391 ITP cases (312 with EITP and 79 with LITP). In LIPT cases, morbidity and mortality rates were higher, with rates of 60% (morbidity) and 53% (mortality). The main clinicopathological findings in ITP cases were different patterns of hemorrhages organs and tissues. In EITP, clinical signs were characterized by extensive subcutaneous hemorrhages and death occurred within a few days; however, in LITP, often sudden death occurred. In macroscopic analysis, hemorrhagic diathesis was observed in all affected animals. In EITP, the most severe hemorrhagic lesions were integumentary, mainly in the dermis and epidermis. In LITP, visceral lesions were predominant, mainly in the epicardium and intestines. Microscopic bone marrow analysis revealed mild cellular hyperplasia in EITP and bone marrow aplasia in LITP. hematological analyses revealed leucopenia, thrombocytopenia, and anemia in all ITP-affected animals. However, fostering by a different sow was only efficient in controlling EITP and had little effect in LITP-symptomatic piglets, due to more severe lesions. Further studies on the etiopathogenesis of LITP are required to improve our understanding of this disease form.

RESUMO: Púrpura trombocitopênica isoimune (PTI) é uma doença imunomediada que causa lesões hemorrágicas graves e alta mortalidade em leitões, que pode se apresentar através de uma forma precoce em leitões neonatos (PTIP) ou uma forma tardia em leitões com duas a três semanas de idade (PTIT). Neste trabalho analisamos aspectos clínicos, hematológicos e histopatológicos de 391 casos de PTI, sendo 312 de PTIP e 79 de PTIT. Observou-se maiores morbidade (60%) e mortalidade (53%) na PTIT. Os principais achados clínico-patológicos observado na PTI são hemorragias em diferentes graus de intensidade e nos diferentes órgãos e tecidos. Na PTIP observou-se predominantemente hemorragias subcutâneas extensas e morte em alguns dias, já na PTIT, observou-se além de grave hemorragia, morte súbita. Na análise macroscópica, observou-se diátese hemorrágica em todos os animais afetados. Na PTIP as lesões hemorrágicas mais graves foram tegumentares, principalmente em derme e epiderme, enquanto, na forma tardia, observou-se lesões predominantemente viscerais, em epicárdico e intestino. A análise microscópica de medula óssea revelou discreta hiperplasia celular na forma PTIP, enquanto, na PTIT observou-se aplasia medular. Na análise hematológica observou-se leucopenia, trombocitopenia e anemia em todos os animais com PTI. Os achados clínicos, histopatológicos e hematológicos para PTIP e PTIT da doença permitiram o diagnóstico de PTI. Entretanto, a troca de mãe se mostrou eficiente apenas para controle PTIP, uma vez que, esta estratégia apresenta pouco resultado para leitões sintomáticos com a PTIT, devido lesões mais severas. Estudos sobre a etiopatogênese da PTIT ainda são necessários para melhor entendimento desta forma da doença.

Effects of neutrophil extracellular traps during human respiratory syncytial virus infection in vitro / Efeitos das redes extracelulares dos neutrófilos durante a infecção in vitro pelo vírus sincicial respiratório

The human respiratory syncytial virus (hRSV) is the most common cause of severe lower respiratory tract diseases in young children worldwide, leading to a high number of hospitalizations and significant expenditures for health systems. Neutrophils are massively recruited to the lung tissue of patients with acute respiratory diseases. At the infection site, they release neutrophil extracellular traps (NETs) that can capture and/or inactivate different types of microorganisms, including viruses. Evidence has shown that the accumulation of NETs results in direct cytotoxic effects on endothelial and epithelial cells. Neutrophils stimulated by the hRSV-F protein generate NETs that are able to capture hRSV particles, thus reducing their transmission. However, the massive production of NETs obstructs the airways and increases disease severity. Therefore, further knowledge about the effects of NETs during hRSV infections is essential for the development of new specific and effective treatments. This study evaluated the effects of NETs on the previous or posterior contact with hRSV-infected Hep-2 cells. Hep-2 cells were infected with different hRSV multiplicity of infection (MOI 0.5 or 1.0), either before or after incubation with NETs (0.5–16 μg/mL). Infected and untreated cells showed decreased cellular viability and intense staining with trypan blue, which was accompanied by the formation of many large syncytia. Previous contact between NETs and cells did not result in a protective effect. Cells in monolayers showed a reduced number and area of syncytia, but cell death was similar in infected and non-treated cells. The addition of NETs to infected tissues maintained a similar virus-induced cell death rate and an increased syncytial area, indicating cytotoxic and deleterious damages. Our results corroborate previously reported findings that NETs contribute to the immunopathology developed by patients infected with hRSV.

O vírus sincicial respiratório humano (hRSV) é a causa mais comum de doenças graves do trato respiratório inferior em crianças pequenas em todo o mundo, resultando em grande número de hospitalizações e gastos significativos para os sistemas de saúde. Neutrófilos são recrutados em massa para o tecido pulmonar de pacientes com doenças respiratórias agudas. No local da infecção, eles liberam armadilhas extracelulares de neutrófilos (NETs) que podem capturar e/ou inativar diferentes tipos de microrganismos, incluindo vírus. Evidências demonstraram que o acúmulo de NETs resulta em efeitos citotóxicos diretos nas células endoteliais e epiteliais. Os neutrófilos estimulados pela proteína F do vírus sincicial respiratório (hRSV-F) geram NETs que são capazes de capturar partículas virais, reduzindo assim sua transmissão. No entanto, a produção maciça de NETs obstrui as vias aéreas e aumenta a gravidade da doença. Assim, um maior conhecimento sobre os efeitos das NETs durante as infecções por hRSV é essencial para o desenvolvimento de novos tratamentos específicos e eficazes. Este estudo avaliou os efeitos das NETs no contato prévio ou posterior à infecção de células Hep-2 com hRSV. As células Hep-2 foram infectadas com diferentes quantidades de hRSV (multiplicidade de infecção ou MOI 0,5 ou 1,0), antes ou após a incubação com NETs (0,5–16 μg/mL). Células infectadas e não tratadas mostraram redução da viabilidade celular e intensa coloração com azul de tripano, que foi acompanhada pela formação de sincícios numerosos e grandes. O contato prévio entre as NETs e as células não resultou em efeito protetor. As células em monocamadas mostraram um número e área de sincícios reduzidos, mas a morte celular foi semelhante àquela apresentada por células infectadas e não tratadas. A adição de NETs aos tecidos infectados manteve taxa de morte celular e formação de sincícios [...].

Effects of neutrophil extracellular traps during human respiratory syncytial virus infection in vitro / Efeitos das redes extracelulares dos neutrófilos durante a infecção in vitro pelo vírus sincicial respiratório

The human respiratory syncytial virus (hRSV) is the most common cause of severe lower respiratory tract diseases in young children worldwide, leading to a high number of hospitalizations and significant expenditures for health systems. Neutrophils are massively recruited to the lung tissue of patients with acute respiratory diseases. At the infection site, they release neutrophil extracellular traps (NETs) that can capture and/or inactivate different types of microorganisms, including viruses. Evidence has shown that the accumulation of NETs results in direct cytotoxic effects on endothelial and epithelial cells. Neutrophils stimulated by the hRSV-F protein generate NETs that are able to capture hRSV particles, thus reducing their transmission. However, the massive production of NETs obstructs the airways and increases disease severity. Therefore, further knowledge about the effects of NETs during hRSV infections is essential for the development of new specific and effective treatments. This study evaluated the effects of NETs on the previous or posterior contact with hRSV-infected Hep-2 cells. Hep-2 cells were infected with different hRSV multiplicity of infection (MOI 0.5 or 1.0), either before or after incubation with NETs (0.5–16 μg/mL). Infected and untreated cells showed decreased cellular viability and intense staining with trypan blue, which was accompanied by the formation of many large syncytia. Previous contact between NETs and cells did not result in a protective effect. Cells in monolayers showed a reduced number and area of syncytia, but cell death was similar in infected and non-treated cells. The addition of NETs to infected tissues maintained a similar virus-induced cell death rate and an increased syncytial area, indicating cytotoxic and deleterious damages. Our results corroborate previously reported findings that NETs contribute to the immunopathology developed by patients infected with hRSV.(AU)

O vírus sincicial respiratório humano (hRSV) é a causa mais comum de doenças graves do trato respiratório inferior em crianças pequenas em todo o mundo, resultando em grande número de hospitalizações e gastos significativos para os sistemas de saúde. Neutrófilos são recrutados em massa para o tecido pulmonar de pacientes com doenças respiratórias agudas. No local da infecção, eles liberam armadilhas extracelulares de neutrófilos (NETs) que podem capturar e/ou inativar diferentes tipos de microrganismos, incluindo vírus. Evidências demonstraram que o acúmulo de NETs resulta em efeitos citotóxicos diretos nas células endoteliais e epiteliais. Os neutrófilos estimulados pela proteína F do vírus sincicial respiratório (hRSV-F) geram NETs que são capazes de capturar partículas virais, reduzindo assim sua transmissão. No entanto, a produção maciça de NETs obstrui as vias aéreas e aumenta a gravidade da doença. Assim, um maior conhecimento sobre os efeitos das NETs durante as infecções por hRSV é essencial para o desenvolvimento de novos tratamentos específicos e eficazes. Este estudo avaliou os efeitos das NETs no contato prévio ou posterior à infecção de células Hep-2 com hRSV. As células Hep-2 foram infectadas com diferentes quantidades de hRSV (multiplicidade de infecção ou MOI 0,5 ou 1,0), antes ou após a incubação com NETs (0,5–16 μg/mL). Células infectadas e não tratadas mostraram redução da viabilidade celular e intensa coloração com azul de tripano, que foi acompanhada pela formação de sincícios numerosos e grandes. O contato prévio entre as NETs e as células não resultou em efeito protetor. As células em monocamadas mostraram um número e área de sincícios reduzidos, mas a morte celular foi semelhante àquela apresentada por células infectadas e não tratadas. A adição de NETs aos tecidos infectados manteve taxa de morte celular e formação de sincícios [...].(AU)

Effects of neutrophil extracellular traps during human respiratory syncytial virus infection in vitro / Efeitos das redes extracelulares dos neutrófilos durante a infecção in vitro pelo vírus sincicial respiratório

Abstract The human respiratory syncytial virus (hRSV) is the most common cause of severe lower respiratory tract diseases in young children worldwide, leading to a high number of hospitalizations and significant expenditures for health systems. Neutrophils are massively recruited to the lung tissue of patients with acute respiratory diseases. At the infection site, they release neutrophil extracellular traps (NETs) that can capture and/or inactivate different types of microorganisms, including viruses. Evidence has shown that the accumulation of NETs results in direct cytotoxic effects on endothelial and epithelial cells. Neutrophils stimulated by the hRSV-F protein generate NETs that are able to capture hRSV particles, thus reducing their transmission. However, the massive production of NETs obstructs the airways and increases disease severity. Therefore, further knowledge about the effects of NETs during hRSV infections is essential for the development of new specific and effective treatments. This study evaluated the effects of NETs on the previous or posterior contact with hRSV-infected Hep-2 cells. Hep-2 cells were infected with different hRSV multiplicity of infection (MOI 0.5 or 1.0), either before or after incubation with NETs (0.5-16 μg/mL). Infected and untreated cells showed decreased cellular viability and intense staining with trypan blue, which was accompanied by the formation of many large syncytia. Previous contact between NETs and cells did not result in a protective effect. Cells in monolayers showed a reduced number and area of syncytia, but cell death was similar in infected and non-treated cells. The addition of NETs to infected tissues maintained a similar virus-induced cell death rate and an increased syncytial area, indicating cytotoxic and deleterious damages. Our results corroborate previously reported findings that NETs contribute to the immunopathology developed by patients infected with hRSV.

Resumo O vírus sincicial respiratório humano (hRSV) é a causa mais comum de doenças graves do trato respiratório inferior em crianças pequenas em todo o mundo, resultando em grande número de hospitalizações e gastos significativos para os sistemas de saúde. Neutrófilos são recrutados em massa para o tecido pulmonar de pacientes com doenças respiratórias agudas. No local da infecção, eles liberam armadilhas extracelulares de neutrófilos (NETs) que podem capturar e/ou inativar diferentes tipos de microrganismos, incluindo vírus. Evidências demonstraram que o acúmulo de NETs resulta em efeitos citotóxicos diretos nas células endoteliais e epiteliais. Os neutrófilos estimulados pela proteína F do vírus sincicial respiratório (hRSV-F) geram NETs que são capazes de capturar partículas virais, reduzindo assim sua transmissão. No entanto, a produção maciça de NETs obstrui as vias aéreas e aumenta a gravidade da doença. Assim, um maior conhecimento sobre os efeitos das NETs durante as infecções por hRSV é essencial para o desenvolvimento de novos tratamentos específicos e eficazes. Este estudo avaliou os efeitos das NETs no contato prévio ou posterior à infecção de células Hep-2 com hRSV. As células Hep-2 foram infectadas com diferentes quantidades de hRSV (multiplicidade de infecção ou MOI 0,5 ou 1,0), antes ou após a incubação com NETs (0,5-16 μg/mL). Células infectadas e não tratadas mostraram redução da viabilidade celular e intensa coloração com azul de tripano, que foi acompanhada pela formação de sincícios numerosos e grandes. O contato prévio entre as NETs e as células não resultou em efeito protetor. As células em monocamadas mostraram um número e área de sincícios reduzidos, mas a morte celular foi semelhante àquela apresentada por células infectadas e não tratadas. A adição de NETs aos tecidos infectados manteve taxa de morte celular e formação de sincícios semelhantes àqueles induzidos pelo vírus em células não tratadas, indicando danos citotóxicos e deletérios. Nossos resultados corroboram achados relatados anteriormente de que as NETs contribuem para a imunopatologia desenvolvida por pacientes infectados com hRSV.

Parasite load, iNOS and cytokine profiles, and histopathological aspects of Leishmania infantum infection in dogs with different clinical presentations / Carga Parasitária, iNOS, citocinas e histopatologia na infecção por Leishmania infantum em cães com apresentações clínicas distintas

Visceral leishmaniasis (VL) is a zoonotic disease with a canine urban reservoir in South America. Dogs from an endemic area within Brazil, which were naturally infected with Leishmania infantum, and those presenting severe clinical (SC), mild, or no clinical (MNC) disease, were evaluated. Parasite load, histopathology, and cytokine and iNOS mRNA expressions were assessed in the spleen and liver in order to determine the potential markers for disease susceptibility or resistance. As a result, dogs with both SC and MNC had high parasite loads; IFN-γ was the most expressive cytokine in both organs, along with IL-6 and IL-4 being detected in the spleen and liver, and IL-10 only in liver. The hepatic tissue presented higher medians for IFN-γ and IL-10, and was the main organ to produce cytokines with hepatic IL-10 suggesting a regulatory follow up. Granulomas were detected in both organs; however, when absent in spleen, they were associated with elevated IL-6 levels, thus highlighting the anti-inflammatory role of IL-6. Microscopic lesions in the spleen were predominantly characterized by an extensively disorganized white pulp and splenic response was suggested as sub optimized. Parasite load, tissue damage, and immunological response may vary in the dogs with similar clinical symptoms, which may not be a good parameter for assessing the animals susceptibility to VL.(AU)

A Leishmaniose visceral (LV) é uma doença zoonótica com reservatório canino na América do Sul. Cães oriundos de área endemica brasileira, naturalmente infectados por Leishmania infantum, apresentando doença clínica severa (CS) ou doença branda ou ausente (BA) foram avaliados. Carga parasitária, histopatologia e expressão de mRNA de citocinas e iNOS foram analisados em baço e fígado, buscando determinar possíveis marcadores de susceptibilidade ou resistência à doença. Como principais resultados, tanto cães CS como BA apresentaram alta carga parasitária. IFN-γ foi a citocina mais expressiva em ambos os órgãos, sendo IL-6 e IL-4 também detectadas em baço e fígado e IL-10 em fígado. No tecido hepático foram encontradas as maiores medianas de IFN-γ e IL-10, sendo o fígado o principal órgão produtor de citocinas, com IL-10 sugerindo acompanhamento regulatório. Granulomas foram detectados em ambos os órgãos. Quando de sua ausência no baço, essa foi associada à elevação dos níveis de IL-6, salientando o papel anti-inflamatório dessa citocina. Alterações microscópicas foram principalmente caracterizadas por extensiva desorganização de polpa branca, com a resposta esplência sendo sugerida como subotimizada. Carga parasitária, dano tecidual e resposta immune variaram mesmo em cães com quadros clínicos similares, não sendo, portanto, a análise clínica um bom parâmetro para avaliação de susceptibilidade animal à LV.(AU)

Alterações provocadas por Neospora caninum e imunodetecção de Toxoplasma gondii em placentas de cabras sem raça definida

O Toxoplasma gondii e o Neospora caninum são protozoários que causam diversas desordens reprodutivas em animais. Este estudo foi realizado com objetivo em cabras, os danos placentários causados por esses protozoários durante a gestação. No primeiro experimento foi realizada, análise ultraestrutural em placentas de animais infectados experimentalmente por N. caninum. Os animais foram divididos em 4 grupos, e inoculados em diferentes tempos gestacionais: G1, com inoculação aos 40 dias de gestação (n=4); G2, animais inoculados aos 90 dias de gestação (n=4); G3, inoculados aos 120 dias de gestação (n=4) e G4, grupo controle (n=3). Quando observado sofrimento fetal, as cabras foram eutanasiadas para coleta dos placentomas. Estes foram fixados em glutaraldeído com tampão fosfato a 2,5% refrigerado. As amostras foram pós-fixadas, desidratadas e incluídas em Époxy e, posteriormente realizados cortes em ultramicrótomo e analisadas. Foram identificadas lesões celulares graves como degenerações, vacuolização celular, retração nuclear/degeneração nuclear, restos celulares, em uma das amostras, o protozoário foi visualizado. Em conclusão, os achados ultraestruturais apresentados indicam modificações celulares degenerativas acentuadas em placentas de cabras induzidas por N. caninum. No segundo experimento, utilizou-se placentas provenientes de animais naturalmente infectados por T. gondii. Foram avaliadas 213 amostras de placenta de animais sorologicamente positivos em ELISA, submetidos a exames histopatológicos. Apenas 23 amostras apresentaram lesões características para protozoários e 4 foram provenientes de animais sorologicamente negativos, porém que também apresentaram as mesmas lesões. As amostras placentárias passaram por processo de desidratação, diafanização e inclusão em parafina. Os cortes de placentas foram submetidos a imunohistoquímica (IHQ) utilizando anticorpo anti-Toxoplasma gondii e o kit comercial DAKO LSAB2 System-HRP. Dessas amostras de placenta obtidas, 85,2% (23/27) foram positivas na IHQ e 81,5% (22/27) apresentaram lesões compatíveis com a infecção por T. gondii. A imunoexpressão ocorreu em células epiteliais das vilosidades placentárias. A técnica de IHQ demonstrou ser uma ferramenta valiosa no diagnóstico de T. gondii em tecido placentário de cabras naturalmente infectadas complementando de forma decisiva e agregando maior valor aos resultados obtidos na análise histopatológica e sorológica

Toxoplasma gondii and Neospora caninum are protozoa that cause various reproductive disorders in animals. With the objective of studying the reproductive disorders in goats, aiming at the placental damages caused by these protozoa, this study was carried out. The study consists of two stages, the first, ultrastructural analysis in placentas of 15 animals infected experimentally by N. caninum. The animals were divided into 4 groups, and inoculated at different gestational times: G1, with inoculation at 40 days of gestation (n = 4); G2, animals inoculated at 90 days of gestation (n = 4); G3, inoculated at 120 days of gestation (n = 4) and G4, control group (n = 3). When fetal distress was observed, the goats were euthanized to collect the placentomas. These were fixed in glutaraldehyde with 2.5% refrigerated phosphate buffer. The samples were sent to the Keizo Asami Immunopathology Laboratory for post-fixation, dehydration and inclusion in Epoxy and later to the Center of Strategic Technologies of the Northeast, where cuts were made in ultramicrotome and observation. Serious cell lesions such as degeneration, cell vacuolization, nuclear retraction / nuclear degeneration, cellular debris were identified in one of the samples, the protozoan was visualized and organelle degradation of placental cells. In conclusion, the ultrastructural findings presented indicate marked degenerative cell changes in N. caninum-induced goat placentas. In the second, immunohistochemistry was used in placentas from animals naturally infected with T. gondii. 213 placenta samples from serologically positive animals in ELISA, and also submitted to histopathological exams. Of these, 23 samples had characteristic lesions for protozoa and 4 were from serologically negative animals, but also had the same lesions. The placental samples underwent cleavage, dehydration, diaphanization and paraffin inclusion. Block cuts were performed by immunohistochemistry using anti-Toxoplasma gondii antibody and the commercial DAKO LSAB2 System-HRP kit. Of these placenta samples obtained, 85.2% (23/27) were positive in IHC and 81.5% (22/27) had lesions compatible with T. gondii infection. Immunoexpression occurred in epithelial cells of the placental villi. The IHQ technique proved to be a valuable tool in the diagnosis of T. gondii in placental tissue of naturally infected goats complementing in a decisive way and adding greater value to the results obtained in the histopathological and serological analysis

PERFIL DE CITOCINAS E DA ENZIMA ÓXIDO NÍTRICO SINTASE INDUZÍVEL EM LINFONODO, BAÇO E FÍGADO DE CÃES INFECTADOS NATURALMENTE POR LEISHMANIA INFANTUM E SUA ASSOCIAÇÃO À CARGA PARASITÁRIA E A ASPECTOS CLÍNICO-PATOLÓGICOS

A leishmaniose visceral é uma doença zoonótica grave transmitida por flebotomíneos infectados, sendo o cão o seu principal reservatório na América do Sul. Nesse contexto, cães naturalmente infectados por Leishmania infantum, oriundos de área endêmica brasileira, foram avaliados de acordo com o seu perfil clínico e histopatológico. A fim de determinar possíveis marcadores de susceptibilidade ou resistência à doença, a carga parasitária, por imunohistoquímica, ou de DNA do parasita e o perfil de expressão de citocinas e iNOS, ambos pela Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real, foram investigados em linfonodo, baço e fígado. Nos linfonodos, IFN- e IL-6 foram associadas à desorganização da região cortico-medular, enquanto que IFN- e TNF- à ausência de hiperplasia folicular. A via regulatória foi notória com a detecção de IL-10 e sua associação à doença severa. Plasmocitose e histiocitose sinusal foram associadas a cargas elevadas de DNA parasitário. Nos baços foi observada desorganização de polpa branca em todas as amostras analisadas, incluindo aquelas pertencentes a animais com resultados parasitológicos negativos ou não detectáveis nesse tecido, porém sorologicamente positivos e com expressão de IFN- esplênico, sugerindo decorrer de tempo no processo inflamatório em prol da redução da carga parasitária. No entanto, tal resposta tende a ser subotimizada devido à perda da arquitetura esplênica. Nos fígados foi evidenciado o predomínio de infiltrado inflamatório inespecífico mononuclear leve composto por linfócitos, plasmócitos e macrófagos. Tal órgão foi o principal produtor de citocinas, em relação ao baço, com maiores níveis de IFN- e IL-10, mas não havendo diferença significativa entre as cargas parasitárias esplênica e hepática. A baixa ou não detecção de iNOS nos três tecidos analisados indica a não ativação de macrófagos pela via clássica, o que favorece a persistência do parasita. Não houve diferenças significativas entre a carga de parasitas ou de DNA parasitário e os grupos clínicos para os órgãos avaliados, sendo notórios animais com cargas elevadas apesar de clínica branda ou ausente. Assim, a apresentação clínica canina não é critério para a avaliação do processo infecioso, o que salienta a importância de animais assintomáticos como reservatório. Além disso, IL-6 foi sugerida como um marcador de doença ativa em linfonodo e baço de cães naturalmente infectados por L. infantum.

Visceral leishmaniasis is a severe zoonotic disease transmitted by infected sandflies, and dogs are its main reservoir in South America. In this context, dogs from a Brazilian endemic area and naturally infected with Leishmania infantum were evaluated according to their clinical status and histopathological profile. In order to determine possible markers of susceptibility or resistance to the disease, the parasite load, by immunochemistry, or parasitic DNA load, and cytokine and iNOS expression profile, both by Real-Time Polymerase Chain Reaction, were investigated in lymph nodes, spleen and liver. In lymph nodes, IFN- and IL-6 were associated with disorganization of the corticomedullary region and IFN- and TNF- with the absence of follicular hyperplasia. The regulatory pathway was remarkable with IL-10 detection and its significant association with the severity of the disease. Plasmacytosis and sinus histiocytosis were associated with high loads of parasitic DNA. For spleens, white pulp disorganization was noted in all analyzed samples, including those belong to animals with negative or not detectable parasitological results in this tissue, but with serological positive results and splenic IFN- expression, what suggests an elapsed time in the inflammatory process in order to reduce the parasitic load. However, this response tends to be suboptimized due to splenic architecture loss. For liver, a mild mononuclear inflammatory infiltrate composed by lymphocytes, plasma cells and macrophages was predominant. The liver was the main cytokine producer in relation to spleen, with higher significant levels of IFN- and IL-10, but there was no significant difference regarding splenic and hepatic parasitic loads. The low- or non-detection of iNOS was evidenced in the three analyzed organs indicating non-macrophage activation by the classic pathway, which favor the parasite persistence. There were no significant differences between the parasite or parasitic DNA load and clinical groups for all three tissue types, with mild or no symptomatic animals showing relative high parasitic loads. Therefore, dogs clinical status isnt criteria for evaluating the infectious process, which raises the importance of asymptomatic animals as reservoir. Moreover, IL-6 was suggested as a marker of active disease in lymph nodes and spleens of dogs naturally infected with L. infantum.

CONTRIBUIÇÕES DA ANÁLISE GENÔMICA PARA O CONTROLE DA TUBERCULOSE BOVINA

Mycobacterium bovis é o agente causador da tuberculose bovina, responsável por uma doença com perdas anuais para a agropecuária global de 3 bilhões de dólares além de sérias repercussões na saúde pública e saúde animal. O sequenciamento genômico e avanços nas técnicas de tipagem molecular têm contribuído para o estudo epidemiológico da tuberculose bovina, por meio da identificação e caracterização de isolados de M. bovis. O genoma de M. bovis é 99,95% idêntico em sequência de nucleotídeos ao genoma de Mycobacterium tuberculosis. Apesar da elevada relação genética global, essas espécies exibem uma grande variedade de fenótipos; a deleção da informação genética, juntamente com a presença de polimorfismos de um único nucleotídeo (SNPs) ao longo do cromossoma das espécies provavelmente explica a diferença na gama de hospedeiros, virulência e imunopatologia encontrada entre estas espécies. O objetivo deste trabalho foi sequenciar, montar, analisar e caracterizar geneticamente genomas micobacterianos, bem como analisá- los filogeneticamente, estabelecendo relações entre os mesmos e comparar um repertório de genes de virulência presentes nos genomas dos isolados M. bovis 04-303 e 534 que apresentam perfis patogênicos contrastantes. A sequência do genoma de AN5 foi obtidas utilizando a tecnologia MiSeq e a montagem do genoma assistida pelo genoma referência: M. bovis AF2122/97. A montagem contém 70 contigs e N50 150.219. O genoma compreende 3.938 sequências codificadoras (CDs) e 48 genes de RNA (3 rRNAs e 45 tRNAs). Nenhuma deleção ou variação genética no isolado M. bovis AN5 utilizado para produção do PPDBR apoia a diferença proteômica encontrada quando comparado ao PPDUK. As sequências dos genomas de M. bovis 04-303 e 534 foram também obtidas utilizando a tecnologia MiSeq. Todos os genes de ambos genomas foram analizados, utilizando M. bovis AF2122/97 como referência. Mutações nucleotídicas foram encontradas em 31 genes de virulência no isolado 04-303: 21 mutações não sinônimas missense (substituição de aminoácidos), 9 mutações de deleção (supressão de aminoácidos) e uma mutação de inserção (inserção de aminoácido). Em relação ao isolado 534, mutações nucleotídicas foram encontradas em 47 genes de virulência: 24 mutações não sinônimas missense, 20 mutações de deleção e 3 mutações de inserção. Dezoito dessas mutações foram comuns em ambos os genomas. As mutações encontradas em genes de virulência estão em concordância com o fenótipo atenuado do isolado M. bovis 534. Estas mutações estão apenas parcialmente em consonância com o fenótipo virulento do isolado M. bovis 04-303. Análises filogenéticas e de processos evolutivos de 38 genomas sequenciados de M. bovis das Américas, Europa, Ásia e África apontaram que isolados norteamericanos estão evoluindo distintamente da maioria dos isolados sul-americanos, além de apresentarem menor pressão de seleção. Através de datação de divergência e da posição basal apresentada por isolados humanos nas árvores filogenéticas evidenciando a origem de M. bovis há aproximadamente 10.000 anos atrás, além de corroborar com a afirmativa de Mycobacterium tuberculosis como progenitor de M. bovis.

Mycobacterium bovis is the causative agent of bovine tuberculosis, a disease responsible for annual losses to global agriculture of $3 billion and with serious repercussions for public health and animal welfare. The genome sequencing and advances in molecular typing techniques have contributed to the epidemiological study of bovine tuberculosis, through the identification and characterization of M. bovis isolates. M. bovis genome is 99,95% identical in nucleotide sequence to Mycobacterium tuberculosis. Despite their high overall genetic relationship, this species exhibit a wide variety of phenotypes; the deletion of genetic information, together with the presence of a single nucleotide polymorphism (SNP) along chromosomes of the species, probably explain the different host ranges, virulence and immunopathology found among these species. The aim of this study was to sequence, assemble, analyze and characterize genetically mycobacterial genomes and analyze them phylogenetically, establishing relationships between them and compare a repertoire of virulence genes present in the genomes of M. bovis isolates 04-303 and 534 with contrasting pathogenic profiles.The genome sequence of AN5 was obtained using MiSeq technology and the assembly was performed with a reference-assisted genome: M. bovis AF2122/97 strain. The assembly contains 70 contigs and an N50 of 150,219. The M. bovis AN5 genome comprises 3,938 coding sequences (CDSs) and 48 RNA genes (3 rRNAs and 45 tRNAs). Neither gene deletion nor gene variation in M. bovis AN5 strains used for production of PPDBR supports the proteomic differences compared with PPDUK. The genome sequence of 04-303 and 534 were also obtained using MiSeq technology. All genes of both M. bovis genome were analyzed using AF2122/97 as a reference genome. Nucleotide mutations were found in 31 virulence genes of 04-303: 21 missense mutations (amino acid replacement), 9 deletion mutations (deletion of amino acid) and 1 insertion mutation (insertion of amino acid). Concerning the 534 strain, nucleotide mutations were found in 47 virulence genes: 24 missense mutations, 20 deletion mutations and 3 insertion mutations. Eighteen of these mutations were common in both genomes. Mutations found in virulence genes are in concordance with the attenuated phenotype of the M. bovis strain 534. These mutations are only partially in consonance with the hyper-virulent phenotype of the M. bovis 04-303 strain. Filogenetic analyses and evolutionary patterns in 38 sequenced genomes of M. bovis from the Americas, Europe, Asia, and Africa pointed that US strains are evolving distinctly from most South American lineages, besides presented lower selection pressure. Across divergence time and basal position of human isolates in filogenetic trees evidencing the M. bovis origin approximately of 10.000 years, and corroborate with the affirmative of Mycobacterium tuberculosis as the progenitor of M. bovis.

REPLICAÇÃO VIRAL, PADRÃO DE EXPRESSÃO DE CITOCINAS E CINÉTICA DE MORTE CELULAR EM CULTURA PRIMÁRIA DE CÉLULAS NEURAIS INFECTADAS PELO VÍRUS ROCIO.

Os arbovírus pertencentes ao gênero Flavivirus (Família Flaviviridae) são responsáveis por considerável morbi-mortalidade, podendo causar quadros graves de encefalite, febre hemorrágica, hepatite e doença febril em vertebrados, incluindo humanos. O flavivírus Rocio (VROC) é de grande importância para a saúde pública no Brasil, pois representa uma grave ameaça de ocorrência de súbitos surtos de encefalite. A imunopatologia das encefalites causadas por flavivírus ainda não está completamente esclarecida e muitos aspectos inerentes à modulação das respostas imunes do SNC carecem por ser desvendados. Deste modo, o objetivo deste trabalho foi analisar o padrão de expressão gênica de citocinas em cultura primária de células neurais submetidas à infecção pelo vírus Rocio. Culturas primárias mistas (neurônio/glia), obtidas a partir de cérebros de camundongos isogênicos neonatos da linhagem BALB/c, foram inoculadas com o VROC (MOI igual a 2) no sétimo dia de cultivo, a confirmação da infecção foi feita por imunocitoquímica (anti-VROC). Quantificou-se a replicação viral nas culturas primárias infectadas, em função do período infeccioso, pelo método da titulação viral. O RNA celular total foi extraído e utilizado para a detecção de citocinas através da técnica de RT-qPCR em tempo real. O estudo demonstrou que cultura primária de células neurais constitui um bom modelo experimental para estudo de infecções do SNC pelo flavivírus Rocio. O VROC infectou eficientemente a cultura primária de células neurais gerando alterações citopatogênicas a partir do 2º dia p.i., momento em que se detectou maior título viral. A cultura primária infectada com o VROC sobreviveu até 7 dias p.i. e a quantificação da carga viral revelou uma cinética de replicação viral compatível com a cinética de morte celular da cultura infectada pelo VROC. Durante os cinco primeiros dias p.i. da cultura primária, houve redução da expressão gênica de INF-, INF-, INF- e IL-1, não houve alteração na expressão de TNF- e houve aumento na expressão de TGF- no 1º, 3º e 5º dia p.i. Os achados deste estudo sugerem que o VROC tem a capacidade de regular negativamente a expressão de citocinas moduladoras das respostas imunes antivirais e inflamatórias e que, neste modelo experimental, a imunorregulação exercida pelo TGF- predomina sobre a modulação das respostas imunes antivirais e inflamatórias, sendo necessários maiores estudos para elucidar a imunopatologia da infecção do SNC pelo VROC.

Arboviruses belonging to the genus Flavivirus (Flaviviridae family) are responsible for considerable morbidity and mortality, may cause severe cases of encephalitis, hemorrhagic fever, hepatitis and febrile disease in vertebrates, including humans. Rocio flavivirus (ROCV) is very important for public health in Brazil, as it represents a serious threat of occurrence of sudden encephalitis outbreaks. The immunopathology of encephalitis caused by flavivirus is not yet fully understood and many aspects involved in modulation of immune responses in the CNS need to be unraveled. Thus, the aim of this study was to analyze the pattern of gene expression of cytokines in primary culture of neural cells when exposed to infection with Rocio. Mixed primary cultures (neuron/glia), obtained from the brains of BALB/C lineage isogenic newborns mice were inoculated with ROCV (MOI equal to 2) on the seventh day of culture and confirmation of infection was made by immunocytochemistry (anti-VROC). Viral replication was quantified in infected primary cultures, depending on the infectious period, by viral titer method. Total cellular RNA was extracted and used for detection of cytokines by real time RT-qPCR techniques. The study showed that primary cultures of neural cells is a good experimental model for the study of CNS infections by Rocio flavivirus. ROCV efficiently infected the primary cultured neural cells leading to cytopathic changes from the 2nd day a.i., when it detected the higher viral titer. The ROCV-infected primary culture survived up to 7 days a.i. and quantification of viral load showed a viral replication kinetics compatible with cell death kinetics of culture infected by ROCV. During the first five days a.i. of the primary culture, there was reduction of IFN- gene expression, IFN-, IFN- and IL-1, there was no change in TNF- expression and there was an increase in TGF- expression in the 1st, 3rd and 5th day a.i.. The findings of this study suggest that ROCV has the ability to downregulate modulators cytokines of antiviral and inflammatory immune responses and, in this experimental model, immunoregulation exerted by TGF- predominates over the modulation of inflammatory and antiviral immune responses, larger studies are needed to elucidate immunopathology of CNS infection by ROCV.

GLOMERULOPATIAS SECUNDÁRIAS À ERLIQUIOSE MONOCÍTICA CANINA CRÔNICA

A ehrlichiose monocítica canina (EMC), é doença infecciosa de alta incidência na clínica veterinária, causada por Ehrlichia canis, bactéria gram-negativa intracelular obrigatória e transmitida pelo carrapato Rhipicephalus sanguineus. O trabalho teve como objetivo avaliar as lesões histopatológicas em rins e baço causadas pela EMC, assim como os parâmetros da bioquímica sérica, ureia, creatinina, albumina e globulina. Para tanto, 16 cães apresentaram valores médios de ureia (90,18mg/dl) e creatinina (1,62m g/dl) acima dos valores de referência normal para cães; a albumina apresentou valores abaixo do normal com média de 2,01g/dl, enquanto a globulina permaneceu dentro da média com 3,58g/dl. A análise histopatológica constituiu na avaliação da região cortical e medular dos rins e do parênquima esplênico. As alterações morfológicas mais prevalentes foram o espessamento da membrana basal, formação de sinéquias, degeneração e necrose tubular. Quanto às glomerulonefrites a que apresentou maior ocorrência foi a do tipo mesangial em 62,5% (10/16) dos cães. Quanto às alterações esplênicas 43,7% (7/16) dos cães desenvolveram hipoplasia dos folículos linfóides, e 87,5% destes (14/16) apresentaram acúmulo de plasmócitos no parênquima. A análise estatística de correlação entre as variáveis, evidenciou correlação positiva entre a concentração de ureia e hiperplasia de células epiteliais glomerulares, e correlação positiva entre a creatinina e hiperplasia de células mesangiais e dilatação tubular; e entre a concentracão de globulina e o infiltrado de plasmócitos. Correlação negativa foi observada para albumina e infiltrado plasmocitário. Em baço, hipertrofia de folículos linfoides e ureia tiveram correlação positiva, enquanto albumina e infiltrado plasmocitário apresentaram correlação negativa. Houve predomínio de glomerulonefrite mesangial, e o infiltrado plasmocitário parece ter papel crucial na imunopatologia das lesões.

Canine monocytic ehrlichiosis (CME), is an infectious disease of high incidence in clinical routine, caused by Ehrlichia canis, an obligate intracellular gram-negative bacterium and transmitted by the tick Rhipicehalus sanguineus. This work aimed to evaluate the histopathological lesions in kidneys and spleen caused by CME, as well as the parameters of serum biochemistry urea, creatinine, albumin and globulin. To this end, 16 dogs showed mean values of urea (90,18mg / dl) and creatinine (1,62mg / dl) were above the normal reference values for dogs; albumin showed values below normal averaging 2.01g / dl, while globulin remained within the average with 3,58g / dl. The histopathological analysis consisted of the evaluation of cortical and medullary region of the kidney and splenic parenchyma. The most prevalent morphological changes were the thickening of the basement membrane, synechia formation, tubular degeneration and necrosis. As for glomerulonephritis the one that presented the highest occurrence was the mesangial type in 62.5% (10/16) of dogs. As for the splenic changes 43.7% (7/16) of the dogs developed hypoplasia of lymphoid follicles, and 87.5% of them (14/16) had plasma accumulation in the parenchyma. The statistical analysis of correlation between the variables, showed positive correlation between the urea concentration and hyperplasia of the glomerular epithelial cells, and also a positive correlation between creatinine and hyperplasia of mesangial cells and tubular dilation; and between the concentration of globulin and infiltrate of plasma cells. Negative correlation was observed for albumin and plasma cell infiltration. In spleen, enlarged lymphoid follicles and urea had positive correlation, whereas albumin and plasma cell infiltrates showed a negative correlation. There was a predominance of mesangial glomerulonephritis, and the plasma cell infiltrate probably plays an essential role in the immunopathology of injuries. ¨¨

Astrocyte intermediate filaments are important markers in olfactory bulb of bovine Herpesvirus type 5 natural infections

Astroglial cells are the most abundant cells in the mammalian central nervous system, yet our knowledge about their function in bovine Herpesvirus type 5 (BoHV-5) has been limited. The aim of this study was to detect by immunohistochemistry assay the reactive astrocytes for glial fibrilary acidic protein (GFAP) and vimentin (VIM), considered intermediate filaments of the cytoskeleton, localized in olfactory bulb from natural acute cases of BoHV-5 infection. All samples were submitted to virus isolation, real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) and in situ hybridization (ISH) technique to confirm the virus transcription and respective genome. Samples were classified into four groups according to the severity of histological lesions. Groups III and IV, which histological lesions were classified as alacia, gliosis, satellitosis, neuronophagia and neuronal necrosis, 35% (± 1.8-2.1) of the inflammatory mononuclear cells, corresponded to CD3 positive lymphocytes. In the same group, 35% (± 1.8) of astrocytes were described as reactive to GFAP and VIM proteins. An agreement of r = 1.0 (P<0.0001) was found between histological lesions, intermediate filaments expression, viral DNA and transcription and CD3 lymphocytes. However, samples with mild histological lesions, 10.8 to 14.2% of astrocytes were classified as reactive to GFAP and VIM filaments. Our findings suggest that GFAP and VIM reactive astrocytes, in primary site of virus replication, seems to play an important role in neurovirulence, in spite of many questions concerning the virus immunopathology remains unclear

Cell-mediated immune response to Leishmania chagasi experimental infection of BALB/c immunosuppressed mice

Leishmaniasis, a zoonosis of worldwide distribution, presents a significant impact on immunosupressed patients. This study aimed to evaluate Leishmania chagasi infection in BALB/c mice immunosuppressed with dexamethasone. Spleen cells stimulated or not with L. chagasi were cultured for cytokine quantification (IFN-gama, IL-2, IL-4 and IL-10) by sandwich ELISA. Parasite loads in the spleen and liver were determined by means of culture microtitration. Immunosuppressed groups showed statistically lower spleen weight and CD4-cell percentage in blood on the day of infection and produced Th1 and Th2 cytokines on other days of the study. The other infected groups, weather immunosupressed or not, also produced Th1 and Th2 cytokines. Parasite loads in the spleen and liver were not statistically different among the groups. It was concluded that L. chagasi infection was not affected by dexamethasone-induced immunosuppression, probably due the reversible effect of the treatment.(AU)

Astrocyte intermediate filaments are important markers in olfactory bulb of bovine Herpesvirus type 5 natural infections

Astroglial cells are the most abundant cells in the mammalian central nervous system, yet our knowledge about their function in bovine Herpesvirus type 5 (BoHV-5) has been limited. The aim of this study was to detect by immunohistochemistry assay the reactive astrocytes for glial fibrilary acidic protein (GFAP) and vimentin (VIM), considered intermediate filaments of the cytoskeleton, localized in olfactory bulb from natural acute cases of BoHV-5 infection. All samples were submitted to virus isolation, real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) and in situ hybridization (ISH) technique to confirm the virus transcription and respective genome. Samples were classified into four groups according to the severity of histological lesions. Groups III and IV, which histological lesions were classified as alacia, gliosis, satellitosis, neuronophagia and neuronal necrosis, 35% (± 1.8-2.1) of the inflammatory mononuclear cells, corresponded to CD3 positive lymphocytes. In the same group, 35% (± 1.8) of astrocytes were described as reactive to GFAP and VIM proteins. An agreement of r = 1.0 (P<0.0001) was found between histological lesions, intermediate filaments expression, viral DNA and transcription and CD3 lymphocytes. However, samples with mild histological lesions, 10.8 to 14.2% of astrocytes were classified as reactive to GFAP and VIM filaments. Our findings suggest that GFAP and VIM reactive astrocytes, in primary site of virus replication, seems to play an important role in neurovirulence, in spite of many questions concerning the virus immunopathology remains unclear(AU)

Experimental infection with Leishmania chagasi in immunosuppressed Balb/c mice: cytokines and parasite burdens

The immune response in leishmaniasis may result in a polarization of the T lymphocyte subpopulation, altering cell phenotype and resulting in immune protection or disease exacerbation. Leishmania may persist in the body either during asymptomatic infections or after treatment, which represents high risk under immunosuppression. The objective of this study was to evaluate the effect of infection with immunosuppression by dexamethasone associated with pentoxifylline on animal weight, spleen weight, spleen and hepatic parasitic load and immunopathology, as well as the IFN- and IL-10 production in spleen cell culture of Balb/c mice infected with Leishmania chagasi. The infection did not cause body weight gain in animals, but both the weight and size of the spleen were increased. The immunosuppression using dexamethasone associated with pentoxifylline affected body weight gain and spleen weight and size in both infected and non-infected animals. The immunosuppression did not significantly alter the course of the splenic or hepatic parasite burden. Dexamethasone and pentoxifylline significantly affected cytokine production, but did not influence the Th1/Th2 ratio in infected animals.

Experimental infection with Leishmania chagasi in immunosuppressed Balb/c mice: cytokines and parasite burdens

The immune response in leishmaniasis may result in a polarization of the T lymphocyte subpopulation, altering cell phenotype and resulting in immune protection or disease exacerbation. Leishmania may persist in the body either during asymptomatic infections or after treatment, which represents high risk under immunosuppression. The objective of this study was to evaluate the effect of infection with immunosuppression by dexamethasone associated with pentoxifylline on animal weight, spleen weight, spleen and hepatic parasitic load and immunopathology, as well as the IFN-ã and IL-10 production in spleen cell culture of Balb/c mice infected with Leishmania chagasi. The infection did not cause body weight gain in animals, but both the weight and size of the spleen were increased. The immunosuppression using dexamethasone associated with pentoxifylline affected body weight gain and spleen weight and size in both infected and non-infected animals. The immunosuppression did not significantly alter the course of the splenic or hepatic parasite burden. Dexamethasone and pentoxifylline significantly affected cytokine production, but did not influence the Th1/Th2 ratio in infected animals.(AU)

Rabies review: immunopathology, clinical aspects and treatment

Among the diseases of viral origin, rabies is unique in its distribution and range of victims since it can afflict all warm-blooded animals. The interaction between the virus and the host population has facilitated the survival of the disease. The rabies virus (RV) has not changed in any significant way and has been capable of taking advantage of conditions suited to the continuance of rabies. Infection by RV is invariably lethal in the absence of protective immune response which, however, can contribute to the pathogenesis of rabies. Proinflammatory cytokines might affect, directly or indirectly, the levels of neurotrophins, growth factors, neurotransmitters and neurotoxins in the brain by activating glia, neurons, and vascular and immune cells. Although understanding of the bases for neuronal dysfunction and neuronal death during RV infection has progressed, no fundamental abnormality has been identified so far.

Immunopathology of rabies infection in mice selected for high or low acute inflammatory reaction

Rabies is a severe and lethal disease that produces a slight inflammatory response during the infection process. We analyzed the immunopathological mechanisms that occur in the central nervous system (CNS) using mice genetically selected for maximal or minimal acute inflammatory reaction (AIRmax or AIRmin). As viral samples, we adopted the antigenic variant 3 (AgV3) of rabies virus from hematophagous bats and a fixed virus strain (PV1 43/3). Titration of specific antibodies was performed using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). We observed a slight increase in IgG and IgG1 isotypes in infected AIRmax mice. Incubation period, determined by intracerebral inoculation with 100 LD50, was 6-7 days for PV1 43/4 strain and 9-10 days for AgV3. No difference in viral replication was noticed between AIRmax and AIRmin mice. Mortality was 100% with both viral strains. Histopathological analysis of brains and spinal cords showed inflammatory foci in all regions of the CNS. No differences were noticed in the number of neutrophils. Negri bodies were observed in practically all sites analyzed. Results suggested that inflammatory reaction is not a determining factor in the susceptibility to rabies infection.

Dermatite atópica canina e ácaros domésticos: revisão / Canine atopic dermatitis and domestic mites: review

Dermatite Atópica Canina (DAC) é doença comum na clínica de pequenos animais e afeta negativamente,em função de seu caráter crônico, a qualidade de vida dos cães afetados e de seus proprietários. Ácaros domiciliares (AD) são considerados como as principais fontes de alérgenos e a comprovação desta associação,caso a caso, se faz necessária para que medidas preventivas e terapêuticas possam ser indicadas. Esta revisãode literatura tem como objetivo fornecer informações atualizadas sobre a imunopatologia da DAC, as principaisespécies de AD envolvidas, os alérgenos já identificados pelos soros de cães atópicos, os métodos de diagnóstico e protocolos de imunoterapia alérgeno-específica (ASIT). (AU)

Canine Atopic Dermatitis (CAD) is a common chronic disease in small animal practice and adversely affects the quality of life of affected dogs and their owners. Domestic mites (DA) are considered as the main sources of allergens and the proof of this association, case-by-case, is necessary for preventive and therapeutic measures may be indicated. This review aims to provide up-to-date information about the immunopathology of CAD, the main species of DA involves, the allergens have already identified by serafrom atopic dogs, diagnostic methods and protocols of allergen-specific immunotherapy (ASIT). (AU)

Dermatite atópica canina e ácaros domésticos: revisão / Canine atopic dermatitis and domestic mites: review

Dermatite Atópica Canina (DAC) é doença comum na clínica de pequenos animais e afeta negativamente,em função de seu caráter crônico, a qualidade de vida dos cães afetados e de seus proprietários. Ácaros domiciliares (AD) são considerados como as principais fontes de alérgenos e a comprovação desta associação,caso a caso, se faz necessária para que medidas preventivas e terapêuticas possam ser indicadas. Esta revisãode literatura tem como objetivo fornecer informações atualizadas sobre a imunopatologia da DAC, as principaisespécies de AD envolvidas, os alérgenos já identificados pelos soros de cães atópicos, os métodos de diagnóstico e protocolos de imunoterapia alérgeno-específica (ASIT).

Canine Atopic Dermatitis (CAD) is a common chronic disease in small animal practice and adversely affects the quality of life of affected dogs and their owners. Domestic mites (DA) are considered as the main sources of allergens and the proof of this association, case-by-case, is necessary for preventive and therapeutic measures may be indicated. This review aims to provide up-to-date information about the immunopathology of CAD, the main species of DA involves, the allergens have already identified by serafrom atopic dogs, diagnostic methods and protocols of allergen-specific immunotherapy (ASIT).