Resumo
Pesquisas têm sido realizadas com objetivo de manter a qualidade do sêmen fresco que é diluído, refrigerado ou congelado em nitrogênio líquido para fins de inseminação artificial na espécie canina. A biotécnica do sêmen colabora com o desenvolvimento de novas formulações de meios diluentes que minimizem a morte de espermatozoides devido ao estresse térmico presente durante a redução da temperatura das curvas de refrigeração e congelação do sêmen. Objetivou-se estudar a influência da adição de vitamina E em meios diluentes na qualidade do sêmen fresco diluído, refrigerado e congelado em cães da raça Bulldog Francês. Foram realizadas colheitas de sêmen por manipulação digital em 5 cães adultos, da raça Bulldog Francês, cinco de cada cão, totalizando 25 ejaculados. As características avaliadas no sêmen fresco foram: volume (mL), coloração, aspecto, concentração (x 106 / mL ), motilidade espermática (%), vigor espermático (1 a 5) e morfologia espermática (%). Para o sêmen refrigerado e congelado foram analisados a motilidade (%), vigor (1 a 5) e morfologia espermática (%). Os ejaculados foram fracionados em 4 partes iguais e diluídos na proporção de 1:1 nos meios: TRIS + Vit. E TRIS - frutose ácido cítrico + 200 mM de vitamina E; TRIS TRIS - frutose ácido cítrico; ACP106® + Vit. E água de c0Co (ACP106®) + 200 mM de vitamina E e Meio 4 água de c0Co (ACP106®). As quatro alíquotas de sêmen, diluídas nos quatro respectivos meios diluentes foram centrifugadas a 1500 g / 10 min e os pellets formados de espermatozoides de cada ejaculado, desprendidos da parede dos tubos foram diluídos de forma homogênea com os quatro meios diluentes até o volume de 1,5 mL e envasado em palhetas francesas de 0,5 mL, mantidas sob refrigeração a 5 0C / 4 h, após col0Cadas em vapor de nitrogênio a -120 0C / 15 min, e mergulhadas no nitrogênio liquido a -196 0C, na sequência armazenadas em ráquis identificadas e armazenadas em botijão de nitrogênio líquido até o momento da descongelação em banho-maria a 37 0C / 30 seg. para as análises microscópicas do sêmen. Os dados do sêmen fresco, refrigerado e congelado foram analisados estatisticamente pela análise de variância e as médias comparadas pelo teste de Tukey a 5%. Para o sêmen fresco diluído nos quatro meios, na pré-curva de refrigeração, houve diferença significativa (P<0,05) para defeitos de cabeça dos espermatozoides, entre os meios TRIS + vit. E (7,59±4,01%) e TRIS (10,48±5,42%). Na pós-curva de refrigeração a 5 0C / 4 horas, para os quatro meios, não houve diferença (P>0,05) entre meios para as características avaliadas. Para o sêmen congelado com meio TRIS e descongelado a 37 0C / 30 seg, houve diferença (P<0,05) para os defeitos espermáticos maiores, sendo a média superior (26,62±5,52%) em relação aos outros três meios. Para os defeitos espermáticos menores, no sêmen congelado com meio TRIS, houve diferença (P<0,05) com menor porcentagem de incidência (16,23±2,02%) em relação aos outros meios. Houve diferença (P<0,05) com significativa elevação dos defeitos totais no sêmen congelado com o meio ACP106® + vit. E, em relação aos demais meios. Verifica-se que as composições dos meios diluidores divergem entre si, resultando em variações nos resultados quanto a manutenção das características qualitativas do sêmen. Deve-se atentar para qual finalidade serão utilizados os meios diluentes dentro das biotécnicas de refrigeração ou congelação. No presente estudo, se observou que a análise microscópica da motilidade e vigor espermáticos no sêmen congelado com o meio ACP106® é dificultada devido à menor transparência do meio em relação ao meio TRIS. Conclui-se que o meio TRIS + vit. E é o mais recomendado para diluir o sêmen fresco para fins de inseminação artificial imediata devido a menor presença de defeitos de cabeça dos espermatozoides. Para a refrigeração, os quatro meios são recomendados, com similaridade na manutenção das características do sêmen. Para o sêmen congelado os meios indicados são o TRIS, TRIS + vit. E, e o meio ACP106®. A adição da Vit. E aos meios não propiciou melhoria do sêmen refrigerado e do sêmen congelado, sendo facultativo o uso da mesma.
Researches have been conducted in order to maintain the quality of the fresh semen which is diluted, refrigerated or frozen in liquid nitrogen for artificial insemination purposes in dogs. The semen biotechnology cooperates with the development of new formulations of types of extenders which minimize the death of the sperms due to thermal stress during temperature reduction of the refrigeration and freezing curves of the semen. The objective was to study the influence of the addition of vitamin E in types of extenders in the quality of the fresh, refrigerated and frozen semen in dogs of French Bulldog breed. Semen samples by digital manipulation were performed on 5 adult dogs, French bulldog breed, five on each dog, totaling 25 ejaculated. The characteristics evaluated in fresh semen were: Volume (mL), color, aspect, concentration (x106/mL), sperm motility (%), vigor (1-5) and sperm morphology (%). For refrigerated and frozen semen, motility (%), vigor (1-5) and morphology (%) were analyzed. The ejaculated ones were fractionated in 4 equal parts and diluted in the ratio 1: 1 in the following extenders: 1 TRIS - Fructose Citric acid + 200mM of vitamin E; 2 TRIS - Fructose Citric acid; 3 - c0Conut water (ACP106®) + 200mM of vitamin E; and 4 c0Conut water (ACP106®). The four aliquots of semen, diluted in the four respective extenders were centrifuged at 1500g/10 min and the "pellets" formed of sperm from every ejaculated, detached from the tubes wall were diluted homogeneously with the four extenders to the volume of 1.5mL and filled into 0.5mL French straws kept under refrigeration at 50C/4 h after placed in a nitrogen vapor at -120 0C/15 min, and immersed in liquid nitrogen at -196 0C in the sequence stored in identified racks and stored in liquid nitrogen container until the time of thawing in a water bath at 37 0C/30 sec. for microscopic semen analysis. Data from fresh, refrigerated and frozen semen were statistically analyzed by analysis of variance and the average compared by Tukey (P<0.05). For fresh semen diluted in the four extenders, in pre-cooling curve, there was a significant difference (P<0.05) for defects in the sperm head, between TRIS + vit. E (7.59±4.01%) and TRIS (10.48±5.42%). In the post-cooling curve to 5 0C/4 hours, for the four extenders, there was no difference (P> 0.05) between the evaluated characteristics. For frozen semen with TRIS and thawed at 37 0C/30 sec, there was difference (P<0.05) for the major sperm defects, being the top average (26.62±5.52%) compared to the other three extenders. For minor sperm defects in frozen semen with TRIS, there was difference (P<0.05) with a lower percentage of incidence (16.23±2.02%) compared to other extenders. There was difference (P<0.05) with a significant increase of total defects in frozen semen with the extender ACP106® + vit. E, compared to other extenders. It is found that the compositions of the extenders diverge from each other, resulting in variations in the results related to the maintenance of the quality of semen characteristics. Attention should be paid for what purpose the extenders within the refrigeration or freezing biotech will be used. In the present study, we found that the microscopic analysis of the spermatic motility and vigor in frozen semen with the ACP106® extender is hampered due to the lower transparency of this extender in relation to the TRIS extender. We conclude that the TRIS + vit. E extender it is the most recommended to dilute the fresh semen for the purpose of immediate artificial insemination due to lower presence of the sperm head defects. For refrigeration, the four extenders are recommended, with similarity in semen characteristics maintenance. For frozen semen the indicated extenders are the TRIS, TRIS + vit. E, and the extender ACP106®. The addition of vit. E in these extenders did not provide improvement of refrigerated and frozen semen, with optional use of it.
Resumo
Foram inseminadas artificialmente com sêmen fresco 16 cadelas da raça Bulldog com idade entre 10 e 33 meses. As inseminações foram realizadas após o aparecimento de células superficiais anucleadas na citologia vaginal, independente de haver ou não corrimento vaginal sanguinolento. O sêmen foi coletado por estimulação peniana e a inseminação artificial (IA) realizada com o uso de uma bainha utilizada para transferência de embriões bovinos, cortada ao meio, conectada a uma seringa plástica com uma mangueira de silicone. Foram realizadas de duas a três IA em dias consecutivos ou alternados. Ficaram gestantes 12 cadelas (75%). A média de filhotes por parto foi de 6,17 (2 a 10). O período gestacional médio foi de 62,5 (58 a 67) dias em relação à primeira IA e de 59,4 (57 a 63) dias em relação à ultima. O processo de manipulação reprodutiva, com o uso de IA mostrou ser eficiente, obtendo-se boa taxa de gestação e considerável número de filhotes.
Resumo
Foram inseminadas artificialmente com sêmen fresco 16 cadelas da raça Bulldog com idade entre 10 e 33 meses. As inseminações foram realizadas após o aparecimento de células superficiais anucleadas na citologia vaginal, independente de haver ou não corrimento vaginal sanguinolento. O sêmen foi coletado por estimulação peniana e a inseminação artificial (IA) realizada com o uso de uma bainha utilizada para transferência de embriões bovinos, cortada ao meio, conectada a uma seringa plástica com uma mangueira de silicone. Foram realizadas de duas a três IA em dias consecutivos ou alternados. Ficaram gestantes 12 cadelas (75%). A média de filhotes por parto foi de 6,17 (2 a 10). O período gestacional médio foi de 62,5 (58 a 67) dias em relação à primeira IA e de 59,4 (57 a 63) dias em relação à ultima. O processo de manipulação reprodutiva, com o uso de IA mostrou ser eficiente, obtendo-se boa taxa de gestação e considerável número de filhotes.