Inseminação em ovelhas por videolaparoscopia por meio de acesso único: relato de caso / Videolaparoscopic insemination in sheeps: case report

A inseminação artificial (IA) proporciona melhoramento genético, intensifica o manejo animal e possibilita a utilização de sêmen de reprodutores que se encontram em diferentes regiões do país, bem como de animais de alto valor zootécnico que já morreram ou de machos que possuem subfertilidade. Por peculiaridades anatômicas das ovelhas, a inseminação artificial intrauterina transcervical é dificultosa. Dessa forma, bons resultados na IA são alcançados quando há deposição do sêmen diretamente dentro do útero, realizada por meio de laparoscopia. Atualmente, diversas técnicas laparoscópicas são utilizadas para inseminação; os métodos rotineiramente empregados são realizados através de dois ou três portais de acesso. O presente trabalho tem o objetivo de verificar a viabilidade de uma nova técnica de inseminação videolaparoscópica intrauterina em ovelhas, com o uso de um acesso único, visando a um procedimento mais eficaz, mais rápido, com menor trauma tecidual e com menor contaminação bacteriana, a fim de minimizar o desconforto pós-operatório. A média do tempo cirúrgico foi de 5,92 minutos. Não foram encontradas dificuldades para realização dos procedimentos, e os animais recuperaram-se sem nenhuma complicação. A utilização de um único acesso mostrou-se eficaz, pois reduziu o tempo cirúrgico e não apresentou complicações.(AU)

Artificial Insemination (AI) provides genetic gain, enhances animal management and enables the use of semen from rams that are in different regions of the country, high-value livestock animals that have died or males who have subfertility. Because of anatomical peculiarities of sheep, transcervical intrauterine insemination is troublesome, thus good results in IA are achieved when there is deposition of semen directly into the uterus, performed by laparoscopy. Currently, various techniques are used for laparoscopic insemination, those routinely employed are conducted using two or three access portals. This study aims to verify the feasibility of a new laparoscopic intrauterine insemination in sheep using a single access, aiming at a more effective and faster procedure with less tissue trauma, minimizing post-operative discomfort and lower bacterial contamination. The mean operative time was 5,92 minutes, there were no difficulties in the procedures and the animals recovered without complications. The use of a single access was effective, reducing the time of the surgery and complications weren't observed.(AU)

Inseminação em ovelhas por videolaparoscopia por meio de acesso único: relato de caso / Videolaparoscopic insemination in sheeps: case report

A inseminação artificial (IA) proporciona melhoramento genético, intensifica o manejo animal e possibilita a utilização de sêmen de reprodutores que se encontram em diferentes regiões do país, bem como de animais de alto valor zootécnico que já morreram ou de machos que possuem subfertilidade. Por peculiaridades anatômicas das ovelhas, a inseminação artificial intrauterina transcervical é dificultosa. Dessa forma, bons resultados na IA são alcançados quando há deposição do sêmen diretamente dentro do útero, realizada por meio de laparoscopia. Atualmente, diversas técnicas laparoscópicas são utilizadas para inseminação; os métodos rotineiramente empregados são realizados através de dois ou três portais de acesso. O presente trabalho tem o objetivo de verificar a viabilidade de uma nova técnica de inseminação videolaparoscópica intrauterina em ovelhas, com o uso de um acesso único, visando a um procedimento mais eficaz, mais rápido, com menor trauma tecidual e com menor contaminação bacteriana, a fim de minimizar o desconforto pós-operatório. A média do tempo cirúrgico foi de 5,92 minutos. Não foram encontradas dificuldades para realização dos procedimentos, e os animais recuperaram-se sem nenhuma complicação. A utilização de um único acesso mostrou-se eficaz, pois reduziu o tempo cirúrgico e não apresentou complicações.(AU)

Artificial Insemination (AI) provides genetic gain, enhances animal management and enables the use of semen from rams that are in different regions of the country, high-value livestock animals that have died or males who have subfertility. Because of anatomical peculiarities of sheep, transcervical intrauterine insemination is troublesome, thus good results in IA are achieved when there is deposition of semen directly into the uterus, performed by laparoscopy. Currently, various techniques are used for laparoscopic insemination, those routinely employed are conducted using two or three access portals. This study aims to verify the feasibility of a new laparoscopic intrauterine insemination in sheep using a single access, aiming at a more effective and faster procedure with less tissue trauma, minimizing post-operative discomfort and lower bacterial contamination. The mean operative time was 5,92 minutes, there were no difficulties in the procedures and the animals recovered without complications. The use of a single access was effective, reducing the time of the surgery and complications weren't observed.(AU)

Viabilidade de duas novas técnicas para inseminação intrauterina laparoscópica em ovinos / Two new techniques for laparoscopic intrauterine insemination in sheep - feasibility study

Avaliaram-se duas novas técnicas de inseminação laparoscópica intrauterina com o uso de agulha espinhal em ovinos. Foram realizadas quatro etapas experimentais, sendo os animais separados em dois grupos em cada etapa. Para tanto, foram utilizados os posicionamentos quadrupedal e dorsal. Realizou-se a inseminação de 80 ovinos após a sincronização de cio. Verificou-se que os acessos laparoscópicos propostos foram viáveis para a inseminação em ovinos. Considerou-se que a inseminação em posicionamento quadrupedal foi tecnicamente mais difícil se comparada ao acesso laparoscópico em decúbito dorsal, porém, com o aprimoramento da técnica e na dependência dos resultados quanto aos índices de prenhez, poderá se tornar procedimento adequado para a inseminação de ovelhas.(AU)

This study evaluated two new laparoscopic intrauterine insemination techniques with spinal needles in sheep. Four experimental stages were done, in which the animals were separated into two groups aiming to evaluate the techniques used. We used a total of 80 estrus-synchronized sheep, which were placed in quadrupedal or dorsal recumbence. The results showed that both insemination techniques using a spinal needle are feasible, but the quadrupedal insemination is technically more difficult compared to the laparoscopic approach in the dorsal position. With technical improvement and depending on the results in relation to pregnancy rates, this access could be considered an alternative procedure for sheep insemination.(AU)

AVALIAÇÃO DE MÉTODOS DE INSEMINAÇÃO, INDUÇÃO / SINCRONIZAÇÃO DA ONDA FOLÍCULAR EM OVELHAS E ADITIVOS NO CONGELAMENTO DE SÊMEN OVINO

CASALI, R. Avaliação de métodos de inseminação, indução / sincronização da onda folícular em ovelhas e aditivos no congelamento de sêmen ovino. 2018. 81 p. Tese (Doutorado em Ciência Animal. Área: Produção Animal)Universidade do Estado de Santa Catarina. Programa de Pós-graduação em Ciência Animal, Lages, 2018. A ovinocultura encontra-se estagnada no aspecto econômico pela inexistência de uma produção constante e padronizada de carne e leite. Uma das causas é a dificuldade de execução da IA transcervical, em função da anatomia tortuosa da cérvix ovina, determinando que historicamente o sêmen ovino congelado esteja condicionado a inseminação por laparoscopia. Isto demonstra a necessidade de se buscar alternativas que possibilitem o emprego da IA cervical. Igualmente importante é a definição de um protocolo de sincronização que permita concentrar a ovulação em ovelhas, oportunizado o encontro dos gametas no momento mais adequado. Outro importante quesito para possibilitar o melhoramento genético dos ovinos, preconiza o aumento da eficiência da criopreservação do sêmen. Buscando superar estes obstáculos, quatro estudos foram conduzidos. O primeiro estudo comparou o método de inseminação transcervical com os métodos de inseminação cervical superficial e inseminação por laparoscópica. O segundo estudo avaliou o emprego de benzoato de estradiol (BE) no início de protocolo curto de sincronização, utilizando implantes de progesterona de terceiro uso. Neste estudo também foi avaliado o emprego de GnRH, como indutor de ovulação. O diagnóstico de gestação dos estudos 1 e 2 foi realizado 30 dias após a IA, por ultrassonografia. O terceiro estudo avaliou a dinâmica folicular de ovelhas submetidas ao protocolo do estudo 2, para um melhor entendimento dos resultados observados. O estudo 4 avaliou a qualidade do sêmen ovino congelado com a adição de trealose e da associação trealose + plasma seminal equino (PSLE), ao diluente. Foram avaliadas a motilidade e vigor no decorrer do teste de termo resistência (TTR), a integridade de membrana por teste hiposmótico, a migração espermática após swim up, além da morfologia espermática. Os dados obtidos foram submetidos à análise de variância e quando necessário a testes de comparação de médias, com nível de significância de 5%. Os resultados obtidos no estudo 1 demonstraram que quando o sêmen foi depositado no útero, proporcionou maior taxa de prenhez, o que foi alcançado em todas as fêmeas, somente por laparoscopia. Na inseminação transcervical, a taxa de prenhez foi intermediária (42,3%), entre a inseminação cervical e laparoscopia (36,0% e 50,2%; P < 0,05), sendo maior nas ovelhas em que o sêmen foi depositado a uma profundidade superior a 4 cm da cervix (60,0% versus 35,1%). Todavia, a deposição intrauterina foi possível em menos de 30% das ovelhas com inseminação transcervical. O estudo 2 demonstrou maior taxa de prenhez quando foi empregado o BE no início de protocolos curtos (com BE = 46,4%, sem BE = 40,4%). Já o emprego do GnRH como indutor de ovulação, não trouxe benefícios na taxa de prenhez (com GnRH 43,9% e sem GnRH 43%). Os dados do experimento 3 estão sendo avaliados, porém pode-se observar que o diâmetro médio do folículo pré-ovulatório foi 8,6 mm para o grupo sem BE e sem GnRh, 7,7 mm para o grupo sem BE com GnRH, 7,5 mm para o grupo com BE e sem GnRH e 7,3 mm para com BE e com GnRH. Em 12 das 40 ovelhas, foi observado cio durante o protocolo, sendo que em 10 o cio ocorreu nas primeiras 48 horas após a aplicação do BE, indicando um provável efeito colateral. O estudo 4 demonstrou que a trealose e a associação de trealose com PSLE melhora a motilidade e o vigor (controle = 36,5%/3, trealose+plasma= 42%/3,3 e trealose = 43,5%/3,3), a integridade de membrana (controle = 25,8%, trealose+plasma = 38,6% e trealose = 32,7%), bem como a migração espermática após swim up. Os experimentos realizados permitiram contribuir em quesitos para a obtenção de melhores taxas de prenhez em ovelhas. Por fim, o estudo possibilitou o avanço em alguns fatores que dificultam a difusão das biotécnicas de reprodução em ovinos.

CASALI, R. Evaluation of methods of insemination, induction / synchronization of the follicular wave in ewes and additives in the freezing of ovine semen. 2018. 81p. Doctoral Thesis in Animal Science. Area of concentration: Animal Production Santa Catarina State University. Animal Science Postgraduate Program, Lages, 2018. Sheep farming is economically stagnated by the lack of meat and milk production in a constant and standardized way. The difficulty to perform simplified transcervical AI, determined by tortuous cervix anatomy is one cause. This has determined that ovine frozen semen historically was conditioned to insemination by laparoscopy. This characterizes the need to search for alternatives that make possible the use of cervical AI. Also important is the definition of a protocol to synchronize the ovulation in ewes, facilitating the join of the gametes at the most appropriate time. Another important question to improve genetic advances in sheep farming is to increase the efficiency of ram semen cryopreservation. In order to overcome these obstacles, four studies were conducted. The first study compared the method of transcervical insemination with the superficial cervical insemination and laparoscopy methods. The second study evaluated the injection of 200 g of estradiol benzoate (BE) at the start of a short-term synchronization protocol, using a third-use progesterone implant. In this study the use of GnRH (50 g) was also evaluated at the time of insemination. The pregnancy diagnosis from studies 1 and 2 was performed 30 days after AI, by ultrasonography. The third study evaluated the follicular dynamics of ewes submitted to the same protocol of study 2, for a better understanding of the observed results. The study 4 evaluated the seminal quality of ovine semen frozen with the addition of trehalose or trehalose + equine seminal lyophilized plasma (PSLE) to the diluent. It was evaluated motility and vigor during the Thermal Resistent Test (TRT); membrane integrity by hyposmotic test; sperm migration after swim up, and sperm pathologies. The data were submitted to analysis of variance and, when necessary, to means comparison tests, with significance level of 5%. The results obtained in study 1 showed a higher pregnancy rate when the semen was deposited into the uterus, which was achieved in all females only by laparoscopy method. Transcervical insemination provides intermediate pregnancy rates (42.3%) between cervical insemination, and laparoscopy (36.0% and 50.2%, respectively P <0.05), being higher in ewes in which semen was deposited to a depth greater than 4 cm from the cervix (60.0% versus 35.1%). However, in transcervical method the intrauterine semen deposition was possible in less than 30% of the ewes. In addition, it is a more time consuming technique. Study 2 showed a higher pregnancy rate when BE was used at the start of short protocol (with BE = 46.4%, without BE = 40.4%). However, the use of GnRH as an ovulation inducer do not influenced pregnancy rates (with GnRH - 43.9% and without GnRH - 43%). The data from study 3 are being processed. Preliminary results show that mean diameter of the preovulatory follicles was 8.6 mm for group without BE and without GnRH; 7.7 mm for group without BE and with GnRH; 7.5 mm for group with BE and without GnRH and 7.3 mm for group with BE and with GnRH. In 12 out of the 40 ewes, estrus was observed during the protocol, and in 10 the estrus occurred within the first 48 hours after the BE application, indicating a probable side effect. The study 4 show that trehalose and the association of trehalose and PSLE improved motility and vigor (control = 36.5% / 3, trehalose + plasma = 42% / 3.3 and trehalose = 43.5% / 3.3); membrane integrity (control = 25.8%, trehalose + plasma = 38.6% and trehalose = 32.7%), as well as sperm migration after swim up. The experiments carried out allowed us to contribute in questions to obtain adequate pregnancy rates in ewes. Finally, all the studies opportunized knowledge advances in factors that difficult the diffusion of ovine reproductive biotechnologies.

Linsémination artificielle chez les félidés / Artificial insemination in felids / Inseminação artificial em felídeos

Linsémination artificielle chez le chat domestique et les félidés sauvages répond à plusieurs indications. Chez le chat, elle peut notamment permettre daider la reproduction lorsque laccouplement ne se produit pas ou difficilement et de favoriser les échanges géographiques de semence et donc un brassage et une meilleure sélection génétiques. Chez les félins sauvages, elle joue un rôle complémentaire au sein des programmes de conservation. Son utilisation est cependant complexe. Loestrus et lovulation sont le plus souvent induits par lemploi de gonadotropines qui possèdent cependant des effets indésirables, notamment un risque dhyperstimulation ovarienne. La semence des mâles est généralement récoltée par électro-éjaculation. Elle peut être congelée. Néanmoins, un problème spécifique aux félins tient à la tératospermie, c'est-à-dire la production de nombreux spermatozoïdes porteurs danomalies morphologiques. Linsémination artificielle donne de meilleurs résultats lorsque la semence est déposée par voie intra-utérine. Pendant longtemps, la laparoscopie a été la technique de référence, mais récemment, des techniques de cathétérisme du col utérin par voie vaginale ont été mises au point, aussi bien chez le chat que chez certains félidés sauvages. Les résultats de linsémination artificielle chez les félidés restent moyens.(AU)

Artificial insemination in the domestic cat and in wild felids has several indications. In the cat, it may replace natural reproduction when matings are unsuccessful or difficult, and it may help to perform geographical exchanges of semen and therefore enhance genetic improvement. In wild felids, it plays a complementary role inside conservation programs. However, its use is complex. First, oestrus and ovulation have to be induced. This is most often obtained using gonadotrophins, which unfortunately may induce undesirable effects, like ovarian hyperstimulation. In males, the semen is generally collected by electro-ejaculation. It may be frozen. However, teratospermia, which is the production of numerous spermatozoa showing morphological abnormalities, is a specific problem affecting felids. Intrauterine inseminations give better results. For a long period, laparoscopy was recommended in felids to perform intrauterine inseminations. Recently, new techniques consisting of catheterizing the cervix through a vaginal access have been developed in the cat as in some wild felids species. Altogether, the rate of success of artificial insemination in felids remains moderate.(AU)

A inseminação artificial em gatos domésticos e felídeos tem várias indicações. No gato, esta técnica substitui a reprodução natural quando as coberturas são mal sucedidas ou de difícil realização, além disso, auxilia geograficamente na permuta de sêmen contribuindo para aumentar a qualidade genética. Nos felídeos selvagens, esta técnica desempenha um papel complementar nos programas de conservação. Contudo, sua utilização é complexa. Inicialmente, há necessidade da indução do estro e ovulação. Geralmente isto é obtido por meio da utilização de gonadotrofinas que, infelizmente, induz a alguns efeitos indesejáveis, tais como, hiperestimulação ovariana. Nos machos, o sêmen geralmente é coletado por meio de eletroejaculação e este é submetido à congelaçãoAdicionalmente, a teratospermia, que é a produção de um grande número de espermatozóides com anormalidades morfológicas, é um problema específico que afeta os felídeos. Melhores resultados são obtidos com a inseminação intrauterina. Durante muito tempo recomendava-se a laparoscopia para a realização da inseminação intrauterina em felídeos. Recentemente, novas técnicas que consistem na cateterização da cérvix através do canal vaginal foram desenvolvidas no gato e em algumas espécies de felídeos selvagens. De modo geral, o índice de sucesso da inseminação artificial em felídeos ainda é considerado modesto.(AU)

L’insémination artificielle chez les félidés / Artificial insemination in felids / Inseminação artificial em felídeos

L’insémination artificielle chez le chat domestique et les félidés sauvages répond à plusieurs indications. Chez le chat, elle peut notamment permettre d’aider la reproduction lorsque l’accouplement ne se produit pas ou difficilement et de favoriser les échanges géographiques de semence et donc un brassage et une meilleure sélection génétiques. Chez les félins sauvages, elle joue un rôle complémentaire au sein des programmes de conservation. Son utilisation est cependant complexe. L’oestrus et l’ovulation sont le plus souvent induits par l’emploi de gonadotropines qui possèdent cependant des effets indésirables, notamment un risque d’hyperstimulation ovarienne. La semence des mâles est généralement récoltée par électro-éjaculation. Elle peut être congelée. Néanmoins, un problème spécifique aux félins tient à la tératospermie, c'est-à-dire la production de nombreux spermatozoïdes porteurs d’anomalies morphologiques. L’insémination artificielle donne de meilleurs résultats lorsque la semence est déposée par voie intra-utérine. Pendant longtemps, la laparoscopie a été la technique de référence, mais récemment, des techniques de cathétérisme du col utérin par voie vaginale ont été mises au point, aussi bien chez le chat que chez certains félidés sauvages. Les résultats de l’insémination artificielle chez les félidés restent moyens.

Artificial insemination in the domestic cat and in wild felids has several indications. In the cat, it may replace natural reproduction when matings are unsuccessful or difficult, and it may help to perform geographical exchanges of semen and therefore enhance genetic improvement. In wild felids, it plays a complementary role inside conservation programs. However, its use is complex. First, oestrus and ovulation have to be induced. This is most often obtained using gonadotrophins, which unfortunately may induce undesirable effects, like ovarian hyperstimulation. In males, the semen is generally collected by electro-ejaculation. It may be frozen. However, teratospermia, which is the production of numerous spermatozoa showing morphological abnormalities, is a specific problem affecting felids. Intrauterine inseminations give better results. For a long period, laparoscopy was recommended in felids to perform intrauterine inseminations. Recently, new techniques consisting of catheterizing the cervix through a vaginal access have been developed in the cat as in some wild felids species. Altogether, the rate of success of artificial insemination in felids remains moderate.

A inseminação artificial em gatos domésticos e felídeos tem várias indicações. No gato, esta técnica substitui a reprodução natural quando as coberturas são mal sucedidas ou de difícil realização, além disso, auxilia geograficamente na permuta de sêmen contribuindo para aumentar a qualidade genética. Nos felídeos selvagens, esta técnica desempenha um papel complementar nos programas de conservação. Contudo, sua utilização é complexa. Inicialmente, há necessidade da indução do estro e ovulação. Geralmente isto é obtido por meio da utilização de gonadotrofinas que, infelizmente, induz a alguns efeitos indesejáveis, tais como, hiperestimulação ovariana. Nos machos, o sêmen geralmente é coletado por meio de eletroejaculação e este é submetido à congelaçãoAdicionalmente, a teratospermia, que é a produção de um grande número de espermatozóides com anormalidades morfológicas, é um problema específico que afeta os felídeos. Melhores resultados são obtidos com a inseminação intrauterina. Durante muito tempo recomendava-se a laparoscopia para a realização da inseminação intrauterina em felídeos. Recentemente, novas técnicas que consistem na cateterização da cérvix através do canal vaginal foram desenvolvidas no gato e em algumas espécies de felídeos selvagens. De modo geral, o índice de sucesso da inseminação artificial em felídeos ainda é considerado modesto.

INSEMINAÇÃO ARTIFICIAL POR RETRAÇÃO CERVICAL EM OVELHAS DA RAÇA SANTA INÊS

Objetivou-se avaliar a viabilidade da técnica de inseminação artificial transcervical com retração da cérvice (IRC) em ovelhas da raça Santa Inês, por meio de parâmetros comportamentais, endócrinos, histológicos e imunológicos. Para tanto foram realizados três estudos sequenciais. No estudo I, utilizando ovelhas sincronizadas com protocolos hormonais à base de prostaglandina ou progestágeno, avaliou-se o efeito da técnica IRC no comportamento, níveis hormonais e na histologia cervical. A IRC, independentemente do protocolo hormonal, possibilitou deposição intrauterina de sêmen em 83,5% das ovelhas. Apenas 9,3% das ovelhas apresentam reação forte a IRC e foi verificada intensa reação inflamatória no epitélio cervical 24 horas pós-IRC, quadro que foi atenuado às 72 horas, com reorganização tecidual. No estudo II, foi avaliado o desempenho da IRC com uso de sêmen congelado disponível comercialmente. Foram comparadas duas técnicas de inseminação (com retração cervical - IRC ou por laparoscopia - IAL) e dois tipos de sêmen (fresco ou congelado). Os níveis séricos de progesterona (P4) foram mensurados e comparados com ovelhas cobertas naturalmente (MN). Houve similaridade (P > 0,05) entre as técnicas de IA para não-retorno ao estro (35,0% vs 35,3%), perda embrionária (19% e 8,5), fertilidade com sêmen fresco (50% e 50%) e com sêmen congelado (17,5% e 20,4%), respectivamente. Também não houve diferença quanto aos níveis de P4. No estudo III, foram usados os mesmos métodos de reprodução do Estudo II para avaliar os níveis séricos de interferon gama (IFN) e interleucina 10 (IL10). As ovelhas foram classificadas como gestantes, vazias ou com perda embrionária. Foram coletadas amostras de sangue em D0, D3, D5, D12 e D17 para quantificação de progesterona, IFN e IL10 (D0 = dia da inseminação/cobertura). Os níveis de progesterona foram similares, exceto pela redução no D17 nas ovelhas vazias (P<0,05). Em função do método de reprodução utilizado, não houve diferença entre os grupos para IFN e IL10 em nenhum momento avaliado (P > 0,05), com médias de 642,1, 713,2 e 741,2 pg/mL para IFN e 667,1, 616,8 e 721,1 pg/mL para IL10 nas ovelhas submetidas à IRC, IAL e MN, respectivamente. As ovelhas com perda embrionária apresentaram menores níveis séricos de IFN e IL10 que ovelhas gestantes e vazias, independentemente do método reprodutivo utilizado, com médias de IFN 769,1, 555,7 e 714,9 pg/mL, e de IL10 713,8, 578,7 e 699,3 pg/mL, na mesma ordem (P<0,01). A inseminação artificial por retração cervical com uso do aplicador expansor e contenção em estação apresenta praticidade, não interfere no bem-estar nem compromete o perfil endócrino e imunológico de ovelhas Santa Inês.

This study aimed to evaluate the feasibility of transcervical artificial insemination by cervical retraction (RCI) in Santa Inês ewes, through behavioral, endocrine, histological and immunological parameters. Therefore, we carried out three sequential studies. In study I, ewes were synchronized with hormone prostaglandin- or progestagen- based protocols for timed RCI and behavior, hormonal levels and cervical histology were evaluated. Regardless of hormonal protocol, RCI allowed intrauterine deposition of semen in 83.5% of the ewes; only 9.3% of the ewes revealed a strong reaction to RCI; intense inflammatory reaction was observed in cervical epithelium 24 hours after RCI, but the inflammation decreased at 72 hours, with tissue reorganization. In study II, we evaluated the performance of the RCI using frozen-thawed semen commercially available; two insemination techniques (with cervical retraction - RCI or laparoscopy - LAI) and two types of semen (fresh or frozen) were compared; serum levels of progesterone (P4) were measured and compared with naturally mated ewes (NM). The AI techniques were similar for non-return to estrus (35.0% vs 35.3%), embryonic loss (19% and 8.5), fertility with fresh semen (50% and 50%) and with semen frozen (17.5% and 20.4%), respectively. There was also no difference in the levels of P4. In Study III, the same methods of Study II were used to measure serum levels of interferon gamma (IFN) and interleukin 10 (IL10). The ewes were classified as pregnant, non pregnant or with embryonic loss. Blood samples were collected on D0, D3, D5, D12 and D17 for quantification of progesterone, IFN and IL-10 (D0 = day of insemination / mating); Progesterone levels were similar, except for the decrease in non pregnant ewes at D17 (P <0.05). Regarding to reproductive method used, there was no difference between groups for IFN and IL-10 in any time, the averages were 642.1, 713.2 and 741.2 pg/mL for IFN and 667.1, 616.8 and 721.1 pg/ml for IL-10 in ewes submitted to RCI, LAI and NM, respectively. The ewes with embryonic loss had lower serum levels of IFN and IL-10 than pregnant and non pregnant ewes, regardless of reproductive method, the averages were 769.1, 555.7 and 714.9 pg/mL for IFN and 713.8, 578.7 and 699.3 pg/ml for IL10, in the same order (P <0.01). In conclusion, artificial insemination by cervical retraction using the expander catheter catheter in ewes restrained in station provides easy implementation, does not interfere in the welfare or compromise the endocrine and immunological profile of Santa Inês ewes.

Emprego do sêmen criopreservado e capacitado in vitro na inseminação artificial intracervical superficial em ovinos

A inseminação artificial intracervical superficial em ovinos é uma técnica simples, de baixo custo e eficiente no emprego do sêmen fresco. Por outro lado, particularidades do aparelho reprodutivo da fêmea ovina, a quantidade de células espermáticas que sobrevivem ao pós-congelamento bem como a capacitação precoce de espermatozóides durante o processo de criopreservação, impedem o emprego desta técnica com sêmen criopreservado, fazendo-se necessária a deposição intrauterina, com auxílio da laparoscopia. Desconhece-se a eficiência da inseminação artificial intracervical superficial em ovinos, empregando-se sêmen criopreservado e capacitado in vitro. O experimento foi realizado com objetivo de determinar as taxas de prenhez com o sêmen criopreservado e capacitado in vitro. Os animais foram divididos aleatoriamente em 5 grupos: sêmen fresco (SF); sêmen congelado cervical (SCC); sêmen congelado laparoscopia (SCL); sêmen congelado capacitado cervical (SCCC); e sêmen congelado capacitado laparoscopia (SCCL). Todas as fêmeas receberam doses inseminantes com concentração de 200x106 sptz. As inseminações ocorreram em um período de 52 a 60 horas após a retirada dos dispositivos de progesterona. Os diagnósticos de prenhez foram realizados com auxílio da ultrassonografia 30 dias após as inseminações. As taxas de prenhez observadas foram: No grupo SF 42,30% (11/26), SCC 23,07% (6/26), SCL 54,16% (13/24), SCCC 25,92% (7/27), SCCL 48,14% (13/27), não existindo diferença estatística entre os grupos experimentais. O experimento realizado mostrou que é possível obter prenhez, empregando sêmen criopreservado e capacitado in vitro, na inseminação artificial pela via cervical em ovinos

The superficial intracervical insemination in sheep is a simple, low cost and efficient technique using fresh semen. Still, the particularities of the female tract, the amount of sperm cells wich survive and the early capacitation during the cryopreservation process, difficult the use of this technique with cryopreserved semen, maaing it s necessary to intrauterine with the aid of laparoscopy. It s unanown the efficiency of superficial intracervical insemination in ovine, using cryopreserved and in vitro capacitated semen. The experiment was carried out with the objective to determine the pregnancy rate of ewes inseminated with cryopreserved and in vitro capacitated semen. The females were randomly distributed among five experimental groups: fresh semen (SF), frozen semen cervical (SCC), frozen semen laparoscopy (SCL), frozen semen in vitro capacitated cervical (SCCC), frozen semen in vitro capacitated laparoscopy (SCCL). All females received dosis with 00x106sptz per insemination. The inseminations were performed from to 60 hours after the withdrawal of progesterone implants. The pregnancy diagnosis was conducted by ultrasongraphy 30 days after inseminations. The observed pregnancy rates was: SF ,30% (113 6), SCC 3,07% (63 6), SCL ,16% (133 ) SCCC %, SCCL 4,1 % (133 7). our experiment showed that in sheep it s viable the superficial cervical artificial insemination using cryopreserved and in vitro capacitated semen

Fertilidade após a inseminação artificial intra-cervical ou laparoscópica intra-uterina de ovelhas utilizando diluidores à base de água de coco / Fertility following intracervical or intrauterine laparoscopic insemination of ewes using extenders based on coconut water

O objetivo deste estudo foi avaliar a taxa de prenhez em ovelhas utilizando diluidores à base de água de coco (in natura: ACN ou em pó: ACP-102®) após inseminação artificial intra-cervical (Experimento 1) ou laparoscópica intra-uterina (Experimento 2). Experimento 1. Sêmen de 4 carneiros Santa Inês foi coletado, diluído a 37°C (T1: ACN; T2: ACP-102®) e resfriado á 4°C. 56 ovelhas Santa Inês foram inseminadas cervicalmente após a sincronização, 31 utilizando o diluidor ACN e 25 o diluidor ACP-102®. Experimento 2. Sêmen de 5 carneiros adultos (Santa Inês: n=04; Dorper n=01) foi coletado e processado de acordo com o descrito. 64 ovelhas SRD foram inseminadas intra-uterina por laparoscopia após a sincronização do estro, 37 utilizando o diluidor ACN e 27 o diluidor ACP-102®. O diagnóstico de gestação foi realizado por ultra-sonografia. A taxa de prenhez entre os tratamentos, dentro de cada método de inseminação, entre cada diluidor para ambos métodos de inseminação foi analisada pelo teste do Qui-quadrado (p<0,05). A taxa de prenhez após IA intra-cervical (ACN: 25,8% vs. ACP-102®: 48%) e laparoscópica (ACN: 72,9% vs ACP-102®: 70,3%) não foi influenciada pelos diluidores. A taxa de prenhez foi influenciada pelo método de inseminação (intra-cervical: 35,7% vs.laparoscopia: 71,8%; p<0,05). Os diluidores a base de água de coco podem ser utilizados nas inseminações artificiais cervical ou laparoscopica em ovelhas do Nordeste do Brasil em condições de campo.(AU)

The objetive of this study was to evaluate pregnancy rates in ewes using extenders based on coconut water (in natura: NCW or in powder: PCW-102®) following intra - cervical (Trial 1) or intrauterine laparoscopic insemination (Trial2). Trial 1. Semen from 4 Santa Inês rams were collected, diluted at 32°C (T1: NCW; T2: PCW-102®) and cooled to 4°C. 56 adult Santa Inês ewes were inseminated intra-cervically following syncronization, 31 using the extender NCW and 25 the extender PCW-102®. Trial 2. Semen from 5 rams (Santa Inês: n=04; Dorper n=01) were collected and processed as described. 64 adult crossbred multiparous ewes were inseminated intrauterine by laparoscopy following oestrus syncronization. 37 ewes using the extender NCW and 27 the extender PCW-102®. The pregnancy diagnosis was performed by ultrasonography. The fertility rates between treatments for each method of insemination and within each extender for both methods were analysed by Chi-square test (p<0,05). The pregnancy rates following intra-cervical (NCW: 25.8% vs PCW-102®: 48%) and intrauterine (NCW: 72.9% vs 70.3%) inseminations were not influenced by the extenders. The pregnancy rate was influenced by insemination method (intra-cervical: 35.7% vs laparoscopy: 71.8%; p<0,05). The extenders based coconut water as basis can be used following cervical or intra-uterine laparoscopic inseminations in ewes from Northeast of Brazil under field conditions.(AU)

Parameters to evaluate ovine frozen semen for laparoscopic insemination / Parâmetros utilizados na avaliação do sêmen congelado ovino para inseminação laparoscópica

The aim of the present study was to verify some parameters for evaluating frozen semen, throughout pregnancy rate, in sheep. Two hundred and ninety-seven ewes from the Corriedale breed were inseminated by laparoscopic method. The estrus were synchronized with intravaginal sponge, containing 50 mg of MAP (medroxyprogesterone acetate), for 12 days and eCG (Equine Chorionic Gonadotrophin; 400 IU) was given in a single intramuscular injection at the moment of withdrawing the sponges. The semen from 32 rams was frozen in pellets. Semen of different qualities was used. The quality of the semen was determined by evaluating sperm motility at thawing, sperm motility after 5 hours incubation, the mean of sperm motility during incubation period (0, 1, 2, 3, 4 and 5 hours) and the percentage of normal sperm cells. Each of these parameters was correlated with pregnancy after laparoscopic insemination. The diagnosis of pregnancy was performed by ultrasonography at 40 days after insemination. The percentages of pregnancy were from 60% to 80% only when the sperm samples exhibited sperm motility higher than 40% (68.1), mean of sperm motility and after thawing at least of 20% (64.4 and 72.3) and sperm motility after 5 hours of incubation superior to 10% (61.1 and 78.6). With regard to the percentage of viable cells, the samples with at least 40% of sperm motility resulted in 61.8% and 66.4% of p

Com a finalidade de verificar o valor de alguns atributos para avaliação da qualidade do sêmen congelado, através da prenhez, duzentas e noventa e sete ovelhas da raça Corriedale foram inseminadas, intra-uterinamente, por laparoscopia. Utilizou-se cio sincronizado, com pessários vaginais contendo 50 mg de MAP (acetato de medroxiprogesterona), por 12 dias, e 400 UI de eCG (Equine chorionic gonadotrophin) no 12º dia. O sêmen, proveniente de 32 carneiros, foi congelado em pellets. Para a inseminação, utilizaram-se amostras de sêmen com diferentes padrões de qualidade preestabelecida, de motilidade progressiva (MP) ao descongelamento, média da MP durante todo o período de incubação (0, 1, 2, 3, 4 e 5 horas), a 37ºC, MP após cinco horas de incubação e percentagem de células, morfologicamente, íntegras. O diagnóstico de gestação foi realizado por ecografia 40 dias após a inseminação. Obtiveram-se percentuais de prenhez entre 60 e 80% somente quando as amostras apresentaram um movimento progressivo superior a 40% (68,0%), uma MP média e após 5 horas de incubação mínima de 20% (64,4 e 72,3%) e uma MP às 5 horas de incubação quando superior a 10% (61,1 e 78,5%). Com relação ao percentual de células íntegras, as amostras com um mínimo de 40% proporcionaram prenhez de 61,7 e 66,4%, enquanto nas com menos de 40% o percentual foi de apenas 15,2%. Os parâmetros estudados demonstraram eficiên

INSEMINAÇÃO LAPAROSCÓPICA EM OVELHAS COM CIO NATURAL INDUZIDO E SINCRONIZADO ANTES E DURANTE A ESTAÇÃO REPRODUTIVA

SUMMARY Three hundred and twenty-nine Corriedale ewes, between two and six years old, were inseminated by laparoscopic method with frozen sêmen in pellet to verify the fertility with natural, induced and synchronized estrous. Sponge with 50mg of MAP was used intravaginal during 12 days, out and within the reproductive season either with or without eCG (Equine Chorionic Gonadotrophin) at the moment of removing the sponges to induce or to synchronize estrous in the ewes. The insemination was between 58 and 66 hours after withdrawal of the sponges, with at least 40% of progressive motility after thawing and each ewe received at least 50 millions total sperm per dose. The pregnancy diagnosis was performed at 40 days by ultrasound. It was observed that satisfatory percentage of pregnancy was obtained only when eCG was injectd in both out (64.91%) and within (62.11%) of the reproductive season. During the reproductive season, the results were just fair when MAP was used without eCG. With natural estrous, the percentage of pregnancy was 63.51%. In conclusion, the results showed that the intrauterine insemination with frozen sêmen in ewes with natural, induced and synchronized estrous using laparoscopy are satisfatory, in both within and out of the reproductive season when eCG is used.

RESUMO Trezentas e vinte e nove ovelhas Corriedale com idade entre 2 e 6 anos foram submetidas a inseminação laparoscópica com sêmen congelado em pellet para verificação dos efeitos do cio natural, induzido e sincronizado com esponjas (MAP- 50mg, por 12 dias), fora e dentro da estação reprodutiva utilizando ou não eCG (Equine Chorionic Gonadotrophin), no porcentual de prenhez. A aplicação do sêmen foi entre 58 e 66 horas após retirada das esponjas, com pelo menos 40% de motilidade progressiva pós-descongelamento e cada ovelha recebeu um mínimo de 50 milhões de espermatozóides totais por dose. O diagnóstico de gestação foi realizado aos 40 dias por ecografia. Ficou evidenciado que os porcentuais de prenhez obtidos foram satisfatórios somente quando foi utilizado o eCG tanto fora (64,91%) quanto dentro (62,11%) da estação reprodutiva. A utilização única do MAP sem eCG apresentou resultados razoáveis (40,91%) na estação reprodutiva. A utilização de cio natural propiciou a obtenção de 63,51% de prenhez. Com base nos resultados obtidos conclui-se que a inseminação intrauterina por laparoscopia em ovelhas com cio induzido ou sincronizado dentro e fora da estação reprodutiva, desde que com a utilização de eCG, assim como em estro natural, apresenta resultados satisfatórios.

Inseminação laparoscópica em ovelhas com cio natural induzido e sincronizado antes e durante a estação reprodutiva

SUMMARY Three hundred and twenty-nine Corriedale ewes, between two and six years old, were inseminated by laparoscopic method with frozen sêmen in pellet to verify the fertility with natural, induced and synchronized estrous. Sponge with 50mg of MAP was used intravaginal during 12 days, out and within the reproductive season either with or without eCG (Equine Chorionic Gonadotrophin) at the moment of removing the sponges to induce or to synchronize estrous in the ewes. The insemination was between 58 and 66 hours after withdrawal of the sponges, with at least 40% of progressive motility after thawing and each ewe received at least 50 millions total sperm per dose. The pregnancy diagnosis was performed at 40 days by ultrasound. It was observed that satisfatory percentage of pregnancy was obtained only when eCG was injectd in both out (64.91%) and within (62.11%) of the reproductive season. During the reproductive season, the results were just fair when MAP was used without eCG. With natural estrous, the percentage of pregnancy was 63.51%. In conclusion, the results showed that the intrauterine insemination with frozen sêmen in ewes with natural, induced and synchronized estrous using laparoscopy are satisfatory, in both within and out of the reproductive season when eCG is used.

RESUMO Trezentas e vinte e nove ovelhas Corriedale com idade entre 2 e 6 anos foram submetidas a inseminação laparoscópica com sêmen congelado em pellet para verificação dos efeitos do cio natural, induzido e sincronizado com esponjas (MAP- 50mg, por 12 dias), fora e dentro da estação reprodutiva utilizando ou não eCG (Equine Chorionic Gonadotrophin), no porcentual de prenhez. A aplicação do sêmen foi entre 58 e 66 horas após retirada das esponjas, com pelo menos 40% de motilidade progressiva pós-descongelamento e cada ovelha recebeu um mínimo de 50 milhões de espermatozóides totais por dose. O diagnóstico de gestação foi realizado aos 40 dias por ecografia. Ficou evidenciado que os porcentuais de prenhez obtidos foram satisfatórios somente quando foi utilizado o eCG tanto fora (64,91%) quanto dentro (62,11%) da estação reprodutiva. A utilização única do MAP sem eCG apresentou resultados razoáveis (40,91%) na estação reprodutiva. A utilização de cio natural propiciou a obtenção de 63,51% de prenhez. Com base nos resultados obtidos conclui-se que a inseminação intrauterina por laparoscopia em ovelhas com cio induzido ou sincronizado dentro e fora da estação reprodutiva, desde que com a utilização de eCG, assim como em estro natural, apresenta resultados satisfatórios.

Identificação do intervalo de tempo fixo para o emprego da inseminação artificial laparoscópica com sêmem congelado em ovelhas Santa Inês

Entre as biotecnologias da reprodução animal, a indução e controle do estro e a inseminação artificial são frequentemente utilizadas na busca por melhoramento genético e produtividade. O presente trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar a eficiência da inseminação artificial com tempo fixo (IATF) realizada 48, 60 e 72 horas após a retirada do CIDR, através da fertilidade, em ovelhas deslanadas da raça Santa Inês, inseminadas por laparoscopia, com sêmen congelado durante a estação reprodutiva. Frente aos resultados obtidos, pode-se concluir que o melhor intervalo de horário para a realização da inseminação intra-uterina por laparoscopia com tempo fixo e utilizando sêmen congelado, em ovelhas da raça Santa Inês, está entre 48 e 60 horas. Palavras-chave: IATF, ovinos, progesterona, Santa Inês. ABSTRACT Of the breeding biotechnologies available for use in animal, estrus induction and control and artificial insemination are those more frequently employed when genetic improvement and increased productivity are sought. The purpose of the present investigation was to evaluate, based on fertility outcomes, the efficiency of fixed-time artificial insemination (FTAI) carried out 48, 60, and 72 h after removal of a controlled internal drug release (CIDR) device in ewes of the Santa Inês breed inseminated by laparoscopy with frozen semen during the breeding season. From the results, it was possible to conclude that the best interval for FTAI with frozen semen in Santa Inês ewes in the breeding season ranges from 48 to 60 h after removal of the intravaginal device. Keywords: FTAI, ovines, progesterone, Santa Inês