Perceptions of the local government and the residents regarding rural tourism development effects. Survey in the Suceava County - Romani / Percepções do governo local e dos residentes sobre os efeitos do desenvolvimento do turismo rural: Levantamento no Condado de Suceava na Romênia

Rural tourism has received more and more attention because it can contribute to increase the living standard in some rural areas, stimulate local economy and reduce the urban-rural gaps. At the same time, the preference for this type of tourism is growing, but for the efficient use of the existing potential, the involvement of local authorities and residents is needed. This paper revealed the perceptions of human resources in local government institutions and of residents in Suceava County - Romania to identify the effects of tourism development on the administrative process, living standards and natural environment. The undertaken questionnaire-based research showed that the degree of tourism development positively influenced the level of improvement of the public affairs management process in the respective administrative-territorial unit, as well as the standard of living of the local community. Regarding the influence of tourism development on the environment, the recorded results showed that the intensification of the tourism phenomenon does not strongly threaten the local environment, but it is necessary to raise awareness of the environmental impact.

O turismo rural tem recebido cada vez mais atenção porque pode contribuir para o aumento do padrão de vida em algumas áreas rurais, para o estímulo da economia local e para a redução das brechas urbano-rurais. Ao mesmo tempo, a preferência por este tipo de turismo é crescente, mas para o aproveitamento eficiente do potencial existente é necessário o envolvimento das autoridades locais e dos residentes. Este artigo tem como objetivo revelar as percepções dos recursos humanos em instituições governamentais locais e dos residentes no Condado de Suceava na Roménia para identificar os efeitos do desenvolvimento do turismo no processo administrativo, nos padrões de vida e no ambiente natural. A pesquisa baseada em questionários evidenciou que o grau de desenvolvimento do turismo influencia positivamente o nível de melhoria do processo de gestão da coisa pública na respectiva unidade administrativo-territorial, bem como os padrões de vida da comunidade local em questão. Em relação à influência do desenvolvimento do turismo no meio ambiente, os resultados registrados mostraram que a intensificação do fenômeno turístico não ameaça fortemente o meio ambiente local, mas é preciso conscientizar sobre o impacto ambiental.

Spatio-temporal distribution patterns of Chironomidae communities in the wadis of Northern Tunisia / Padrões de distribuição espaço-temporal de comunidades Chironomidae nos wadis do norte da Tunísia

In Northern Tunisia, seasonal streams, called wadi, are characterized by extreme hydrological and thermal conditions. These freshwater systems have very particular features as a result of their strong irregularity of flow due to limited precipitation runoff regime, leading to strong seasonal hydrologic fluctuations. The current study focused on the spatio-temporal distribution of chironomids in 28 sampling sites spread across the Northern Tunisia. By emplying PERMANOVA, the results indicated a significant spatio-temporal variation along various environmental gradients. The main abiotic factors responsible for noted differences in the spatial distribution of chironomids in wadi were the conductivity and temperature, closely followed by altitude, pH, salinity, talweg slope and dissolved oxygen, identified as such by employing distance-based linear models' procedure. The Distance-based redundancy analysis ordination showed two main groups: the first clustered the Bizerte sites, which were characterized by high water conductivity, sodium concentration and salinity. The second main group comprised sites from the Tell zone and was characterized by low temperatures, neutral pH, low conductivity and nutrients content. The subfamily TANYPODIINAE (e.g., Prochladius sp., Prochladius choerus (Meigen, 1804) and Macropelopia sp.) was the dominant group at Tell zone, whereas species such as Diamesa starmachi (Kownacki et Kownacha, 1970) and Potthastia gaedii (Meigen, 1838) were found only in Tell Wadis. In contrast, chironomid species such as Diamesa starmachi (Kownacki et Kownacha, 1970), Potthastia gaedii (Meigen, 1838), Procladius choreus (Meigen, 1804) were specific for Tell Mountain. Cap Bon wadis region was dominated by genus Cladotanytarsus sp. The results of this survey liked the taxonomic composition of chironomid assemblages to the variation of hydromorphological and physic-chemical gradients across the northern Tunisia wadis.

No norte da Tunísia, riachos sazonais chamados wadi são caracterizados por condições hidrológicas e térmicas extremas. Esses sistemas de água doce têm características muito particulares como resultado de sua forte irregularidade de fluxo devido ao regime de escoamento de precipitação limitado, levando a fortes flutuações hidrológicas sazonais. O estudo atual enfocou a distribuição espaço-temporal dos quironomídeos em 28 locais de amostragem espalhados pelo norte da Tunísia. Ao aplicar PERMANOVA, os resultados indicaram uma variação espaço-temporal significativa ao longo de vários gradientes ambientais. Os principais fatores abióticos responsáveis pelas diferenças observadas na distribuição espacial dos quironomídeos no wadi foram a condutividade e a temperatura, seguidos de perto por altitude, pH, salinidade, declive do talvegue e oxigênio dissolvido, identificados como tais empregando o procedimento de modelos lineares baseados na distância. A ordenação da análise de redundância baseada em distância mostrou dois grupos principais: o primeiro agrupou os sítios Bizerte, que foram caracterizados por alta condutividade da água, concentração de sódio e salinidade. O segundo grupo principal compreendia locais da zona de Tell e era caracterizado por baixas temperaturas, pH neutro, baixa condutividade e conteúdo de nutrientes. A subfamília Tanypodiinae (por exemplo, Prochladius sp., Prochladius choerus [Meigen, 1804] e Macropelopia sp.) era o grupo dominante na zona de Tell, enquanto espécies como Diamesa starmachi (Kownacki et Kownacha, 1970) e Potthastia gaedii (Meigen, 1838) foram encontradas apenas em Tell Wadis. Em contraste, espécies de quironomídeos, como Diamesa starmachi (Kownacki et Kownacha, 1970), Potthastia gaedii (Meigen, 1838), Procladius choreus (Meigen, 1804), eram específicas para Tell Mountain. A região de Cap Bon wadis [...].

Spatio-temporal distribution patterns of Chironomidae communities in the wadis of Northern Tunisia / Padrões de distribuição espaço-temporal de comunidades Chironomidae nos wadis do norte da Tunísia

In Northern Tunisia, seasonal streams, called wadi, are characterized by extreme hydrological and thermal conditions. These freshwater systems have very particular features as a result of their strong irregularity of flow due to limited precipitation runoff regime, leading to strong seasonal hydrologic fluctuations. The current study focused on the spatio-temporal distribution of chironomids in 28 sampling sites spread across the Northern Tunisia. By emplying PERMANOVA, the results indicated a significant spatio-temporal variation along various environmental gradients. The main abiotic factors responsible for noted differences in the spatial distribution of chironomids in wadi were the conductivity and temperature, closely followed by altitude, pH, salinity, talweg slope and dissolved oxygen, identified as such by employing distance-based linear models' procedure. The Distance-based redundancy analysis ordination showed two main groups: the first clustered the Bizerte sites, which were characterized by high water conductivity, sodium concentration and salinity. The second main group comprised sites from the Tell zone and was characterized by low temperatures, neutral pH, low conductivity and nutrients content. The subfamily TANYPODIINAE (e.g., Prochladius sp., Prochladius choerus (Meigen, 1804) and Macropelopia sp.) was the dominant group at Tell zone, whereas species such as Diamesa starmachi (Kownacki et Kownacha, 1970) and Potthastia gaedii (Meigen, 1838) were found only in Tell Wadis. In contrast, chironomid species such as Diamesa starmachi (Kownacki et Kownacha, 1970), Potthastia gaedii (Meigen, 1838), Procladius choreus (Meigen, 1804) were specific for Tell Mountain. Cap Bon wadis region was dominated by genus Cladotanytarsus sp. The results of this survey liked the taxonomic composition of chironomid assemblages to the variation of hydromorphological and physic-chemical gradients across the northern Tunisia wadis.(AU)

No norte da Tunísia, riachos sazonais chamados wadi são caracterizados por condições hidrológicas e térmicas extremas. Esses sistemas de água doce têm características muito particulares como resultado de sua forte irregularidade de fluxo devido ao regime de escoamento de precipitação limitado, levando a fortes flutuações hidrológicas sazonais. O estudo atual enfocou a distribuição espaço-temporal dos quironomídeos em 28 locais de amostragem espalhados pelo norte da Tunísia. Ao aplicar PERMANOVA, os resultados indicaram uma variação espaço-temporal significativa ao longo de vários gradientes ambientais. Os principais fatores abióticos responsáveis pelas diferenças observadas na distribuição espacial dos quironomídeos no wadi foram a condutividade e a temperatura, seguidos de perto por altitude, pH, salinidade, declive do talvegue e oxigênio dissolvido, identificados como tais empregando o procedimento de modelos lineares baseados na distância. A ordenação da análise de redundância baseada em distância mostrou dois grupos principais: o primeiro agrupou os sítios Bizerte, que foram caracterizados por alta condutividade da água, concentração de sódio e salinidade. O segundo grupo principal compreendia locais da zona de Tell e era caracterizado por baixas temperaturas, pH neutro, baixa condutividade e conteúdo de nutrientes. A subfamília Tanypodiinae (por exemplo, Prochladius sp., Prochladius choerus [Meigen, 1804] e Macropelopia sp.) era o grupo dominante na zona de Tell, enquanto espécies como Diamesa starmachi (Kownacki et Kownacha, 1970) e Potthastia gaedii (Meigen, 1838) foram encontradas apenas em Tell Wadis. Em contraste, espécies de quironomídeos, como Diamesa starmachi (Kownacki et Kownacha, 1970), Potthastia gaedii (Meigen, 1838), Procladius choreus (Meigen, 1804), eram específicas para Tell Mountain. A região de Cap Bon wadis [...].(AU)

Diagnosis and management strategies for urospermia in stallions / Diagnóstico e estratégias de manejo na urospermia em garanhões

Urospermia, contaminação do sêmen com urina durante a ejaculação, é considerada a segunda causa mais frequente de disfunção ejaculatoria em garanhões. A presença de urina no sêmen pode afetar drasticamente a fertilidade através do pH alcalino e alta osmolaridade da urina, além de causar uma potencial inflamação uterina após a cobertura ou inseminação artificial. Esta condição pode estar associada a outras doenças como cistite, herpesvírus equino-1 e paralisia periódica hipercalêmica; no entanto, causas idiopáticas são as mais comuns. Por esse motivo, o tratamento da urospermia pode ser frustrante e o prognóstico para a resolução completa dessa condição costuma ser desfavorável. Garanhões que sofrem de urospermia são frequentemente diagnosticados após resultados frustrantes de fertilidade e baixa qualidade do sêmen. O diagnóstico de urospermia é baseado na aparência amarela e odor típico, presença de cristais de urina, pH alcalino, além do aumento da creatinina e níveis de nitrogênio. O tratamento da urospermia é desafiador, já que a maioria dos casos é idiopática, limitando as opções terapêuticas. No entanto, quando uma condição primária é diagnosticada, ela deve ser tratada para tentar resolver a causa da urospermia. Na maioria dos casos, as terapias direcionadas à redução da contaminação da urina incluem a redução da quantidade de urina na bexiga antes da cobertura ou coleta de sêmen, tratamento farmacológico para auxiliar o fechamento do colo da bexiga durante a ejaculação, ou a coleta apenas da porção rica em esperma através da coleta fracionada do ejaculado. O método mais simples e estabelecido para o manejo da urospermia é encorajar o garanhão a urinar antes da coleta de sêmen ou cobertura natural. No entanto, quando a coleta de sêmen livre de urina não é possível, o sêmen contaminado com urina pode ser processado para minimizar os efeitos adversos do pH e da osmolaridade ao esperma. O sêmen contaminado com urina deve ser diluído com diluente à base de leite no intuito de diminuir os efeitos deletérios da urina sobre os espermatozoides. A centrifugação com gradiente de densidade a fim de selecionar os espermatozoides com características superiores também é uma alternativa nesses casos. Além disso, a criopreservação de sêmen contendo baixos níveis de contaminação com urina pode ser realizada.

Urospermia is the contamination of semen with urine during ejaculation. Urospermia is the second most frequent ejaculatory dysfunction of stallions. It can drastically affect fertility mediated by alkaline pH, the high osmolarity of urine, and presumably excessive post-breeding inflammatory response. This condition can be associated with many other diseases (i.e., cystitis, equine herpesvirus-1, and hyperkalemic periodic paralysis); however, idiopathic causes appear to be predominant. For this reason, the treatment of urospermia can be frustrating, and the prognosis for complete resolution of this condition is often poor. Stallions suffering from urospermia are usually diagnosed after poor semen quality and fertility results. Diagnosis of urospermia is based on the yellow appearance, urine smell, urine crystal, alkaline pH, increased creatinine, and urea nitrogen levels. The treatment for urospermia is challenging. Most cases are idiopathic, thereby limiting therapeutic options. However, when a primary condition is diagnosed, it should be treated to solve the cause of urospermia. In most cases, therapies directed at reducing urine contamination include reducing the amount of urine in the bladder before breeding, pharmacological treatments to enhance bladder neck closure during ejaculation, or collecting only the sperm-rich portion of the ejaculate using an open-ended artificial vagina are used to manage stallions with urospermia. The simplest and most established method for managing urospermia is to encourage the stallion to urinate before semen collection or natural breeding. However, when the collection of semen free from urine is not possible, urine-contaminated semen can be processed to minimize the adverse effects of pH and osmolarity on the sperm. Semen contaminated with urine should be immediately extended with a milk-based extender to mitigate the deleterious effects of urine on the sperm. Single-layer gradient centrifugation can also be used to select sperm with superior traits for low urine contamination. In addition, semen cryopreservation can be performed in stallion semen with a low level of urine contamination.

Cinética e integridade de espermatozoides caprinos criopreservados utilizando Red Cushion® como estratégia de proteção espermática durante a centrifugação do sêmen / Kinetics and integrity of cryopreserved goat sperm using Red Cushion® as a strategy to sperm protection during semen centrifugation

Objetivou-se avaliar o efeito do gradiente de Iodixanol (Red Cushion®, RC) como método deproteção espermática durante a centrifugação (CE) do sêmen caprino destinado à criopreservação. Foramrealizadas colheitas de sêmen de cinco reprodutores caprinos da raça Anglo Nubiana (N= cincoejaculados/bode). Os ejaculados foram divididos em três grupos experimentais: GC (Controle); G1 (CEutilizado 1ml de RC) e G2 (foi utilizado 0,5mL de RC, misturado ao pellet espermático após a CE). Asamostras foram centrifugadas, diluídas, envasadas e criopreservadas. A cinética espermática foi avaliada porsistema computadorizado de análise (CASA) após a descongelação e pós-teste de termorresistência (TTR), efoi avaliada a integridade de membrana plasmática e acrossomal (MPAI, %). Não foram observadasdiferenças para a motilidade total (p=0,1849) avaliada pós-descongelação (GC=45,1%, G1=51,86% eG2=55,28%) ou pós-TTR (GC=10,32%, G1=11,44% e G2=13,16%), bem como para nenhum outroparâmetro cinético avaliado. Também não foram encontradas diferenças para a MPAI (GC=43,70% ±16,60; G1=36,68 ± 17,40; G2=41,72 ± 14,76; p=0,2523). Conclui-se que a utilização de Red Cushion®não promove nenhum benefício à manutenção da cinética e integridade de espermatozoides caprinossubmetidos a centrifugação previamente ao processo de criopreservação do sêmen.(AU)

The aim of this study was to evaluate the efficacy of iodixanol gradient centrifugation (RedCushion®, RC) as a method of protection of goat semen submitted to centrifugation previously tocryopreservation process. Semen were collected from five Anglo Nubian goats (n = five ejaculates/goat).The ejaculates were divided into three experimental groups: GC (Control; conventional centrifugation);G1 (centrifugation using 1ml RC) and G2 (centrifugation using 0.5 mL RC, mixed to sperm pellet beforethe cryopreservation). Samples were centrifuged (CE) at 600xg for 10 minutes, diluted, packed andcryopreserved. Sperm kinetics were evaluated using a computer assisted semen analysis (CASA) afterthawing and after thermoresistance test (TTR), and the integrity of the plasma and acrosomal membranewas evaluated (MPAI, %). No differences were observed for total motility (P =0.1849) assessed afterthawing (GC=45.1%, G1=51.86% and G2=55.28%) or post-TTR (GC=10.32%, G1=11.44% andG2=13.16%), as well as for the other kinetic parameters analyzed. Furthermore, no differences for MPAI(CG =43.70% ± 16.60; G1=36.68 ± 17.40; G2=41.72 ± 14.76; P=0.2523) were found comparing thedifferent groups. In conclusion, Red Cushion® was not able to improve the kinetics and integrity of thegoat semen submitted to the cryopreservation process.(AU)

Cinética e integridade de espermatozoides caprinos criopreservados utilizando Red Cushion® como estratégia de proteção espermática durante a centrifugação do sêmen / Kinetics and integrity of cryopreserved goat sperm using Red Cushion® as a strategy to sperm protection during semen centrifugation

Objetivou-se avaliar o efeito do gradiente de Iodixanol (Red Cushion®, RC) como método deproteção espermática durante a centrifugação (CE) do sêmen caprino destinado à criopreservação. Foramrealizadas colheitas de sêmen de cinco reprodutores caprinos da raça Anglo Nubiana (N= cincoejaculados/bode). Os ejaculados foram divididos em três grupos experimentais: GC (Controle); G1 (CEutilizado 1ml de RC) e G2 (foi utilizado 0,5mL de RC, misturado ao pellet espermático após a CE). Asamostras foram centrifugadas, diluídas, envasadas e criopreservadas. A cinética espermática foi avaliada porsistema computadorizado de análise (CASA) após a descongelação e pós-teste de termorresistência (TTR), efoi avaliada a integridade de membrana plasmática e acrossomal (MPAI, %). Não foram observadasdiferenças para a motilidade total (p=0,1849) avaliada pós-descongelação (GC=45,1%, G1=51,86% eG2=55,28%) ou pós-TTR (GC=10,32%, G1=11,44% e G2=13,16%), bem como para nenhum outroparâmetro cinético avaliado. Também não foram encontradas diferenças para a MPAI (GC=43,70% ±16,60; G1=36,68 ± 17,40; G2=41,72 ± 14,76; p=0,2523). Conclui-se que a utilização de Red Cushion®não promove nenhum benefício à manutenção da cinética e integridade de espermatozoides caprinossubmetidos a centrifugação previamente ao processo de criopreservação do sêmen.

The aim of this study was to evaluate the efficacy of iodixanol gradient centrifugation (RedCushion®, RC) as a method of protection of goat semen submitted to centrifugation previously tocryopreservation process. Semen were collected from five Anglo Nubian goats (n = five ejaculates/goat).The ejaculates were divided into three experimental groups: GC (Control; conventional centrifugation);G1 (centrifugation using 1ml RC) and G2 (centrifugation using 0.5 mL RC, mixed to sperm pellet beforethe cryopreservation). Samples were centrifuged (CE) at 600xg for 10 minutes, diluted, packed andcryopreserved. Sperm kinetics were evaluated using a computer assisted semen analysis (CASA) afterthawing and after thermoresistance test (TTR), and the integrity of the plasma and acrosomal membranewas evaluated (MPAI, %). No differences were observed for total motility (P =0.1849) assessed afterthawing (GC=45.1%, G1=51.86% and G2=55.28%) or post-TTR (GC=10.32%, G1=11.44% andG2=13.16%), as well as for the other kinetic parameters analyzed. Furthermore, no differences for MPAI(CG =43.70% ± 16.60; G1=36.68 ± 17.40; G2=41.72 ± 14.76; P=0.2523) were found comparing thedifferent groups. In conclusion, Red Cushion® was not able to improve the kinetics and integrity of thegoat semen submitted to the cryopreservation process.

Multidimensional poverty of the ethnic tibetan farm and Herder households in Gansu province, China / Pobreza multidimensional da fazenda tibetana étnica e das famílias de Herder na província de Gansu, China

Ethnic Tibetan farm and herder households (FHH) in Gansu Province, China are stricken with poverty. Solving the poverty problem in this or other poverty pockets across China has special importance for the countrys political stability, ethnic unity, social well-being, and ecological security. This paper calculates the multidimensional poverty situation of ethnic Tibetan farm and herder households of Gansu Province, China by using the Alkire-Foster method. Twelve indicators are included in the multidimensional poverty indicator system. Results showed that 1) in the single indicator measure, the adult family members received at least 9th grade education (x3), the home toilet type (x7), and the labor availability (x2) showed a higher incidence of deprivation, 2) many FHH in the Tibetan areas of the Gansu Province are facing multidimensional poverty but the proportion of extreme poverty is very small, and 3) from the perspective of contribution rate, the adult family members received at least 9th grade education (x3), labor availability (x2), self-health assessment (x1), home toilet type (x7), and school-age children dropout rate (x4) occupied the top five positions as obtained from the equal weight to dimensions (DEW) method.(AU)

As fazendas tibetanas e lares de pastores na província de Gansu, na China, são atingidas pela pobreza. Resolver o problema da pobreza neste ou em outros aglomerados em toda a China tem importância especial para a estabilidade política do país, a unidade étnica, o bem-estar social e a segurança ecológica. Esta pesquisa calcula a situação multidimensional da pobreza das famílias de fazendeiros e pastores tibetanos da Província de Gansu, usando o método Alkire-Foster. Doze indicadores estão incluídos no sistema multidimensional de indicadores de pobreza. Os resultados mostram que: 1) na medida de indicador único, os membros adultos da família receberam o grau de instrução até, pelo menos, a 9ª série (x3); o tipo de banheiro (x7) e a disponibilidade de mão-de-obra (x2) apresentam maior incidência de privação; 2) muitas FHH nas áreas tibetanas da Província de Gansu enfrentam pobreza multidimensional, mas a proporção de pobreza extrema é muito pequena e, 3) do ponto de vista da taxa de contribuição, os membros adultos da família receberam pelo menos a 9ª série (x3), disponibilidade (x2), a análise de auto-avaliação (x1), o tipo de banheiro domiciliar (x7) e a taxa de desistência de crianças em idade escolar (x4) ocuparam as cinco primeiras posições obtidas do método de peso igual a dimensões (DEW).(AU)

Centrifugación en gradiente de densidad: alternativa para sexar espermatozoides caninos? / Density gradient centrifugation: alternative for sexing sperm in dogs? / Centrifugação em gradiente de densidade: alternativa para sexagem espermática em cães?

La evolución de técnicas para la separación del sexo de esperma en los últimos años ha permitido avances significativos, pero todavía no hay método que ha sido utilizado con éxito en perros. Apear de la citometría de flujo ser un método eficaz para el sexado de esperma, en perros puede ser considerado difícil de implementar en vista del alto costo de la aplicación de técnica y la recuperación baja de espermatozoides después de la separación. En contraste, la centrifugación en gradiente de densidad también puede ser utilizado para la separación de espermatozoides en los perros. Esta técnica también se basa en la diferencia de contenido en DNA entre los espermatozoides portadores de los cromosomas X e Y. Separación de esperma puede ser confirmada por diversos métodos tales como citometría de flujo, hibridación in situ fluorescente (FISH), coloración con quinacrina mostaza y PCR. El objetivo de esta revisión es abordar el centrifugacion en gradiente de densidad como alternativa a la separación del sexo de espermatozoides en los perros.(AU)

The technical progress concerning sperm sexing in recent years has enabled significant advances, but still none method was used successfully in dogs. Despite the flow cytometry to be an effective method for sperm sexing, in dogs it can be considered difficult to implement in view of high cost of application of the technique and low sperm recovery after separation. In contrast, density gradient centrifugation can also be used for separating sperm in dogs. This technique is also based on the DNA content difference between sperm with chromosomes X and Y. Sperm separation can be confirmed by various methods such as flow cytometry, fluorescence in situ hybridization (FISH) staining with quinacrine mustard and PCR. The objective of this review to address the density gradient centrifugation as an alternative to sperm sexing in dogs.(AU)

A evolução das técnicas de sexagem espermática nos últimos anos permitiu avanços significativos, mas ainda nenhum método foi empregado com sucesso na espécie canina. Apesar da citometria de fluxo ser um método eficiente para sexagem espermática, nos cães pode ser considerada de difícil aplicação, em vista do alto custo da aplicação da técnica e da baixa recuperação espermática após a separação. Em contrapartida, a centrifugação em gradiente de densidade também pode ser utilizada para separação espermática em cães. Essa técnica também se baseia na diferença do conteúdo de DNA entre os espermatozoides portadores dos cromossomos X e Y. A separação espermática pode ser confirmada por diferentes métodos, como citometria de fluxo, hibridização in situ fluorescente (FISH), coloração com quinacrina mostarda e PCR. Objetivou-se, com esta revisão abordar a centrifugação em gradiente de densidade como uma alternativa a sexagem espermática em cães.(AU)

Centrifugación en gradiente de densidad: alternativa para sexar espermatozoides caninos? / Density gradient centrifugation: alternative for sexing sperm in dogs? / Centrifugação em gradiente de densidade: alternativa para sexagem espermática em cães?

La evolución de técnicas para la separación del sexo de esperma en los últimos años ha permitido avances significativos, pero todavía no hay método que ha sido utilizado con éxito en perros. Apear de la citometría de flujo ser un método eficaz para el sexado de esperma, en perros puede ser considerado difícil de implementar en vista del alto costo de la aplicación de técnica y la recuperación baja de espermatozoides después de la separación. En contraste, la centrifugación en gradiente de densidad también puede ser utilizado para la separación de espermatozoides en los perros. Esta técnica también se basa en la diferencia de contenido en DNA entre los espermatozoides portadores de los cromosomas X e Y. Separación de esperma puede ser confirmada por diversos métodos tales como citometría de flujo, hibridación in situ fluorescente (FISH), coloración con quinacrina mostaza y PCR. El objetivo de esta revisión es abordar el centrifugacion en gradiente de densidad como alternativa a la separación del sexo de espermatozoides en los perros.

The technical progress concerning sperm sexing in recent years has enabled significant advances, but still none method was used successfully in dogs. Despite the flow cytometry to be an effective method for sperm sexing, in dogs it can be considered difficult to implement in view of high cost of application of the technique and low sperm recovery after separation. In contrast, density gradient centrifugation can also be used for separating sperm in dogs. This technique is also based on the DNA content difference between sperm with chromosomes X and Y. Sperm separation can be confirmed by various methods such as flow cytometry, fluorescence in situ hybridization (FISH) staining with quinacrine mustard and PCR. The objective of this review to address the density gradient centrifugation as an alternative to sperm sexing in dogs.

A evolução das técnicas de sexagem espermática nos últimos anos permitiu avanços significativos, mas ainda nenhum método foi empregado com sucesso na espécie canina. Apesar da citometria de fluxo ser um método eficiente para sexagem espermática, nos cães pode ser considerada de difícil aplicação, em vista do alto custo da aplicação da técnica e da baixa recuperação espermática após a separação. Em contrapartida, a centrifugação em gradiente de densidade também pode ser utilizada para separação espermática em cães. Essa técnica também se baseia na diferença do conteúdo de DNA entre os espermatozoides portadores dos cromossomos X e Y. A separação espermática pode ser confirmada por diferentes métodos, como citometria de fluxo, hibridização in situ fluorescente (FISH), coloração com quinacrina mostarda e PCR. Objetivou-se, com esta revisão abordar a centrifugação em gradiente de densidade como uma alternativa a sexagem espermática em cães.

Influence of spatial gradient caused by a large dam on fish assemblage in a subtropical reservoir: Upper Uruguay River / Influência do gradiente espacial sobre a estrutura da ictiofauna em um reservatório subtropical: Alto Rio Uruguai

The objective of this work was to evaluate the influence of different environments formed in the area of influence of a reservoir - lentic, transition and lotic - on the composition and structure of the fish fauna. For this, collections were made with seasonal periodicity in the Itá reservoir, Upper Uruguay River, from 2001 to 2010. The results showed that the spatial gradient plays an important role in the fish assemblage structure. The lotic stretch was the place with the largest values of CPUE, both in number and biomass. As well, species with dependence on certain original fluvial conditions managed to maintain their presence in this stretch. In the lotic area, catching fish that are considered large migratory species coincided with their reproductive periods. The transition stretch presented an intermediate productivity and shared species with the two adjacent sections. However, it had greater similarity with the lentic area. The lentic and transition zones presented the more profound changes, showing an increase of opportunistic species. Within the context of a system of reservoirs in cascade, this study points out the free stretches flowing into the Itá reservoir as being priority areas for the conservation of the Upper Uruguay River region.(AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência dos diferentes ambientes formados na área de influência de um reservatório lêntico, transição e lótico sobre a composição e estrutura da ictiofauna. Para isto, foram realizadas coletas com periodicidade sazonal no reservatório de Itá, Alto Rio Uruguai, no período compreendido entre 2001 e 2010. Os resultados demonstraram que o gradiente espacial desempenha importante papel para determinar a estrutura da assembleia íctica. O trecho lótico foi o local com os maiores valores de CPUE, tanto em número como em biomassa. Além disso, espécies presentes antes do barramento e com dependência de certas condições originalmente encontradas no ambiente fluvial conseguiram manter suas representatividades neste ambiente. Nestes trechos, as capturas de peixes considerados grandes migradores foram coincidentes com seus períodos reprodutivos. O trecho também foi caracterizado por uma maior instabilidade, com capturas que não responderam de forma clara a padrões sazonais. O trecho de transição apresentou a segunda maior produtividade e compartilhou espécies com os dois trechos adjacentes, porém, teve maior similaridade com a zona lêntica. Nas zonas lênticas e de transição as espécies oportunistas se fizeram mais presentes. Para estes dois trechos, pôde-se associar as variações nas capturas a padrões sazonais.(AU)

Influence of spatial gradient caused by a large dam on fish assemblage in a subtropical reservoir: Upper Uruguay River / Influência do gradiente espacial sobre a estrutura da ictiofauna em um reservatório subtropical: Alto Rio Uruguai

The objective of this work was to evaluate the influence of different environments formed in the area of influence of a reservoir - lentic, transition and lotic - on the composition and structure of the fish fauna. For this, collections were made with seasonal periodicity in the Itá reservoir, Upper Uruguay River, from 2001 to 2010. The results showed that the spatial gradient plays an important role in the fish assemblage structure. The lotic stretch was the place with the largest values of CPUE, both in number and biomass. As well, species with dependence on certain original fluvial conditions managed to maintain their presence in this stretch. In the lotic area, catching fish that are considered large migratory species coincided with their reproductive periods. The transition stretch presented an intermediate productivity and shared species with the two adjacent sections. However, it had greater similarity with the lentic area. The lentic and transition zones presented the more profound changes, showing an increase of opportunistic species. Within the context of a system of reservoirs in cascade, this study points out the free stretches flowing into the Itá reservoir as being priority areas for the conservation of the Upper Uruguay River region.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência dos diferentes ambientes formados na área de influência de um reservatório – lêntico, transição e lótico – sobre a composição e estrutura da ictiofauna. Para isto, foram realizadas coletas com periodicidade sazonal no reservatório de Itá, Alto Rio Uruguai, no período compreendido entre 2001 e 2010. Os resultados demonstraram que o gradiente espacial desempenha importante papel para determinar a estrutura da assembleia íctica. O trecho lótico foi o local com os maiores valores de CPUE, tanto em número como em biomassa. Além disso, espécies presentes antes do barramento e com dependência de certas condições originalmente encontradas no ambiente fluvial conseguiram manter suas representatividades neste ambiente. Nestes trechos, as capturas de peixes considerados grandes migradores foram coincidentes com seus períodos reprodutivos. O trecho também foi caracterizado por uma maior instabilidade, com capturas que não responderam de forma clara a padrões sazonais. O trecho de transição apresentou a segunda maior produtividade e compartilhou espécies com os dois trechos adjacentes, porém, teve maior similaridade com a zona lêntica. Nas zonas lênticas e de transição as espécies oportunistas se fizeram mais presentes. Para estes dois trechos, pôde-se associar as variações nas capturas a padrões sazonais.

More than two decades after the introduction of Limnoperna fortunei (Dunker 1857) in La Plata Basin / Duas décadas após a chegada de Limnoperna fortunei (Dunker 1857) na Bacia do Prata

The golden mussel, Limnoperna fortunei, is an Asian freshwater bivalve introduced in South America in the beginning of the 1990s, probably through ballast water releases in La Plata River estuary. It dispersed north through Paraná, Uruguay and Paraguay Rivers. The study evaluated the macroscale (18° to 34° S; 45° to 60° W) distribution of L. fortunei (larval stages) in the main rivers and reservoirs of La Plata Basin. Samplings were performed through 68 µm vertical plankton net hauls. Limnological variables were simultaneously determined. Larvae abundance correlated significantly with oxygen (positively) in summer, with temperature (positively) in winter and with total phosphorus and total nitrogen (both negatively) in winter. We expected densities to decrease towards north (latitudinal gradient) and increase in lentic conditions (reservoirs). Despite maximum density was found near the introduction point (La Plata River) similar value was also observed 2,000 km north (Paraguay River). The first hypothesis was refuted. The second hypothesis was partially accepted. Abundances were consistently higher in summer. Higher trophic conditions and fast flow seem to inhibit population growth. Food resources (chlorophyll a) locally influenced temporal variation. Limnoperna fortunei is widely distributed in La Plata basin, reaching high larval densities superior to 10,000 ind. m-3, in all major sub-basins. The species exhibits a high intrinsic dispersal ability (free planktonic larvae), wide tolerance to environmental factors and dispersion is potentialized by natural dispersion processes (e.g. fauna displacement) and human facilitation (e.g. commercial navigation).(AU)

O mexilhão dourado, Limnoperna fortunei, é um bivalve de água doce originário da Ásia e introduzido na América do Sul no início de 1990, provavelmente através da água de lastro liberada no estuário do rio La Plata. Dispersando-se para o norte através dos rios Paraná, Uruguai e Paraguai. Esse estudo avaliou a distribuição em macroescala (18° a 34° S; 45° a 60° W) de L. fortunei (estágios larvais) nos principais rios e reservatórios da bacia La Plata. Amostragens foram realizadas através de arrastos verticais com rede planctônica de 68 µm. Variáveis limnológicas foram simultaneamente determinadas. A abundância larval correlacionou-se significativamente com oxigênio (positivamente) no verão, com a temperatura (positivamente) no inverno e com fósforo total e nitrogênio total (ambos negativamente) no inverno. Esperávamos um decréscimo da densidade em direção ao norte (gradiente latitudinal) e aumento em condições lênticas (reservatórios). Apesar de a densidade máxima ter sido encontrada próximo do ponto de introdução (La Plata River) valores similares também foram observados 2.000 km ao norte (rio Paraguai). A primeira hipótese foi refutada. A segunda hipótese foi parcialmente aceita. Abundâncias foram consistentemente maiores no verão. Condições eutróficas e fluxo rápido parecem inibir o crescimento populacional. Recurso alimentar (clorofila a) local influenciou a variação temporal. Limnoperna fortunei está amplamente distribuído na bacia de La Plata, alcançando densidades larvais superiores a 10.000 ind. m-3 em todas as principais sub bacias. A espécie possui alta capacidade de dispersão intrínseca (larva planctônica livre), ampla tolerância aos fatores ambientais e os processos de dispersão são potencializados por processos naturais (e.g. deslocamento de fauna) e facilitação humana (e.g. navegação comercial).(AU)

Abiotic factors drives floristic variations of ferns metacommunity in an Atlantic Forest remnant / Fatores abióticos regulam as variações florísticas na metacomunidade de samambaias em um remanescente de Floresta Atlântica

We analyzed floristic variations in ferns metacommunity at the local scale and their relationship with abiotic factors in an Atlantic Forest remnant of northeastern Brazil. Floristic and environmental variations were accessed on ten plots of 10 × 20 m. We performed cluster analyses, based on Bray-Curtis dissimilarity index to establish the floristic relationship. The influence of abiotic factors: luminosity, temperature, relative air humidity and relative soil moisture was evaluated from a redundancy analysis. We found 24 species belonging to 20 genera and 12 families. The ferns flora showed high floristic heterogeneity (>75% for most of the plots associations). The ferns metacommunity was structured along an abiotic gradient modulated by temperature, luminosity, and relative soil moisture.(AU)

Analisamos as variações florísticas na metacomunidade de samambaias em escala local e sua relação com fatores abióticos em um remanescente de Floresta Atlântica no Nordeste do Brasil. Variações florísticas e ambientais foram acessadas a partir de dez parcelas de 10 × 20 m. Realizamos análises de cluster, baseado no índice de similaridade de Bray-Curtis para estabelecer relações florísticas. A influência de fatores abióticos: luminosidade, temperatura, umidade relativa do ar e umidade relativa do solo foram avaliadas a partir da análise de redundância. Encontramos 24 espécies pertencentes a 20 gêneros e 12 famílias. A flora de samambaias exibiu uma elevada heterogeneidade florística (>75% para a maioria das associações entre plots). Observou-se que a metacomunidade de samambaias estava estruturada ao longo de um gradiente abiótico modulado pela temperatura, luminosidade e umidade relativa do solo.(AU)

Evaluación de la técnica de electroforesis en gel con gradiente de temperatura como un método de estudio de la microbiota cecal de pollos de engorde / Evaluation of the temperature gradient gel electrophoresis as study method of the broiler chicken cecal microbiota / Avaliação da técnica de eletroforese em gel com gradiente de temperatura como método de estudo da microbiota cecal de frangos de corte

En la actualidad se requiere la producción de aves de corral acelerado desarrollo y la eficiencia productiva máxima, que sólo puede ser proporcionado tomando como base una homeostasis fisiológica intestinal, que sólo se puede lograr mediante el establecimiento de una microflora saludable. En general, se acordó que la microbiota afecta tanto al sistema inmunológico, local y sistémica, como el uso de la dieta, por lo que el objetivo de este estudio fue evaluar la composición de la microbiota cecal de las aves durante la vida útil de 42 días, utilizando la técnica de electroforesis en gel con gradiente de temperatura (TGGE), aún no explotado por la avicultura. Nuestros resultados demostraron una composición de la microbiota estable durante todo el período de estudio, sin embargo, un refinamiento de los estudios técnicos y de otro puede proporcionar información adicional.(AU)

They are currently required of the poultry of production an accelerated development and maximum productive efficiency, which can only be provided taking as the basis an intestinal physiological homeostasis, which can only be achieved by establishing a healthy microflora. It is generally agreed that the microbiota affects both the immune system, local and systemic, as the use of diet, so the aim of this study was to evaluate the composition of the cecal microbiota of birds over the 42 days of life, using the electrophoresis technique Gel with temperature gradient (TGGE), not yet exploited by poultry. The results demonstrated a stable microbiota composition throughout the study period, however, a refinement of technical and other studies can provide additional information.(AU)

Exigem-se atualmente das aves de produção um desenvolvimento acelerado e máxima eficiência produtiva, o que só pode ser obtido tendo-se como base uma homeostase fisiológica intestinal, a qual só será possível mediante o estabelecimento de uma microbiota saudável. É de consenso geral que a microbiota afeta tanto o sistema imune, local e sistêmico, quanto o aproveitamento da dieta, por isso, o objetivo do presente estudo foi avaliar a composição da microbiota cecal das aves ao longo dos 42 dias de vida, utilizando-se da Técnica de Eletroforese em Gel com Gradiente de Temperatura (TGGE), ainda não explorada pela avicultura. Os resultados demonstraram uma estabilidade da composição da microbiota ao longo do período avaliado, entretanto, um refinamento da técnica e outros estudos podem trazer informações complementares.(AU)

Evaluación de la técnica de electroforesis en gel con gradiente de temperatura como un método de estudio de la microbiota cecal de pollos de engorde / Evaluation of the temperature gradient gel electrophoresis as study method of the broiler chicken cecal microbiota / Avaliação da técnica de eletroforese em gel com gradiente de temperatura como método de estudo da microbiota cecal de frangos de corte

En la actualidad se requiere la producción de aves de corral acelerado desarrollo y la eficiencia productiva máxima, que sólo puede ser proporcionado tomando como base una homeostasis fisiológica intestinal, que sólo se puede lograr mediante el establecimiento de una microflora saludable. En general, se acordó que la microbiota afecta tanto al sistema inmunológico, local y sistémica, como el uso de la dieta, por lo que el objetivo de este estudio fue evaluar la composición de la microbiota cecal de las aves durante la vida útil de 42 días, utilizando la técnica de electroforesis en gel con gradiente de temperatura (TGGE), aún no explotado por la avicultura. Nuestros resultados demostraron una composición de la microbiota estable durante todo el período de estudio, sin embargo, un refinamiento de los estudios técnicos y de otro puede proporcionar información adicional.

They are currently required of the poultry of production an accelerated development and maximum productive efficiency, which can only be provided taking as the basis an intestinal physiological homeostasis, which can only be achieved by establishing a healthy microflora. It is generally agreed that the microbiota affects both the immune system, local and systemic, as the use of diet, so the aim of this study was to evaluate the composition of the cecal microbiota of birds over the 42 days of life, using the electrophoresis technique Gel with temperature gradient (TGGE), not yet exploited by poultry. The results demonstrated a stable microbiota composition throughout the study period, however, a refinement of technical and other studies can provide additional information.

Exigem-se atualmente das aves de produção um desenvolvimento acelerado e máxima eficiência produtiva, o que só pode ser obtido tendo-se como base uma homeostase fisiológica intestinal, a qual só será possível mediante o estabelecimento de uma microbiota saudável. É de consenso geral que a microbiota afeta tanto o sistema imune, local e sistêmico, quanto o aproveitamento da dieta, por isso, o objetivo do presente estudo foi avaliar a composição da microbiota cecal das aves ao longo dos 42 dias de vida, utilizando-se da Técnica de Eletroforese em Gel com Gradiente de Temperatura (TGGE), ainda não explorada pela avicultura. Os resultados demonstraram uma estabilidade da composição da microbiota ao longo do período avaliado, entretanto, um refinamento da técnica e outros estudos podem trazer informações complementares.

Composição e distribuição de conchas de moluscos límnicos no Parque SESC Baía das Pedras, Pantanal de Poconé, Mato Grosso / Composition and distribution of shells of limnic mollusks in SESC Baía das Pedras Park, Pantanal, Poconé, Mato Grosso

A riqueza, abundância e similaridade na composição de moluscos em diferentes corpos d’água no Parque Baía das Pedras, Pantanal de Poconé foi avaliada a partir de registros de conchas de indivíduos mortos durante o período de estiagem.Conchas de sete espécies de moluscos foram coletadas manualmente no perímetro de 19 corpos d’água (cinco poças remanescentes de Corixo, 12 Caixas de Empréstimo e duas Baías). A distância entre os corpos d’água e a área total de cada corpo d’água foram utilizadas como variáveis explicativas para a riqueza e distribuição de moluscos. As matrizes de dissimilaridade na composição e abundância de espécies (Bray Curtis) e de distância geográfica (Distância Euclidiana) entre os pontos demonstraram uma distribuição heterogênea para as espécies. A análise de ordenação da abundância e riqueza de moluscos em função das variáveis ambientais (área, profundidade e temperatura), não indicou presença de gradiente ambiental para as populações estudadas. Contudo, essas variáveis correlacionadas influenciam na riqueza (maior no Corixo) e abundância (r²=0,444 e p =0,028) de espécies nos corpos d’água, o que indica a prevalência de fatores locais na composição e um efeito do tamanho do sistema aquático na mortalidade de moluscos. Conchas são bons testemunhos para explicar a estruturação de comunidades de moluscos em sistemas aquáticos temporários, fornecendo dados sobre a composição e riqueza de espécies, porém, não são eficazes para explicar as relações desta comunidade com o meio abiótico como determinantes de um padrão de distribuição.

The richness, abundance and similarity of the mollusks’ composition in different freshwater bodies at Baía das Pedras Park, Pantanal Poconé were evaluated from the records of empty shells during the dry season. We collected seven species of mollusks at the perimeter of 19 water bodies (five in puddles of temporary streams, 12 loan boxes and two lakes). The distance between the water bodies and the total area of each one were used as explanatory variables for the richness and distribution of mollusks. The matrix of dissimilarity in the composition and abundance of species (Bray Curtis) and geographic distance (Euclidean distance) between points showed a heterogeneous distribution for the species. Ordination analysis of the abundance and richness of mollusks as a function of environmental variables (area, depth and temperature) no indicated the presence of environmental gradient of the populations studied. However, these variables correlated influence on richness (higher in Corixo) and abundance (r² = 0.444 and p = 0.028) of species in water bodies, which indicates the prevalence of local factors in the composition and an effect of the size of the aquatic system in the mortality of mollusks. Shells are good evidence to explain the structure of mollusk communities in temporary aquatic systems, providing data on the composition and species richness, but are not effective to explain the relationships between community and environmental variables as determining of distribution.

Composição e distribuição de conchas de moluscos límnicos no Parque SESC Baía das Pedras, Pantanal de Poconé, Mato Grosso / Composition and distribution of shells of limnic mollusks in SESC Baía das Pedras Park, Pantanal, Poconé, Mato Grosso

A riqueza, abundância e similaridade na composição de moluscos em diferentes corpos dágua no Parque Baía das Pedras, Pantanal de Poconé foi avaliada a partir de registros de conchas de indivíduos mortos durante o período de estiagem.Conchas de sete espécies de moluscos foram coletadas manualmente no perímetro de 19 corpos dágua (cinco poças remanescentes de Corixo, 12 Caixas de Empréstimo e duas Baías). A distância entre os corpos dágua e a área total de cada corpo dágua foram utilizadas como variáveis explicativas para a riqueza e distribuição de moluscos. As matrizes de dissimilaridade na composição e abundância de espécies (Bray Curtis) e de distância geográfica (Distância Euclidiana) entre os pontos demonstraram uma distribuição heterogênea para as espécies. A análise de ordenação da abundância e riqueza de moluscos em função das variáveis ambientais (área, profundidade e temperatura), não indicou presença de gradiente ambiental para as populações estudadas. Contudo, essas variáveis correlacionadas influenciam na riqueza (maior no Corixo) e abundância (r²=0,444 e p =0,028) de espécies nos corpos dágua, o que indica a prevalência de fatores locais na composição e um efeito do tamanho do sistema aquático na mortalidade de moluscos. Conchas são bons testemunhos para explicar a estruturação de comunidades de moluscos em sistemas aquáticos temporários, fornecendo dados sobre a composição e riqueza de espécies, porém, não são eficazes para explicar as relações desta comunidade com o meio abiótico como determinantes de um padrão de distribuição.(AU)

The richness, abundance and similarity of the mollusks composition in different freshwater bodies at Baía das Pedras Park, Pantanal Poconé were evaluated from the records of empty shells during the dry season. We collected seven species of mollusks at the perimeter of 19 water bodies (five in puddles of temporary streams, 12 loan boxes and two lakes). The distance between the water bodies and the total area of each one were used as explanatory variables for the richness and distribution of mollusks. The matrix of dissimilarity in the composition and abundance of species (Bray Curtis) and geographic distance (Euclidean distance) between points showed a heterogeneous distribution for the species. Ordination analysis of the abundance and richness of mollusks as a function of environmental variables (area, depth and temperature) no indicated the presence of environmental gradient of the populations studied. However, these variables correlated influence on richness (higher in Corixo) and abundance (r² = 0.444 and p = 0.028) of species in water bodies, which indicates the prevalence of local factors in the composition and an effect of the size of the aquatic system in the mortality of mollusks. Shells are good evidence to explain the structure of mollusk communities in temporary aquatic systems, providing data on the composition and species richness, but are not effective to explain the relationships between community and environmental variables as determining of distribution.(AU)

In-house validation for multi-residue analysis of tetracycline in cow milk by HPLC with UV detection / Validação intralaboratorial para análise múltipla dos resíduos de tetraciclina em leite bovino por cromatografia líquida de alta eficiência com detecção UV

The indiscriminate use of antibiotics in dairy cattle without complying with the waiting period results in residual contamination, whose effective control in produced milk requires validated methods toensure analytical results. The aim of this study was to optimize and validate the HPLC-UV/VIS method at 365 nm for analyzingthe tetracycline in pasteurized cow milk in accordance with the European Community (2002/657/EC). Spiked milk with analytes (oxytetracycline, tetracycline, doxycycline, and chlortetracycline) was submitted to deproteinization and cleaning by a C18 solid-phase column and analyzed by HPLC using a gradient system with 0.01 mol L?1 oxalic acid-acetonitrile-triethylamine (90:9.9:0.1) and acetonitrile on a reverse phase (C18) column. Accuracy and precision were assessed by adding analytes to levels of 0.5, 1, and 1.5 times the permissible maximum limit allowed in Brazil. The method presented selectivity with a decision limit (CC?) and detection capability (CC?) ranging from 114.2 to 143.7 and from 129.3 to 188.7 µg kg?1, respectively. The recovery of tetracyclines was higher than 82.5% with a precision of 7.1%, demonstrating theefficiency in determining tetracycline residues in cow milk.

O uso indiscriminado de antibiótico em gado leiteiro, sem cumprimento do período de carência, resulta em contaminação residual, cujo controle efetivo no leite produzido requer métodos validados que garantam os resultados analíticos. O estudo visou otimizar e validar o método de CLAE-UV/VIS a 365 nm para análise de tetraciclina em leite bovino pasteurizado em conformidade com a Comunidade Europeia (2002/657/EC). O leite fortificado com analitos (oxitetraciclina, tetraciclina, doxiciclina e clortetraciclina) foi submetido à extração por desproteinização e limpeza por coluna de fase sólida C18 e submetido à análise por CLAE empregando sistema gradiente com 0,01 mol L-1 de ácido oxálico-acetonitrila-trietilamina (90:9,9:0,1) e acetonitrila, em coluna de fase reversa (C18). A exatidão e precisão foram avaliadas adicionando o analitos em níveis de 0,5, 1 e 1,5 vezes o limite máximo permitido no Brasil. O método apresentou seletividade com limite de decisão (CC?) e capacidade de detecção (CC?) variando de 114,2 a 143,7 e 129,3 a 188,7 µg kg-1, respectivamente. A recuperação de tetraciclinas foi superior a 82,5% e a precisão de 7,1%, demonstrando eficiência para a determinação de resíduos de tetraciclina em leite bovino.

In-house validation for multi-residue analysis of tetracycline in cow milk by HPLC with UV detection / Validação intralaboratorial para análise múltipla dos resíduos de tetraciclina em leite bovino por cromatografia líquida de alta eficiência com detecção UV

The indiscriminate use of antibiotics in dairy cattle without complying with the waiting period results in residual contamination, whose effective control in produced milk requires validated methods toensure analytical results. The aim of this study was to optimize and validate the HPLC-UV/VIS method at 365 nm for analyzingthe tetracycline in pasteurized cow milk in accordance with the European Community (2002/657/EC). Spiked milk with analytes (oxytetracycline, tetracycline, doxycycline, and chlortetracycline) was submitted to deproteinization and cleaning by a C18 solid-phase column and analyzed by HPLC using a gradient system with 0.01 mol L?1 oxalic acid-acetonitrile-triethylamine (90:9.9:0.1) and acetonitrile on a reverse phase (C18) column. Accuracy and precision were assessed by adding analytes to levels of 0.5, 1, and 1.5 times the permissible maximum limit allowed in Brazil. The method presented selectivity with a decision limit (CC?) and detection capability (CC?) ranging from 114.2 to 143.7 and from 129.3 to 188.7 µg kg?1, respectively. The recovery of tetracyclines was higher than 82.5% with a precision of 7.1%, demonstrating theefficiency in determining tetracycline residues in cow milk.(AU)

O uso indiscriminado de antibiótico em gado leiteiro, sem cumprimento do período de carência, resulta em contaminação residual, cujo controle efetivo no leite produzido requer métodos validados que garantam os resultados analíticos. O estudo visou otimizar e validar o método de CLAE-UV/VIS a 365 nm para análise de tetraciclina em leite bovino pasteurizado em conformidade com a Comunidade Europeia (2002/657/EC). O leite fortificado com analitos (oxitetraciclina, tetraciclina, doxiciclina e clortetraciclina) foi submetido à extração por desproteinização e limpeza por coluna de fase sólida C18 e submetido à análise por CLAE empregando sistema gradiente com 0,01 mol L-1 de ácido oxálico-acetonitrila-trietilamina (90:9,9:0,1) e acetonitrila, em coluna de fase reversa (C18). A exatidão e precisão foram avaliadas adicionando o analitos em níveis de 0,5, 1 e 1,5 vezes o limite máximo permitido no Brasil. O método apresentou seletividade com limite de decisão (CC?) e capacidade de detecção (CC?) variando de 114,2 a 143,7 e 129,3 a 188,7 µg kg-1, respectivamente. A recuperação de tetraciclinas foi superior a 82,5% e a precisão de 7,1%, demonstrando eficiência para a determinação de resíduos de tetraciclina em leite bovino.(AU)

Avaliação da sinalização de zinco em amostras seminais de touros PRÉ e PÓS Percoll® e correlação com o desenvolvimento embrionário

A produção in vitro de embrião (PIVE) em bovinos consiste na maturação do oócito (MIV), fecundação (FIV) e subsequente cultivo in vitro (CIV). Para o sucesso em cada etapa, os gametas precisam de alguns requisitos. Em relação ao espermatozoide, as células precisam ser capacitadas para a fecundação in vitro para gerar o zigoto. O processo de capacitação espermática deixa a célula pronta para a fecundação por meio de alterações funcionais e estruturais resultando em mudanças de permeabilidade na membrana celular, promovendo o influxo de cálcio. Além do cálcio, estudos recentes descreveram a participação do zinco no processo, podendo ser um novo método para avaliar a capacitação espermática. O espermatozoide precisa ser capacitado para fecundar, no entanto, uma capacitação prematura é prejudicial, pois inviabiliza a célula para sua principal função. A manipulação, congelação/descongelação, preparação de espermatozoides para a PIVE e a seleção de células podem ocasionar esta capacitação prematura. Para a FIV, há a necessidade de se separar os espermatozoides com motilidade, sendo o gradiente de densidade Percoll® o mais utilizado em bovinos. Ainda não está claro se a submissão do sêmen a esse gradiente promove a capacitação completa dos espermatozoides, refletindo negativamente na produção in vitro de embriões, sendo este o objetivo do presente estudo. Para tanto, sêmen de 10 touros Nelore, foi submetido (PÓS) ou não (PRÉ) ao gradiente de densidade Percoll®. A motilidade espermática foi avaliada por análise computadorizada (CASA) e a integridade da membrana plasmática (PI) e o potencial de membrana mitocondrial (JC1) por citometria de fluxo. A capacitação espermática foi avaliada por ensaio de fluorescência de clortetraciclina (CTC) e as assinaturas de zinco utilizando a sonda de fluorescência FluoZinTM -3 AM (FZ3). Por fim foi realizado a produção in vitro de embriões utilizando as amostras seminais submetidas ao gradiente Percoll®. Foi realizado a correlação entre as taxas de clivagem, de blastocisto e de desenvolvimento embrionário com as variáveis de capacitação. O grupo PRÉ (não submetido ao gradiente Percoll®) apresentou maior porcentagem de espermatozoides capacitados, quando comparado ao grupo PÓS, que apresentou maior quantidade de espermatozoides não capacitados. O grupo PRÉ apresentou também, maior porcentagem de espermatozoides reagidos na avaliação da CTC e maior porcentagem de espermatozoides com retilinearidade, quando comparados aos espermatozoides submetidos ao gradiente Percoll®. Foi possível observar uma correlação negativa entre a assinatura de zinco (3 e 4) no espermatozoide, que indica células capacitadas, e a taxa de desenvolvimento embrionário in vitro, demostrando que quanto mais células capacitadas PÓS Percoll®, menos embriões são produzidos. O gradiente de densidade Percoll® remove os espermatozoides já capacitados das amostras, confirmado pela maior presença de células não capacitadas após o gradiente. A capacitação de espermatozoides detectada pela assinatura de ZN3 correlaciona negativamente com a taxa de blastocisto e desenvolvimento embrionário.

Evaluation of zinc signaling in seminal samples from bulls PRE and POST Percoll® and correlation with embryonic development Resumo da tese em inglês: The in-vitro production (IVP) of bovine embryos consists in oocyte maturation, fertilization and consequent in-vitro culture. For the success in each step, gametes need some requisites. Concerning the sperm, cells need to be capacitated for in-vitro fertilization to generate the zygote. Sperm capacitation process makes the cell ready for fertilization by functional and structural alterations resulting in permeability changes on cell membrane, which promotes calcium influx. Nevertheless, recent studies described zinc as a new method to assess sperm capacitation. Sperm needs to be capacitated to fertilize, but a premature capacitation is harmful for the process. The manipulation, freezing/thawing, sperm preparation for IVP and cell sorting may be involved with this premature capacitation. For IVP viable cells must be separated form the extender and dead cells, being Percoll® gradient the most used in bovine. It is not yet clear if the submission of semen to a Percoll® gradient promotes complete sperm capacitation, reflecting on in vitro embryo production, being this the objective of this study. For that, semen of 10 Nelore Bulls, used on in-vitro embryo production were submitted (POST) or not (PRE) to a Percoll® gradient. Sperm motility was evaluated by computer assisted sperm analysis (CASA) and sperm plasmatic membrane integrity (PI), mitochondrial membrane potential (JC1) by Flow Cytometry. Sperm capacitation was evaluated by chlortetracycline fluorescence assay (CTC) and zinc assay with fluorescence probe FluoZinTM -3 AM (FZ3). Finally, in vitro embryo production was performed using seminal samples submitted to the Percoll® gradient. A correlation between cleavage rate, blastocyst rate and the embryo development rate with the sperm capacitation variables was performed. Semen not submitted to Percoll® gradient presented higher percentage of capacitated sperm, higher percentage of reacted spermatozoa in CTC evaluation, and higher percentage of sperm with rectilinearity when compared to sperm submitted to Percoll® gradient. In addition, sperm submitted to Percoll® gradient, had a higher percentage of non-capacitated cells when compared to sperm not submitted to Percoll® gradient. We observed a negative correlation between sperm Zinc signature (3 and 4) that indicate capacitated cells and in-vitro embryo development rate, showing that the more capacitated cells, less embryos are produced. Percoll® gradient removes sperm already capacitated from samples, confirmed by the presence of non-capacitated spermatozoa after submitting sperm to Percoll® gradient. This condition seems to be important for bovine in-vitro fertilization and subsequently success of bovine in-vitro embryo production.