The action of demineralized bovine bone matrix on bone neoformation in rats submitted to experimental alcoholism / Ação da matriz óssea bovina desmineralizada na neoformação óssea em ratos submetidos ao alcoolismo experimental

The objective of this study was to evaluate whether demineralized bovine bone (Gen-ox®) alters bone neoformation in rats submitted to alcoholism. Forty male rats were separated into two groups of 20 rats and distributed as follows: Group E1, which received 25% ethanol and a surgical cavity filled only by a blood clot, and Group E2, which received 25% ethanol and a surgical cavity filled with Gen-ox®. The animals were euthanized at 10, 20, 40 and 60 days after surgery and necropsy was performed. The histomorphological and histometric analyses of the area of connective tissue and bone neoformation showed that the reorganization of the bone marrow and full repair of the surgical cavity in Group E1 occurred more quickly than in Group E2. It was also noted that in the final period the animals in Group E2 showed areas of connective tissue and thick bone trabeculae around the particles of the implant. It can be concluded that the use of Gen-ox® delayed the process of bone repair in alcoholic rats, although it can be used as filling material because it shows osteoconductive activity, as evidenced by bone tissue formation around the graft particles.(AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar se a matriz óssea bovina desmineralizada (Gen-ox®) altera a neoformação óssea em ratos submetidos ao alcoolismo. Foram utilizados 40 ratos machos, separados em dois grupos de 20 animais cada, assim distribuídos: Grupo E1, que recebeu etanol a 25% e cavidade cirúrgica preenchida por coágulo sanguíneo, e Grupo E2, que recebeu etanol a 25% e cavidade cirúrgica preenchida por Gen-ox®. Os animais foram eutanasiados aos 10, 20, 40 e 60 dias após a cirurgia. Os estudos histomorfológico e histométrico da quantidade de tecido conjuntivo presente e a quantidade de tecido ósseo neoformado demostraram que a reorganização da medula óssea e a reparação total da cavidade cirúrgica no Grupo E1 ocorreram em menor espaço de tempo do que no Grupo E2. Observou-se também que, no período final do experimento, os animais do Grupo E2 apresentaram áreas de tecido conjuntivo e trabéculas ósseas espessas ao redor das partículas do material implantado. Concluiu-se que a utilização do Gen-ox® retardou o processo de reparação óssea em ratos alcoolizados, muito embora o Gen-ox® possa ser utilizado como material de preenchimento, pois demonstra atividade osteocondutiva, com a formação de tecido ósseo ao redor das partículas do enxerto.(AU)

Estenose de pelve em felino tratado com anel de matriz óssea desmineralizada (MOD) – relato de caso / Pelvic stenosis in a cat treated with demineralized bone matrix (DBM) ring – case report / Estenosis pélvica en un felino tratado con un anillo de matriz ósea desmineralizada (MOD) – relato de un caso

Enxertos ósseos são usados para tratamento de uniões retardadas, não uniões, osteotomias, fraturas multifragmentares e substituição de perdas ósseas. A matriz óssea desmineralizada (MOD) tem sido usada para tratamento de grandes defeitos ósseos. Foi avaliado o uso da MOD como distrator para correção de estenose pélvica em um felino. Foi atendida no Hovet-INTA uma gata SRD de catorze meses, apresentando diminuição da opacidade óssea, osteopenia, corticais finas e deformação da pelve com estreitamento do canal pélvico. A constipação era constante, e para resolução do problema foi realizada terapêutica clínica sem produzir os efeitos benéficos desejados, sendo indicada a correção da estenose pélvica cirúrgica. Um anel de MOD foi inserido e fixado na sínfise pélvica após a osteotomia. A efetividade foi evidenciada por diminuição da relação entre a linha sacroisquiática e interpúbica. O animal não demonstrou nenhuma reação inflamatória aparente, seja macroscópica ou radiográfica, não apresentando sinais clínicos de constipação.

Bone grafts are used for delayed unions, nonunions, osteotomies, multifragmental fractures and replacement therapy for bone loss. Demineralized bone matrix (DBM) has been used to treat large bone defects. We evaluated the use of DBM as a distractor for the correction of pelvic stenosis in a cat. A 14-month-old kitten was attended at the INTA Veterinary Hospital with decreased bone opacity, osteopenia, thin cortical bone and pelvis deformation with narrowing of the pelvic canal. Because constipation could not be satisfactorily treated with regular clinical approaches, the patient underwent surgical correction. After osteotomy, a ring of DBM was inserted and attached to the pelvic symphysis. Effectiveness could be verified through a decrease in the relationship between the sacroischiatic and interpubic lines. The animal showed no apparent macroscopic or radiographic inflammatory reactions, and had no further signs of constipation.

Los injertos óseos se usan para el tratamiento de uniones retardadas, no unión, osteotomías, fracturas en minuta y sustitución de pérdidas óseas. La matriz ósea desmineralizada (MOD) ha sido utilizada para el tratamiento de grandes pérdidas óseas. Se estudió el uso de la MOD como dilatador óseo en la corrección de un caso de estenosis pélvica en un felino. Una gata mestiza de catorce meses fue atendida en el Hovet-INTA, presentando disminución de la opacidad ósea, osteopenia, corticales finas y deformación de la pelvis con estrechez del canal pélvico. La constipación era constante, por lo que se intentó un tratamiento clínico que no obtuvo los resultados deseados, indicándose entonces la corrección de la estenosis pélvica a través de cirugía. Después de realizar la osteotomía, se insertó y fijó un anillo de MOD a la pelvis del paciente. La efectividad quedó evidente por la disminución de la relación entre la línea sacro-isquiática y la línea inter-púbica. El animal no mostró reacciones inflamatorias aparentes, tanto macroscópicas como radiográficas, sin evidenciar signos clínicos de constipación.

Estenose de pelve em felino tratado com anel de matriz óssea desmineralizada (MOD) relato de caso / Pelvic stenosis in a cat treated with demineralized bone matrix (DBM) ring case report / Estenosis pélvica en un felino tratado con un anillo de matriz ósea desmineralizada (MOD) relato de un caso

Enxertos ósseos são usados para tratamento de uniões retardadas, não uniões, osteotomias, fraturas multifragmentares e substituição de perdas ósseas. A matriz óssea desmineralizada (MOD) tem sido usada para tratamento de grandes defeitos ósseos. Foi avaliado o uso da MOD como distrator para correção de estenose pélvica em um felino. Foi atendida no Hovet-INTA uma gata SRD de catorze meses, apresentando diminuição da opacidade óssea, osteopenia, corticais finas e deformação da pelve com estreitamento do canal pélvico. A constipação era constante, e para resolução do problema foi realizada terapêutica clínica sem produzir os efeitos benéficos desejados, sendo indicada a correção da estenose pélvica cirúrgica. Um anel de MOD foi inserido e fixado na sínfise pélvica após a osteotomia. A efetividade foi evidenciada por diminuição da relação entre a linha sacroisquiática e interpúbica. O animal não demonstrou nenhuma reação inflamatória aparente, seja macroscópica ou radiográfica, não apresentando sinais clínicos de constipação.(AU)

Bone grafts are used for delayed unions, nonunions, osteotomies, multifragmental fractures and replacement therapy for bone loss. Demineralized bone matrix (DBM) has been used to treat large bone defects. We evaluated the use of DBM as a distractor for the correction of pelvic stenosis in a cat. A 14-month-old kitten was attended at the INTA Veterinary Hospital with decreased bone opacity, osteopenia, thin cortical bone and pelvis deformation with narrowing of the pelvic canal. Because constipation could not be satisfactorily treated with regular clinical approaches, the patient underwent surgical correction. After osteotomy, a ring of DBM was inserted and attached to the pelvic symphysis. Effectiveness could be verified through a decrease in the relationship between the sacroischiatic and interpubic lines. The animal showed no apparent macroscopic or radiographic inflammatory reactions, and had no further signs of constipation.(AU)

Los injertos óseos se usan para el tratamiento de uniones retardadas, no unión, osteotomías, fracturas en minuta y sustitución de pérdidas óseas. La matriz ósea desmineralizada (MOD) ha sido utilizada para el tratamiento de grandes pérdidas óseas. Se estudió el uso de la MOD como dilatador óseo en la corrección de un caso de estenosis pélvica en un felino. Una gata mestiza de catorce meses fue atendida en el Hovet-INTA, presentando disminución de la opacidad ósea, osteopenia, corticales finas y deformación de la pelvis con estrechez del canal pélvico. La constipación era constante, por lo que se intentó un tratamiento clínico que no obtuvo los resultados deseados, indicándose entonces la corrección de la estenosis pélvica a través de cirugía. Después de realizar la osteotomía, se insertó y fijó un anillo de MOD a la pelvis del paciente. La efectividad quedó evidente por la disminución de la relación entre la línea sacro-isquiática y la línea inter-púbica. El animal no mostró reacciones inflamatorias aparentes, tanto macroscópicas como radiográficas, sin evidenciar signos clínicos de constipación.(AU)

Study of the formation of ectopic bone and hematopoetic tissues induced by the implantation of demineralized bone matrix in mices / Estudo da formação ectópica de tecidos ósseo e hematopoiético induzida pelo implante de matriz óssea desmineralizada, em camundongos

Seventy-five healthy mice (twenty-five males and fifty females) were allotted to five groups with fifteen mices (five males and ten females). During the experimental period the effect of the intramuscular implantation of demineralized bone matrix was assessed at 7, 14, 21, 28, and 35 days. All the animals received the intramuscular implantation of demineralized bone matrix between the semimembranosus muscle fibers, in both sides. The results showed that the intramuscular implantation of demineralized bone matrix in mice induces the formation of an ectopic bone plaque that is characterized by fibroblastic proliferation (seven days), followed by cartilage (14 days), bone (21 days) and bone marrow (35 days). There was no difference with reference to ectopic bone formation and hematopoetic tissues to attribute to sex factor. KEY-WORDS: Ectopic bone tissue. Ectopic hematopoetic tissue. Demineralized bone matrix. Mice.

No presente trabalho foram utilizados 75 camundongos (25 machos e 50 fêmeas) adultos, sadios, distribuídos em cinco grupos experimentais. Cada grupo foi constituído por 15 animais, sendo 10 fêmeas e cinco machos. Ao longo do protocolo experimental os diferentes grupos experimentais, enumerados de um a cinco, foram sucessivamente avaliados quanto à resposta ao implante intramuscular de matriz óssea desmineralizada aos sete, 14, 21, 28 e 35 dias. Todos os animais receberam implante intramuscular de matriz óssea desmineralizada entre as fibras musculares do músculo semimembranoso, bilateralmente. Os resultados mostraram que o implante intramuscular de matriz óssea desmineralizada induz à formação de placa óssea ectópica, ocorrendo inicialmente uma proliferação fibroblástica (sete dias), seguida pelo aparecimento sucessivo de cartilagem (14 dias), osso (21 dias) e medula óssea (35 dias). Não houve diferença com relação à formação ectópica de tecidos ósseo e hematopoiético, induzida pelo implante de matriz óssea desmineralizada, atribuível ao fator sexo.PALAVRAS-CHAVE: Tecido ósseo ectópico. Tecido hematopoiético ectópico. Matriz óssea desmineralizada. Camundongos.

Assessment of bovine biomaterials containing bone morphogenetic proteins bound to absorbable hydroxyapatite in rabbit segmental bone defects / Avaliação de biomateriais bovinos contendo proteínas morfogenéticas ósseas absorvidas a hidroxiapatita em defeitos ósseos segmentares em coelhos

PURPOSE: To evaluate the osteo-regenerative capacity of two proprietary bone grafting materials, using a segmental defect model in both radial diaphyses of rabbits. METHODS: The right defect was filled with pooled bone morphogenetic proteins (pBMPs) bound to absorbable ultrathin powdered hydroxyapatite (HA) mixed with inorganic and demineralized bone matrix and bone-derived collagen, derived from bovine bone (Group A). The left defect was filled with bovine demineralized bone matrix and pBMPs bound to absorbable ultrathin powdered HA (Group B). In both groups, an absorbable membrane of demineralized bovine cortical was used to retain the biomaterials in the bone defects, and to guide the tissue regeneration. The rabbits were euthanized 30, 90 and 150 days after surgery. Radiographic, tomographic and histologic evaluations were carried out on all specimens. RESULTS: At 30 days, the demineralized cortical bone cover was totally resorbed in both groups. HA was totally resorbed from Group A defects, whereas HA persisted in Group B defects. A prominent foreign body reaction was evident with both products, more pronounced in sections from Group B. At 90 days, the defects in Group B exhibited more new bone than Group A. However, at 150 days after surgery, neither treatment had stimulated complete repair of the defect. CONCLUSION: The partial bone healing of the segmental defect occurred with low or none performance of the biomaterials tested.(AU)

OBJETIVO: Avaliar a capacidade osteo-regenerativa de dois biomateriais utilizando um modelo de defeito segmentar efetuado nas diáfises do rádio de coelhos. MÉTODOS: O defeito direito foi preenchido com pool de proteínas morfogenéticas ósseas (pBMPs) e hidroxiapatita em pó ultrafina absorvível (HA) combinada com matriz óssea inorgânica desmineralizada e colágeno, derivados do osso bovino (Grupo A). O defeito esquerdo foi preenchido com matriz óssea desmineralizada bovina com pBMPs e hidroxiapatita em pó ultrafina absorvível (Grupo B). Em ambos os defeitos utilizou-se membrana reabsorvível de cortical bovina desmineralizada para reter os biomateriais no defeito ósseo e guiar a regeneração tecidual. Os coelhos foram submetidos à eutanásia aos 30, 90 e 150 dias após a cirurgia. Foram efetuados exames radiográficos, tomográficos e histológicos em todos os espécimes. RESULTADOS: Aos 30 dias de pós-cirúrgico, o osso cortical desmineralizado foi totalmente reabsorvido em ambos os grupos. A HA tinha reabsorvido nos defeitos do Grupo A, mas persistiu nos do Grupo B. Uma reação de corpo estranho foi evidente com ambos os produtos, porém mais pronunciada no Grupo B. Aos 90 dias os defeitos do grupo B tinham mais formação óssea que os do Grupo A. Entretanto, aos 150 dias após a cirurgia, nenhum tratamento havia promovido o completo reparo do defeito. CONCLUSÃO: Os biomateriais testados contribuíram pouco ou quase nada para a reconstituição do defeito segmentar.(AU)

Matriz óssea homóloga desmineralizada associada à medula óssea autógena fresca na artrodese vertebral dorsolateral lombar em coelhos / Homologous demineralized bone matrix associated to autologous bone marrow in a rabbit dorsolateral lumbar vertebral fusion

Foi avaliada a matriz óssea homóloga desmineralizada (MOD), associada à medula óssea autógena fresca (MO), na artrodese vertebral dorsolateral lombar em 24 coelhos (grupo 1), depositada sobre os processos transversos de L5-L6 previamente descorticados. Em outros nove coelhos (grupo-controle), foi realizada apenas a descorticação dos processos transversos e nas diferentes avaliações, foi observada insignificante reação periosteal local, sem união óssea. No grupo 1, às cinco semanas de pós-operatório, 87,5 por cento dos animais apresentaram união (artrodese) à palpação, seguido por 75 e 100 por cento às sete e nove semanas, respectivamente. Os índices de artrodese aos RX foram de 50 por cento, 62 por cento e 75 por cento, no mesmo período de avaliação. Histologicamente, às cinco semanas havia características de osteointegração da MOD com os processos transversos descorticados, de onde partiram os vasos sangüíneos que penetraram a matriz, e presença de ilhas de cartilagem no centro do enxerto. Nas semanas seguintes, a ossificação endocondral evoluiu e a MOD foi quase totalmente substituída por tecido ósseo trabecular, formando uma ponte de osso maduro entre e sobre os processos transversos adjacentes, propiciando ao segmento operado maior resistência mecânica em comparação aos segmentos adjacentes. A associação da MOD com a MO mostrou-se uma opção exeqüível e de baixo custo na artrodese vertebral dorsolateral lombar em coelhos.(AU)

It was evaluated the homologous demineralized bone matrix (HDBM), associated with the fresh autogenous bone marrow (FABM), in the vertebral dorsolateral lumbar union in 24 rabbits (group 1), that was placed on the transverse processes of previously decorticated L5-L6 vertebrae. In other nine rabbits (control group), it was just accomplished the decortications of the transverse processes, which showed insignificant local periostial reaction, without bone union after different evaluations. In the group 1, after five weeks of postoperative interval, 87.5% of the animals presented union (arthrodesis), which was observed by palpation, followed by 75 and 100% after seven and nine weeks, respectively. The arthrodesis indexes to X rays were of 50%, 62% and 75%, in the same evaluation period. According to histological analysis, after five weeks, there were characteristics of osteointegration of HDBM with the decorticated transverse processes, from where the blood vessels that penetrated the bone matrix originated, and the presence of cartilage tissue in the center of the graft. In the following weeks, the endocondral ossification continued and HDBM was almost totally substituted by trabecular bone tissue, forming a bridge of ripe bone among and over the adjacent transverse processes, propitiating larger mechanical resistance to the operated segment in comparison to the adjacent segments. The association of HDBM with the FABM showed as a feasible option with low cost in the vertebral dorsolateral lumbar arthrodesis in rabbits.(AU)

STUDY OF THE FORMATION OF ECTOPIC BONE AND HEMATOPOETIC TISSUES INDUCED BY THE IMPLANTATION OF DEMINERALIZED BONE MATRIX IN MICES. / ESTUDO DA FORMAÇÃO ECTÓPICA DE TECIDOS ÓSSEO E HEMATOPOIÉTICO INDUZIDA PELO IMPLANTE DE MATRIZ ÓSSEA DESMINERALIZADA, EM CAMUNDONGOS.

Seventy-five healthy mice (twenty-five males and fifty females) were allotted to five groups with fifteen mices (five males and ten females). During the experimental period the effect of the intramuscular implantation of demineralized bone matrix was assessed at 7, 14, 21, 28, and 35 days. All the animals received the intramuscular implantation of demineralized bone matrix between the semimembranosus muscle fibers, in both sides. The results showed that the intramuscular implantation of demineralized bone matrix in mice induces the formation of an ectopic bone plaque that is characterized by fibroblastic proliferation (seven days), followed by cartilage (14 days), bone (21 days) and bone marrow (35 days). There was no difference with reference to ectopic bone formation and hematopoetic tissues to attribute to sex factor. KEY-WORDS: Ectopic bone tissue. Ectopic hematopoetic tissue. Demineralized bone matrix. Mice.

No presente trabalho foram utilizados 75 camundongos (25 machos e 50 fêmeas) adultos, sadios, distribuídos em cinco grupos experimentais. Cada grupo foi constituído por 15 animais, sendo 10 fêmeas e cinco machos. Ao longo do protocolo experimental os diferentes grupos experimentais, enumerados de um a cinco, foram sucessivamente avaliados quanto à resposta ao implante intramuscular de matriz óssea desmineralizada aos sete, 14, 21, 28 e 35 dias. Todos os animais receberam implante intramuscular de matriz óssea desmineralizada entre as fibras musculares do músculo semimembranoso, bilateralmente. Os resultados mostraram que o implante intramuscular de matriz óssea desmineralizada induz à formação de placa óssea ectópica, ocorrendo inicialmente uma proliferação fibroblástica (sete dias), seguida pelo aparecimento sucessivo de cartilagem (14 dias), osso (21 dias) e medula óssea (35 dias). Não houve diferença com relação à formação ectópica de tecidos ósseo e hematopoiético, induzida pelo implante de matriz óssea desmineralizada, atribuível ao fator sexo.PALAVRAS-CHAVE: Tecido ósseo ectópico. Tecido hematopoiético ectópico. Matriz óssea desmineralizada. Camundongos.

STUDY OF THE FORMATION OF ECTOPIC BONE AND HEMATOPOETIC TISSUES INDUCED BY THE IMPLANTATION OF DEMINERALIZED BONE MATRIX IN MICES. / ESTUDO DA FORMAÇÃO ECTÓPICA DE TECIDOS ÓSSEO E HEMATOPOIÉTICO INDUZIDA PELO IMPLANTE DE MATRIZ ÓSSEA DESMINERALIZADA, EM CAMUNDONGOS.

Seventy-five healthy mice (twenty-five males and fifty females) were allotted to five groups with fifteen mices (five males and ten females). During the experimental period the effect of the intramuscular implantation of demineralized bone matrix was assessed at 7, 14, 21, 28, and 35 days. All the animals received the intramuscular implantation of demineralized bone matrix between the semimembranosus muscle fibers, in both sides. The results showed that the intramuscular implantation of demineralized bone matrix in mice induces the formation of an ectopic bone plaque that is characterized by fibroblastic proliferation (seven days), followed by cartilage (14 days), bone (21 days) and bone marrow (35 days). There was no difference with reference to ectopic bone formation and hematopoetic tissues to attribute to sex factor. KEY-WORDS: Ectopic bone tissue. Ectopic hematopoetic tissue. Demineralized bone matrix. Mice.

No presente trabalho foram utilizados 75 camundongos (25 machos e 50 fêmeas) adultos, sadios, distribuídos em cinco grupos experimentais. Cada grupo foi constituído por 15 animais, sendo 10 fêmeas e cinco machos. Ao longo do protocolo experimental os diferentes grupos experimentais, enumerados de um a cinco, foram sucessivamente avaliados quanto à resposta ao implante intramuscular de matriz óssea desmineralizada aos sete, 14, 21, 28 e 35 dias. Todos os animais receberam implante intramuscular de matriz óssea desmineralizada entre as fibras musculares do músculo semimembranoso, bilateralmente. Os resultados mostraram que o implante intramuscular de matriz óssea desmineralizada induz à formação de placa óssea ectópica, ocorrendo inicialmente uma proliferação fibroblástica (sete dias), seguida pelo aparecimento sucessivo de cartilagem (14 dias), osso (21 dias) e medula óssea (35 dias). Não houve diferença com relação à formação ectópica de tecidos ósseo e hematopoiético, induzida pelo implante de matriz óssea desmineralizada, atribuível ao fator sexo.PALAVRAS-CHAVE: Tecido ósseo ectópico. Tecido hematopoiético ectópico. Matriz óssea desmineralizada. Camundongos.

Potencial osteoindutor da matriz óssea homóloga desmineralizada de coelho

In order to evaluate osteoinduction of the homologous demineralized bone matrix (DBM), 1 cm radial fragments were demineralized in HCL 0.6 N solution for 24 hours, preserved in 70% ethanol solution and implanted in the abdominal musculature of 12 adult rabbits. The animals were sacrificed at 2, 4 and 6 post-operative weeks. After euthanasia, macroscopic, miroscopic and tetracycline fluorescence exams were performed. At four weeks, the implants already presented calcification signs. Microscopically, there was mature bone and medulary canal with hematopoietic cells, at six weeks. There was no evidence of rejection, or fluorescence at two and four weeks; at six weeks, there was difuse and concentric bands fluorescence. DBM in HCL 0.6 N solution and preserved in ethanol 70% solution maintains its osteoinductive property and remains sterile.

O trabalho objetivou avaliar o potencial osteoindutor da matriz óssea homóloga (MOD) desmineralizada em ácido clorídrico. Em doze coelhos adultos, foi realizada uma incisão sagital mediana na pele abdominal, de aproximadamente 5 cm, e a divulsão do tecido subcutâneo, permitindo que três fragmentos de MOD, com 1 cm de comprimento, fossem implantados em "bolsas" confeccionadas cirurgicamente no músculo reto abdominal. A MOD foi preparada a partir de rádios de coelhos sacrificados por superdosagem anestésica e estocada em etanol 70%, em temperatura ambiente, por, no mínimo, 15 dias, até o momento do uso. Para permitir análise prévia às enxertias, fragmentos de MOD preservados em etanol 70% e fixados em formol a 10% tamponado foram submetidos à rotina histológica. Quatro coelhos foram sacrificados a cada duas, quatro e seis semanas de pós-operatório. A rotina histológica foi realizada, também, em dois dos enxertos implantados em cada animal, em cortes longitudinais e transversais, corados por H&E e no fragmento restante a deposição de osso novo foi evidenciada pela fluorescência da tetraciclina administrada aos animais. Os resultados da pesquisa permitiram concluir que o ácido clorídrico 0,6 N promoveu desmineralização eficaz e manteve o potencial indutor da matriz óssea; a imersão da matriz óssea desmineralizada em etanol 70% propiciou a esterilização dos enxertos homólogos e não inibiu o potencial osteoindutor; e também que, a MOD, devido a fatores indutores inerentes que atuam sobre as células dos tecidos adjacentes, promoveu quimiotaxia, mitose e diferenciação celular.

Potencial osteoindutor da matriz óssea homóloga desmineralizada de coelho

In order to evaluate osteoinduction of the homologous demineralized bone matrix (DBM), 1 cm radial fragments were demineralized in HCL 0.6 N solution for 24 hours, preserved in 70% ethanol solution and implanted in the abdominal musculature of 12 adult rabbits. The animals were sacrificed at 2, 4 and 6 post-operative weeks. After euthanasia, macroscopic, miroscopic and tetracycline fluorescence exams were performed. At four weeks, the implants already presented calcification signs. Microscopically, there was mature bone and medulary canal with hematopoietic cells, at six weeks. There was no evidence of rejection, or fluorescence at two and four weeks; at six weeks, there was difuse and concentric bands fluorescence. DBM in HCL 0.6 N solution and preserved in ethanol 70% solution maintains its osteoinductive property and remains sterile.

O trabalho objetivou avaliar o potencial osteoindutor da matriz óssea homóloga (MOD) desmineralizada em ácido clorídrico. Em doze coelhos adultos, foi realizada uma incisão sagital mediana na pele abdominal, de aproximadamente 5 cm, e a divulsão do tecido subcutâneo, permitindo que três fragmentos de MOD, com 1 cm de comprimento, fossem implantados em "bolsas" confeccionadas cirurgicamente no músculo reto abdominal. A MOD foi preparada a partir de rádios de coelhos sacrificados por superdosagem anestésica e estocada em etanol 70%, em temperatura ambiente, por, no mínimo, 15 dias, até o momento do uso. Para permitir análise prévia às enxertias, fragmentos de MOD preservados em etanol 70% e fixados em formol a 10% tamponado foram submetidos à rotina histológica. Quatro coelhos foram sacrificados a cada duas, quatro e seis semanas de pós-operatório. A rotina histológica foi realizada, também, em dois dos enxertos implantados em cada animal, em cortes longitudinais e transversais, corados por H&E e no fragmento restante a deposição de osso novo foi evidenciada pela fluorescência da tetraciclina administrada aos animais. Os resultados da pesquisa permitiram concluir que o ácido clorídrico 0,6 N promoveu desmineralização eficaz e manteve o potencial indutor da matriz óssea; a imersão da matriz óssea desmineralizada em etanol 70% propiciou a esterilização dos enxertos homólogos e não inibiu o potencial osteoindutor; e também que, a MOD, devido a fatores indutores inerentes que atuam sobre as células dos tecidos adjacentes, promoveu quimiotaxia, mitose e diferenciação celular.

Matriz óssea homóloga desmineralizada na preparação de falhas ósseas segmentares produzidas no rádio de coelhos

In order to evaluate osteoinduction and osteoconduction of the homologous demineralized bone matrix (DBM), processed in HCl 0.6 N solution for 24 hours and preserved in 70% ethanol solution, radial fragments were implanted in radius of adults rabbits. The animals were sacrificed at 3, 6, 9 and 12 post-operative weeks and the control group was sacrificed in 12 post-operative weeks. Radiographic exams of the operated radii were performed immediately after surgery and 3, 6, 9 and 12 post-operative weeks. After euthanasia, computed tomography, macroscopic, microscopic and tetracycline fluorescence exams were performed. DBM preserved its osteoinductive property and remains sterile. The empty spaces are favorable to osteoconduction and its growth factors induce osseous formation.

No presente trabalho, foram avaliados os potenciais osteoindutor e osteocondutor da matriz óssea homóloga desmineralizada (MOD) em ácido clorídrico 0,6 N e conservada em etanol 70% e sua utilização no preenchimento de falhas osteoperiosteais induzidas em rádio de coelhos. O rádio operado de todos os animais foi radiografado imediatamente após a cirurgia e na 3ª,6ª, 9ª e 12ª semanas após. No grupo tratado, sete animais foram sacrificados a cada três semanas, sendo realizadas tomografia computadorizada e avaliações macro e microscópica e da fluorescência óssea à tetraciclina. Os animais do grupo controle foram sacrificados na 12ª semana de pós-operatório. Foi constatado que a matriz acelerou o processo de formação óssea, devido a fatores indutores inerentes que atuaram sobre as células dos tecidos adjacentes e que os canais vasculares, as lacunas e o canal medular vazios da MOD, serviram de arcabouço para a penetração celular, determinando osteocondução.

Matriz óssea homóloga desmineralizada na preparação de falhas ósseas segmentares produzidas no rádio de coelhos

In order to evaluate osteoinduction and osteoconduction of the homologous demineralized bone matrix (DBM), processed in HCl 0.6 N solution for 24 hours and preserved in 70% ethanol solution, radial fragments were implanted in radius of adults rabbits. The animals were sacrificed at 3, 6, 9 and 12 post-operative weeks and the control group was sacrificed in 12 post-operative weeks. Radiographic exams of the operated radii were performed immediately after surgery and 3, 6, 9 and 12 post-operative weeks. After euthanasia, computed tomography, macroscopic, microscopic and tetracycline fluorescence exams were performed. DBM preserved its osteoinductive property and remains sterile. The empty spaces are favorable to osteoconduction and its growth factors induce osseous formation.

No presente trabalho, foram avaliados os potenciais osteoindutor e osteocondutor da matriz óssea homóloga desmineralizada (MOD) em ácido clorídrico 0,6 N e conservada em etanol 70% e sua utilização no preenchimento de falhas osteoperiosteais induzidas em rádio de coelhos. O rádio operado de todos os animais foi radiografado imediatamente após a cirurgia e na 3ª,6ª, 9ª e 12ª semanas após. No grupo tratado, sete animais foram sacrificados a cada três semanas, sendo realizadas tomografia computadorizada e avaliações macro e microscópica e da fluorescência óssea à tetraciclina. Os animais do grupo controle foram sacrificados na 12ª semana de pós-operatório. Foi constatado que a matriz acelerou o processo de formação óssea, devido a fatores indutores inerentes que atuaram sobre as células dos tecidos adjacentes e que os canais vasculares, as lacunas e o canal medular vazios da MOD, serviram de arcabouço para a penetração celular, determinando osteocondução.

Induction of osteogenesis by demineralized homologous and xenograft bone matrix

The osteogenesis induction by demineralized bone matrix grafts remains as a challenge in the reconstructions of the mandible through homologous and xenografts or in implants in abdominal muscle. PURPOSE: Observed the behaviour of implants of demineralized bone matrix at the mandible (right side with homologous graft and left side with xenograft of pig). METHODS: Experimental study with homologous and heterologous implants of demineralized bone matrix at the mandible and in ectopic muscle at the Center of Experimental Surgery of Heliopolis Hospital, Hosphel, São Paulo, Brazil. In 6 white New Zeland rabbits, 46 grafts were performed being 23 with homologous (rabbit) and 23 with xenograft (pig). 12 homologous implants (6 at the right side of the mandible and 6 at abdominal muscle of the rabbit) and 12 heterologous implants of pigs (6 at the left side of the mandible and 6 at abdominal muscle rabbit) were performed with demineralized bone matrix. RESULTS: Osteogenesis was assessed through histologic features after 30 and 60 days. After 1 rabbit dead, osteogenesis (mandible) were detected in 9 of 11 (82%) rabbits that received homologous matrix, in spite of heterologous implants showed osteogenesis in 6 out of 11 (54%) (p=0,18). The abdominal muscle showed induced osteogenesis in 3 out of 11(27%) animals with homologous and 0% with heterologous implants (p=0,10). CONCLUSIONS: Osteogenesis induction through homologous grafts in rabbit mandible and abdominal muscle were more effective than xenografts.

A indução da osteogênese com matriz de enxerto ósseo desmineralizado continua a ser um desafio na reconstrução mandibular com enxerto homólogo e heterólogo ou em implantes em músculo abdominal. OBJETIVO: Observar o comportamento dos implantes desmineralizados de matriz óssea na mandíbula (lado direito com enxerto homólogo e esquerdo com heterólogo de porco) e em músculo abdominal. MÉTODOS: Experimental com enxerto homólogo e heterólogo de matriz óssea desmineralizada na mandíbula e em músculo ectópico no Centro de Cirurgia Experimental do Hospital Heliópolis, Hosphel, São Paulo, Brasil. 6 coelhos brancos da raça Nova Zelândia, 46 procedimentos cirúrgicos sendo 23 com enxerto homólogo (coelho) e 23 com heterólogo (porco). 12 implantes homólogos (6 no lado direito da mandíbula e 6 na musculatura abdominal) foram feitos com matriz óssea desmineralizada. RESULTADOS: Osteogênese avaliada através de histologia 30 e 60 dias após a cirurgia. Excluído 1 coelho morto, a osteogênese mandibular foi detectada em 9/11 (82%) coelhos que receberam matriz homóloga e 6/11 (54%) com heteróloga (p=0,18). No músculo abdominal, houve indução da osteogênese em 31/1 (27%) nos enxertos homólogos e 0% nos heterólogos (p>0,20). CONCLUSÕES: A indução da osteogênese através de implantes homólogos em mandíbula e musculatura abdominal de coelho foi mais eficiente que através dos heterólogos.

Ectopic osteomyelogenous response to demineralized bone matrix implant in busulphan treated mice / Resposta osteomielogênica ectópica ao implante de matriz óssea desmineralizada em camundongos tratados com bussulfano

Swiss female mice (25-30 g; n = 100) were four times treated i.p. with busulphan (20 mg/kg), with 15 day interval between doses. Blood was collected by retroorbital puncture from treated and non treated control animals (n = 15) for white blood cell count, hematocrit and hemoglobin evaluation, before treatment and on 30th, 60th, 90th days followingthe first dose of the drug. On day 60 both treated (60 survived animals) and non treated (n = 15) animals received intermuscular implant of demineralized bone matrix (DBM-10 mg). All of them were killed 30 days after implant (90th day post busulphan initial dose) for histological analysis of esternal bone marrow (EBM) and ectopic osteomyelogenousresponse to the DBM implant. Thirty days after the first dose of busulphan, leukopenia and drop in the granulocyte, lymphocyte and monocyte numbers were observed. The hematocrit and hemoglobin rate decreased on 60th day. Histologycal analysis of the EBM of the test group showed hypocellularity, sinusoid capilar distention and reduction inmegakaryocyte numbers. Control animals showed 100% positive response to DBM implant with the formation of metaplastic plaques made of bone trabeculae forming cavities filled with haematopoietic cells. 46.7% of the test animals had positive osteomyelogenous response, similar to that of the control groups, except for hypocellularity and more adipocytes; 25% displ

Camundongos Swiss, fêmeas, (25-30 g; n = 100) receberam 4 injeções de bussulfano (20 mg/kg, ip) a intervalos de 15 dias (n = 100). Antes do tratamento e após 30, 60 e 90 dias, os animais deste e de um grupo controle (n = 15) foram avaliados quanto ao leucograma, taxa de hemoglobina e hematrócito por meio do sangue colhido por punção retroorbital. Sessenta dias após o início do tratamento, 60 animais sobreviventes do grupo tratado e 15 animais do grupo controle receberam implantes intermuseulares de matriz óssea desmineralizada (MOD-10 mg). No 90s dia (30 dias após o implante) foram sacrificados para exame histológico da medula óssea esternal (MOE) e da resposta osteomielogênica ao implante de MOD. Trinta dias após o início do tratamento observou-se leucopenia, com diminuição do número de granulócitos, linfócitos e monócitos nos animais que receberam bussulfano. O hematócrito e a taxa de hemoglobina apresentaram-se diminuídos no 609 dia. O exame histológico da MOE do grupo tratado revelou hipocelularidade, dilatação dos capilares sinusóides e redução do número de megacariócitos (50%). Os animais controle apresentaram 100% de resposta positiva ao implante de MOD, havendo formação de placas metaplásicas compostas por trabéculas ósseas contendo cavitações preenchidas por células hematopoiéticas. Em 46,7% dos animais tratados observou-se resposta osteomielogênica semelhante à do gru

Ectopic osteomyelogenous response to demineralized bone matrix implant in busulphan treated mice / Resposta osteomielogênica ectópica ao implante de matriz óssea desmineralizada em camundongos tratados com bussulfano

Swiss female mice (25-30 g; n = 100) were four times treated i.p. with busulphan (20 mg/kg), with 15 day interval between doses. Blood was collected by retroorbital puncture from treated and non treated control animals (n = 15) for white blood cell count, hematocrit and hemoglobin evaluation, before treatment and on 30th, 60th, 90th days followingthe first dose of the drug. On day 60 both treated (60 survived animals) and non treated (n = 15) animals received intermuscular implant of demineralized bone matrix (DBM-10 mg). All of them were killed 30 days after implant (90th day post busulphan initial dose) for histological analysis of esternal bone marrow (EBM) and ectopic osteomyelogenousresponse to the DBM implant. Thirty days after the first dose of busulphan, leukopenia and drop in the granulocyte, lymphocyte and monocyte numbers were observed. The hematocrit and hemoglobin rate decreased on 60th day. Histologycal analysis of the EBM of the test group showed hypocellularity, sinusoid capilar distention and reduction inmegakaryocyte numbers. Control animals showed 100% positive response to DBM implant with the formation of metaplastic plaques made of bone trabeculae forming cavities filled with haematopoietic cells. 46.7% of the test animals had positive osteomyelogenous response, similar to that of the control groups, except for hypocellularity and more adipocytes; 25% displ

Camundongos Swiss, fêmeas, (25-30 g; n = 100) receberam 4 injeções de bussulfano (20 mg/kg, ip) a intervalos de 15 dias (n = 100). Antes do tratamento e após 30, 60 e 90 dias, os animais deste e de um grupo controle (n = 15) foram avaliados quanto ao leucograma, taxa de hemoglobina e hematrócito por meio do sangue colhido por punção retroorbital. Sessenta dias após o início do tratamento, 60 animais sobreviventes do grupo tratado e 15 animais do grupo controle receberam implantes intermuseulares de matriz óssea desmineralizada (MOD-10 mg). No 90s dia (30 dias após o implante) foram sacrificados para exame histológico da medula óssea esternal (MOE) e da resposta osteomielogênica ao implante de MOD. Trinta dias após o início do tratamento observou-se leucopenia, com diminuição do número de granulócitos, linfócitos e monócitos nos animais que receberam bussulfano. O hematócrito e a taxa de hemoglobina apresentaram-se diminuídos no 609 dia. O exame histológico da MOE do grupo tratado revelou hipocelularidade, dilatação dos capilares sinusóides e redução do número de megacariócitos (50%). Os animais controle apresentaram 100% de resposta positiva ao implante de MOD, havendo formação de placas metaplásicas compostas por trabéculas ósseas contendo cavitações preenchidas por células hematopoiéticas. Em 46,7% dos animais tratados observou-se resposta osteomielogênica semelhante à do gru

Biomateriais como arcabouços para sustentação de células-tronco mesenquimais

O trabalho teve por objetivos avaliar a habilidade in vitro e in vivo de quatro diferentes biomateriais como arcabouço para células-tronco mesenquimais (CTMs). Para tanto, as CTMs da medula óssea de cães foram isoladas, caracterizadas e cultivadas por sete dias juntamente aos seguintes biomateriais: composto de colágeno bovino tipo I fibrilar contendo grânulos de hidroxiapatita e -fosfato-tricálcico; hidroxiapatita purificada; matriz óssea desmineralizada; e poliuretana de mamona. Foram avaliadas a capacidade de proliferação celular e a diferenciação para a linhagem osteogênica, além da adesão celular à superfície dos biomateriais. Adicionalmente, os biomateriais isoladamente e também adicionados de CTMs foram implantados no tecido subcutâneo de 20 camundongos CB-17-Prkdc>scid/PasUnib e removidos após 15 dias para a análise histológica. In vitro, todos os biomateriais permitiram o crescimento das CTMs, que se aderiram e multiplicaram-se. As CTMs sofreram diferenciação para a linhagem osteogênica na presença de hidroxiapatita e iniciaram a deposição de matriz na presença de poliuretana de mamona e do biomaterial composto de colágeno bovino tipo I fibrilar contendo grânulos de hidroxiapatita e -fosfato-tricálcico. In vivo, todos os biomateriais testados mostraram-se biocompatíveis e induziram discreta resposta inflamatória. A osteogênese foi mais intensa na presença dos grânulos de hidroxiapatita, seguida pela poliuretana de mamona e matriz óssea desmineralizada, sendo menor na presença do composto de colágeno bovino tipo I fibrilar contendo grânulos de hidroxiapatita e -fosfato-tricálcico. Foi possível concluir que os biomateriais testados são passíveis de serem utilizados como arcabouço para células-tronco mesenquimais visando à terapia celular na regeneração de tecido ósseo

The aim of this study was to evaluate the in vitro and in vivo ability of four biomaterials ? highly purified fibrillar type I bovine collagen with hydroxyapatite and ß-tricalcium phosphate phosphate granules, purified hydroxyapatite, demineralized bone matrix, castor oil based polyurethane ? as mesenchymal stem cells (MSC) scaffold. MSC were isolated from canine bone marrow, characterized and cultivated for seven days with the biomaterials. Cell proliferation, adhesion to the biomaterials? surface and differentiation to osteogenic lineage were evaluated. Additionally, the biomaterials isolated and combined with MSC were subcutaneously transplanted to 20 CB-17- Prkdc>scid/PasUnib mice and harvested after 15 days for histological analysis. The biomaterials in vitro allowed the cells growth, attachment and spreading in its surfaces. The cells differentiated to osteogenic lineage in the presence of hydroxyapatite, and started matrix deposition in the presence of the castor oil based polyurethane and collagen with hydroxyapatite and ß-tricalcium phosphate granules. In vivo, all biomaterials were biocompatible and induced low inflammatory response. Osteogenesis was pronounced with hydroxyapatite granules, followed by the polyurethane and demineralized bone matrix, but discrete in the presence of the collagen with hydroxyapatite and ß-tricalcium phosphate granules. It was possible to conclude that the tested biomaterials may be used as mesenchymal stem cells scaffold for a cell-based reconstructive therapy in orthopedics

Estudo da formação ectópica de tecidos ósseo e hematopoiético induzida pelo implante de matriz óssea desmineralizada, em camundongos

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