Pathological, molecular and phylogenic study of fowlpox virus in domesticated chickens of Tikrit City, Iraq / Estudo patológico, molecular e filogenético do vírus da varíola aviária em frangos de corte domesticados da cidade de Tikrit, Iraque

Fowlpox virus (FPV) is one of the viruses affecting chickens worldwide, causing pathological and economic losses in the poultry industry. Viral lesions are easily recognizable by the eye and usually appear in the featherless areas, especially the head. Moreover, the virus could lead to blindness and mortality in some cases. This study diagnosed the suspected fowlpox cases, identified and classified the causative agent. We also analyzed the differences and similarities of closely related viruses at the neighboring and regional countries. Fifty samples were collected from three locations of Tikrit city from the domesticated chickens, which showed cutaneous lesions. Virus DNA was extracted directly from tissue samples before the nested PCR technique was performed. The virion core protein (P4b) gene is partially sequenced and analyzed with routine histological sectioning. Results showed that the virus causes pock lesions of dermal hyperplasia and hyperkeratosis. Hyperplasia and congestion of the chorioallantoic membrane were also recorded. The study also showed that the DNA of FPV could be extracted directly from animal tissue without further purification. The sequence analysis showed that the FPV was confirmed in all samples clustered in clade A identical with Iranian and Egyptian isolates. In conclusion, this study approved that the virus belongs to the classical dermal type of poxviruses and the short genetic distances between viruses related to closely neighboring countries. We also concluded that the conservative P4b gene included mutation sites that make this gene practical for diagnosing the virus and phylogenetic analysis.(AU)

O vírus da varíola aviária (VVA) é um dos vírus que acometem os frangos de corte em todo o mundo, causando perdas patológicas e econômicas na indústria aviária. As lesões causadas pelo vírus são facilmente reconhecidas pela observação visual e usualmente aparecem nas áreas do corpo das aves livres de penas, especialmente na cabeça. Além disso, em alguns casos a doença pode provocar a cegueira e a mortalidade de animais acometidos. O presente trabalho foi delineado para diagnosticar casos suspeitos de varíola aviária, identificar o agente causal e classificá-lo. Adicionalmente foram analisadas diferenças e similaridades com outros vírus estreitamente relacionados em localidades vizinhas e regionais. Cinquenta amostras foram colhidas em três localidades da cidade de Tikrit de frangos de corte, domesticados, que apresentavam lesões cutâneas. O DNA do vírus foi extraído diretamente das amostras de tecidos antes que a técnica de PCR fosse realizada. As proteínas do core do vírus, gene (P4b), foram parcialmente sequenciadas de analisadas em secções da rotina histológica. Os resultados obtidos revelaram que o vírus causa lesões variólicas com hiperplasia dermal e hiperqueratose. A hiperplasia e a congestão da membrana corioalantóica também foram registradas. O estudo também revelou que o DNA do VVA pode ser extraído diretamente de tecidos animais sem a realização de uma pré-purificação. A análise sequencial revelou que o VVA foi confirmado em todas as amostras agrupando-se em uma classe A, idêntica com isolados iranianos e egípcios. A conclusão obtida foi que o presente trabalho confirmou que o vírus pertence ao tipo dérmico clássico dos poxvirus e que as curtas distâncias genéticas entre os vírus relacionados são encontrados em países vizinhos. Também foi concluído que o gene conservador P4b inclui pontos de mutação que o tornam um gene prático para diagnosticar o vírus em análises filogenéticas.(AU)

Pathological, molecular and phylogenic study of fowlpox virus in domesticated chickens of Tikrit City, Iraq / Estudo patológico, molecular e filogenético do vírus da varíola aviária em frangos de corte domesticados da cidade de Tikrit, Iraque

Fowlpox virus (FPV) is one of the viruses affecting chickens worldwide, causing pathological and economic losses in the poultry industry. Viral lesions are easily recognizable by the eye and usually appear in the featherless areas, especially the head. Moreover, the virus could lead to blindness and mortality in some cases. This study diagnosed the suspected fowlpox cases, identified and classified the causative agent. We also analyzed the differences and similarities of closely related viruses at the neighboring and regional countries. Fifty samples were collected from three locations of Tikrit city from the domesticated chickens, which showed cutaneous lesions. Virus DNA was extracted directly from tissue samples before the nested PCR technique was performed. The virion core protein (P4b) gene is partially sequenced and analyzed with routine histological sectioning. Results showed that the virus causes pock lesions of dermal hyperplasia and hyperkeratosis. Hyperplasia and congestion of the chorioallantoic membrane were also recorded. The study also showed that the DNA of FPV could be extracted directly from animal tissue without further purification. The sequence analysis showed that the FPV was confirmed in all samples clustered in clade A identical with Iranian and Egyptian isolates. In conclusion, this study approved that the virus belongs to the classical dermal type of poxviruses and the short genetic distances between viruses related to closely neighboring countries. We also concluded that the conservative P4b gene included mutation sites that make this gene practical for diagnosing the virus and phylogenetic analysis.(AU)

O vírus da varíola aviária (VVA) é um dos vírus que acometem os frangos de corte em todo o mundo, causando perdas patológicas e econômicas na indústria aviária. As lesões causadas pelo vírus são facilmente reconhecidas pela observação visual e usualmente aparecem nas áreas do corpo das aves livres de penas, especialmente na cabeça. Além disso, em alguns casos a doença pode provocar a cegueira e a mortalidade de animais acometidos. O presente trabalho foi delineado para diagnosticar casos suspeitos de varíola aviária, identificar o agente causal e classificá-lo. Adicionalmente foram analisadas diferenças e similaridades com outros vírus estreitamente relacionados em localidades vizinhas e regionais. Cinquenta amostras foram colhidas em três localidades da cidade de Tikrit de frangos de corte, domesticados, que apresentavam lesões cutâneas. O DNA do vírus foi extraído diretamente das amostras de tecidos antes que a técnica de PCR fosse realizada. As proteínas do core do vírus, gene (P4b), foram parcialmente sequenciadas de analisadas em secções da rotina histológica. Os resultados obtidos revelaram que o vírus causa lesões variólicas com hiperplasia dermal e hiperqueratose. A hiperplasia e a congestão da membrana corioalantóica também foram registradas. O estudo também revelou que o DNA do VVA pode ser extraído diretamente de tecidos animais sem a realização de uma pré-purificação. A análise sequencial revelou que o VVA foi confirmado em todas as amostras agrupando-se em uma classe A, idêntica com isolados iranianos e egípcios. A conclusão obtida foi que o presente trabalho confirmou que o vírus pertence ao tipo dérmico clássico dos poxvirus e que as curtas distâncias genéticas entre os vírus relacionados são encontrados em países vizinhos. Também foi concluído que o gene conservador P4b inclui pontos de mutação que o tornam um gene prático para diagnosticar o vírus em análises filogenéticas.(AU)

Tissue damage and embryonic malformation induced by aqueous extract of Pteridium aquilinum on chorioallantoic membrane of chick embryo (CAM) / Danos teciduais e mal formações morfológicas induzidas pelo extrato aquoso de Pteridium aquilinum sobre a membrana corioalantóica (CAM) e o embrião de galinha

The aim of this study was evaluate the effects of Bracken fern (BF) (Pteridium aquilinum (L.) Kuhn.) on biological systems. When consumed by animals can cause acute intoxication, hematuria, biochemistry alterations and cancer. To humans the toxicity is associated with its intake on contaminated ground water or milk and inhalation of its spores. In order to check the BF aqueous extract (AEB) deleterious effects on animals blood vessels system, chick embryo chorioallantoic membrane (CAM) was used. It were applying on CAM 0.1, 0.5, 1, 5, 10 e 15 µg/mL of AEB and saline as control. The angiogenesis was analyzed and the vascular density index (VDI) calculated. The CAM samples were prepared and stained with H&E to evaluation of microvessels, Masson’s trichrome to characterize collagen and fibrin deposition and Picro-sirius used to evaluate collagen using polarized light. Also the morphological aspects of embryos were analysed. We observe on the results of neovascularization that AEB did not change significantly the number of vessels/mm², however, membranes treated with AEB (5 or 10 µg/ mL) exhibit opacity and tissue fibrosis, both signs of inflammation. Histological analysis with Masson’s trichrome and picro-sirius on tissues exposed to AEB respectively has shown increased collagen fibers and presence of fibrilar collagen. The embryos exposed to concentrations of 5 or 10 μg/mL AEB, showed changes as poor face formation and poor closing of abdominal wall. The highest concentration of AEB (15 μg/mL) was lethal to embryos. Although significant effects on the CAM’s vasculature has not observed, tissue aggression was detected, a desmoplasia (an extensive inflammatory signal triggered by tissue injury), changes caused on embryos as well as the presence of toxic substances in the AEB show us an important and deleterious pathway of this bracken fern extract on its intoxicants effects on humans and animals, and even cancer or the death of animals.

O foco principal desse estudo foi avaliar os efeitos do extrato aquoso de Samambaia (EAS) (Pteridium aquilinum (L.) Kuhn) sobre sistemas biológicos. A ingestão das folhas de Samambaia pode provocar intoxicação aguda, hematúria, alterações bioquímicas e câncer se consumida por animais. Em humanos também pode provocar intoxicação ao ser ingerida com água ou leite contaminados e pela inalação de seus esporos. Considerando os efeitos danosos provocados pelo consumo dessa planta esse estudo analisou a ação do EAS sobre um sistema de vasos sanguíneos, a membrana corioalantóide (MCA) de embrião de galinha. Sobre a MCA foram aplicados 0,1, 0,5, 1, 5, 10 e 15 µg/mL de EAS, salina como controle. A angiogênese foi analisada e o índice de densidade vascular (IDV) calculado. Amostras da CAM foram coradas com H&E para avaliação de microvasos, Tricrômico de Masson para caracterização de colágeno e deposição de fibrina e Picro-sirius para analisar o colágeno através de luz polarizada. Os aspectos morfológicos dos embriões também foram analisados. Os resultados da neovascularização mostraram que não houve mudança significativa do número de vasos/mm². Entretanto, as membranas tratadas com 5 ou 10 µg/mL EAS exibiram uma opacidade junto com um tecido fibroso, ambos sinais de inflamação. Corroborando, as análises com Tricrômico Masson e Picro Sirius, respectivamente, apontaram para um aumento das fibras colágenas e presença de colágeno fibrilar. Embriões expostos às concentrações de 5 e 10 μg/mL do EAS sofreram malformações na face e na parede tóraco-abdominal. A concentração de 15 μg/mL foi letal para os embriões. Embora efeitos significativos na vasculatura da MCA não tenham ocorrido, observou-se desmoplasia (um grande sinal de inflamação). Esse fato, juntamente com as malformações no embrião e a presença de compostos tóxicos no EAS inferem, se a planta for ingerida, uma via importante para explicar a intoxicação de animais e humanos, e até mesmo o câncer ou a morte de animais.

Tissue damage and embryonic malformation induced by aqueous extract of Pteridium aquilinum on chorioallantoic membrane of chick embryo (CAM) / Danos teciduais e mal formações morfológicas induzidas pelo extrato aquoso de Pteridium aquilinum sobre a membrana corioalantóica (CAM) e o embrião de galinha

The aim of this study was evaluate the effects of Bracken fern (BF) (Pteridium aquilinum (L.) Kuhn.) on biological systems. When consumed by animals can cause acute intoxication, hematuria, biochemistry alterations and cancer. To humans the toxicity is associated with its intake on contaminated ground water or milk and inhalation of its spores. In order to check the BF aqueous extract (AEB) deleterious effects on animals blood vessels system, chick embryo chorioallantoic membrane (CAM) was used. It were applying on CAM 0.1, 0.5, 1, 5, 10 e 15 µg/mL of AEB and saline as control. The angiogenesis was analyzed and the vascular density index (VDI) calculated. The CAM samples were prepared and stained with H&E to evaluation of microvessels, Massons trichrome to characterize collagen and fibrin deposition and Picro-sirius used to evaluate collagen using polarized light. Also the morphological aspects of embryos were analysed. We observe on the results of neovascularization that AEB did not change significantly the number of vessels/mm², however, membranes treated with AEB (5 or 10 µg/ mL) exhibit opacity and tissue fibrosis, both signs of inflammation. Histological analysis with Massons trichrome and picro-sirius on tissues exposed to AEB respectively has shown increased collagen fibers and presence of fibrilar collagen. The embryos exposed to concentrations of 5 or 10 μg/mL AEB, showed changes as poor face formation and poor closing of abdominal wall. The highest concentration of AEB (15 μg/mL) was lethal to embryos. Although significant effects on the CAMs vasculature has not observed, tissue aggression was detected, a desmoplasia (an extensive inflammatory signal triggered by tissue injury), changes caused on embryos as well as the presence of toxic substances in the AEB show us an important and deleterious pathway of this bracken fern extract on its intoxicants effects on humans and animals, and even cancer or the death of animals.(AU)

O foco principal desse estudo foi avaliar os efeitos do extrato aquoso de Samambaia (EAS) (Pteridium aquilinum (L.) Kuhn) sobre sistemas biológicos. A ingestão das folhas de Samambaia pode provocar intoxicação aguda, hematúria, alterações bioquímicas e câncer se consumida por animais. Em humanos também pode provocar intoxicação ao ser ingerida com água ou leite contaminados e pela inalação de seus esporos. Considerando os efeitos danosos provocados pelo consumo dessa planta esse estudo analisou a ação do EAS sobre um sistema de vasos sanguíneos, a membrana corioalantóide (MCA) de embrião de galinha. Sobre a MCA foram aplicados 0,1, 0,5, 1, 5, 10 e 15 µg/mL de EAS, salina como controle. A angiogênese foi analisada e o índice de densidade vascular (IDV) calculado. Amostras da CAM foram coradas com H&E para avaliação de microvasos, Tricrômico de Masson para caracterização de colágeno e deposição de fibrina e Picro-sirius para analisar o colágeno através de luz polarizada. Os aspectos morfológicos dos embriões também foram analisados. Os resultados da neovascularização mostraram que não houve mudança significativa do número de vasos/mm². Entretanto, as membranas tratadas com 5 ou 10 µg/mL EAS exibiram uma opacidade junto com um tecido fibroso, ambos sinais de inflamação. Corroborando, as análises com Tricrômico Masson e Picro Sirius, respectivamente, apontaram para um aumento das fibras colágenas e presença de colágeno fibrilar. Embriões expostos às concentrações de 5 e 10 μg/mL do EAS sofreram malformações na face e na parede tóraco-abdominal. A concentração de 15 μg/mL foi letal para os embriões. Embora efeitos significativos na vasculatura da MCA não tenham ocorrido, observou-se desmoplasia (um grande sinal de inflamação). Esse fato, juntamente com as malformações no embrião e a presença de compostos tóxicos no EAS inferem, se a planta for ingerida, uma via importante para explicar a intoxicação de animais e humanos, e até mesmo o câncer ou a morte de animais.(AU)

Correlação dos estágios embrionários e a morfologia do corpo lúteo e placenta de Crotalus durissus (VIPERIDAE)

Atualmente, grande parte do conhecimento adquirido sobre reprodução de serpentes, advém de estudos levados a efeito na América do Norte e Europa, com animais de regiões temperadas; e, na Austrália, com Elapídeos tropicais. No presente estudo foram utilizadas dez serpentes fêmeas prenhes de Crotalus durissus (Viperidae) de região neotropical, com o objetivo de descrever e correlacionar a morfologia do corpo lúteo, placenta e estágio fetal. Com isso pode-se inferir também, o tempo de prenhez. As técnicas realizadas para essa descrição e correlação foram: biometria macroscópica das fêmeas e suas estruturas; microscopia de luz com coloração de hematoxilina-eosina e microscopia eletrônica de varredura. Foram coletados no total 124 corpos lúteos e 116 placentas, onde observou-se que a cascavel possui o corpo lúteo de caráter ovulatório e a placenta do tipo corioalantóica evolvida por uma delgada membrana da casca do ovo. Concluiu-se que o tamanho padrão da superfície dos corpos lúteos para uma prenhez normal é de 18 a 34 mm2 e que há um corpo lúteo para cada ovo, independente se está fertilizado ou atrésico, porém os ovos atrésicos não possuem placenta. Pela primeira vez foi possível visualizar a disposição estrutural dos filamentos calcários em forma de trama na membrana da casca do ovo. Foi inferida uma classificação da placenta em três estágios I, II e III de acordo com a morfologia e aumento das vilosidades apresentadas entre placenta e útero; e a partir da identificação do estágio de desenvolvimento embrionário e fetal pode-se inferir o tempo de prenhez em C. durissus, classificadas em três terços, inicial, médio e final, evidenciando que existe uma correlação entre a evolução dos estágios placentários com desenvolvimento fetal, conforme a evolução gradual da prenhêz.

At de present time, great part of snake reproduction knowledge results from researches realized in North America and Europe, with temperate region animals; in Australia with tropical Elapides. At this present research, ten pregnant females of the snake Crotalus durissus (Viperidae), from Neotropical Region, were utilized. The main goal is to correlate the morphology, corpus luteum, placenta and fetal development. Then, it is also easy to deduce the pregnancy time. The techniques performed for this description and correlation were females macroscopic biometry and their structures; light microscopy with hematoxiline-eosine color and electronic scanning microscopy. 124 corpora lutea and 116 placentas were collected. In those samples could be observed that rattlesnakes have an ovulatory corpus luteum and a corioalantoic placenta wrapped by a slender membrane of the eggshell. Clearly the conclusion is that the normal standard size surface corpus luteum for a normal pregnancy is from 18 to 34mm² and that there is a corpus luteum for each egg, independently if it is fertilized or atresic; but, these atresic eggs have not placenta. For the first time it was possible to visualize the structural arrangement of the calcareous filaments in shaped frame in the eggshell membrane. It was inferred a placenta classification in three stages: I, II and III according to the morphology and increased vilosiddes presented among placenta and uterus; and, from the identification of embryonic and fetal development stage we can infer the time pregnancy in C. durissus, classified in three thirds, initial, middle and final, indicating that there is a correlation between the evolution of placental stage with fetal development, as the gradual evolution of pregnancy.

Avaliação morfológica das membranas fetais e da placenta de Mazama gouazoubira (veado-catingueiro) de vida livre no terço inicial da gestação / Morphological evaluation of fetal membranes and placenta of wild life Mazama gouazoubira deer in the first third of pregnancy

Mazama gouazoubira, o veado-catingueiro, é uma espécie de cervídeo de porte pequeno, que pode ser encontrado na América do Sul, desde o sul do Uruguai até o norte de Mato Grosso, no Brasil. Este estudo teve como objetivo descrever as membranas fetais e a placenta de M. gouazoubira no terço inicial de gestação. As amostras coletadas foram analisadas macroscopicamente e microscopicamente. O exame do útero demonstrou uma gestação univitelina e um embrião com crown-rump de 13mm. Na análise do embrião pode ser observado o olho pigmentado, as saliências auriculares, o mesonefro e e metanefro em desenvolvimento, o fígado e sua proeminência externa, o estômago, os membros torácicos e os brotos dos membros pélvicos. A placenta apresentou-se oligocotiledonária e no útero puderam ser observadas nove carúnculas. O saco gestacional mediu 15cm de comprimento e, como observado no início da gestação dos ruminantes domésticos, os cotilédones não puderam ser identificados macroscopicamente. Uma fraca adesão foi observada entre as carúnculas e a membrana corioalantóica (cotilédones) que formavam os placentônios. A membrana corioalantóica demonstrou um alantóide bem vascularizado composto por uma fina camada de células de núcleos e citoplasmas alongados. Na outra face da membrana, o cório foi composto por células cúbicas, de citoplasmas escassos e núcleos grandes e arredondados, características de células trofoblásticas. Envolvendo o embrião visualizou-se o saco amniótico constituído de duas camadas passíveis de separação mecânica, que apresentaram morfologia similar, sendo formadas por um epitélio pavimentoso avascular. Não foi observado saco vitelino no estágio gestacional do espécime estudado. Conclui-se que a placenta de M. gouazoubira é oligocotiledonária, como observado em outros cervídeos, e que as membranas fetais apresentam semelhanças com a de outros ruminantes, incluindo as características citológicas. Estudos adicionais são necessários para determinar a presença do saco vitelino e quando ocorre sua regressão.(AU)

Mazama gouazoubira is a small-sized deer, which can be found in South America, from southern Uruguay to the north of Mato Grosso, Brazil. This study aimed to describe the fetal membranes and placenta of M. gouazoubira in the first third of pregnancy. Samples collected were macroscopically and microscopically analyzed. Uterus examination demonstrated univitelinic gestation with an embryo measuring a crown-rump length of 13mm. In the embryo analysis we could identify the pigmented eye, auricular hillocks, mesonephron and early metanephron, liver and its external prominence, stomach, thoracic members and buds of pelvic members. Placenta was oligocotyledonary and nine caruncles were found in the uterus. Gestational sac measured 15cm in length, and, as observed in the early gestation of domestic ruminants, cotyledons could not be identified macroscopically. A weak adhesion was found between caruncles and chorioallantoic membrane (cotyledons) forming the placentomes. The chorioallantoic membrane showed a well-vascularized allantoid composed by a thin layer of cells with stretched nucleus and cytoplasm. On the other side of the membrane, the chorion was composed by cubic cells with scant cytoplasm and large-rounded nuclei, features of trophoblast cells. Involving the embryo we identified a two-layered amniotic sac. Layers could be mechanically separated and had similar morphology, showing a non-vascularized squamous epithelium. There was no yolk sac in the gestational stage of this specimen. We concluded that the placenta of M. gouazoubira is an oligocotyledonary placenta, as observed in others cervids, and that the fetal membranes showed similarities with those from other domestic ruminants, including cytological characteristics. Further studies are required in order to determine the presence of the yolk sac and its regression time.(AU)