Detection of paratuberculosis in dairy cows from southern Brazil / Detecção da paratuberculose em vacas leiteiras no sul do Brasil

Bovine paratuberculosis causes chronic, incurable diarrhea and weight loss, resulting in decreased cattle production. The disease is caused by Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP), an obligate intracellular mycobactin-dependent mycobacterium that replicates slowly in the host and has heightened environmental resistance. In countries where the disease is found and the damage has been quantified, direct and indirect economic losses are extremely high. Local epidemiological data is of paramount importance for the implementation of control programs. Our objective was to verify whether paratuberculosis is present in commercial dairy herds in different mesoregions of RS. Therefore, a prospective, cross-sectional and observational study was performed on dairy cattle from five mesoregions of the RS state, Brazil. Milk samples taken from individual cows on commercial farms were tested using indirect ELISA tests and classified as negative, suspicious, or positive. In herds containing at least one positive cow, we conducted convenience sampling of feces directly from the rectal ampulla to identify MAP through PCR. Of the 362 cows tested, 20 were seroreactive for paratuberculosis from two mesoregions. The PCR tests were all positive; cows with a negative ELISA and positive PCR results probably indicate that the MAP was ingested and eliminated without causing infection. We found that paratuberculosis is likely endemic in the northwest and northeast mesoregions.

A paratuberculose bovina causa diarreia crônica e incurável, perda de peso e resulta em diminuição da produção. A doença é causada pelo Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP), micobactéria intracelular obrigatória, dependente de micobactina, que se replica lentamente no hospedeiro e possui elevada resistência ambiental. Nos países onde a doença é encontrada e os danos foram quantificados, as perdas econômicas diretas e indiretas são extremamente altas. Os dados epidemiológicos locais são de suma importância para a implementação de programas de controle. Nosso objetivo foi verificar se a paratuberculose está presente em rebanhos leiteiros comerciais em diferentes mesorregiões do RS. Para tanto, foi realizado um estudo prospectivo, transversal e observacional em bovinos leiteiros de cinco mesorregiões do estado do RS, Brasil. Amostras de leite individuais, provenientes de vacas leiteiras de fazendas comerciais foram testadas com ELISA indireto e classificadas como negativas, suspeitas ou positivas. Em rebanhos contendo pelo menos uma vaca positiva, realizamos amostragem por conveniência, em que foram coletadas fezes diretamente da ampola retal, para identificar MAP por meio da PCR. Das 362 vacas testadas, 20 foram sororreativas para paratuberculose, oriundas de duas mesorregiões. Os testes de PCR foram todos positivos. Vacas com resultado negativo no teste ELISA e PCR positivo provavelmente indicam que o MAP foi ingerido e eliminado sem causar infecção. Sugere-se que a paratuberculose é provavelmente endêmica nas mesorregiões noroeste e nordeste.

Isolation and genotyping of Mycobacterium bovis in suggestive lesions of tuberculosis in cattle slaughtered in the state of Ceará, Brazil / Isolamento e tipificação genética de Mycobacterium bovis em lesões sugestivas de tuberculose em bovinos abatidos no estado do Ceará

Bovine tuberculosis (BTB) is a zoonosis caused by the bacterium Mycobacterium bovis, which induces the development of nodular and granulomatous lesions in various animal tissues. The recognition of these suggestive gross lesions during postmortem sanitary inspection in slaughterhouses provides a presumptive diagnosis, which requires the use of complementary tests to confirm the disease. This study aimed to verify the occurrence of BTB in cattle slaughtered in slaughterhouses in the state of Ceará, Brazil, using bacteriological and molecular methods. To this end, suggestive lesions were analyzed on carcasses condemned by the "Serviço de Inspeção Estadual" (SIE). The samples were submitted to microbiological analysis using culture media and specific staining followed by spoligotyping molecular technique for identification and genotyping of the mycobacteria. Occurrence of lesions suggestive of BTB was verified in bovine carcasses (0.071%) from different municipalities of the state. These lesions were located mainly in the lung (95.12%), lymph nodes (58.53%), and liver (36.58%). Microbiological culture showed bacterial isolation (17.94%), with the growth of colonies showing morphological and tannic characteristics belonging to genus Mycobacterium spp. Genetic polymorphism analysis identified M. bovis in all isolates, which were discriminated into six spoligotypes (SB0121, SB0295, SB1064, SB0120, SB0870, and SB0852). These profiles have been described in Brazil and several areas of the world, except for profiles SB1064 and SB0852, which were described in the country for the first time. The results show that the association of the diagnostic methods used was the basis for the first study on identification of mycobacteria found in the state, which may provide a database for the epidemiological study of BTB in the state of Ceará.(AU)

A tuberculose bovina (TB) é uma zoonose causada pelo Mycobacterium bovis, o qual induz ao desenvolvimento de lesões nodulares e granulomatosas em vários tecidos do animal. O reconhecimento dessas lesões macroscópicas sugestivas durante a inspeção sanitária post mortem em matadouros fornece um diagnóstico presuntivo, sendo necessário a utilização de testes complementares para confirmação da doença. O objetivo deste trabalho foi verificar a ocorrência da TB em animais abatidos em matadouros-frigoríficos no estado do Ceará através da utilização de métodos bacteriológicos e moleculares. Para tanto, foram analisadas lesões sugestivas de TB em carcaças condenadas pelo Serviço de Inspeção Estadual (SIE). As amostras foram submetidas à análise microbiológica, utilizando meios de cultivo e de coloração específicos, seguida pela técnica molecular spoligotyping para identificação e tipificação genética da micobactéria. Verificou-se a ocorrência de lesões sugestivas de TB em carcaças bovinas (0,071%) oriundas de diferentes municípios do estado do Ceará. Essas lesões estavam localizadas principalmente no pulmão (95,12%), linfonodos (58,53%) e fígado (36,58%). O cultivo microbiológico obteve isolamento bacteriano (17,94%), com o crescimento de colônias apresentando características morfológicas e tintoriais pertencentes ao gênero Mycobacterium spp. A análise do polimorfismo genético identificou a presença de M. bovis em todos os isolados, que foram discriminados em seis espoligotipos (SB0121, SB0295, SB1064, SB0120, SB0870 e SB0852), descritos no Brasil e em diversas áreas do mundo, exceto os perfis SB1064 e SB0852 que foram descritos pela primeira vez no país. Os resultados obtidos demonstram que a associação dos métodos diagnósticos utilizados foram a base do primeiro estudo de identificação das micobactérias encontradas no estado do Ceará, o que pode contribuir para a criação de um banco de dados para o estudo epidemiológico da TB no estado.(AU)

Isolation and genotyping of Mycobacterium bovis in suggestive lesions of tuberculosis in cattle slaughtered in the state of Ceará, Brazil / Isolamento e tipificação genética de Mycobacterium bovis em lesões sugestivas de tuberculose em bovinos abatidos no estado do Ceará

Bovine tuberculosis (BTB) is a zoonosis caused by the bacterium Mycobacterium bovis, which induces the development of nodular and granulomatous lesions in various animal tissues. The recognition of these suggestive gross lesions during postmortem sanitary inspection in slaughterhouses provides a presumptive diagnosis, which requires the use of complementary tests to confirm the disease. This study aimed to verify the occurrence of BTB in cattle slaughtered in slaughterhouses in the state of Ceará, Brazil, using bacteriological and molecular methods. To this end, suggestive lesions were analyzed on carcasses condemned by the "Serviço de Inspeção Estadual" (SIE). The samples were submitted to microbiological analysis using culture media and specific staining followed by spoligotyping molecular technique for identification and genotyping of the mycobacteria. Occurrence of lesions suggestive of BTB was verified in bovine carcasses (0.071%) from different municipalities of the state. These lesions were located mainly in the lung (95.12%), lymph nodes (58.53%), and liver (36.58%). Microbiological culture showed bacterial isolation (17.94%), with the growth of colonies showing morphological and tannic characteristics belonging to genus Mycobacterium spp. Genetic polymorphism analysis identified M. bovis in all isolates, which were discriminated into six spoligotypes (SB0121, SB0295, SB1064, SB0120, SB0870, and SB0852). These profiles have been described in Brazil and several areas of the world, except for profiles SB1064 and SB0852, which were described in the country for the first time. The results show that the association of the diagnostic methods used was the basis for the first study on identification of mycobacteria found in the state, which may provide a database for the epidemiological study of BTB in the state of Ceará.(AU)

A tuberculose bovina (TB) é uma zoonose causada pelo Mycobacterium bovis, o qual induz ao desenvolvimento de lesões nodulares e granulomatosas em vários tecidos do animal. O reconhecimento dessas lesões macroscópicas sugestivas durante a inspeção sanitária post mortem em matadouros fornece um diagnóstico presuntivo, sendo necessário a utilização de testes complementares para confirmação da doença. O objetivo deste trabalho foi verificar a ocorrência da TB em animais abatidos em matadouros-frigoríficos no estado do Ceará através da utilização de métodos bacteriológicos e moleculares. Para tanto, foram analisadas lesões sugestivas de TB em carcaças condenadas pelo Serviço de Inspeção Estadual (SIE). As amostras foram submetidas à análise microbiológica, utilizando meios de cultivo e de coloração específicos, seguida pela técnica molecular spoligotyping para identificação e tipificação genética da micobactéria. Verificou-se a ocorrência de lesões sugestivas de TB em carcaças bovinas (0,071%) oriundas de diferentes municípios do estado do Ceará. Essas lesões estavam localizadas principalmente no pulmão (95,12%), linfonodos (58,53%) e fígado (36,58%). O cultivo microbiológico obteve isolamento bacteriano (17,94%), com o crescimento de colônias apresentando características morfológicas e tintoriais pertencentes ao gênero Mycobacterium spp. A análise do polimorfismo genético identificou a presença de M. bovis em todos os isolados, que foram discriminados em seis espoligotipos (SB0121, SB0295, SB1064, SB0120, SB0870 e SB0852), descritos no Brasil e em diversas áreas do mundo, exceto os perfis SB1064 e SB0852 que foram descritos pela primeira vez no país. Os resultados obtidos demonstram que a associação dos métodos diagnósticos utilizados foram a base do primeiro estudo de identificação das micobactérias encontradas no estado do Ceará, o que pode contribuir para a criação de um banco de dados para o estudo epidemiológico da TB no estado.(AU)

Tuberculose bovina: impactos para a pecuária e riscos para a Saúde Pública / Bovine tuberculosis: impacts for livestock and risks for Public Health / Tuberculosis bovina: impactos para el ganado y riesgos para la Salud Pública

A tuberculose bovina está entre as principais zoonoses detectadas pelo serviço de inspeção durante o exame post-mortem das carcaças bovinas, sendo responsável por gerar consideráveis prejuízos econômicos para a pecuária e riscos para a saúde pública. Tem como agente etiológico o microrganismo Mycobacterium bovis, o qual possui tropismo pela espécie bovina, porém pode acometer outras espécies, incluindo a humana. Estima-se que nos países desenvolvidos, 1 a 2% dos casos de tuberculose em humanos seja causada por M. bovis, enquanto nos subdesenvolvidos, esta estimativa é de 10 a 20%, podendo ser ainda maior. Já, para a pecuária, as perdas são decorrentes da redução de 10 a 25% na eficiência produtiva, no ganho de peso, pela necessidade de sacrifício dos animais positivos e das condenações totais ou parciais das carcaças oriundas de animais infectados. O presente estudo teve por objetivo abordar os impactos da tuberculose bovina para a pecuária e sua importância para a saúde pública.

Bovine tuberculosis is among the main zoonosis detected by the inspection service during the postmortem examination of bovine carcasses, and is responsible for generating considerable economic damage to livestock and risks to public health. Its etiological agent is the microorganism Mycobacterium bovis, which has tropism for the bovine species, but can affect other species, including the human one. It is estimated that in developed countries 1 to 2% of tuberculosis cases in humans are caused by M. bovis, while in underdeveloped countries, this estimate is 10 to 20% and may be even higher. For livestock, losses are due to a 10 to 25% reduction in productive efficiency, weight gain, the need to sacrifice positive animals and total or partial condemnation of carcasses from infected animals. This study aimed to address the impacts of bovine tuberculosis on livestock and its importance to public health.

La tuberculosis bovina se encuentra entre las principales zoonosis detectadas por el servicio de inspección durante el examen post mortem de los cadáveres bovinos, y es responsable de generar considerables daños económicos para el ganado y riesgos para la salud pública. Su agente etiológico es el microorganismo Mycobacterium bovis, que tiene tropismo para las especies bovinas, pero puede afectar a otras especies, incluida la humana. Se estima que en los países desarrollados 1 a 2% de los casos de tuberculosis en humanos son causados por M. bovis, mientras que en los países subdesarrollados, esta estimación es del 10 al 20% y puede ser aún mayor. Para el ganado, las pérdidas se deben a una reducción del 10 al 25% en la eficiencia productiva, el aumento de peso, la necesidad de sacrificar animales positivos y la condena total o parcial de los cadáveres de animales infectados. Este estudio tuvo como objetivo abordar los impactos de la tuberculosis bovina en el ganado y su importancia para la salud pública.

Tuberculose bovina: impactos para a pecuária e riscos para a Saúde Pública / Bovine tuberculosis: impacts for livestock and risks for Public Health / Tuberculosis bovina: impactos para el ganado y riesgos para la Salud Pública

A tuberculose bovina está entre as principais zoonoses detectadas pelo serviço de inspeção durante o exame post-mortem das carcaças bovinas, sendo responsável por gerar consideráveis prejuízos econômicos para a pecuária e riscos para a saúde pública. Tem como agente etiológico o microrganismo Mycobacterium bovis, o qual possui tropismo pela espécie bovina, porém pode acometer outras espécies, incluindo a humana. Estima-se que nos países desenvolvidos, 1 a 2% dos casos de tuberculose em humanos seja causada por M. bovis, enquanto nos subdesenvolvidos, esta estimativa é de 10 a 20%, podendo ser ainda maior. Já, para a pecuária, as perdas são decorrentes da redução de 10 a 25% na eficiência produtiva, no ganho de peso, pela necessidade de sacrifício dos animais positivos e das condenações totais ou parciais das carcaças oriundas de animais infectados. O presente estudo teve por objetivo abordar os impactos da tuberculose bovina para a pecuária e sua importância para a saúde pública.(AU)

Bovine tuberculosis is among the main zoonosis detected by the inspection service during the postmortem examination of bovine carcasses, and is responsible for generating considerable economic damage to livestock and risks to public health. Its etiological agent is the microorganism Mycobacterium bovis, which has tropism for the bovine species, but can affect other species, including the human one. It is estimated that in developed countries 1 to 2% of tuberculosis cases in humans are caused by M. bovis, while in underdeveloped countries, this estimate is 10 to 20% and may be even higher. For livestock, losses are due to a 10 to 25% reduction in productive efficiency, weight gain, the need to sacrifice positive animals and total or partial condemnation of carcasses from infected animals. This study aimed to address the impacts of bovine tuberculosis on livestock and its importance to public health.(AU)

La tuberculosis bovina se encuentra entre las principales zoonosis detectadas por el servicio de inspección durante el examen post mortem de los cadáveres bovinos, y es responsable de generar considerables daños económicos para el ganado y riesgos para la salud pública. Su agente etiológico es el microorganismo Mycobacterium bovis, que tiene tropismo para las especies bovinas, pero puede afectar a otras especies, incluida la humana. Se estima que en los países desarrollados 1 a 2% de los casos de tuberculosis en humanos son causados por M. bovis, mientras que en los países subdesarrollados, esta estimación es del 10 al 20% y puede ser aún mayor. Para el ganado, las pérdidas se deben a una reducción del 10 al 25% en la eficiencia productiva, el aumento de peso, la necesidad de sacrificar animales positivos y la condena total o parcial de los cadáveres de animales infectados. Este estudio tuvo como objetivo abordar los impactos de la tuberculosis bovina en el ganado y su importancia para la salud pública.(AU)

Tuberculose em felinos domésticos (Felis catus) no sul do Rio Grande do Sul

ABSTRACT: Clinical pathological aspects of four cases of tuberculosis in domestic cats in southern Rio Grande do Sul is described. A retrospective study was conducted of cats diagnosed with tuberculosis and necropsied at the Regional Diagnostic Laboratory of the Federal University of Pelotas (LRD/UFPel) from January 2000 to December 2014. In two cases, the amplification of genetic sequence IS6110 specific to Mycobacterium tuberculosis demonstrated that the disease was of human origin. The other two were positive for Mycobacterium spp. The clinical signs were characterized by progressive weight loss, anorexia, and dyspnea. The evident macroscopic changes were cachexia, swelling of submandibular lymph nodes with focal areas of caseous aspect on cut surface. The lungs had multifocal caseous areas at the pleural surface. Histologically, the cats had pneumonia and granulomatous lymphadenitis. The Ziehl-Neelsen staining revealed the presence of alcohol-acid resistant bacteria. There was a positive immunostaining for mycobacteria by immunohistochemistry technique. We alert to the importance of feline tuberculosis as a public health problem, because infected cats may serve as source for dissemination of mycobacteria in the environment, and be sentinels for the occurrence of the disease in humans.

RESUMO: Descrevem-se os aspectos clínico patológicos de quatro casos de tuberculose em felinos domésticos no Sul do Rio Grande do sul. Foi realizado um estudo retrospectivo dos casos diagnosticados como tuberculose em gatos necropsiados no Laboratório Regional de Diagnóstico da Universidade Federal de Pelotas (LRD/UFPel) no período de janeiro de 2000 a dezembro de 2014. Em dois casos a amplificação da sequência genética IS6110 específica para Mycobacterium tuberculosis demonstrou que a doença era de origem humana. Os outros dois foram positivos para Mycobacterium spp. Os sinais clínicos caracterizaram-se por emagrecimento progressivo, anorexia e dispneia. As alterações macroscópicas evidenciadas eram de caquexia, aumento de volume dos linfonodos submandibulares com áreas focais de aspecto caseoso ao corte. Nos pulmões havia áreas multifocais a coalescentes amareladas de aspecto caseoso, discretamente elevadas e firmes na superfície pleural. Histologicamente havia broncopneumonia e linfadenite granulomatosas. A coloração de Ziehl-Neelsen evidenciou a presença de bacilos álcool-ácidos resistentes. Houve imunomarcação positiva para micobactéria pela técnica de imuno-histoquímica. Alerta-se para a importância da tuberculose felina como um problema de saúde pública pois gatos infectados podem servir de fonte para a disseminação das micobactérias no ambiente, além de serem sentinelas para a ocorrência da enfermidade em seres humanos.

Tuberculose em felinos domésticos (Felis catus) no sul do Rio Grande do Sul / Tuberculosis in domestic cats (Felis catus) in southern Rio Grande do Sul

Descrevem-se os aspectos clínico patológicos de quatro casos de tuberculose em felinos domésticos no Sul do Rio Grande do sul. Foi realizado um estudo retrospectivo dos casos diagnosticados como tuberculose em gatos necropsiados no Laboratório Regional de Diagnóstico da Universidade Federal de Pelotas (LRD/UFPel) no período de janeiro de 2000 a dezembro de 2014. Em dois casos a amplificação da sequência genética IS6110 específica para Mycobacterium tuberculosis demonstrou que a doença era de origem humana. Os outros dois foram positivos para Mycobacterium spp. Os sinais clínicos caracterizaram-se por emagrecimento progressivo, anorexia e dispneia. As alterações macroscópicas evidenciadas eram de caquexia, aumento de volume dos linfonodos submandibulares com áreas focais de aspecto caseoso ao corte. Nos pulmões havia áreas multifocais a coalescentes amareladas de aspecto caseoso, discretamente elevadas e firmes na superfície pleural. Histologicamente havia broncopneumonia e linfadenite granulomatosas. A coloração de Ziehl-Neelsen evidenciou a presença de bacilos álcool-ácidos resistentes. Houve imunomarcação positiva para micobactéria pela técnica de imuno-histoquímica. Alerta-se para a importância da tuberculose felina como um problema de saúde pública pois gatos infectados podem servir de fonte para a disseminação das micobactérias no ambiente, além de serem sentinelas para a ocorrência da enfermidade em seres humanos.(AU)

Clinical pathological aspects of four cases of tuberculosis in domestic cats in southern Rio Grande do Sul is described. A retrospective study was conducted of cats diagnosed with tuberculosis and necropsied at the Regional Diagnostic Laboratory of the Federal University of Pelotas (LRD/UFPel) from January 2000 to December 2014. In two cases, the amplification of genetic sequence IS6110 specific to Mycobacterium tuberculosis demonstrated that the disease was of human origin. The other two were positive for Mycobacterium spp. The clinical signs were characterized by progressive weight loss, anorexia, and dyspnea. The evident macroscopic changes were cachexia, swelling of submandibular lymph nodes with focal areas of caseous aspect on cut surface. The lungs had multifocal caseous areas at the pleural surface. Histologically, the cats had pneumonia and granulomatous lymphadenitis. The Ziehl-Neelsen staining revealed the presence of alcohol-acid resistant bacteria. There was a positive immunostaining for mycobacteria by immunohistochemistry technique. We alert to the importance of feline tuberculosis as a public health problem, because infected cats may serve as source for dissemination of mycobacteria in the environment, and be sentinels for the occurrence of the disease in humans.(AU)

Tuberculose em felinos domésticos (Felis catus) no sul do Rio Grande do Sul / Tuberculosis in domestic cats (Felis catus) in southern Rio Grande do Sul

Descrevem-se os aspectos clínico patológicos de quatro casos de tuberculose em felinos domésticos no Sul do Rio Grande do sul. Foi realizado um estudo retrospectivo dos casos diagnosticados como tuberculose em gatos necropsiados no Laboratório Regional de Diagnóstico da Universidade Federal de Pelotas (LRD/UFPel) no período de janeiro de 2000 a dezembro de 2014. Em dois casos a amplificação da sequência genética IS6110 específica para Mycobacterium tuberculosis demonstrou que a doença era de origem humana. Os outros dois foram positivos para Mycobacterium spp. Os sinais clínicos caracterizaram-se por emagrecimento progressivo, anorexia e dispneia. As alterações macroscópicas evidenciadas eram de caquexia, aumento de volume dos linfonodos submandibulares com áreas focais de aspecto caseoso ao corte. Nos pulmões havia áreas multifocais a coalescentes amareladas de aspecto caseoso, discretamente elevadas e firmes na superfície pleural. Histologicamente havia broncopneumonia e linfadenite granulomatosas. A coloração de Ziehl-Neelsen evidenciou a presença de bacilos álcool-ácidos resistentes. Houve imunomarcação positiva para micobactéria pela técnica de imuno-histoquímica. Alerta-se para a importância da tuberculose felina como um problema de saúde pública pois gatos infectados podem servir de fonte para a disseminação das micobactérias no ambiente, além de serem sentinelas para a ocorrência da enfermidade em seres humanos.(AU)

Clinical pathological aspects of four cases of tuberculosis in domestic cats in southern Rio Grande do Sul is described. A retrospective study was conducted of cats diagnosed with tuberculosis and necropsied at the Regional Diagnostic Laboratory of the Federal University of Pelotas (LRD/UFPel) from January 2000 to December 2014. In two cases, the amplification of genetic sequence IS6110 specific to Mycobacterium tuberculosis demonstrated that the disease was of human origin. The other two were positive for Mycobacterium spp. The clinical signs were characterized by progressive weight loss, anorexia, and dyspnea. The evident macroscopic changes were cachexia, swelling of submandibular lymph nodes with focal areas of caseous aspect on cut surface. The lungs had multifocal caseous areas at the pleural surface. Histologically, the cats had pneumonia and granulomatous lymphadenitis. The Ziehl-Neelsen staining revealed the presence of alcohol-acid resistant bacteria. There was a positive immunostaining for mycobacteria by immunohistochemistry technique. We alert to the importance of feline tuberculosis as a public health problem, because infected cats may serve as source for dissemination of mycobacteria in the environment, and be sentinels for the occurrence of the disease in humans.(AU)

INFLUÊNCIA DA GORDURA DO LEITE BOVINO E CAPRINO NA RESISTÊNCIA DOMycobacterium fortuitum À PASTEURIZAÇÃO LENTA

Abstract This study aimed to show the effect of goat and bovine milk fat on thermal resistance of Mycobacterium fortuitum. Milk samples were divided into two portions, whole and skimmed, each part was inoculated withM. fortuitum and then distributed in tubes for quantification of the agent during pasteurization, in a water bath. As samples were diluted and plated on Lowenstein-Jensen (37 °C/5 days), the count results were expressed as log10 CFU/mL. The heat treatment reduced 4.4 log10 CFU/mL for goat whole milk (2.8% fat), 4.9 log10CFU/mL for skim goat milk (0.3%), 3.9 log10 CFU/ml for whole bovine milk (5.9%), and 5.4 log10 CFU/mL for skim bovine milk (0.2%), without significant difference, possibly because of the low number of samples. Values of D65 °C were, respectively, 10.51 minutes, 8.61 minutes, 18.02 minutes, and 7.82 minutes and the low R2 value of the straight line equations indicated that other factors, in addition to the ones studied, influenced the heat death of the agent. The results suggest a trend of influence by fat milk, and by the animal species on the decay rate of M. fortuitum, and that pasteurization was less effective overM. fortuitum in whole bovine milk.

Resumo Este estudo objetivou mostrar o efeito da gordura do leite caprino e bovino sobre a resistência térmica do Mycobacterium fortuitum. Amostras de leite foram divididas em duas porções, integral e desnatada, cada porção foi inoculada com M. fortuitum e então distribuída em tubos para a quantificação do agente durante a pasteurização lenta, em banho-maria. As amostras foram diluídas e semeadas em Lowenstein-Jensen (37 °C/5 dias), os resultados da contagem foram expressos em Log10 UFC/mL. O tratamento térmico reduziu 4,4 Log10 UFC/mL no leite caprino integral (2,8% de gordura), 4,9 Log10 UFC/mL no leite caprino desnatado (0,3%), 3,9 Log10 UFC/mL no leite bovino integral (5,9%) e 5,4 Log10 UFC/mL no leite bovino desnatado (0,2%), sem diferença significante, possivelmente pelo baixo número de amostras. Os valores D65 °C foram, respectivamente, 10,51 minutos, 8,61 minutos, 18,02 minutos e 7,82 minutos e o valor de R2 baixo das equações da reta indicam que outros fatores, além dos que foram estudados, influenciam a morte térmica do agente. Os resultados sugerem uma tendência de influência da gordura do leite e também da espécie animal sobre a taxa de decaimento do M. fortuitum, sendo que a pasteurização foi menos eficaz sobre oM. fortuitum no leite bovino integral.

Influence of milk fat in the resistance of Mycobacterium fortuitum to slow pasteurization / Influência da gordura do leite bovino e caprino na resistência do Mycobacterium fortuitum à pasteurização lenta

This study aimed to show the effect of goat and bovine milk fat on thermal resistance of Mycobacterium fortuitum. Milk samples were divided into two portions, whole and skimmed, each part was inoculated withM. fortuitum and then distributed in tubes for quantification of the agent during pasteurization, in a water bath. As samples were diluted and plated on Lowenstein-Jensen (37 °C/5 days), the count results were expressed as log10 CFU/mL. The heat treatment reduced 4.4 log10 CFU/mL for goat whole milk (2.8% fat), 4.9 log10CFU/mL for skim goat milk (0.3%), 3.9 log10 CFU/ml for whole bovine milk (5.9%), and 5.4 log10 CFU/mL for skim bovine milk (0.2%), without significant difference, possibly because of the low number of samples. Values ​​of D65 °C were, respectively, 10.51 minutes, 8.61 minutes, 18.02 minutes, and 7.82 minutes and the low R2 value of the straight line equations indicated that other factors, in addition to the ones studied, influenced the heat death of the agent. The results suggest a trend of influence by fat milk, and by the animal species on the decay rate of M. fortuitum, and that pasteurization was less effective overM. fortuitum in whole bovine milk

Este estudo objetivou mostrar o efeito da gordura do leite caprino e bovino sobre a resistência térmica do Mycobacterium fortuitum. Amostras de leite foram divididas em duas porções, integral e desnatada, cada porção foi inoculada com M. fortuitum e então distribuída em tubos para a quantificação do agente durante a pasteurização lenta, em banho-maria. As amostras foram diluídas e semeadas em Lowenstein-Jensen (37 C/5 dias), os resultados da contagem foram expressos em Log10 UFC/mL. O tratamento térmico reduziu 4,4 Log10 UFC/mL no leite caprino integral (2,8% de gordura), 4,9 Log10 UFC/mL no leite caprino desnatado (0,3%), 3,9 Log10 UFC/mL no leite bovino integral (5,9%) e 5,4 Log10 UFC/mL no leite bovino desnatado (0,2%), sem diferença significante, possivelmente pelo baixo número de amostras. Os valores D65 C foram, respectivamente, 10,51 minutos, 8,61 minutos, 18,02 minutos e 7,82 minutos e o valor de R2 baixo das equações da reta indicam que outros fatores, além dos que foram estudados, influenciam a morte térmica do agente. Os resultados sugerem uma tendência de influência da gordura do leite e também da espécie animal sobre a taxa de decaimento do M. fortuitum, sendo que a pasteurização foi menos eficaz sobre o M. fortuitum no leite bovino integral

Influence of milk fat in the resistance of Mycobacterium fortuitum to slow pasteurization / Influência da gordura do leite bovino e caprino na resistência do Mycobacterium fortuitum à pasteurização lenta

This study aimed to show the effect of goat and bovine milk fat on thermal resistance of Mycobacterium fortuitum. Milk samples were divided into two portions, whole and skimmed, each part was inoculated withM. fortuitum and then distributed in tubes for quantification of the agent during pasteurization, in a water bath. As samples were diluted and plated on Lowenstein-Jensen (37 °C/5 days), the count results were expressed as log10 CFU/mL. The heat treatment reduced 4.4 log10 CFU/mL for goat whole milk (2.8% fat), 4.9 log10CFU/mL for skim goat milk (0.3%), 3.9 log10 CFU/ml for whole bovine milk (5.9%), and 5.4 log10 CFU/mL for skim bovine milk (0.2%), without significant difference, possibly because of the low number of samples. Values ​​of D65 °C were, respectively, 10.51 minutes, 8.61 minutes, 18.02 minutes, and 7.82 minutes and the low R2 value of the straight line equations indicated that other factors, in addition to the ones studied, influenced the heat death of the agent. The results suggest a trend of influence by fat milk, and by the animal species on the decay rate of M. fortuitum, and that pasteurization was less effective overM. fortuitum in whole bovine milk(AU)

Este estudo objetivou mostrar o efeito da gordura do leite caprino e bovino sobre a resistência térmica do Mycobacterium fortuitum. Amostras de leite foram divididas em duas porções, integral e desnatada, cada porção foi inoculada com M. fortuitum e então distribuída em tubos para a quantificação do agente durante a pasteurização lenta, em banho-maria. As amostras foram diluídas e semeadas em Lowenstein-Jensen (37 C/5 dias), os resultados da contagem foram expressos em Log10 UFC/mL. O tratamento térmico reduziu 4,4 Log10 UFC/mL no leite caprino integral (2,8% de gordura), 4,9 Log10 UFC/mL no leite caprino desnatado (0,3%), 3,9 Log10 UFC/mL no leite bovino integral (5,9%) e 5,4 Log10 UFC/mL no leite bovino desnatado (0,2%), sem diferença significante, possivelmente pelo baixo número de amostras. Os valores D65 C foram, respectivamente, 10,51 minutos, 8,61 minutos, 18,02 minutos e 7,82 minutos e o valor de R2 baixo das equações da reta indicam que outros fatores, além dos que foram estudados, influenciam a morte térmica do agente. Os resultados sugerem uma tendência de influência da gordura do leite e também da espécie animal sobre a taxa de decaimento do M. fortuitum, sendo que a pasteurização foi menos eficaz sobre o M. fortuitum no leite bovino integral(AU)

Decline in Mycobacterium bovis and Brucella abortus populations during the maturation of experimentally contaminated parmesan-type cheese / Decaimento do Mycobacterium bovis e da Brucella abortus durante a cura de queijo tipo parmesão experimentalmente contaminado

Brazilian legislation allows the manufacture of raw milk cheese with a maturation exceeding 60 days at room temperature above 5C, but there is a lack of solid scientific evidence on the efficacy of this maturation process in inactivating important pathogens that may be present in milk, such as Mycobacterium bovis and Brucella abortus. Thus, the objectives of this study were to produce parmesan-type cheese experimentally contaminated with M. bovis and B. abortus and evaluate the survival of these pathogens along 2-month maturation. Parmesan-type cheese was manufactured in the laboratory using whole pasteurized milk with or without inoculation with M. bovis (SB1033) or B. abortus (1119-3) and matured at 18C for up to 63 days. M. bovis was inoculated in Stonebrink-Leslie medium supplemented with antibiotics and incubated at 37C for 45 days, and B. abortus was incubated in Farrel medium at 36C for 3 days. The average D18C value, weighted by variance, was 37.5 ± 5.3 days for M. bovis and 5.9 ± 0.7 days for B. abortus. The average physicochemical parameters in the cheese at the end of the study were as follows: pH = 4.89, water activity = 0.976, and moisture percentage = 43.1%. The pH might have contributed to the reduction in the population of B. abortus but seems not to have influenced the population of M. bovis. We conclude that the duration of the maturation process influences the size of the surviving populations of M. bovis and B. abortus, and that the shortening of the maturation duration might not ensure a decline in pathogen levels to safe levels. Thus, complementary studies considering the effect of several other technological aspects on the survival of these pathogens are required, including the effect of the lactic acid bacterial population, salt content, and temperature of maturation.(AU)

A legislação brasileira permite a fabricação queijos de leite cru com maturação superior a 60 dias em temperatura acima de 5C, mas falta evidência científica sólida sobre a eficácia do processo de maturação na inativação de importantes patógenos que podem estar presentes no leite, como o Mycobacterium bovis e a Brucella abortus. Assim, os objetivos desse estudo foram produzir o queijo tipo parmesão experimentalmente contaminado com M. bovis e B. abortus e avaliar a sobrevivência desses patógenos ao longo de 2 meses de maturação. Queijo do tipo parmesão foi fabricado em laboratório com leite pasteurizado integral com ou sem inoculo de M. bovis (SB1033) ou B. abortus (1119-3) e maturado a 18C por até 63 dias. M. bovis foi semeado em meio Stonebrink-Leslie, acrescido de antibióticos, e incubado a 37C por 45 dias e a B. abortus foi semeada em meio Farrel a 36C por 3 dias. O valor D18C médio, ponderado pela variância, foi de 37,5 ± 5,3 dias para o M. bovis e de 5,9 ± 0,7 dias para a B. abortus. Os parâmetros físico-químicos médios do queijo no final do estudo foram como se segue: pH = 4,89, atividade de água = 0,976 e umidade percentual = 43,1%. O pH pode ter contribuído para redução da população de B. abortus mas parece não ter influenciado a população de M. bovis. Concluiu-se que a duração do processo de maturação influencia o tamanho da população sobrevivente de M. bovis e de B. abortus e que o encurtamento do período de maturação pode não garantir um declínio desses patógenos para níveis seguros. Assim, estudos complementares que considerem o efeito de vários outros aspectos tecnológicos na sobrevivência desses patógenos são necessários, incluindo o efeito da população de bactérias ácido láticas, teor de sal e temperatura de maturação.(AU)

Effect of pasteurization on the decay of Mycobacterium bovis in milk cream / Efeito da pasteurização no decaimento de Mycobacterium bovis em creme de leite

Milk cream must be pasteurized in order to be sold in Brazil. However, there are no specific legal requirements for this product, and producers set their own pasteurization parameters using the ones approved for milk as a reference. Considering that fat protects bacteria from heat, that no thermal inactivation studies have been performed on Mycobacterium bovis present in cream, and that bovine tuberculosis is endemic in Brazil, the aim of this study was to evaluate the inactivation of M. bovis in milk cream subjected to commercial parameters of pasteurization. Milk cream samples were contaminated and pasteurized in a water bath at 75, 80, 85, and 90C for 5 and 15 s. M. bovis cells were plated onto Stonebrink-Leslie medium, incubated at 36C for 45 days, and quantified; the result was expressed in log CFU mL-1. The fat content of the samples ranged from 34% to 37% and the average initial load of M. bovis was 8.0 Log CFU mL-1. The average decay of the M. bovis populations was 4.0, 4.3, 4.9 and 6.7 log CFU mL-1 when the cream was incubated for 15 sec at 75, 80, 85 and 90C, respectively, showing that the efficiency of the heat treatment was improved by increasing the temperature of the process. Given the lipophilic nature of M. bovis, the cream should be subjected to more intense parameters of pasteurization than those applied to milk.(AU)

A pasteurização do creme de leite é obrigatória no Brasil, mas não há parâmetros legais específicos para esse produto, de forma que as empresas estabelecem seus próprios parâmetros tendo como referência mínima os aprovados para a pasteurização do leite. Assim, considerando que a gordura tem efeito termo protetor para as bactérias, que não há estudos de inativação térmica do Mycobacterium bovis em creme de leite e que a tuberculose bovina é endêmica no Brasil, o objetivo deste estudo foi avaliar a inativação de M. bovis em creme de leite, submetido aos parâmetros comerciais de pasteurização. Amostras de creme de leite foram contaminadas e pasteurizadas em Banho-Maria a 75C, 80C, 85C e 90C, por até 15 s. O M. bovis foi quantificado por semeadura em meio Stonebrink-Leslie, incubado a 36ºC por 45 dias, e o resultado expresso em Log UFC mL-1. O teor de gordura das amostras variou de 34 a 37% e a carga inicial média de M. bovis foi de 8,0 Log UFC mL-1. O decaimento médio da população de M. bovis foi de 4,0, 4,3, 4,9 e 6,7 Log UFC mL-1, quando expostos respectivamente às temperaturas estudadas por 15 s, demonstrando que a eficácia do tratamento térmico melhorou com o aumento da temperatura do processo. Devido ao caráter lipofílico do M. bovis, o creme de leite deveria ser submetido a parâmetros de pasteurização mais intensos do que aqueles aplicados ao leite.(AU)

Effect of pasteurization on the decay of Mycobacterium bovis in milk cream / Efeito da pasteurização no decaimento de Mycobacterium bovis em creme de leite

Milk cream must be pasteurized in order to be sold in Brazil. However, there are no specific legal requirements for this product, and producers set their own pasteurization parameters using the ones approved for milk as a reference. Considering that fat protects bacteria from heat, that no thermal inactivation studies have been performed on Mycobacterium bovis present in cream, and that bovine tuberculosis is endemic in Brazil, the aim of this study was to evaluate the inactivation of M. bovis in milk cream subjected to commercial parameters of pasteurization. Milk cream samples were contaminated and pasteurized in a water bath at 75, 80, 85, and 90C for 5 and 15 s. M. bovis cells were plated onto Stonebrink-Leslie medium, incubated at 36C for 45 days, and quantified; the result was expressed in log CFU mL-1. The fat content of the samples ranged from 34% to 37% and the average initial load of M. bovis was 8.0 Log CFU mL-1. The average decay of the M. bovis populations was 4.0, 4.3, 4.9 and 6.7 log CFU mL-1 when the cream was incubated for 15 sec at 75, 80, 85 and 90C, respectively, showing that the efficiency of the heat treatment was improved by increasing the temperature of the process. Given the lipophilic nature of M. bovis, the cream should be subjected to more intense parameters of pasteurization than those applied to milk.

A pasteurização do creme de leite é obrigatória no Brasil, mas não há parâmetros legais específicos para esse produto, de forma que as empresas estabelecem seus próprios parâmetros tendo como referência mínima os aprovados para a pasteurização do leite. Assim, considerando que a gordura tem efeito termo protetor para as bactérias, que não há estudos de inativação térmica do Mycobacterium bovis em creme de leite e que a tuberculose bovina é endêmica no Brasil, o objetivo deste estudo foi avaliar a inativação de M. bovis em creme de leite, submetido aos parâmetros comerciais de pasteurização. Amostras de creme de leite foram contaminadas e pasteurizadas em Banho-Maria a 75C, 80C, 85C e 90C, por até 15 s. O M. bovis foi quantificado por semeadura em meio Stonebrink-Leslie, incubado a 36ºC por 45 dias, e o resultado expresso em Log UFC mL-1. O teor de gordura das amostras variou de 34 a 37% e a carga inicial média de M. bovis foi de 8,0 Log UFC mL-1. O decaimento médio da população de M. bovis foi de 4,0, 4,3, 4,9 e 6,7 Log UFC mL-1, quando expostos respectivamente às temperaturas estudadas por 15 s, demonstrando que a eficácia do tratamento térmico melhorou com o aumento da temperatura do processo. Devido ao caráter lipofílico do M. bovis, o creme de leite deveria ser submetido a parâmetros de pasteurização mais intensos do que aqueles aplicados ao leite.

Decline in Mycobacterium bovis and Brucella abortus populations during the maturation of experimentally contaminated parmesan-type cheese / Decaimento do Mycobacterium bovis e da Brucella abortus durante a cura de queijo tipo parmesão experimentalmente contaminado

Brazilian legislation allows the manufacture of raw milk cheese with a maturation exceeding 60 days at room temperature above 5C, but there is a lack of solid scientific evidence on the efficacy of this maturation process in inactivating important pathogens that may be present in milk, such as Mycobacterium bovis and Brucella abortus. Thus, the objectives of this study were to produce parmesan-type cheese experimentally contaminated with M. bovis and B. abortus and evaluate the survival of these pathogens along 2-month maturation. Parmesan-type cheese was manufactured in the laboratory using whole pasteurized milk with or without inoculation with M. bovis (SB1033) or B. abortus (1119-3) and matured at 18C for up to 63 days. M. bovis was inoculated in Stonebrink-Leslie medium supplemented with antibiotics and incubated at 37C for 45 days, and B. abortus was incubated in Farrel medium at 36C for 3 days. The average D18C value, weighted by variance, was 37.5 ± 5.3 days for M. bovis and 5.9 ± 0.7 days for B. abortus. The average physicochemical parameters in the cheese at the end of the study were as follows: pH = 4.89, water activity = 0.976, and moisture percentage = 43.1%. The pH might have contributed to the reduction in the population of B. abortus but seems not to have influenced the population of M. bovis. We conclude that the duration of the maturation process influences the size of the surviving populations of M. bovis and B. abortus, and that the shortening of the maturation duration might not ensure a decline in pathogen levels to safe levels. Thus, complementary studies considering the effect of several other technological aspects on the survival of these pathogens are required, including the effect of the lactic acid bacterial population, salt content, and temperature of maturation.

A legislação brasileira permite a fabricação queijos de leite cru com maturação superior a 60 dias em temperatura acima de 5C, mas falta evidência científica sólida sobre a eficácia do processo de maturação na inativação de importantes patógenos que podem estar presentes no leite, como o Mycobacterium bovis e a Brucella abortus. Assim, os objetivos desse estudo foram produzir o queijo tipo parmesão experimentalmente contaminado com M. bovis e B. abortus e avaliar a sobrevivência desses patógenos ao longo de 2 meses de maturação. Queijo do tipo parmesão foi fabricado em laboratório com leite pasteurizado integral com ou sem inoculo de M. bovis (SB1033) ou B. abortus (1119-3) e maturado a 18C por até 63 dias. M. bovis foi semeado em meio Stonebrink-Leslie, acrescido de antibióticos, e incubado a 37C por 45 dias e a B. abortus foi semeada em meio Farrel a 36C por 3 dias. O valor D18C médio, ponderado pela variância, foi de 37,5 ± 5,3 dias para o M. bovis e de 5,9 ± 0,7 dias para a B. abortus. Os parâmetros físico-químicos médios do queijo no final do estudo foram como se segue: pH = 4,89, atividade de água = 0,976 e umidade percentual = 43,1%. O pH pode ter contribuído para redução da população de B. abortus mas parece não ter influenciado a população de M. bovis. Concluiu-se que a duração do processo de maturação influencia o tamanho da população sobrevivente de M. bovis e de B. abortus e que o encurtamento do período de maturação pode não garantir um declínio desses patógenos para níveis seguros. Assim, estudos complementares que considerem o efeito de vários outros aspectos tecnológicos na sobrevivência desses patógenos são necessários, incluindo o efeito da população de bactérias ácido láticas, teor de sal e temperatura de maturação.

Diagnóstico molecular do granuloma lepróide canino, a partir de cortes histológicos emblocados em parafina, pela técnica de reação em cadeia de polimerase (Pcr) estudo retrospectivo (2002-2009) / Molecular diagnosis of Canine Leproid Granuloma out of paraffin-embedded histological cuts using polymerase chain reaction (PCR) a retrospective study (2002-2009)

Canine leproid granuloma or canine leprosy is a mycobacteriosis that has a dermatopathic framework, which includes aspects that are still unclear, especially regarding its mode of transmission and etiological agent. In order to verify the genetic characterization of the mycobacteria that is involved in the condition, the present study analyzed histological cuts from animals with an established diagnosis of such disorder. The study samples were taken from of 13 dogs that were assisted at the HOVET / USP Dermatology Service. This material was subsequently subjected to nested and real-time polymerase chain reaction (PCR). The nested PCR confirmed the presence of the agent in 18.7% of the animals, whereas the real-time PCR detected 69.2% of samples with DNA of the mycobacterium, thus proving that such method presents higher sensitivity. Furthermore, it was observed that the species of mycobacterium that causes Canine Leproid Granulnoma in dogs from Brazil presents a 100% genetic homology when compared to samples obtained from animals in studies abroad.(AU)

O Granuloma lepróide canino (GLC) ou lepra canina consiste em micobacteriose, com quadro dermatopático que conta com aspectos ainda obscuros, principalmente quanto ao seu modo de transmissão e agente etiológico envolvido. Com a finalidade de se verificar a caracterização gênica da micobactéria em questão, procedeu-se estudo a partir de cortes histológicos, de animais com diagnóstico estabelecido da enfermidade. A amostragem foi composta de 13 cães, atendidos no Serviço de Dermatologia do HOVET/USP. Tal material foi posteriormente submetido às técnicas de reação em cadeia de polimerase (PCR), nested e em tempo real. O método da PCR nested confirmou a presença do agente em apenas 18,7% dos animais. Enquanto que, em 69,2% das amostras, o DNA da micobactéria envolvida foi detectado pela PCR em tempo real, demonstrando ser neste estudo, o método de maior sensibilidade. Pôde-se concluir ainda que a espécie de micobactéria causadora do Granuloma lepróide canino nos cães brasileiros possui homologia gênica de 100%, quando comparada às amostras provindas de animais de estudos estrangeiros.(AU)

Múltiplas estirpes de isolados de Mycobacteriumbovis identificados por tipagem molecular em bovinos abatidos em matadouros-frigoríficos / Multiple strains of Mycobacterium bovis isolates identified by molecular typing of bovine animals slaughtered in slaughterhouse

O objetivo do presente trabalho foi utilizar métodos bacteriológicos e moleculares para a identificação do Mycobacteriumbovis em lesões observadas em carcaças de bovinos durante a inspeção postmortem de rotina em matadouros-frigoríficos com serviço de inspeção oficial. Foi acompanhado o abate e a inspeção de 825.394 bovinos, sadios ao exame ante mortem pelo serviço de inspeção oficial em dez matadouros-frigoríficos do estado da Bahia. Carcaça de 180 bovinos apresentaram lesões sugestivas de tuberculose e por outras linfadenites. No isolamento bacteriano, 25 amostras apresentaram crescimento disgônico de colônias de coloração creme-amareladas em meio de cultura Stonebrink-Leslie. Desses isolados, 14 foram identificados como M. bovis PCR multiplex e pela técnica do spoligotyping foram discriminados oito diferentes espoligotipos do M. bovis, sendo sete descritos na literatura e um novo spoligotipo sem descrição anterior. O espoligotipo majoritário foi o SB0121, com cinco amostras, sendo descrito no Brasil e em outros países, seguidos por dois clusters, SB295 e SB1055, com dois isolados cada. O espoligotipo SB1145 e SB1648 foram referidos apenas no Brasil e Dinamarca, respectivamente. O espoligotipo SB140 já foi encontrado no Brasil, Argentina, Uruguai e Paraguai. Estes resultados demonstram que os espoligotipos obtidos são compartilhados, até o momento, entre estados brasileiros e entre países da América Latina e Europa. Sendo assim, a discriminação molecular de isolados de M. bovis através do Spoligotyping constitui-se numa ferramenta para estudos epidemiológicos da tuberculose bovina no Estado da Bahia.(AU)

The aim of this study was to use bacteriological and molecular methods to identify Mycobacteriumbovis in lesions observed in cattle carcasses during routine post-mortem inspection in slaughterhouses with official inspection service. It was accompanied the slaughter and inspection of 825,394 cattle, healthy ante mortem examination by the official inspection service in ten slaughterhouses in the state of Bahia. Carcasses of 180 cattle presented lesions suggestive of tuberculosis and other lymphadenitis. In bacterial isolation, 25 samples showed dysgonic growth of colonies of creamy-yellow in medium-Stonebrink Leslie. From these isolates, 14 were identified as M. bovis and the multiplex PCR technique spoligotyping was discriminated against eight different spoligotypes of M. bovis, seven previously described in the literature and a new spoligotypes without former description. The major spoligotypes was SB0121, with five samples which has been described in Brazil and other countries, followed by two clusters, SB295 and SB1055, with two isolates each. The SB1145 and SB1648 spoligotypes were reported only in Brazil and Denmark, respectively. The spoligotypes SB140 has been found in Brazil, Argentina, Uruguay and Paraguay. These results demonstrate that the spoligotypes obtained are shared, so far, among Brazilian states and among Latin America and Europe. Thus, molecular discrimination of isolates of M. bovis by Spoligotyping constitutes a tool for epidemiological studies of bovine tuberculosis in the state of Bahia.(AU)

Influência do antagonismo por bactérias ácido-láticas e da maturação sobre a viabilidade de mycobacterium bovis bcg em queijos tipo minas artesanal.

O consumo de leite cru e seus derivados é considerado um dos principais fatores de risco associados à tuberculose zoonótica, causada por Mycobacterium bovis. No estado de Minas Gerais, o queijo Minas artesanal é o principal produto lácteo artesanal, feito a partir de leite cru e em propriedades rurais. Bactérias ácido-láticas (BAL) são um grupo de micro-organismos originários de produtos lácteos que, além de apresentar funções tecnológicas, também exibem atividade antagonista contra micobactérias. O objetivo desse trabalho foi: (I) avaliar a atividade antagonista in vitro de BAL isoladas de queijo Minas artesanal contra M. bovis BCG; (II) isolar e quantificar M. bovis BCG em queijo tipo Minas artesanal durante a maturação controlada. No ensaio in vitro, foram testadas nove bactérias ácido-láticas em cinco provas in vitro contra M. bovis BCG: antagonismo spot-on-the-lawn, atividade antagonista em caldo 7H9 e leite fermentado e atividade antagonista de sobrenadante filtrado ou autoclavado de BAL. Os micro-organismos Lactobacillus paracasei A1C, Lactobacillus rhamnosus D1C, Lactobacillus plantarum 1CV e L. plantarum 56CV demonstraram os melhores resultados em todos os ensaios. Características intrínsecas a esses lactobacilos, como taxa de crescimento e produção de ácido e bacteriocinas, podem ter sido responsáveis pela diminuição significativa de M. bovis BCG. A viabilidade de M. bovis BCG também foi testada em queijos tipo Minas artesanal, feito a partir de leite cru e soro-fermento, ao longo de 90 dias de maturação. Foram estudados três tratamentos distintos: queijos controle, queijos com adição de M. bovis BCG e queijos com adição de M. bovis BCG e L. paracasei e L. rhamnosus. As análises foram feitas nos dias 1, 8, 15, 22, 29, 45, 60 e 90 pós-produção. Foram avaliados os seguintes parâmetros ao longo da maturação: contagens de BAL, M. bovis BCG, coliformes a 30ºC e a 45°C, Staphylococcus spp. e Staphylococcus coagulase positivo, fungos; presença de Salmonella spp.; pH; concentrações de ácido lático, umidade, extrato seco total e desengordurado, gordura, proteína e cloreto de sódio. M. bovis BCG não foi detectado apenas após 45 dias nos queijos com adição de BAL e após 60 dias nos queijos do tratamento sem BAL. Os principais fatores relacionados à redução da micobactéria foram a presença de BAL e a diminuição da umidade do produto

The consumption of raw milk and its products is considered one of the main risk factors associated with zoonotic tuberculosis in humans, a disease caused by Mycobacterium bovis. In the state of Minas Gerais, Minas artisanal cheese is the main artisanal dairy product, and is made from raw milk in rural properties in the countryside. Lactic acid bacteria (LAB) are a group of microorganisms derived from milk and its products which present inhibitory activity against pathogens, including mycobacteria. The aim of this study was: (I) to assess in vitro antagonistic activity of LAB isolated from Brazilian Minas artisanal cheese against M. bovis BCG; (II) to isolate and to quantify M. bovis BCG in experimental Minas artesanal cheese during controlled ripening. In the in vitro analysis, nine LAB were tested against M. bovis BCG on five different assays: spot on the lawn; antagonistic activity in 7H9 broth and in fermented milk, and antagonistic activity of LAB supernatants. L. paracasei A1C, L. rhamnosus D1C, L. plantarum 1CV and L. plantarum 56CV demonstrated better antagonistic activity in all assays. This could be due to their own characteristics such as growth rate, acid and bacteriocin production. Mycobacterium bovis BCG viability was also tested in Minas artesanal cheeses during ripening for 90 days. Cheeses were made according to three diferente treatments: control treatment, cheeses with M. bovis BCG and cheeses with L. paracasei, L. rhamnosus and M. bovis BCG. The analysis were performed on days 1, 8, 15, 22, 29, 45, 60 and 90 after the cheeses production. The following parameters were examinated throughout the ripening period: counts of LAB, M. bovis BCG, coliforms at 30ºC and 45ºC, Staphylococcus spp., coagulase-positive Staphylococcus, fungi; presence of Salmonella spp.; pH; concentrations of lactic acid, moisture, total dry matter, deffated dry matter, fat, protein and sodium chloride. The micobacteria was not detected only after 45 days in cheeses with LAB and 60 days in cheeses without LAB. The main factors associated with the absence of the micobacteria were the presence of LAB and the decline of the moisture contente of the cheese.

Tuberculose em caprinos e ovinos abatidos no semiárido da Paraíba, Brasil

The aim of this work was to isolate and characterize microorganisms in hypertrophied lymph nodes or gross lesions suggestive of tuberculosis collected from 12 goats and 28 sheep slaughtered at the public slaughterhouse of Patos municipality, Paraíba State, in the Northeast region of Brazil. The identification of mycobacteria was performed by the PRA method (PCR-Restriction Enzyme Analysis). Histopathological examination of lesions was also performed. Organs affected were liver, lung, mammary gland, bladder and mediastinal, mesenteric, submandibular, parotid, popliteal, precrural, prescapular and superficial inguinal lymph nodes. Histopathological examination showed the presence of granulomas in 8 (20.00%) animals. Of the 12 goats, 1 (8.33%) was positive in the culture of mycobacteria, and by PRA method the isolate was classified as belonging to the M. tuberculosis complex. Two (7.14%) sheep were positive for the presence of environmental mycobacteria. There was isolation of Corynebacterium pseudotuberculosis in 8 (66.66%) goats and 17 (60.71%) sheep, and simultaneous isolation of mycobacteria and C. pseudotuberculosis in 1 (8.33%) goat and 1 (3.57%) sheep. The isolation of mycobacteria of the M. tuberculosis complex in goats in this study raises concerns of public health, as professionals involved in handling these animals and the meat and milk consumers are exposed to the risk of infection.

O objetivo do presente trabalho foi isolar e tipificar micro-organismos presentes em linfonodos hipertrofiados ou lesões macroscópicas sugestivas de tuberculose colhidos de 12 caprinos e 28 ovinos abatidos no matadouro público do município de Patos, Paraíba. A identificação de micobactérias foi feita com o método PRA (PCR-Restriction Enzyme Analysis). Também foi realizado o exame histopatológico das lesões. Os órgãos afetados foram fígado, pulmão, glândula mamária, bexiga e linfonodos mediastínicos, mesentéricos, submandibulares, parotídeos, poplíteos, pré-crural, pré-escapular e inguinal superficial. O exame histopatológico apontou a presença de granulomas em 8 (20,00%) animais. Dos 12 caprinos, 1 (8,33%) foi positivo no cultivo de micobactérias, e pelo método PRA o isolado foi classificado como pertencente ao complexo M. tuberculosis. Dois (7,14%) ovinos foram positivos para a presença de micobactérias ambientais. Houve isolamento de Corynebacterium pseudotuberculosis em 8 (66,66%) caprinos e em 17 (60,71%) ovinos, e isolamento simultâneo de micobactérias e C. pseudotuberculosis em 1 (8,33%) caprino e 1 (3,57%) ovino. O isolamento de micobactéria do complexo M. tuberculosis em caprinos no presente trabalho levanta preocupações do ponto de vista de saúde pública, uma vez que profissionais envolvidos na manipulação destes animais, bem como a população consumidora de carne e leite, estão expostos ao risco de infecção.

Tuberculosis in goats and sheep slaughtered in the semiarid of the Paraíba state, Northeast region of Brazil / Tuberculose em caprinos e ovinos abatidos no semiárido da Paraíba, Brasil

The aim of this work was to isolate and characterize microorganisms in hypertrophied lymph nodes or gross lesions suggestive of tuberculosis collected from 12 goats and 28 sheep slaughtered at the public slaughterhouse of Patos municipality, Paraíba State, in the Northeast region of Brazil. The identification of mycobacteria was performed by the PRA method (PCR-Restriction Enzyme Analysis). Histopathological examination of lesions was also performed. Organs affected were liver, lung, mammary gland, bladder and mediastinal, mesenteric, submandibular, parotid, popliteal, precrural, prescapular and superficial inguinal lymph nodes. Histopathological examination showed the presence of granulomas in 8 (20.00%) animals. Of the 12 goats, 1 (8.33%) was positive in the culture of mycobacteria, and by PRA method the isolate was classified as belonging to the M. tuberculosis complex. Two (7.14%) sheep were positive for the presence of environmental mycobacteria. There was isolation of Corynebacterium pseudotuberculosis in 8 (66.66%) goats and 17 (60.71%) sheep, and simultaneous isolation of mycobacteria and C. pseudotuberculosis in 1 (8.33%) goat and 1 (3.57%) sheep. The isolation of mycobacteria of the M. tuberculosis complex in goats in this study raises concerns of public health, as professionals involved in handling these animals and the meat and milk consumers are exposed to the risk [...]

O objetivo do presente trabalho foi isolar e tipificar micro-organismos presentes em linfonodos hipertrofiados ou lesões macroscópicas sugestivas de tuberculose colhidos de 12 caprinos e 28 ovinos abatidos no matadouro público do município de Patos, Paraíba. A identificação de micobactérias foi feita com o método PRA (PCR-Restriction Enzyme Analysis). Também foi realizado o exame histopatológico das lesões. Os órgãos afetados foram fígado, pulmão, glândula mamária, bexiga e linfonodos mediastínicos, mesentéricos, submandibulares, parotídeos, poplíteos, pré-crural, pré-escapular e inguinal superficial. O exame histopatológico apontou a presença de granulomas em 8 (20,00%) animais. Dos 12 caprinos, 1 (8,33%) foi positivo no cultivo de micobactérias, e pelo método PRA o isolado foi classificado como pertencente ao complexo M. tuberculosis. Dois (7,14%) ovinos foram positivos para a presença de micobactérias ambientais. Houve isolamento de Corynebacterium pseudotuberculosis em 8 (66,66%) caprinos e em 17 (60,71%) ovinos, e isolamento simultâneo de micobactérias e C. pseudotuberculosis em 1 (8,33%) caprino e 1 (3,57%) ovino. O isolamento de micobactéria do complexo M. tuberculosis em caprinos no presente trabalho levanta preocupações do ponto de vista de saúde pública, uma vez que profissionais envolvidos na manipulação destes animais, bem como a população consumidora de carne [...]