Reactivity against Sarcocystis neurona and Sarcocystis falcatula-like in horses from Southeastern and Midwestern Brazil / Reatividade contra Sarcocystis neurona e Sarcocystis falcatula-like em equinos das regiões Sudeste e Centro-Oeste do Brasil

Equine protozoal myeloencephalitis (EPM) is a neurological disease caused by Sarcocystis neurona. Immunofluorescence antibody tests (IFATs) have been widely used to identify exposure of horses to S. neurona in Brazil. Here we used IFAT to search for IgG antibodies against Sarcocystis falcatula-like (Dal-CG23) and S. neurona (SN138) in sera from 342 horses sampled in Campo Grande, Mato Grosso do Sul state (Midwestern), and São Paulo, São Paulo state (Southeastern), Brazil. The 1:25 cutoff value was chosen to maximize sensitivity of the test. IgG antibodies against S. neurona were detected in 239 horses (69.88%), whereas IgG antibodies against S. falcatula-like were detected in 177 horses (51.75%). Sera from 132 horses (38.59%) reacted against both isolates. Absence of reactivity was evidenced in 58/342 horses (16.95%). The lower cutoff used, and the presence of opossums infected with S. falcatula-like and Sarcocystis spp. in the regions where the horses were sampled, might justify the high seroprevalence observed here. Owing to the similarity among antigens targeted in immunoassays, reports on S. neurona-seropositive horses in Brazil may also derive from the exposure of horses to other Sarcocystis species. The role of other Sarcocystis species in causing neurological diseases in horses in Brazil remains unclear.(AU)

Mieloencefalite protozoária equina (MPE) é uma doença neurológica causada por Sarcocystis neurona. Reação de imunofluorescência indireta (RIFI) tem sido utilizada para identificar a exposição de equinos à S. neurona no Brasil. Neste estudo, a RIFI foi utilizada para avaliar a presença de anticorpos IgG anti-Sarcocystis falcatula-like (Dal-CG23) e anti-S. neurona (SN138) no soro de 342 equinos de Campo Grande, Mato Grosso do Sul (Centro-oeste) e São Paulo, São Paulo (Sudeste), Brasil. O ponto de corte de 1:25 foi escolhido para maximizar a sensibilidade. Anticorpos IgG anti-S. neurona foram detectados em 239 cavalos (69,88%), enquanto anticorpos IgG anti-S. falcatula-like foram detectados em 177 cavalos (51,75%). O soro de 132 animais (38,59%) reagiu contra ambos os isolados. A ausência de reatividade foi evidenciada em 58/342 animais (16,95%). O baixo ponto de corte e a presença de gambás infectados com S. falcatula-like e Sarcocystis spp., nas regiões onde os equinos foram amostrados podem justificar a alta soroprevalência aqui observada. Devido à similaridade entre antígenos de superfície detectados nos imunoensaios, relatos de soropositividade contra S. neurona no Brasil podem resultar da exposição dos equinos a outras espécies de Sarcocystis. O papel de outras espécies de Sarcocystis como causa de doença neurológica em equinos no Brasil permanece incerto.(AU)

Mieloencefalite protozoária equina: relato de caso / Equine protozoal myeloencephalitis: case report

A Mieloencefalite Protozoária Equina (EPM) é uma doença infecciosa que possui como principal agente o protozoário Sarcocystis neurona. O parasita acomete o sistema nervoso central de equinos podendo causar alterações neurológicas como ataxia, paresia, atrofia muscular e alterações de estado mental. Com ampla distribuição no território nacional, é importante que esta afecção faça parte do diagnóstico diferencial em animais da espécie equina, uma vez que equinos portadores desta afecção podem apresentar desde sinais discretos, como ligeira queda no desempenho, a graves sinais neurológicos. Para isso, o médico veterinário deve compreender suas características e os métodos diagnósticos eficazes para sua identificação. Uma égua da raça Brasileiro de Hipismo, de cinco anos de idade, foi atendida na cidade de Belo Horizonte, em Minas Gerais, com histórico de atrofia na região lombar e garupa. Ainda, foi relatada a presença de gambás na fazenda em que vivia o animal. No exame neurológico foi detectada incoordenação motora de grau 2. O teste SAG ELISA foi realizado, e obtido resultado positivo. Todos os achados e o resultado positivo no teste corroboram o diagnóstico da EPM, o que levou ao tratamento preconizado, e a visível melhora clínica. O objetivo desse trabalho é relatar um caso clínico de EPM em uma égua no município de Belo Horizonte, Minas Gerais, Brasil, levando em consideração a importância do conhecimento dos aspectos epidemiológicos, clínicos, diagnósticos e terapêuticos da doença.

Equine Protozoal Myeloencephalitis (EPM) is an infectious disease whose main agent is the protozoan Sarcocystis neurona. The parasite affects the central nervous system of horses and can cause neurological alterations like ataxia, paresis, muscle atrophy and changes in mental status. With wide distribution in the national territory, it is important that this disease is part of the differential diagnosis in animals of equine species, since equines with this disease can present from discrete signs, such as a slight decrease in performance, to serious neurological signs. That is why the veterinarian must understand its characteristics and effective diagnostic methods for its identification. A five-year-old Brazilian Sport Horse mare was attended in the city of Belo Horizonte, Minas Gerais, with a history of atrophy in the lumbar region and rump. Also, the presence of opossums on the farm where the animal lived was reported. In neurological examination, grade 2 motor incoordination was detected. The SAG ELISA test was performed, and a positive result was obtained. All findings and the positive test result corroborate the diagnosis of EPM, which led to the recommended treatment, and visible clinical improvement. The aim of this paper is to report a clinical case of EPM in a mare in the city of Belo Horizonte, Minas Gerais, Brazil, taking into account the importance of knowledge of the epidemiological, clinical, diagnostic and therapeutic aspects of disease.

Mieloencefalite protozoária equina: relato de caso / Equine protozoal myeloencephalitis: case report

A Mieloencefalite Protozoária Equina (EPM) é uma doença infecciosa que possui como principal agente o protozoário Sarcocystis neurona. O parasita acomete o sistema nervoso central de equinos podendo causar alterações neurológicas como ataxia, paresia, atrofia muscular e alterações de estado mental. Com ampla distribuição no território nacional, é importante que esta afecção faça parte do diagnóstico diferencial em animais da espécie equina, uma vez que equinos portadores desta afecção podem apresentar desde sinais discretos, como ligeira queda no desempenho, a graves sinais neurológicos. Para isso, o médico veterinário deve compreender suas características e os métodos diagnósticos eficazes para sua identificação. Uma égua da raça Brasileiro de Hipismo, de cinco anos de idade, foi atendida na cidade de Belo Horizonte, em Minas Gerais, com histórico de atrofia na região lombar e garupa. Ainda, foi relatada a presença de gambás na fazenda em que vivia o animal. No exame neurológico foi detectada incoordenação motora de grau 2. O teste SAG ELISA foi realizado, e obtido resultado positivo. Todos os achados e o resultado positivo no teste corroboram o diagnóstico da EPM, o que levou ao tratamento preconizado, e a visível melhora clínica. O objetivo desse trabalho é relatar um caso clínico de EPM em uma égua no município de Belo Horizonte, Minas Gerais, Brasil, levando em consideração a importância do conhecimento dos aspectos epidemiológicos, clínicos, diagnósticos e terapêuticos da doença.(AU)

Equine Protozoal Myeloencephalitis (EPM) is an infectious disease whose main agent is the protozoan Sarcocystis neurona. The parasite affects the central nervous system of horses and can cause neurological alterations like ataxia, paresis, muscle atrophy and changes in mental status. With wide distribution in the national territory, it is important that this disease is part of the differential diagnosis in animals of equine species, since equines with this disease can present from discrete signs, such as a slight decrease in performance, to serious neurological signs. That is why the veterinarian must understand its characteristics and effective diagnostic methods for its identification. A five-year-old Brazilian Sport Horse mare was attended in the city of Belo Horizonte, Minas Gerais, with a history of atrophy in the lumbar region and rump. Also, the presence of opossums on the farm where the animal lived was reported. In neurological examination, grade 2 motor incoordination was detected. The SAG ELISA test was performed, and a positive result was obtained. All findings and the positive test result corroborate the diagnosis of EPM, which led to the recommended treatment, and visible clinical improvement. The aim of this paper is to report a clinical case of EPM in a mare in the city of Belo Horizonte, Minas Gerais, Brazil, taking into account the importance of knowledge of the epidemiological, clinical, diagnostic and therapeutic aspects of disease.(AU)

Occurrence of anti Sarcocystis spp., anti Toxoplasma gondii, and anti Neospora spp. antibodies in equines from western Santa Catarina, Brazil / Ocorrência de anticorpos anti Sarcocytis spp., anti Toxoplasma gondii e anti Neospora spp. em equinos da região Oeste de Santa Catarina

Equine raising is generally articulated as a secondary activity on farms, where animals are used for leisure or work. Thus, it is important to consider the health of these animals, seeking to understand which are the main agents that circulate in a given farm or region. In this sense, this study aimed to evaluate the presence of IgG anti-Sarcocystis spp., anti-Toxoplasma gondii, and anti-Neospora spp. antibodies in equines in western Santa Catarina, Brazil. A total of 100 serum samples from horses from 10 farms, located in the municipalities of Faxinal dos Guedes, Xaxim, and Xanxerê were analyzed from June to December 2019. The samples were evaluated by indirect immunofluorescence reaction (IIFR) to detect antibodies of IgG class against the three agents. The results showed that the equines in the region are seropositive against the three studied agents, 11% of which for Sarcocystis spp. 21% for T. gondii, and 20% for Neospora spp. The analysis of the presence of these protozoa in different environments showed that both stabled and extensively raised horses presented signs of contact with the studied agents. Animals that live only in stables had a higher occurrence of IgG anti-Sarcocystis (7/32; 21.88%) and anti-T. gondii (11/32; 34.38%) antibodies. The evaluating of animals raised on pasture, semi-extensively and extensively, showed a higher percentage of seropositivity for N. caninum (9/34; 26.47%). The high occurrence of animals seropositive to the studied protozoa reinforces the importance of controlling and preventing these agents in the region, as they have the potential to cause a high impact on equid farming, mainly involving reproductive losses and equine protozoal myeloencephalitis (EPM).

A criação de equinos geralmente está articulada como atividade secundária nas propriedades, nas quais os animais são utilizados para lazer ou trabalho. Dessa forma é importante considerar a sanidade desses animais, buscando entender quais os principais agentes que circulam em determinada propriedade ou região. Com isso, o presente trabalho teve por objetivo avaliar a presença de anticorpos IgG anti- Sarcocystis spp., anti-Toxoplasma gondii e anti-Neospora spp. em equinos na região Oeste de Santa Catarina. Foram analisadas 100 amostras de soro de equinos de 10 propriedades, localizadas nos municípios de Faxinal dos Guedes, Xaxim e Xanxerê, no período de junho a dezembro de 2019. As amostras foram avaliadas por Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) para detecção de anticorpos da classe IgG contra os três agentes. Os resultados obtidos demonstram que os equinos da região apresentam soropositividade contra os três agentes estudados, sendo 11%, para Sarcocystis spp. 21%, para T. gondii e 20 %, para Neospora spp. Na análise da presença destes protozoários em diferentes ambientes, observou-se que tanto equinos estabulados ou criados de forma extensiva ambos apresentaram já terem entrado em contato com os agentes pesquisados. Animais que vivem apenas estabulados, apresentaram maior ocorrência de anticorpos IgG anti – Sarcocystis (7/32; 21,88%) e anti-T. gondii (34.38%-11/32). Quando avaliados os animais criados a pasto, de forma semi-extensiva e extensiva, houve um percentual maior de soropositividade para N. caninum (26.47% -9/34). A alta ocorrência de animais soropositivos aos protozoários estudados reforça a importância com o controle e prevenção desses agentes na região, uma vez que estes têm potencial para causar grande impacto na equideocultura, envolvendo principalmente as perdas reprodutivas, além da mieloencefalite protozoária equina (EPM).

Sarcocystis neurona, seroprevalence of antibodies in equines and research of oocystis in opossum in Ilhéus - Itabuna microregion, Bahia, Brazil / Sarcocystis neurona, seroprevalência de anticorpos em equinos e pesquisa de oocistos em gambás na microrregião de Ilhéus - Itabuna, Bahia, Brasil

Abstract The aims of this study were to determine the seroprevalence of Sarcocystis neurona antibodies in equines in the Ilhéus-Itabuna microregion (BA), and identify possible factors associated with infection. The presence of sporocysts/oocysts of Sarcocystis spp. was also verified in Didelphis spp. A total of 669 serum samples were collected from equines in 56 properties located in 12 municipalities in the region. Indirect fluorescent antibody test was performed with slides containing merozoites of the S. neurona, using a cut-off titer of 1:80. Occurrence of 7.92% of anti-S. neurona antibodies was observed in the sampled equines. The purposes trade and work were significantly associated with the presence of antibodies (p<0.05), and being used for the purpose of work (21.6%) was considered a risk factor, while being used for the purpose of trade (3.6%) was a protective factor. A total of 25 Didelphis spp. was captured for research on sporocysts/oocysts in stool samples and intestinal scrapings, being all negative. Didelphis spp. were all negative for the presence of Sarcocystis spp. and this circumstance does not change the fact that seroprevalence of S. neurona has been observed in horses raised in the southern Bahia.

Resumo O presente estudo foi realizado na microrregião de Ilhéus-Itabuna, Bahia. Os objetivos deste estudo foram determinar a soroprevalência de anticorpos contra Sarcocystis neurona em equinos da microrregião Ilhéus-Itabuna (BA) e identificar possíveis fatores associados à infecção. A presença de esporocistos/oocistos de Sarcocystis spp. também foi pesquisada em Didelphis spp. Foram coletadas 669 amostras de soro de equinos em 56 propriedades localizadas em 12 municípios da região. Foi utilizada a reação de imunofluorescência indireta (RIFI), utilizando-se lâminas confeccionadas com merozoítos de Sarcocystis neurona (cepa SN138) e ponto de corte na diluição de 1:80. A ocorrência de anticorpos anti- S. neurona, nos equinos amostrados, foi de 7,92%. As finalidades dos animais - comércio e trabalho - apresentaram-se significativas (p<0.05), sendo que a finalidade trabalho (21,6%) foi considerada fator de risco, enquanto a finalidade comércio (3,6%) foi considerada fator de proteção. Foram capturados 25 Didelphis spp., para pesquisa de esporocistos/oocistos em amostras de fezes e raspado de mucosa intestinal. Todos os Didelphis spp. foram negativos para a presença de Sarcocystis spp., mesmo assim essa circunstância não alterou o fato da ocorrência de S. neurona ter sido observada em cavalos criados na mesorregião do sul da Bahia.

Occurrence of anti Sarcocystis spp., anti Toxoplasma gondii, and anti Neospora spp. antibodies in equines from western Santa Catarina, Brazil / Ocorrência de anticorpos anti Sarcocytis spp., anti Toxoplasma gondii e anti Neospora spp. em equinos da região Oeste de Santa Catarina

Equine raising is generally articulated as a secondary activity on farms, where animals are used for leisure or work. Thus, it is important to consider the health of these animals, seeking to understand which are the main agents that circulate in a given farm or region. In this sense, this study aimed to evaluate the presence of IgG anti-Sarcocystis spp., anti-Toxoplasma gondii, and anti-Neospora spp. antibodies in equines in western Santa Catarina, Brazil. A total of 100 serum samples from horses from 10 farms, located in the municipalities of Faxinal dos Guedes, Xaxim, and Xanxerê were analyzed from June to December 2019. The samples were evaluated by indirect immunofluorescence reaction (IIFR) to detect antibodies of IgG class against the three agents. The results showed that the equines in the region are seropositive against the three studied agents, 11% of which for Sarcocystis spp. 21% for T. gondii, and 20% for Neospora spp. The analysis of the presence of these protozoa in different environments showed that both stabled and extensively raised horses presented signs of contact with the studied agents. Animals that live only in stables had a higher occurrence of IgG anti-Sarcocystis (7/32; 21.88%) and anti-T. gondii (11/32; 34.38%) antibodies. The evaluating of animals raised on pasture, semi-extensively and extensively, showed a higher percentage of seropositivity for N. caninum (9/34; 26.47%). The high occurrence of animals seropositive to the studied protozoa reinforces the importance of controlling and preventing these agents in the region, as they have the potential to cause a high impact on equid farming, mainly involving reproductive losses and equine protozoal myeloencephalitis (EPM).(AU)

A criação de equinos geralmente está articulada como atividade secundária nas propriedades, nas quais os animais são utilizados para lazer ou trabalho. Dessa forma é importante considerar a sanidade desses animais, buscando entender quais os principais agentes que circulam em determinada propriedade ou região. Com isso, o presente trabalho teve por objetivo avaliar a presença de anticorpos IgG anti- Sarcocystis spp., anti-Toxoplasma gondii e anti-Neospora spp. em equinos na região Oeste de Santa Catarina. Foram analisadas 100 amostras de soro de equinos de 10 propriedades, localizadas nos municípios de Faxinal dos Guedes, Xaxim e Xanxerê, no período de junho a dezembro de 2019. As amostras foram avaliadas por Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) para detecção de anticorpos da classe IgG contra os três agentes. Os resultados obtidos demonstram que os equinos da região apresentam soropositividade contra os três agentes estudados, sendo 11%, para Sarcocystis spp. 21%, para T. gondii e 20 %, para Neospora spp. Na análise da presença destes protozoários em diferentes ambientes, observou-se que tanto equinos estabulados ou criados de forma extensiva ambos apresentaram já terem entrado em contato com os agentes pesquisados. Animais que vivem apenas estabulados, apresentaram maior ocorrência de anticorpos IgG anti Sarcocystis (7/32; 21,88%) e anti-T. gondii (34.38%-11/32). Quando avaliados os animais criados a pasto, de forma semi-extensiva e extensiva, houve um percentual maior de soropositividade para N. caninum (26.47% -9/34). A alta ocorrência de animais soropositivos aos protozoários estudados reforça a importância com o controle e prevenção desses agentes na região, uma vez que estes têm potencial para causar grande impacto na equideocultura, envolvendo principalmente as perdas reprodutivas, além da mieloencefalite protozoária equina (EPM).(AU)

Mieloencefalite protozoária equina

A mieloencefalite protozoária eqüina é uma doença que acomete o sistema nervoso central (SNC) causando uma infecção. O principal agente etiológico é o Sarcocystis neurona e tem como hospedeiro definitivo o Didelphis albiventris (gambá). Há predominância em alguns sinais clínicos como ataxia e paresia. A rápida avaliação do animal e o rápido diagnóstico podem diminuir algumas complicações e diminuir os sinais clínicos presentes nele.(AU)

Equine protozoal myeloencephalitis is a disease that affects the central nervous system (CNS) causing an infection. The main etiological agent is Sarcocystis neuronal and has its definitive host Didelphis albiventris (opossum). There is a predominance of some clinical signs such as ataxia and paresis. Rapid assessment of the animal and rapid diagnosis may decrease some complications and decrease the clinical signs present in it.(AU)

Mieloencefalite protozoária equina

A mieloencefalite protozoária eqüina é uma doença que acomete o sistema nervoso central (SNC) causando uma infecção. O principal agente etiológico é o Sarcocystis neurona e tem como hospedeiro definitivo o Didelphis albiventris (gambá). Há predominância em alguns sinais clínicos como ataxia e paresia. A rápida avaliação do animal e o rápido diagnóstico podem diminuir algumas complicações e diminuir os sinais clínicos presentes nele.

Equine protozoal myeloencephalitis is a disease that affects the central nervous system (CNS) causing an infection. The main etiological agent is Sarcocystis neuronal and has its definitive host Didelphis albiventris (opossum). There is a predominance of some clinical signs such as ataxia and paresis. Rapid assessment of the animal and rapid diagnosis may decrease some complications and decrease the clinical signs present in it.

Mieloencefalite equina por protozoario (MEP): revisão de literatura / Equine protozoal myeloencephalitis (EPM): literature review

A mieloencefalite protozoária equina (MEP) é uma doença infecciosa causada principalmente pelo protozoário Sarcocystis neurona que produz disfunção neurológica no cérebro e na medula, porém pode ser causada também pelo Neospora caninum e Neospora huguesi. O equino é o hospedeiro acidental e o vetor do protozoário é o gambá (hospedeiros definitivos). Um exame é o teste imunológico do líquor, que proporciona um diagnóstico preciso. No tratamento é utilizado coccidioestatico, antiinflamatório, vitaminas e analgésicos, e evitar que o hospedeiro definitivo tenha acesso aos alimentos dos equinos. O objetivo do presente trabalho foi desenvolver uma revisão de literatura sobre mieloencefalite protozoária equina.(AU)

Equine protozoal myeloencephalitis (EPM) is an infectious disease caused mainly by the protozoan Sarcocystis neuron that produces neurological dysfunction in the brain and marrow, but can also be caused by Neospora caninum and Neospora huguesi. The equine is the accidental host and the vector of the protozoan is the opossum (definitive hosts). An examination is the CSF test, which provides an accurate diagnosis. In the treatment coccidiostatic, anti-inflammatory, vitamins and analgesics are used, and to avoid that the definitive host has access to the food of the horses. The objective of the present work was to develop a literature review on equine protozoal myeloencephalitis.(AU)

Mieloencefalite equina por protozoario (MEP): revisão de literatura / Equine protozoal myeloencephalitis (EPM): literature review

A mieloencefalite protozoária equina (MEP) é uma doença infecciosa causada principalmente pelo protozoário Sarcocystis neurona que produz disfunção neurológica no cérebro e na medula, porém pode ser causada também pelo Neospora caninum e Neospora huguesi. O equino é o hospedeiro acidental e o vetor do protozoário é o gambá (hospedeiros definitivos). Um exame é o teste imunológico do líquor, que proporciona um diagnóstico preciso. No tratamento é utilizado coccidioestatico, antiinflamatório, vitaminas e analgésicos, e evitar que o hospedeiro definitivo tenha acesso aos alimentos dos equinos. O objetivo do presente trabalho foi desenvolver uma revisão de literatura sobre mieloencefalite protozoária equina.

Equine protozoal myeloencephalitis (EPM) is an infectious disease caused mainly by the protozoan Sarcocystis neuron that produces neurological dysfunction in the brain and marrow, but can also be caused by Neospora caninum and Neospora huguesi. The equine is the accidental host and the vector of the protozoan is the opossum (definitive hosts). An examination is the CSF test, which provides an accurate diagnosis. In the treatment coccidiostatic, anti-inflammatory, vitamins and analgesics are used, and to avoid that the definitive host has access to the food of the horses. The objective of the present work was to develop a literature review on equine protozoal myeloencephalitis.

Low prevalence of infection by Sarcocystis neurona in horses from the State of Alagoas, Brazil / Baixa prevalência da infecção por Sarcocystis neurona em cavalos do estado de Alagoas, Brasil

The aim of this study was to determine the prevalence of infection by Sarcocystis neurona in horses and identify potential risk factors. Were analyzed 427 samples from 36 farms in 21 municipalities in the Alagoas State, Brazil. Presence of anti-S. neurona antibodies was diagnosed by indirect immunofluorescence antibody test (IFAT) and was confirmed using the immunoblot test. Risk factors were assessed through investigative questionnaires on animal management on the farms. The prevalence of anti-S.neurona antibodies was 2.8% (confidence interval, CI: 1.5-4.9%) from IFAT and 1.6% (CI:0.8-3.34%) from immunoblot, and there were positive horses on 16.6% of the studied farms. None of the variables studied presented associations with serological status for S. neurona. This is the first report on infection by S. neurona in horses reared in Alagoas, Brazil showing a low exposure to S. neurona in this region, but with significant numbers of foci.(AU)

Objetivou-se neste estudo determinar a prevalência e os fatores de risco associados à infecção por Sarcocystis neurona em equinos. Foram analisadas 427 amostras de 36 propriedades localizadas em 21 municípios do estado de Alagoas. O diagnóstico de anticorpos anti-S. neurona foi realizado pela técnica de Imunofluorescência Indireta (IFI) e confirmada por immunoblot. O estudo dos fatores de risco foi realizado a partir de questionários investigativos sobre o manejo dos animais nas propriedades. A prevalência de anticorpos anti-S. neurona foi de 2,8% (I.C. 1,5-4,9%) na IFI e de 1,6% (I.C. 0,8-3,34%) no immunoblot com equinos positivos em 16,6% das propriedades estudadas. Nenhuma variável estudada apresentou associação com o status sorológico para S. neurona. Este é o primeiro relato da infecção por S. neurona em equinos criados no Estado de Alagoas, Brasil, confirmando que os animais desta região têm baixa exposição a S. neurona, mas com significativo número de focos.(AU)

Occurrences of antibodies against Toxoplasma gondii, Neospora spp. and Sarcocystis neurona in horses and dogs in the municipality of Pauliceia, São Paulo, Brazil / Ocorrências de anticorpos anti-Toxoplasma gondii, Neospora spp. e Sarcocystis neurona em equinos e cães do município de Pauliceia, São Paulo, Brasil

Serum samples from 116 horses and 47 dogs from the municipality of Paulicéia, in the state of São Paulo, Brazil, were examined for anti-Toxoplasma gondii, -Neospora spp. and -Sarcocystis neurona antibodies by means of the indirect fluorescent antibody test (IFAT). The results showed that only one horse was seropositive for T. gondii (0.9%) and anti-Neospora spp. antibodies were detected in three out of the 116 horses tested (2.6%). However, 27 horses showed antibodies against S. neurona (23.8%). Amongst the serum samples from the dogs, 10 out of the 47 dogs showed antibodies against T. gondii (21.3%) and three dogs showed antibodies against Neospora caninum (6.4%). This study reports that in the municipality of Paulicéia dogs in both the rural and the urban area were exposed to T. gondii and N. caninum, while horses in the rural area were exposed to all three protozoa studied, with high occurrence of anti-S. neurona antibodies.(AU)

Amostras de soro de 116 equinos e 47 cães provenientes do município de Paulicéia, São Paulo, foram testadas para detecção de anticorpos anti-Toxoplasma gondii, -Neospora spp. e -Sarcocystis neurona por meio da reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Apenas um equino, entre 116 equinos testados, teve diagnóstico soropositivo para T. gondii (0,9%), e três deles (2,6%) apresentaram anticorpos anti-Neospora spp. Entretanto, 27 equinos apresentaram anticorpos anti-S. neurona (23,8%). Nas amostras de cães, dez dos 47 animais apresentaram anticorpos anti-T. gondii (21,3%) e três tiveram diagnóstico soropositivo para Neospora caninum (6,4%). Este estudo relata que no município de Paulicéia os cães das áreas urbana e rural foram expostos a T. gondii e N. caninum, enquanto os equinos da área rural foram expostos aos três protozoários estudados, com alta ocorrência de anticorpos anti- S. neurona.(AU)

Occurrences of antibodies against Toxoplasma gondii, Neospora spp. and Sarcocystis neurona in horses and dogs in the municipality of Pauliceia, São Paulo, Brazil / Ocorrências de anticorpos anti-Toxoplasma gondii, Neospora spp. e Sarcocystis neurona em equinos e cães do município de Pauliceia, São Paulo, Brasil

Serum samples from 116 horses and 47 dogs from the municipality of Paulicéia, in the state of São Paulo, Brazil, were examined for anti-Toxoplasma gondii, -Neospora spp. and -Sarcocystis neurona antibodies by means of the indirect fluorescent antibody test (IFAT). The results showed that only one horse was seropositive for T. gondii (0.9%) and anti-Neospora spp. antibodies were detected in three out of the 116 horses tested (2.6%). However, 27 horses showed antibodies against S. neurona (23.8%). Amongst the serum samples from the dogs, 10 out of the 47 dogs showed antibodies against T. gondii (21.3%) and three dogs showed antibodies against Neospora caninum (6.4%). This study reports that in the municipality of Paulicéia dogs in both the rural and the urban area were exposed to T. gondii and N. caninum, while horses in the rural area were exposed to all three protozoa studied, with high occurrence of anti-S. neurona antibodies.(AU)

Amostras de soro de 116 equinos e 47 cães provenientes do município de Paulicéia, São Paulo, foram testadas para detecção de anticorpos anti-Toxoplasma gondii, -Neospora spp. e -Sarcocystis neurona por meio da reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Apenas um equino, entre 116 equinos testados, teve diagnóstico soropositivo para T. gondii (0,9%), e três deles (2,6%) apresentaram anticorpos anti-Neospora spp. Entretanto, 27 equinos apresentaram anticorpos anti-S. neurona (23,8%). Nas amostras de cães, dez dos 47 animais apresentaram anticorpos anti-T. gondii (21,3%) e três tiveram diagnóstico soropositivo para Neospora caninum (6,4%). Este estudo relata que no município de Paulicéia os cães das áreas urbana e rural foram expostos a T. gondii e N. caninum, enquanto os equinos da área rural foram expostos aos três protozoários estudados, com alta ocorrência de anticorpos anti- S. neurona.(AU)

Intra-uterine exposure of horses to Sarcocystis spp. antigens / Exposição intrauterina ao Sarcocystis spp. em equinos

The aim of this study was to examine the intra-uterine exposure to Sarcocystis spp. antigens, determining the number of foals with detectable concentrations of antibodies against these agents in the serum, before colostrum ingestion and collect data about exposure of horses to the parasite. Serum samples were collected from 195 thoroughbred mares and their newborns in two farms from southern Brazil. Parasite specific antibody responses to Sarcocystis antigens were detected using the indirect immunofluorescent antibody test (IFAT) and immunoblot analysis. In 84.1% (159/189) of the pregnant mares and in 7.4% (14/189) of foals we detected antibodies anti-Sarcocystis spp. by IFAT. All samples seropositive from foals were also positive in their respective mares. Serum samples of seropositive foals by IFAT, showed no reactivity on the immunoblot, having as antigens S. neurona merozoites. In conclusion, the intra-uterine exposure to Sarcocystis spp. antigens in horses was demonstrated, with occurrence not only in mares, but also in their foals, before colostrum ingestion these occurrences were reduced.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar a exposição intrauterina ao Sarcocystis spp., para determinar o número de potros que possuem concentrações detectáveis de anticorpos contra esses agentes no soro, antes da ingestão do colostro, por meio da coleta de dados sobre a exposição a esses protozoários nos equinos. Amostras de soro foram coletadas de 195 éguas puro-sangue e seus respectivos potros recém-nascidos, em duas fazendas localizadas na região Sul do Brasil. Os testes utilizados na detecção de anticorpos específicos para o Sarcocystis foram a reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e análise por meio de immunoblot. Pela RIFI, em 84,1% (159/189) das éguas e em 7,4% (14/189) dos potros foram detectados anticorpos anti-Sarcocystis spp. Todas as amostras soropositivas dos potros também foram positivas para suas respectivas mães. As amostras de soro dos potros soropositivos na RIFI, não apresentaram reatividade no immunoblot, tendo como antígenos merozoítos de S. neurona. Em conclusão, foi demonstrada a exposição intrauterina de Sarcocystis spp. em equinos, com ocorrência em éguas, porém, em seus respectivos potros, antes da ingestão de colostro a ocorrência foi reduzida.(AU)

Avaliação de dois métodos de estocagem de amostras teciduais para diagnóstico molecular de Sarcocystis spp

No Brasil existem três espécies de gambás, Didelphis aurita, Didelphis albiventris e Didelphis marsupialis. Entre os diversos agentes patológicos que estes hospedeiros albergam, estão os protozoários do gênero Sarcocystis de grande interesse na medicina veterinária por causar a Mieloencefalite Protozoária Equina (EPM). Com a evolução dos métodos de diagnóstico a biologia molecular possibilitou a identificação de espécies em hospedeiros diferentes. Com isso o presente trabalho tem por objetivo avaliar dois métodos de conservação tecidual com a finalidade de melhorar o diagnóstico molecular. Para tanto, foram utilizados cinco gambás D. aurita para a obtenção dos esporocistos contidos na lâmina própria do intestino delgado. Estes foram extraídos da mucosa após digestão da mesma com hipoclorito de sódio 10%. Após a contagem e morfometria dos esporocistos, cada amostra foi padronizada em inóculos contendo 60 e 120 esporocistos em 1 mL, que foram inoculados em periquitos australianos (Melopsittacus undulatus). Dois periquitos foram inoculados com solução de soro fisiológico, perfazendo um total de 12 periquitos. De todos os periquitos que morreram ou foram eutanasiados no período de quatro meses, foram coletadas amostras de tecidos e conservadas a temperatura de -20 ºC com e sem a imersão em álcool absoluto. Foi realizada a biologia molecular dos esporocistos com o primer ITS 18S 9L/1H. Utilizando este mesmo primer foi realizado o diagnóstico molecular dos seguintes tecidos: coração, língua, coxa, peito, fígado, pulmão e cérebro, com o intuito de comparar a eficiência dos métodos de conservação. Como resultado dos valores morfométricos em micrômetros dos esporocistos obtivemos o comprimento médio de 11,2 ± 0,9 (7-15,6) e largura média de 7,7 ± 0,6 (3,8-10,9). Todas as amostras de raspado de mucosa contendo os esporocistos foram positivas para a PCR utilizando o primer ITS. O método de conservação a -20°C sem e com imersão em álcool absoluto apresentaram eficiência na preservação do DNA dos tecidos, embora não foram encontradas diferenças estatísticas significativas entre os dois métodos avaliados. Nas infecções agudas foram observadas lesões histopatológicas em região hepática e pulmonar, com formação de merontes nos pulmões. Nas infecções crônicas foram encontrados 20 cistos maduros e imaturos nos tecidos do peito, coxa e da língua que mensurados tiveram valores em micrômetros de 25,4 ± 7,1 (12,7-34,8) de largura e 45,9 ± 24,6 (16,8-113,0) de comprimento. Com os resultados obtidos podemos inferir que os gambás D. aurita estão parasitados com espécies de Sarcosystis spp. que tem aves como hospedeiro intermediário.

In Brazil there are three species of possums, Didelphis aurita, Didelphis albiventris and Didelphis marsupialis. Among the various pathological agents that these hosts harbor, protozoa of the genus Sarcocystis is object of great interest in veterinary medicine for causing Equine Protozoan Myeloencephalitis (EPM). With the evolution of diagnostic methods, molecular biology has enabled to identify species in different hosts. Thus, the present work aims to evaluate two methods of tissue conservation in order to improve the molecular diagnosis. For this purpose, five D. aurita possums were used to obtain the sporocysts contained in the small intestine lamina propria. These were extracted from the mucosa after digestion with 10% sodium hypochlorite. After sporocyst counting and morphometry, each sample was standardized on inocula containing 60 and 120 sporocysts in 1 mL, which were inoculated into budgerigars (Melopsittacus undulatus). Two parakeets were inoculated with saline solution, making a total of 12 parakeets. From all the parakeets that died or were euthanized in the period of four months, tissue samples were collected and kept at -20 ºC with and without immersion in absolute alcohol. Molecular biology of the sporocysts was performed with the ITS 18S 9L / 1H primer. Using this same primer, the molecular diagnosis of the following tissues was performed: heart, language, thigh, chest, liver, lung and brain, in order to compare the efficiency of conservation methods. As a result of the morphometric values in micrometers of the sporocysts, we obtained an average length of 11.2 ± 0.9 (7-15.6) and an average width of 7.7 ± 0.6 (3.8-10.9). All mucosa scrape samples containing sporocysts were positive for PCR using the ITS primer. The method of conservation at -20 ° C without and with immersion in absolute alcohol showed efficiency in the preservation of DNA tissue, although no statistically significant differences were found between the two methods evaluated. In acute infections, histopathological lesions were observed in the hepatic and pulmonary regions, with formation of merons in the lungs. In chronic infections, 20 mature and immature cysts were found in the chest thigh and tongue tissues, which were measured with micrometers values of 25.4 ± 7.1 (12.7-34.8) in width and 45.9 ± 24.6 (16.8-113.0) in length. With the results obtained, its possible to infer that D. aurita possums are parasitized with Sarcosystis spp. species that have birds as an intermediate host.

Transmissão vertical de Toxoplasma gondii, Neospora spp. e Sarcocystis neurona em éguas da raça Puro Sangue Inglês (PSI)

As doenças infecto-parasitárias causam prejuízos na criação de equinos. Os protozoários Toxoplasma gondii, Neospora spp. e Sarcocystis neurona estão relacionados às doenças neurológicas e reprodutivas em equinos. Em cavalos, T. gondii e Neospora spp. podem ser transmitidos via horizontal e vertical. Sarcocystis neurona causa a Mieloencefalite Protozoária Equina (MEP). Existem poucos estudos que avaliaram a presença dos protozoários em placentas de éguas e até o presente, não foram encontrados trabalhos em amostras de líquido amniótico. A presente dissertação foi dividida em dois capítulos. O capítulo I objetivou detectar e monitorar os anticorpos anti-Toxoplasma gondii, anti-Neospora spp. e anti-Sarcocystis neurona em éguas prenhas e verificar a exposição intra-uterina dos parasitas, pela pesquisa de anticorpos específicos em amostras pré colostrais de potros. Amostras de soro de 31 éguas prenhas foram avaliadas em três momentos: (1º) dois meses antes do parto; (2º) um mês antes do parto e (3º) no dia do parto. As amostras séricas dos potros foram analisadas antes da ingestão do colostro. O método RIFI (Reação de Imunofluorescência Indireta), nos soros maternos foi realizado nas diluições 1:64 para T. gondii, 1:50 para Neospora spp. e 1:16 para S. neurona. Os soros pré colostrais dos potros foram avaliados sem diluição e na diluição 1:16 para os três protozoários. Nenhuma égua apresentou anticorpos para T. gondii. Em 19,35% das éguas, verificou-se anticorpos anti-Neospora spp. e 29,03% anticorpos anti-S. neurona. Nenhum anticorpo foi detectado nas amostras pré colostrais dos potros. Durante o período gestacional, as éguas apresentaram flutuações nos títulos de anticorpos anti-Neospora spp. e anti-S. neurona, com maior soroprevalência no 9º mês para ambos. Neste estudo constatou a presença de anticorpos anti-Neospora spp. e anti-S. neurona em éguas. Nos potros não foram detectados anticorpos. O monitoramento das éguas prenhas soropositivas é importante para a sanidade do animal. O capítulo II objetivou detectar os protozoários Toxoplasma gondii, Neospora spp e Sarcocystis neurona em placentas equinas e líquido amniótico, e descrever lesões causadas pelos parasitas. Amostras de soro de 31 éguas prenhas foram avaliadas pelo método de RIFI como descrito anteriormente. A PCR para os três protozoários foi realizada em amostras de placentas (pool) de 31 éguas e em 30 amostras de líquido amniótico. Para análise histológica foram coletadas quatro regiões da placenta (corno prenhe, corno não prenhe, corpo do útero e estrela cervical). Estruturas parasitárias (cistos) foram observadas em cinco placentas. Na PCR quatro amostras de placenta foram positivas para Neospora spp. e uma para S. neurona. A PCR dos líquidos amnióticos resultou em sete amostras positivas, uma para T. gondii, cinco para Neospora spp. e uma S. neurona. Neospora spp. e Sarcocystis neurona foram detectados em tecidos placentários, demonstrando que estes infectam placenta equina. T. gondii, Neospora spp. e S. neurona foram detectados em amostras de líquido amniótico. Sugere-se que a transmissão transplacentária de T. gondii, Neospora spp. e Sarcocystis neurona ocorra em éguas.

Infectious-parasitic diseases cause damage to horse breeding. Toxoplasma gondii, Neospora spp. and Sarcocystis neurona are related to neurological and reproductive diseases in horses. In horse T. gondii and Neospora spp. can be transmitted through horizontal and vertical routes. S. neurona causes Equine Protozoan Myeloencephalitis (EPM). There are few studies that have evaluated the presence of protozoa in mares placentas and to date, no studies have been found in samples of amniotic fluid. This dissertation had been divided into two chapters. Chapter I aimed to detect and monitor the antibodies anti-Toxoplasma gondii, antiNeospora spp. and anti-Sarcocystis neurona in pregnant mares and to verify the intrauterine exposure of the parasites by detecting specific antibodies in pre-colostral samples of the foals. Serum samples from 31 pregnant mares were evaluated in three moments: (1st) two months before delivery; (2nd) one month before delivery and (3rd) on the day of the birth. The serum samples from foals were analyzed before ingesting colostrum. The IFAT method (Indirect Immunofluorescence Antibody Test) in maternal serum was performed at 1:64 dilutions for T. gondii, 1:50 for Neospora spp. and 1:16 for S. neurona. Pre colostral serum from foals were tested pure and at 1:16 dilution for the three protozoa. No mare showed antibodies to T. gondii. In 19.35% of the mares were verified anti-Neospora spp.; and 29.03% were verified with anti-S. neurona antibodies. No antibodies were detected in the pre colostral samples of the foals. During the gestational period, the mares showed fluctuations in the anti-Neospora spp. and anti-S. neurona, with higher seroprevalence in the 9th month for both. This study has established the presence of anti-Neospora spp. and anti-S. neurona in mares.This study has established the presence of anti-Neospora spp. and anti-S. neurone in mares. In foals, no antibodies were detected. Monitoring of pregnant seropositive mares is important for the animal's health. Chapter II aimed to detect the protozoa Toxoplasma gondii, Neospora spp. and Sarcocystis neurona in equine placentas and amniotic fluid, and to describe the lesions caused by the parasites. Serum samples from 31 pregnant mares were evaluated by the IFAT method as previously described. PCR, for the three protozoans, was performed from the placental samples (pool) of 31 mares and 30 samples of amniotic fluid. For histological analysis, four regions (pregnant horn, not pregnant horn, body of the uterus and cervical star) of the placenta were collected. Parasitic structures (cysts) were observed in five placentas. In PCR, four placenta samples were positive for Neospora spp., and one for S. neurona. The amniotic fluids PCR resulted in seven positive sample, one for T gondii, five for Neospora spp. and a S. neurona. Neospora spp. and Sarcocystis neurona were detected in placental tissues, demonstrating that these infect mares placentas. T. gondii, Neospora spp. and S. neurona were detected in samples of amniotic fluid. It is suggested that the transplacental transmission of Toxoplasma gondii, Neospora spp. and Sarcocystis neurona occurs in mares.

Caracterização patológica e parasitológica de casos de mieloencefalite protozoária equina na região sul do Brasil

A mieloencefalite protozoária equina (MEP) é uma doença neurológica que acomete equinos no continente americano. MEP é frequentemente causada por Sarcocystis neurona e ocasionalmente por Neospora hughesi. A maior parte do conhecimento atual sobre MEP é proveniente de estudos conduzidos na América do Norte, enquanto dados referentes à MEP na América do Sul são escassos. O objetivo deste estudo é descrever os aspectos epidemiológicos, patológicos, imuno-histoquímicos e moleculares de casos de MEP em equinos submetidos à necropsia entre os anos de 2010 e 2017 na região sul do Brasil. No período estudado, 13 casos histologicamente compatíveis com MEP foram diagnosticados, representando 2,64% do total de diagnósticos em equinos e 34,21% das doenças inflamatórias afetando o sistema nervoso central (SNC) nesta espécie. MEP correspondeu à segunda condição inflamatória do SNC mais comum em equinos, apenas atrás da infecção pelo vírus da raiva. A idade mediana dos equinos afetados foi de oito anos, a maioria dos animais acometidos eram machos (10/13), e a doença foi observada ao longo de todo o ano. Lesões macroscópicas, caracterizadas por áreas multifocais de coloração avermelhada foram detectadas na medula espinhal em cinco equinos. Lesões microscópicas apresentaram-se de forma multifocal em todos os casos, e foram mais frequentemente observadas em segmentos da medula espinhal e no rombencéfalo. As lesões encontravam-se restritas a medula espinhal e ao encéfalo em três e dois casos, respectivamente. Protozoários intralesionais consistentes com S. neurona foram observados em secções histológicas em cinco equinos, e imunomarcação positiva para S. neurona foi observada em onze casos (11/13). Através de técnicas moleculares, cinco casos positivos para o ITS-1 e para o 18S rRNA foram detectados. Após o sequenciamento obtiveram-se fragmentos de qualidade de duas amostras referentes ao gene 18S rRNA e quatro referentes ao ITS-1. No presente estudo, o agente associado com casos de MEP detectado por imuno-histoquímica e técnicas moleculares foi Sarcocystis spp. Portanto, MEP deve ser incluída entre os diagnósticos diferenciais de doenças neurológicas em equinos na região sul do Brasil, mesmo em casos em que parasitas não são prontamente observados na avaliação histológica.

Equine protozoal myeloencephalitis (EPM) is a neurologic disease affecting horses in the American continent. EPM it is often caused by Sarcocystis neurona, and occasionally by Neospora hughesi infection. Most current knowledge regarding EPM comes from studies conducted in North America, while in South America these data are scant. The aim of this study is to describe the epidemiological, pathological, immunohistochemical and molecular findings of EPM cases in horses necropsied in Southern Brazil from 2010 to 2017. In the studied period, 13 cases compatible with EPM were diagnosed, representing 2.64% of the overall postmortem diagnosis in horses, and 34.21% of the central nervous system (CNS) inflammatory conditions in the species. EPM corresponded to the second most common cause of CNS inflammatory disease in horses, only after rabies virus infection. Median age of affected horses was of eight years, males were overrepresented (10/13), and the disease was observed all year round. Gross lesions were detected in the spinal cord in five horses (5/13), and these were characterized by multifocal red areas. Microscopic lesions were multifocal in all cases, and these were more frequently observed in the spinal cord segments and in the rhombencephalon. Lesions were restricted to the spinal cord and to the brain in three and two cases, respectively. Intralesional protozoans consistent with S. neurona were seen in histopathological sections in five horses, and positive immunostaining for S. neurona was observed in eleven cases (11/13). Through molecular techniques, five positive cases for the ITS-1 and 18S rRNA genes were detected. After sequencing, two quality samples of 18S rRNA gene and four of the ITS-1 were obtained. In the present study, the only agent associated with EPM cases detected by immunohistochemistry, and molecular analysis was Sarcocystis spp. Therefore, EPM should be included among the differential diagnosis of neurological disease in horses in Southern Brazil, even in the cases where parasites are not readily seen in the histological examination

Perfil proteômico do líquido cefalorraquidiano após transplantes intratecal de células estromais mesenquimais multipotentes em equinos

Estudos com células estromais mesenquimais multipotentes (MSCs) estão em crescente progresso devido às suas propriedades imunomoduladoras, antiinflamatórias, antiapoptóticas e de regeneração tecidual, tornando essa modalidade de terapia celular promissora no tratamento de diversas doenças. Devido à limitada capacidade regenerativa do sistema nervoso central (CNS), causando sequelas funcionais, as MSCs estão sendo investigadas como uma alternativa terapêutica para condições neurológicas inflamatórias, vasculares, traumáticas e degenerativas em diversas espécies animais. A Mieloencefalite protozoária equina (EPM) causada por ambos os protozoários do filo Apicomplexa, Sarcocystis neurona e Neospora hughesi, permanece como uma importante doença neurológica dos equinos nas Américas, embora a maioria dos casos seja devida à infecção por S. neurona. A aplicação da proteômica com sua gama de ferramentas na clínica de equinos pode contribuir significativamente para o entendimento de processos patológicos e facilitar a descoberta de novos alvos terapêuticos ou marcadores diagnósticos. Neste contexto, os objetivos deste estudo foram avaliar o perfil proteômico do líquido cefalorraquidiano (CSF) antes e após múltiplos transplantes intratecal de MSCs em equinos hígidos e o perfil proteômico do CSF de equinos cronicamente afetados pela EPM. Doze cavalos adultos clinicamente saudáveis foram divididos aleatoriamente em três grupos experimentais: grupo DPBS (DPBS ou control; n = 4) onde a solução salina tamponada com fosfato de Dulbecco's (DPBS) foi administrada pela via intratecal; grupo AD-G (AD-G; n = 4), no qual foram realizados transplantes intratecal com MSCs alogênicas de tecido adiposo; e grupo BM-G (BM-G; n = 4), no qual foram realizados transplantes intratecal com MSCs alogênicas de medula óssea. Todos os grupos experimentais receberam três tratamentos seriados (DPBS ou MSCs) com intervalo de 30 dias entre eles. As amostras de CSF foram coletadas dos grupos experimentais imediatamente antes do primeiro tratamento (denominado momento M0 ou Before) e 30 dias após o terceiro tratamento (denominado momento M90 ou After). Ao mesmo tempo, os CSF de 16 equinos clinicamente saudáveis e de 9 equinos cronicamente afetados por EPM foram coletados da subaracnóide, denominados grupo Control (Control; n = 16) e grupo EPM (EPM; n = 9) respectivamente. Cada uma das amostras de CSF do grupo Control e do grupo EPM foram individualmente ressuspendidas e agrupadas em pool, totalizando dois pool representativos de cada um dos grupos experimentais e denominados igualmente (Control e EPM) para avaliar o perfil proteômico dos mesmos. De modo similar, os três grupos que receberam transplantes e coletas de CSF nos dois distintos momentos, foram agrupados em seis pool representativos para cada grupo e momento. Considerando a plataforma proteômica utilizada, os três grupos foram pareadamente comparados: DPBS After vs. Before, AD-G After vs. Before e BM-G After vs. Before, sendo encontradas 208, 211 e 131 proteínas em cada comparação, respectivamente. Do mesmo modo, na comparação pareada do CSF dos grupos EPM e Control, EPM vs. Control, 201 proteínas foram identificadas e 33 proteínas observadas exclusivamente no CSF do grupo EPM. Ademais, também foi observada na comparação pareada dos grupos DPBS, BM-G e EPM, a presença dos três tipos de enolases interagindo entre si (ENO 1, ENO 2 e ENO 3), sendo em DPBS e BM-G como exclusivas do momento After e no grupo EPM como exclusivas dele. Neste contexto, este estudo ao avaliar os perfis proteômico do CSF antes e após múltiplos transplantes intratecal de MSCs em equinos hígidos e do CSF de equinos cronicamente afetados pela EPM permitiu identificar as enolases como potenciais marcadores de lesão neural e/ou de EPM. Novos estudos devem ser realizados para confirmar estes achados e avançar no conhecimento dos efeitos da terapia celular com MSCs pela via intratecal, para o tratamento de lesões neurológicas em equinos.

Multipotent mesenchymal stromal cell (MSCs) studies are under increasing progress because of their immunomodulatory, anti-inflammatory, antiapoptotic and tissue regeneration properties, making this modality of cell therapy promising in the treatment of various diseases. Due to the limited regenerative capacity of the central nervous system (CNS), causing functional sequelae, MSCs are being investigated as a therapeutic alternative for inflammatory, vascular, traumatic and degenerative neurological conditions in various animal species. Equine protozoal myeloencephalitis (EPM) caused by both protozoa of the Apicomplexa phylum, Sarcocystis neurona and Neospora hughesi, remains an important neurological disease in horses in the Americas, although most cases are due to S. neurona infection. The application of proteomics with its range of tools in the equine clinic can contribute significantly to the understanding of pathological processes and facilitate the discovery of new therapeutic targets or diagnostic markers. In this context, the objectives of this study were to evaluate the proteomic profiling of cerebrospinal fluid (CSF) before and after multiple intrathecal transplantations of MSCs in healthy horses and the CSF proteomic profiling of horses chronically affected by EPM. Twelve clinically healthy adult horses were randomly divided into three experimental groups: DPBS (DPBS or control; n = 4), in which intrathecal "transplants" with Dulbecco's phosphate buffered saline (DPBS) were performed; group AD-G (AD-Gs; n = 4), in which intrathecal transplants were performed with allogeneic adipose tissue MSCs; and BM-G group (BM-G; n = 4), in which intrathecal transplants were performed with allogeneic bone marrow MSCs. All experimental groups received three serial treatments (DPBS or MSCs) with a 30-day interval between them. CSF samples were collected from the experimental groups immediately before the first treatment (called the M0 or Before) and 30 days after the third treatment (called the M90 or After). At the same time, CSF of 16 healthy horses and 9 horses chronically affected by EPM were collected from the subarachnoid, Control group (Control; n = 16) and EPM group (EPM; n = 9) respectively. Each of the CSF samples from the Control group and from the EPM group were individually resuspended and pooled, totalizing two representative pools of each one the experimental groups and also named (Control and EPM) to evaluate their proteomic profilings. Similarly, the three groups that received transplants and CSF collections at two different times were grouped into six representative pools for each group and time. Considering the proteomic platform used, the three groups were similarly compared: DPBS After vs. Before, AD-G After vs. Before and BM-G After vs. Before, being found 208, 211 and 131 proteins in each comparison, respectively. Likewise, in the paired comparison of the CSF of the EPM and Control groups, EPM vs. Control, 201 proteins were identified, and 33 proteins were observed exclusively in the CSF of the EPM group. In addition, the presence of the three types of enolases interacting with each other (ENO 1, ENO 2 and ENO 3) was also observed in the comparison of the DPBS, BM-G and EPM groups, being exclusives in DPBS and BM-G at time After and in the EPM group as its exclusively. In this context, this study, when evaluating the proteomic profilings of CSF before and after multiple intrathecal transplantations of MSCs in healthy horses and CSF of horses chronically affected by EPM, allowed the identification of enolases as potential markers of neural and / or EPM injury. Further studies should be performed to confirm these findings and to advance the knowledge of the effects of intrathecal cell therapy with MSCs for the treatment of neurological lesions in horses.

EXPOSIÇÃO DE CÃES A Sarcocystis neurona NA ZONA RURAL DO MUNICÍPIO DE ILHÉUS, BAHIA

OLIVEIRA DEIRÓ, C. M. C. Exposição de cães a Sarcocystis neurona na zona rural do município de Ilhéus, Bahia. Salvador, 2018. 44p. Dissertação (Mestrado em Ciência Animal nos Trópicos. Escola de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal da Bahia. Sarcocystis neurona é um protozoário coccídio, considerado o principal causador da mieloencefalite protozoária equina. A infecção por S. neurona e indução de doença neurológica em cães têm sido relatadas na América do Norte, sendo o cão considerado um hospedeiro aberrante ou acidental do protozoário. Objetivou-se com este estudo testar soros caninos provenientes da zona rural de Ilhéus, Bahia, quanto à reatividade a S. neurona. Avaliou-se também a reatividade cruzada com o protozoário Sarcocystis cruzi, que tem cães como hospedeiros definitivos. Foram testadas 353 amostras de soro caninos pela técnica da reação de imunofluorescência indireta (RIFI) com ponto de corte de 1:25, utilizando-se merozoítos de S. neurona produzidos em cultivo celular e bradizoítos de S. cruzi obtidos a partir de cistos de miocárdio bovino confirmados na PCR e sequenciamento, e 14 amostras aleatórias foram testadas no WB/imunoblot. Os resultados obtidos foram comparados com os seguintes dados dos cães: idade, sexo, domicílio, hábito de caça, contato com cavalos, bovinos e animais silvestres, zona de mata e disfunção neurológica para traçar um perfil epidemiológico. Os resultados da RIFI indicaram uma frequência de animais expostos a S. neurona de 3,39% (12/353) e a S. cruzi de 4,81% (17/353). Duas amostras (0,56%) foram positivas para ambas as espécies. No WB/imunoblot bandas de proteínas específicas para S. neurona foram observadas em oito amostras reativas na RIFI. A análise estatística demonstrou associação entre a variável contato com animais silvestres e a presença de anticorpos anti-S. neurona. Em conclusão, os soros dos cães foram reativos a antígenos de S. neurona e S. cruzi na região estudada, sem evidência de reação sorológica cruzada entre os parasitos na RIFI, porém, apresentam reatividade cruzada no imunoblot. Provavelmente, os animais foram expostos a formas infectantes de ambos os parasitos ou a espécies de Sarcocystis geneticamente semelhantes.

OLIVEIRA DEIRÓ, C. M. C. Dogs exposure to Sarcocystis neurona in rural areas of the city of Ilhéus, Bahia. Salvador, 2018. 44p. Dissertação (Mestrado em Ciência Animal nos Trópicos. Escola de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal da Bahia. Sarcocystis neurona is a coccidian parasite that is the major cause of equine protozoal myeloencephalitis. Infection by S. neurona and induction of neurologic disease in dogs have been reported in North America, where the dog is considered an aberrant or accidental host of the protozoa. The aim of this study was to test dog sera from rural areas of the city of Ilhéus, Bahia, to S. neurona .Potential serologic cross-reactivity to the protozoan Sarcocystis cruzi was also evaluated, as the dog is definitive host of this parasite. Sera from 353 dogs were tested by immunofluorescent antibody technique (IFAT) to S. neurona with a cut of 1:25, using merozoites produced in cell culture, and to S. cruzi, employing bradyzoites extracted from bovine myocardium confirmed by PCR and sequencing, and 14 samples were random chosen for immunoblot. The results obtained were evaluated with the following data about the dogs: age, gender, residence, hunting habits, contact with horses, stockyard and wild animals, inhabiting close to forest and neurological disease in order to gather better epidemiological information. The results obtained by IFAT indicated a frequency of 3.83% (12/353) of dogs exposed to S. neurona, and 4.81% (17/353) to S. cruzi. Two samples (0.56%) were simultaneously positive for both antigens. In the immunoblot, proteins bands for S. neurona were observed in eight samples that tested positive in IFAT. Statistical analysis indicate association between the variable contact with wild animals and antibodies to S. neurona. In conclusion, sera from dogs were reactive to S. neurona and S. cruzi antigens in the studied region, without evidence of serologic cross-reactivity between the parasites by IFAT, however, cross-reactivity occurred in immunoblot. The dogs were probably exposed to infectivity forms from both parasites or to genetically-related Sarcocystis species.

COMPARAÇÃO ANTIGÊNICA ENTRE Sarcocystis neurona E Sarcocystis falcatula-like ISOLADO IN VITRO NA BAHIA

BORGES-SILVA, W. Comparação antigênica entre Sarcocystis neurona e uma cepa de Sarcocystis falcatula-like isolado in vitro na Bahia. Salvador, 2019. 56p. Dissertação (Mestrado em Ciência Animal nos Trópicos). Escola de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal da Bahia. Sarcocystis neurona é um protozoário coccídio, considerado o principal causador da mieloencefalite protozoária equina. Gambás do gênero Didelphis são os hospedeiros definitivos deste protozoário. O Brasil possui, pelo menos, quatro Didelphis spp., favorecendo uma maior recombinação genética entre as espécies de Sarcocystis. Objetivou-se com este estudo comparar antigenicamente um isolado nacional de Sarcocystis falcatula-like (Sarco-BA1) com potencial para uso em testes sorológicos com uma cepa norte-americana de S. neurona (SN138). Foram testadas 409 amostras (217 provenientes da Bahia e 192 do Rio Grande do Sul) de soro equino pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI), utilizando-se merozoítos produzidos em cultivo celular dos dois parasitos. Os resultados obtidos na RIFI indicam uma frequência de animais expostos a S. neurona de 17,1%, a S. falcatula-like de 10,5%, e aos dois parasitos simultaneamente, de 6,1%. Soros de 13 animais (6 positivos para S. neurona, 4 positivos para S. falcatula-like e 3 negativos na RIFI) foram testados por meio de Imunoblot empregando-se antígeno reduzido de SN138 e Sarco-BA1. Em três amostras foi possível identificar proteína de peso molecular de 16 kDa, compatível com antígeno imunodominante do parasito. Os resultados, com reação positiva entre ambas as cepas testadas, permitem duas possíveis conclusões, de que os animais foram expostos aos dois parasitos testados, ou que os animais foram expostos a um dos parasitos, mas reagem de forma cruzada na RIFI. A caracterização da mesma proteína imunodominante para ambas as cepas testadas no Imunoblot possibilitou constatar que existem semelhanças antigênicas no reconhecimento da proteína específica de 16 kDa pelo imunoblot.

BORGES-SILVA, W. Antigenic comparison between Sarcocystis neurona and Sarcocystis falcatula-like isolated in vitro in Bahia. Salvador, 2019. 56p. Dissertação (Mestrado em Ciência Animal nos Trópicos). Escola de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal da Bahia. Sarcocystis neurona is a coccidian protozoan, considered the main agent of equine protozoal mieloencephalitis. Opossums of the Didelphis genus are the definitive hosts of that protozoan. Brazil has at least four Didelphis spp., favoring a greater genetic recombination among the species of Sarcocystis. The aim of this study was to compare antigenically a national isolate of Sarcocystis falcatula-like (Sarco-BA1) with potential for use in serological tests with a North American strain of S. neurona (SN138). A total of 409 samples (217 from Bahia and 192 from Rio Grande do Sul) of equine serum were tested by the immunofluorescence antibody test (IFAT), using merozoites produced in cell culture of the two parasites. The results obtained in IFAT indicate a frequency of 17.1% animals exposed to S. neurona, 10.5% to S. falcatula-like, and 6.1% to both parasites. Sera from 13 animals (6 S. neurona positive, 4 S. falcatula-like positive and 3 negative on IFAT) were tested by immunoblot using reduced SN138 antigen and Sarco-BA1. In three samples it was possible to identify a 16 kDa molecular weight protein, which is compatible with the parasite's immunodominant antigen. These results, with positive reaction to both tested strains, allow two possible conclusions, that the animals were exposed to both tested parasites, or that the animals were exposed to one of the parasites, but they cross-react in the IFAT. The characterization of the same immunodominant protein for both tested strains in immunoblot allowed to conclude that there are antigenic similarities in the recognition of the 16 kDa specific protein by the immunoblot.