Myonecrosis caused by Clostridium septicum in a horse from Southern Brazil / Mionecrose causada por Clostridium septicum em um cavalo do sul do Brasil

Clostridial myonecrosis is a highly fatal infectious disease of the muscle that is caused by pathogenic clostridia. When it occurs in equine muscle, the infection can cause a variety of clinical signs. The present report described a case of acute myonecrosis caused by Clostridium septicum in a horse, which had a favorable clinical evolution. A 6-year-old mare was admitted to a veterinary hospital due to increased volume and lameness in the left pelvic limb after an intramuscular injection of an anti-inflammatory drug. The diagnosis of myonecrosis caused by C. septicum was based on clinical and laboratory findings. The animal showed significant improvement after 5 months of treatment and was discharged from the hospital. There is very limited information regarding myonecrosis caused by C. septicum in horses in Brazil; our study showed that early diagnosis and prompt appropriate treatment can ensure significant improvement and recovery of affected animals.

Mionecroses clostridiais são doenças altamente fatais, causadas por uma ou mais espécies de Clostridium sp. patogênicos. Entretanto, no músculo equino, a infecção pode produzir uma variedade de lesões e sinais clínicos. O presente relato descreve um caso de mionecrose aguda em um cavalo causada por Clostridium septicum, que apresentou uma evolução clínica favorável. Uma égua de seis anos foi internada em um hospital veterinário devido a um aumento de volume e claudicação no membro pélvico esquerdo, observado após injeção intramuscular de anti-inflamatório. O diagnóstico de mionecrose por C. septicum foi baseado nos achados clínicos e laboratoriais. Houve uma melhora significativa do animal após cinco meses de tratamento, permitindo que o mesmo fosse liberado do hospital veterinário. Considerando que as informações sobre C. septicum causadores de mionecroses em cavalos no Brasil são muito limitadas, este relato demonstra que o diagnóstico precoce e a implementação adequada do tratamento podem garantir uma melhora significativa e a recuperação dos animais afetados.

Systemic clostridiosis due to Clostridium perfringens infection in Equus asinus - case report / Clostridiose sistêmica devido a infecção de Clostridium perfringens em Equus asinus - relato de caso

Clostridial infections, particularly clostridial myonecrosis, can be fulminant and fatal; they often arise without an obvious history of trauma. The majority of equine clostridial myonecrosis cases are associated with intramuscular injection. This paper presents the first report of clostridial myositis by C. perfringens in a donkey after an injection of flunixin meglumine on the neck, describing the clinical, necroscopic, and histopathological events. Bacterial isolation and biochemical tests confirmed the definitive diagnosis of C. perfringens.

Clostridioses, particularmente a mionecrose clostridial, podem ser fulminantes e fatais; elas geralmente surgem sem um histórico óbvio de trauma. A maioria dos casos de mionecrose clostridial equina está associada à injeção intramuscular. Este artigo apresenta o primeiro relato de miosite clostridial por C. perfringens em jumento após injeção de flunixina meglumina no pescoço, descrevendo os achados clínicos, necroscópicos e histopatológicos. Isolamento bacteriano e testes bioquímicos confirmaram o diagnóstico definitivo de C. perfringens.

Diagnosis of blackleg from cattle tissue impregnated in common filter paper / Diagnóstico de carbúnculo sintomático a partir de papel filtro comum impregnado com tecido bovino

Blackleg, an acute myonecrosis caused by Clostridium chauvoei, is usually underdiagnosed since the rapid transport of adequate samples for laboratory testing is difficult. This study tested a direct polymerase chain reaction (PCR) technique using common filter paper impregnated with cattle tissue samples obtained from animals suspected with blackleg. Twenty-five samples, belonging to eleven animals from Rio Grande do Sul State, Brazil, were analyzed. The direct PCR technique identified eight positive animals corroborating with results from microbiological culture. Skeletal muscle was the most common tissue type used in this study and when the animal was positive the pathogen was always detected in this tissue. Storage time of the impregnated filter paper at room temperature did not prove to be a limiting factor for the quality of the results indicating that this procedure can be carried out in the field and samples be sent in regular mail. Our results suggested that direct PCR of common filter paper impregnated with cattle tissue is a practical and economical alternative for the diagnosis of blackleg.

Carbúnculo sintomático, uma mionecrose aguda causada por Clostridium chauvoei, costuma ser subdiagnosticada, pois o transporte rápido de amostras adequadas para exames laboratoriais é complicado. O objetivo deste estudo foi testar a técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) direta, utilizando papel filtro comum impregnado com amostras de tecido bovino obtidas de animais suspeitos de carbúnculo sintomático. Foram analisadas 25 amostras, pertencentes a onze animais do estado do Rio Grande do Sul, Brasil. A técnica de PCR direta identificou oito animais positivos, corroborando com os resultados da cultura microbiológica. O músculo esquelético foi o tecido mais utilizado neste estudo e quando o animal foi positivo, o patógeno sempre foi detectado neste tecido. O tempo de armazenamento do papel filtro impregnado, à temperatura ambiente, não se mostrou um fator limitante para a qualidade dos resultados, indicando que esse procedimento pode ser realizado no local e as amostras enviadas por correio normal. Nossos resultados sugerem que a PCR direta usando papel filtro comum impregnado com tecido bovino é uma alternativa prática e econômica para o diagnóstico de carbúnculo sintomático.

Diagnosis of blackleg from cattle tissue impregnated in common filter paper / Diagnóstico de carbúnculo sintomático a partir de papel filtro comum impregnado com tecido bovino

Blackleg, an acute myonecrosis caused by Clostridium chauvoei, is usually underdiagnosed since the rapid transport of adequate samples for laboratory testing is difficult. This study tested a direct polymerase chain reaction (PCR) technique using common filter paper impregnated with cattle tissue samples obtained from animals suspected with blackleg. Twenty-five samples, belonging to eleven animals from Rio Grande do Sul State, Brazil, were analyzed. The direct PCR technique identified eight positive animals corroborating with results from microbiological culture. Skeletal muscle was the most common tissue type used in this study and when the animal was positive the pathogen was always detected in this tissue. Storage time of the impregnated filter paper at room temperature did not prove to be a limiting factor for the quality of the results indicating that this procedure can be carried out in the field and samples be sent in regular mail. Our results suggested that direct PCR of common filter paper impregnated with cattle tissue is a practical and economical alternative for the diagnosis of blackleg.(AU)

Carbúnculo sintomático, uma mionecrose aguda causada por Clostridium chauvoei, costuma ser subdiagnosticada, pois o transporte rápido de amostras adequadas para exames laboratoriais é complicado. O objetivo deste estudo foi testar a técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) direta, utilizando papel filtro comum impregnado com amostras de tecido bovino obtidas de animais suspeitos de carbúnculo sintomático. Foram analisadas 25 amostras, pertencentes a onze animais do estado do Rio Grande do Sul, Brasil. A técnica de PCR direta identificou oito animais positivos, corroborando com os resultados da cultura microbiológica. O músculo esquelético foi o tecido mais utilizado neste estudo e quando o animal foi positivo, o patógeno sempre foi detectado neste tecido. O tempo de armazenamento do papel filtro impregnado, à temperatura ambiente, não se mostrou um fator limitante para a qualidade dos resultados, indicando que esse procedimento pode ser realizado no local e as amostras enviadas por correio normal. Nossos resultados sugerem que a PCR direta usando papel filtro comum impregnado com tecido bovino é uma alternativa prática e econômica para o diagnóstico de carbúnculo sintomático.(AU)

Clostridium perfringens α and ß recombinant toxoids in equine immunization / Toxóides recombinantes α e ß de Clostridium perfringens na imunização de equinos

Clostridium perfringens is considered one of the main causative agents of superacute enterocolitis, usually fatal in the equine species, due to the action of the ß toxin, and is responsible for causing severe myonecrosis, by the action of the α toxin. The great importance of this agent in the equine economy is due to high mortality and lack of vaccines, which are the main form of prevention, which guarantee the immunization of this animal species. The aim of this study was to evaluate three different concentrations (100, 200 and 400µg) of C. perfringens α and ß recombinant toxoids in equine immunization and to compare with a group vaccinated with a commercial toxoid. The commercial vaccine was not able to stimulate an immune response and the recombinant vaccine was able to induce satisfactory humoral immune response in vaccinated horses, proving to be an alternative prophylactic for C. perfringens infection.(AU)

Clostridium perfringens é considerado um dos principais agentes causadores de enterocolites superagudas, geralmente fatais na espécie equina, devido à ação da toxina ß, além de ser responsável por causar quadros graves de mionecrose, pela ação da toxina α. A grande importância desses agentes na equinocultura, deve-se a elevada mortalidade e a inexistência de vacinas, principal forma de prevenção, que garantam a imunização dessa espécie animal. O objetivo deste trabalho foi avaliar três diferentes concentrações (100, 200 e 400µg) dos toxóides recombinantes α e ß de C. perfringens na imunização de equinos, bem como comparar com um grupo vacinado com um toxóide comercial. A vacina comercial não se mostrou capaz de estimular uma resposta imune e a vacina recombinante foi capaz de induzir resposta imune humoral satisfatória em equinos vacinados, provando ser uma alternativa profilática para infecção por C. Perfringens.(AU)

Clostridium perfringens α and ß recombinant toxoids in equine immunization / Toxóides recombinantes α e ß de Clostridium perfringens na imunização de equinos

Clostridium perfringens is considered one of the main causative agents of superacute enterocolitis, usually fatal in the equine species, due to the action of the ß toxin, and is responsible for causing severe myonecrosis, by the action of the α toxin. The great importance of this agent in the equine economy is due to high mortality and lack of vaccines, which are the main form of prevention, which guarantee the immunization of this animal species. The aim of this study was to evaluate three different concentrations (100, 200 and 400µg) of C. perfringens α and ß recombinant toxoids in equine immunization and to compare with a group vaccinated with a commercial toxoid. The commercial vaccine was not able to stimulate an immune response and the recombinant vaccine was able to induce satisfactory humoral immune response in vaccinated horses, proving to be an alternative prophylactic for C. perfringens infection.(AU)

Clostridium perfringens é considerado um dos principais agentes causadores de enterocolites superagudas, geralmente fatais na espécie equina, devido à ação da toxina ß, além de ser responsável por causar quadros graves de mionecrose, pela ação da toxina α. A grande importância desses agentes na equinocultura, deve-se a elevada mortalidade e a inexistência de vacinas, principal forma de prevenção, que garantam a imunização dessa espécie animal. O objetivo deste trabalho foi avaliar três diferentes concentrações (100, 200 e 400µg) dos toxóides recombinantes α e ß de C. perfringens na imunização de equinos, bem como comparar com um grupo vacinado com um toxóide comercial. A vacina comercial não se mostrou capaz de estimular uma resposta imune e a vacina recombinante foi capaz de induzir resposta imune humoral satisfatória em equinos vacinados, provando ser uma alternativa profilática para infecção por C. Perfringens.(AU)

Protective efficacy of commercial vaccines against a virulent field strain of Clostridium chauvoei / Eficácia protetiva de vacinas comerciais contra uma cepa de campo virulenta de Clostridium chauvoei

Blackleg is an acute and frequently fatal infection that mainly affects cattle and is caused by Clostridium chauvoei. Formalin-killed, whole-cell vaccines are commonly used to control blackleg. The aim of this study was to verify the protective efficacy of two commercial vaccines against the infection of guinea pigs with two strains of C. chauvoei, a virulent field strain (SBP 07/09) and the reference strain used in official tests (Manguinhos-Teixeira or MT). The strains used in the challenge were characterized by whole genome sequencing, and the minimal inhibitory concentrations of 15 antimicrobials were determined. To assess the protective efficacy, guinea pigs were vaccinated and subsequently challenged with C. chauvoei. All four vaccinated and challenged groups seroconverted after vaccination, while the control group remained seronegative, as determined by indirect ELISA. The identical performance of the two C. chauvoei strains in terms of virulence after challenge and their inability to infect vaccinated animals was correlated with their high genetic homology. Both commercial vaccines showed good protective efficacy against both the reference and field strains. Although C. chauvoei vaccination failures have been reported, the results from our study and others reported high similarity among C. chauvoei strains from all over the world, which suggests that the vaccine failures are not due to antigenic variability but inadequate vaccine management.(AU)

O carbúnculo sintomático é uma infecção aguda e frequentemente fatal que afeta principalmente os bovinos, causada pelo Clostridium chauvoei. A administração de vacinas formolizadas compostas pelas células bacterianas inteiras é comumente utilizada no controle desta doença. O objetivo deste estudo foi verificar, em cobaios, a eficácia protetiva de duas vacinas comerciais contra duas cepas de Clostridium chauvoei, uma cepa de campo virulenta (SBP 07/09) e a cepa de referência utilizada nos testes oficiais (MT, Manguinhos-Teixeira). Adicionalmente, realizar a caracterização das cepas utilizadas no desafio pelo sequenciamento completo do genoma e pela determinação da concentração inibitória mínima frente a 15 antimicrobianos. Para tanto, os cobaios foram vacinados e subsequentemente desafiados com. Os quatro grupos vacinados e desafiados soroconverteram, enquanto que o grupo controle permaneceu soronegativo pelo teste de ELISA indireto. O desempenho idêntico das duas cepas de C. chauvoei após o desafio in vivo e a incapacidade de infectar os animais vacinados está correlacionado com a homologia genética das cepas. Além disso, ambas as vacinas comerciais demonstraram uma adequada eficácia protetiva contra as cepas de campo e de referência. Embora o insucesso das vacinações contra C. chauvoei tenha sido previamente relatado, os resultados deste estudo, juntamente com a alta similaridade genética reportada previamente em cepas provenientes de diferentes continentes sugerem que as falhas vacinais não estão relacionadas à variabilidade antigênica, mas sim ao manejo vacinal inadequado.(AU)

Protective efficacy of commercial vaccines against a virulent field strain of Clostridium chauvoei / Eficácia protetiva de vacinas comerciais contra uma cepa de campo virulenta de Clostridium chauvoei

Blackleg is an acute and frequently fatal infection that mainly affects cattle and is caused by Clostridium chauvoei. Formalin-killed, whole-cell vaccines are commonly used to control blackleg. The aim of this study was to verify the protective efficacy of two commercial vaccines against the infection of guinea pigs with two strains of C. chauvoei, a virulent field strain (SBP 07/09) and the reference strain used in official tests (Manguinhos-Teixeira or MT). The strains used in the challenge were characterized by whole genome sequencing, and the minimal inhibitory concentrations of 15 antimicrobials were determined. To assess the protective efficacy, guinea pigs were vaccinated and subsequently challenged with C. chauvoei. All four vaccinated and challenged groups seroconverted after vaccination, while the control group remained seronegative, as determined by indirect ELISA. The identical performance of the two C. chauvoei strains in terms of virulence after challenge and their inability to infect vaccinated animals was correlated with their high genetic homology. Both commercial vaccines showed good protective efficacy against both the reference and field strains. Although C. chauvoei vaccination failures have been reported, the results from our study and others reported high similarity among C. chauvoei strains from all over the world, which suggests that the vaccine failures are not due to antigenic variability but inadequate vaccine management.

O carbúnculo sintomático é uma infecção aguda e frequentemente fatal que afeta principalmente os bovinos, causada pelo Clostridium chauvoei. A administração de vacinas formolizadas compostas pelas células bacterianas inteiras é comumente utilizada no controle desta doença. O objetivo deste estudo foi verificar, em cobaios, a eficácia protetiva de duas vacinas comerciais contra duas cepas de Clostridium chauvoei, uma cepa de campo virulenta (SBP 07/09) e a cepa de referência utilizada nos testes oficiais (MT, Manguinhos-Teixeira). Adicionalmente, realizar a caracterização das cepas utilizadas no desafio pelo sequenciamento completo do genoma e pela determinação da concentração inibitória mínima frente a 15 antimicrobianos. Para tanto, os cobaios foram vacinados e subsequentemente desafiados com. Os quatro grupos vacinados e desafiados soroconverteram, enquanto que o grupo controle permaneceu soronegativo pelo teste de ELISA indireto. O desempenho idêntico das duas cepas de C. chauvoei após o desafio in vivo e a incapacidade de infectar os animais vacinados está correlacionado com a homologia genética das cepas. Além disso, ambas as vacinas comerciais demonstraram uma adequada eficácia protetiva contra as cepas de campo e de referência. Embora o insucesso das vacinações contra C. chauvoei tenha sido previamente relatado, os resultados deste estudo, juntamente com a alta similaridade genética reportada previamente em cepas provenientes de diferentes continentes sugerem que as falhas vacinais não estão relacionadas à variabilidade antigênica, mas sim ao manejo vacinal inadequado.

Could mesenchymal stem cell therapy help in the treatment of muscle damage caused by Bothrops alternatus venom? / Podem as células tronco mesenquimais auxiliarem no tratamento da lesão muscular causada pelo veneno de Bothrops alternatus?

The aim of this study was to evaluate the use of mesenchymal stem cells (MSC) in the treatment of myonecrosis induced by Bothrops alternatus venom in rats. Seventy-five male adult Wistar rats were divided into three experimental groups. G1 and G2 were injected in the gastrocnemius muscle with 120g of B. alternatus venom, while G3 received 200L of PBS only. Three days after the venom injection, 12 rats from G1 were treated with 5.0 x 106 MSC in PBS, whereas G2 and G3 rats received PBS. Every three days, blood and muscle samples of five animals from each group were taken for serum biochemical and pathological analyses. Histological examinations showed more intense muscle lesions following MSC treatment, characterized by disorganization and loss of muscle fibers, with focal necrosis and inflammatory infiltration by mononuclear cells. In conclusion, the use of MSC for the treatment of local damage caused by inoculation of B. alternatus venom impaired muscle regeneration and interfered in the healing process.(AU)

O objetivo do presente trabalho foi avaliar a utilização das células tronco mesenquimais (MSC) no tratamento da mionecrose induzida pelo veneno de Bothrops alternatus em ratos. 75 ratos Wistar adultos foram distribuídos em três grupos experimentais. G1 e G2 receberam 120g de veneno de B. alternatus, enquanto o G3 recebeu apenas 200L de PBS. Três dias após a administração do veneno, os ratos do grupo G1 foram tratados com 5.0 x 106 MSC, enquanto G2 e G3 receberam exclusivamente PBS. A cada três dias, amostras de sangue e tecido muscular foram coletadas de cinco animais de cada grupo para avaliação bioquímica sérica e patológica, respectivamente. A análise histológica revelou lesão muscular mais intensa após a aplicação das MSC, caracterizada pela desorganização e perdas das fibras musculares, com necrose focal e infiltrado inflamatório mononuclear. É possível concluir que a utilização das MSC para o tratamento da lesão local causada pela inoculação do veneno B. alternatus deteriorou a regeneração muscular e interferiu com o processo de cicatrização.(AU)

Could mesenchymal stem cell therapy help in the treatment of muscle damage caused by Bothrops alternatus venom? / Podem as células tronco mesenquimais auxiliarem no tratamento da lesão muscular causada pelo veneno de Bothrops alternatus?

The aim of this study was to evaluate the use of mesenchymal stem cells (MSC) in the treatment of myonecrosis induced by Bothrops alternatus venom in rats. Seventy-five male adult Wistar rats were divided into three experimental groups. G1 and G2 were injected in the gastrocnemius muscle with 120g of B. alternatus venom, while G3 received 200L of PBS only. Three days after the venom injection, 12 rats from G1 were treated with 5.0 x 106 MSC in PBS, whereas G2 and G3 rats received PBS. Every three days, blood and muscle samples of five animals from each group were taken for serum biochemical and pathological analyses. Histological examinations showed more intense muscle lesions following MSC treatment, characterized by disorganization and loss of muscle fibers, with focal necrosis and inflammatory infiltration by mononuclear cells. In conclusion, the use of MSC for the treatment of local damage caused by inoculation of B. alternatus venom impaired muscle regeneration and interfered in the healing process.

O objetivo do presente trabalho foi avaliar a utilização das células tronco mesenquimais (MSC) no tratamento da mionecrose induzida pelo veneno de Bothrops alternatus em ratos. 75 ratos Wistar adultos foram distribuídos em três grupos experimentais. G1 e G2 receberam 120g de veneno de B. alternatus, enquanto o G3 recebeu apenas 200L de PBS. Três dias após a administração do veneno, os ratos do grupo G1 foram tratados com 5.0 x 106 MSC, enquanto G2 e G3 receberam exclusivamente PBS. A cada três dias, amostras de sangue e tecido muscular foram coletadas de cinco animais de cada grupo para avaliação bioquímica sérica e patológica, respectivamente. A análise histológica revelou lesão muscular mais intensa após a aplicação das MSC, caracterizada pela desorganização e perdas das fibras musculares, com necrose focal e infiltrado inflamatório mononuclear. É possível concluir que a utilização das MSC para o tratamento da lesão local causada pela inoculação do veneno B. alternatus deteriorou a regeneração muscular e interferiu com o processo de cicatrização.

White muscle disease in three selenium deficient beef and dairy calves in Argentina and Uruguay / Doença do músculo branco em três bezerros para carne e leite deficientes em selênio na Argentina e Uruguai

White muscle disease (WMD), nutritional myodegeneration or enzootic muscular dystrophy, is a nutritional condition associated with selenium and/or vitamin E deficiency in ruminants. These elements are constituents of the major body antioxidant systems. Depletion of selenium results in oxidative damage to cardiac and skeletal muscle cells, resulting in myodegeneration and myonecrosis, typical lesions of WMD. Selenium deficiency is common in South America, but WMD is underreported. This research describes clinical, biochemical and pathological findings in two episodes of WMD associated with selenium deficiency in beef and dairy calves in Argentina and Uruguay with concurrent copper deficiency in one of them, which resulted in spontaneous calf mortality. Further studies are necessary to estimate the true incidence and economic impact of clinical and subclinical mineral deficiencies in livestock production systems in the southern cone of South America.

Doença do músculo branco (DMB), miodegeneração nutricional ou distrofia muscular enzoótica é uma condição nutricional associada à deficiência de selênio e/ou vitamina E em ruminantes. Esses elementos são constituintes dos principais sistemas antioxidantes do corpo. O esgotamento de selênio resulta em dano oxidativo às células musculares cardíacas e esqueléticas, resultando em miodegeneração e mionecrose, lesões típicas da DMB. A deficiência de selênio é comum na América do Sul, mas a DMB está subnotificada. Este trabalho descreve os achados clínicos, bioquímicos e patológicos em dois surtos de DMB associados à deficiência de selênio em bezerros para carne e leite na Argentina e Uruguai com concomitante deficiência de cobre em um surto, que resultaram em mortalidade espontânea de bezerros. São necessários mais estudos para estimar a verdadeira incidência e impacto econômico das deficiências minerais clínicas e subclínicas nos sistemas de produção pecuária no sul da América do Sul.

Blackleg in cattle: current understanding and future research needs / Carbúnculo sintomático: compreensão atual e futuras necessidades de pesquisa

Blackleg is an endogenous acute infection that principally affects cattle, whose etiologic agent is the anaerobic bacterium Clostridium chauvoei. In recent years, the major virulence factors of C. chauvoei have been discovered and described. However, the pathogenesis of blackleg in cattle, and in particular, the movement of the pathogen from the point of entry to the affected tissues is not yet fully elucidated. Disease control is based on appropriate management and vaccination. This review summarizes the latest research findings that contribute toward the understanding of the disease in cattle, provide a foundation to preventive strategies, and identify future research needs.

O carbúnculo sintomático é uma infecção endógena, aguda, que acomete principalmente bovinos, cujo agente etiológico é a bactéria anaeróbica Clostridium chauvoei. Recentemente, os principais fatores de virulência do C. chauvoei foram descobertos e descritos. Contudo, a patogênese do carbúnculo sintomático em bovinos, especialmente a circulação do patógeno desde o ponto de entrada até os tecidos acometidos ainda não está completamente elucidada. O controle desta enfermidade é baseado em medidas adequadas de manejo e vacinação. Esta revisão reúne as mais recentes descobertas que contribuíram para o entendimento da doença em bovinos, fornece embasamento para medidas preventivas e aponta futuras necessidades de pesquisa.

Blackleg in cattle: current understanding and future research needs / Carbúnculo sintomático: compreensão atual e futuras necessidades de pesquisa

Blackleg is an endogenous acute infection that principally affects cattle, whose etiologic agent is the anaerobic bacterium Clostridium chauvoei. In recent years, the major virulence factors of C. chauvoei have been discovered and described. However, the pathogenesis of blackleg in cattle, and in particular, the movement of the pathogen from the point of entry to the affected tissues is not yet fully elucidated. Disease control is based on appropriate management and vaccination. This review summarizes the latest research findings that contribute toward the understanding of the disease in cattle, provide a foundation to preventive strategies, and identify future research needs.(AU)

O carbúnculo sintomático é uma infecção endógena, aguda, que acomete principalmente bovinos, cujo agente etiológico é a bactéria anaeróbica Clostridium chauvoei. Recentemente, os principais fatores de virulência do C. chauvoei foram descobertos e descritos. Contudo, a patogênese do carbúnculo sintomático em bovinos, especialmente a circulação do patógeno desde o ponto de entrada até os tecidos acometidos ainda não está completamente elucidada. O controle desta enfermidade é baseado em medidas adequadas de manejo e vacinação. Esta revisão reúne as mais recentes descobertas que contribuíram para o entendimento da doença em bovinos, fornece embasamento para medidas preventivas e aponta futuras necessidades de pesquisa.(AU)

White muscle disease in three selenium deficient beef and dairy calves in Argentina and Uruguay / Doença do músculo branco em três bezerros para carne e leite deficientes em selênio na Argentina e Uruguai

White muscle disease (WMD), nutritional myodegeneration or enzootic muscular dystrophy, is a nutritional condition associated with selenium and/or vitamin E deficiency in ruminants. These elements are constituents of the major body antioxidant systems. Depletion of selenium results in oxidative damage to cardiac and skeletal muscle cells, resulting in myodegeneration and myonecrosis, typical lesions of WMD. Selenium deficiency is common in South America, but WMD is underreported. This research describes clinical, biochemical and pathological findings in two episodes of WMD associated with selenium deficiency in beef and dairy calves in Argentina and Uruguay with concurrent copper deficiency in one of them, which resulted in spontaneous calf mortality. Further studies are necessary to estimate the true incidence and economic impact of clinical and subclinical mineral deficiencies in livestock production systems in the southern cone of South America.(AU)

Doença do músculo branco (DMB), miodegeneração nutricional ou distrofia muscular enzoótica é uma condição nutricional associada à deficiência de selênio e/ou vitamina E em ruminantes. Esses elementos são constituintes dos principais sistemas antioxidantes do corpo. O esgotamento de selênio resulta em dano oxidativo às células musculares cardíacas e esqueléticas, resultando em miodegeneração e mionecrose, lesões típicas da DMB. A deficiência de selênio é comum na América do Sul, mas a DMB está subnotificada. Este trabalho descreve os achados clínicos, bioquímicos e patológicos em dois surtos de DMB associados à deficiência de selênio em bezerros para carne e leite na Argentina e Uruguai com concomitante deficiência de cobre em um surto, que resultaram em mortalidade espontânea de bezerros. São necessários mais estudos para estimar a verdadeira incidência e impacto econômico das deficiências minerais clínicas e subclínicas nos sistemas de produção pecuária no sul da América do Sul.(AU)

A retrospective study on the diagnosis of clostridial myonecrosis in ruminants in Brazil / Estudo retrospectivo sobre o diagnóstico de mionecroses clostridiais em ruminantes no Brasil

A standardized immunochemistry method for the diagnosis of clostridial myonecrosis was applied to 38 formalized tissue samples from ruminants with clinical and post mortem history suggestive of blackleg or gas gangrene. The diagnosis of clostridial myonecrosis was confirmed in 37 out of 38 (97.4%) samples tested. Clostridium chauvoei and Clostridium perfringens type A were the most common agents found alone, being detected in ten (26.3%) and six (15.8%) samples, respectively. The other cases showed an association of two or three clostridia, with C. perfringens type A detected in 11 (29%) cases. Based on the findings of the present study, polyvalent vaccines against clostridial infections of animals incorporating C. perfringens would be more adequate for preventative purposes in the endemic areas.

Imuno-istoquímica padronizada para avaliar o diagnóstico etiológico de mionecrose por agentes do gênero Clostridium foi utilizada em 38 tecidos formalizados de ruminantes com suspeita clínica e macroscópica, além de histopatologia compatível com carbúnculo sintomático ou gangrena gasosa. O diagnóstico de mionecrose foi confirmado em 37 das 38 (97,4%) amostras avaliadas. Clostridium chauvoei e Clostridium perfringens tipo A foram os únicos agentes encontrados sozinhos, sendo detectados em dez (26,3%) e seis (15,8%) amostras, respectivamente. Os outros casos foram causados por combinações de dois ou mais agentes, sendo que C. perfringens type A foi detectado em dez (29,9%) dessas amostras. Baseado nos resultados obtidos, sugere-se que vacinas polivalentes contendo C. perfringens seriam mais adequadas para prevenção de mionecrose causada por clostrídios.

A retrospective study on the diagnosis of clostridial myonecrosis in ruminants in Brazil / Estudo retrospectivo sobre o diagnóstico de mionecroses clostridiais em ruminantes no Brasil

A standardized immunochemistry method for the diagnosis of clostridial myonecrosis was applied to 38 formalized tissue samples from ruminants with clinical and post mortem history suggestive of blackleg or gas gangrene. The diagnosis of clostridial myonecrosis was confirmed in 37 out of 38 (97.4%) samples tested. Clostridium chauvoei and Clostridium perfringens type A were the most common agents found alone, being detected in ten (26.3%) and six (15.8%) samples, respectively. The other cases showed an association of two or three clostridia, with C. perfringens type A detected in 11 (29%) cases. Based on the findings of the present study, polyvalent vaccines against clostridial infections of animals incorporating C. perfringens would be more adequate for preventative purposes in the endemic areas.(AU)

Imuno-istoquímica padronizada para avaliar o diagnóstico etiológico de mionecrose por agentes do gênero Clostridium foi utilizada em 38 tecidos formalizados de ruminantes com suspeita clínica e macroscópica, além de histopatologia compatível com carbúnculo sintomático ou gangrena gasosa. O diagnóstico de mionecrose foi confirmado em 37 das 38 (97,4%) amostras avaliadas. Clostridium chauvoei e Clostridium perfringens tipo A foram os únicos agentes encontrados sozinhos, sendo detectados em dez (26,3%) e seis (15,8%) amostras, respectivamente. Os outros casos foram causados por combinações de dois ou mais agentes, sendo que C. perfringens type A foi detectado em dez (29,9%) dessas amostras. Baseado nos resultados obtidos, sugere-se que vacinas polivalentes contendo C. perfringens seriam mais adequadas para prevenção de mionecrose causada por clostrídios.(AU)

EXPRESSÃO DE GENES IMUNOLÓGICOS EM CAMARÕES Litopenaeus vannamei DESAFIADOS EXPERIMENTALMENTE COM O VÍRUS DA MIONECROSE INFECCIOSA E TRATADOS COM dsRNA PRODUZIDAS in vivo

O cultivo de camarão marinho vem se expandido mundialmente desde o inicio do século, e o camarão branco do Pacífico (Litopenaeus vannamei) é a espécie mais cultivada. Embora a carcinicultura apresente crescimento expressivo, a manifestação de enfermidades dificulta seu avanço. A doença causada pelo vírus da mionecrose infecciosa (IMNV), primeiramente relatada no nordeste brasileiro em 2002, ainda provoca significativas perdas na carcinicultura brasileira. Dentre as alternativas de combate a infecções virais, o RNA de interferência (RNAi) é promissor, pois há evidências da eficácia na aplicação dessa técnica no tratamento dessas enfermidades. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a dinâmica da expressão de genes imunológicos em camarões L. vannamei infectados experimentalmente com o IMNV e tratados com moléculas de dsRNA produzidos in vivo pelo Bacillus subtilis JJBs3 contendo a sequência do ORF1a referente ao IMNV. Num primeiro experimento, foi realizado o acompanhamento do desenvolvimento da mionecrose infecciosa para duas diluições (1,02 x 104 e 1,02 x 103 cópias/100 l) de um extrato de tecido infectado por IMNV, por quantificação das cópias virais por RT-qPCR e métodos histopatológicos; foram validados os extratos IMNV e SPF (livre de IMNV, WSSV e IHHNV) através de infecção experimental por injeção intramuscular, com duração de 22 dias. Os grupos infectados com o extrato IMNV apresentaram curvas de sobrevivência com diferenças significativas (p<0,05) em relação aos dois grupos controle (solução salina e extrato de tecido SPF), bem como alterações histopatológicas. Foram verificadas ainda, diferenças significativas (p<0,05) na carga viral dos tratamentos III e IV entre o 2° pré e o 6° dia pós-injeção, dentre os três pontos de coleta, com valores médios de 1,33 x 102 a 1,59 x 107 cópias virais, respectivamente. A expressão dos genes imunológicos (Sid-1, Dicer-2, Argonauta-2, proPO-1 e PPAE-1), avaliada por qPCR e aplicando o método 2-Cq, apresentou diminuição ao longo do experimento, com exceção do Sid-1 e Argonauta-2 no tratamento com menor dose viral. No segundo experimento (25 dias; seis tratamentos; quatro pontos de coleta), foi avaliado o efeito de diferentes doses (0.5, 1.0, 3.0 e 5.0 g de dsRNA por grama de camarão) produzidas in vivo pelo Bacillus subtilis JJBs3, ministradas através de injeção intramuscular dois dias antes do desafio. Foram utilizados dois grupos controles, em um deles os animais foram injetados com solução salina e extrato de tecido SPF (negativo), e no outro com solução salina e extrato de tecido infectado (positivo). Alterações histopatológicas características de IMN e diferenças significativas (p<0,05) na carga viral entre o 2° pré e 8° dia pós-injeção foram verificadas nos tratamentos que receberam injeção com extrato IMNV. Não foram observadas diferenças na sobrevivência ou na expressão dos genes analisados ao longo do experimento, mostrando que da forma e nas condições em que foram ofertadas, as dsRNAs não surtiram efeito protetivo. Por se tratar de um novo modelo de produção de dsRNA, as técnicas de obtenção, purificação, quantificação e métodos de entrega dessas moléculas precisam ser aprimoradas.

Shrimp farming is one of the fastest growing aquaculture activities in the world and the Pacific white shrimp (Litopenaeus vannamei) is the most widely cultivated species. Although shrimp farming shows significant growth, the manifestation of diseases hinders its progress. The disease caused by the Infectious Myonecrosis Virus (IMNV) causes significant losses in Brazilian shrimp farming. Recent evidence has suggested that interference RNA (RNAi) could be a viable alternative to control viral diseases. The present work aimed to evaluate the dynamics of immunological gene expression in L. vannamei shrimp experimentally infected with IMNV and treated with dsRNA molecules produced in vivo by Bacillus subtilis JJBs3 containing the IMNV sequence of ORF1a. In a first experiment, the progress of the infection caused by two dilutions (1.02 x 104 and 1.02 x 103 copies / 100 l) of an IMNV-infected tissue extract was monitored by quantifying viral copies by RT- qPCR and histopathological methods; IMNV and SPF (free from IMNV, WSSV and IHHNV) extracts were validated through experimental intramuscular injection infection lasting 22 days. Groups infected with IMNV extract showed survival curves with significant differences (p<0.05) in relation to the two control groups (saline solution and SPF tissue extract), as well as histopathological alterations. Significant differences (p<0.05) in viral load were observed in treatments III and IV between the 2nd and 6th day after infection, among three collection points, with average values of 1.33 x 102 to 1.59. x 107 viral copies, respectively. Expression of immunological genes (Sid-1, Dicer-2, Argonaut-2, proPO-1 and PPAE-1), was evaluated by qPCR, applying the 2-Cq method. In most cases expression reduction was observed. However, Sid-1 and Argonaut-2 showed expression increase in the treatment with the lowest viral dose. In the second experiment (25 days; six treatments; four sampling points), the effect of different doses (0.5, 1.0, 3.0 and 5.0 g dsRNA per gram of shrimp), administered by intramuscular injection two days before the challenge, was monitored. Two control groups were used, in one of them the animals were injected with saline and SPF tissue extract (negative), and in the other, with saline and infected tissue extract (positive). Histopathological changes characteristic of IMN and significant differences (p<0.05) in viral load between the 2nd and 8th post-injection day were verified in cases where IMNV was applied. No differences were observed in the extent or expression of the genes analyzed throughout the experiment, suggesting that in the present conditions dsRNAs had no protective effect. Because this is a new model of dsRNA production, the techniques of use, purification, quantification as well as the delivery methods of these molecules need to be improved.

Avaliação da eficiência dos toxóides recombinantes e de Clostridium perfringens na imunização de equinos

Clostridium perfringens tem sido classificado como principal agente patogênico gastrointestinal em potros com até 10 dias de idade, apesar dos quadros de enterocolites serem mais comuns em neonatos, animais jovens e adultos também podem ser acometidos. O quadro clínico que se manifesta na forma de cólica, diarreia sanguinolenta e evolui rapidamente para choque circulatório, é causado por ação da toxina (CPB) de C. perfringens tipo C. Esse agente bacteriano também está associado a graves quadros de mionecrose, geralmente fatais, por envolvimento da toxina (CPA) de C. perfringens tipo A. Para equinocultura, a importância dessas enfermidades deve-se a elevada mortalidade e a inexistência de vacinas comerciais, que garantam a imunização, principal forma de prevenção. Assim o objetivo deste trabalho foi ser o pioneiro em utilizar e avaliar a longevidade da resposta imune humoral no período de um ano, em equinos imunizados com diferentes concentrações (100, 200 e 400µg) de toxóides recombinantes CPA e CPB de C. perfringens tipos A e C, respectivamente, bem como comparar aos resultados obtidos em animais inoculados com toxóide comercial. Foram utilizados 50 animais da espécie equina, raça Mangalarga Marchador, de ambos os sexos, a partir de um ano de idade, sem histórico vacinal contra clostridioses. Os animais foram divididos aleatoriamente em cinco grupos de dez equinos: Grupo Vacina Recombinante 100µg (G1), Grupo Vacina Recombinante 200µg (G2), Grupo Vacina Recombinante 400µg (G3), Grupo Vacina Comercial (G4) e Grupo Controle Negativo (G5). Os equinos do G1, G2 e G3 foram vacinados com a vacina recombinante contendo diferentes concentrações dos toxóides recombinantes CPA e CPB 100, 200 e 400µg, respectivamente, G4 com vacina comercial e o G5 recebeu solução salina estéril (NaCl 0,9%). Todos os animais receberam duas doses de 2ml, por via intramuscular, na tábua do pescoço, nos dias zero e 28 após a primeira dose. As amostras de soro sanguíneo foram coletadas nos dias zero, 28, 56, 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270, 300, 330 e 360 após a primeira vacinação. Os soros obtidos, após centrifugação foram submetidos a técnica de soroneutralização em camundongos. O teste de potência realizado no dia 56, demonstrou que as formulações de 200 e 400µg foram capazes de induzir resposta imune em todos os equinos inoculados, de acordo com os níveis exigidos na legislação, assim como, ao avaliar a longevidade (teste de eficiência) da resposta imune vacinal, as mesmas concentrações apresentaram níveis de anticorpos detectáveis até o dia 180, não havendo diferenças significativas entre os resultados obtidos. A vacina recombinante nas concentrações acima de 200µg foi capaz de estimular resposta imune humoral satisfatória em equinos.

Clostridium perfringens has been rated as the main gastrointestinal pathogen in foals up to age 10 days old, although enterocolitis is more common in neonates, young and adult animals may also be affected. The clinical picture which manifests itself in a form of colic, bloody diarrhoea and progresses rapidly towards a circulatory shock, is caused by the action of toxin (CPB) of C. perfringens type C. This bacterial agent is also associated with severe myonecrosis, usually fatal, due to the involvement of toxin (CPA) of C. perfringens type A. For equinoculture, the importance of these diseases is due to the high mortality and the absence of commercial vaccines, which ensure immunization, the main form to prevent. Therefore, the aim of the present work was to be pioneer in using and to analyse the longevity of humoral immune response in the period of one year, in horses immunized with different concentrations (100, 200 and 400µg) of recombinant toxoids CPA and CPB of C. perfringens types A and C, respectively, as well as compare to results acquired from inoculated animals with commercial toxoid. Fifty horses were used, Mangalarga Marchador breed, of both sexes, from the age of one year and up, no vaccine history against clostridiosis. The animals were randomly divided into five groups of ten horses: Recombinant Vaccine Group 100µg (G1), Recombinant Vaccine Group 200µg (G2), Recombinant Vaccine Group 400µg (G3), Commercial Vaccine Group (G4) and Negative Control Group (G5). G1, G2 and G3 horses have been vaccinated with the recombinant vaccine containing different concentrations of recombinant toxoids CPA and CPB 100, 200 and 400µg, respectively, G4 with commercial vaccine and G5 received sterile saline (NaCl 0.9%). All animals received two doses of 2ml, intramuscularly, in the neck, on days zero and 28 after the first dose. Blood serum samples were collected on days zero, 28, 56, 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270, 300, 330 and 360 after the first vaccination. The serum obtained after centrifugation was submitted to the serum neutralization technique in mice. The potency test held on day 56 has demonstrated that the formulations of 200 and 400µg were able to induce an immune response in all inoculated horses, according to levels required by legislation, as well as, when assessing the longevity (efficiency test) of the immune response, the same concentrations presented levels of detectable antibodies until day 180, without significant differences between the results obtained. The recombinant vaccine in above concentrations 200 µg was able to stimulate a satisfactory humoral immune response in horses.

Histopathological, immunohistochemical and biomolecular diagnosis of myocarditis due to Clostridium chauvoei in a bovine / Diagnóstico anatomopatológico, imuno-histoquímico e biomolecular de um caso de miocardite por Clostridium chauvoei em um bovino

The aim of this study was to report a case of clostridial myocarditis in a bovine in Brazil with emphasis on the pathological findings, isolation and molecular identification associated with the in situ localization of C. chauvoei. The animal, a male Brangus bull with nine months of age, was found dead without prior clinical signs. Multifocal and coalescent areas of necrosis were observed in the myocardium. Rod cells in the cardiac muscle fibers were positive immunostaining for C. chauvoei, while this bacterium was also isolated and identified by polymerase chain reaction (PCR).(AU)

O objetivo deste estudo foi relatar um caso de miocardite clostridial em um bovino no Brasil, com ênfase nos achados patológicos, isolamento e identificação molecular do agente e visualização in situ de C. chauvoei. O animal, um macho da raça Brangus com nove meses de idade, foi encontrado morto sem sinais clínicos prévios. Foram observadas áreas de necrose multifocal e coalescente no miocárdio, com a presença de bastonetes imunomarcados para C. chauvoei nas fibras musculares cardíacas. Uma estirpe de C. chauvoei foi isolada do tecido e sua identidade foi confirmada por reação em cadeia da polimeras (PCR).(AU)

Mionecrose traumática em equino: Relato de Caso

Mionecrose em equídeos é uma achado comumente relacionado a deficiência mineral, como o selênio, ou clostridioses, sendo raros os relatos dessa patologia relacionada a traumas. Objetivou-se relatar um caso de mionecrose flegmonosa em uma égua.