Resistance of Haemonchus contortus to monepantel in sheep: first report in Espírito Santo, Brazil / Resistência de Haemonchus contortus ao monepantel em ovinos: primeiro relato no Espírito Santo - Brasil

Abstract The objective of this study was to provide the first report of resistance of Haemonchus contortus to monepantel in sheep in Espírito Santo. The study was conducted in a property with history of monepantel use since 2014 and register of low efficacy in studies conducted over the past few years with fecal egg count reduction test. Lambs born on the property (males and females aged approximately 100 days) were selected and after eggs per gram of feces (EPG) analysis on fecal samples, these were divided into two groups: a group treated with monepantel (2.5 mg / Kg) and a control group without anthelmintic treatment. Seven days later, the animals were euthanized to recover parasites from the gastrointestinal tract. The efficacy of the treatment was 61.35% against H. contortus, thus proving that anthelmintic resistance to monepantel was present.

Resumo O objetivo deste estudo foi fornecer o primeiro relato de resistência de Haemonchus contortus ao monepantel em ovinos no Espírito Santo. O estudo foi conduzido em uma propriedade com histórico de uso de monepantel, desde 2014, e registro de baixa eficácia em estudos conduzidos nos últimos anos, utilizando-se testes de redução de contagem de ovos por grama de fezes (OPG). Cordeiros nascidos na propriedade (machos e fêmeas com idade aproximada de 100 dias) foram selecionados e, após contagem de OPG, foram divididos em dois grupos: um grupo tratado com monepantel (2,5 mg / kg) e um grupo controle, sem tratamento com anti-helmíntico. Após 7 dias, os animais foram eutanasiados para a recuperação dos parasitos no trato gastrointestinal. O tratamento apresentou eficácia de 61,35% para H. contortus, comprovando que a resistência anti-helmíntica ao monepantel foi presente.

Phenotypic and genotypic approaches for detection of anthelmintic resistant sheep gastrointestinal nematodes from Brazilian northeast / Abordagens fenotípica e genotípica para detecção de resistência anti-helmíntica em nematoides gastrintestinais de ovinos no nordeste do Brasil

Abstract The aim of this study was to characterize the anthelmintic resistance (AR) of a sheep gastrointestinal nematode population, named Caucaia, from northeastern Brazil. Phenotypic tests performed were: egg hatch (EHT), larval development (LDT) and fecal egg count reduction (FECRT). Benzimidazoles (BZs) genotypic evaluation was by frequency of single nucleotide polymorphisms (SNPs) F200Y, F167Y and E198A, and for levamisole (LEV), by frequency of resistance alleles of Hco-acr-8 gene. The primers were designed specifically for Haemonchus contortus. Effective concentrations 50% (EC50) for BZs (EHT), and for macrocyclic lactones (MLs) and LEV (LDT) were 1.02 µg/mL, 1.81 ng/mL and 0.04 µg/mL, respectively. Resistance ratios for MLs and LEV were 0.91 and 3.07, respectively. FECRT efficacies of BZs, MLs, monepantel (MPTL) and LEV were 52.4; 87.0; 94.5 and 99.6%, respectively. qPCR for BZs demonstrated resistance allele frequencies of 0%, 26.24% and 69.08% for SNPs E198A, F200Y and F167Y, respectively. For LEV, 54.37% of resistance alleles were found. There was agreement between EHT, FECRT and qPCR for BZs, and agreement between LDT and qPCR for LEV. Thus, based on higher sensitivity of qPCR, and phenotypic evaluation, the Caucaia population was considered resistant to BZs, MLs, LEV and suspect for MPTL.

Resumo O objetivo deste estudo foi caracterizar a resistência anti-helmíntica (RA) da população de nematoides gastrintestinais de ovinos, denominada Caucaia, do Nordeste brasileiro. Os testes fenotípicos foram: eclosão de ovos (TEO), desenvolvimento larvar (TDL) e redução da contagem de ovos nas fezes (TRCOF). A avaliação genotípica para benzimidazóis (BZs) foi por frequência de polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) F200Y, F167Y e E198A; e para levamisol (LEV), pela frequência alélica para resistência no gene Hco-acr-8. Os "primers" foram específicos para Haemonchus contortus. As concentrações efetivas 50% (CE50) para BZs (TEO) e para lactonas macrocíclicas (LMs) e LEV (TDL) foram 1,02 µg/mL, 1,81 ng/mL e 0,04 µg/mL, respectivamente. Os fatores de resistência para LMs e LEV foram 0,91 e 3,07, respectivamente. As eficácias para BZs, LMs, monepantel (MPTL) e LEV no TRCOF foram 52,4; 87,0; 94,5 e 99,6%, respectivamente. A qPCR para BZs demonstrou frequências de 0%, 26,24% e 69,08% para SNPs E198A, F200Y e F167Y, respectivamente. Para LEV foram encontrados 54,37% de alelos resistentes. Houve concordância entre TEO, TRCOF e qPCR para BZs, e entre TDL e qPCR para LEV. Baseada na maior sensibilidade da qPCR e avaliação fenotípica, a população Caucaia foi considerada resistente a BZs, LMs, LEV e suspeita para MPTL.

Anthelmintic resistance of Haemonchus contortus from sheep flocks in Brazil: concordance of in vivo and in vitro (RESISTA-Test©) methods / Resistência anti-helmíntica de Haemonchus contortus em rebanhos ovinos noBrasil: concordância de métodos in vivo e in vitro (RESISTA-Test©)

This study evaluated the resistance status of Haemonchus contortus from sheep flocks in the state of São Paulo, Brazil, through comparison between the fecal egg count reduction test (FECRT) and the larval development test (LDT). For the FECRT, 35 sheep were selected in each of five flocks and divided into groups treated with: benzimidazole, levamisole, ivermectin, monepantel and control. Feces were collected for EPG and fecal cultures. The LDT was performed using thiabendazole (TBZ), levamisole (LEV), ivermectin aglycone (IVM-A) and Zolvix (ZLV). Resistance to all drugs was detected using FECRT in 100% of the flocks, except in relation to ZLV (40% resistant and 20% suspected of resistance). LDT indicated resistance to TBZ and IVM-A in all flocks, to LEV in 80% of flocks and to ZLV in 10%. Total agreement was obtained between the two tests for TBZ and IVM (k = 1.0), while for LEV (k = 0.8) and ZLV (k = 0.9), substantial and almost perfect agreement were obtained, respectively. The concordance between the tests was significant, thus showing that it is possible to use the outcome of the LDT to predict the FECRT, and hence validating the former as a fast diagnostic test for use by sheep farmers in Brazil.(AU)

Este estudo avaliou o status de resistência de Haemonchus contortus em rebanhos ovinos do estado de São Paulo, Brasil, através de um estudo comparativo entre o teste de redução da contagem de ovos nas fezes (TRCOF) e o teste de desenvolvimento larvar (TDL). Para o TRCOF, 35 ovinos foram selecionados em cada um dos cinco rebanhos e divididos em grupos tratados com: benzimidazol, levamisol, ivermectina, monepantel e controle. Fezes foram coletadas para OPG e coproculturas. O TDL foi realizado com tiabendazol-TBZ, levamisol-LEV, ivermectina aglicona-IVM-A e Zolvix-ZLV. Resistência a todos os fármacos foi detectada por meio do TRCOF em 100% dos rebanhos, exceto para ZLV (40% resistentes e 20% suspeitos de resistência). O LDT indicou resistência ao TBZ e IVM-A em todos os rebanhos; em 80% dos rebanhos ao LEV e 10% ao ZLV. Foi obtida concordância total entre os dois testes para TBZ e IVM (k = 1,0), enquanto para LEV (k = 0,8) e ZLV (k = 0,9) foram obtidas concordância substancial e quase perfeita, respectivamente. A concordância entre os testes foi significante, sendo possível usar o resultado do LDT para prever o do TRCOF, validando-se o primeiro como um teste diagnóstico rápido para criadores de ovinos no Brasil.(AU)

Anthelmintic activity of nanoencapsulated carvacryl acetate against gastrointestinal nematodes of sheep and its toxicity in rodents / Atividade anti-helmíntica do acetato de carvacrila nanoencapsulado sobre nematoides gastrintestinais de ovinos e toxicidade em roedores

The objective of this study was to evaluate the efficacy of carvacryl acetate (CVA) and nanoencapsulated CVA (nCVA) on gastrointestinal nematodes of sheep. The CVA was nanoencapsulated with chitosan/gum arabic and the efficacy of nanoencapsulation (EE), yield, zeta potential, nanoparticle morphology and release kinetics at pH 3 and 8 were analyzed. Acute and subchronic toxicity were evaluated in rodents and reduction of egg counts in the faeces (FECRT) of sheep. The sheep were divided into four groups (n = 10): G1, 250 mg/kg CVA; G2, 250 mg/kg nCVA; G3, polymer matrix and G4: 2.5 mg/kg monepantel. EE and nCVA yield were 65% and 57%, respectively. The morphology of the nanoparticles was spherical, size (810.6±286.7 nm), zeta potential in pH 3.2 (+18.3 mV) and the 50% release of CVA at pHs 3 and 8 occurred at 200 and 10 h, respectively. nCVA showed LD50 of 2,609 mg/kg. CVA, nCVA and monepantel reduced the number of eggs per gram of faeces (epg) by 57.7%, 51.1% and 97.7%, respectively. The epg of sheep treated with CVA and nCVA did not differ from the negative control (P>0.05). Nanoencapsulation reduced the toxicity of CVA; however, nCVA and CVA presented similar results in the FECRT.(AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficácia do acetato de carvacrila (ACV) e do ACV nanoencapsulado (nACV) sobre nematóides gastrintestinais de ovinos. O ACV foi nanoencapsulado com quitosana/goma arábica e foi analisada a eficácia de nanoencapsulamento (EE), o rendimento, potencial zeta, morfologia das nanopartículas e cinética de liberação em pH 3 e 8. Foram avaliadas as toxicidades aguda e subcrônica em roedores e a redução da contagem de ovos nas fezes (RCOF) de ovinos. Os ovinos foram divididos em quatro grupos (n = 10): G1, 250 mg/kg ACV; G2, 250 mg/kg de nACV; G3, matriz polimérica e G4: 2,5 mg/kg de monepantel. A EE e o rendimento de nACV foram de 65% e 57%, respectivamente. A morfologia das nanopartículas foi esférica, tamanho (810,6±286,7 nm), potencial zeta no pH 3,2 (+18,3 mV) e a liberação de 50% de CVA nos pHs 3 e 8 ocorreu às 200 e 10 h, respectivamente. nACV apresentou DL50 de 2.609 mg/kg. ACV, nACV e o monepantel reduziram a contagem de ovos por grama de fezes (opg) em 57,7%, 51,1% e 97,7%, respectivamente. A contagem de opg de ovelhas tratadas com ACV e nCVA não diferiu do controle negativo (P>0,05). O nanoencapsulamento reduziu a toxicidade do AVC; no entanto, nACV e ACV apresentaram resultados semelhantes na RCOF.(AU)

Clinical parameters of goats infected with gastrointestinal nematodes and treated with condensed tannin / Parâmetros clínicos de caprinos infectados por nematoides gastrintestinais e tratados com tanino condensado

Small ruminants are affected by gastrointestinal nematodes that cause great economic losses in sheep and goat farming. Alternatives have been studied to control these parasites, such as the use of taniniferous plants; however, few studies have reported the effects of condensed tannins on blood parameters. This study aimed to verify the effect of condensed tannin for the treatment of goats infected by gastrointestinal nematodes on hematological, biochemical, and serum protein parameters. Blood samples were collected weekly from 24 six-month-old male Boer goats experimentally infected with gastrointestinal nematodes weighing 15 ± 2.5 kg live weight and reared in a feedlot system for 28 days. The animals were divided into four groups of six animals, one group was treated with Mimosa caesalpiniifolia condensed tannin (CT), the second group was treated with CT and polyethylene glycol (CT + PEG), the third group was treated with 5 mg kg-1 BW-1 monepantel (positive control), and the fourth group did not receive any treatment (negative control). The results obtained for erythrocytes, hemoglobin, hematocrit, and total plasma protein showed no statistically significant differences among the groups, and neither did the biochemical variables alkaline phosphatase, aspartate aminotransferase, urea, creatinine, glucose, iron, calcium, phosphorus, and magnesium. Proteinogram data were evaluated, including total protein, albumin, ceruloplasmin, transferrin, haptoglobin, and α1-acid glycoprotein. There was no statistically significant difference among the groups for ceruloplasmin, transferrin, haptoglobin, and α1-acid glycoprotein. Therefore, the treatment of goats infected by gastrointestinal nematodes with M. caesalpiniifolia CT did not interfere in hematological, biochemical, and serum protein parameters.(AU)

Os pequenos ruminantes são acometidos por nematoides gastrintestinais que causam grandes prejuízos econômicos na ovinocaprinocultura. Alternativas têm sido estudadas para controle desses parasitas, como o uso de plantas taniníferas. Poucas pesquisas relatam os efeitos causados pelos taninos condensados sobre aspectos sanguíneos. Este trabalho teve como objetivo verificar o efeito do tanino condensado no tratamento de caprinos infectados por nematoides gastrintestinais sobre os parâmetros hematológicos, bioquímicos e proteinograma sérico. Foram coletadas amostras sanguíneas semanalmente de 24 caprinos mestiços da raça Boer, experimentalmente infectados com nematoides gastrintestinais, com seis meses de idade e pesando 15 ± 2,5 Kg de peso vivo (PV), criados em sistema de confinamento, durante 28 dias. Os animais foram divididos em quatro grupos de seis animais, sendo um grupo tratado com tanino condensado (TC) da Mimosa caesalpinifolia, o segundo grupo tratado com Tanino Condensado e Polietilenoglicol (TC+PEG), o terceiro grupo com monepantel (5mg kg-1/PV) (controle positivo) e o quarto grupo que não recebeu nenhum tipo de tratamento (controle negativo). Os resultados obtidos com eritrócitos, hemoglobina, hematócrito e proteína plasmática total não apresentaram diferenças estatisticamente significativas, bem como as variáveis bioquímicas fosfatase alcalina, aspartato aminotransferase, ureia, creatinina, glicose, ferro, cálcio, fósforo e magnésio. Foram avaliados dados de proteinograma, como proteína total, albumina, ceruloplasmina, transferrina, haptoglobina e α1-glicoproteína ácida. Não houve diferença estatisticamente significativa entre os grupos para ceruloplasmina, transferrina, haptoglobina e α1-glicoproteína ácida. Conclui-se que o tratamento de caprinos infectados por nematoides gastrintestinais com M. caesalpinifolia não interferiu nos parâmetros hematológicos, bioquímicos e proteinograma sérico.(AU)

Losses caused by gastrointestinal nematode infections in Dorper lambs under two nutritional status / Prejuízos causados pelas infecções por nematoides gastrintestinais em cordeiros Dorper submetidos a dois manejos nutricionais

The aim of this study was to evaluate the effect of two nutritional statuses on the productive performance of Dorper lambs naturally infected with gastrointestinal nematodes. Thirty-two lambs, grazing together on the same pasture, were allocated into four experimental groups: (G1) infected-supplemented diet, (G2) control-supplemented diet, (G3) infected-basal diet, and (G4) control-basal diet. Control animals received suppressive treatment with monepantel every two weeks, while precautionary anthelmintic treatments were given to all lambs of the infected groups with packed cell volume (PCV) 23%. There was reduction in the PCV means of all groups, which was more pronounced in the infected lambs that also presented reduction in total plasma protein values in comparison with the controls. Weight gain was affected by diet and infection status (P 0.05). Daily body weight gain was 0.170 kg in the G1, 0.205 kg in the G2, 0.085 kg in the G3, and 0.116 kg in the G4. The cold carcass weight was 4.1% and 13.7% higher in controls in comparison with infected lambs, respectively, in the supplemented and basal diets. The infected groups, despite receiving precautionary anthelmintic treatments to prevent deaths due to haemonchosis, presented reduction in the production parameters in comparison with the controls.(AU)

O experimento teve por objetivo determinar o efeito de dois níveis de nutrição no desempenho produtivo de cordeiros Dorper naturalmente infectados por nematoides gastrintestinais. Trinta e dois cordeiros, mantidos juntos na mesma pastagem, foram alocados em quatro grupos experimentais: (G1) infectado-suplementado, (G2) controle-suplementado, (G3) infectado-dieta basal e (G4) controle-dieta basal. Os cordeiros suplementados receberam diariamente concentrado em quantidade equivalente a 2% do peso corporal (PC), enquanto na dieta basal receberam apenas uma pequena quantidade de concentrado (0,35% do PC). Os animais controles receberam tratamento supressivo com anti-helmíntico a cada duas semanas e os infectados foram tratados individualmente quando apresentaram volume globular (VG) 23%. Houve redução nas médias de VG em todos os grupos, as quais foram mais pronunciadas nos animais dos grupos infectados, que também apresentaram redução nos valores de proteína plasmática total em comparação com os controles. Houve efeito significativo da dieta e da infecção no ganho de peso (P 0,05). O ganho em peso diário foi de 0,170 kg no G1, 0,205 kg no G2, 0,085 kg no G3 e 0,116 kg no G4. Os grupos infectados, apesar de receberem tratamentos anti-helmínticos preventivos que evitaram mortes por haemonchose, apresentaram redução nos parâmetros produtivos em comparação com os controles.(AU)

Anthelminthic resistance of gastrointestinal nematodes in sheep to monepantel treatment in central region of Rio Grande do Sul, Brazil

ABSTRACT: Given the numerous reports of anthelminthic resistance of sheep nematodes to different anthelmintic compounds, this study aimed to evaluate the resistance status of gastrointestinal nematodes from naturally infected sheep to monepantel in the state of Rio Grande do Sul. Four farms that present extensive raising system and absence of anthelmintic treatment for 60 days were selected for the study. Lambs that present counts of eggs per gram of feces (EPG) 200 (sensitivity of 50 EPG) one day (D-1) before the treatment were select for the study and randomly separated into two groups, a control group and an experimental group treated with monepantel. Feces were collected 9 days after the treatment (D+9) for EPG counts and fecal culture. The monepantel was 100% effective only on 2. The efficacy found on farm 1, 3, and 4 were 2.82%, 25.8%, and 78.4%, respectably. There were no viable larvae post-treatment at farm 2, but the genera Haemonchus, Trichostrongylus, Cooperia, and Strongyloides were resistant to it at the other farms. This study shows the presence of parasites resistant to the treatment with monepantel, pointing to the importance of monitoring its efficacy in sheep flocks of Rio Grande do Sul, Brazil.

RESUMO: Devido aos numerosos relatos de resistência anti-helmíntica de nematódeos gastrintestinais de ovinos a diferentes compostos, este estudo objetivou avaliar o status da resistência de nematódeos gastrintestinais de ovinos naturalmente infectados ao monepantel no estado do Rio Grande do Sul. Quatro fazendas que apresentam sistema extensivo de criação e ausência de tratamento anti-helmíntico por 60 dias foram selecionados para o estudo. Animais que apresentassem as contagens de ovos por grama de fezes (OPG) 200 (sensibilidade de 50 OPG) um dia (D-1) antes do tratamento foram selecionados para o estudo e separados em dois grupos, um grupo controle e um grupo experimental tratado com monepantel. Fezes foram coletadas nove dias após o tratamento (D + 9) para realização do OPG e cultura fecal. O monepantel foi 100% eficaz apenas na propriedade 2. A eficácia encontrada nas propriedades 1, 3 e 4 foi 2,82%, 25,8% e 78,4%, respectivamente. Não houveram larvas viáveis após o tratamento nas propriedades 2, porém os gêneros Haemonchus, Trichostrongylus, Cooperia e Strongyloides demonstraram resistência a este nas demais propriedades. Este estudo mostra a presença de parasitas resistentes ao tratamento com monepantel, apontando para a importância de monitorar a sua eficácia em rebanhos de ovinos do Rio Grande do Sul, Brasil.

Resistance to monepantel in multiresistant gastrointestinal nematodes in sheep flocks in Rio Grande do Sul / Resistência ao Monepantel em nematoides gastrintestinais multiresistentes em rebanhos ovinos no Rio Grande do Sul

The excessive, indiscriminate, and continued use of anthelmintic drugs as control methods favors parasite resistance, and this phenomenon has been reported in Brazil and worldwide. The current status of parasite resistance to anthelmintic drugs in sheep flocks in Rio Grande do Sul was assessed by calculating the EPG count in the stool to estimate the prevalence of resistance to the anthelmintic drugs closantel, levamisole, fenbendazole, monepantel, and moxidectin in seven properties. The animals from each flock were randomly distributed in six groups according to the anthelminthic drug used, as follows: T1, levamisole; T2, fenbendazole; T3, monepantel; T4, moxidectin; T5, closantel; and T6, control. On day zero, fecal samples were collected, and each animal was treated with one anthelminthic drug. Fecal samples were collected again after 14 days to calculate the efficacy of each active principle. Coproculture was performed using a pool of fecal samples from each group on day 0 and 14 to identify the predominant genera and prevalence of helminths. The genera identified in the coprocultures were Haemonchus, Trichostrongylus, Oesophagostomum, and Teladorsagia. All flocks developed resistance to levamisole, fenbendazole, moxidectin, and closantel. Moreover, resistance to monepantel was found in four of the seven farms. These results demonstrate the critical situation of anthelmintic resistance in sheep flocks in Rio Grande do Sul and the need to adopt other integrated control measures in addition to anthelmintic treatment.(AU)

Uso excessivo, indiscriminado e continuado de anti-helmínticos como métodos de controle favorece o desenvolvimento de isolados de parasitos resistentes, fenômeno relatado no Brasil e no mundo. Com o objetivo de verificar a atual situação da resistência anti-helmíntica em rebanhos ovinos no Rio Grande do Sul, foram realizados testes de redução da contagem de OPG nas fezes (TRCOF), a fim de estimar a prevalência de resistência parasitária em sete propriedades utilizando os seguintes anti-helmínticos: closantel, levamisol, fenbendazol, monepantel e moxidectina. Em cada rebanho os animais foram distribuídos aleatoriamente, respeitando a homogeneidade de categorias, em seis grupos, T1 - levamisol, T2 - fenbendazol, T3 - monepantel, T4 - moxidectina, T5 - closantel e T6 - controle. No dia zero foram coletadas amostras de fezes e os animais foram tratados, após 14 dias foi feita nova coleta de fezes para calcular a eficácia de cada princípio ativo. A coprocultura foi realizada através de um pool de fezes de cada grupo no dia 0 e 14 para identificação dos principais gêneros e as suas prevalências. Os gêneros de helmintos identificados nas coproculturas realizadas foram: Haemonchus, Trichostrongylus, Oesophagostomum e Teladorsagia. Em todos os rebanhos foi diagnosticada resistência ao levamisol, febendazol, moxidectina e closantel, e, em quatro das sete propriedades foi encontrada resistência ao monepantel. Alerta-se para a situação crítica da resistência anti-helmíntica nos rebanhos gaúchos e a necessidade de se adotarem outras medidas de controle integrado além do tratamento exclusivo com anti-helmíntico.(AU)

Anthelminthic resistance of gastrointestinal nematodes in sheep to monepantel treatment in central region of Rio Grande do Sul, Brazil / Resistência anti-helmíntica de nematódeos gastrointestinais de ovinos ao monepantel na região central do Rio Grande do Sul

Given the numerous reports of anthelminthic resistance of sheep nematodes to different anthelmintic compounds, this study aimed to evaluate the resistance status of gastrointestinal nematodes from naturally infected sheep to monepantel in the state of Rio Grande do Sul. Four farms that present extensive raising system and absence of anthelmintic treatment for 60 days were selected for the study. Lambs that present counts of eggs per gram of feces (EPG) ≥200 (sensitivity of 50 EPG) one day (D-1) before the treatment were select for the study and randomly separated into two groups, a control group and an experimental group treated with monepantel. Feces were collected 9 days after the treatment (D+9) for EPG counts and fecal culture. The monepantel was 100% effective only on 2. The efficacy found on farm 1, 3, and 4 were 2.82%, 25.8%, and 78.4%, respectably. There were no viable larvae post-treatment at farm 2, but the genera Haemonchus, Trichostrongylus, Cooperia, and Strongyloides were resistant to it at the other farms. This study shows the presence of parasites resistant to the treatment with monepantel, pointing to the importance of monitoring its efficacy in sheep flocks of Rio Grande do Sul, Brazil.(AU)

Devido aos numerosos relatos de resistência anti-helmíntica de nematódeos gastrintestinais de ovinos a diferentes compostos, este estudo objetivou avaliar o status da resistência de nematódeos gastrintestinais de ovinos naturalmente infectados ao monepantel no estado do Rio Grande do Sul. Quatro fazendas que apresentam sistema extensivo de criação e ausência de tratamento anti-helmíntico por 60 dias foram selecionados para o estudo. Animais que apresentassem as contagens de ovos por grama de fezes (OPG) ≥200 (sensibilidade de 50 OPG) um dia (D-1) antes do tratamento foram selecionados para o estudo e separados em dois grupos, um grupo controle e um grupo experimental tratado com monepantel. Fezes foram coletadas nove dias após o tratamento (D + 9) para realização do OPG e cultura fecal. O monepantel foi 100% eficaz apenas na propriedade 2. A eficácia encontrada nas propriedades 1, 3 e 4 foi 2,82%, 25,8% e 78,4%, respectivamente. Não houveram larvas viáveis após o tratamento nas propriedades 2, porém os gêneros Haemonchus, Trichostrongylus, Cooperia e Strongyloides demonstraram resistência a este nas demais propriedades. Este estudo mostra a presença de parasitas resistentes ao tratamento com monepantel, apontando para a importância de monitorar a sua eficácia em rebanhos de ovinos do Rio Grande do Sul, Brasil.(AU)

Anthelminthic resistance of gastrointestinal nematodes in sheep to monepantel treatment in central region of Rio Grande do Sul, Brazil / Resistência anti-helmíntica de nematódeos gastrointestinais de ovinos ao monepantel na região central do Rio Grande do Sul

Given the numerous reports of anthelminthic resistance of sheep nematodes to different anthelmintic compounds, this study aimed to evaluate the resistance status of gastrointestinal nematodes from naturally infected sheep to monepantel in the state of Rio Grande do Sul. Four farms that present extensive raising system and absence of anthelmintic treatment for 60 days were selected for the study. Lambs that present counts of eggs per gram of feces (EPG) ≥200 (sensitivity of 50 EPG) one day (D-1) before the treatment were select for the study and randomly separated into two groups, a control group and an experimental group treated with monepantel. Feces were collected 9 days after the treatment (D+9) for EPG counts and fecal culture. The monepantel was 100% effective only on 2. The efficacy found on farm 1, 3, and 4 were 2.82%, 25.8%, and 78.4%, respectably. There were no viable larvae post-treatment at farm 2, but the genera Haemonchus, Trichostrongylus, Cooperia, and Strongyloides were resistant to it at the other farms. This study shows the presence of parasites resistant to the treatment with monepantel, pointing to the importance of monitoring its efficacy in sheep flocks of Rio Grande do Sul, Brazil.(AU)

Devido aos numerosos relatos de resistência anti-helmíntica de nematódeos gastrintestinais de ovinos a diferentes compostos, este estudo objetivou avaliar o status da resistência de nematódeos gastrintestinais de ovinos naturalmente infectados ao monepantel no estado do Rio Grande do Sul. Quatro fazendas que apresentam sistema extensivo de criação e ausência de tratamento anti-helmíntico por 60 dias foram selecionados para o estudo. Animais que apresentassem as contagens de ovos por grama de fezes (OPG) ≥200 (sensibilidade de 50 OPG) um dia (D-1) antes do tratamento foram selecionados para o estudo e separados em dois grupos, um grupo controle e um grupo experimental tratado com monepantel. Fezes foram coletadas nove dias após o tratamento (D + 9) para realização do OPG e cultura fecal. O monepantel foi 100% eficaz apenas na propriedade 2. A eficácia encontrada nas propriedades 1, 3 e 4 foi 2,82%, 25,8% e 78,4%, respectivamente. Não houveram larvas viáveis após o tratamento nas propriedades 2, porém os gêneros Haemonchus, Trichostrongylus, Cooperia e Strongyloides demonstraram resistência a este nas demais propriedades. Este estudo mostra a presença de parasitas resistentes ao tratamento com monepantel, apontando para a importância de monitorar a sua eficácia em rebanhos de ovinos do Rio Grande do Sul, Brasil.(AU)

Nematode resistance to five anthelmintic classes in naturally infected sheep herds in Northeastern Brazil / Resistência de nematódeos a cinco classes de anti-helmínticos em rebanhos de ovinos naturalmente infectados no Nordeste do Brasil

This study aimed to evaluate the occurrence of nematode resistance to anthelmintics on sheep herds from the semi-arid region of Paraíba, Northeastern Brazil. Fecal Egg Count Reduction Test (FECRT) was carried out on 20 properties. In each herd, 30 animals were divided into five groups containing six animals each: group I, treated with albendazole 10%, 4 mg/kg; group II, ivermectin 0.08%, 0.2 mg/kg; group III, closantel 10%, 10 mg/kg; group IV, levamisole hydrochloride 5%, 5 mg/kg; and group V, monepantel 2.5%, 2.5 mg/kg. All treatments were administered orally as a single dose. Fecal samples were collected on days zero and 10 after treatment, to perform FECRT and coprocultures. Multiresistance was observed in all the properties; 95% had high resistance to albendazole, 85% to ivermectin, 80% to closantel, 40% to levamisole, and 45% to monepantel. On property 15, where monepantel was ineffective, a second FECRT for this anthelmintic was carried out 4 months after the first, resulting in 75% efficacy. Immediately after the FECRT result, two ewes were euthanized and necropsied, and Haemonchus contortus, Trichostrongylus axei, Trichostrongylus colubriformis, Oesophagostomum columbianum, and Trichuris ovis were recovered. It was concluded that the resistance of sheep gastrointestinal nematodes to antthelmintic, including monepantel, is high.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrência de resistência de nematódeos a anti-helmínticos em rebanhos ovinos do semiárido da Paraíba, Nordeste do Brasil. Testes de Redução na Contagem de Ovos Fecais (TRCOF) foram conduzidos em 20 propriedades. Em cada rebanho, 30 animais foram selecionados e foram divididos em cinco grupos contendo seis animais cada: grupo I, tratado com albendazol 10%, 10 mg/kg; grupo II, ivermectina 0,08%, 0,2 mg/kg; grupo III, closantel 10%, 10 mg/kg; grupo IV, cloridrato de levamisol 5%, 5 mg/kg; grupo V, monepantel 2,5%, 2,5 mg/kg. Todos os tratamentos foram administrados via oral, em dose única. Amostras fecais foram coletadas nos dias zero e 10 após os tratamentos, para a realização do TRCOF e coproculturas. Multirresistência foi observada em todas as propriedades; 95% dos rebanhos obtiveram alta resistência ao albendazole, 85% a ivermectina, 80% ao closantel, 40% ao levamisole, e 45% a monepantel. Na propriedade 15, onde o monepantel foi ineficaz, um segundo TRCOF foi conduzido para este fármaco 4 meses após o primeiro, resultando em 75% de eficácia. Imediatamente após o resultado do TRCOF, duas ovelhas foram eutanaziadas e necropsiadas, e Haemonchus contortus, Trichostrongylus axei, Trichostrongylus colubriformis, Oesophagostomum columbianum, e Trichuris ovis foram recuperados. Concluiu-se que a resistência dos nematódeos gastrintestinais de ovinos aos anti-helmínticos, incluindo o monepantel, é alta.(AU)

Haemonchus contortus resistance to monepantel in sheep: fecal egg count reduction tests and randomized controlled trials / Resistência de Haemonchus contortus ao monepantel em ovinos: testes de eficácia através de redução de contagem de ovos e controlado randomizado

Worm infections are a major cause of economic losses in sheep farming, and their control depends essentially on anthelmintic drugs. After decades without the discovery of new drug types, a new class of anthelmintics, called aminoacetonitrile derivatives, represented by monepantel, was released on the market. In order to evaluate a report of low efficacy of monepantel on a sheep farm in the municipality of Taiúva, state of São Paulo, Brazil, fecal egg count reduction and critical tests were performed on a Haemonchus contortus strain collected from this farm. To this end, ten animals were experimentally infected with 5000 H. contortus third-stage larvae, and these animals were divided into two groups, control and treated, according to the treatment with monepantel. The parameters evaluated were reduction in fecal egg counts on post-treatment days (PTD) 0, 2, 4, 7 and 14, and the therapeutic efficacy at the end of this period. Egg count reduction was observed starting on PTD 2, with a maximum reduction of 32.89% recorded on PTD 14. The critical test revealed 24.65% efficacy, indicating resistance to the active ingredient monepantel. The ineffectiveness of monepantel may be associated with the excessive use of the anthelmintic, which the farmer administered at intervals of less than one month, without technical guidance or a defined criterion. Given that the anthelmintic was used on this farm for less than one year, according to the farmer, it can be inferred that H. contortus develops resistance to monepantel in a few generations if the product is used incorrectly.(AU)

Verminoses são uma das principais causas de prejuízo econômico na ovinocultura, cujo controle depende essencialmente de fármacos anti-helmínticos. Depois de décadas sem o surgimento de novos grupos químicos de fármacos, uma nova classe de anti-helmínticos, os derivados da aminoacetonitrila, representados pelo monepantel, foram lançados no mercado. Com o objetivo de avaliar um relato de baixa eficácia do monepantel em uma propriedade produtora de ovinos do município de Taiúva, estado de São Paulo, foi realizado um teste de redução de contagem de ovos e um teste crítico em uma linhagem de Haemonchus contortus obtida da propriedade. Dez animais foram infectados experimentalmente com 5000 larvas de terceiro estágio do isolado de Haemonchus contortus, e estes animais foram divididos em dois grupos, controle e tratados, em dependência do tratamento com monepantel. Foram avaliados a redução de ovos nas fezes nos dias 0, 2, 4, 7 e 14 pós-tratamento e a eficácia terapêutica ao final do período. A redução da contagem de ovos foi observada a partir do 2o dia pós-tratamento (DPT), com redução máxima, de 32,89%, registrada no 14º DPT. O teste crítico revelou eficácia de apenas 24,65%, evidenciando resistência ao princípio ativo. A ineficácia do monepantel pode estar associada a utilização do vermífugo de forma massiva, uma vez que o produtor administrava o produto em intervalos inferiores a um mês, sem orientação técnica ou critério definido. Dado que o anti-helmíntico foi usado na propriedade por período inferior a um ano, de acordo com o produtor, pode-se sugerir que Haemonchus contortus desenvolva resistência ao monepantel em poucas gerações caso o produto seja utilizado incorretamente.(AU)

Multiple anthelmintic resistance in Southern Brazil sheep flocks / Múltipla resistência anti-helmíntica em rebanhos ovinos no sul do Brasil

Gastrointestinal parasites represent an important cause of reduced productivity of sheep worldwide. As anthelmintic are still the main control tool for these parasites, this work evaluated the efficacy of commercially available active principles in 22 sheep flocks in the southern region of Rio Grande do Sul, Brazil. In each farm 10 sheep were randomly distributed in seven groups with the following treatments: abamectin; albendazole; closantel; levamisole; monepantel; trichlorphon and no anthelmintic (control). All flocks showed resistance to at least three anthelmintics and in 20 farms only two products demonstrated efficacy for parasitic control. In two farms, there was no susceptibility to the six active principles tested. The results of this study provide evidence that the common commercially available anthelmintic are not assuring effective chemical control of gastrointestinal parasitic infections in ovine flocks in the southern region of Rio Grande do Sul. Monepantel, the newest introduced drug in the Brazilian market was not effective in 18% of the flocks tested, confirming that the parasitic resistance can be established quickly after the introduction of new molecules mainly when alternative program of parasite control is not performed.(AU)

As parasitoses gastrintestinais representam importante causa de queda na produtividade na ovinocultura mundial. Como a utilização de anti-helmínticos é, ainda, a principal forma de controle parasitário, o presente estudo avaliou a eficácia de princípios ativos comercialmente disponíveis, em 22 rebanhos ovinos da região Sul do Rio Grande do Sul, Brasil. Em cada propriedade foram utilizados 10 ovinos divididos em sete grupos que receberam os seguintes tratamentos: abamectina; albendazole; closantel; levamisole; monepantel; e triclorfon. Um grupo permaneceu como controle, sem tratamento anti-helmíntico. Nas 22 propriedades do estudo houve resistência, no mínimo, a três anti-helmínticos. Em 20 propriedades apenas dois produtos demonstraram eficácia para o controle parasitário. Em duas propriedades não houve sensibilidade aos seis princípios ativos testados. Os resultados do presente estudo demonstraram que os anti-helmínticos disponíveis no marcado Brasileiro não asseguram um controle parasitário efetivo nos rebanhos ovinos da região Sul do Rio Grande do Sul, incluindo o monepantel que foi ineficaz em 18% dos rebanhos testados, confirmando que a resistência dos parasitos aos princípios ativos pode se estabelecer rapidamente após a introdução de novas moléculas, principalmente quando programas alternativos de controle não são realizados.(AU)

Resistência de uma população de Haemonchus contortus ao monepantel no Espírito Santo, Brasil

Objetivou-se neste trabalho avaliar a eficácia do tratamento com anti helmíntico (monepantel) sobre as populações de nematoides gastrointestinais em ovinos, sendo o estudo dividido em duas etapas. Na primeira foi realizado o resgate do histórico dos princípios ativos utilizados no rebanho da fazenda ao longo dos últimos cinco anos e três testes de eficácia foram realizados para avaliação dos principais fármacos utilizados ao longo dos anos. Foi verificado que monepantel está sendo utilizado na propriedade desde o ano 2014, apresentando eficácias de 96, 64 e 1%, respectivamente nos anos de 2015, 2017 e 2019. Na segunda etapa, foram selecionados 14 cordeiros, machos e fêmeas com idade média de 130 dias, alocados em dois grupos experimentais: controle e tratado. Após as análises de OPG das amostras fecais, os animais foram divididos em dois grupos, o grupo tratado foi medicado com 1mL/10 kg de monepantel, enquanto o grupo controle não recebeu nenhum tratamento com anti-helmíntico. Após 7 dias da realização do tratamento, os animais foram eutanasiados par recuperação dos parasitos no trato gastrointestinal. O material foi analisado, realizando a contagem e identificação dos parasitos. O cálculo para avaliação da eficácia demonstrou redução de 61%, demonstrando resistência anti-helmíntica de Haemonchus contortus e valores sugestivos de resistência de Oesophagostomum columbianum ao monepantel.

The objective of this work was to evaluate the efficacy of treatment with anthelmintic (monepantel) on the populations of gastrointestinal nematodes in sheep, and the study is divided into two studies. In the first, the history of the active ingredients used in the herd of the farm was carried out during the last five years and three efficacy tests were performed to evaluate the main drugs used over the years. It was verified that monepantel is being used in the property since 2014, presenting efficacies of 96, 64 and 1%, respectively in the years 2015, 2017 and 2019. In the second stage, 14 lambs, males and females with a mean age of 130 days, allocated in two experimental groups were selected: control and treated. After the OPG analyses of the fecal samples, the animals were divided into two groups, the treated group was medicated with 1mL/10 kg of monepantel, while the control group did not receive any treatment with anthelmintic. After 7 days of treatment, the animals were euthanized for recovery of parasite in the gastrointestinal tract. The material was analyzed, performing the counting and identification of the parasitos. The calculation for efficacy evaluation showed a reduction of 61%, demonstrating anthelmintic resistance of Haemonchus contortus and values suggestive of resistance of Oesophagostomum columbianum to monepantel.

NANOEMULSÕES DE ALGINATO E ÓLEO ESSENCIAL DE Eucalyptus staigeriana: PRODUÇÃO, CARACTERIZAÇÃO, TOXICIDADE E ATIVIDADE ANTI-HELMÍNTICA SOBRE NEMATOIDES GASTRINTESTINAIS DE PEQUENOS RUMINANTES

O parasitismo por nematoides gastrintestinais (NGI) é uma grave ameaça a ovinocaprinocultura e com o aparecimento e disseminação da resistência anti-helmíntica (RA), novas alternativas de controle são necessárias. O óleo essencial de Eucalyptus staigeriana (OEEs) apresenta atividade anti-helmíntica, e o desenvolvimento de formulações visando o seu encapsulamento usando matriz de alginato de sódio (ALG) pode ser vantajoso para aumentar sua estabilidade e eficácia. Objetivando-se desenvolver emulsões de ALG e OEEs para o controle de NGI de pequenos ruminantes, a metodologia foi realizada em três fases. Na fase 1, cujo objetivo foi caracterizar uma população de Haemonchus contortus, nomeada Caucaia, quanto à RA, realizou-se a comparação entre testes fenotípicos de eclosão de ovos (TEO), desenvolvimento larvar (TDL) e redução de ovos nas fezes (TRCOF) e genotípico por qPCR para benzimidazois (BZs) e levamisol (LEV). Houve concordância entre TEO, TRCOF e qPCR para BZs, e entre TDL e qPCR para LEV. A população Caucaia foi considerada resistente a BZs, lactonas macrocíclicas, LEV e suspeita para monepantel. Na fase 2, objetivou-se desenvolver emulsões de ALG e OEEs, caracterizá-las e avaliar seus efeitos in vitro sobre eclosão de ovos e desenvolvimento larvar de H. contortus. Quatro emulsões foram preparadas com proporções variadas de Tween 80, OEEs e ALG 4%, caracterizadas físico-quimicamente e avaliadas no TEO e TDL. As emulsões foram estáveis, com tamanho de partícula predominantemente nanométrico e potencial zeta negativo. As emulsões foram mais efetivas que o OEEs no TEO, com concentração efetiva 50% (CE50) de 0,088 a 0,150 mg/mL para as emulsões e 0,308 mg/mL para OEEs. No TDL, emulsões e OEEs foram semelhantes, com CE50 variando de 3,91 a 4,60 mg/mL para emulsões e 4,17 mg/mL para OEEs. Portanto, emulsões de ALG e OEEs foram produzidas com sucesso, sendo a emulsão 2 (E2), com menor razão Tween 80/OEEs e ALG/OEEs, considerada a melhor e com potencial para o controle alternativo de H. contortus. Na fase 3, objetivou-se avaliar E2 in vitro contra H. contortus adultos, sua toxicidade aguda e atividade in vivo contra NGI. Foram realizados os testes de motilidade do adulto (TMA), avaliação por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e confocal de varredura a laser (MCVL). A dose letal 50% (DL50) de E2 foi verificada e o TRCOF foi realizado contra NGI da população Caucaia. No TMA, OEEs e E2 inibiram a motilidade de H. contortus e nas concentrações de 0,4 e 0,6 mg/mL, E2 foi mais efetiva que o OEEs. As imagens de MEV e de MCVL demonstraram alterações estruturais, principalmente, enrugamento de cutícula. A DL50 estimada da emulsão foi superior a 2.000 mg/kg. No TRCOF, a eficácia do OEEs e de E2 foram similares, com 54,2% de redução no opg pós-tratamento. Portanto, E2 demonstrou efeito promissor contra H. contortus adultos in vitro, segurança toxicológica e atividade contra NGI in vivo. Dessa forma, foi possível produzir e caracterizar, de forma bem-sucedida, emulsões de ALG e OEEs, que demonstraram estabilidade e atividade anti-helmíntica contra NGI de pequenos ruminantes, com potencial para aplicação em futuros esquemas de tratamento alternativo.

Parasitism by gastrointestinal nematodes (GIN) is a serious threat to sheep and goat farming and due to emergence and spread of anthelmintic resistance (AR), new control alternatives are required. The essential oil of Eucalyptus staigeriana (EsEO) has anthelmintic activity, so the development of formulations aimed at its encapsulation using sodium alginate matrix (ALG) can be advantageous to increase its stability and effectiveness. Aiming to develop emulsions of ALG and EsEO to control GIN in small ruminants, the methodology was developed in three phases. In phase 1, whose objective was to characterize a population of Haemonchus contortus, named Caucaia, regarding AR, a comparison was made between phenotypic tests of egg hatch (EHT), larval development (LDT) and fecal egg reduction (FECRT) and genotypic by qPCR for benzimidazoles (BZs) and levamisole (LEV). There was agreement between EHT, FECRT and qPCR for BZs, and between LDT and qPCR for LEV. The Caucaia population was considered resistant to BZs, macrocyclic lactones, LEV and suspected for monepantel. In phase 2, the aim was to develop emulsions of ALG and EsEO, characterize them and evaluate their in vitro effects on egg hatching and larval development of H. contortus. Four emulsions were prepared by varying proportions between Tween 80, EsEO and 4% ALG, physicochemically characterized and evaluated on EHT and LDT. The emulsions were stable, with predominantly nanometric particle size and negative zeta potential. The emulsions were more effective than EsEO in EHT, with effective concentration 50% (EC50) ranging from 0.088 to 0.150 mg/mL for the emulsions and 0.308 mg/mL for EsEO. In LDT, emulsions and EsEO were similar, with EC50 ranging from 3.91 to 4.60 mg/mL for emulsions and 4.17 mg/mL for EsEO. Therefore, ALG and EsEO emulsions were successfully produced, and emulsion 2 (E2), with low levels of the ratio between Tween 80/EsEO and ALG/EsEO was considered the best and with potential for alternative control of H. contortus. In phase 3, the aim was to evaluate E2 in vitro against adult H. contortus, its acute toxicity and in vivo activity against GIN. Adult worm motility test (AWMT) was performed, evaluation by scanning electron microscopy (SEM) and confocal laser scanning microscopy (CLSM). The lethal dose 50% (LD50) of E2 was assessed and FECRT was performed against the Caucaia population GIN. In AWMT, EsEO and E2 inhibited the motility of H. contortus and at concentrations 0.4 and 0.6 mg/mL, E2 was more effective than EsEO. SEM and CLSM images showed structural changes, mainly cuticle wrinkling. The LD50 of the emulsion was estimated to be greater 2,000 mg/kg. In FECRT, the efficacy of EsEO and E2 were similar, with a 54.2% reduction in epg post-treatment. Therefore, E2 showed promising effect against adult H. contortus in vitro, toxicological safety and activity against GIN in vivo. In this way, it was possible to successfully produce and characterize emulsions of ALG and EsEO, which demonstrated stability and anthelmintic activity gainst GIN of small ruminants, with potential for application in future alternative treatment schemes.

DESENVOLVIMENTO E VALIDAÇÃO DE UM TESTE DE DIAGNÓSTICO PARA MONITORAMENTO DA RESISTÊNCIA ANTI-HELMÍNTICA EM REBANHOS OVINOS

O teste de desenvolvimento larvar (TDL) pode ser uma ferramenta de diagnóstico da resistência anti-helmíntica de rebanhos, permitindo seu monitoramento e ajustes de manejo. O objetivo deste estudo foi desenvolver e validar um teste de diagnóstico in vitro da resistência de Haemonchus contortus a anti-helmínticos comerciais e validar os resultados a campo. A eficácia do tiabendazol (TBZ), levamisol (LEV), ivermectina-monossacárida (IVM-M), monepantel (MPT) e Zolvix® (ZLV) foi avaliada no TDL em isolados de H. contortus susceptível (Echevarria1991-HcEc91) e resistente (Botucatu-HcBot), em placas de cultura de 24 e 96 poços. Testes complementares foram posteriormente realizados com a ivermectina aglicona (IVMA). Para validação do TDL, realizou-se o teste de redução da contagem de ovos nas fezes (TRCOF) em cinco rebanhos ovinos com anti-helmínticos comerciais dos mesmos grupos químicos (grupos de 7 animais com OPG 200). TDL e coproculturas também foram realizadas com as amostras dos rebanhos (HcRebanhos). H. contortus foi o parasita majoritário em todas as fazendas (média de 74%). O fator de resistência (FR) definido para os isolados foi superior a 3, indicando que o teste foi capaz de diferenciar HcEc91 e HcBot para TBZ, LEV, MPT, ZLV, IVM-A, e de maneira menos consistente para IVM-M. A similaridade das curvas dose-resposta entre as placas e interação placa*concentração (R2 de 98,4 a 99,0% para HcEc91/HcBot e de 99,4 a 99,0% para HcRebanhos), bem como baixas diferenças na eficácia média (0,02 a 2,26% para HcEc91/HcBot e 0,02 a 4,90% para HcRebanhos) para todos os anti-helmínticos, exceto para MPT, indicaram concordância confiável do TDL em ambas as placas, tanto para a avaliação de HcEc91/HcBot quanto para HcRebanhos. No último caso, a detecção de resistência pelo ZLV foi mais clara e mais estável do que pelo MPT. A adaptação do teste para placas de 96 poços resultou em economia de pelo menos 51.9%. Por meio do TRCOF, detectou-se resistência a todos os grupos químicos em todos os rebanhos, exceto para ZLV (40% resistentes e 20% suspeitos de resistência). Os resultados do TDL nos rebanhos indicaram resistência a TBZ (100%), LEV (80%), ZLV (20%), IVM-M (0%) e IVM-A (100%). Foi obtida concordância total quanto aos resultados de ambos os testes para TBZ e IVM-A (k=1,00). Já para LEV e ZLV, apesar de haver divergência de resultados em dois rebanhos, esta não foi estatisticamente diferente para ambas as drogas (P= 0,077 e P= 0,197, respectivamente), obtendo-se concordância substancial (k= 0,8 e 0,6, respectivamente). Os dados do presente estudo indicam que os resultados dos dois testes são comparáveis, validando, portanto, esse teste como uma opção para o diagnóstico da resistência anti-helmíntica para produtores de pequenos ruminantes.

The larval development test (LDT) can be a diagnostic tool for anthelmintic resistance in flocks, allowing monitoring and management adjustments. The aim of this study was to develop and validate an in vitro diagnostic test of Haemonchus contortus resistance to commercial anthelmintics and to validate the results at the farm level. The efficacy of thiabendazole (TBZ), levamisole (LEV), ivermectin-monosaccharide (IVM-M), monepantel (MPT) and Zolvix® (ZLV) were evaluated in LDT in susceptible (Echevarria1991-HcEc91) and resistant (BotucatuHcBot) isolates, in 24 and 96 well culture plates. Complementary tests were subsequently performed with ivermectin aglycone (IVM-A). To validate the LDT, the fecal egg count reduction test (FECRT) was performed in five sheep flocks with commercial anthelmintics from the same chemical groups (groups of 7 animals with FEC 200). LDT and fecal cultures were also carried out with the samples of the flocks (HcFlocks). H. contortus was the major parasite on all farms (average of 74%). The resistance factor (RF) defined for the isolates was greater than 3, indicating that the test was able to differentiate HcEc91 and HcBot for TBZ, LEV, MPT, ZLV, IVM-A, and in a less consistent way for IVM-M. The similarity of the dose-response curves between the plates and plate*concentration interaction (R2 from 98.4 to 99.0% for HcEc91/HcBot and from 99.4 to 99.0% for HcFlocks), as well as low differences in efficacy mean (0.02 to 2.26% for HcEc91/HcBot and 0.02 to 4.90% for HcFlocks) for all anthelmintics, except for MPT, indicated a reliable agreement of the LDT in both plates, both for the evaluation of HcEc91/HcBot as for HcFlocks. In the latter case, resistance detection by ZLV was clearer and more stable than by MPT. The adaptation of the test to 96-well plates resulted in savings of at least 51.9%. Through FECRT, resistance to all chemical groups was detected in all flocks, except for ZLV (40% resistant and 20% suspected of resistance). LDT results in flocks indicated resistance to TBZ (100%), LEV (80%), ZLV (20%), IVM-M (0%) and IVM-A (100%). Total agreement was obtained regarding the results of both tests for TBZ and IVM-A (k = 1.00). For LEV and ZLV, although there was a divergence of results in two flocks, this was not statistically different for both drugs (P = 0.077 and P = 0.197, respectively), with substantial agreement (k = 0.8 and 0.6, respectively). The data from the present study indicate that the results of the two tests are comparable, thus validating this test as an option for the diagnosis of resistance for small ruminant farmers.

EXTRATO DE PRÓPOLIS VERDE NO CONTROLE DE HELMINTOS GASTROINTESTINAIS DE OVINOS E CAPRINOS: ESTUDOS IN VITRO E IN VIVO

O uso indiscriminado de anti-helmínticos químicos sem o devido conhecimento do manejo a ser adotado bem como as características do produto e do animal a ser tratado podem ocasionar a resistência parasitária, a qual pode ser diminuída quando se faz a adoção de métodos de controle alternativos, utilizando produtos de origem natural. Neste contexto, o objetivo do trabalho foi avaliar a potencialidade da utilização da própolis verde sobre ovos e larvas de helmintos gastrointestinais de ovinos (in vitro) e sua eficácia anti-helmíntica em caprinos (in vivo). Primeiramente, o percentual de ácidos fenólicos, flavonoides e a atividade antioxidante da própolis verde utilizada foram determinados a fim de estabelecer quais os principais compostos químicos presentes e suas respectivas quantidades. Os efeitos do fitoterápico sobre ovos e larvas de helmintos gastrointestinais de ovinos avaliados por meio de testes que predisseram percentuais de eclodibilidade de ovos e inibição da migração larval dos helmintos. Em uma segunda etapa, os efeitos do extrato de própolis verde foram observados diretamente sobre os animais. Cabras Boer foram divididas em três grupos experimentais, sendo: T1 tratamento com glicerina (animais recebendo glicerina bidestilada líquida), T2 extrato de própolis verde (0,3g/kg PV) e T3 anti-helmíntico químico monepantel. Ambos grupos experimentais receberam os produtos teste no dia sete do período experimental, coletas de ma terial fecal para análises de ovos por grama de fezes (OPG) e coprocultura foram realizadas até o dia 60. A coloração da mucosa ocular foi determinada em todos os dias de coleta, pelo método Famacha. Foram colhidas amostras de sangue para realização de hemograma e perfil bioquímico sérico. O teste de redução de contagem de ovos nas fezes (TRCOF) foi realizado com o objetivo de predizer o grau de redução n a contaminação por helmintos para os diferentes produtos. A própolis utilizada apresentou uma vasta composição química, compostos como taninos e diferentes fenólicos garantiram a atividade anti -helmíntica da mesma. Elevada atividade antioxidante foi observada pela técnica de capacidade antioxidante de redução férrica. Não foi observada eclodibilidade de ovos quando utilizada a concentração de 99,99 mg mL -1 do fitoterápico, a mesma concentração inibiu mais de 97% da migração de larvas. Os valores de OPG e Famacha foram melhores para o monepantel quando comparado à própolis verde. O anti-helmíntico químico apresentou 64% de redução da contaminação no TRCOF. Conforme os resultados de hemograma, a própolis teve efeito positivo sobre o sistema imune dos animais, diminuindo a possível ocorrência de processos inflamatórios ou ainda sua intensidade. As infecções de ambos tratamentos apresentaram maiores proporções de H. contortus em relação às demais espécies de helmintos. A própolis foi eficiente no controle de nema toides gastrointestinais de pequenos ruminantes, ao passo que controlou o vos e larvas de helmintos.

The indiscriminate use of chemical anthelmintics without proper knowledge of the management to be adopted as well as the characteristics of the product and animal to be treated can cause parasitic resistance, which can be reduced when adopting alternative control methods, using products of natural origin. This work aimed to evaluate the potentiality of the use of green propolis on eggs and larvae of gastrointestinal helminths of sheep (in vitro) and their anthelmintic efficacy in goats (in vivo). First, the percentage of phenolic acids, flavonoids and the antioxidant activity of green propolis used were determined in order to establish the main chemical compounds present and their respective amounts. The effects of the herbal remedy on eggs and larvae of the gastrointestinal helminths of sheep evaluated by means of tests predicted percentages of egg hatchability and inhibition of larval migration of helminths. In a second step, the effects of the green propolis extract were obse rved directly on animals. Boer goats were divided into three experimental groups: T1 glycerin treatment (animals receiving liquid double - distilled glycerin), T2 - green propolis extract (0,3g / kg PV) and T3 - anthelmintic chemical - monepantel. Both experimental groups received the test products on the seventh day of the experimental period, fecal material samples for analysis of eggs per gram of feces (EPG) and coproculture were carried out until the 60th. The ocular mucosa coloration was determined on all days of collection by the Famacha method. Blood samples were collected for hemogram and serum biochemical profile. The FEC reduction test (FECRT) was performed with the objective of predicting the degree of reduction in helminth contamination for the different products. The propolis used presented a great chemical composition, compounds such as tannins and different phenolics guaranteed the anthelmintic activity of the same. High antioxidant activity was observed by the technique of antioxidant capacity of iron reduction. No egg hatchability was observed when the concentration of 99.99 mg mL -1 of the herbal product was used, the same concentration inhibited more than 97% of the larvae migration. The values of EPG and Famacha were better for monepantel when compared to green propolis. The chemical anthelmintic showed a 64% reduction in FECRT contamination. According to the hemogram results, propolis had a positive effect on the immune system of the animals, reducing the possible occurrence of inflammator y processes or even their intensity. Infections of both treatments presented higher proportions of H. contortus in relation to other species of helminths. Propolis was efficient in controlling gastrointestinal nematodes of small ruminants, while controlling eggs and larvae of helminths.

Eficácia do monepantel para controle de estrongilídeos parasitos gastrintestinais de ovinos / monepantel efficacy to control gastrointestinal strongylid parasites in sheep

            A resistência anti-helmíntica é um dos maiores desafios para o controle de endoparasitos em pequenos ruminantes. O recente lançamento do monepantel pode representar uma alternativa para tratamento das helmintoses, associado a outras ferramentas de controle integrado. Este trabalho tem por objetivo testar a eficácia do monepantel em um rebanho de ovinos com histórico de resistência às lactonas macrocíclicas e benzimidazóis, em Uberlândia-MG. Foram selecionados vinte ovinos cujos valores individuais de ovos por grama de fezes(OPG) no método de Gordon e Witlock foram superiores a 200. Estes animais foram divididos em um grupo tratado com monepantel 2,5mg/kg, por via oral,(n=10) e um grupo controle(n=10). No dia zero, foram procedidas a pesagem dos animais, a administração do vermífugo e a coleta de fezes para determinação de OPG. Novas coletas de fezes foram realizadas 7 e 14 dias após o tratamento. O percentual de redução de OPG(R%) foi calculado pela diferença entre a média de OPG do grupo tratado antes e após o tratamento; o percentual de eficácia

Resistência anti-helmíntica e controle biológico de nematódeos gastrintestinais de ovinos em ambiente semiárido

No capítulo I, o objetivo do trabalho foi avaliar a ação do Monepantel e outros anti-helmínticos sobre nematódeos gastrintestinais de ovinos do Semiárido da Paraíba. O segundo trata-se da influência do tempo de estocagem de três anos de péletes de M. thaumasium sobre a predação de larvas infectantes de tricostrongilideos de ovinos. O primeiro estudo foi desenvolvido em 20 propriedades, onde utilizamos 30 ovinos de cada propriedade sem tratamento anti-helmíntico a pelo menos três meses. Os animais foram divididos em cinco grupos: grupo I, tratados com 2,0 mL / 10 kg de Albendazol 10%; grupo II, tratados com 2,5 mL / 10 kg de Ivermectina 0,08%; grupo III, tratado com 1,0 mL / 10 kg de Closantel 10%; grupo IV, tratado com 1,0 mL / 10 kg de Cloridrato de Levamisole 5%; e o grupo V, tratados com 1,0 mL / 10 kg de Monepantel 2,5%. Amostras fecais foram coletadas nos dias zero e dez para realização das análises fecais. Para avaliar a resistência, aplicou-se o teste de redução na contagem de ovos por grama de fezes (RCOF) e a coprocultura. Foi observada a multirresistência em todas as propriedades avaliadas, onde 95% das fazendas tinham alta resistência ao Albendazol, 85% à Ivermectina, 80% ao Closantel, 40% ao Levamisole e 45% ao Monepantel. O segundo TRCOF para Monepantel foi realizado quatro meses após o primeiro na propriedade 15, onde o vermífugo foi ineficaz, resultando em eficácia de 75%. Duas ovelhas foram eutanaziadas e necropsiadas, e Haemonchus contortus, Trichostrongylus axei, Trichostrongylus colubriformis, Oesophagostomum columbianum e Trichuris ovis foram recuperados. O segundo estudo foi realizado no Instituto Federal da Paraíba, campus Sousa, Foram utilizados oito ovinos com OPG negativo, divididos em quatro grupos experimentais: Grupo I, 3g/10 kg de p.v de péletes de M. thaumasium 36 meses de estocagem, dose única; Grupo II, 3g/ 10 kg de péletes de M. thaumasium - recém produzidos, dose única; Grupo III, 3g/10 kg p.v, de péletes sem fungos; Grupo IV, controle. A cada 24h, até 120 h, as fezes dos animais foram coletadas e enviadas ao Laboratório de Parasitologia Veterinária para realização das análises. Foram pesadas 15 gramas de fezes de cada animal e acrescidas cinco gramas de vermiculite expandida, procedidas as coproculturas e adicionadas 1000 larvas infectantes (L3) de tricostrongilídeos de ovinos, sendo a recuperação larval realizada após sete dias. Observou-se que a predação de larvas no Grupo I (M. thaumasium - 36 meses) não diferiu estatisticamente (p>0,01) do Grupo II (M. thaumasium recente), apresentando respectivamente reduções de 75 e 79%. Ambos os grupos acrescentaram pico de predação larvas às 72h. O gênero de helminto mais recuperado nas coproculturas foi Haemonchus sp. Concluiu-se que os nematódeos gastrintestinais de ovinos estão resistentes ao monepantel e que foi frequente a ocorrência de multirresistência a anti-helmínticos por esses nematódeos. Concluiu-se que o período de estocagem de 3 anos de M. thaumasium na matriz de alginato não influenciou a eficácia da predação de larvas de trichotrongilidea de ovelhas, com alta redução da recuperação larval e presença de atividade fúngica nas fezes até 96 horas após administração aos animais.

In Chapter I, the objective of this study was to evaluate the action of Monepantel and other anthelmintics on gastrointestinal nematodes of sheep of the Paraíba Semi-arid. The second is the influence of the three-year storage time of M. thaumasium pellets on the predation of infective larvae of tricostrongilide sheep. The first study was developed in 20 properties, where we used 30 sheep from each farm without anthelmintic treatment for at least three months. The animals were divided into five groups: group I, treated with 2.0 mL / 10 kg of 10% Albendazole; group II, treated with 2.5 ml / 10 kg Ivermectin 0.08%; Group III treated with 1.0 mL / 10 kg of 10% Closantel; Group IV, treated with 1.0 mL / 10 kg of 5% Levamisole Hydrochloride; and group V treated with 1.0 mL / 10 kg of 2.5% Monepantel. Fecal samples were collected at days zero and ten to perform fecal analyzes. To evaluate the resistance, the reduction test was applied in egg count per gram of feces (RCOF) and coproculture. Multiresistance was observed in all the properties evaluated, where 95% of the farms had high resistance to Albendazole, 85% to Ivermectin, 80% to Closantel, 40% to Levamisole and 45% to Monepantel. The second TRCOF for Monepantel was performed four months after the first one at property 15, where the vermifuge was ineffective, resulting in 75% efficacy. Two sheep were euthanized and necropsied, and Haemonchus contortus, Trichostrongylus axei, Trichostrongylus colubriformis, Oesophagostomum columbianum and Trichuris ovis were recovered. The second study was carried out at the Federal Institute of Paraíba, Sousa campus. Eight negative OPG sheep were divided into four experimental groups: Group I, 3g / 10kg of pellets of M. thaumasium - 36 months of storage, dose only; Group II, 3g / 10 kg of M. thaumasium pellets - freshly produced, single dose; Group III, 3g / 10 kg p.v, of pellets without fungi; Group IV, control. Every 24 hours, up to 120 h, the faeces of the animals were collected and sent to the Veterinary Parasitology Laboratory for analysis. Fifteen grams of feces from each animal were weighed and five grams of expanded vermiculite were added, the coprocultures were added and 1000 infective larvae (L3) of tricostrongilídeos of ovinos, being the larval recovery realized after seven days. It was observed that the predation of larvae in Group I (M. thaumasium - 36 months) did not differ statistically (p> 0.01) from Group II (M. thaumasium - recent), respectively presenting reductions of 75 and 79%. Both groups added peak predation to larvae at 72 h. The genus of helminth most recovered in coprocultures was Haemonchus sp. It was concluded that the gastrointestinal nematodes of sheep are resistant to monepantel and that the occurrence of multi-resistance to anthelmintic by these nematodes was frequent. It was concluded that the 3-year storage period of M. thaumasium in the alginate matrix did not influence the efficacy of predation of sheep trichotrongilide larvae with high reduction of larval recovery and presence of fungal activity in the feces up to 96 hours after administration animals.

TRATAMENTO SUPRESSIVO COM MONEPANTEL SOBRE A SELEÇÃO FENOTÍPICA EM OVELHAS NATURALMENTE INFECTADAS EM PASTAGENS

O controle de parasitas gastrintestinais têm se mostrado um grande desafio para a ovinocultura no Brasil, devido ao fenômeno da resistência aos medicamentos anti-parasitários. O fenômeno da resistência é a redução da eficácia do medicamento inferior a 95%. A fim de estudar a resposta ao uso do princípio ativo monepantel (MNT) em tratamento supressivo de ovinos em pastagens, foram utilizadas 45 ovelhas mestiças Suffolk e White Dorper, naturalmente infectadas com nematódeos gastrintestinais (NGI) no Laboratório de Produção e Pesquisa em Ovinos e Caprinos (LAPOC) da Universidade Federal do Paraná. As ovelhas foram divididas em três grupos de 15 animais, sendo; G1: Controle; sob tratamento após avaliação do grau FAMACHA© (FMC) a cada 15 dias, G2: Monepantel (MNT) na dose terapêutica de 20 mg/kg, independentemente do grau FMC; e G3: MNT na dose de 40 mg/kg, independentemente do grau FMC. Para os grupos 2 e 3 os animais receberam as doses do medicamento via oral, conforme a recomendação do fabricante, a cada 30 dias. A cada 15 dias todos os animais do experimento foram pesados e tinham seu grau FMC e escore de condição corporal monitorados, além do sangue coletado para determinação do hematócrito a cada 30 dias; nesse intervalo também ocorriam as avaliações de pastagem, altura e massa de forragem na qual os animais foram mantidos. As contagens de larvas infectantes (L3) na pastagem ocorreram mensalmente. A eficácia do MNT foi avaliada nos dias 0, 7, 14, 21 e 28 de cada mês, através de coleta de fezes semanal para contagem de ovos por grama de fezes (OPG), sendo reiniciada a avaliação a partir da aplicação do medicamento no dia 0 do mês subsequente, totalizando seis meses. A cada 30 dias foi feita coprocultura com a amostra fecal composta de todos os animais para identificação das espécies de parasitas. Não houve efeito de tratamento (P>0,05) sobre o número de OPG nas fezes das ovelhas e nem sobre a variável peso (P=0,75). No entanto, sobre esta variável houve efeito de período (P<0,0001) e interação tratamento x período (P<0,0001). Os valores de grau FMC variaram entre os graus 1 e 2. As médias de hematócrito foram 27, 29 e 32%, respectivamente, para os grupos Controle, G2 e G3. Concluiu-se que, após a utilização do MNT de maneira supressiva, a baixa eficácia observada (28 e 39% para os grupos 2 e 3, respectivamente) pode ser indicativo de resistência parasitária.

The control of intestinal parasites has been demonstrated a big challenge for the sheep farming in Brazil as a result of the resistance of the nematodes to anti-parasitic. The phenomenon of the resistance is a significant reduction in 95% on efficacy of the medicine. To study an answer the use of the active monepantel (MNT) in suppressor treatment of sheep in pasturage, 45 sheep Suffolk and White Dorper sheep naturally infected with gastrointestinal nematodes (GIN) were used in the Sheep Research and Production Laboratory (LAPOC) of the Federal University of Paraná (UFPR). The sheep were divided into three groups of 15 animals, being; G1: Control; with treatment after evaluated the degree FAMACHA (FMC) every 15 days, G2: Monepantel (MNT) at a dose of 20 mg / kg (therapeutic dose), regardless of the degree of FMC; and G3: MNT at a dose of 40 mg / kg, regardless of the degree of FMC. For groups 2 and 3, the animals received doses of oral medication, according to the manufacturer's recommendation, every 30 days. Every 15 days all animals in the experiment were weighed and had their FMC grade and body condition score monitored, in addition to the blood collected for hematocrit determination every 30 days; in this interval also the evaluations of pasturage, height and forage mass occurred - in which the animals were maintained. The counts of infective larvae (L3) on pasturage occurred monthly. The effect of MNT was evaluated on days 0, 7, 14, 21 and 28 of each month, through weekly stool collection for egg count per gram of feces (EPG), and the evaluation was restarted from the application of the drug, on day 0 of the subsequent month, totaling six months. It was done coproculture with the fecal sample composed of all the animals to identify the species of parasites, every 30 days. There was no treatment effect (P>0.05) on the number of EPG in the faeces of the ewes and neither about the weight variable (P = 0.75). However, on this variable there was period effect (P<0.0001) and treatment x period interaction (P<0.0001). The values of FMC degree ranged between grades 1 to 2. The mean hematocrit values were 27, 29 and 32%, respectively, for the Control, G2 and G3 groups. It was concluded that, after MNT suppressive use, the observed low efficacy (28 and 39%) for groups 2 and 3, respectively may be indicative of parasitic resistance.