Caracterização antigênica de cepas de Moraxella bovis, Moraxella bovoculi e Moraxella ovis com potencial uso vacinal

Ceratoconjuntivite infecciosa bovina (CIB) é a principal doença ocular de bovinos. Altamente contagiosa, é responsável por significativas perdas econômicas para a pecuária no mundo inteiro. Moraxella bovis é, reconhecidamente, o agente primário da enfermidade em bovinos. Contudo, a ocorrência de outras espécies do gênero, incluindo M. ovis e M. bovoculi, recentemente descrita, têm sido comuns em surtos da doença e são suspeitas de serem causalmente associadas ao sucesso limitado de medidas preventivas, sobretudo do uso de bacterinas contendo apenas cepas de M. bovis. Esta dissertação descreve a caracterização antigênica de cepas de M. bovis, M. bovoculi e M. ovis e de uma vacina comercial através da análise de reatividade cruzada por citometria de fluxo e da identificação de antígenos imunodominantes e conservados através de Western blotting. Antissoros contra cepas das três espécies foram obtidos a partir da imunização de coelhos Nova Zelândia e desafiados frente a um painel de cepas isoladas de bovinos e ovinos clinicamente acometidos pela doença entre 1983 e 2013 assim como cepas de referência de cada espécie. Cepas de campo de M. bovoculi (Mbv2 e Mbv3) reconheceram satisfatoriamente todas as cepas heterólogas. Contudo, as cepas Mbv3 (M. bovoculi), Mov2 (M. ovis) e Mov3 (M. ovis) destacaram-se pela maior intensidade de reconhecimento de cepas de suas respectivas espécies e sugerem que antígenos espécie-específicos desempenham importante papel na resposta imune do hospedeiro. A associação dos percentuais de reatividade aos perfis antigênicos evidenciados através da análise por Western blotting indica que a resposta imune induzida por Moraxella spp. parece ser mediada por múltiplos antígenos de superfície dos quais, diversos são compartilhados entre as três espécies. Entre 32 diferentes proteínas detectadas, 22 (68,7%) foram reconhecidas por pelo menos um antissoro nos extratos protéicos de todas as cepas analisadas por Western blotting. Nosso estudo sugere a seleção e combinação de cepas de M. bovis, M. bovoculi e M. ovis circulantes para composição da unidade antigênica de vacinas como estratégia de controle de IBK e a utilização de citometria de fluxo como metodologia mais adequada para esta seleção.

Infectious bovine keratoconjunctivitis (IBK) is the main ocular disease of cattle. Highly contagious, it is responsible for significant economic losses of livestock worldwide. Moraxella bovis is recognized as the primary agent of the disease in cattle. However, the occurrence of other similar species, including M. ovis and M. bovoculi, recently described, have been common in outbreaks of the disease and are suspected to be causally related to the limited success of preventive measures, especially the use of bacterins containing only strains of M. bovis. This dissertation describes the antigenic characterization of M. bovis, M. bovoculi and M. ovis strains and a commercial vaccine by cross-reactivity using flow cytometry analysis and identification of immunodominant conserved antigens by Western blotting. Antisera against strains of the three species were obtained from immunization of New Zealand rabbits and challenged before a panel of strains isolated from cattle and sheep clinically affected by the disease between 1983 and 2013 as well as reference strains of each species. Field strains of M. bovoculi (Mbv2 and Mbv3) recognized satisfactorily all heterologous strains. However, Mbv3 (M. bovoculi), Mov2 (M. ovis) and Mov3 (M. ovis) strains stood out as the most intense recognition strains of their respective species and suggest that species-specific antigens play an important role in the host immune response. The association of reactivity percentage with the antigenic profiles, evidenced by Western blotting analysis, indicates that the immune response induced by Moraxella spp. appears to be mediated by multiple surface antigens of which many are shared between the three species. Among 32 different proteins identified, 22 (68.7%) were recognized by at least one antiserum in the protein extracts of all strains analyzed by Western blotting. Our study suggests (1) the selection and combination of M. bovis, M. bovoculi and M. ovis strains to be used in the composition of antigenic unit vaccines as IBK control strategy and (2) the use of flow cytometry as the most appropriate methodology for this selection.

Conjunctival bacterial flora of healthy ovines in Pernambuco State, Brazil / Flora conjuntival bacteriana de ovinos sadios da raça Santa Inês e seus mestiços criados na microrregião de Garanhuns, Pernambuco

In all the animals there is a normal conjunctive bacterial flora. For correct evaluation of the results of any culture technique, it is necessary to know the microorganisms considered as part of the normal flora, differentiating them from the pathogenic ones. This study cared to determine bacteriologic patterns from healthy ovine"s conjunctival sacks. Sixty unaffected eyes were studied. For bacterial isolation and Mycoplasma search, conjunctival swabs were done. Moraxella sp. was the most frequent bacteria in healthy eyes, 28.33% (17/60), followed by Staphylococcus sp., 23.33% (14/60). Streptococcus sp., 5.00% (3/60), Micrococcus sp., 5.00% (3/60), Corynebacte¬rium sp., 3.33% (2/60), Bacillus sp., 3.33% (2/60) and Serratia sp., 1.67% (1/60). Mycoplasma conjunctivae was present in 15.00% (9/60) of samples.

Em todos os animais existe uma flora bacteriana conjuntival normal. Para correta avaliação dos resultados de qualquer técnica de cultura, é necessário conhecer os microrganismos considerados como parte da flora normal, diferenciando-os dos patogênicos. Neste estudo o objetivo foi estabelecer padrões bacteriológicos de sacos conjuntivais de ovinos sadios. Avaliou-se 60 olhos de 30 animais sem altera-ções clínicas aparentes. Para o isolamento bacteriano e pesquisa de Mycoplasma, utilizou-se swab do saco conjuntival. Moraxella sp. foi a bactéria mais isolada, presente em 28,33% (17/60) dos olhos sadios, seguido por Staphylococcus sp., 23,33% (14/60). Streptococcus sp., 5,00% (3/60), Micrococcus sp., 5,00% (3/60), Corynebacterium sp., 3,33% (2/60), Bacillus sp., 3,33% (2/60) e Serratia sp., 1,67% (1/60). O Mycoplasma conjunctivae esteve presente em 15,00% (9/60) das amos¬tras estudadas.

Conjunctival bacterial flora of healthy ovines in Pernambuco State, Brazil / Flora conjuntival bacteriana de ovinos sadios da raça Santa Inês e seus mestiços criados na microrregião de Garanhuns, Pernambuco

In all the animals there is a normal conjunctive bacterial flora. For correct evaluation of the results of any culture technique, it is necessary to know the microorganisms considered as part of the normal flora, differentiating them from the pathogenic ones. This study cared to determine bacteriologic patterns from healthy ovine"s conjunctival sacks. Sixty unaffected eyes were studied. For bacterial isolation and Mycoplasma search, conjunctival swabs were done. Moraxella sp. was the most frequent bacteria in healthy eyes, 28.33% (17/60), followed by Staphylococcus sp., 23.33% (14/60). Streptococcus sp., 5.00% (3/60), Micrococcus sp., 5.00% (3/60), Corynebacte¬rium sp., 3.33% (2/60), Bacillus sp., 3.33% (2/60) and Serratia sp., 1.67% (1/60). Mycoplasma conjunctivae was present in 15.00% (9/60) of samples.

Em todos os animais existe uma flora bacteriana conjuntival normal. Para correta avaliação dos resultados de qualquer técnica de cultura, é necessário conhecer os microrganismos considerados como parte da flora normal, diferenciando-os dos patogênicos. Neste estudo o objetivo foi estabelecer padrões bacteriológicos de sacos conjuntivais de ovinos sadios. Avaliou-se 60 olhos de 30 animais sem altera-ções clínicas aparentes. Para o isolamento bacteriano e pesquisa de Mycoplasma, utilizou-se swab do saco conjuntival. Moraxella sp. foi a bactéria mais isolada, presente em 28,33% (17/60) dos olhos sadios, seguido por Staphylococcus sp., 23,33% (14/60). Streptococcus sp., 5,00% (3/60), Micrococcus sp., 5,00% (3/60), Corynebacterium sp., 3,33% (2/60), Bacillus sp., 3,33% (2/60) e Serratia sp., 1,67% (1/60). O Mycoplasma conjunctivae esteve presente em 15,00% (9/60) das amos¬tras estudadas.

Conjunctival microbial flora of clinically normal persons who work in a hospital environment

The objective of the work was to study the microbiota of the conjunctival secretion of health professionals. Samples were collected from the clinically normal eyes of 40 health professionals in four different sectors, Proctology, General Intensive Care Unit (ICU), Male Ward, and Oncology of Hospital das Clínicas Dr. Augusto Leite, Aracaju, SE, Brazil. Ten professionals from each sector were selected. The samples were inoculated into various culture media: blood agar, Chapman agar, EMB medium (Teague), and Sabouraud dextrose agar with chloramphenicol. The bacteria most frequently isolated from all the sectors were Staphylococcus epidermidis (45.0%) and Bacillus sp (29.0%). The least frequent bacteria were Proteus sp (6.1%), Staphylococcus aureus (4.1%), Enterobacter sp (4.1%), Alcaligenes sp (4.1%), Citrobacter sp (2.1%), Moraxella sp (2.1%), and Proteus mirabilis (2.1%). Fungi were not isolated. These results confirm the continuous contamination of the conjunctival sac of these professionals by the external environment, while at the same time confirming that the mechanisms of local defence continue to be intact, preventing the fixation of invading microorganisms.

O objetivo deste trabalho foi a caracterização da microbiota da secreção conjuntival de profissionais hígidos do Hospital da Clínicas Dr. Augusto Leite, Aracaju, SE, Brasil. Foram colhidas amostras de secreção conjuntival de olhos clinicamente normais de 40 profissionais em 4 diferentes setores do hospital: Proctologia, Unidade Intensiva de Tratamento Geral, Enfermaria Masculina e Setor de Oncologia. As amostras foram inoculadas em ágar sangue, ágar Chapman, meio de Teague e ágar Sabouraud dextrose com cloranfenicol. As bactérias mais frequentemente isoladas de todos os setores foram Staphylococcus epidermidis (45,0%) e Bacillus sp (29,0%). As menos frequentes foram Proteus sp (6,1%), Staphylococcus aureus (4,1%), Enterobacter sp (4,1%), Alcaligenes sp (4,1%), Citrobacter sp (2,1%), Moraxella sp (2,1%) e Proteus mirabilis (2,1%). Fungos não foram isolados. Estes resultados confirmam uma contaminação contínua do saco conjuntival desses profissionais pelo ambiente externo, evidenciando a importância dos mecanismos locais de defesa, que devem estar intactos na prevenção contra a fixação e a invasão desses microrganismos.

Bactérias que degradam monofluoroacetato de sódio

O objetivo deste trabalho foi descrever o isolamento de bactérias que degradam monofluoroacetato de sódio (MFA) em amostras de solo, plantas e de rúmen caprino, bem como, realizar uma análise comparativa de sequências enzimáticas, utilizando como critério de seleção a conservação da tríade catalítica, sítio ativo e motivos estruturais da fluoroacetato dehalogenase. As amostras de solo e plantas foram coletadas em áreas de ocorrência de Mascagnia rigida e Palicourea aenofusca, que contêm MFA e as de animais foi coletado líquido ruminal via fístula de caprinos adultos, machos, mestiços, com fistula ruminal, alimentados com feno e pastagem nativa. As amostras foram cultivadas em aerobiose no meio mineral acrescido de 20 mmol L?1 de monofluoroacetato de sódio. Através do sequenciamento do gene 16S rRNA foram isolados sete bactérias de amostras de solo e plantas, identificados como Paenibacillus sp. (ECPB01), Burkholderia sp. (ECPB02), Cupriavidus sp. (ECPB03), Staphylococcus sp. (ECPB04), Ancylobacter sp. (ECPB05), Ralstonia sp. (ECPB06), e Stenotrophomonas sp. (ECPB07). Das amostras de rúmen caprino foram identificados Pigmentiphaga kullae (ECPB08) e Ancylobacter dichloromethanicus (ECPB09). Todos os isolados degradaram o MFA contido no meio, alcançando uma taxa de degradação de 20 mmol L?1 de íon flúor, após 32 horas de incubação em meio Mineral. Na análise comparativa das sequências enzimáticas, de um total de 549 sequências proteicas obtidas do NCBI, 128 continham a tríade catalítica, o sítio ativo e motivo estrutural encontrados na fluoroacetato dehalogenase de Burkholderia sp. (gi|95102016), Micromonospora lupini str. lupac 08 (gi|386690726), Rhodopseudomonas palustris (gi|81829712) e Moraxella sp. (gi|216773), sugerindo que todas são fluoroacetato dehalogenase, pela presença do mecanismo catalítico e estrutural único para defluoração do monofluoroacetato de sódio. No futuro, alguns destes microorganismos podem ser utilizados para estabelecer no rúmen uma população bacteriana capaz de degradar o MFA e proteger ruminantes de intoxicações por este composto

Determinação da qualidade microbiológica de quibes crus comercializados na cidade de São José do Rio Preto, SP / Determination of the microbiological quality of raw kibbe traded in the city of São José do Rio Preto, SP

Em todas as regiões do mundo, a carne vem sendo considerada desde há muito tempo como um alimento nutritivo altamente desejável, mas recentemente, em países mais desenvolvidos, este papel se modificou com relação principalmente as exigências do consumidor. Como resultado, a qualidade do produto tornou-se um fator mais significativo no comércio de produtos cárneos. Dentre esses, encontra-se o quibe que pode ser conceituado como sendo aquele elaborado à base de carne moída, trigo partido e condimentos, podendo também ser assado, frito ou até mesmo cru, provido ainda de recheio ou não. Deverá ser preparado com matérias primas sadias, limpas e em perfeito estado de conservação. O ingrediente de maior importância empregado em sua elaboração é a carne moída ou triturada. Em sua superfície, uma associação de Pseudomonas, Acinetobacter e Moraxella poderá se desenvolver; no interior, uma biota Gran positiva produtora de ácido láctico geralmente predomina. Dentre os seus mais freqüentes contaminantes há vários organismos significativos em saúde pública como o Staphylococcus aureus, os clostrídios, os coliformes totais e fecais (termotolerantes), a Escherichia coli e a Salmonella sp. Considerando esses aspectos, este trabalho teve como objetivo determinar a qualidade microbiológica de quibes crus comercializados na cidade de São José do Rio Preto SP, por meio das seguintes análises: contagem de bactérias aeróbias mesófilas, de bolores e de leveduras, de Staphylococcus aureus e de clostrídios sulfito redutores, determinação do Número Mais Provável (NMP) de coliformes totais e de fecais, pesquisa de Escherichia coli e de Salmonella sp. (...)(AU)

In all parts of the world, meat is being considered as a nutritious highly desirable food since many years ago, but recently, in more affluent countries this role has changed mainly with regard to the exigences of the consumer. As a result, quality of product has become a more significant factor in meat products. Among them one meets the kibbe that can be concepted as being that elaborated on the ground of minced meat, chopped wheat and spices, also being able to be roast, fry or even raw, provided still of stuftng or not. It should be prepared with healthful, clean raw materials and in perfect state of conservation. The ingredient of more importance employed in its elaboration is the minced or ground meat. On the surface, a Pseudomonas, Acinetobacter and Moraxella association will be able to develop; in the interior a Gram-positive lactic acid flora generally predominate. Among its frequent contaminants are various organisms significant in public health as the Staphylococcus aureus, the Clostridium sp, the total and fecal (thermotolerants) coliforms, the Escherichia coli and the SalmonelIa sp. Considering these aspects, this work had as objective to determine the microbiological quality of raw kibbe commercialized in the city of SãoJosé do Rio Preto - SP, by means of the following analysis: the counting of mesophilic aerobic bacteria, moulds and yeasts, Staphylococcus aureus and Clostridium sulfite reducer, the determination of the Most Probable Number (MPN) of total and fecal coliforms, the research of Escherichia coliand SalmonelIa sp. (...) (AU)