Biotecnologias na preservação de espermatozoides felinos / Biotechnologies in the preservation of feline sperm

O gato doméstico é a única espécie da família Felídea sem risco ou iminência de extinção, diferente da maior parte dos felinos selvagens. Desta forma, o desenvolvimento e aprimoramento de diferentes biotécnicas reprodutivas, são essenciais para a manutenção da qualidade reprodutiva, tendo em vista a preservação de espécies mais vulneráveis. Além disso, as biotécnicas do sêmen são para as tecnologias reprodutivas, como a inseminação artificial (IA) e a fertilização in vitro (FIV). Sendo assim, o objetivo deste compilado bibliográfico foi abordar as principais técnicas de colheita, análise e preservação de sêmen/espermatozoides felino, assim como o uso dessas células em IA e FIV. Para a colheita do sêmen felino, diferentes métodos têm sido aplicados: ejaculação farmacológica, eletroejaculação e vagina artificial. Em caso de óbito do reprodutor, os espermatozoides recuperados do epidídimo também apresentam viabilidade reprodutiva. Ademais, a cinética espermática avaliada pelo sistema CASA, a morfologia e a morfometria são as principais análises que demonstram a qualidade espermática e refletem na fertilidade do ejaculado. O sistema CASA também avalia a trajetória individual de cada espermatozoide, que ao se agrupar em clusters, demonstra a heterogeneidade do ejaculado nas subpopulações. Contudo, os diluentes para a conservação e refrigeração dos espermatozoides felinos e as curvas de congelação ainda não estão totalmente estabelecidos e influenciam diretamente a viabilidade dos espermatozoides criopreservados. Diante disso, os resultados da utilização do sêmen felino após criopreservação são inconsistentes, sendo necessários mais estudos para elucidar melhores curvas de congelação e meios de diluentes para viabilizar a preservação do material genético dos gatos.

The domestic cat is the only species of the Felidea family without risk or imminence of extinction, unlike most wild cats. Therefore, the development and improvement of different reproductive biotechnologies are essential for the maintenance of reproductive quality for the preservation of the most vulnerable species. Furthermore, semen biotechnologies are the basis for reproductive technologies such as artificial insemination (AI) and in vitro fertilization (IVF). Thus, the objective of this bibliographic compilation was to approach the main techniques of collection, analysis, and preservation of feline semen/sperm, as well as the use of these cells in AI and IVF. For feline semen collection, different methods have been applied: pharmacological ejaculation, electroejaculation, and artificial vagina. In case of death of the sire, sperm recovered from the epididymis also show reproductive viability. Moreover, the sperm kinetics evaluated by the CASA system, the morphology, and the morphometry are the main analyzes that demonstrate sperm quality and reflect on ejaculate fertility. The CASA system also evaluates the individual path of each sperm, which, when grouped into clusters, demonstrates the heterogeneity of the ejaculate in the subpopulations. However, diluents for the conservation and refrigeration of feline sperm and freezing curves are not yet fully established and directly influence the viability of cryopreserved sperm. Therefore, the results of using feline semen after cryopreservation are inconsistent, and further studies are needed to elucidate better freezing curves and diluents to enable the preservation of the genetic material of cats.

In vitro sperm characteristics and in vivo fertility of sex-sorted and conventional semen in suckled Nelore cows at a traditional schedule for timed-AI with estrus detection / Características espermáticas in vitro e fertilidade in vivo de sêmen convencional e sexado em vacas Nelore pósparto submetidas à IATF tradicional com detecção de estro

The aim of this study was to assess in vitro sperm characteristics and pregnancies/AI (P/AI) of conventional and sex-sorted semen at timed-AI of suckled, multiparous Nelore cows. All cows (n=348) were submitted to a traditional estradiol/progesterone (P4)-based protocol. At 48h after P4-device removal, the estrous behavior was recorded, and AI was performed with conventional or sex-sorted semen from two bulls. The following sperm assessments were performed: CASA, Hyposmotic Test, sperm morphometry and chromatin structure by TB staining. P/AI were reduced (P<0.001) for sex-sorted compared to conventional semen in cows expressing estrus (27vs47%) or not (11vs.37%). Membrane integrity (Bull1: 30.3±9.6 vs. 52.3±12.4%, P=0.01; Bull2: 24.5±3.0 vs. 48.7±1.6%, P=0.006) and sperm concentration (Bulll: 23.2±0.6 vs. 43.0±0.8x10 sperm/mL, P<0.001; Bull2: 25.1+2.8 VS. 42.1±0.7x10 sperm/mL; P<0.001) were reduced in sex-sorted compared to conventional semen, for both bulls. Total and progressive motility were reduced in sex-sorted semen for Bull1 (TM: 49.7±15.9 vs. 94.9±1.9%, P=0.007; PM: 16.7±3.4 vs. 44.1±13.2%, P=0.009) and no differences were detected for Bull2 (TM: 45.0±17.5 vs. 68.2±19.1%, P=0.098; PM: 12.8±4.7 vs. 30.0±13.0%, P=0.065). Sperm ellipticity from sex-sorted was lower than conventional semen for Bull2 (0.306±0.01 vs. 0.342±0.02, P=0.02) and no difference was detected for Bull1 (0.332±0.01 vs. 0.330±0.01, P=0.55). Reduced in vivo fertility was observed for sex-sorted semen, regardless of estrous behavior. In vitro sperm quality of sex-sorted semen was compromised for both bulls, but differently affected for each sire.

O estudo teve como objetivo avaliar características espermáticas in vitro e a taxa de concepção (TC) de sêmen convencional e sexado em um programa de IATF tradicional de vacas Nelore pós-parto. Todas as vacas (n=348) foram submetidas ao mesmo protocolo de IATF à base de estradiol e de progesterona. Após 48 horas da retirada do implante, foi determinada a expressão de estro dos animais e a IA foi realizada com sêmen convencional e sexado de dois touros Angus. As seguintes características espermáticas foram avaliadas: análise computadorizada do sêmen, teste hiposmótico, morfometria espermática e estrutura cromatinica por meio da coloração com azul de toluidina. A TC foi menor (P<0,001) para sêmen sexado comparado ao convencional, em vacas que expressaram estro (27 vs. 47%) e que não apresentaram estro (11 vs. 37%). A integridade da membrana plasmática (Touro 1: 30,319,6 vs. 52,3+12,4%, P=0,010; Touro 2: 24,5+3,0 vs. 48,7±1,6%, P=0,006) e a concentração espermática (Touro 1: 23,2±0,6 vs. 43,0±0,8x10 sperm/mL, P<0,001; Touro 2: 25,1+2,8 vs. 42,1 +0,7x10'sperm/mL, P<0,001) foram menores no sêmen sexado comparado ao convencional, para ambos os touros. Motilidades total e progressiva foram menores no sêmen sexado comparado ao convencional para o Touro 1 (MT: 49,7±15,9 vs. 94,9±1,9%, P=0,007; MP: 16,7+3,4 vs. 44,1+13,2%, P=0,009), enquanto diferenças não foram detectadas no Touro 2 (MT: 45,0±17,5 vs. 68,2±19,1%, P=0,098; MP: 12,8±4,7 vs. 30,0±13,0%, P=0,065). Elipticidade espermática do sêmen sexado foi menor do que do sêmen convencional no Touro 2 (0,306±0,01 vs. 0,342±0,02, P=0,020), mas não houve diferença no Touro 1 (0,332±0,01 vs. 0,330±0,01, P=0,552). Reduzida fertilidade in vivo foi observada para o sêmen sexado em relação ao convencional, independentemente da expressão de cio das vacas. A qualidade seminal in vitro do sêmen sexado foi comprometida para ambos os touros, mas diferentemente afetada para cada reprodutor.

Spermatozoon head size the main differentiating feature between spermatozoa of blue and white Arctic fox (Vulpes lagopus)

Morfologia e morfometria espermática, este é um importante determinante da capacidade reprodutiva masculina. Dados morfométricos podem fornecer informações relevantes em estudos focados em biologia evolutiva, avaliação da qualidade do esperma, incluindo previsão do potencial de fertilidade, criopreservação de sêmen ou efeito de reprotóxicos. O artigo apresenta a análise morfométrica de espermatozóides de dois morfos coloridos de raposa do Ártico (Vulpes lagopus), e tenta determinar a relação entre indicadores de qualidade selecionados e dimensões e forma dos espermatozóides. O material de pesquisa consistiu em ejaculados coletados uma única vez por estimulação manual de 20 raposas do Ártico de um ano de idade (10 indivíduos do morfo azul e 10 do morfo branco). Ejaculados foram analisados ​​para parâmetros padrão (volume, concentração de esperma, número total de espermatozóides no ejaculado) e utilizado para a preparação de espécimes microscópicos. Verificou-se que as dimensões dos espermatozóides das raposas do Ártico dependem dos morfos da cor masculina. Os espermatozóides das raposas brancas do Ártico foram significativamente mais longos (1,82 µm) e tinham cabeças maiores (0,32 µm mais longas e 0,15 µm mais largas) em comparação com os espermatozóides das raposas azuis do Ártico (P <0,05). As interações entre as dimensões particulares dos espermatozoides indicaram a ocorrência de gametas com formas diferentes. Todos os coeficientes de correlação entre as características morfométricas dos espermatozoides foram estatisticamente significantes. Nossa pesquisa provou que nas raposas azuis do Ártico, as dimensões dos espermatozóides (comprimento da cauda e comprimento total do espermatozóide) podem estar relacionadas com a porcentagem de espermatozóides com alterações primárias (respectivamente: r = -0,68 er = -0,75; em P <0,05).(AU)

Uso da galactose na vitrificação de sêmen ovino em palhetas / Use of galactose to vitrify ram semen in straws

A vitrificação de espermatozoides é uma técnica que apresenta grande potencial para criopreservação de material genético, e sua eficácia tem sido superior aos métodos convencionais em algumas espécies. No entanto, existem poucos estudos sobre sua eficiência com sêmen ejaculado de carneiros e o uso da galactose como crioprotetor extracelular durante a vitrificação. Objetivou-se com este estudo avaliar o efeito da galactose (0,01 M), associada ou não ao glicerol (3% e 7%), em meio comercial (Steridyl® - controle), na criopreservação de espermatozoides de carneiros pelo método de palhetas, comparando o método clássico de congelação e a vitrificação. Ejaculados de seis carneiros da raça Dorper em idade reprodutiva foram coletados com vagina artificial, aliquotados, diluídos individualmente (100 × 106 espermatozoides/mL) nos meios testados, envasados em palhetas de 0,25 mL e submetidos à congelação clássica ou vitrificação. Foram analisadas a cinemática, morfologia, morfometria, viabilidade, integridade física e funcional da membrana espermática. A congelação clássica obteve melhores resultados de motilidade total e progressiva do que a vitrificação nos quatro extensores testados, uma vez que as amostras vitrificadas não apresentaram motilidade pós-reaquecimento (p < 0,05). A adição de galactose ou glicerol ao meio comercial não trouxe efeito benéfico tanto para a vitrificação quanto congelação clássica.

Sperm vitrification is a technique with great potential for cryopreservation of genetic material, with superior effectiveness compared to conventional methods in some species. However, few studies have shown its efficiency with ejaculated sperm of rams and the use of galactose as an extracellular cryoprotectant during vitrification. This study aimed to evaluate the effect of galactose (0.01 M), with or without glycerol addition (3% and 7%) in a commercial extender (Steridyl® - control) for ram sperm cryopreservation in straws, comparing the classic freezing method and vitrification. Ejaculates from six breeding soundness Dorper rams were collected with an artificial vagina, aliquoted, individually diluted (100 × 106 sperm/mL) on extenders tested, loaded into 0.25 mL straws, and subjected to a classic freezing method or vitrification. Sperm kinematics, morphology, morphometry, viability, and physical and functional integrity of the sperm membrane were evaluated. The classic freezing method resulted in higher total and progressive motility than vitrification, as no motility was detected in vitrified samples after rewarming (p<0.05). The addition of galactose or glycerol to the commercial medium did not benefit both vitrification and the classic freezing method.

Estudo preliminar da morfometria da cabeça espermática do macaco-de-cheiro de vida livre / Preliminary study of the spermatic head morphometry of free living Ecuadorian Squirrel Monkey

The objective of this study was to describe and compare the head morphometry of normal and pathological sperm from Saimiri macrodon. In the morphological analysis, 39% of the sperm had normal morphology, and 61% had major or minor defects, with pathology in the tails being the most frequent with 47% (38% curled tail, 7% folded tail and 2% strongly folded tail). Among the evaluated head morphometry parameters, area (A), width (L) and ellipticity (E) showed statistical difference (p>0.05) between normal and pathological sperm. The average head area and width was lower in normal sperm (p=0,01 e p=0,04, respectively), and the mean ellipticity was higher (p=0,038), when compared to pathological sperm. This definition of the sperm morphometric parameters of S. macrodon is important for the samples selection destined to reproduction biotechnologies and for the clarification of taxonomic and evolutionary issues in the genus Saimiri.

Uso da galactose na vitrificação de sêmen ovino em palhetas / Use of galactose to vitrify ram semen in straws

A vitrificação de espermatozoides é uma técnica que apresenta grande potencial para criopreservação de material genético, e sua eficácia tem sido superior aos métodos convencionais em algumas espécies. No entanto, existem poucos estudos sobre sua eficiência com sêmen ejaculado de carneiros e o uso da galactose como crioprotetor extracelular durante a vitrificação. Objetivou-se com este estudo avaliar o efeito da galactose (0,01 M), associada ou não ao glicerol (3% e 7%), em meio comercial (Steridyl® - controle), na criopreservação de espermatozoides de carneiros pelo método de palhetas, comparando o método clássico de congelação e a vitrificação. Ejaculados de seis carneiros da raça Dorper em idade reprodutiva foram coletados com vagina artificial, aliquotados, diluídos individualmente (100 × 106 espermatozoides/mL) nos meios testados, envasados em palhetas de 0,25 mL e submetidos à congelação clássica ou vitrificação. Foram analisadas a cinemática, morfologia, morfometria, viabilidade, integridade física e funcional da membrana espermática. A congelação clássica obteve melhores resultados de motilidade total e progressiva do que a vitrificação nos quatro extensores testados, uma vez que as amostras vitrificadas não apresentaram motilidade pós-reaquecimento (p < 0,05). A adição de galactose ou glicerol ao meio comercial não trouxe efeito benéfico tanto para a vitrificação quanto congelação clássica.

Sperm vitrification is a technique with great potential for cryopreservation of genetic material, with superior effectiveness compared to conventional methods in some species. However, few studies have shown its efficiency with ejaculated sperm of rams and the use of galactose as an extracellular cryoprotectant during vitrification. This study aimed to evaluate the effect of galactose (0.01 M), with or without glycerol addition (3% and 7%) in a commercial extender (Steridyl® - control) for ram sperm cryopreservation in straws, comparing the classic freezing method and vitrification. Ejaculates from six breeding soundness Dorper rams were collected with an artificial vagina, aliquoted, individually diluted (100 × 106 sperm/mL) on extenders tested, loaded into 0.25 mL straws, and subjected to a classic freezing method or vitrification. Sperm kinematics, morphology, morphometry, viability, and physical and functional integrity of the sperm membrane were evaluated. The classic freezing method resulted in higher total and progressive motility than vitrification, as no motility was detected in vitrified samples after rewarming (p<0.05). The addition of galactose or glycerol to the commercial medium did not benefit both vitrification and the classic freezing method.

Morphology, morphometry, and membrane integrity of epididymal spermatozoa of spotted pacas (Cuniculus paca, Linnaeus 1766) / Morfologia, morfometria e integridade da membrana de espermatozoides epididimários de paca (Cuniculus paca, Linnaeus 1766)

The objective of this study was to evaluate the morphology, morphometry, and membrane integrity of epididymal spermatozoa of spotted pacas using spermatic cells collected from the epididymal tails of five animals. The flotation method using the ACP-123® and Botusemen Special® extenders was performed, and samples were stained in Diff-Quick and eosin-nigrosine. Descriptive statistics of data were obtained and Students t-test was performed. The morphology of 200 Diff-Quick-stained spermatozoa showed that they had an oval head with three vesicles in the acrosomal region, a midpiece, an elongated tail; moreover, 27% of the spermatozoa exhibited cellular defects. The morphometry of 100 sperm cells (analyzed with an optical microscope and the EZ Leica LAS software for Windows) presented the following measurements (mean ± SD): total length 43.87 ± 4.91 μm, head 7.54 ± 0.82 μm, midpiece 5.35 ± 0.83 μm, tail 30.72 ± 2.55 μm, and head width 5.30 ± 0.68 μm. Of the 2,000 cells stained with eosin-nigrosine for membrane integrity evaluation, 83.8% diluted in ACP-123® and 72.9% diluted in Botusemen® had intact membranes. The results of this study suggest that epididymal spermatozoa of pacas can be used in assisted reproduction programs; moreover, our study adds knowledge to the reproductive biology of wild animals, and encourages further research on the role of the three acrosomal vesicles present in this species.

Com o objetivo de avaliar a morfologia, a morfometria e a integridade de membrana dos espermatozoides epididimários de paca, células espermáticas oriundas da cauda do epidídimo foram obtidas de cinco animais pelo método de flutuação, utilizando os diluidores ACP-123 ® e Botusemen Special®, coradas em Panótico rápido e Eosina-Nigrosina. Os dados foram analisados por estatística descritiva e teste t de Student. A morfologia de 200 espermatozoides corados em Panótico rápido evidenciou que os mesmos possuíam: cabeça ovalada com três vesículas na região acrossomal, peça intermediária, cauda alongada, sendo os defeitos celulares de 27%. A morfometria de 100 células espermáticas (efetuada com microscópio óptico e softwares EZ Leica LAS de aquisição de imagens para sistemas operacionais Windows) apresentou as seguintes medidas (média ± d.p): comprimento total 43,87 ± 4,91 µm, cabeça 7,54 ± 0,82 µm, peça intermediária 5,35 ± 0,83 µm, cauda 30,72 ± 2,55 µm e largura da cabeça 5,30 ± 0,68 µm. Das 2.000 células coradas em Eosina-Nigrosina para avaliação da integridade da membrana, 83,8 % das diluídas em ACP 123 ® e 72,9 % das diluídas em Botusemen® estavam com as membranas intactas. Os resultados sugerem que espermatozoides epididimários de pacas podem ser utilizados em técnicas de reprodução assistida, agregam conhecimentos a esta área e suscitam novos estudos sobre o papel das três vesículas acrossomais características nesta espécie.

Morphology, morphometry, and membrane integrity of epididymal spermatozoa of spotted pacas (Cuniculus paca, Linnaeus 1766) / Morfologia, morfometria e integridade da membrana de espermatozoides epididimários de paca (Cuniculus paca, Linnaeus 1766)

The objective of this study was to evaluate the morphology, morphometry, and membrane integrity of epididymal spermatozoa of spotted pacas using spermatic cells collected from the epididymal tails of five animals. The flotation method using the ACP-123® and Botusemen Special® extenders was performed, and samples were stained in Diff-Quick and eosin-nigrosine. Descriptive statistics of data were obtained and Students t-test was performed. The morphology of 200 Diff-Quick-stained spermatozoa showed that they had an oval head with three vesicles in the acrosomal region, a midpiece, an elongated tail; moreover, 27% of the spermatozoa exhibited cellular defects. The morphometry of 100 sperm cells (analyzed with an optical microscope and the EZ Leica LAS software for Windows) presented the following measurements (mean ± SD): total length 43.87 ± 4.91 μm, head 7.54 ± 0.82 μm, midpiece 5.35 ± 0.83 μm, tail 30.72 ± 2.55 μm, and head width 5.30 ± 0.68 μm. Of the 2,000 cells stained with eosin-nigrosine for membrane integrity evaluation, 83.8% diluted in ACP-123® and 72.9% diluted in Botusemen® had intact membranes. The results of this study suggest that epididymal spermatozoa of pacas can be used in assisted reproduction programs; moreover, our study adds knowledge to the reproductive biology of wild animals, and encourages further research on the role of the three acrosomal vesicles present in this species.(AU)

Com o objetivo de avaliar a morfologia, a morfometria e a integridade de membrana dos espermatozoides epididimários de paca, células espermáticas oriundas da cauda do epidídimo foram obtidas de cinco animais pelo método de flutuação, utilizando os diluidores ACP-123 ® e Botusemen Special®, coradas em Panótico rápido e Eosina-Nigrosina. Os dados foram analisados por estatística descritiva e teste t de Student. A morfologia de 200 espermatozoides corados em Panótico rápido evidenciou que os mesmos possuíam: cabeça ovalada com três vesículas na região acrossomal, peça intermediária, cauda alongada, sendo os defeitos celulares de 27%. A morfometria de 100 células espermáticas (efetuada com microscópio óptico e softwares EZ Leica LAS de aquisição de imagens para sistemas operacionais Windows) apresentou as seguintes medidas (média ± d.p): comprimento total 43,87 ± 4,91 µm, cabeça 7,54 ± 0,82 µm, peça intermediária 5,35 ± 0,83 µm, cauda 30,72 ± 2,55 µm e largura da cabeça 5,30 ± 0,68 µm. Das 2.000 células coradas em Eosina-Nigrosina para avaliação da integridade da membrana, 83,8 % das diluídas em ACP 123 ® e 72,9 % das diluídas em Botusemen® estavam com as membranas intactas. Os resultados sugerem que espermatozoides epididimários de pacas podem ser utilizados em técnicas de reprodução assistida, agregam conhecimentos a esta área e suscitam novos estudos sobre o papel das três vesículas acrossomais características nesta espécie.(AU)

Spermatogenesis in sheep supplemented with detoxified castor bean (Ricinus communis L. ) as a replacement for soybean meal / Espermatogênese de ovinos suplementados com torta de mamona (Ricinus communis L. ) destoxificada em substituição ao farelo de soja

The objective was to evaluate the effect of replacing soybean meal with the detoxified castor bean cake on testicular morphometry and spermatogenesis of sheep. Were used 24 uncastrated, 9-month old sheep weighing 29±0.8 kg they were randomly distributed among three treatments: T1 = 0%, T2 = 50%, and T3 = 100% substitution of soybean meal with detoxified castor bean cake. The animals were fed with Aruana grass pastage (Panicum maximum Aruana) and a ration for 90 days. After slaughtering, the testicles were collected and histological slides were prepared with tissue fragments. The data were evaluated for normality using the Shapiro-Wilk test, and analysis of variance was carried out at 5% level of significance. Substitution of soybean meal with detoxified castor bean cake had no effect on any of the assessed variables at the tested levels (P >0.05). The mean yield of spermatogenesis was 72.91 rounded spermatids per spermatogonium; the mean of total number of germ cells held by a Sertoli cell was 12.09; the mean of the testicular spermatic reserve was 31.82×109 and that per testicular gram was 238.28×106; the mean of daily spermatic production was 3.03×109 and that per testicular gram was 22.69×106; and the total number of Sertoli cells was 4.15×109 and that per testicular gram was 34.51×106. The results show that it is possible to replace 100% of the soybean meal with detoxified castor bean cake in sheep diet without any effects on spermatogenesis; however, it is important to perform seminal evaluations in future studies.(AU)

O objetivo com este estudo foi avaliar o efeito da substituição do farelo de soja pela torta de mamona destoxificada sobre a espermatogênese em ovinos. Foram utilizados 24 ovinos, com peso médio de 29±0,8kg e 9 meses de idade, distribuídos aleatoriamente em três tratamentos: T1= 0%, T2= 50% e T3= 100% de substituição do farelo de soja pela torta de mamona destoxificada. Os animais foram alimentados com pastagem de capim Aruana (Panicum maximum cv. Aruana) e ração durante 90 dias. Por ocasião do abate, coletou-se os testículos para mensurações e avaliação da espermatogênese. Os dados foram avaliados quanto à normalidade por meio do teste de Shapiro-Wilk e utilizou-se a Análise de Variância com 5% de significância. Não houve efeito da substituição do farelo de soja pela torta de mamona destoxificada nos níveis testados (P>0,05) para nenhuma das variáveis avaliadas. O rendimento médio da espermatogênese foi de 72,91 espermátides arredondadas produzidas a partir de uma espermatogônia; a média do número total de células germinativas sustentadas por uma de célula de Sertoli foi 12,09; a média da reserva espermática testicular total foi de 31,82x109 e de 238,28x106 por grama de testículo; a média da produção espermática diária foi de 3,03x109 e de 22,69x106 por grama de testículo e o número total de células de Sertoli foi de 4,15x109 e de 34,51x106 por grama de testículo. Os resultados demonstram que é possível substituir 100% do farelo de soja pela torta de mamona destoxificada na dieta de ovinos sem prejuízos no processo de espermatogênese.(AU)

Spermatogenesis in sheep supplemented with detoxified castor bean (Ricinus communis L. ) as a replacement for soybean meal / Espermatogênese de ovinos suplementados com torta de mamona (Ricinus communis L. ) destoxificada em substituição ao farelo de soja

The objective was to evaluate the effect of replacing soybean meal with the detoxified castor bean cake on testicular morphometry and spermatogenesis of sheep. Were used 24 uncastrated, 9-month old sheep weighing 29±0.8 kg they were randomly distributed among three treatments: T1 = 0%, T2 = 50%, and T3 = 100% substitution of soybean meal with detoxified castor bean cake. The animals were fed with Aruana grass pastage (Panicum maximum Aruana) and a ration for 90 days. After slaughtering, the testicles were collected and histological slides were prepared with tissue fragments. The data were evaluated for normality using the Shapiro-Wilk test, and analysis of variance was carried out at 5% level of significance. Substitution of soybean meal with detoxified castor bean cake had no effect on any of the assessed variables at the tested levels (P >0.05). The mean yield of spermatogenesis was 72.91 rounded spermatids per spermatogonium; the mean of total number of germ cells held by a Sertoli cell was 12.09; the mean of the testicular spermatic reserve was 31.82×109 and that per testicular gram was 238.28×106; the mean of daily spermatic production was 3.03×109 and that per testicular gram was 22.69×106; and the total number of Sertoli cells was 4.15×109 and that per testicular gram was 34.51×106. The results show that it is possible to replace 100% of the soybean meal with detoxified castor bean cake in sheep diet without any effects on spermatogenesis; however, it is important to perform seminal evaluations in future studies.

O objetivo com este estudo foi avaliar o efeito da substituição do farelo de soja pela torta de mamona destoxificada sobre a espermatogênese em ovinos. Foram utilizados 24 ovinos, com peso médio de 29±0,8kg e 9 meses de idade, distribuídos aleatoriamente em três tratamentos: T1= 0%, T2= 50% e T3= 100% de substituição do farelo de soja pela torta de mamona destoxificada. Os animais foram alimentados com pastagem de capim Aruana (Panicum maximum cv. Aruana) e ração durante 90 dias. Por ocasião do abate, coletou-se os testículos para mensurações e avaliação da espermatogênese. Os dados foram avaliados quanto à normalidade por meio do teste de Shapiro-Wilk e utilizou-se a Análise de Variância com 5% de significância. Não houve efeito da substituição do farelo de soja pela torta de mamona destoxificada nos níveis testados (P>0,05) para nenhuma das variáveis avaliadas. O rendimento médio da espermatogênese foi de 72,91 espermátides arredondadas produzidas a partir de uma espermatogônia; a média do número total de células germinativas sustentadas por uma de célula de Sertoli foi 12,09; a média da reserva espermática testicular total foi de 31,82x109 e de 238,28x106 por grama de testículo; a média da produção espermática diária foi de 3,03x109 e de 22,69x106 por grama de testículo e o número total de células de Sertoli foi de 4,15x109 e de 34,51x106 por grama de testículo. Os resultados demonstram que é possível substituir 100% do farelo de soja pela torta de mamona destoxificada na dieta de ovinos sem prejuízos no processo de espermatogênese.

Efeito de diferentes concentrações de ingestão de gossipol livre sobre morfometria testicular e qualidade seminal de touros da raça Nelore / Effect of free gossypol intake in different levels on the testicular morphometry and seminal quality of Nelore bulls

A cotonicultura tem forte fator de impacto na economia nacional, e o estado de Mato Grosso se destaca por ser o maior produtor de algodão herbáceo e deter o maior rebanho bovino do país, condições essas que estimulam o uso do caroço, da torta e do farelo de algodão na alimentação animal. Considerando que o gossipol está presente nos subprodutos do algodão e que seus efeitos sobre a reprodução podem reduzir a fertilidade dos animais, objetivou-se, com essa pesquisa, avaliar o efeito da ingestão de dietas com diferentes teores de gossipol livre por dia sobre a morfometria testicular e a qualidade seminal de touros da raça Nelore. Foram utilizados 28 touros, distribuídos aleatoriamente em seis tratamentos: T0, 0 grama de gossipol livre/touro/dia ; T1, 1,08 grama de gossipol livre/touro/dia; T2, 2,07 gramas de gossipol livre/touro/dia; T3, 3,24 gramas de gossipol livre/touro/dia; T4, 3,82 gramas de gossipol livre/touro/dia e T5, 5,08 gramas de gossipol livre/touro/dia. Os animais de cada tratamento foram mantidos confinados em área média de 100m2, dotada de bebedouro, cochos para mistura mineral e para volumoso/concentrado. O consumo de 3,24 gramas de gossipol livre/touro/dia alterou a qualidade espermática e a morfometria testicular de touros.(AU)

The cotton industry has a strong impact factor in the Brazilian economy and the state of Mato Grosso stands out for being the largest upland-type cotton producer and also holds the largest cattle herd in the country, conditions that stimulate the use of cottonseed pie and cottonseed meal in animal feed. Whereas gossypol is present in cotton by-products and their effects on reproduction can reduce the animal fertility, this research evaluated the effect of diets with different free gossypol contents in the testicular morphometry and semen quality of Nelore bulls. 28 bulls were randomly distributed in six treatments: T0, receiving no free gossypol; T1, receiving 1.08g / bull / day; T2, receiving 2.07g / bull / day; T3, receiving 3.24g / bull / day; T4, receiving 3.82g / bull / day and T5, receiving 5.08g / bull / day of free gossypol respectively. The animals in each treatment were kept confined in an averaged area of 100m2, having fresh water, troughs for mineral mixture and roughage / concentrate. The consumption of 3.24g of free gossypol / bull / day altered the bulls sperm quality and testicular morphometry.(AU)

Efeito de diferentes concentrações de ingestão de gossipol livre sobre morfometria testicular e qualidade seminal de touros da raça Nelore / Effect of free gossypol intake in different levels on the testicular morphometry and seminal quality of Nelore bulls

A cotonicultura tem forte fator de impacto na economia nacional, e o estado de Mato Grosso se destaca por ser o maior produtor de algodão herbáceo e deter o maior rebanho bovino do país, condições essas que estimulam o uso do caroço, da torta e do farelo de algodão na alimentação animal. Considerando que o gossipol está presente nos subprodutos do algodão e que seus efeitos sobre a reprodução podem reduzir a fertilidade dos animais, objetivou-se, com essa pesquisa, avaliar o efeito da ingestão de dietas com diferentes teores de gossipol livre por dia sobre a morfometria testicular e a qualidade seminal de touros da raça Nelore. Foram utilizados 28 touros, distribuídos aleatoriamente em seis tratamentos: T0, 0 grama de gossipol livre/touro/dia ; T1, 1,08 grama de gossipol livre/touro/dia; T2, 2,07 gramas de gossipol livre/touro/dia; T3, 3,24 gramas de gossipol livre/touro/dia; T4, 3,82 gramas de gossipol livre/touro/dia e T5, 5,08 gramas de gossipol livre/touro/dia. Os animais de cada tratamento foram mantidos confinados em área média de 100m2, dotada de bebedouro, cochos para mistura mineral e para volumoso/concentrado. O consumo de 3,24 gramas de gossipol livre/touro/dia alterou a qualidade espermática e a morfometria testicular de touros.(AU)

The cotton industry has a strong impact factor in the Brazilian economy and the state of Mato Grosso stands out for being the largest upland-type cotton producer and also holds the largest cattle herd in the country, conditions that stimulate the use of cottonseed pie and cottonseed meal in animal feed. Whereas gossypol is present in cotton by-products and their effects on reproduction can reduce the animal fertility, this research evaluated the effect of diets with different free gossypol contents in the testicular morphometry and semen quality of Nelore bulls. 28 bulls were randomly distributed in six treatments: T0, receiving no free gossypol; T1, receiving 1.08g / bull / day; T2, receiving 2.07g / bull / day; T3, receiving 3.24g / bull / day; T4, receiving 3.82g / bull / day and T5, receiving 5.08g / bull / day of free gossypol respectively. The animals in each treatment were kept confined in an averaged area of 100m2, having fresh water, troughs for mineral mixture and roughage / concentrate. The consumption of 3.24g of free gossypol / bull / day altered the bulls sperm quality and testicular morphometry.(AU)

Reproductive toxicity of neem seeds (Azadirachta indica) in male quail (Coturnix coturnix japonica) / Toxicidade reprodutiva da semente de neem (Azadirachta indica ) em codorna macho (Coturnix coturnix japonica)

Considering that neem (Azadirachta indica A. Juss.) causes deleterious effects on fertility, the objective was to evaluate the effect of feeding quail (Coturnix coturnix japonica Linnaeus, 1758) of 90 days old with neem seeds on seminal quality, biometric parameters, and testicular morphometrics, as an experimental model. After the 30 day adaptation period to the experimental conditions, birds were randomly distributed in five treatments of neem seeds incorporated into feed, with 10 replicates: T1 (0%), T2 (5%), T3 (10%), T4 (20%) and T5 (40%). After 60 days of receiving experimental rations, their semen was collected to evaluate the sperm quality, the birds were euthanized, and testes were submitted to biometric, histological, and histomorphometric evaluation. The data were evaluated by analysis of variance and later by Tukey test with a significance level of 5%. The mean values of testicle weight, length, and width significantly decreased in T4 and T5, due degeneration of germinal epithelial cells. In these treatments, it occurred a significant increase (P>0.05) in the average values of the tunica albuginea thickness and a significant reduction in the values of the seminiferous tubule diameter and the height of the germinal epithelium. In addition, the mean values of seminal volume, sperm concentration, sperm motility, vigor, and sperm viability were significantly reduced. Thus, the use of neem in bird feeding, as well as the use for therapeutic purposes, is questionable, considering its negative impact on reproduction.

Considerando que o neem (Azadirachta indica A. Juss.) causa efeitos deletérios na fertilidade, objetivou-se avaliar o efeito da alimentação com sementes de neem sobre a qualidade seminal, parâmetros biométricos e morfometria testicular com codornas (Coturnix coturnix japonica Linnaeus, 1758) com 90 dias de idade, como modelo experimental. Após o período de adaptação de 30 dias às condições experimentais, as aves foram distribuídas aleatoriamente em cinco tratamentos de sementes de neem incorporadas na ração, com 10 repetições: T1 (0%), T2 (5%), T3 (10%), T4 (20%) e T5 (40%). Após 60 dias de receber rações experimentais, seu sêmen foi coletado para avaliar a qualidade espermática, as aves foram sacrificadas e os testículos foram submetidos à avaliação biométrica, histológica e histomorfométrica. Os dados foram avaliados por análise de variância e mais tarde pelo teste de Tukey com um nível de significância de 5%. Os valores médios do peso, comprimento e largura do testículo diminuíram significativamente em T4 e T5, devido à degeneração de células epiteliais germinativas. Nestes tratamentos, ocorreu um aumento significativo (P>0,05) nos valores médios da espessura da túnica albugínea e uma redução significativa nos valores do diâmetro do túbulo seminífero e a altura do epitélio germinal. Além disso, os valores médios do volume seminal, concentração de esperma, motilidade espermática, vigor e viabilidade espermática foram significativamente reduzidos. Assim, o uso de neem na alimentação de aves, bem como o uso para fins terapêuticos, são questionáveis, considerando seu impacto negativo na reprodução.

Reproductive toxicity of neem seeds (Azadirachta indica) in male quail (Coturnix coturnix japonica) / Toxicidade reprodutiva da semente de neem (Azadirachta indica ) em codorna macho (Coturnix coturnix japonica)

Considering that neem (Azadirachta indica A. Juss.) causes deleterious effects on fertility, the objective was to evaluate the effect of feeding quail (Coturnix coturnix japonica Linnaeus, 1758) of 90 days old with neem seeds on seminal quality, biometric parameters, and testicular morphometrics, as an experimental model. After the 30 day adaptation period to the experimental conditions, birds were randomly distributed in five treatments of neem seeds incorporated into feed, with 10 replicates: T1 (0%), T2 (5%), T3 (10%), T4 (20%) and T5 (40%). After 60 days of receiving experimental rations, their semen was collected to evaluate the sperm quality, the birds were euthanized, and testes were submitted to biometric, histological, and histomorphometric evaluation. The data were evaluated by analysis of variance and later by Tukey test with a significance level of 5%. The mean values of testicle weight, length, and width significantly decreased in T4 and T5, due degeneration of germinal epithelial cells. In these treatments, it occurred a significant increase (P>0.05) in the average values of the tunica albuginea thickness and a significant reduction in the values of the seminiferous tubule diameter and the height of the germinal epithelium. In addition, the mean values of seminal volume, sperm concentration, sperm motility, vigor, and sperm viability were significantly reduced. Thus, the use of neem in bird feeding, as well as the use for therapeutic purposes, is questionable, considering its negative impact on reproduction.(AU)

Considerando que o neem (Azadirachta indica A. Juss.) causa efeitos deletérios na fertilidade, objetivou-se avaliar o efeito da alimentação com sementes de neem sobre a qualidade seminal, parâmetros biométricos e morfometria testicular com codornas (Coturnix coturnix japonica Linnaeus, 1758) com 90 dias de idade, como modelo experimental. Após o período de adaptação de 30 dias às condições experimentais, as aves foram distribuídas aleatoriamente em cinco tratamentos de sementes de neem incorporadas na ração, com 10 repetições: T1 (0%), T2 (5%), T3 (10%), T4 (20%) e T5 (40%). Após 60 dias de receber rações experimentais, seu sêmen foi coletado para avaliar a qualidade espermática, as aves foram sacrificadas e os testículos foram submetidos à avaliação biométrica, histológica e histomorfométrica. Os dados foram avaliados por análise de variância e mais tarde pelo teste de Tukey com um nível de significância de 5%. Os valores médios do peso, comprimento e largura do testículo diminuíram significativamente em T4 e T5, devido à degeneração de células epiteliais germinativas. Nestes tratamentos, ocorreu um aumento significativo (P>0,05) nos valores médios da espessura da túnica albugínea e uma redução significativa nos valores do diâmetro do túbulo seminífero e a altura do epitélio germinal. Além disso, os valores médios do volume seminal, concentração de esperma, motilidade espermática, vigor e viabilidade espermática foram significativamente reduzidos. Assim, o uso de neem na alimentação de aves, bem como o uso para fins terapêuticos, são questionáveis, considerando seu impacto negativo na reprodução.(AU)

Estágio reprodutivo, histologia e morfometria sazonal do testículo de Dermanura cinerea (Chiroptera: Phyllostomidae) em fragmento de Mata Atlântica no Litoral Sul de Pernambuco, Brasil

ABSTRACT This study analyzed the reproductive stage, histology and morphometry of the testes of Dermanura cinerea (Gervais, 1856) in Atlantic Forest fragment on the South Coast of Pernambuco. Specimens were captured by mist net, and collections occurred monthly over two consecutive nights for 18 months. The meteorological data were grouped in rainy and dry months. Eighteen adult specimens were used, which were classified in males with descendant testes and with testes no descendant. For the histological analysis, the testes were collected, fixed and processed following the routine histological technique. The slides obtained were stained by Hematoxylin-Eosin. In the morphometric analysis the area of occupation of the tubular and intertubular compartment were measured, the number of Leydig, Sertoli, spermatocytes and elongated spermatids were quantified. The morphometric data were submitted to statistical analysis. Dermanura cinerea presented higher sperm production activity in dry months and higher hormone production in rainy months. This information is also related to the reproductive pattern of the females and to the increase in rainfall indexes, since it is a determinant factor in the mediation of the food availability of the frugivorous species, such as D. cinerea in the Atlantic Forest area of Pernambuco.

RESUMO Esse estudo analisou o estágio reprodutivo, a histologia e a morfometria dos testículos de Dermanura cinerea (Gervais, 1856) em fragmento de Mata Atlântica no Litoral Sul de Pernambuco. Os espécimes foram capturados por redes de neblina e as coletas ocorreram mensalmente, ao longo de duas noites consecutivas, durante 18 meses. Os dados meteorológicos foram agrupados em meses chuvosos e secos. Foram utilizados 18 espécimes adultos, os quais foram classificados em machos com testículos descendentes e não descendentes. Para as análises histológicas, os testículos foram coletados, fixados e processados seguindo a técnica histológica de rotina. As lâminas obtidas foram coradas por Hematoxilina-Eosina. Nas análises morfométricas foram mensuradas a área de ocupação do compartimento tubular e intertubular, quantificados o número de células de Leydig, de Sertoli, de espermatócitos e de espermátides alongadas. Os dados morfométricos foram submetidos às análises estatísticas. Dermanura cinerea apresentou maior atividade de produção espermática em meses secos e maior produção hormonal em meses chuvosos. Essas informações estão relacionadas também com o padrão reprodutivo das fêmeas e com a elevação nos índices pluviométricos, já que é um fator determinante na mediação da disponibilidade alimentar das espécies frugívoras, como D. cinerea em área de Mata Atlântica de Pernambuco.

Estágio reprodutivo, histologia e morfometria sazonal do testículo de Dermanura cinerea (Chiroptera: Phyllostomidae) em fragmento de Mata Atlântica no Litoral Sul de Pernambuco, Brasil / Reproductive stage, histology and seasonal morphometry of the testes of Dermanura cinerea (Chiroptera: Phyllostomidae) in Atlantic Forest fragment on the South Coast of Pernambuco, Brazil

This study analyzed the reproductive stage, histology and morphometry of the testes of Dermanura cinerea (Gervais, 1856) in Atlantic Forest fragment on the South Coast of Pernambuco. Specimens were captured by mist net, and collections occurred monthly over two consecutive nights for 18 months. The meteorological data were grouped in rainy and dry months. Eighteen adult specimens were used, which were classified in males with descendant testes and with testes no descendant. For the histological analysis, the testes were collected, fixed and processed following the routine histological technique. The slides obtained were stained by Hematoxylin-Eosin. In the morphometric analysis the area of occupation of the tubular and intertubular compartment were measured, the number of Leydig, Sertoli, spermatocytes and elongated spermatids were quantified. The morphometric data were submitted to statistical analysis. Dermanura cinerea presented higher sperm production activity in dry months and higher hormone production in rainy months. This information is also related to the reproductive pattern of the females and to the increase in rainfall indexes, since it is a determinant factor in the mediation of the food availability of the frugivorous species, such as D. cinerea in the Atlantic Forest area of Pernambuco.(AU)

Esse estudo analisou o estágio reprodutivo, a histologia e a morfometria dos testículos de Dermanura cinerea (Gervais, 1856) em fragmento de Mata Atlântica no Litoral Sul de Pernambuco. Os espécimes foram capturados por redes de neblina e as coletas ocorreram mensalmente, ao longo de duas noites consecutivas, durante 18 meses. Os dados meteorológicos foram agrupados em meses chuvosos e secos. Foram utilizados 18 espécimes adultos, os quais foram classificados em machos com testículos descendentes e não descendentes. Para as análises histológicas, os testículos foram coletados, fixados e processados seguindo a técnica histológica de rotina. As lâminas obtidas foram coradas por Hematoxilina-Eosina. Nas análises morfométricas foram mensuradas a área de ocupação do compartimento tubular e intertubular, quantificados o número de células de Leydig, de Sertoli, de espermatócitos e de espermátides alongadas. Os dados morfométricos foram submetidos às análises estatísticas. Dermanura cinerea apresentou maior atividade de produção espermática em meses secos e maior produção hormonal em meses chuvosos. Essas informações estão relacionadas também com o padrão reprodutivo das fêmeas e com a elevação nos índices pluviométricos, já que é um fator determinante na mediação da disponibilidade alimentar das espécies frugívoras, como D. cinerea em área de Mata Atlântica de Pernambuco.(AU)

Estágio reprodutivo, histologia e morfometria sazonal do testículo de Dermanura cinerea (Chiroptera: Phyllostomidae) em fragmento de Mata Atlântica no Litoral Sul de Pernambuco, Brasil / Reproductive stage, histology and seasonal morphometry of the testes of Dermanura cinerea (Chiroptera: Phyllostomidae) in Atlantic Forest fragment on the South Coast of Pernambuco, Brazil

This study analyzed the reproductive stage, histology and morphometry of the testes of Dermanura cinerea (Gervais, 1856) in Atlantic Forest fragment on the South Coast of Pernambuco. Specimens were captured by mist net, and collections occurred monthly over two consecutive nights for 18 months. The meteorological data were grouped in rainy and dry months. Eighteen adult specimens were used, which were classified in males with descendant testes and with testes no descendant. For the histological analysis, the testes were collected, fixed and processed following the routine histological technique. The slides obtained were stained by Hematoxylin-Eosin. In the morphometric analysis the area of occupation of the tubular and intertubular compartment were measured, the number of Leydig, Sertoli, spermatocytes and elongated spermatids were quantified. The morphometric data were submitted to statistical analysis. Dermanura cinerea presented higher sperm production activity in dry months and higher hormone production in rainy months. This information is also related to the reproductive pattern of the females and to the increase in rainfall indexes, since it is a determinant factor in the mediation of the food availability of the frugivorous species, such as D. cinerea in the Atlantic Forest area of Pernambuco.

Esse estudo analisou o estágio reprodutivo, a histologia e a morfometria dos testículos de Dermanura cinerea (Gervais, 1856) em fragmento de Mata Atlântica no Litoral Sul de Pernambuco. Os espécimes foram capturados por redes de neblina e as coletas ocorreram mensalmente, ao longo de duas noites consecutivas, durante 18 meses. Os dados meteorológicos foram agrupados em meses chuvosos e secos. Foram utilizados 18 espécimes adultos, os quais foram classificados em machos com testículos descendentes e não descendentes. Para as análises histológicas, os testículos foram coletados, fixados e processados seguindo a técnica histológica de rotina. As lâminas obtidas foram coradas por Hematoxilina-Eosina. Nas análises morfométricas foram mensuradas a área de ocupação do compartimento tubular e intertubular, quantificados o número de células de Leydig, de Sertoli, de espermatócitos e de espermátides alongadas. Os dados morfométricos foram submetidos às análises estatísticas. Dermanura cinerea apresentou maior atividade de produção espermática em meses secos e maior produção hormonal em meses chuvosos. Essas informações estão relacionadas também com o padrão reprodutivo das fêmeas e com a elevação nos índices pluviométricos, já que é um fator determinante na mediação da disponibilidade alimentar das espécies frugívoras, como D. cinerea em área de Mata Atlântica de Pernambuco.

Effect of dietary antioxidant supplementation on reproductive characteristics of male broiler breeders during the post-peak production phase / Efeito da suplementação dietética de antioxidantes sobre características reprodutivas de machos reprodutores de frangos de corte na fase pós pico de produção

Because of their membrane constitution, sperm cells of male broiler breeders are prone to lipid peroxidation, which affects their fertilizing capacity. The aim of the present study was to evaluate the effects of antioxidant diet supplementation on the reproductive characteristics of 12 male broiler breeders (Cobb) older than 50 weeks. The roosters were randomly distributed in a completely randomized experimental design with two treatments (treatment 1: commercial feed; treatment 2: commercial feed supplemented with canthaxanthin, lycopene, and vitamin C) and 6 replicates. Semen samples were collected by abdominal massage, and then underwent evaluation of semen volume, sperm concentration, motility, vigor, and morphology. Morphometric analyses of testes, combs, and dewlaps were performed at 68 weeks. Testes samples were collected for morphometric analysis of seminiferous tubules and analysis of cellular proliferation in the germinal epithelium by using immunohistochemical staining with anti-proliferating cell nuclear antigen (anti-PCNA) antibodies. Statistical data analysis was performed using the SAS software (SAS, 2002). No significant effects of antioxidant supplementation were observed on semen characteristics (p > 0.05). A significant positive effect of the antioxidant blend was observed on the percentage of normal sperm, dewlap weight and width, and testes weight and le

Os espermatozoides de machos reprodutores de frango de corte são células propensas a peroxidação lipídica, dada à constituição biológica de sua membrana, influenciando a capacidade fertilizante do macho. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da suplementação dietética de antioxidantes sobre características reprodutivas de machos reprodutores de frangos de corte com idade superior a 50 semanas. Foram utilizados 12 galos Cobb de 50 semanas de idade distribuídos aleatoriamente em um delineamento inteiramente casualizado com 2 tratamentos (tratamento 1: ração comercial; tratamento 2: ração comercial suplementada de cantaxantina, licopeno e vitamina C) e 6 repetições. Amostras de sêmen foram coletadas pelo método de massagem abdominal e submetidas à avaliação do volume seminal, concentração, motilidade, vigor e morfologia espermática. Às 68 semanas de idade, amostras de testículo foram coletadas para determinação da morfometria tubular dos testículos e para análise da proliferação celular no epitélio germinativo através de imunohistoquímica anti-PCNA. A morfometria de testículos, cristas e barbelas foram analisadas nas 68 semanas de idade. Os dados foram submetidos à análise estatística utilizando-se o software SAS (SAS, 2002). Não foram observadas diferenças significativas (p > 0,05) com a adição dos antioxidantes sobre as características seminais. Houve efeito positivo

VITRIFICAÇÃO DE ESPERMATOZOIDES EJACULADOS DE CARNEIROS COMPARAÇÃO COM A CONGELAÇÃO CLÁSSICA

A criopreservação de sêmen é uma biotécnica de considerável impacto econômico, por ser uma das técnicas base para a implantação de outras biotecnologias de conservação e multiplicação de recursos genéticos, como a inseminação artificial e produção in vitro de embriões. Embora a congelação clássica seja a técnica mais utilizada para criopreservar sêmen de ovinos, ela ainda apresenta algumas limitações nesta espécie. Com isso, surgem novos métodos de criopreservação, sendo a vitrificação um dos mais promissores. A vitrificação de sêmen apresenta diversas vantagens, por ser um método rápido e de baixo custo, mas principalmente a não formação de cristais de gelo. No entanto, existem poucos estudos sobre sua eficiência com sêmen ejaculado de carneiros e o uso da galactose como crioprotetor extracelular, bem como os efeitos que esses crioprotetores e as técnicas de criopreservação exercem aos espermatozoides. O presente estudo foi desenvolvido para avaliar o efeito da galactose (0,01 M), associada ou não ao glicerol (3 e 7%) em meio comercial na vitrificação de espermatozoides de carneiros pelo método de palhetas. Ejaculados de seis carneiros da raça Dorper foram coletados com vagina artificial, diluídos individualmente nos meios testados e as amostras foram envasadas em palhetas de 0,25 ml. Para avaliar efeito das diferentes técnicas sobre a qualidade espermática após a criopreservação, as amostras foram criopreservadas utilizando tanto o método clássico quanto vitrificação, tendo sido analisados posteriormente a cinemática, morfologia, morfometria, viabilidade, integridade física e funcional da membrana espermática. A vitrificação espermática apresentou resultados inferiores (p<0,05) à congelação clássica, pois não apresentou motilidade em nenhum dos extensores, bem como baixos valores de viabilidade, integridade física e funcional da membrana. A vitrificação resultou em maior porcentagem de cauda fortemente enrolada na análise morfológica e menor percentual de células reativas ao teste hiposmótico em todos os extensores quando comparado com a congelação clássica (p<0,05). Além disso, a utilização de extensores adicionados de galactose sem ou com glicerol a 3% e 7% aumentou significativamente o percentual de defeitos maiores. Conclui-se que a galactose e o glicerol nas concentrações utilizadas foram ineficazes para vitrificação de espermatozoides de ovinos pelo método de palhetas.

Semen cryopreservation is a biotechnique with substantial economic impact, since it is the basic technique to implement further biotechnologies on conservation and multiplication of genetic resources, such as artificial insemination and in vitro embryo production. Although classical freezing is the most common technique to cryopreserve sheep semen, it has some limitations in this specie. Therefore, new methods of cryopreservation have been developed, with vitrification being one of the most promising. Semen vitrification has several advantages, as a fast and low-cost method, but mainly due to avoid ice crystals formation. However, there are few studies evaluating its efficiency with sheep ejaculated semen and the use of galactose as an extracellular cryoprotectant, as well as the effects that these cryoprotectants and cryopreservation techniques have on sperm. The present study was developed to evaluate the effect of galactose (0.01 M), associated or not with glycerol (3 and 7%) in commercial medium on vitrification of sheep sperm using the straw method. Ejaculates from six Dorper rams were collected with artificial vagina, individually diluted in tested media and the samples were packed in 0.25 ml straws. To assess the effect of different techniques on sperm quality after cryopreservation, the samples were cryopreserved using both classical and vitrification methods, and the kinematics, morphology, morphometry, viability, physical and functional integrity of the sperm membrane were analyzed. Sperm vitrification had lower results (p <0.05) than classic freezing, as no motility was detected in any tested extender, as well as lower values of viability, physical and functional integrity of the membrane were observed. The vitrification resulted in a higher percentage of coiled tail on morphological analysis and a lower percentage of cells reactive to hyposmotic test in all extenders when compared to classical freezing (p <0.05). In addition, the use of extenders added with galactose without or with 3% and 7% glycerol significantly increased the percentage of major defects. It was concluded that galactose and glycerol at the concentrations used were ineffective for vitrification of sheep sperm using the straw method.

Sêmen Convencional e Sexado: Características In Vitro e Fertilidade de Vacas Nelore com Ou Sem a Aplicação de Prostaglandina no Momento da Iatf.

O presente estudo teve por objetivo avaliar a fertilidade do sêmen convencional e sexado utilizado em vacas Nelore multíparas que receberam tratamento com PGF2 no momento da inseminação artificial (IA) e expressaram diferentes intensidades de comportamento de estro (com ou sem expressão de estro) em um protocolo de IATF. Adicionalmente o estudo avaliou laboratorialmente as amostras de sêmen sexado e convencional a fim de comparar as características seminais in vitro com os resultados de fertilidade obtidos a campo. No experimento a campo, foram avaliadas as taxas de concepção (TC) de vacas multíparas lactantes da raça Nelore locadas em duas fazendas comerciais de gado de corte (fazenda 1: n=348 e fazenda 2: n=355). Em ambas as fazendas, as vacas foram submetidas ao mesmo protocolo de IATF. Quarenta e oito hs após a remoção do dispositivo de Progesterona (dia 11; D11), a IA foi realizada com sêmen convencional ou sexado de dois touros diferentes, de forma aleatória. Adicionalmente, no momento da IA, as vacas receberam, aleatoriamente, 12,5 mg im de dinoprost trometamina (Dinoprost; Lutalyse®; tratamento PGF) ou 2,5 mL im de soro fisiológico estéril (Controle). O comportamento estral foi aferido no D11 (momento da IATF) pela ativação do dispositivo estrotect®. Os dados foram analisados por regressão logística a um grau de significância de 5%. No experimento laboratorial, foram avaliadas amostras de sêmen sexado e convencional dos dois touros (touros 1 e 2), utilizados na fazenda 1 deste estudo. Foram analisados parâmetros convencionais de qualidade espermática, avaliação da integridade de membrana plasmática (pelo teste hiposmótico), análise computadorizada do sêmen (CASA) e avaliação de morfometria e parâmetros da cromatina espermática pelo Azul de Toluidina. Os dados laboratoriais foram analisados por ANOVA considerando 5% de significância. De acordo com os resultados do estudo a campo, a TC geral foi de 32,8% na Fazenda 1 e 42,3% na Fazenda 2 (P = 0,01). Escore de condição corporal (P = 0,02), comportamento estral (P=0,01) e tipo de sêmen (P <0,001) foram fatores que afetaram a TC. Vacas inseminadas com sêmen convencional tiveram 2,73 vezes mais probabilidade de tornar-se gestantes do que vacas inseminadas com sêmen sexado e vacas exibindo estro tiveram 2,5 vezes mais chance de gestação do que vacas que não exibiram estro. Nenhum efeito do tratamento com PGF2 (P=0,67) foi detectado em vacas que receberam sêmen convencional ou sexado. Ainda assim, foi detectada tendência estatística de interação (P=0,08) entre o tratamento (PGF ou controle) e o comportamento estral (estro ou não). O tratamento com PGF2 no momento da IA aumentou em 70% a TC das vacas que não expressaram estro. Nas análises laboratoriais, o sêmen convencional de ambos os touros apresentou maior (P<0,05) motilidade visual, concentração espermática, espermatozoides móveis na palheta e integridade de membrana plasmática em relação ao sêmen sexado. Nas avaliações pelo sistema CASA, motilidade total (MT) e progressiva (MP) foram significativamente menores nas amostras de sêmen sexado em relação ao convencional no touro 1 (P<0.05). A amplitude de deslocamento lateral de cabeça (ALH) foi maior (P<0.05) no sêmen sexado comparado ao sêmen convencional nos dois animais avaliados. Os resultados de análise morfométrica demonstraram que o touro 2 apresentou menor elipsidade nos espermatozoides sexados em relação ao sêmen convencional (P<0,05), enquanto no touro 1 foi observado menor Fourier1 no sêmen sexado em relação ao convencional. Não foram observadas diferenças na descompactação e heterogeneidade do DNA, quando comparados sêmen convencional e sexado em ambos os touros. Concluiu-se que a fertilidade do sêmen sexado foi menor do que o sêmen convencional, independente do tratamento com PGF2. Porém, vacas que não apresentaram estro e receberam o tratamento com PGF2 no momento da IA demonstraram TC semelhante às vacas em estro, independentemente do tipo de sêmen. Além disso, o processo de sexagem prejudicou diversas características de viabilidade espermática, bem como parâmetros cinéticos e morfométricos dos espermatozoides que estão relacionados com menor capacidade de fertilização deste tipo de sêmen.

The present study aimed to evaluate the fertility of conventional and sexed semen used in multiparous Nelore cows that received PGF2 treatment at the moment of AI and expressed different intensities of estrus behavior (estrus or no estrus expression) in timed-AI protocol. Additionally, laboratory assessment of sexed and conventional semen was performed in order to compare in vitro sperm characteristics with field fertility results. In the field experiment, conception rates (CR) of lactating multiparous Nelore cows from two commercial beef farms (farm 1: n=348 and farm 2: n=355) were evaluated. The animals were submitted to the same timed-AI protocol and 48 hs after the progesterone device removal (day 11; D11), AI was randomly performed with conventional or sexed semen from two different bulls. Additionally, at the time of AI, cows randomly received 12.5 mg im of dinoprost tromethamine (Dinoprost; Lutalyse®; PGF treatment) or 2.5 mL im of sterile saline (Control). Estrus behavior was measured at D11 (moment of timed-AI) by estrotect® device. The data were analyzed by logistic regression at 5% of significance level. In the laboratory experiment, sexed and conventional semen samples from the bulls (bulls 1 and 2) used in farm 1 were evaluated. Conventional sperm quality parameters, plasma membrane integrity (hyposmotic test), computerized semen analysis (CASA) and sperm morphometry and chromatin (Toluidine Blue) assessment were analyzed. The laboratory data were analyzed by ANOVA at 5% of significance. The overall CR was 32.8% in Farm 1 and 42.3% in Farm 2 (P = 0.01). Body condition score (P = 0.02), estrous behavior (P = 0.01) and semen type (P <0.001) were factors affecting CR. Cows inseminated with conventional semen were 2.73 times more likely to become pregnant than cows inseminated with sexed semen and cows exhibiting estrus were 2.5 times more likely to become pregnant than cows not exhibiting estrus. No effect of PGF2 treatment (P=0.67) was detected in cows that received conventional or sexed semen. Still, a statistical tendency of interaction (P=0.08) was detected between treatment (PGF or control) and estrous behavior (estrus or no estrus). Treatment with PGF2 at the time of AI increased by 82% the CR of cows with no estrus behavior. In laboratory analyses, conventional semen from both bulls demonstrated higher (P<0.05) visual motility, sperm concentration, number of motile sperm in the straw and plasma membrane integrity compared to sexed semen. In the CASA assessment, total