Pathology, microbiology, and molecular evaluation of tissues from equids serologically positive for Burkholderia mallei in Midwestern Brazil / Avaliação patológica, microbiológica e molecular em amostras de tecidos de equídeos sorologicamente positivos para Burkholderia mallei no Centro-Oeste do Brasil

Glanders is a disease caused by the bacterium Burkholderia mallei that primarily affects horses, mules and donkeys. The disease can cause lesions in the skin, lungs and several other organs. However, it often manifests as an asymptomatic disease. In Brazil, serological tests of high sensitivity and specificity are used to assist in the detection of antibodies against B. mallei and to contribute to the control of the disease. However, due to the mandatory euthanasia of seroreactive animals, equids with positive serology for B. mallei and asymptomatic generated great conflicts between breeders, veterinarians and diagnostic laboratories. This study clarifies the limitations of complementary diagnostic tests for detecting B. mallei. It describes the clinical, morphological and laboratory findings in 24 equines from different municipalities in the Mato Grosso State, Brazil, which reacted to the complement fixation test and were positive in the western blotting test for glanders. Data and tissue samples were collected from 24 horses for histological, microbiological and molecular analysis. In 23 horses, no clinical signs, morphological alterations, microbiological isolation, or molecular detection would characterize B. mallei infection. On the other hand, samples from an asymptomatic horse without lesional alterations showed sequence amplification compatible with B. mallei in the PCR. Considering that the infection by B. mallei is subject to the application of animal sanitary defense measures and that, by international requirement and national legislation, the serological results are tools that should support the sanitation procedures for the error of the bacteria in the Mato Grosso State, Brazil.

Mormo é uma enfermidade causada pela bactéria Burkholderia mallei que acomete primariamente cavalos, mulas e burros. A doença pode causar lesões na pele, pulmões e em diversos outros órgãos, entretanto frequentemente manifesta-se como uma enfermidade assintomática. No Brasil são utilizados testes sorológicos de elevada sensibilidade e especificidade para auxiliar na detecção de anticorpos contra B. mallei e contribuir para controle da doença. Porém, devido à obrigatoriedade da eutanásia de animais sororeagentes, os equídeos com sorologia positiva para B. mallei e assintomáticos geraram grandes embates entre criadores, médicos-veterinários e laboratórios de diagnóstico. Este trabalho esclarece as limitações dos testes diagnósticos complementares para detecção de B. mallei e descreve os achados clínicos, morfológicos e de exames laboratoriais em 24 equídeos, procedentes de diferentes municípios do estado de Mato Grosso, Brasil, que reagiram ao teste de fixação de complemento e foram positivos no teste de "western blotting" para mormo. Foram colhidos dados e amostras de tecidos de 24 equídeos para análise histológica, microbiológica e molecular. Em 23 equídeos não existiam sinais clínicos, alterações morfológicas, isolamento microbiológico ou detecção molecular que caracterizassem infecção por B. mallei. Por outro lado, amostras de um cavalo assintomático e sem alterações lesionais apresentaram amplificação de sequência compatível com B. mallei na PCR. Considerando que a infecção por B. mallei é passível da aplicação de medidas de defesa sanitária animal e que por exigência internacional e da legislação nacional, os resultados sorológicos são ferramentas que devem amparar os procedimentos de saneamento para erradicação da bactéria no estado de Mato Grosso, Brasil.

Historical highlights regarding glanders, from 2007 to 2017, in the state of Maranhão, Brazil / Destaques históricos do mormo, de 2007 a 2017, no estado do Maranhão, Brasil

Glanders is an infectious disease of equids caused by Burkholderia mallei, a facultative intracellular non-mobile Gram-negative bacterium that can be transmitted to other animals and humans. This study described glanders cases reported in the state of Maranhão, located within an Amazon-Cerrado transition region in northeastern Brazil, from 2007 to 2017. A database in an electronic spreadsheet (Microsoft Excel 2010) was developed containing information on the number of positive animals according to age, sex, purpose, year and month, municipality and mesoregion of origin of the animal. The descriptive analyzis was performed on data provided by the State Agency for Agricultural and Livestock Protection of the state of Maranhão (AGED), and by the official private laboratory. As the database did not have information data about negative animals, possible risk factors could not be evaluated. Among the total of 62,555 equids were evaluated by means of the complement fixation test (CFT), 59,036 were horses, 2,981 mules and 538 donkeys. Thirty-five samples (0.06%) reacted in the CFT. Five additional samples were by the western blot technique and three of them were positive. All the reactive horses (Equuscaballus) were from rural areas. Results presented here indicate that glanders may be endemic in the state of Maranhão and is a public health concern.

O mormo é uma doença infecciosa de equídeos causada por Burkholderia mallei, uma bactéria Gram-negativa intracelular, não móvel e facultativa que pode ser transmitida a outros animais e humanos. O objetivo deste estudo foi descrever os casos de mormo relatados no estado do Maranhão, em uma região de transição Amazônia-Cerrado do Nordeste do Brasil, no período de 2007 a 2017. Um banco de dados em uma planilha eletrônica (Microsoft Excel 2010) foi desenvolvido contendo informações sobre o número de animais positivos de acordo com a idade, sexo, finalidade, ano, mês, municípios e mesorregiões de origem do animal. A análise descritiva foi realizada sobre os dados fornecidos pela Agência Estadual de Defesa Agropecuária do Estado do Maranhão (AGED), e pelo laboratório privado oficial. Como o banco de dados não possui informações sobre animais negativos, possíveis fatores de risco não puderam ser avaliados. Entre o total de 62.555 equídeos foram avaliados com o teste de fixação do complemento (CFT), 59.036 eram cavalos, 2.981 mulas e 538 jumentos. Trinta e cinco (0,06%) amostras reagiram ao CFT. Cinco amostras adicionais foram testadas pela técnica de western blot e três foram positivas. Todos os animais positivos foram cavalos (Equus caballus) da área rural. Os resultados indicam que o mormo pode ser endêmico no estado do Maranhão e uma preocupação de saúde pública.

Identification of management factors associated with glanders's occurrence in equids in Brazilian Northeast region / Identificação dos fatores de manejo associados à ocorrência do Mormo em equídeos no Nordeste do Brasil

Glanders is a contagious zoonotic infectious disease characterized by an acute or chronic condition that mainly affects equids and is caused by Burkholderia (B.) mallei. From January 2005 to December 2017, 697 farms with positive cases of this disease were registered in Brazil, with the Northeast region accounting for 61.4% (428/697) of the total number of cases. This study conducted an epidemiological study of B. mallei infections that occurred in farms in the states of Pernambuco, Paraíba, Ceará and Alagoas. For this purpose, investigative questionnaires were applied to six farms where there were outbreaks of glanders and 11 farms where there were no reports of glanders between 2017 and 2021, and statistical analysis of the factors associated with the occurrence of glanders in Northeastern Brazil was performed. Factors such as the purpose of rearing (P = 0.023), lack of information on disease transmission modes (P = 0.034), failure to carry out periodic tests for glanders diagnosis (P = 0,029), no request for glanders tests prior to the purchase of new animals periodic tests for glanders diagnosis (P = 0.029), not requiring a negative test for glanders in the acquisition of animals (P = 0.06), use of extensive breeding systems(P = 0.027), and poor stall hygiene were associated with disease occurrence (P = 0.001). Understanding the factors related to the occurrence of glanders in the Northeast Region of Brazil helps to establish management measures that minimize bacteria transmission, thereby reducing the number of cases in the region and economic losses associated with glanders.

O mormo é uma doença infectocontagiosa, zoonótica, de caráter agudo ou crônico, que acomete principalmente os equídeos, causado por Burkholderia (B.) mallei. De janeiro de 2005 até dezembro de 2017, 697 focos da doença foram registrados no Brasil, sendo que a região Nordeste detém 61,4% (428/697) do total de focos. Objetivou-se realizar um estudo epidemiológico da infecção por Burkholderia mallei em propriedades nos estados de Pernambuco, Paraíba, Ceará e Alagoas. Para tal foi aplicado questionário investigativo em seis fazendas onde houve caso de Mormo e 11 fazendas em que não houve relato entre 2007 e 2011 e realizada análise estatística dos fatores de manejo associados à ocorrência do Mormo no Nordeste do Brasil. Observou-se associação significativa para as seguintes variáveis: objetivo da criação (comércio, esporte e trabalho nas fazendas) (P = 0,023); ausência de informação sobre as formas de transmissão da bactéria (P = 0,034); não realização de exames periódicos para o diagnóstico do mormo (P = 0,029); exigência de exame negativo na compra de equinos (P = 0,06); utilização do sistema de criação extensivo (P = 0,027) e deficiência de higienização das baias (P = 001). Os resultados obtidos devem ser utilizados na implementação de medidas de manejo que minimizem o risco de transmissão da bactéria, reduzindo os casos da doença na região e as perdas econômicas com o mormo.

Monitoring the outbreak of equine glanders in Alagoas, Brazil: Clinical, immunological, molecular, and anatomopathological findings / Monitoramento de surtos de mormo nos equídeos em Alagoas, Brasil: achados clínicos, imunológicos, moleculares e anatomopatológico

Glanders is an infectious and often lethal zoonotic disease of equines caused by the bacterium, Burkholderia mallei. This condition is characterized by respiratory, lymphatic, and cutaneous lesions. In this study, we monitored the development of clinical symptoms in animals naturally infected with B. mallei across different equine breeds and also isolated and characterized the disease-causing bacteria. We studied two official glanders outbreaks in the state of Alagoas, Brazil. During the outbreaks, we performed clinical and immunological follow-up of the animals, as well as euthanasia and anatomopathological examination. We also collected diagnostic materials for isolative, phenotypic, molecular, and biological testing. We did not observe any clinical patterns of glanders among animals infected with the same strain of B. mallei. Based on our results, we suggest that early diagnosis of infection should be made through highly sensitive and specific immunoassays. In asymptomatic but positive test cases, we confirmed the importance of conducting pathological, microbiological, and molecular examinations.

O mormo é uma enfermidade infectocontagiosa e frequentemente letal, aguda ou crônica, caracterizada por lesões respiratórias, linfáticas e cutâneas em equídeos, porém de caráter zoonótico. Objetivou-se acompanhar o desenvolvimento dos sinais clínicos e de lesões em animais infectados naturalmente por B. mallei em diferentes propriedades de criação de equídeos, e isolar e caracterizar a bactéria causadora da doença. Foram estudados dois focos oficiais para o mormo no estado de Alagoas. Realizou-se o acompanhamento clinico e imunológico dos animais nos focos, eutanásia e exame anatomopatológico dos animais, além de colheita de material para diagnóstico através de técnicas de isolamento, fenotípicas, moleculares e prova biológica. Neste estudo não se observou um padrão clínico para o diagnóstico do mormo em animais infectados com a mesma cepa de B. mallei. O diagnóstico precoce da infecção deve ser realizado por meio de testes imunológicos de elevada sensibilidade e especificidade. Nos casos assintomáticos e positivos nos testes oficiais é importante a realização do exame anatomopatológico, microbiológico e molecular.

Monitoring the outbreak of equine glanders in Alagoas, Brazil: Clinical, immunological, molecular, and anatomopathological findings / Monitoramento de surtos de mormo nos equídeos em Alagoas, Brasil: achados clínicos, imunológicos, moleculares e anatomopatológico

Glanders is an infectious and often lethal zoonotic disease of equines caused by the bacterium, Burkholderia mallei. This condition is characterized by respiratory, lymphatic, and cutaneous lesions. In this study, we monitored the development of clinical symptoms in animals naturally infected with B. mallei across different equine breeds and also isolated and characterized the disease-causing bacteria. We studied two official glanders outbreaks in the state of Alagoas, Brazil. During the outbreaks, we performed clinical and immunological follow-up of the animals, as well as euthanasia and anatomopathological examination. We also collected diagnostic materials for isolative, phenotypic, molecular, and biological testing. We did not observe any clinical patterns of glanders among animals infected with the same strain of B. mallei. Based on our results, we suggest that early diagnosis of infection should be made through highly sensitive and specific immunoassays. In asymptomatic but positive test cases, we confirmed the importance of conducting pathological, microbiological, and molecular examinations.(AU)

O mormo é uma enfermidade infectocontagiosa e frequentemente letal, aguda ou crônica, caracterizada por lesões respiratórias, linfáticas e cutâneas em equídeos, porém de caráter zoonótico. Objetivou-se acompanhar o desenvolvimento dos sinais clínicos e de lesões em animais infectados naturalmente por B. mallei em diferentes propriedades de criação de equídeos, e isolar e caracterizar a bactéria causadora da doença. Foram estudados dois focos oficiais para o mormo no estado de Alagoas. Realizou-se o acompanhamento clinico e imunológico dos animais nos focos, eutanásia e exame anatomopatológico dos animais, além de colheita de material para diagnóstico através de técnicas de isolamento, fenotípicas, moleculares e prova biológica. Neste estudo não se observou um padrão clínico para o diagnóstico do mormo em animais infectados com a mesma cepa de B. mallei. O diagnóstico precoce da infecção deve ser realizado por meio de testes imunológicos de elevada sensibilidade e especificidade. Nos casos assintomáticos e positivos nos testes oficiais é importante a realização do exame anatomopatológico, microbiológico e molecular.(AU)

Situação atual do mormo no estado de São Paulo e no Brasil

O Mormo é uma enfermidade causada pela bactéria Burkholderiamallei que acomete principalmente os equídeos e é caracterizada por provocar lesões nos sistemas respiratório cutâneo e linfático. Em virtude do grande impacto gerado na equideocultura e, principalmente, por ser uma enfermidade de caráter zoonótico, está incluída na lista de doenças de notificação imediata de qualquer caso suspeito no Brasil, e os casos confirmados são informados a Organização Mundial de Saúde Animal (OIE).

Situação atual do mormo no estado de São Paulo e no Brasil

O Mormo é uma enfermidade causada pela bactéria Burkholderiamallei que acomete principalmente os equídeos e é caracterizada por provocar lesões nos sistemas respiratório cutâneo e linfático. Em virtude do grande impacto gerado na equideocultura e, principalmente, por ser uma enfermidade de caráter zoonótico, está incluída na lista de doenças de notificação imediata de qualquer caso suspeito no Brasil, e os casos confirmados são informados a Organização Mundial de Saúde Animal (OIE).(AU)

Burkholderia mallei isolation from milk of a mare and evidence of congenital transmission of glanders in equids: case reports / Isolamento de Burkholderia mallei de leite de égua e evidência de transmissão congênita de mormo em equinos: relatos de casos

This is the first report of Burkholderia mallei isolation in milk from a mare diagnosed with glanders and of transplacental transmission of the bacteria in a seropositive pregnant mare, both from São Paulo State, Brazil, 2016 and 2019. After necropsy, the horses were evaluated for macroscopic lesions, and organ samples were removed for histological, bacteriological, and molecular analysis. B.mallei was identified in milk samples by culture isolation and PCR, whereas in the fetus of the pregnant mare by PCR of the stomach fluid. These findings will contribute to the epidemiological knowledge of glanders life cycle in Brazil.

Este é o primeiro relato de isolamento de Burkholderia mallei no leite de uma égua com diagnóstico de mormo e de transmissão transplacentária da bactéria em uma égua prenhe soropositiva, ambas do Estado de São Paulo, Brasil, 2016 e 2019. Após a necropsia, os cavalos foi verificada a presença de lesões macroscópicas e amostras de órgãos foram coletadas para posterior análise histológica, bacteriológica e molecular. B.mallei foi identificada em amostras de leite por isolamento bacteriano e PCR, enquanto no feto de égua prenhe por PCR do fluido estomacal. Esses achados contribuirão para o conhecimento epidemiológico do ciclo de vida do mormo no Brasil.

Burkholderia mallei isolation from milk of a mare and evidence of congenital transmission of glanders in equids: case reports / Isolamento de Burkholderia mallei de leite de égua e evidência de transmissão congênita de mormo em equinos: relatos de casos

This is the first report of Burkholderia mallei isolation in milk from a mare diagnosed with glanders and of transplacental transmission of the bacteria in a seropositive pregnant mare, both from São Paulo State, Brazil, 2016 and 2019. After necropsy, the horses were evaluated for macroscopic lesions, and organ samples were removed for histological, bacteriological, and molecular analysis. B.mallei was identified in milk samples by culture isolation and PCR, whereas in the fetus of the pregnant mare by PCR of the stomach fluid. These findings will contribute to the epidemiological knowledge of glanders life cycle in Brazil.(AU)

Este é o primeiro relato de isolamento de Burkholderia mallei no leite de uma égua com diagnóstico de mormo e de transmissão transplacentária da bactéria em uma égua prenhe soropositiva, ambas do Estado de São Paulo, Brasil, 2016 e 2019. Após a necropsia, os cavalos foi verificada a presença de lesões macroscópicas e amostras de órgãos foram coletadas para posterior análise histológica, bacteriológica e molecular. B.mallei foi identificada em amostras de leite por isolamento bacteriano e PCR, enquanto no feto de égua prenhe por PCR do fluido estomacal. Esses achados contribuirão para o conhecimento epidemiológico do ciclo de vida do mormo no Brasil.(AU)

Métodos de diagnóstico e estratégias de controle do mormo no brasil

Glanders is a zoonotic disease caused by Burkholderia mallei that affects equidae. After its re-emergence in Brazil the disease has been reported in almost all country. The control strategy established by the Ministry of Agriculture, Livestock and Supply (MAPA) involves statutory testing for equidae trafic control, movement restrictions and culling of positive animals from the detected outbreaks. These measures are based on the results of serological tests performed by private laboratories accredited by MAPA or by official MAPA laboratories. The complement fixation (CF) test is prescribed as screening and western blotting (WB) as a confirmatory test. The major problems for the diagnosis of glanders in Brazil are technological dependence, the quality of certain antigens, as well as the limitations of the screening test (CF), with low sensitivity (Se) and specificity (Sp), and the subjectivity of the WB. Alternatively, we have developed an indirect ELISA (ELISAi) employing antigens of B. mallei isolated in Brazil (Diagnostic kit – Glanders iELISA; MAPA License n: 10.080/2015). The ELISAi showed Se and Sp of 98.76% and 99.65%, respectively. The Kit will be submitted to international validation (OIE-Tender ref. AD/SR/2015/1885). The next step to complete the validation in Brazil is the conduction of reproductibility assay. Then it is expected that the ELISAi will be included in the Equidae National Health Program as official test for serological diagnosis of glanders.

O Mormo é uma zoonose causada pela bactéria Burkholderia mallei que afeta equídeos. Após sua reemergência no Brasil a doença tem sido notificada em praticamente todo território nacional. A estratégia de controle instituída pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e abastecimento (MAPA) envolve o teste para controle de trânsito e de eventos de aglomeração de equídeos, bem como interdição e saneamento dos focos detectados. Essas medidas são baseadas nos resultados de testes sorológicos realizados por laboratórios privados credenciados pelo MAPA ou por laboratórios oficiais do MAPA. A fixação do complemento (FC) é o teste prescrito como triagem e o western blotting (WB) como prova confirmatória. Os principais gargalos para o diagnóstico do mormo no Brasil são a dependência tecnológica, a qualidade de certos antígenos, bem como as limitações do teste de triagem (FC), com baixa sensibilidade (Se) e especificidade (Sp), além da subjetividade do WB. Como alternativa, desenvolvemos um ELISA indireto (ELISAi) empregando antígeno de amostras de B. mallei isoladas no Brasil (Kit diagnóstico Mormo ELISAi; MAPA Licença no: 10.080/2015). O teste apresentou Se e Sp de 98,76% e 99,65%, respectivamente. O Kit será submetido à validação internacional (OIE-Tender ref. AD/ SR/2015/1885). A próxima etapa para concluir a validação no Brasil é a realização de provas de reprodutibilidade. Espera-se que, cumprida essa etapa, o ELISAi seja incluído no Programa Nacional de Sanidade dos Equídeos como teste oficial para diagnóstico sorológico do mormo.

Métodos de diagnóstico e estratégias de controle do mormo no brasil

Glanders is a zoonotic disease caused by Burkholderia mallei that affects equidae. After its re-emergence in Brazil the disease has been reported in almost all country. The control strategy established by the Ministry of Agriculture, Livestock and Supply (MAPA) involves statutory testing for equidae trafic control, movement restrictions and culling of positive animals from the detected outbreaks. These measures are based on the results of serological tests performed by private laboratories accredited by MAPA or by official MAPA laboratories. The complement fixation (CF) test is prescribed as screening and western blotting (WB) as a confirmatory test. The major problems for the diagnosis of glanders in Brazil are technological dependence, the quality of certain antigens, as well as the limitations of the screening test (CF), with low sensitivity (Se) and specificity (Sp), and the subjectivity of the WB. Alternatively, we have developed an indirect ELISA (ELISAi) employing antigens of B. mallei isolated in Brazil (Diagnostic kit Glanders iELISA; MAPA License n: 10.080/2015). The ELISAi showed Se and Sp of 98.76% and 99.65%, respectively. The Kit will be submitted to international validation (OIE-Tender ref. AD/SR/2015/1885). The next step to complete the validation in Brazil is the conduction of reproductibility assay. Then it is expected that the ELISAi will be included in the Equidae National Health Program as official test for serological diagnosis of glanders.(AU)

O Mormo é uma zoonose causada pela bactéria Burkholderia mallei que afeta equídeos. Após sua reemergência no Brasil a doença tem sido notificada em praticamente todo território nacional. A estratégia de controle instituída pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e abastecimento (MAPA) envolve o teste para controle de trânsito e de eventos de aglomeração de equídeos, bem como interdição e saneamento dos focos detectados. Essas medidas são baseadas nos resultados de testes sorológicos realizados por laboratórios privados credenciados pelo MAPA ou por laboratórios oficiais do MAPA. A fixação do complemento (FC) é o teste prescrito como triagem e o western blotting (WB) como prova confirmatória. Os principais gargalos para o diagnóstico do mormo no Brasil são a dependência tecnológica, a qualidade de certos antígenos, bem como as limitações do teste de triagem (FC), com baixa sensibilidade (Se) e especificidade (Sp), além da subjetividade do WB. Como alternativa, desenvolvemos um ELISA indireto (ELISAi) empregando antígeno de amostras de B. mallei isoladas no Brasil (Kit diagnóstico Mormo ELISAi; MAPA Licença no: 10.080/2015). O teste apresentou Se e Sp de 98,76% e 99,65%, respectivamente. O Kit será submetido à validação internacional (OIE-Tender ref. AD/ SR/2015/1885). A próxima etapa para concluir a validação no Brasil é a realização de provas de reprodutibilidade. Espera-se que, cumprida essa etapa, o ELISAi seja incluído no Programa Nacional de Sanidade dos Equídeos como teste oficial para diagnóstico sorológico do mormo.(AU)

Soroprevalência de mormo, anemia infecciosa equina e brucelose do cavalo baixadeiro / The seroprevalence of glanders, equine infectious anemia and brucellosisof equine race “baixadeiro”

Visando subsidiar medidas de controle e prevenção das doenças infecciosas no cavalo baixadeiro, criado na baixada ocidental maranhense, foram analisadas 415 amostras de soro sanguíneo pelas técnicas de imunodifusão em gel de agar, fixação de complemento e antígeno acidificado tamponado para diagnóstico de anemia infecciosa equina, mormo e brucelose, respectivamente. Os casos positivos para mormo foram submetidos à maleinização pelo serviço oficial de defesa agropecuária e os animais reagentes para brucelose foram reexaminados pela técnica do 2 mercaptoetanol. Encontrou-se 81 (19,51%) animais positivos para AIE, dois (0,48%) para mormo e quatro (0,96%) para brucelose. Dentre os animais com AIE, 41,97% eram machos e 58,03% fêmeas, 7,40% tinham entre 13 e 24 meses, 32,10% entre 25 a 48 meses e 60,50% acima de 48 meses de idade. A maior frequência de AIE foi observada em fêmeas e animais com idade superior a 48 meses. A anemia infecciosa equina é, sem dúvida, a enfermidade de maior impacto sobre os equídeos no Brasil, mas o mormo deve ser uma constante preocupação dos órgãos de defesa agropecuária, não devido ao número de casos, mas porque é uma zoonose com elevada morbidade e letalidade. A brucelose equina merece preocupação em virtude da debilidade orgânica que provoca nos animais, pelos prejuízos decorrentes da eutanásia dos equinos infectados, além de constituírem fonte de infecção para outras espécies domésticas, inclusive, para o homem(AU)

Aiming to support measures for control and prevention of infectious diseases in “Baixadeiro” horse, we analyzed 415 blood serumsamples by the techniques of agar gel immunodiffusion, complement fixation and buffered acidified antigen for the diagnosis ofequine infectious anemia, glanders and brucellosis, respectively. The cases positive for glanders underwent maleinização by theofficial service of agricultural health and reagents animals for brucellosis were re-examined by the technique of 2-mercaptoethanol.Met 81 (19.51 %) animals positive for EIA, two (0.48%) for glanders and four (0.96%) for brucellosis. Among the animals with EIA,41.97 % were males and 58.03 % females, 7.40 % were between 13 and 24 months, 32.10% from 25 to 48 months and 60.50% over 48 months old. The EIA was more frequently observed in female animals aged more than 48 months. Equine infectiousanemia is undoubtedly the greatest impact on disease of equines in Brazil, but glanders should be a constant concern of theorgans of agricultural defense, not because of the number of cases, but because it is a zoonotic disease with high morbidity andlethality. Equine brucellosis deserves concern because the organic weakness that causes the animals, for damages arising fromthe euthanasia of infected horses, as well as being a source of infection to other household, even for the man species(AU)

Produção e purificação parcial de PPD-maleína para diagnóstico do mormo em equídeos / Partially purified malleo-proteins production for glanders diagnosis in Equidae

Objetivou-se com este estudo produzir e purificar parcialmente a PPD-maleína a partir de amostras de Burkholderia mallei isoladas de equídeos no Brasil com potencial para uso no diagnóstico do mormo. As linhagens de B. mallei fenotipicamente caracterizadas e de virulência comprovada foram inoculadas em caldo Dorset-Henley para crescer e metabolizar. Em seguida, as proteínas foram separadas por precipitação com ácido tricloroacético e precipitadas com sulfato de amônia. As PPDs-maleínas foram concentradas em 1,0mg/mL e na avaliação realizada em cobaios foi eficaz no desenvolvimento da hipersensibilidade do tipo tardia e consequentemente na identificação de animais verdadeiro positivos e exclusão dos verdadeiro negativos, sendo uma possibilidade em potencial para utilização no diagnóstico do mormo.(AU)

The objective of this study was to produce and partially purify Malleo-protein from Burkholderia mallei samples isolates from Equidae in Brazil with potential for use in the diagnosis of glanders. The strain B. mallei phenotypically characterized and proven virulent was inoculated into broth Dorset-Henley to grow and metabolize. The proteins were separated by trichloroacetic acid precipitation and amonium sulfate precipitation. The PPD mallein was concentrated 1.0mg/mL and biologically tested in guinea pigs. It was effective in the development of delayed-type hypersensitivity and consequently to identify true-positive animals and to exclude of true negatives. There is the possibility for potential use in the glanders diagnosis in Equidae.(AU)

Sinais clínicos em equídeos naturalmente infectados por Burkholderia mallei no estado de Alagoas: relato de caso / Clinical Signs in equids naturally infected by Burkholderia mallei in the state of Alagoas: case report / Signos Clínicos en équidos infectados naturalmente por Burkholderia mallei en el estado de Alagoas: reporte de caso

Há alguns anos o mormo chegou a ser considerado erradicado no Brasil pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA), porém tem ganhado importância devido ao aumento no número de casos nos últimos anos em todos os estados brasileiros. Os sinais clínicos foram reconhecidos desde que a doença foi registrada pela primeira vez por Hipócrates e Aristóteles e as formas de manifestação da doença são prepatente, hiperaguda, aguda e crônica. Objetivou-se relatar os achados clínicos de equídeos naturalmente infectados com mormo em propriedades consideradas foco pela Agência de Defesa e Inspeção Agropecuária de Alagoas - ADEAL e pelo MAPA no estado de Alagoas. Os sinais clínicos observados nos animais acometidos foram, apatia, dispneia estertorosa, nódulos linfáticos infartados (aumentados), expectoração nasal mucopurulenta bilateral em 3/16 dos animais observados, 1/16 animal apresentou a forma crônica evidenciada pelo edema de membro posterior esquerdo, com presença de lesões ulceradas, linfagite disseminada, expectoração de secreção nasal serosanguinolenta bilateral (hemoptise) e dispneia severa. Por fim os sinais clínicos e achados macroscópicos observados nos animais naturalmente infectados por Burkholderia mal/ei no estado de Alagoas corroboram com o descrito na literatura veterinária e para que haja o controle e a não disseminação da doença, animais positivos devem ser eutanasiados e propriedades foco devem ser interditadas.

A few years ago the glanders came to be considered eradicated in Brazil by the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply (MAPA), but has gained importance due to the increase in the number of cases in recent years in ali Brazilian states. The clinical signs were recognized since the disease was first recorded by Hippocrates and Aristotle and the forms of the disease manifestation are prepatente, hyperacute, acute and chronic. This study aimed to report the clinical findings of equids naturally infected with glanders properties considered focus by the Defense Agency and Agriculturallnspection of Alagoas - ADEAL and the ap in the state of Alagoas. The clinical signs observed in animais affected were, apathy, dyspnea stertorous, infarcted Iymph nodes (increased), expectoration mucopurulent bilateral nasal in 3/16 of animais observed, 1/16 animal presented the chronic form evidenced by edema in the left posterior limb, with the presence of ulcerated lesions, linfagite disseminated, the expectoration of nasal secretion serosanguinolenta bilateral (hemoptysis) and severe dyspnea. Finally, the clinical signs and macroscopic findings observed in animais naturally infected by Burkholderia mallei in Alagoas state corroborate with the previously described in the literature on veterinary and for which there is no control and the spread of the disease, positive animais should be euthanized and focus should be interditadas properties.

Hace unos anos el Muermo llegó a ser considerado erradicado en Brasil por el Ministerio de Agricultura, Ganadería y Alimentación (MAPA), pero ha adquirido mayor importancia debido al aumento en el número de casos en los últimos anos en todos los estados brasilenos. Los signos clínicos fueron reconocidos desde que la enfermedad fue grabado por primera vez por Hipócrates y Aristóteles y las formas de las manifestaciones de la enfermedad son prepatente, Hiperaguda, aguda y crónica. Este estudio tiene como objetivo informar los hallazgos clínicos de équidos infectados naturalmente con el Muermo consideran propiedades focus por Ia Agencia de Defensa e Inspección Agrícola de Alagoas - ADEAL Y el MAPA en el estado de Alagoas. Los signos clínicos observados en los animales afectados fueron, apatía, disnea estertorosa, ganglios linfáticos infartados (aumento), expectoración nasal mucopurulento bilateral en 3/16 (tres/dieciséis) de animales observados, 1/16 (uno/dieciséis) animal presentado Iaforma crónica evidenciada por edema en la extremidad posterior izquierda, con la presencia de lesiones ulceradas, linfagite difundido, la expectoración de secreción nasal serosanguinolenta bilateral (hemoptisis) y disnea severa. Por último, los signos clínicos y los hallazgos macroscópicos observados en los animales infectados naturalmente por Burkholderia mallei en el Estado de Alagoas corroborar con las descritas previamente en la literatura sobre veterinaria y para los cuales no hay control y la propagación de la enfermedad, los animales positivos deben ser sacrificados y el enfoque debe ser interditadas propiedades.

Sinais clínicos em equídeos naturalmente infectados por Burkholderia mallei no estado de Alagoas: relato de caso / Clinical Signs in equids naturally infected by Burkholderia mallei in the state of Alagoas: case report / Signos Clínicos en équidos infectados naturalmente por Burkholderia mallei en el estado de Alagoas: reporte de caso

Há alguns anos o mormo chegou a ser considerado erradicado no Brasil pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA), porém tem ganhado importância devido ao aumento no número de casos nos últimos anos em todos os estados brasileiros. Os sinais clínicos foram reconhecidos desde que a doença foi registrada pela primeira vez por Hipócrates e Aristóteles e as formas de manifestação da doença são prepatente, hiperaguda, aguda e crônica. Objetivou-se relatar os achados clínicos de equídeos naturalmente infectados com mormo em propriedades consideradas foco pela Agência de Defesa e Inspeção Agropecuária de Alagoas - ADEAL e pelo MAPA no estado de Alagoas. Os sinais clínicos observados nos animais acometidos foram, apatia, dispneia estertorosa, nódulos linfáticos infartados (aumentados), expectoração nasal mucopurulenta bilateral em 3/16 dos animais observados, 1/16 animal apresentou a forma crônica evidenciada pelo edema de membro posterior esquerdo, com presença de lesões ulceradas, linfagite disseminada, expectoração de secreção nasal serosanguinolenta bilateral (hemoptise) e dispneia severa. Por fim os sinais clínicos e achados macroscópicos observados nos animais naturalmente infectados por Burkholderia mal/ei no estado de Alagoas corroboram com o descrito na literatura veterinária e para que haja o controle e a não disseminação da doença, animais positivos devem ser eutanasiados e propriedades foco devem ser interditadas.(AU)

A few years ago the glanders came to be considered eradicated in Brazil by the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply (MAPA), but has gained importance due to the increase in the number of cases in recent years in ali Brazilian states. The clinical signs were recognized since the disease was first recorded by Hippocrates and Aristotle and the forms of the disease manifestation are prepatente, hyperacute, acute and chronic. This study aimed to report the clinical findings of equids naturally infected with glanders properties considered focus by the Defense Agency and Agriculturallnspection of Alagoas - ADEAL and the ap in the state of Alagoas. The clinical signs observed in animais affected were, apathy, dyspnea stertorous, infarcted Iymph nodes (increased), expectoration mucopurulent bilateral nasal in 3/16 of animais observed, 1/16 animal presented the chronic form evidenced by edema in the left posterior limb, with the presence of ulcerated lesions, linfagite disseminated, the expectoration of nasal secretion serosanguinolenta bilateral (hemoptysis) and severe dyspnea. Finally, the clinical signs and macroscopic findings observed in animais naturally infected by Burkholderia mallei in Alagoas state corroborate with the previously described in the literature on veterinary and for which there is no control and the spread of the disease, positive animais should be euthanized and focus should be interditadas properties.(AU)

Hace unos anos el Muermo llegó a ser considerado erradicado en Brasil por el Ministerio de Agricultura, Ganadería y Alimentación (MAPA), pero ha adquirido mayor importancia debido al aumento en el número de casos en los últimos anos en todos los estados brasilenos. Los signos clínicos fueron reconocidos desde que la enfermedad fue grabado por primera vez por Hipócrates y Aristóteles y las formas de las manifestaciones de la enfermedad son prepatente, Hiperaguda, aguda y crónica. Este estudio tiene como objetivo informar los hallazgos clínicos de équidos infectados naturalmente con el Muermo consideran propiedades focus por Ia Agencia de Defensa e Inspección Agrícola de Alagoas - ADEAL Y el MAPA en el estado de Alagoas. Los signos clínicos observados en los animales afectados fueron, apatía, disnea estertorosa, ganglios linfáticos infartados (aumento), expectoración nasal mucopurulento bilateral en 3/16 (tres/dieciséis) de animales observados, 1/16 (uno/dieciséis) animal presentado Iaforma crónica evidenciada por edema en la extremidad posterior izquierda, con la presencia de lesiones ulceradas, linfagite difundido, la expectoración de secreción nasal serosanguinolenta bilateral (hemoptisis) y disnea severa. Por último, los signos clínicos y los hallazgos macroscópicos observados en los animales infectados naturalmente por Burkholderia mallei en el Estado de Alagoas corroborar con las descritas previamente en la literatura sobre veterinaria y para los cuales no hay control y la propagación de la enfermedad, los animales positivos deben ser sacrificados y el enfoque debe ser interditadas propiedades.(AU)

Assessment of the effectiveness of the PPD-mallein produced in Brazil for diagnosing glanders in mules

To assess the potency of the PPD-mallein produced in Brazil, five animals were from a property identified as a focus of glanders. These animals had suggestive clinical signs of the disease and the other five, from a property free from glanders, showed no clinical signs and were serology negative (control group). PPD-mallein from Burkholderia mallei was obtained by precipitation with trichlo-roa-cetic acid and ammonium sulfate. The animals were inoculated according to the criteria established by Department of Agriculture, Livestock and Supply (MAPA) for the diagnosis of glanders. After 48 h of application of PPD-mallein, there was swelling in the area of application, presence of ocular secretion and tears in sick animals. The control group showed no inflammatory reaction at the site of inoculation of PPD-mallein. This immunogen produced in Brazil and still being tested was effective for identifying the infection in true positive animals and excluding the truly negative ones, being a new possibility for diagnosis and control of glanders.(AU)

Prevalência de mormo no estado de Pernambuco no período de 2006 a 2011 / Glanders prevalence in the State of Pernambuco, Brazil, from 2006 to 2011

O mormo é uma doença infecto-contagiosa de caráter agudo ou crônico, causada pela bactéria Burkholderia mallei. Acomete diversos mamíferos, principalmente, os equídeos, sendo maior a casuística em asininos e muares. Sendo uma zoonose de relevância econômica, foi realizado estudo epidemiológico dos focos de mormo em Pernambuco no período de 2006 a 2011, com o objetivo de verificar a distribuição espacial, temporal e a duração do saneamento das propriedades afetadas. A população objeto das investigações epidemiológicas foi constituída de 94,36% de equinos, 3,78% de muares e 1,86% de asininos, distribuída em todo o Estado.Verificou-se geograficamente que a mesorregião da Zona da Mata de Pernambuco, no período estudado, foi a que apresentou maior número de focos seguida das mesorregiões do Agreste e Sertão. A distribuição temporal revelou que não há um comportamento regular na detecção de focos, sendo isso atribuído à dependência da detecção dos casos de animais em trânsito. Quanto á duração, cerca de 90% dos focos foram saneados em até 180 dias. Deste modo, verificou-se que os focos investigados foram, em sua maioria, na criação de equino, por esta ser a espécie mais transportada, exigindo-se o exame negativo para o mormo, causando impacto econômico nas criações de cavalos.

Glanders is an infectious disease of acute or chronic nature, caused by the bacterium Burkholderia mallei. It affects many mammals, especially the horses, and casuistry is higher in asses and mules. As a zoonosis of economic importance, it was conducted an epidemiological study of outbreaks of glanders in Pernambuco in the period of 2006-2011, with the objective of verifying the spatial distribution, temporal and sanitation duration of the affected properties. The object of epidemiological research population consisted of 94.36% of horses, 3.78% of mules and 1.86% of donkeys, distributed throughout the state. In the period studied, it was found that the “Zona da Mata” of Pernambuco showed the largest number of outbreaks, followed by others regions. The temporal distribution showed that there is a regular behavior in outbreaks. This can be attributed to the dependence of the detection of cases of animals in transit. As for the duration, about 90% of outbreaks were resolved in 180 days. Thus, it was found that the outbreaks were seen mostly in horses breeding, because this is the specie most transported, requiring a negative test for glanders, and causing economic impact on breedings.

Comparação da Prevalência do Mormo entre as Zonas da Mata, Agreste e Sertão de Pernambuco, de 2005 à 2011 / Glanders Prevalence comparision between Zona da Mata, Agreste and Sertão from Pernambuco, Brazil, from 2005 to 2011

O mormo acomete os equídeos, outros mamíferos e ocasionalmente o homem. Este estudo descreve os resultados dos testes diagnósticos realizados para trânsito de equídeos no período de 2005 à 2011. Os testes foram realizados na Zona da Mata, Agreste e Sertão de Pernambuco. Todos os positivos no exame da fixação de complemento (FC) sem sintomatologia clínica eram confirmados pela prova da maleína. Foi utilizada a base de dados da Superintendência Federal de Agricultura no Estado de Pernambuco (SFA-PE), alimentada por meio de relatórios mensais elaborados por dois laboratórios credenciados para realização do diagnóstico do mormo. Foi feita análise descritiva da série histórica 2005 à 2011 dos casos de mormo e calculada a prevalência. A prevalência foi estratificada pelas regiões de Pernambuco. Foi feito o teste qui-quadrado para testar a associação entre a prevalência do mormo (variável direta) e diagnóstico de AIE nas regiões do Estado (variáveis independentes).Verificou-se 68 animais positivos, com uma média de 9,71 casos por ano. Conclui-se que: 1.há maior prevalência de mormo na Zona da mata (p<0,05); 2.há associação entre a ocorrência de Mormo e AIE (p<0,05); 3. o número de testes realizados para diagnóstico do mormo e AIE apresenta sazonalidade causada pela distribuição dos eventos hípicos.

Glanders affects equines, other mammals and occasionally man. This study describes the results of diagnostic tests for equine traffic from 2005 to 2011. The tests were conducted in the Zona da Mata, Agreste and Sertão of Pernambuco. All animals positive in the complement fixation test (FC) without clinical symptoms were confirmed by the evidence of mallein. It was used database of the Federal Agriculture in the State of Pernambuco (SFA-PE), fed through monthly reports from two laboratories accredited to perform the diagnosis of glanders. Descriptive analysis and calculated prevalence were accomplished on the time series in 2005 to 2011 cases of glanders. Prevalence was stratified by region of Pernambuco. The chi-square test was done to test the association between the prevalence of glanders (direct variable) and diagnosis of AIE in the regions of the state (independent variables). There were 68 positive animals, with an average of 9.71 cases per year. It is concluded that: 1. There is a higher prevalence of glanders in the Zona da Mata (p <0.05); 2. There is an association between the occurrence of glanders and AIE (p <0.05); 3. The number of tests for diagnosis of glanders and AIE presents seasonality caused by the distribution of equestrian events.

Comparação da Prevalência do Mormo entre as Zonas da Mata, Agreste e Sertão de Pernambuco, de 2005 à 2011 / Glanders Prevalence comparision between Zona da Mata, Agreste and Sertão from Pernambuco, Brazil, from 2005 to 2011

O mormo acomete os equídeos, outros mamíferos e ocasionalmente o homem. Este estudo descreve os resultados dos testes diagnósticos realizados para trânsito de equídeos no período de 2005 à 2011. Os testes foram realizados na Zona da Mata, Agreste e Sertão de Pernambuco. Todos os positivos no exame da fixação de complemento (FC) sem sintomatologia clínica eram confirmados pela prova da maleína. Foi utilizada a base de dados da Superintendência Federal de Agricultura no Estado de Pernambuco (SFA-PE), alimentada por meio de relatórios mensais elaborados por dois laboratórios credenciados para realização do diagnóstico do mormo. Foi feita análise descritiva da série histórica 2005 à 2011 dos casos de mormo e calculada a prevalência. A prevalência foi estratificada pelas regiões de Pernambuco. Foi feito o teste qui-quadrado para testar a associação entre a prevalência do mormo (variável direta) e diagnóstico de AIE nas regiões do Estado (variáveis independentes).Verificou-se 68 animais positivos, com uma média de 9,71 casos por ano. Conclui-se que: 1.há maior prevalência de mormo na Zona da mata (p<0,05); 2.há associação entre a ocorrência de Mormo e AIE (p<0,05); 3. o número de testes realizados para diagnóstico do mormo e AIE apresenta sazonalidade causada pela distribuição dos eventos hípicos.(AU)

Glanders affects equines, other mammals and occasionally man. This study describes the results of diagnostic tests for equine traffic from 2005 to 2011. The tests were conducted in the Zona da Mata, Agreste and Sertão of Pernambuco. All animals positive in the complement fixation test (FC) without clinical symptoms were confirmed by the evidence of mallein. It was used database of the Federal Agriculture in the State of Pernambuco (SFA-PE), fed through monthly reports from two laboratories accredited to perform the diagnosis of glanders. Descriptive analysis and calculated prevalence were accomplished on the time series in 2005 to 2011 cases of glanders. Prevalence was stratified by region of Pernambuco. The chi-square test was done to test the association between the prevalence of glanders (direct variable) and diagnosis of AIE in the regions of the state (independent variables). There were 68 positive animals, with an average of 9.71 cases per year. It is concluded that: 1. There is a higher prevalence of glanders in the Zona da Mata (p <0.05); 2. There is an association between the occurrence of glanders and AIE (p <0.05); 3. The number of tests for diagnosis of glanders and AIE presents seasonality caused by the distribution of equestrian events.(AU)

Prevalência de mormo no estado de Pernambuco no período de 2006 a 2011 / Glanders prevalence in the State of Pernambuco, Brazil, from 2006 to 2011

O mormo é uma doença infecto-contagiosa de caráter agudo ou crônico, causada pela bactéria Burkholderia mallei. Acomete diversos mamíferos, principalmente, os equídeos, sendo maior a casuística em asininos e muares. Sendo uma zoonose de relevância econômica, foi realizado estudo epidemiológico dos focos de mormo em Pernambuco no período de 2006 a 2011, com o objetivo de verificar a distribuição espacial, temporal e a duração do saneamento das propriedades afetadas. A população objeto das investigações epidemiológicas foi constituída de 94,36% de equinos, 3,78% de muares e 1,86% de asininos, distribuída em todo o Estado.Verificou-se geograficamente que a mesorregião da Zona da Mata de Pernambuco, no período estudado, foi a que apresentou maior número de focos seguida das mesorregiões do Agreste e Sertão. A distribuição temporal revelou que não há um comportamento regular na detecção de focos, sendo isso atribuído à dependência da detecção dos casos de animais em trânsito. Quanto á duração, cerca de 90% dos focos foram saneados em até 180 dias. Deste modo, verificou-se que os focos investigados foram, em sua maioria, na criação de equino, por esta ser a espécie mais transportada, exigindo-se o exame negativo para o mormo, causando impacto econômico nas criações de cavalos.(AU)

Glanders is an infectious disease of acute or chronic nature, caused by the bacterium Burkholderia mallei. It affects many mammals, especially the horses, and casuistry is higher in asses and mules. As a zoonosis of economic importance, it was conducted an epidemiological study of outbreaks of glanders in Pernambuco in the period of 2006-2011, with the objective of verifying the spatial distribution, temporal and sanitation duration of the affected properties. The object of epidemiological research population consisted of 94.36% of horses, 3.78% of mules and 1.86% of donkeys, distributed throughout the state. In the period studied, it was found that the “Zona da Mata” of Pernambuco showed the largest number of outbreaks, followed by others regions. The temporal distribution showed that there is a regular behavior in outbreaks. This can be attributed to the dependence of the detection of cases of animals in transit. As for the duration, about 90% of outbreaks were resolved in 180 days. Thus, it was found that the outbreaks were seen mostly in horses breeding, because this is the specie most transported, requiring a negative test for glanders, and causing economic impact on breedings.(AU)