Granulomatous lymphadenitis in a dog caused by Mycobacterium intracellulare

Background: Mycobacteriosis is caused by bacteria belonging to the genus Mycobacterium, with considerable zoonoticpotential and risk to public health. Infection in dogs is rare and is usually associated with immunosuppression, resultingfrom eating meat or contact with contaminated soil or fomites. Dogs are also known as potential sources for the spread ofatypical tuberculosis in humans and other animals. This paper aims to describe the clinical, cytological, histopathological,and molecular findings of a male canine seen at University Veterinary Hospital of Cuiabá, Mato Grosso, with generalizedlymphadenomegaly associated Mycobacterium intracellulare infection.Case: A 2-year-old male Lhasa Apso dog was referred to the University Veterinary Hospital in Cuiabá city, located in theMidwest region of Brazil. The patient had a history of intermittent claudication of the left pelvic limb for approximately6 months and lymphadenomegaly with progression for approximately 2 months. The dog had wheezing and generalizedlymphadenopathy (submandibular, axillary, and popliteal lymph nodes); cryptorchidism was also observed. A completeblood count revealed nonspecific results, and in the serum biochemical profile, the values of urea, creatinine, albumin, andalanine aminotransferase were within the reference range. No changes were observed on the radiography of the femurotibiopatellar joints. Considering the generalised lymphadenopathy, fine needle aspiration cytology and histopathologicalexamination through biopsy of the lymph nodes was performed. On the cytology and histopathology, numerous negativeimages of moderately refringent bacillary structures distending the cytoplasm from the macrophages was found. Thesamples were also subjected to special Ziehl-Neelsen staining, which confirmed an accentuated and diffuse granulomatouslymphadenitis associated with alcohol...

Granulomatous lymphadenitis in a dog caused by Mycobacterium intracellulare

Background: Mycobacteriosis is caused by bacteria belonging to the genus Mycobacterium, with considerable zoonoticpotential and risk to public health. Infection in dogs is rare and is usually associated with immunosuppression, resultingfrom eating meat or contact with contaminated soil or fomites. Dogs are also known as potential sources for the spread ofatypical tuberculosis in humans and other animals. This paper aims to describe the clinical, cytological, histopathological,and molecular findings of a male canine seen at University Veterinary Hospital of Cuiabá, Mato Grosso, with generalizedlymphadenomegaly associated Mycobacterium intracellulare infection.Case: A 2-year-old male Lhasa Apso dog was referred to the University Veterinary Hospital in Cuiabá city, located in theMidwest region of Brazil. The patient had a history of intermittent claudication of the left pelvic limb for approximately6 months and lymphadenomegaly with progression for approximately 2 months. The dog had wheezing and generalizedlymphadenopathy (submandibular, axillary, and popliteal lymph nodes); cryptorchidism was also observed. A completeblood count revealed nonspecific results, and in the serum biochemical profile, the values of urea, creatinine, albumin, andalanine aminotransferase were within the reference range. No changes were observed on the radiography of the femurotibiopatellar joints. Considering the generalised lymphadenopathy, fine needle aspiration cytology and histopathologicalexamination through biopsy of the lymph nodes was performed. On the cytology and histopathology, numerous negativeimages of moderately refringent bacillary structures distending the cytoplasm from the macrophages was found. Thesamples were also subjected to special Ziehl-Neelsen staining, which confirmed an accentuated and diffuse granulomatouslymphadenitis associated with alcohol...(AU)

Mycobacteria in Minas cheese commercialized in open fairs in São Paulo, Brazil / Mycobacteria em queijos tipo Minas comercializados em feiras-livres de São Paulo, Brasil

Mycobacterium bovis is the causative agent of bovine tuberculosis, a disease that affects dairy herds throughout the Brazilian territory, constituting a neglected zoonosis transmitted by raw milk and its derivatives. In this study, we evaluated the presence of M. bovis and other mycobacteria in Minas cheese obtained from open fairs in the city of São Paulo between 2012 and 2013. Samples (n = 133) were decontaminated using hexa-cetylpyridinium chloride and seeded on StonebrinkLeslie medium. The isolates were submitted to molecular identification by TB Multiplex PCR targeting the 16S rRNA gene and amplicon nucleotide sequencing. From 16 cheese samples (12%), we obtained 26 putative colonies of Mycobacterium spp., none of which belonged to any of the Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium, or Mycobacterium intracellulare complexes. Phylogenetic analysis showed that sample sequences were grouped in a clade that includes only non-tuberculous mycobacteria with proximity to sequences obtained from Mycobacterium novocastrense (3 sequences), Mycobacterium holsaticum (1 sequence), andMycobacterium elephantis (2 sequences). Although no epidemiological evidence was found regarding the importance of oral transmission of mycobacteria in healthy people, their importance in the immunosuppressed population remains uncertain.

Mycobacterium bovis é o agente da tuberculose bovina, doença que acomete o rebanho em todo território brasileiro e é uma negligenciada zoonose transmitida pelo leite e seus derivados. Este trabalho avaliou a presença de M. bovis e outras micobactérias, em queijo minas meia-cura, obtidos em feiras-livres na cidade de São Paulo, entre os anos de 2012 e 2013. As amostras (n = 133) foram descontaminadas pelo método HPC (hexa-cetyl-pyridinium chloride) e semeadas em meio Stonebrink Leslie. Os isolados foram submetidos à identificação molecular por PCR TB multiplex, pesquisando-se o gene 16S rRNA, e ao sequenciamento nucleotídico. Dezesseis amostras (12%) possuiam 26 colônias sugestivas de Mycobacterium spp., mas nenhuma delas pertencia aos complexos Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium e Mycobacterium intracellulare. A análise filogenética mostrou que todas as amostras estavam agrupadas em clados que incluem apenas micobactérias não tuberculosas (MNT), sendo que algumas possuiam proximidade com sequências obtidas de Mycobacterium novocastrense (3 sequências), Mycobacterium hosaticum (1 sequência) e Mycobacterium elephantis (2 sequências). Embora no momento não haja evidência epidemiológica da importância da transmissão oral das micobactérias pra indivíduos saudáveis, sua importância na população imunossuprimida ainda é incerta.

Mycobacteria in Minas cheese commercialized in open fairs in São Paulo, Brazil / Mycobacteria em queijos tipo Minas comercializados em feiras-livres de São Paulo, Brasil

Mycobacterium bovis is the causative agent of bovine tuberculosis, a disease that affects dairy herds throughout the Brazilian territory, constituting a neglected zoonosis transmitted by raw milk and its derivatives. In this study, we evaluated the presence of M. bovis and other mycobacteria in Minas cheese obtained from open fairs in the city of São Paulo between 2012 and 2013. Samples (n = 133) were decontaminated using hexa-cetylpyridinium chloride and seeded on StonebrinkLeslie medium. The isolates were submitted to molecular identification by TB Multiplex PCR targeting the 16S rRNA gene and amplicon nucleotide sequencing. From 16 cheese samples (12%), we obtained 26 putative colonies of Mycobacterium spp., none of which belonged to any of the Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium, or Mycobacterium intracellulare complexes. Phylogenetic analysis showed that sample sequences were grouped in a clade that includes only non-tuberculous mycobacteria with proximity to sequences obtained from Mycobacterium novocastrense (3 sequences), Mycobacterium holsaticum (1 sequence), andMycobacterium elephantis (2 sequences). Although no epidemiological evidence was found regarding the importance of oral transmission of mycobacteria in healthy people, their importance in the immunosuppressed population remains uncertain.

Mycobacterium bovis é o agente da tuberculose bovina, doença que acomete o rebanho em todo território brasileiro e é uma negligenciada zoonose transmitida pelo leite e seus derivados. Este trabalho avaliou a presença de M. bovis e outras micobactérias, em queijo minas meia-cura, obtidos em feiras-livres na cidade de São Paulo, entre os anos de 2012 e 2013. As amostras (n = 133) foram descontaminadas pelo método HPC (hexa-cetyl-pyridinium chloride) e semeadas em meio Stonebrink Leslie. Os isolados foram submetidos à identificação molecular por PCR TB multiplex, pesquisando-se o gene 16S rRNA, e ao sequenciamento nucleotídico. Dezesseis amostras (12%) possuiam 26 colônias sugestivas de Mycobacterium spp., mas nenhuma delas pertencia aos complexos Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium e Mycobacterium intracellulare. A análise filogenética mostrou que todas as amostras estavam agrupadas em clados que incluem apenas micobactérias não tuberculosas (MNT), sendo que algumas possuiam proximidade com sequências obtidas de Mycobacterium novocastrense (3 sequências), Mycobacterium hosaticum (1 sequência) e Mycobacterium elephantis (2 sequências). Embora no momento não haja evidência epidemiológica da importância da transmissão oral das micobactérias pra indivíduos saudáveis, sua importância na população imunossuprimida ainda é incerta.

Mycobacteria in Minas cheese commercialized in open fairs in São Paulo, Brazil / Mycobacteria em queijos tipo Minas comercializados em feiras-livres de São Paulo, Brasil

Mycobacterium bovis is the causative agent of bovine tuberculosis, a disease that affects dairy herds throughout the Brazilian territory, constituting a neglected zoonosis transmitted by raw milk and its derivatives. In this study, we evaluated the presence of M. bovis and other mycobacteria in Minas cheese obtained from open fairs in the city of São Paulo between 2012 and 2013. Samples (n = 133) were decontaminated using hexa-cetylpyridinium chloride and seeded on Stonebrink­Leslie medium. The isolates were submitted to molecular identification by TB Multiplex PCR targeting the 16S rRNA gene and amplicon nucleotide sequencing. From 16 cheese samples (12%), we obtained 26 putative colonies of Mycobacterium spp, none of which belonged to any of the Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium, or Mycobacterium intracellulare complexes. Phylogenetic analysis showed that sample sequences were grouped in a clade that includes only non-tuberculous mycobacteria with proximity to sequences obtained from Mycobacterium novocastrense (3 sequences), Mycobacterium holsaticum (1 sequence), and Mycobacterium elephantis (2 sequences). Although no epidemiological evidence was found regarding the importance of oral transmission of mycobacteria in healthy people, their importance in the immunosuppressed population remains uncertain.(AU)

Mycobacterium bovis é o agente da tuberculose bovina, doença que acomete o rebanho em todo território brasileiro e é uma negligenciada zoonose transmitida pelo leite e seus derivados. Este trabalho avaliou a presença de M. bovise outras micobactérias, em queijo minas meia-cura, obtidos em feiras-livres na cidade de São Paulo, entre os anos de 2012 e 2013. As amostras (n = 133) foram descontaminadas pelo método HPC (hexa-cetyl-pyridinium chloride) e semeadas em meio Stonebrink Leslie. Os isolados foram submetidos à identificação molecular por PCR TB multiplex, pesquisando-se o gene 16S rRNA, e ao sequenciamento nucleotídico. Dezesseis amostras (12%) possuiam 26 colônias sugestivas de Mycobacterium spp, mas nenhuma delas pertencia aos complexos Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium e Mycobacterium intracellulare. A análise filogenética mostrou que todas as amostras estavam agrupadas em clados que incluem apenas micobactérias não tuberculosas (MNT), sendo que algumas possuiam proximidade com sequências obtidas de Mycobacterium novocastrense (3 sequências), Mycobacterium hosaticum(1 sequência) e Mycobacterium elephantis (2 sequências). Embora no momento não haja evidência epidemiológica da importância da transmissão oral das micobactérias pra indivíduos saudáveis, sua importância na população imunossuprimida ainda é incerta.(AU)

Mycobacteria in Minas cheese commercialized in open fairs in São Paulo, Brazil / Mycobacteria em queijos tipo Minas comercializados em feiras-livres de São Paulo, Brasil

Mycobacterium bovis is the causative agent of bovine tuberculosis, a disease that affects dairy herds throughout the Brazilian territory, constituting a neglected zoonosis transmitted by raw milk and its derivatives. In this study, we evaluated the presence of M. bovis and other mycobacteria in Minas cheese obtained from open fairs in the city of São Paulo between 2012 and 2013. Samples (n = 133) were decontaminated using hexa-cetylpyridinium chloride and seeded on StonebrinkLeslie medium. The isolates were submitted to molecular identification by TB Multiplex PCR targeting the 16S rRNA gene and amplicon nucleotide sequencing. From 16 cheese samples (12%), we obtained 26 putative colonies of Mycobacterium spp., none of which belonged to any of the Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium, or Mycobacterium intracellulare complexes. Phylogenetic analysis showed that sample sequences were grouped in a clade that includes only non-tuberculous mycobacteria with proximity to sequences obtained from Mycobacterium novocastrense (3 sequences), Mycobacterium holsaticum (1 sequence), andMycobacterium elephantis (2 sequences). Although no epidemiological evidence was found regarding the importance of oral transmission of mycobacteria in healthy people, their importance in the immunosuppressed population remains uncertain.(AU)

Mycobacterium bovis é o agente da tuberculose bovina, doença que acomete o rebanho em todo território brasileiro e é uma negligenciada zoonose transmitida pelo leite e seus derivados. Este trabalho avaliou a presença de M. bovis e outras micobactérias, em queijo minas meia-cura, obtidos em feiras-livres na cidade de São Paulo, entre os anos de 2012 e 2013. As amostras (n = 133) foram descontaminadas pelo método HPC (hexa-cetyl-pyridinium chloride) e semeadas em meio Stonebrink Leslie. Os isolados foram submetidos à identificação molecular por PCR TB multiplex, pesquisando-se o gene 16S rRNA, e ao sequenciamento nucleotídico. Dezesseis amostras (12%) possuiam 26 colônias sugestivas de Mycobacterium spp., mas nenhuma delas pertencia aos complexos Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium e Mycobacterium intracellulare. A análise filogenética mostrou que todas as amostras estavam agrupadas em clados que incluem apenas micobactérias não tuberculosas (MNT), sendo que algumas possuiam proximidade com sequências obtidas de Mycobacterium novocastrense (3 sequências), Mycobacterium hosaticum (1 sequência) e Mycobacterium elephantis (2 sequências). Embora no momento não haja evidência epidemiológica da importância da transmissão oral das micobactérias pra indivíduos saudáveis, sua importância na população imunossuprimida ainda é incerta.(AU)

Nasal swab real-time PCR is not suitable for in vivo diagnosis of bovine tuberculosis / A PCR em tempo real de swab nasal não é adequada para o diagnóstico in vivo de tuberculose bovina

Bovine tuberculosis (bTB) is a zoonosis causing economic losses and public health risks in many countries. The disease diagnosis in live animals is performed by intradermal tuberculin test, which is based on delayed hypersensitivity reactions. As tuberculosis has complex immune response, this test has limitations in sensitivity and specificity. This study sought to test an alternative approach for in vivo diagnosis of bovine tuberculosis, based on real-time polymerase chain reaction (PCR). DNA samples, extracted from nasal swabs of live cows, were used for SYBR® Green real-time PCR, which is able to differentiate between Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium avium complexes. Statistical analysis was performed to compare the results of tuberculin test, the in vivo gold standard bTB diagnosis method, with real-time PCR, thereby determining the specificity and sensitivity of molecular method. Cervical comparative test (CCT) was performed in 238 animals, of which 193 had suitable DNA from nasal swabs for molecular analysis, as indicated by amplification of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) gene, and were included in the study. In total, 25 (10.5%) of the animals were CCT reactive, of which none was positive in the molecular test. Of the 168 CCT negative animals, four were positive for M. tuberculosis complex at real time PCR from nasal swabs. The comparison of these results generated values of sensitivity and specificity of 0% and 97.6%, respectively; moreover, low coefficients of agreement and correlation (-0.029 and -0.049, respectively) between the results obtained with both tests were also observed. This study showed that real-time PCR from nasal swabs is not suitable for in vivo diagnosis of bovine tuberculosis; thus tuberculin skin test is still the best option for this purpose.(AU)

A tuberculose bovina (bTB) é uma zoonose que causa perdas econômicas e riscos à saúde pública em muitos países. O diagnóstico da doença em animais vivos é realizado pelo teste intradérmico da tuberculina, que é baseado em reações de hipersensibilidade tardia. Como a tuberculose tem resposta imunológica complexa, este teste tem limitações em termos de sensibilidade e especificidade. Este estudo procurou desenvolver uma abordagem alternativa para o diagnóstico in vivo da tuberculose bovina, com base na reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real. As amostras de DNA, extraídas de suabes nasais de vacas vivas, foram usadas para PCR em tempo real com SYBR® Green, capaz de diferenciar os complexos Mycobacterium tuberculosis e Mycobacterium avium. A análise estatística foi realizada para comparar os resultados de teste de tuberculina, padrão ouro para o diagnóstico in vivo da bTB, com PCR em tempo real, determinando-se assim a especificidade e sensibilidade do método molecular. O teste cervical comparativo (TCC) foi realizado em 238 animais, dos quais 193 tiveram DNA dos suabes nasais adequados para análise molecular, como indicado pela amplificação do gene gliceraldeído-3-fosfato-desidrogenase (GAPDH), e foram incluídos no estudo. No total, 25 (10,5%) animais foram reativos no TCC, dos quais nenhum foi positivo no teste molecular. Dos 168 animais negativos no TCC, quatro foram positivos para o complexo M. tuberculosis na PCR em tempo real a partir dos suabes nasais. A comparação destes resultados gerou valores de sensibilidade e especificidade de 0% e 97,6%, respectivamente; além disso, baixos coeficientes de concordância e correlação (-0,029 e -0,049, respectivamente) entre os resultados obtidos com ambos os testes também foram observados. Este estudo mostrou que a PCR em tempo real a partir de suabes nasais não é adequada para o diagnóstico in vivo da tuberculose bovina; portanto, o teste da tuberculina ainda é a melhor opção para este fim.(AU)

Nasal swab real-time PCR is not suitable for in vivo diagnosis of bovine tuberculosis / A PCR em tempo real de swab nasal não é adequada para o diagnóstico in vivo de tuberculose bovina

Bovine tuberculosis (bTB) is a zoonosis causing economic losses and public health risks in many countries. The disease diagnosis in live animals is performed by intradermal tuberculin test, which is based on delayed hypersensitivity reactions. As tuberculosis has complex immune response, this test has limitations in sensitivity and specificity. This study sought to test an alternative approach for in vivo diagnosis of bovine tuberculosis, based on real-time polymerase chain reaction (PCR). DNA samples, extracted from nasal swabs of live cows, were used for SYBR® Green real-time PCR, which is able to differentiate between Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium avium complexes. Statistical analysis was performed to compare the results of tuberculin test, the in vivo gold standard bTB diagnosis method, with real-time PCR, thereby determining the specificity and sensitivity of molecular method. Cervical comparative test (CCT) was performed in 238 animals, of which 193 had suitable DNA from nasal swabs for molecular analysis, as indicated by amplification of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) gene, and were included in the study. In total, 25 (10.5%) of the animals were CCT reactive, of which none was positive in the molecular test. Of the 168 CCT negative animals, four were positive for M. tuberculosis complex at real time PCR from nasal swabs. The comparison of these results generated values of sensitivity and specificity of 0% and 97.6%, respectively; moreover, low coefficients of agreement and correlation (-0.029 and -0.049, respectively) between the results obtained with both tests were also observed. This study showed that real-time PCR from nasal swabs is not suitable for in vivo diagnosis of bovine tuberculosis; thus tuberculin skin test is still the best option for this purpose.(AU)

A tuberculose bovina (bTB) é uma zoonose que causa perdas econômicas e riscos à saúde pública em muitos países. O diagnóstico da doença em animais vivos é realizado pelo teste intradérmico da tuberculina, que é baseado em reações de hipersensibilidade tardia. Como a tuberculose tem resposta imunológica complexa, este teste tem limitações em termos de sensibilidade e especificidade. Este estudo procurou desenvolver uma abordagem alternativa para o diagnóstico in vivo da tuberculose bovina, com base na reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real. As amostras de DNA, extraídas de suabes nasais de vacas vivas, foram usadas para PCR em tempo real com SYBR® Green, capaz de diferenciar os complexos Mycobacterium tuberculosis e Mycobacterium avium. A análise estatística foi realizada para comparar os resultados de teste de tuberculina, padrão ouro para o diagnóstico in vivo da bTB, com PCR em tempo real, determinando-se assim a especificidade e sensibilidade do método molecular. O teste cervical comparativo (TCC) foi realizado em 238 animais, dos quais 193 tiveram DNA dos suabes nasais adequados para análise molecular, como indicado pela amplificação do gene gliceraldeído-3-fosfato-desidrogenase (GAPDH), e foram incluídos no estudo. No total, 25 (10,5%) animais foram reativos no TCC, dos quais nenhum foi positivo no teste molecular. Dos 168 animais negativos no TCC, quatro foram positivos para o complexo M. tuberculosis na PCR em tempo real a partir dos suabes nasais. A comparação destes resultados gerou valores de sensibilidade e especificidade de 0% e 97,6%, respectivamente; além disso, baixos coeficientes de concordância e correlação (-0,029 e -0,049, respectivamente) entre os resultados obtidos com ambos os testes também foram observados. Este estudo mostrou que a PCR em tempo real a partir de suabes nasais não é adequada para o diagnóstico in vivo da tuberculose bovina; portanto, o teste da tuberculina ainda é a melhor opção para este fim.(AU)

OCORRÊNCIA E DETECÇÃO MOLECULAR DE ESPÉCIES DE MYCOBACTERIUM, E DOS GENES DE VIRULÊNCIA VAPA, VAPB E VAPN EM LINHAGENS DE RHODOCOCCUS EQUI, ISOLADAS DE LINFONODOS DE TAIASSUÍDEOS DE CATIVEIRO

Foram investigadas, neste estudo, proteínas associadas à virulência (genes vapA, vapB e vapN) das espécies de Rhodococcus equi e Micobactérias isoladas de 330 linfonodos de catetos (Tayassu tajacu) e queixadas (Tayassu pecari) destinados ao consumo humano. Trinta e seis (10,9%) linhagens de R. equi foram isoladas, 3,3% (11/330) dos linfonodos de queixadas e 7,6% (25/330) dos catetos. Entre os 11 isolados de R. equi das queixadas, 90,9% (n=10/11) foram obtidos de linfonodos mesentéricos e apenas 9,1% (n=1/10) de linfonodo mediastínico. Nos 25 isolados de R. equi dos catetos, 40,0% (10/25) foram obtidos de linfonodos mesentéricos, 36,0% (9/25) de submandibulares e 24,0% (6/25) de mediastínicos. Não foram identificados genes vapA, vapB e vapN entre os isolados de R. equi. Foi isolado Mycobacterium sp. de 3,03% (10/330) do total de linfonodos. Entre os 10 isolados de micobactérias, 60% (n=6/10) dos linfonodos eram de queixadas e 40% (4/10) de catetos. Dez espécies de Mycobacterium foram detectadas por PCR-PRA, com predominância de M. avium tipo 1. O sequenciamento dos genes hsp65 e rpob revelaram micobactérias saprófitas (M. sinense, M. kumamotonense) e potencialmente patogênicas (M. colombiense, M. intracellulare) para humanos e animais. Esta é a primeira descrição de R. equi e / ou espécies de micobactérias identificadas nos linfonodos de espécimes de Tayassuideos. Apesar da ausência de genes Vap, a identificação de R. equi, bem como de micobactérias não tuberculosas e saprófitas, destacam o risco de transmissão desses patógenos das espécies de Tayassuideos para humanos por meio de carne ou produtos à base de carne contaminados com conteúdo de linfonodos, uma vez que R. equi sem plasmídeo de virulência e as espécies de micbactérias descritas aqui já foram relatadas como causas de infecções pulmonares e extrapulmonares em seres humanos imunocompetentes e imunocomprometidos.

Virulence-associated proteins (vapA, vapB and vapN genes) of Rhodococcus equi and Mycobacterium species isolated from 330 lymph nodes of collared peccaries (Tayassu tajacu) and white-lipped peccaries (Tayassu pecari) intended for human consumption were investigated. Thirty-six (10.9%) R. equi strains were isolated, 3.3% (11/330) from white-lipped peccary and 7.6% (25/330) of collared peccary lymph nodes. Among the 11 isolates of R. equi of the white-lipped peccaries, 90.9% (n = 10/11) were obtained from mesenteric lymph nodes and only 9.1% (n = 1/10) of the mediastinal lymph node. In the 25 isolates of R. equi obtained from collared peccaries, 40.0% (10/25) were recovered from mesenteric lymph nodes, 36% (9/25) from submandibular, and 24.0% (6/25) from mediastinal ones. No vapA, vapB, and vapN genes (plasmidless type) were identified among R. equi isolates. Mycobacterium sp. was isolated in 3.03% (10/330) of all lymph nodes analyzed. Among the 10 mycobacterial isolates, 60% (n = 6/10) were from white-lipped peccary, and 40% (4/10) from collared peccary lymph nodes. Ten Mycobacterium species were detected by PCR-PRA, with predominance of M. avium type 1. Sequencing of hsp65 and rpob genes revealed mycobacteria that were saprophytic (M. sinense, M. kumamotonense) and potentially pathogenic (M. colombiense, M. intracellulare) to humans and animals. To our knowledge, this is the first description of R. equi and/or mycobacteria species identified in the lymph nodes of Tayassuid specimens. Despite the absence of Vap genes, the identification of R. equi, as well as nontuberculous and saprophytic mycobacteria highlight the risk of transmission of these pathogens from Tayassuidae species to humans by means of meat or meat products contaminated with lymph node contents, since R. equi plasmidless type and mycobacterial species described here have been reported as causes of pulmonary and extrapulmonary infections both in immunocompetent and immunocompromised humans.

Mycobacterial isolation from Felis concolor in captivity / Isolamento de micobactérias em Felis concolor em cativeiro

This study was made in a wildlife preserve from Argentina where a previous tuberculosis report in Felis concolor has been done. The aim was to identify mycobacterial species isolated from the orpharynx of five American lions using bacteriological and molecular biology techniques on cases with nonspecific clinical signals. Samples were collected after sedation. They were treated in order to isolate Mycobacterium. Bacteriological differentiation was made using biochemical tests. Polymerase chain reaction has been performed to detect hsp65, IS6110 and IS1081. Acid fast bacilli were present infour specimens and from them were isolated slowly growing mycobacteria. The strains were differentiated as M. gordonae in two cases and M. simiae, M. scrofulaceum and M. avium/intracellulare in one case each other. The strains were identified as M. gordonae in three cases and M. avium III or M. simiae in two by PRA. The role of feral cats in the epidemiology of nontuberculous mycobacterial diseases remains to be further investigated.(AU)

Este trabalho foi realizado em uma reserva natural da Argentina com antecedentes de tuberculose em uma suçuarana adulta. O objetivo foi identificar por meio de técnicas bacteriológicas e de biologia molecular as espécies isoladas da orofaringe de cinco suçuaranas que apresentavam sinais clínicos inespecíficos. As amostras foram colhidas das suçuaranas após sedação. Posteriormente foram processadas para obtenção do isolamento e identificação por meio de provas bioquímicas do gênero Mycobacterium pela técnica de PCR. Investigou-se a presença das seqüências de inserção IS6110 e IS1081 e hsp65. Obtiveram-se resultados positivos à coloração de Ziehl-Neelsen de quatro amostras, isolando cinco cepas de crescimento lento. As cepas foram classificadas como M. gordonae em dois casos e M. simiae, Mscrofulaceum e M. avium/intracellulare em um. Por PRA, identificou-se o padrão de M. gordonae em três cepas e M. avium III ou M.simiae em dois.(AU)

Diagnóstico diferencial de cistos e linfadenite granulomatosa em linfonodos suínos

As infecções por Mycobacterium sp. têm grande importância na suinocultura devido às perdas econômicas decorrentes da alteração do destino de carcaças, tais como condenação total, aproveitamento condicional, ou mercado interno. As principais causadoras de linfadenite granulomatosa (LG), encontradas em matadouros frigoríficos, são as micobactérias pertencentes ao complexo Mycobacterium avium-intracellulare. Na inspeção post mortem não há como determinar a espécie de micobactéria envolvida na linfadenite granulomatosa. Por esse motivo, as carcaças e vísceras dos suínos com lesões granulomatosas em linfonodos seguem a destinação prevista para casos de tuberculose. Em 2009, verificou-se aumento nas condenações por LG em um frigorífico de suínos, sob inspeção federal, na região do Vale do Taquari, RS. Na tentativa de identificar as causas e, possivelmente, adequar os critérios para tais condenações, o presente estudo teve como objetivo determinar a prevalência de LG no período de 2008 a 2011, através da inspeção visual e através de exames histopatológicos e microbiológicos em 47 linfonodos das regiões mesentérica, traqueobrônquica e submandibular, amostrados na linha de abate que foram processados pelos métodos de rotina histológica e corados pela técnica de Ziehl-Neelsen. Em vinte e uma amostras, realizou-se, também, a técnica de PCR quantitativo para circovirus suíno tipo 2 (PCV2) e em 26 amostras exame bacteriológico de rotina. Em vinte (42,6%), dos 47 linfonodos analisados, a lesão foi classificada, visualmente, como cisto sendo 90% destes confirmados pela histologia. Entre os 27 linfonodos classificados como LG na inspeção visual, 19 (70,4%) foram confirmados na histologia. As principais diferenciações da lesão cística para LG, ao exame visual, incluíram a fácil remoção do conteúdo sob leve pressão e a ausência de granuloma ao corte. Na análise histopatológica, observaram-se áreas císticas com conteúdo proteináceo, algumas amostras com infiltrado linfocítico. PCV2 não foi detectado nas amostras testadas e identificou-se Corynebacterium (1/26), Staphylococcus coagulase negativa (4/26) e Staphylococcus hyicus (2/26). A adoção de novos critérios na diferenciação entre lesões tuberculoides e císticas, à inspeção post mortem de linfonodos mesentéricos, determinou a redução da prevalência das condenações por LG de 5,81% em 2009 para 1,47%, em 2011. Não foram detectados agentes infecciosos associados à lesão cística de linfonodos mesentéricos. No entanto, a etiologia dessas lesões císticas não foi determinada

Infection by Mycobacterium sp. has a great economic impact on the swine industry due to the economic looses associated with condemnation or altered destination of the carcass in slaughterhouse. The main causes of granulomatous lymphadenitis (GL) in pigs are bacterium belonging to the Mycobacterium avium-intracellularis group. Since visual differentiation among Mycobacterium species involved in GL is not possible, carcass and viscera from GL-affected pigs follow the same destination from that of tuberculosis. An increased number of condemnations due to GL in a swine slaughterhouse under federal inspection in the region of Taquari Valley were recorded. In an attempting to identify the causes and to adapt the inspection criteria for such condemnations, this study aimed to determine the prevalence of GL from 2008 to 2011 through visual inspection, histopathological and microbiological examinations in lymph nodes. Forty seven lymph nodes were collected and processed by the routine histological methods and stained by Ziehl-Neelsen. In 21 samples, quantitative PCR for PCV2 was performed. The other 26 samples were analyzed by standard bacteriology. From 47 lymph nodes analyzed, 20 (42.6 %) were classified as cysts by visual inspection, 90% of which were confirmed by histology. A total of 19 (70.4%) of the 27 lymph nodes visually classified as GL were confirmed by histology. The main visual differences between cysts and GL were the easy content removal under light pressure and absence of granuloma at the cut surface. At histopathological examination, cysts showed areas with proteinaceous contents, some of them with histiocytic infiltrate. PCV2 was not detected in the tested samples. Bacteriological analysis identified Corynebacterium (1/26), Staphylococcus coagulase negative (4/26) and Staphylococcus hyicus (2/26). Adoption of a new criteria for differentiating cystic from tuberculous lesions, at the post mortem inspection of mesenteric lymph nodes, decreased the prevalence of 5.81% recorded in 2009 to 1.47% in 2011, in the condemnation due to GL. It is suggested that most lesions previously classified as GL were truly cysts. No infectious agents were associated with such lesions. However, the etiology of these lymph nodal cystic lesions could not be determined

Estudo da transmissão horizontal de Mycobacterium avium-intracellulare em suínos

Experimental infections were performed to study the horizontal transmission of Mycobacterium avium-intracellulare (MAI) in swine. Twelve 35 to 42 day-old pigs were divided into three groups of four pigs each. Each group was housed in separate rooms, and inoculated with three MAI strains: VPS1, SC1 and ATCC-13950. After inoculation, four non-inoculated swines were added to each group and maintained in the same pen up to 150 days of age, when were slaughtered. Other four non-inoculated swines were maintained as a control group. The infection was diagnosed by the tuberculin test at 140 days of age, by detection of macroscopic lesions at slaughter and histopathologic and bacteriologic examination of tissues collected at necropsy. Culture of fecal samples were made during the experiment indicating active excretion of MAI between 14 and 42 days post-inoculation. Transmission of MAI among pigs kept in the same pen was observed with all the three strains used. The most evident transmission was with strain SC1, in which four "in contact" pigs were infected, followed by ATCC-13950 (two pigs) and VPS1 (one pig). These results indicate that infected swine can be an important source of infection, favoring the dissemination of this disease.

O trabalho teve como objetivo estudar a transmissão horizontal de Mycobacterium avium-intracellulare (MAI) entre suínos. Doze suínos com 35 a 42 dias de idade, divididos em três grupos de quatro e alojados em salas independentes, foram inoculados por via oral com as cepas VPS1, SC1 e ATCC-13950 de Mycobacterium avium-intracellulare. A seguir, quatro suínos não inoculados foram colocados em cada grupo e mantidos na mesma baia até o abate aos 150 dias da idade. Outro grupo de quatro suínos não inoculados foi utilizado como controle. Pelo exame de fezes verificou-se que houve excreção ativa de MAI entre 14 e 42 dias pós-inoculação. A transmissão da infecção foi avaliada pelo teste de tuberculina aos 140 dias de idade e pelos exames de patologia macro e microscópica e de isolamento do MAI de órgãos. Os quatro suínos em contato com aqueles inoculados com a cepa SC1 foram contaminados, enquanto que com a cepa VPS1 apenas um e com a ATCC-13950 somente dois. Concluiu-se que houve transmissão de MAI entre os suínos mantidos na mesma baia, com as três cepas utilizadas, mas foi mais evidente com a cepa SC1, indicando que o suíno pode ser importante fonte de infecção na disseminação da doença.

Estudo da transmissão horizontal de Mycobacterium avium-intracellulare em suínos

Experimental infections were performed to study the horizontal transmission of Mycobacterium avium-intracellulare (MAI) in swine. Twelve 35 to 42 day-old pigs were divided into three groups of four pigs each. Each group was housed in separate rooms, and inoculated with three MAI strains: VPS1, SC1 and ATCC-13950. After inoculation, four non-inoculated swines were added to each group and maintained in the same pen up to 150 days of age, when were slaughtered. Other four non-inoculated swines were maintained as a control group. The infection was diagnosed by the tuberculin test at 140 days of age, by detection of macroscopic lesions at slaughter and histopathologic and bacteriologic examination of tissues collected at necropsy. Culture of fecal samples were made during the experiment indicating active excretion of MAI between 14 and 42 days post-inoculation. Transmission of MAI among pigs kept in the same pen was observed with all the three strains used. The most evident transmission was with strain SC1, in which four "in contact" pigs were infected, followed by ATCC-13950 (two pigs) and VPS1 (one pig). These results indicate that infected swine can be an important source of infection, favoring the dissemination of this disease.

O trabalho teve como objetivo estudar a transmissão horizontal de Mycobacterium avium-intracellulare (MAI) entre suínos. Doze suínos com 35 a 42 dias de idade, divididos em três grupos de quatro e alojados em salas independentes, foram inoculados por via oral com as cepas VPS1, SC1 e ATCC-13950 de Mycobacterium avium-intracellulare. A seguir, quatro suínos não inoculados foram colocados em cada grupo e mantidos na mesma baia até o abate aos 150 dias da idade. Outro grupo de quatro suínos não inoculados foi utilizado como controle. Pelo exame de fezes verificou-se que houve excreção ativa de MAI entre 14 e 42 dias pós-inoculação. A transmissão da infecção foi avaliada pelo teste de tuberculina aos 140 dias de idade e pelos exames de patologia macro e microscópica e de isolamento do MAI de órgãos. Os quatro suínos em contato com aqueles inoculados com a cepa SC1 foram contaminados, enquanto que com a cepa VPS1 apenas um e com a ATCC-13950 somente dois. Concluiu-se que houve transmissão de MAI entre os suínos mantidos na mesma baia, com as três cepas utilizadas, mas foi mais evidente com a cepa SC1, indicando que o suíno pode ser importante fonte de infecção na disseminação da doença.

Mycobacteria in Minas cheese commercialized in open fairs in São Paulo, Brazil / Mycobacteria em queijos tipo Minas comercializados em feiras-livres de São Paulo, Brasil

Mycobacterium bovis is the causative agent of bovine tuberculosis, a disease that affects dairy herds throughout the Brazilian territory, constituting a neglected zoonosis transmitted by raw milk and its derivatives. In this study, we evaluated the presence of M. bovis and other mycobacteria in Minas cheese obtained from open fairs in the city of São Paulo between 2012 and 2013. Samples (n = 133) were decontaminated using hexa-cetylpyridinium chloride and seeded on StonebrinkLeslie medium. The isolates were submitted to molecular identification by TB Multiplex PCR targeting the 16S rRNA gene and amplicon nucleotide sequencing. From 16 cheese samples (12%), we obtained 26 putative colonies of Mycobacterium spp., none of which belonged to any of the Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium, or Mycobacterium intracellulare complexes. Phylogenetic analysis showed that sample sequences were grouped in a clade that includes only non-tuberculous mycobacteria with proximity to sequences obtained from Mycobacterium novocastrense (3 sequences), Mycobacterium holsaticum (1 sequence), andMycobacterium elephantis (2 sequences). Although no epidemiological evidence was found regarding the importance of oral transmission of mycobacteria in healthy people, their importance in the immunosuppressed population remains uncertain.

Mycobacterium bovis é o agente da tuberculose bovina, doença que acomete o rebanho em todo território brasileiro e é uma negligenciada zoonose transmitida pelo leite e seus derivados. Este trabalho avaliou a presença de M. bovis e outras micobactérias, em queijo minas meia-cura, obtidos em feiras-livres na cidade de São Paulo, entre os anos de 2012 e 2013. As amostras (n = 133) foram descontaminadas pelo método HPC (hexa-cetyl-pyridinium chloride) e semeadas em meio Stonebrink Leslie. Os isolados foram submetidos à identificação molecular por PCR TB multiplex, pesquisando-se o gene 16S rRNA, e ao sequenciamento nucleotídico. Dezesseis amostras (12%) possuiam 26 colônias sugestivas de Mycobacterium spp., mas nenhuma delas pertencia aos complexos Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium e Mycobacterium intracellulare. A análise filogenética mostrou que todas as amostras estavam agrupadas em clados que incluem apenas micobactérias não tuberculosas (MNT), sendo que algumas possuiam proximidade com sequências obtidas de Mycobacterium novocastrense (3 sequências), Mycobacterium hosaticum (1 sequência) e Mycobacterium elephantis (2 sequências). Embora no momento não haja evidência epidemiológica da importância da transmissão oral das micobactérias pra indivíduos saudáveis, sua importância na população imunossuprimida ainda é incerta.

Mycobacteria in Minas cheese commercialized in open fairs in São Paulo, Brazil / Mycobacteria em queijos tipo Minas comercializados em feiras-livres de São Paulo, Brasil

Mycobacterium bovis is the causative agent of bovine tuberculosis, a disease that affects dairy herds throughout the Brazilian territory, constituting a neglected zoonosis transmitted by raw milk and its derivatives. In this study, we evaluated the presence of M. bovis and other mycobacteria in Minas cheese obtained from open fairs in the city of São Paulo between 2012 and 2013. Samples (n = 133) were decontaminated using hexa-cetylpyridinium chloride and seeded on StonebrinkLeslie medium. The isolates were submitted to molecular identification by TB Multiplex PCR targeting the 16S rRNA gene and amplicon nucleotide sequencing. From 16 cheese samples (12%), we obtained 26 putative colonies of Mycobacterium spp., none of which belonged to any of the Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium, or Mycobacterium intracellulare complexes. Phylogenetic analysis showed that sample sequences were grouped in a clade that includes only non-tuberculous mycobacteria with proximity to sequences obtained from Mycobacterium novocastrense (3 sequences), Mycobacterium holsaticum (1 sequence), andMycobacterium elephantis (2 sequences). Although no epidemiological evidence was found regarding the importance of oral transmission of mycobacteria in healthy people, their importance in the immunosuppressed population remains uncertain.

Mycobacterium bovis é o agente da tuberculose bovina, doença que acomete o rebanho em todo território brasileiro e é uma negligenciada zoonose transmitida pelo leite e seus derivados. Este trabalho avaliou a presença de M. bovis e outras micobactérias, em queijo minas meia-cura, obtidos em feiras-livres na cidade de São Paulo, entre os anos de 2012 e 2013. As amostras (n = 133) foram descontaminadas pelo método HPC (hexa-cetyl-pyridinium chloride) e semeadas em meio Stonebrink Leslie. Os isolados foram submetidos à identificação molecular por PCR TB multiplex, pesquisando-se o gene 16S rRNA, e ao sequenciamento nucleotídico. Dezesseis amostras (12%) possuiam 26 colônias sugestivas de Mycobacterium spp., mas nenhuma delas pertencia aos complexos Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium e Mycobacterium intracellulare. A análise filogenética mostrou que todas as amostras estavam agrupadas em clados que incluem apenas micobactérias não tuberculosas (MNT), sendo que algumas possuiam proximidade com sequências obtidas de Mycobacterium novocastrense (3 sequências), Mycobacterium hosaticum (1 sequência) e Mycobacterium elephantis (2 sequências). Embora no momento não haja evidência epidemiológica da importância da transmissão oral das micobactérias pra indivíduos saudáveis, sua importância na população imunossuprimida ainda é incerta.