Aspectos epidemiológicos da infecção por Ehrlichia canis, Anaplasma platys e Mycoplasma spp. em gatos domésticos / Epidemiological aspects of infection by Ehrlichia canis, Anaplasma platys and Mycoplasma spp. in domestic cats

Hemoparasitoses vêm se tornando cada vez mais importantes na clínica médica de pequenos animais. Dentre os agentes causadores encontramos Ehrlichiacanis, Anaplasmaplatys., e Mycoplasma spp., torna-se de grande importância conhecer a epidemiologia nos gatos domésticos. Objetivou-se com esta pesquisa fazer um levantamento retrospectivo de fichas de gatos advindos de consultas no Hospital Veterinário Mário Dias Teixeira (HOVET) que realizaram exame de Reação de Cadeia da polimerase (PCR) no laboratório de biologia molecular, na Universidade Federal Rural da Amazônia, no ano de 2018 e 2019. No total foram 72 amostras de gatos domésticos processadas, sendo 33 machos e 39 fêmeas, 70 animais SRD e 2 Siameses, todos com trombocitopenia, além de outros sinais clínicos que os levaram a precisar de atendimento veterinário, foram categorizados os meses de entrada e processamento das amostras, bairros dos animais e grupos etários. De todos os animais testados, 34,7% obtiveram diagnóstico positivo para uma das enfermidades, sendo o gênero Mycoplasma spp. o que mais prevaleceu em amostras positivas, com maior frequência em fêmeas adultas, bem como foi descrita ocorrência de E. canis apenas nesse sexo, já A. platysfoi descrito com maior frequência em machos, além de achados de infecções concomitantes observado entre os agentes Anaplasmae Mycoplasma. Concluímos que os gatos atendidos no HOVET possuíam parasitismo por diferentes agentes infecciosos.

Hemoparasitosis have become increasingly important in the small animals' internal medicine. Among the causal agents, there are Ehrlichiacanis, Anaplasmaplatys. and Mycoplasma spp., which give the understanding of the epidemiology in domestic cats a great significance. This research aimed to make a retrospective survey of records from cats that came from appointments at the Veterinary Hospital Mário Dias Teixeira (HOVET) and underwent the Polymerase Chain Reaction (PCR) test at the molecular biology laboratory, at the Amazônia Federal Rural University (UFRA), in the years of 2018 and 2019. In total, 72 samples of domestic cats were processed, from which 33 were males and 39 females, 70 of them were mongrel cats and 2 siamese, all of them showed thrombocytopenia amongst other clinical signs that led them to need a veterinary appointment, the months of admission, processing of the samples, districts the animals came from and age group were categorized. 34,7% of all the animals tested showed positive results for one of the diseases, with the genus Mycoplasma spp. being the most prevalent in positive samples, showing a higher rate in adult females, as the occurrence of E. canis was reported only in females, while A. platys was reported with a higher rate in males, as well as concomitant infections following the observation of the agents Anaplasma and Mycoplasma. In conclusion, the cats admitted at HOVET showed parasitism by different infectious agents.

Histopathologic patterns and etiologic diagnosis of porcine respiratory disease complex in Brazil / Padrões histopatológicos e diagnóstico etiológico do complexo de doenças respiratórias dos suínos no Brasil

Porcine respiratory disease complex is a major health concern for the porcine industry, causing significant economic loss. In this study, a total of 156 samples from pigs referred to a diagnostic laboratory in Brazil for 15 months were analyzed by histopathology, bacterial isolation, PCR, and immunohistochemistry. Multiple infections were common, so 42.3% of the pigs had more than one pathogen detected in the lungs. Swine influenza virus was detected in 25.0% of the cases. Porcine circovirus type 2 was detected in 7.1% of the pigs, which was often associated with Pasteurella multocida. In addition, one case of porcine circovirus type 3 infection associated with granulomatous pneumonia was diagnosed. Bacteria were isolated in 125 cases, namely Pasteurella multocida (34.0%), Glaesserella (Haemophilus) parasuis (35.2%), Streptococcus suis (13.5%), and Actinobacillus pleuropneumoniae (7.7%). Mycoplasma hyopneumoniae was identified in 7.0% of the cases, and 18.6% of pigs carried Salmonella sp. The most common patterns of pulmonary inflammation were broncopneumonia, bronchointerstitial pneumonia, and pleuritis, in that order. This study demonstrated that histopathology is an efficient tool along with other laboratorial diagnostic tests for establishing an etiologic diagnosis in cases of porcine respiratory disease complex.

O complexo de doenças respiratórias de suínos é um dos principais problemas sanitários na suinocultura, causando perdas econômicas significativas. O presente estudo incluiu amostras de 156 suínos, que foram encaminhados a um laboratório de diagnóstico no Brasil, durante um período de 15 meses, sendo realizados histopatologia, isolamento bacteriano, PCR e imuno-histoquímica. Coinfecções por múltiplos patógenos foram comuns, correspondendo a 42,3% dos animais, que tiveram mais de um agente identificado nos pulmões. O vírus da influenza suína foi detectado em 25,0%. O circovírus suíno tipo 2 foi detectado em 7,1% dos animais, frequentemente associado à Pasteurella multocida. Além disso, foi diagnosticado um caso de circovírus suíno tipo 3 associado à pneumonia granulomatosa. Foram isoladas bactérias em 125 casos, a saber: Pasteurella multocida (34,0%), Glaesserella (Haemophilus) parasuis (35,2%), Streptococcus suis (13,5%) e Actinobacillus pleuropneumoniae (7,7%). Mycoplasma hyopneumoniae foi identificado em 7,0%, e 18,6% dos animais tiveram isolamento de Salmonella sp. Os padrões mais frequentes de inflamação pulmonar foram: broncopneumonia, pneumonia broncointersticial e pleurite, nesta ordem. Este estudo demonstrou que a histopatologia é uma ferramenta eficiente, juntamente a outras técnicas laboratoriais de diagnóstico, para o estabelecimento de diagnóstico etiológico em casos do complexo de doenças respiratórias de suínos.

Micoplasmose respiratória murina em ratos (Rattus norvegicus): revisão de literatura / Murine respiratory mycoplasmosis in rats (Rattus norvegicus): literature review

O Mycoplasma pulmonis é o agente etiológico primário da micoplasmose respiratória murina (MRM), importante patologia que acomete os ratos de laboratório, animais há muito utilizados para a realização de pesquisas experimentais e que, nos últimos anos, também passaram a ser criados como animais de companhia, com crescente presença em clínicas veterinárias. A MRM, uma patologia crônica que pode se apresentar de maneira subclínica, tem a sua instalação eprogressão usualmente associadas a falhas de manejo. O conhecimento sobre a MRM em ratos, é fundamental para a convivência saudável dos tutores com esses animais, além de ser essencial para que os animais empregados em investigações científicas possibilitem a obtenção de resultados experimentais fidedignos.

Mycoplasma pulmonis is the primary etiologic agent of murine respiratory mycoplasmosis (MRM), an important pathology of laboratory rats. For a long time, rats have been used in experimental research but nowadays it was observed an increasing number of rats treated as pets with a progressive presence of them in veterinary clinics. MRM is a chronic pathology often subclinical that is usually associated with inadequate management conditions. The objective of the present paper is to emphasize the importance of MRM in rats, to make possible a healthy coexistence of these animals with their owners and also for the achievement of reliable experimental results when they were applied in scientific investigations.

Micoplasmose respiratória murina em ratos (Rattus norvegicus): revisão de literatura / Murine respiratory mycoplasmosis in rats (Rattus norvegicus): literature review

O Mycoplasma pulmonis é o agente etiológico primário da micoplasmose respiratória murina (MRM), importante patologia que acomete os ratos de laboratório, animais há muito utilizados para a realização de pesquisas experimentais e que, nos últimos anos, também passaram a ser criados como animais de companhia, com crescente presença em clínicas veterinárias. A MRM, uma patologia crônica que pode se apresentar de maneira subclínica, tem a sua instalação eprogressão usualmente associadas a falhas de manejo. O conhecimento sobre a MRM em ratos, é fundamental para a convivência saudável dos tutores com esses animais, além de ser essencial para que os animais empregados em investigações científicas possibilitem a obtenção de resultados experimentais fidedignos.(AU)

Mycoplasma pulmonis is the primary etiologic agent of murine respiratory mycoplasmosis (MRM), an important pathology of laboratory rats. For a long time, rats have been used in experimental research but nowadays it was observed an increasing number of rats treated as pets with a progressive presence of them in veterinary clinics. MRM is a chronic pathology often subclinical that is usually associated with inadequate management conditions. The objective of the present paper is to emphasize the importance of MRM in rats, to make possible a healthy coexistence of these animals with their owners and also for the achievement of reliable experimental results when they were applied in scientific investigations.(AU)

Screening of feral pigeons (columba livia) for pathogens of veterinary and medical importance

Pathogens of veterinary and medical importance were investigated in 240 feral pigeons (Columba livia) captured in warehouses in São Paulo State, Brazil for one year. Rapid serum agglutination test (RST) was performed for the detection of antibodies against Mycoplasma synoviae, Mycoplasma gallisepticum and Salmonella Pullorum/Gallinarum. Positive samples were submitted to hemagglutination inhibition (HI) and tube seroagglutination tests, respectively. Molecular techniques (RT-PCR and PCR) were performed for Newcastle Diseases Virus (NDV) and Chlamydia psittaci diagnosis. Additionally, HI test was applied to detect antibodies against NDV. Serological results by RST were 3.3% positive for M. synoviae, 2.5% for M. gallisepticum, and 0.4% for S. Pullorum/Gallinarum, all negative on the confirmatory tests performed. NDV RNA or antibodies were not detected. C. psittaci DNA was detected in 13% of the samples. Further research on pigeon health status should be conducted because this species is highly adaptable and their numbers are rapidly rising around the world, posing risks for animals and human beings.

Screening of feral pigeons (columba livia) for pathogens of veterinary and medical importance

Pathogens of veterinary and medical importance were investigated in 240 feral pigeons (Columba livia) captured in warehouses in São Paulo State, Brazil for one year. Rapid serum agglutination test (RST) was performed for the detection of antibodies against Mycoplasma synoviae, Mycoplasma gallisepticum and Salmonella Pullorum/Gallinarum. Positive samples were submitted to hemagglutination inhibition (HI) and tube seroagglutination tests, respectively. Molecular techniques (RT-PCR and PCR) were performed for Newcastle Diseases Virus (NDV) and Chlamydia psittaci diagnosis. Additionally, HI test was applied to detect antibodies against NDV. Serological results by RST were 3.3% positive for M. synoviae, 2.5% for M. gallisepticum, and 0.4% for S. Pullorum/Gallinarum, all negative on the confirmatory tests performed. NDV RNA or antibodies were not detected. C. psittaci DNA was detected in 13% of the samples. Further research on pigeon health status should be conducted because this species is highly adaptable and their numbers are rapidly rising around the world, posing risks for animals and human beings.(AU)

ISOLAMENTO E CARACTERIZAÇÃO DE ISOLADOS DE Mycoplasma hyopneumoniae PROVENIENTES DE PULMÃO DE SUÍNOS DE MINAS GERAIS, BRASIL

Mycoplasma hyopneumoniae é o agente etiológico da pneumonia enzoótica, responsável por uma das maiores causas de perdas na produção. A bactéria possui um metabolismo limitado e precisa obter moléculas do ambiente de crescimento, acarretando grandes dificuldades para o cultivo in vitro. Essas limitações inviabilizam a execução de técnicas de diagnóstico e a pesquisa e desenvolvimento de novas estratégias para controle e prevenção. Diante disso, este projeto objetivou isolar Mycoplasma hyopneumoniae, realizar o cultivo desta bactéria em laboratório, conhecer o perfil genético e avaliar a susceptibilidade in vitro dos isolados a diferentes antimicrobianos. A coleta de pulmões com suspeita de pneumonia enzoótica foi realizada em animais de abate provenientes de uma mesma propriedade localizada no Vale do Piranga- MG. A confirmação do isolamento foi realizada através de observações visuais de mudança de cor no meio de cultivo, e também através de PCR convencional e sequenciamento parcial do gene 16s de M. hyopneumoniae. Para se conhecer o perfil genético dos isolados foi realizada a técnica de PCR contendo os principais genes envolvidos com a patogenia da bactéria. Para a avaliação da susceptibilidade antimicrobiana dos isolados, utilizou-se a técnica de concentração inibitória mínima (MIC). Foi obtido êxito no processo de isolamento do agente, com a obtenção de 16 isolados, comprovadamente positivos ao PCR convencional e com 100% de identidade com diferentes cepas já conhecidas. Através do PCR de genes de virulência foi criado um dendrograma, e os isolados foram agrupados em 4 clusters, sugerindo uma variabilidade genética entre eles. O MIC foi mais alto para os antimicrobianos tilosina e espiramicina, do que para enrofloxacina e tiamulina. Nossos resultados apresentam o primeiro isolamento de M. hyopneumoniae a partir de amostras de campo nacionais e demonstram uma possível variabilidade genética entre os 4 diferentes isolados, com diferenças na susceptibilidade aos agentes antimicrobianos.

In the context of the swine sector growth in Brazil, the health problems that affect animal health and productivity should receive special attention. Mycoplasma hyopneumoniae is the etiologic agent of enzootic pneumonia, responsible for one of the major causes of production losses. The bacteria have a limited metabolism and need to obtain several different molecules from the environment, causing great complications for in vitro culture. These limitations make it difficult to carry out diagnostic techniques and the research and development of antimicrobials and vaccines. The aim of this project was to isolate Mycoplasma hyopneumoniae, to cultivate this bacterium in the laboratory, to understand the genetic profile and to evaluate the in vitro susceptibility of the isolates to different antimicrobials. The collection of lungs with suspected enzootic pneumonia was performed in slaughter animals from the same farm from Vale do Piranga region. Isolation confirmation was carried out through visual observations of color change in the culture medium, through conventional PCR and partial gene sequencing. To know the genetic profile of the isolates, a PCR was performed containing the main genes involved in the pathogenesis of the bacteria. The antimicrobial susceptibility of the isolates and strains was used the method known as minimum inhibitory concentration (MIC). The isolate was successfully obtained with 16 isolates, proven positive for conventional PCR and with 100% identify with different strains already known. A dendrogram was created after gene PCR technique, and the isolates were distributed in 4 clusters, suggesting a genetic variability among 4 different strains. The MIC was higher for the antimicrobials tylosin and spiramycin than for enrofloxacin and thiamulin. Our results show the first isolation of M. hyopneumoniae from national field samples and also demonstrate a possible genetic variability among the four different isolates, with differences in susceptibility to antimicrobial agents.

Descrição parasitológica, epidemiológica e hematológica do Galea spixii (Wangler, 1831) de vida livre no Estado da Paraíba, Brasil

A interação homem, animal doméstico e a fauna silvestre podem acarretar a disseminação de muitas doenças, sendo agentes infecciosos ou parasitários, contudo pouca atenção é dada ao papel dessas doenças. Portanto, a compreensão da biodiversidade parasitária e infecciosa dos animais de vida silvestre é de extrema importância, a fim de estabelecer o papel desses animais como reservatórios de agentes patogênicos e parasitários. O presente estudo teve como objetivo testar Mycoplasma sp., Babesia sp., Ehrlichia sp. e Bartonella sp. em mamíferos selvagens Galea spixii (Wangler, 1831) e identificar os parasitas naturais dessa espécie, focando na importância de animais como potenciais reservatórios, como fonte de infecção e seus impactos. Os animais foram capturados na Região Geográfica Imediata de Campina Grande - Paraíba, utilizando armadilhas do tipo Tomahawk, a identificação dos roedores foi feita pelo Guia dos Roedores do Brasil. Os animais foram anestesiados e eutanasiados com uma sobredosagem da associação de anestésicos dissociativos, após anestesia geral. A coleta dos artrópodes foi feita pelo método de catação, raspados cutâneos e swab do pavilhão auricular, após a coleta foram clareados com hidróxido de potássio a 10% e identificados com chave especifica. O exame coprológico foi realizado com os Kits Fill FLOTAC e mini-FLOTAC. A coleta de sangue foi feita por punção intracardíaca e as amostras encaminhadas para o Laboratório de Patologia Clínica da Universidade Federal da Paraíba - UFPB para realização do hemograma e para o Laboratório de Zoonoses e Epidemiologia Molecular e Laboratório de Doenças Transmitidas por Vetores, na Universidade Federal do Paraná - UFPR, para extração do DNA e verificação de infecções dos agentes patogênicos. Não foram detectadas infecções para Mycoplasma sp., Babesia sp., Ehrlichia sp. e Bartonella sp. em G. spixii (Wangler, 1831). Os ectoparasitos identificados foram: Gliricola quadrisetosa, Gyropus ovalis, Laelaps sp. e Chirodiscoides caviae. No exame coprológico foram detectados ovos de Nematóides, ovos de Cestóides e oocistos de coccídeos. O estudo desses patógenos em animais selvagens envolve aspectos de saúde pública, animal e ambiente, por isso é necessário conhecer as possíveis espécies que servem como reservatórios agentes infecciosos e parasitários.

The interaction between man, domestic animal and wildlife can cause and lead to the spread of many diseases, being infectious or parasitic agents, but little attention is given to the role of these diseases in conservation biology. Therefore, understanding the parasitic and infectious biodiversity of wildlife is of paramount importance in order to establish the role of these animals as reservoirs of pathogens and parasites. The present study aimed to test Mycoplasma sp., Babesia sp., Ehrlichia sp. and Bartonella sp. in wild mammals Galea spixii and to identify the natural parasites of this species, focusing on the importance of animals as potential reservoirs, as source of infection and its impacts Animals were captured in the immediate geographic region of Campina Grande, using Tomahawk-type traps, identification of rodents was made by the Rodents Guide of Brazil. The animals were anesthetized and euthanized with an overdose of the association of dissociative anesthetics after general anesthesia. The collection of the arthropods was done by the method of treatment, skin scrapings and swab of the auricular pavilion, after the collection were lightened with 10% potassium hydroxide and identified with a specific key. The coprological examination was performed with the Fill FLOTAC and mini-FLOTAC Kits. Blood collection was done by intracardiac puncture and the samples were sent to the Laboratory of Clinical Pathology of the Federal University of Paraíba - UFPB to perform the blood count and to the Laboratory of Zoonoses and Molecular Epidemiology and Laboratory of Diseases Transmitted by Vectors at the Federal University of Paraná - UFPR, for DNA extraction and infection of pathogens. No infections were detected for Mycoplasma sp., Babesia sp., Ehrlichia sp. and Bartonella sp. in G. spixii. The ectoparasites identified were: Gliricola quadrisetosa, Gyropus ovalis, Laelaps sp. and Chirodiscoides caviae. In the coprological examination were detected Nematode Eggs, Cestode Eggs and Coccidia Oocysts. The study of these pathogens in wild animals involves aspects of public health, animal and environment, so it is necessary to know the possible species that serve as reservoirs infectious and parasitic agents.

Detecção de Mycoplasma pulmonis no trato respiratório superior em roedores através da técnica de PCR / /Mycoplasma pulmonis detection in the rodents respiratoru tract by PCR

Objetivo: apresentar a técnica de PCR para a detecção de Mycoplasma pulmonis das colônias convencionais de camundongos das linhagens isogênicas C57BL/6, BALB/c e heterogênica Swiss, e ratos Wistar. Material e Métodos: A extração do DNA foi realizada a partir de fragmento de traqueia, utilizando para a reação de PCR os oligonucleotídeos iniciadores F: 5’- CA TGT TCT TGG CCA CCTAT - 3’ e R:5’ - ATC CCT CAA TGA GCT GGT TC - 3' que amplificam um produto de 152 pb. Os produtos obtidos foram separados por eletrólise em gel de agarose. A visualização e fotodocumentação foram realizadas sob luz ultravioleta. Resultados e conclusões: A PCR possibilitou a detecção de camundongos positivos, sendo 38% da linhagem C57BL/6, 24% da linhagem BALB/c, 14% da linhagem heterogênica Swiss e 52% de ratos Wistar. Esses resultados sugerem que o emprego da técnica de PCR foi eficaz para o diagnóstico de Mycoplasma pulmonis em colônias de animais de laboratório. Certificado CEAU nº 251/11 HCFMUSP.

Objective: To introduce the PCR technique for detection of Mycoplasma pulmonis in conventional colony of mice inbred strains C5BL/6, BALB/c, outbred Swiss, and Whistar rats. Methods: DNA extraction was made from a fragment of the trachea, using the PCR primers F: 5’-CA TCT TGG TGT CCA CCTAT - 3’ and R:5’ - ATC CCT CAA TGA GCT GGT TC-3' which amplify a product of 152 bp. The products were separated by agarose gel electrophoresis. The viewing and photo documentation were performed under ultravioleta light. Results and Conclusion: The PCR allowed the detection of positive mice, 38% of C57BL/6, 24% of BALB/c 14% of Swiss and 52% of Wistar rats. These results suggest that the use of PCR technique was effective for the diagnosis of Mycoplasma pulmonis in colonies of laboratory animals. Certified CEAU nº 251/11 HCFMUSP.

Detecção de Mycoplasma pulmonis no trato respiratório superior em roedores através da técnica de PCR / /Mycoplasma pulmonis detection in the rodents respiratoru tract by PCR

Objetivo: apresentar a técnica de PCR para a detecção de Mycoplasma pulmonis das colônias convencionais de camundongos das linhagens isogênicas C57BL/6, BALB/c e heterogênica Swiss, e ratos Wistar. Material e Métodos: A extração do DNA foi realizada a partir de fragmento de traqueia, utilizando para a reação de PCR os oligonucleotídeos iniciadores F: 5- CA TGT TCT TGG CCA CCTAT - 3 e R:5 - ATC CCT CAA TGA GCT GGT TC - 3' que amplificam um produto de 152 pb. Os produtos obtidos foram separados por eletrólise em gel de agarose. A visualização e fotodocumentação foram realizadas sob luz ultravioleta. Resultados e conclusões: A PCR possibilitou a detecção de camundongos positivos, sendo 38% da linhagem C57BL/6, 24% da linhagem BALB/c, 14% da linhagem heterogênica Swiss e 52% de ratos Wistar. Esses resultados sugerem que o emprego da técnica de PCR foi eficaz para o diagnóstico de Mycoplasma pulmonis em colônias de animais de laboratório. Certificado CEAU nº 251/11 HCFMUSP. (AU)

Objective: To introduce the PCR technique for detection of Mycoplasma pulmonis in conventional colony of mice inbred strains C5BL/6, BALB/c, outbred Swiss, and Whistar rats. Methods: DNA extraction was made from a fragment of the trachea, using the PCR primers F: 5-CA TCT TGG TGT CCA CCTAT - 3 and R:5 - ATC CCT CAA TGA GCT GGT TC-3' which amplify a product of 152 bp. The products were separated by agarose gel electrophoresis. The viewing and photo documentation were performed under ultravioleta light. Results and Conclusion: The PCR allowed the detection of positive mice, 38% of C57BL/6, 24% of BALB/c 14% of Swiss and 52% of Wistar rats. These results suggest that the use of PCR technique was effective for the diagnosis of Mycoplasma pulmonis in colonies of laboratory animals. Certified CEAU nº 251/11 HCFMUSP.(AU)

Nested-PCR for the detection of Mycoplasma hyopneumoniae in bronchial alveolar swabs, frozen tissues and formalin-fixed paraffin-embedded swine lung samples: comparative evaluation with immunohistochemical findings and histological features / Detecção de Mycoplasma hyopneumoniae por PCR em amostras de pulmão suíno fixadas em formalina e associação com achados histológicos e imuno-histoquímicos

The diagnosis of Mycoplasma hyopneumoniae infection is often performed through histopathology, immunohistochemistry (IHC) and polymerase chain reaction (PCR) or a combination of these techniques. PCR can be performed on samples using several conservation methods, including swabs, frozen tissue or formalin-fixed and paraffin-embedded (FFPE) tissue. However, the formalin fixation process often inhibits DNA amplification. To evaluate whether M. hyopneumoniae DNA could be recovered from FFPE tissues, 15 lungs with cranioventral consolidation lesions were collected in a slaughterhouse from swine bred in herds with respiratory disease. Bronchial swabs and fresh lung tissue were collected, and a fragment of the corresponding lung section was placed in neutral buffered formalin for 48 hours. A PCR assay was performed to compare FFPE tissue samples with samples that were only refrigerated (bronchial swabs) or frozen (tissue pieces). M. hyopneumoniae was detected by PCR in all 15 samples of the swab and frozen tissue, while it was detected in only 11 of the 15 FFPE samples. Histological features of M. hyopneumoniae infection were presented in 11 cases and 7 of these samples stained positive in IHC. Concordance between the histological features and detection results was observed in 13 of the FFPE tissue samples. PCR was the most sensitive technique. Comparison of different sample conservation methods indicated that it is possible to detect M. hyopneumoniae from FFPE tissue. It is important to conduct further research using archived material because the efficiency of PCR could be compromised under these conditions.(AU)

O diagnóstico de infecção por Mycoplasma hyopneumoniae é frequentemente realizado através de histopatologia, imuno-histoquímica (IHQ) e reação em cadeia da polimerase (PCR), ou uma combinação dessas técnicas. PCR pode ser realizada a partir de amostras submetidas a vários métodos de conservação, incluindo swabs, tecido refrigerado ou congelado, ou ainda tecido fixado em formalina e embebido em parafina (FFEP). Entretanto, o processo de fixação em formalina pode inibir a amplificação de DNA. Para avaliar se DNA de M. hyopneumoniae poderia ser recuperado de tecido FFEP, 15 pulmões com lesões de consolidação crânio-ventral de suínos oriundos de rebanhos com problemas respiratórios foram selecionados no abatedouro. Swabs bronquiais e pulmão fresco foram colhidos, e um fragmento da mesma porção de pulmão foi colocado por 48 horas em solução de formalina tamponada e posteriormente processado e embebido em parafina. PCR foi realizada comparando amostras de tecido fixado em formalina com amostras que passaram somente por refrigeração (swab bronquial) ou foram congeladas (fragmentos de tecido). A detecção de M. hyopneumoniae ocorreu em todas as 15 amostras de swabs e tecido congelado enquanto em amostras de tecido FFEP, o agente foi detectado somente em 11 das 15 amostras. Características histológicas de infecção por M. hyopneumoniae ocorreram em 11 casos e 7 destas amostras obtiveram marcação imuno-histoquímica positiva. Concordância entre histologia e detecção a partir de tecido FFEP foi observada em 13 casos. Dentre as técnicas analisadas, a PCR foi a mais sensível. A comparação de diferentes métodos de conservação de amostras indica que é possível detectar M. hyopneumoniae a partir de tecido FFEP, fato importante para pesquisa utilizando material arquivado, porém a eficácia do teste de PCR pode ficar comprometida sob essas condições.(AU)

Micoplasmas hemotrópicos em felinos domésticos na cidade de Santa Maria, Rio Grande do Sul, Brasil

A anemia infecciosa felina é uma doença causada por bactérias pertencentes ao gênero Mycoplasma, que compreendem um grupo distinto, pois são encontradas aderidas à superfície dos eritrócitos, no entanto, são incapazes de romper a membrana celular. São conhecidas como hemoplasmas ou micoplasmas hemotrópicos. Mycoplasma haemofelis, Candidatus Mycoplasma haemominutum e Candidatus Mycoplasma turicensis, são as espécies capazes de infectar felinos domésticos. A infecção pelos hemoplasmas está presente em quase todos continentes, exceto na Antártida. A doença pode variar de uma forma assintomática a grave e fatal, dependendo da espécie envolvida e da susceptibilidade do hospedeiro. A principal forma de diagnóstico da infecção é através da reação em cadeia do polimerase (PCR), método bastante sensível e específico. O objetivo deste trabalho foi verificar a frequência da infecção por hemoplasmas felinos na cidade de Santa Maria, Rio Grande do Sul, Brasil e, também analisar os parâmetros hematológicos dos animais positivos, assim como o sexo e a idade. Dessa forma, foram analisadas 192 amostras de sangue de felinos domésticos provenientes do Laboratório de Análises Clínicas Veterinárias da Universidade Federal de Santa Maria (LACVetUFSM). Hemograma, extração de DNA e PCR, para as três espécies de hemoplasmas supracitadas, foram realizados, bem como a análise do histórico clínico, sexo e idade. A frequência total de micoplasmas hemotrópicos encontrada foi de 14,6%, sendo que, 7,83% foram positivos para Candidatus M. haemominutum, 4,17% para Mycoplasma haemofelis, 1,56% para Candidatus M. turicensis, 0,52% para Candidatus M. haemominutum e Mycoplasma haemofelis e 0,52% para Candidatus M. turicensis e Candidatus M. haemominutum. Quanto ao sexo 10,95% de amostras infectadas eram de machos, enquanto que 3,65% eram de fêmeas. Os animais até quatro anos de idade foram mais acometidos pela infecção do que os felinos mais velhos e, apenas 3 animais apresentaram anemia, não foram observadas alterações no leucograma dos animais positivos. Sendo assim, foi possível verificar que a infecção causada por estes organismos está presente na cidade de Santa Maria e, que o Candidatus M. haemominutum é a espécie mais frequente associada à infecção, além disso, os felinos machos e jovens são mais acometidos.

Feline infectious anemia is a disease caused by bacteria belonging to the genus Mycoplasma, comprising a different group since they are found attached to the surface of erythrocytes, however, are unable to break the cell membrane. They are known as hemoplasmas or mycoplasma Hemotrophic. Mycoplasma haemofelis, Candidatus Mycoplasma haemominutum and Candidatus Mycoplasma turicensis, are species capable of infecting domestic cats. Infection by hemoplasmas is present in almost all continents except Antarctica. The disease can vary from asymptomatic to severe and fatal form, depending upon the species involved and host susceptibility. The main tool for diagnosing the infection is by polymerase chain reaction (PCR), highly sensitive and specific method. The objective of this study was to determine the frequency of infection hemoplasmas cats in the city of Santa Maria, Rio Grande do Sul, Brazil, and also analyze the hematological parameters of positive animals, as well as sex and age. Thus, it analyzed 192 blood samples from domestic cats from the Laboratory of Analyzes Clinics Veterinaries at Universidade Federal de Santa Maria (LACVet-UFSM). CBC, DNA extraction and PCR for the three species hemoplasmas above were performed, and the analysis of the medical history, age and sex. The overall frequency of Hemotrophic mycoplasmas found was 14.6%, and, 7.83% were positive for Candidatus M. haemominutum, 4.17% for Mycoplasma haemofelis, 1.56% for Candidatus M. turicensis, 0.52% for Candidatus M. haemominutum and Mycoplasma haemofelis and 0.52% for Candidatus M. turicensis and Candidatus M. haemominutum. The sex 10.95% of infected samples were males, while 3.65% were females. The animals up to four years of age were most affected by the infection than older cats and only 3 animals had anemia, there were no changes in white blood cell count of positive animals. Thus, it observed that the infection caused by these organisms is present in the city of Santa Maria and the Candidatus M. haemominutum is the most common species associated with infection, in addition, males and young cats are most affected.

Detecção do Grupo Mycoplasma mycoides por imunoperoxidase indireta (IPI) e PCR-REA em conduto auditivo de bovinos / Detection of Mycoplasma mycoides cluster by indirect immunoperoxidase (IPI) and PCR-REA in the ear canal of bovines

O Grupo Mycoplasma mycoides (GMM) foi diagnosticado por PCR-REA e imunoperoxidase indireta (IPI) em amostras de lavados de conduto auditivo de bovinos no Estado do Rio de Janeiro, Brasil. 60 bovinos foram selecionados aleatoriamente. As lavagens foram feitas com uso de seringas estéreis contendo um volume de 60 mL de solução salina tamponada (PBS pH 7.2). As amostras obtidas foram estocadas em glicerol (1:2) e congeladas a 20ºC até uso. Estas amostras foram diluídas até 10-5 e repicadas em meio Hayflick modificado, sólido e líquido, sendo incubados a 37ºC por 48-72 horas. As placas foram mantidas em microaerofilia e observadas diariamente, para visualização das colônias típicas em ôovo-fritoõ. Das 60 amostras cultivadas, 48 (80,00 por cento) foram positivas para Mycoplasma spp. A prevalência obtida para o GMM na IPI foi de 20,0 por cento (12/60) enquanto na PCR-REA foi de 41,7 por cento (25/60). Das cepas tipificadas pela IPI 58,3 por cento (7/12) foram M. mycoides subsp. mycoides LC e 41,7 por cento (5/12) foram M. capricolum. Na PCR-REA o grupo M. mycoides foi confirmado pela visualização de um amplicon de 785bp, compatível com este grupo. O valor encontrado no teste Kappa para associação entre estes testes foi de 0,14 (P>0,05. Na clivagem do produto da PCR com a enzima de restrição AluI, de cepas de referências e dos isolados de ouvido os fragmentos obtidos foram de 81, 98, 186 e 236pb, mas não de 370pb, que é específica para o agente da Pleuropneumonia Contagiosa Bovina. A presença de espécies de micoplasmas no conduto auditivo de bovinos assintomáticos representa um risco para propagação de Mycoplasma spp. entre rebanhos bovinos no Brasil.(AU)

Mycoplasma mycoides cluster (MMC) was diagnosed by polimerase chain reaction-restriction endonuclease analysis (PCR-REA) and indirect immunoperoxidase (IPI), both, carried out in flushing from external ear canal, collected from bovine at slaughter time in the State of Rio de Janeiro, southeastern, Brazil. A total of 60 bovines were randomly selected. Sterile syringes (60mL) loaded with buffer solution (PBS, pH 7.2) were used for the ear canal flushing. The obtained samples were stored in glycerol (1:2) and frozen at -20ºC until use. These specimens were diluted up to 10-5, inoculated in liquid and solid modified Hayflickïs media and incubated at 37ºC for 2-3 days. The plates were kept in a microaerophilia condition and examined every two days under a stereomicroscope for the presence of typical colonies ôfried-eggõ. In this study, 35 strains selected in agreement with their biochemistry and physiologic proprieties, were used. From the 60 cultivated samples, 48 (80.00 percent) were positive for Mycoplasma spp. Under IPI the prevalence obtained for MMC was 20.0 percent (12/60) while by PCR-REA it was 41.7 percent (25/60). The IPI typing of these isolates resulted in 58.3 percent (7/12) for M.mycoides mycoides LC and 41.7 percent (5/12) for M. capricolum. PCR-REA for MMC was confirmed by the amplicon size of 785bp, compatible with this group. The Kappa value for the association between these two tests was 0.14 (p>0.05). After restriction analysis with AluI in all MMC strains the fragments size obtained were of 81, 98, 186 and 236bp, but not of 370bp that is compatible with Mycoides mycoides mycoides SC of bovine type. The presence of mycoplasmas species in the ear canal of asymptomatic bovines represent a risk of subsequent propagation of Mycoplasma spp. among bovine herds in Brazil.(AU)

Mycoplasma pulmonis and Mycoplasma arthritidis in rodents from animal houses / Mycoplasma pulmonis e/ou Mycoplasma arthritidis em animais de laboratório (ratos e camundongos) de diferentes biotérios

Rats and mice from different animal house facilities without microbial barriers and one from barrier sustained facilities were checked for mycoplasma presence by lung perfusion with tracheobronquial lavage and ear flushing. Mycoplasmas were characterized by "fried egg" colonies, Dienes stain and digitonine resistance. Glucose catabolism, arginine hydrolysis, tetrazoliun reduction and film/ spots production was applied as screening differential assays. Identification was performed by growth inhibition test. In the barrier sustained colonies, mycoplasmas were not detected, but from a conventional animal house, M. pulmonis was found in the follow order: 20.0% in Swiss mice, 14.28% in C57BL/6J colonies and 83.79% in Wistar rats. M. arthritidis was isolated only from rats by ear flushing in order of 5.4%. Both species were observed in one rat and one unidentified strain of mycolplasma was isolated from hamsters. M. pulmonis was obtained from rats but not from mice proceeded from other two conventional animal houses. Mycoplasma infection rate could not be established in these facilities because rats and mice were specially selected, as usually is to search mycoplasmas, based on their origin and symptoms. The authors suggest that mycoplasma investigation nust be permanent in any animal house rearing rodents. Mycoplasma infection rate must be established with a representative sampling

Ratos e camundongos de três biotérios com e um sem barreiras microbianas foram bacteriologicamente estudados quanto à presença de micoplasma, através da perfusão de pulmão com lavado traqueobrônquico e lavado de ouvido. Caracterizou-se a presença destas bactérias pela formação de colônias em "ovo frito", coloração de Dienes, resistência à digitonina, catabolismo da glicose, hidrólise da arginina, redução do tetrazólio e produção de filme e manchas. A identificação das cepas isoladas foi através da inibição de crescimento. No biotério com barreiras microbianas, os micoplasmas não foram detectados. Entretanto, isolou-se Mycoplasma pulmonis e Mycoplasma arthritidis em biotérios sem barreiras. Nas instalações sem barreiras microbianas com amostragem representativa, detectou-se M. pulmonis em 20% dos camundongos Swiss, 14,28% na linhagem C57B1/6J e em 83,78% na amostragem dos ratos. Encontrou-se M. arthritidis em 5,4% dos ratos, através da lavagem de ouvido. Ambas as espécies estavam presentes em 2,7% dos ratos. Os anti-soros utilizados não identificaram uma cepa isolada de hamster. M. pulmonis foi identificado em ratos de um grupo de animais procedentes de outros 2 biotérios. A taxa de infecção por micoplasma não pôde ser estabelecida porque os ratos e camundongos foram especialmente selecionados para a pesquisa de micoplasma devido a sua origem a aspectos clínicos. Os autores suge

Aspectos epidemiológicos da infecção por Ehrlichia spp., Anasplama platys e Mycoplasma spp. em felinos domésticos

Hemoparasitoses have become increasingly important in the medical practice of small animals. Among the causative agents we find the genera Ehrlichia spp, Anaplasma spp. and Mycoplasma spp., and it becomes of great importance to know the epidemiology in domestic cats. This research aimed to make a retrospective survey of records of cats that underwent polymerase chain reaction (PCR) examination in the molecular biology laboratory at the Federal Rural University of the Amazon in 2018 and 2019. A total of 72 feline samples were processed, being 33 males and 39 females, 70 SRD animals and 2 Siamese, all with thrombocytopenia, in addition to other clinical signs that led them to need veterinary care, the months of entry and processing of samples, neighborhoods of the animals, categorized by age groups, street access, presence of ectoparasites and contactors were categorized. Higher occurrence of Ehrlichia spp. was described in adult females, while Anaplasma platys, Mycoplasma spp. and concomitant infections were more reported in adult males. We conclude that the cats seen at HOVET had parasitism by different infectious agents.

Hemoparasitoses vêm se tornando cada vez mais importantes na clínica médica de pequenos animais. Dentre os agentes causadores encontramos os gêneros Ehrlichia spp, Anaplasma spp. e Mycoplasma spp., e torna- se de grande importância conhecer a epidemiologia nos gatos domésticos. Objetivou-se com esta pesquisa fazer um levantamento retrospectivo de fichas de felinos que realizaram exame de Reação de Cadeia da polimerase (PCR) no laboratório de biologia molecular, na Universidade Federal Rural da Amazônia, no ano de 2018 e 2019. No total foram 72 amostras de felinos processadas, sendo 33 machos e 39 fêmeas, 70 animais SRD e 2 Siameses, todos com trombocitopenia, além de outros sinais clínicos que os levaram a precisar de atendimento veterinário, foram categorizados os meses de entrada e processamento das amostras, bairros dos animais, categorizados por grupos etários, acesso à rua, presença de ectoparasitas e contactantes. Foi descrita maior ocorrência de Ehrlichia spp. em fêmeas adultas, enquanto Anaplasma platys, Mycoplasma spp. e infecções concomitantes foram mais relatadas em machos adultos. Concluímos que os felinos atendidos no HOVET possuíam parasitismo por diferentes agentes infecciosos.

REATIVAÇÃO DE Mycoplasma Gallisepticum CEPA F ATRAVÉS DE PASSAGEM EM OVOS SPF E CARACTERIZAÇÃO GENÉTICA DE VACINAS DISPONÍVEIS NO BRASIL

PIMENTEL, Jorge Couto D. Sc., Universidade Federal de Viçosa, Julho de 2012. Reativação de Mycoplasma gallisepticum cepa F através de passagem em ovos SPF e caracterização genética de vacinas disponíveis no Brasil. Orientador: Joaquin Hernán Patarroyo Salcedo. O presente trabalho avaliou diferentes passagens de sementes de Mycoplasma Gallisepticum cepa F em ovos embrionados SPF em laboratório para produzir vacinas vivas liofilizadas e testar sua eficácia a campo quanto ao título e sorologia rápida (SAR) e ELISA, definindo a melhor rota de produção comercial de vacinas. As mesmas sementes foram caracterizadas geneticamente antes e após o tratamento para comparação das diferenças genéticas. O trabalho foi realizado nas dependências da Ceva Saúde Animal na cidade de Campinas-SP, as atividades de campo no Centro de Pesquisas em Animais do Brasil (CPABR) na cidade de Amparo-SP e as análises genéticas no laboratório Simbios em Canoas-RS. Após todos os testes concluídos, avaliou-se a performance dos produtos testados quanto a: cultivo de sementes, tipos de sementes usadas, passagem em ovos e sorologia vacinal por SAR e ELISA, específicos para MG. Estabeleceu-se um parâmetro para a produção de vacinas comerciais eficazes reativando sementes de Mycoplasma gallisepticum, através de passagem de sementes de MG F em ovos SPF. Por fim, demonstrou-se que o tratamento de ativação de sementes por passagem em ovos foi eficaz e não alterou as características genéticas das sementes de MG F, demonstrando segurança no processo desenvolvido. Este estudo também estabeleceu qual a relação genética e sorológica das vacinas de MG F disponíveis no mercado brasileiro, por comparações com as cepas MG-70 e duas MG-F de dois laboratórios distintos confirmando a classificação das cepas F como F e agrupando a MG-70 em um cluster diferente da cepa F e também da cepa rugosa. ABSTRACT PIMENTEL, Jorge Couto D. Sc., Universidade Federal de Viçosa, Julho de 2012. Reativation of Mycoplasma gallisepticum strain F by passages in SPF eggs and vaccines genetic caracterization available in Brazil. Orientador: Joaquin Hernán Patarroyo Salcedo. This study evaluated different passages of Mycoplasma gallisepticum seeds F strain in embryonated SPF eggs in laboratory to produce freeze-dried live vaccines and test its effectiveness in the field as titer using serum plate agglutination test (SPA) and ELISA, defining the best route for commercial production of MG vaccines. The same seeds were genetically characterized before and after treatment for comparing the genotypic differences. The study was conducted at Ceva Animal Health in Campinas-SP, fields trials at Brazilian Center for Animal Assays (CPABR) in Amparo-SP, and genetic analyses in the Simbios laboratory in Canoas-RS. After all tests completed, the peformance of the products tested was evaluated for: production of seeds, seed types used, evaluation of passage in eggs and serology using SPA and ELISA specifics for MG. Set a parameter for the production of commercial vaccines effective reactivating Mycoplasma gallisepticum seeds throught passages in SPF eggs. Finally, it was demonstrated that seeds activation was effective and did not alter the genetic characteristics of MG, showing the security process developed. This study also established that the genetic and serological relationship for MG F vaccines available in Brazil, by comparison with the 2 F strains from different veterinary companies and MG-70. The F strains vacc

DETECÇÃO MOLECULAR DOS HEMOPARASITAS Anaplasma marginale, Anaplasma centrale E Candidatus Mycoplasma haemobos EM BOVINOS LEITEIROS DA REGIÃO SUL DO BRASIL

As hemoparasitoses são doenças bastante prevalentes no rebanho brasileiro e causam grandes prejuízos econômicos para a pecuária do país. A identificação de bovinos persistentemente infectados em áreas endêmicas é importante para monitorar a movimentação de animais infectados para áreas livres da doença, bem como para prevenir a infecção de animais suscetíveis. Neste contexto, este trabalho teve como objetivo a detecção molecular dos hemoparasitas Anaplasma marginale, Anaplasma centrale e Mycoplasma spp. em bovinos da região Sul do Brasil. Foram utilizadas 433 amostras de sangue de bovinos sadios coletadas em assentamentos rurais do Norte do Paraná, as quais foram acondicionadas e levadas ao Laboratório de Protozoologia Veterinária da Universidade Estadual de Londrina, onde foram submetidas a extração de DNA e realização da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), para detecção de hemoparasitas. Do total de amostras, 89,4% (390/433) foram positivas para A. marginale, 34% (147/433) para A. centrale, 61% (264/433) para ‘Candidatus M. haemobos (‘C. M. haemobos), 31,2% (135/433) amostras estavam coinfectadas com A. marginale e A. centrale, 9,2% (40/433) coinfectadas com A. marginale e ‘C. M. haemobos, 1,8% (8/433) coinfectadas com A. centrale e ‘C. M. haemobos e 20,5% (89/433) apresentavam os três agentes. Nenhum animal apresentava, no momento da coleta de sangue, alterações clínicas. Nos hemogramas, constatou-se que alguns bovinos encontravam-se anêmicos, porém, não foi observada correlação entre positividade nos testes e anemia. Os resultados obtidos neste estudo permitem concluir que os agentes pesquisados encontram-se ampalmente disseminados entre os animais da região Norte do Paraná. A detecção de bovinos persistentemente infectados é importante para a determinação da infecção e do estado imunológico dos animais. Neste estudo, a PCR mostrou ser uma ferramenta poderosa para a detecção e a diferenciação de A. marginale e A. centrale que parasitam os bovinos. Além disso, esta é a primeira confirmação molecular do hemoplasma 'C. M. haemobos em bovinos do Brasil. Além disso, foi observado uma elevado ocorrência 'C. M. haemobos' em bovinos leiteiros da região norte do Paraná com possível impacto na produção

Detecção de Mycoplasma pulmonis e Mycoplasma arthritidis no trato respiratório superior de ratos e bioteristas por cultivo e reação em cadeia da polimerase (PCR) / Detection of Mycoplasma pulmonis and Mycoplasma arthritidis in the upper respiratory tract of rats and technicians by culture and polymerase chain reaction (PCR)

Mycoplasma pulmonis e Mycoplasma arthritidis são espécies frequentemente isoladas de animais de laboratório (ratos), causando prejuízos e alteração em resultados de pesquisa que utilizam tais animais. O Mycoplasma pulmonis coloniza principalmente o trato respiratório, nasofaringe e ouvido médio de murinos e causa micoplasmose respiratória murina (MRM). A principal via de transmissão é horizontal, o que facilita a disseminação deste agente para os demais ambientes do biotério e também para seus funcionários. O Mycoplasma arthritidis pode ser isolado da orofaringe destes animais, mas sua ocorrência natural é rara. Os micoplasmas geralmente são espécie-específicos embora algumas espécies possam ser encontradas em diferentes hospedeiros. O objetivo deste trabalho foi o isolamento Mycoplasma pulmonis e Mycoplasma arthritidis em ratos de laboratório e a detecção destas espécies por meio da PCR em ratos e funcionários de diferentes biotérios. Foram positivas para Mycoplasma pulmonis 144 (60%) amostras de lavado traqueal de ratos na cultura e 155 (64,58%) pela PCR espécie especifica. Mycoplasma arthritidis não foi isolado e detectado em nenhuma amostra analisada. M. pulmonis foi detectado em quatro (10%) amostras de funcionários que não mantinham contato direto com os ratos, sendo uma do biotério 1 e três do biotério 4. Dos bioteristas que mantinham contato direto, 24 (77,4%) foram negativos nas duas coletas, 4 (12,9%) foram positivos após o manejo dos animais, 2 (6,5%) foram positivos em ambas as coletas e 1 (3,2%) foi positivo somente antes da higienização das caixas. Estes resultados mostram que pessoas que trabalham em biotérios estão expostas a tal agente podendo servir como veículo de transmissão

Mycoplasma pulmonis and Mycoplasma arthritidis are species usually isolated from laboratory rats, causing losses and modifying results of research that use such animals. Mycoplasma pulmonis inhabit primary the respiratory tract, nasopharynx, and middle ear of murines causing the murine respiratory mycoplasmosis (MRM). In general, aerosols perform the transmission, which allows the spreading of this agent to all facilities departments and to technicians. Mycoplasma arthritidis can be recovered from the oropharynx of these animals, but its occurrence is rare. Mycoplasmas usually exhibit a rather strict host and tissue specificity, probably reflecting their nutritionally exacting nature and obligate parasitic mode of life. However, there are numerous examples of the presence of mycoplasmas in hosts and tissue different from their normal habitats. The aim of this study was to recovery Mycoplasma pulmonis and Mycoplasma arthritidis from laboratory rats and detection of these species by PCR in rats and technicians from distinct facilities. 144 (60%) samples of tracheal washed of rats were positives in culture to Mycoplasma pulmonis and 155 (64,58%) by specific PCR. Mycoplasma arthritidis was nor isolated, neither detected in any samples. M. pulmonis was detected in four (10%) of the samples collected from the technicians who did not maintain direct contact with rats, being one sample from facility 1 and three samples from facility 3. Regarding to technicians who keep direct contact, 24 (77,4%) were negatives on the two collects, 4 (12,9%) were positives after manipulating animals, 2 (6,5%) were positives in both collects, before and after treatment of animals and 1 (3,2%) was positive before cleaning the boxes. These results showed that people who work in facilities are exposed to this agent and can become a revervoirs of infection