Location, distribution, and quantification of myenteric plexus neurons of the jejunum of quails fed with different levels of commercial Macleaya cordata extract / Localização, distribuição e quantificação dos neurônios do plexo mioentérico do jejuno de codornas de postura alimentadas com diferentes inclusões do extrato comercial de Macleaya cordata

ABSTRACT: Coturniculture has been promising, progressing from a subsistence to a technical activity due to its quick production, low breeding investment, and rapid economic return. After the restriction of antimicrobials as growth promoters, some studies aimed to evaluate alternative products that would make the farming of healthy birds viable without impacting their performance, with commercial Macleaya cordata extract being one of these substitutes. The functions of the gastrointestinal tract are coordinated mainly by the enteric nervous system, and the myenteric plexus is responsible for the reflex control of contractile activities of the external muscles. Thus, this study located and demonstrated the distribution of the myenteric plexus, quantifing the total population of myenteric neurons (Giemsa+) and the subpopulation of myenteric nitrergic neurons (NADPH-d+), and evaluated the effects of commercial Macleaya cordata extract on these populations of quail jejunum neurons. A total of 240 one-day-old female laying quails were distributed into four treatments, with four repetitions of 15 birds each. The test groups (T1, T2, and T3) were treated with commercial Macleaya cordata extract throughout the experimental period using the following doses: T1 - test group, basal diet added with 150 ppm of the extract in the feed; T2- test group, basal diet added with100 ppm of the extract in the feed; T3 - test group, basal diet added with 50 ppm of the extract in the feed; and T4 - control group, basal diet with no added extract. The study included histological analysis, Giemsa+, and NADPH-d+ myenteric neuron staining. The results showed that the myenteric plexus is located between longitudinal layer fibers and in the transition region between the longitudinal and circular layers of the muscular tunic, with the myenteric population organized into ganglia and isolated in the region of neuronal fiber bundles. The commercial Macleaya cordata extract showed no quantitative changes in the myenteric Giemsa+ population and myenteric NADPH-d+ subpopulation, however, the groups that consumed the extract showed greater NADPH-d+ neuron activity compared to the control group, implying that the food remained longer in the intestinal lumen, therefore, enabling greater nutrient use and resulting in increased productive performance.

RESUMO: A coturnicultura tem apresentado características promissoras, deixando de ser uma atividade de subsistência e ocupando patamares tecnificados devido a sua precocidade produtiva, baixo investimento de criação e rápido retorno econômico. A partir da restrição da utilização de antimicrobianos como promotores de crescimento, estudos foram direcionados com o objetivo de se avaliar produtos alternativos que viabilizassem a criação de aves saudáveis, sem comprometer seu desempenho, sendo o extrato comercial da Macleaya cordata um destes substitutos. As funções do trato gastrintestinal são coordenadas principalmente pelo sistema nervoso entérico, sendo o plexo mioentérico responsável pelo controle reflexo das atividades contráteis da musculatura externa. Desta forma, o presente trabalho teve como objetivo localizar e demonstrar a distribuição do plexo mioentérico, quantificar a população total de neurônios mioentéricos (Giemsa+), e a subpopulação de neurônios mioentéricos nitrérgicos (NADPH-d+), além de avaliar os efeitos do extrato comercial da Macleaya cordata sobre estas populações de neurônios do jejuno de codornas. Foram alojadas 240 codornas de postura, fêmeas, com um dia de idade, distribuídas aleatoriamente em quatro tratamentos, com quatro repetições de 15 aves cada. Os grupos testes (T1, T2 e T3) foram tratados com extrato comercial de Macleaya cordata durante todo o período experimental conforme as doses indicadas, sendo: T1 - grupo teste, com dieta basal adicionada de 150 ppm do extrato na ração; T2 - grupo teste, com dieta basal adicionada de 100 ppm do extrato na ração; T3 - grupo teste, com dieta basal adicionada de 50 ppm do extrato na ração, e T4 - grupo controle, com dieta basal isenta do extrato. Foram realizadas análise histológica e a marcação dos neurônios mioentéricos Giemsa+ e NADPH-d+. Os resultados demonstraram que o plexo mioentérico está localizado entre as fibras do estrato longitudinal, e na região de transição entre os estratos longitudinal e circular da túnica muscular, estando a população mioentérica organizada em gânglios, e também isoladamente na região dos feixes das fibras neuronais. O extrato comercial da Macleaya cordata não alterou quantitativamente os neurônios da população mioentérica Giemsa+ e da subpopulação mioentérica NADPH-d+, mas os grupos que consumiram o extrato apresentaram maior atividade dos neurônios NADPH-d+ em relação ao grupo controle, permitindo inferir que o alimento permaneceu maior tempo no lúmen intestinal e, portanto, possibilitou um maior aproveitamento dos nutrientes, podendo refletir em melhor desempenho produtivo.

Location, distribution, and quantification of myenteric plexus neurons of the jejunum of quails fed with different levels of commercial Macleaya cordata extract / Localização, distribuição e quantificação dos neurônios do plexo mioentérico do jejuno de codornas de postura alimentadas com diferentes inclusões do extrato comercial de Macleaya cordata

Coturniculture has been promising, progressing from a subsistence to a technical activity due to its quick production, low breeding investment, and rapid economic return. After the restriction of antimicrobials as growth promoters, some studies aimed to evaluate alternative products that would make the farming of healthy birds viable without impacting their performance, with commercial Macleaya cordata extract being one of these substitutes. The functions of the gastrointestinal tract are coordinated mainly by the enteric nervous system, and the myenteric plexus is responsible for the reflex control of contractile activities of the external muscles. Thus, this study located and demonstrated the distribution of the myenteric plexus, quantifing the total population of myenteric neurons (Giemsa+) and the subpopulation of myenteric nitrergic neurons (NADPH-d+), and evaluated the effects of commercial Macleaya cordata extract on these populations of quail jejunum neurons. A total of 240 one-day-old female laying quails were distributed into four treatments, with four repetitions of 15 birds each. The test groups (T1, T2, and T3) were treated with commercial Macleaya cordata extract throughout the experimental period using the following doses: T1 - test group, basal diet added with 150 ppm of the extract in the feed; T2- test group, basal diet added with100 ppm of the extract in the feed; T3 - test group, basal diet added with 50 ppm of the extract in the feed; and T4 - control group, basal diet with no added extract. The study included histological analysis, Giemsa+, and NADPH-d+ myenteric neuron staining. The results showed that the myenteric plexus is located between longitudinal layer fibers and in the transition region between the longitudinal and circular layers of the muscular tunic, with the myenteric population organized into ganglia and [...].

A coturnicultura tem apresentado características promissoras, deixando de ser uma atividade de subsistência e ocupando patamares tecnificados devido a sua precocidade produtiva, baixo investimento de criação e rápido retorno econômico. A partir da restrição da utilização de antimicrobianos como promotores de crescimento, estudos foram direcionados com o objetivo de se avaliar produtos alternativos que viabilizassem a criação de aves saudáveis, sem comprometer seu desempenho, sendo o extrato comercial da Macleaya cordata um destes substitutos. As funções do trato gastrintestinal são coordenadas principalmente pelo sistema nervoso entérico, sendo o plexo mioentérico responsável pelo controle reflexo das atividades contráteis da musculatura externa. Desta forma, o presente trabalho teve como objetivo localizar e demonstrar a distribuição do plexo mioentérico, quantificar a população total de neurônios mioentéricos (Giemsa+), e a subpopulação de neurônios mioentéricos nitrérgicos (NADPH-d+), além de avaliar os efeitos do extrato comercial da Macleaya cordata sobre estas populações de neurônios do jejuno de codornas. Foram alojadas 240 codornas de postura, fêmeas, com um dia de idade, distribuídas aleatoriamente em quatro tratamentos, com quatro repetições de 15 aves cada. Os grupos testes (T1, T2 e T3) foram tratados com extrato comercial de Macleaya cordata durante todo o período experimental conforme as doses indicadas, sendo: T1 - grupo teste, com dieta basal adicionada de 150 ppm do extrato na ração; T2 - grupo teste, com dieta basal adicionada de 100 ppm do extrato na ração; T3 - grupo teste, com dieta basal adicionada de 50 ppm do extrato na ração, e T4 - grupo controle, com dieta basal isenta do extrato. Foram realizadas análise histológica e a marcação dos neurônios mioentéricos Giemsa+ e NADPH-d+. Os resultados demonstraram que o plexo mioentérico está localizado entre as fibras do [...].

Location, distribution, and quantification of myenteric plexus neurons of the jejunum of quails fed with different levels of commercial Macleaya cordata extract / Localização, distribuição e quantificação dos neurônios do plexo mioentérico do jejuno de codornas de postura alimentadas com diferentes inclusões do extrato comercial de Macleaya cordata

Coturniculture has been promising, progressing from a subsistence to a technical activity due to its quick production, low breeding investment, and rapid economic return. After the restriction of antimicrobials as growth promoters, some studies aimed to evaluate alternative products that would make the farming of healthy birds viable without impacting their performance, with commercial Macleaya cordata extract being one of these substitutes. The functions of the gastrointestinal tract are coordinated mainly by the enteric nervous system, and the myenteric plexus is responsible for the reflex control of contractile activities of the external muscles. Thus, this study located and demonstrated the distribution of the myenteric plexus, quantifing the total population of myenteric neurons (Giemsa+) and the subpopulation of myenteric nitrergic neurons (NADPH-d+), and evaluated the effects of commercial Macleaya cordata extract on these populations of quail jejunum neurons. A total of 240 one-day-old female laying quails were distributed into four treatments, with four repetitions of 15 birds each. The test groups (T1, T2, and T3) were treated with commercial Macleaya cordata extract throughout the experimental period using the following doses: T1 - test group, basal diet added with 150 ppm of the extract in the feed; T2- test group, basal diet added with100 ppm of the extract in the feed; T3 - test group, basal diet added with 50 ppm of the extract in the feed; and T4 - control group, basal diet with no added extract. The study included histological analysis, Giemsa+, and NADPH-d+ myenteric neuron staining. The results showed that the myenteric plexus is located between longitudinal layer fibers and in the transition region between the longitudinal and circular layers of the muscular tunic, with the myenteric population organized into ganglia and [...].(AU)

A coturnicultura tem apresentado características promissoras, deixando de ser uma atividade de subsistência e ocupando patamares tecnificados devido a sua precocidade produtiva, baixo investimento de criação e rápido retorno econômico. A partir da restrição da utilização de antimicrobianos como promotores de crescimento, estudos foram direcionados com o objetivo de se avaliar produtos alternativos que viabilizassem a criação de aves saudáveis, sem comprometer seu desempenho, sendo o extrato comercial da Macleaya cordata um destes substitutos. As funções do trato gastrintestinal são coordenadas principalmente pelo sistema nervoso entérico, sendo o plexo mioentérico responsável pelo controle reflexo das atividades contráteis da musculatura externa. Desta forma, o presente trabalho teve como objetivo localizar e demonstrar a distribuição do plexo mioentérico, quantificar a população total de neurônios mioentéricos (Giemsa+), e a subpopulação de neurônios mioentéricos nitrérgicos (NADPH-d+), além de avaliar os efeitos do extrato comercial da Macleaya cordata sobre estas populações de neurônios do jejuno de codornas. Foram alojadas 240 codornas de postura, fêmeas, com um dia de idade, distribuídas aleatoriamente em quatro tratamentos, com quatro repetições de 15 aves cada. Os grupos testes (T1, T2 e T3) foram tratados com extrato comercial de Macleaya cordata durante todo o período experimental conforme as doses indicadas, sendo: T1 - grupo teste, com dieta basal adicionada de 150 ppm do extrato na ração; T2 - grupo teste, com dieta basal adicionada de 100 ppm do extrato na ração; T3 - grupo teste, com dieta basal adicionada de 50 ppm do extrato na ração, e T4 - grupo controle, com dieta basal isenta do extrato. Foram realizadas análise histológica e a marcação dos neurônios mioentéricos Giemsa+ e NADPH-d+. Os resultados demonstraram que o plexo mioentérico está localizado entre as fibras do [...].(AU)

Quantification of the neurons of myenteric plexus of the bat molossus rufus / Quantificação dos neurônios do plexo mientérico de morcegos da espécie Molossus rufus

There are no studies that characterize the enteric nervous system (ENS) bats. The organization and density of myenteric neurons may vary according to the animal species, as well as the segment of the digestive tube considered. The nitric oxide is one of the key neurotransmitters present in the myenteric neurons, acting as a mediator in the smooth muscle relaxation. These neurons are evidenced by immunohistochemistry of nitric oxide synthase (NOS) or by NADPH-diaphorase histochemistry. In this sense, this study aimed to characterize the total neuronal population and subpopulation NADPH-d+ of the myenteric plexus present in the jejunum of the insectivore species Molossus rufus quantitatively. Five specimens were collected of M. rufus in a buffer area of the "Reserva Biológica das Perobas" in the microregion of Cianorte/PR. After the euthanasia, in a chamber saturated with isoflurane, segments were collected from the small intestine corresponding to the jejunum intended for two techniques for neuronal marking, Giemsa and NADPH-diaphorase, and a fragment to the histological technique of hematoxylin-eosin and Masson's trichrome. All the procedures were approved by the "Comitê de Ética no Uso de Animais Unipar" (CEUA - protocol No. 34347/2017) and the "Instituto Chico Mendes de Conservação da Biodiversidade" (ICMBio - protocol No. 60061-1) The histological sections allowed to highlight the location of the myenteric plexus between the longitudinal and circular layers of the muscular tunic. The myenteric plexus had an average of total neuronal population (neurons Giemsa+) of 279.23 neurons/mm2, being the nitrergic neurons (neurons NADPH-d+) represented 20.4% of this total population, with an average of 58.14 neuron/mm2. Therefore, the collected data are consistent with previous studies in other mammalian species concerning the location of the myenteric plexus, as well as the neural myenteric proportion NADPH-d+ compared with the population of neurons Giemsa+. The gaps in the knowledge of ENS of bats limits comparative intraspecific and interspecific studies.(AU)

Não há estudos que caracterizem o sistema nervoso entérico (SNE) destes animais, configurando uma lacuna no conhecimento quanto à biologia destes indivíduos. A organização e densidade dos neurônios mientéricos podem variar de acordo com a espécie animal bem como o segmento do tubo digestório considerado. O óxido nítrico é um dos principais neurotransmissores presentes nos neurônios mientéricos, atuando como mediador no relaxamento do músculo liso gastrointestinal, de modo que estes neurônios são evidenciados igualmente pela imunohistoquímica da óxido nítrico-sintase (NOS) ou pela histoquímica da NADPH-diaforase. Neste sentido, objetivou-se caracterizar quantitativamente a população neuronal total e subpopulação NADPH-d+ do plexo mientérico presente no jejuno da espécie Molossus rufus de hábito alimentar insetívoro. Foram coletados cinco espécimes de M. rufus em área de amortecimento da Reserva Biológica das Perobas na microrregião de Cianorte/PR. Após a eutanásia, em câmara saturada com isoflurano, foram coletados segmentos do intestino delgado correspondentes ao jejuno destinados a duas técnicas para marcação neuronal, Giemsa e NADPH-diaforase e, um fragmento para a técnica histológica de hematoxilina-eosina e tricômio de Masson. Todos os procedimentos realizados foram aprovados pelo Comitê de Ética no Uso de Animais da Unipar (CEUA - protocolo nº 34347/2017) e pelo Instituto Chico Mendes de Conservação da Biodiversidade (ICMBio - protocolo nº 60061-1) Os cortes histológicos possibilitaram evidenciar a localização do plexo mientérico entre os estratos longitudinal e circular da túnica muscular. Neurônios Giemsa+ apresentaram uma média de 279,23 neurônios/mm2, já os neurônios nitrérgicos apresentaram em média 20,4% da população neuronal mientérica total, sendo evidenciados 58,14 neurônios NADPH-d+/mm2. Portanto, os dados coletados mostram-se condizentes com estudos anteriores em outras espécies de mamíferos quanto à localização do plexo mientérico, bem como, a proporção neuronal mientérica NADPH-d+ comparada com a população de neurônios Giemsa+. As lacunas existentes quanto ao conhecimento do SNE de morcegos limita possíveis inferências em comparativo intraespecífico e interespecífico.(AU)

Quantification of the neurons of myenteric plexus of the bat molossus rufus / Quantificação dos neurônios do plexo mientérico de morcegos da espécie Molossus rufus

There are no studies that characterize the enteric nervous system (ENS) bats. The organization and density of myenteric neurons may vary according to the animal species, as well as the segment of the digestive tube considered. The nitric oxide is one of the key neurotransmitters present in the myenteric neurons, acting as a mediator in the smooth muscle relaxation. These neurons are evidenced by immunohistochemistry of nitric oxide synthase (NOS) or by NADPH-diaphorase histochemistry. In this sense, this study aimed to characterize the total neuronal population and subpopulation NADPH-d+ of the myenteric plexus present in the jejunum of the insectivore species Molossus rufus quantitatively. Five specimens were collected of M. rufus in a buffer area of the "Reserva Biológica das Perobas" in the microregion of Cianorte/PR. After the euthanasia, in a chamber saturated with isoflurane, segments were collected from the small intestine corresponding to the jejunum intended for two techniques for neuronal marking, Giemsa and NADPH-diaphorase, and a fragment to the histological technique of hematoxylin-eosin and Masson's trichrome. All the procedures were approved by the "Comitê de Ética no Uso de Animais Unipar" (CEUA - protocol No. 34347/2017) and the "Instituto Chico Mendes de Conservação da Biodiversidade" (ICMBio - protocol No. 60061-1) The histological sections allowed to highlight the location of the myenteric plexus between the longitudinal and circular layers of the muscular tunic. The myenteric plexus had an average of total neuronal population (neurons Giemsa+) of 279.23 neurons/mm2, being the nitrergic neurons (neurons NADPH-d+) represented 20.4% of this total population, with an average of 58.14 neuron/mm2. Therefore, the collected data are consistent with previous studies in other mammalian species concerning the location of the myenteric plexus, as well as the neural myenteric proportion NADPH-d+ compared with the population of neurons Giemsa+. The gaps in the knowledge of ENS of bats limits comparative intraspecific and interspecific studies.(AU)

Não há estudos que caracterizem o sistema nervoso entérico (SNE) destes animais, configurando uma lacuna no conhecimento quanto à biologia destes indivíduos. A organização e densidade dos neurônios mientéricos podem variar de acordo com a espécie animal bem como o segmento do tubo digestório considerado. O óxido nítrico é um dos principais neurotransmissores presentes nos neurônios mientéricos, atuando como mediador no relaxamento do músculo liso gastrointestinal, de modo que estes neurônios são evidenciados igualmente pela imunohistoquímica da óxido nítrico-sintase (NOS) ou pela histoquímica da NADPH-diaforase. Neste sentido, objetivou-se caracterizar quantitativamente a população neuronal total e subpopulação NADPH-d+ do plexo mientérico presente no jejuno da espécie Molossus rufus de hábito alimentar insetívoro. Foram coletados cinco espécimes de M. rufus em área de amortecimento da Reserva Biológica das Perobas na microrregião de Cianorte/PR. Após a eutanásia, em câmara saturada com isoflurano, foram coletados segmentos do intestino delgado correspondentes ao jejuno destinados a duas técnicas para marcação neuronal, Giemsa e NADPH-diaforase e, um fragmento para a técnica histológica de hematoxilina-eosina e tricômio de Masson. Todos os procedimentos realizados foram aprovados pelo Comitê de Ética no Uso de Animais da Unipar (CEUA - protocolo nº 34347/2017) e pelo Instituto Chico Mendes de Conservação da Biodiversidade (ICMBio - protocolo nº 60061-1) Os cortes histológicos possibilitaram evidenciar a localização do plexo mientérico entre os estratos longitudinal e circular da túnica muscular. Neurônios Giemsa+ apresentaram uma média de 279,23 neurônios/mm2, já os neurônios nitrérgicos apresentaram em média 20,4% da população neuronal mientérica total, sendo evidenciados 58,14 neurônios NADPH-d+/mm2. Portanto, os dados coletados mostram-se condizentes com estudos anteriores em outras espécies de mamíferos quanto à localização do plexo mientérico, bem como, a proporção neuronal mientérica NADPH-d+ comparada com a população de neurônios Giemsa+. As lacunas existentes quanto ao conhecimento do SNE de morcegos limita possíveis inferências em comparativo intraespecífico e interespecífico.(AU)

Brief topical and intraluminal use of Carolina rinse solution does not attenuate experimental ischemia and reperfusion injury in rabbit jejunum / [O uso tópico breve e intraluminal da solução de Carolina rinse não atenua a injúria de isquemia e reperfusão experimental no jejuno de coelhos ]

Fifteen New Zealand adult rabbits were randomly allocated into three groups: Sham-operated (group A), Ischemia and Reperfusion (group B) and Carolina Rinse Solution (CRS) (group C). Groups B and C were subjected to one hour of ischemia and two hours of reperfusion. In group C, ten minutes before reperfusion, the bowel lumen was filled with CRS, and the segment immersed in CRS. Necrosis and loss of integrity of the villi were visible in groups B and C. Edema of the submucosa and circular muscle was observed in all groups. Hemorrhage was observed in different layers for groups B and C, but group C showed more severe hemorrhage in different layers during reperfusion. All groups showed polymorphonuclear leukocyte infiltration on the base of the mucosa, submucosa, and longitudinal muscle, in addition to polymorphonuclear leukocytes margination in the mucosal and submucosal vessels. Necrosis of enterocytes, muscles, crypts of Lieberkühn and myenteric plexus was observed in groups B and C during reperfusion. Topical and intraluminal Carolina Rinse Solution did not attenuate the effects of ischemia and reperfusion in the small intestine of rabbits.(AU)

Quinze coelhos da raça Nova Zelândia foram alocados em três grupos: instrumentado (grupo A), isquemia e reperfusão (grupo B) e solução de Carolina rinse (CRS) (grupo C). Os grupos B e C foram submetidos a uma hora de isquemia e a duas horas de reperfusão. No grupo C, 10 minutos antes da reperfusão, o segmento isolado foi imerso e teve seu lúmen preenchido com CRS. Os grupos B e C apresentaram necrose e perda progressiva da integridade das vilosidades. Foi observado edema na submucosa e na camada muscular circular em todos os grupos. Nos grupos B e C, foi observada hemorragia em diferentes camadas, mas, no grupo C, a hemorragia foi mais intensa durante a reperfusão. Todos os grupos apresentaram infiltrado de PMN na base da mucosa, na submucosa e na camada muscular longitudinal e marginação de PMN nos vasos da mucosa e da submucosa. Durante a reperfusão, foi observada necrose dos enterócitos, das camadas musculares, das criptas de Lieberkühn e do plexo mioentérico nos grupos B e C. O uso tópico e intraluminal de CRS não atenuou os efeitos da isquemia e da reperfusão no intestino delgado de coelhos.(AU)

Brief topical and intraluminal use of Carolina rinse solution does not attenuate experimental ischemia and reperfusion injury in rabbit jejunum / [O uso tópico breve e intraluminal da solução de Carolina rinse não atenua a injúria de isquemia e reperfusão experimental no jejuno de coelhos]

Fifteen New Zealand adult rabbits were randomly allocated into three groups: Sham-operated (group A), Ischemia and Reperfusion (group B) and Carolina Rinse Solution (CRS) (group C). Groups B and C were subjected to one hour of ischemia and two hours of reperfusion. In group C, ten minutes before reperfusion, the bowel lumen was filled with CRS, and the segment immersed in CRS. Necrosis and loss of integrity of the villi were visible in groups B and C. Edema of the submucosa and circular muscle was observed in all groups. Hemorrhage was observed in different layers for groups B and C, but group C showed more severe hemorrhage in different layers during reperfusion. All groups showed polymorphonuclear leukocyte infiltration on the base of the mucosa, submucosa, and longitudinal muscle, in addition to polymorphonuclear leukocytes margination in the mucosal and submucosal vessels. Necrosis of enterocytes, muscles, crypts of Lieberkühn and myenteric plexus was observed in groups B and C during reperfusion. Topical and intraluminal Carolina Rinse Solution did not attenuate the effects of ischemia and reperfusion in the small intestine of rabbits.(AU)

Quinze coelhos da raça Nova Zelândia foram alocados em três grupos: instrumentado (grupo A), isquemia e reperfusão (grupo B) e solução de Carolina rinse (CRS) (grupo C). Os grupos B e C foram submetidos a uma hora de isquemia e a duas horas de reperfusão. No grupo C, 10 minutos antes da reperfusão, o segmento isolado foi imerso e teve seu lúmen preenchido com CRS. Os grupos B e C apresentaram necrose e perda progressiva da integridade das vilosidades. Foi observado edema na submucosa e na camada muscular circular em todos os grupos. Nos grupos B e C, foi observada hemorragia em diferentes camadas, mas, no grupo C, a hemorragia foi mais intensa durante a reperfusão. Todos os grupos apresentaram infiltrado de PMN na base da mucosa, na submucosa e na camada muscular longitudinal e marginação de PMN nos vasos da mucosa e da submucosa. Durante a reperfusão, foi observada necrose dos enterócitos, das camadas musculares, das criptas de Lieberkühn e do plexo mioentérico nos grupos B e C. O uso tópico e intraluminal de CRS não atenuou os efeitos da isquemia e da reperfusão no intestino delgado de coelhos.(AU)

A new experimental model of intrinsic denervation in ileum from wistar rats through intramural microinjections of benzalkonium chloride / Um novo modelo experimental de desnervação intrínseca em íleo de ratos wistar através de micro injeções intramurais de cloreto de benzalcônio

Extensive literature is available about the intrinsic denervation of segments of the digestive tube through the application of CB in the serosa of the viscera. However, this technique has some disadvantages like causing peritonitis, flanges and high mortality, limiting its use in humans. The aim of the present study was to evaluate the feasibility of benzalkonium chloride (CB) to induce intrinsic chemical denervation, through applications of CB in the intramural ileum of wistar rats, as well as deepen the knowledge about the evolution of neuronal injury caused in the process. We used 40 rats, divided into two groups (control-GC and benzalkonium-GB) of 20 animals each, divided into four sub-groups according to the time of postoperative assessment of 24, 48 hours, 30 and 90 days. The animals were submitted to intramural microinjections of sterile saline solution 0.9% (GC) or benzalkonium chloride (GB) in ileal portion, and subsequent histopathological analysis and immunohistochemistry for evaluation of neuronal injury. A significant decrease (p<0.05) was found of the neuronal myenteric count over time in groups, GB3, GB4 and GB2. The specific positive immunolabeling for H2AX and Caspase-3 confirmed the results obtained in the histopathological evaluation, denoting the ignition of irreversible cell injury in 24 hours, evolving into neuronal apoptosis in 48 hours after application of the CB 0.3%. Under the conditions in which this work was conducted, it can be concluded that the application of CB 0.3% by means of microinjections intramural in the ileal wall is able to induce intrinsic chemical denervation of the diverticulum of wistar rats and that the main mechanism of neuronal death is induction of apoptosis.(AU)

Existe vasta literatura sobre a desnervação intrínseca de segmentos do tubo digestório através da aplicação de CB na serosa da víscera. Entretanto, essa técnica tem a desvantagem de causar peritonite, formação de bridas e alta mortalidade, não sendo factível para eventuais utilizações em humanos. O objetivo do presente estudo foi avaliar a viabilidade do Cloreto de benzalcônio (CB) induzir desnervação química intrínseca, por meio de aplicações intramurais em íleo de ratos wistar, além de aprofundar o conhecimento sobre a evolução da lesão neuronal causada neste processo. Foram utilizados 40 ratos, distribuídos em dois grupos (controle- GC e benzalcônio- GB) de 20 animais cada, subdivididos em quatro subgrupos de acordo com o tempo de avaliação pós-operatória de 24, 48 horas, 30 e 90 dias. Os animais foram submetidos à microinjeções intramurais de solução salina estéril 0,9% (GC) ou de cloreto de benzalcônio (GB) em porção ileal, e posterior análise histopatológica e imuno-histoquímica, para avaliação da lesão neuronal. Houve diminuição significativa (p<0,05) na contagem neuronal mientérica ao longo do tempo nos grupos GB2, GB3 e GB4. A imunomarcação específica positiva para H2AX e Caspase-3 confirmou os resultados obtidos na avaliação histopatológica, denotando início da lesão celular irreversível em 24 horas, evoluindo para apoptose neuronal em 48 horas após a aplicação do CB 0,3%. Nas condições em que este trabalho foi conduzido, é possível concluir que a aplicação de CB 0,3% por meio de microinjeções intramurais na parede ileal é capaz de induzir desnervação química intrínseca da porção ileal de ratos wistar e que o principal mecanismo de morte neuronal é a indução de apoptose.(AU)

A new experimental model of intrinsic denervation in ileum from wistar rats through intramural microinjections of benzalkonium chloride / Um novo modelo experimental de desnervação intrínseca em íleo de ratos wistar através de micro injeções intramurais de cloreto de benzalcônio

Extensive literature is available about the intrinsic denervation of segments of the digestive tube through the application of CB in the serosa of the viscera. However, this technique has some disadvantages like causing peritonitis, flanges and high mortality, limiting its use in humans. The aim of the present study was to evaluate the feasibility of benzalkonium chloride (CB) to induce intrinsic chemical denervation, through applications of CB in the intramural ileum of wistar rats, as well as deepen the knowledge about the evolution of neuronal injury caused in the process. We used 40 rats, divided into two groups (control-GC and benzalkonium-GB) of 20 animals each, divided into four sub-groups according to the time of postoperative assessment of 24, 48 hours, 30 and 90 days. The animals were submitted to intramural microinjections of sterile saline solution 0.9% (GC) or benzalkonium chloride (GB) in ileal portion, and subsequent histopathological analysis and immunohistochemistry for evaluation of neuronal injury. A significant decrease (p<0.05) was found of the neuronal myenteric count over time in groups, GB3, GB4 and GB2. The specific positive immunolabeling for H2AX and Caspase-3 confirmed the results obtained in the histopathological evaluation, denoting the ignition of irreversible cell injury in 24 hours, evolving into neuronal apoptosis in 48 hours after application of the CB 0.3%. Under the conditions in which this work was conducted, it can be concluded that the application of CB 0.3% by means of microinjections intramural in the ileal wall is able to induce intrinsic chemical denervation of the diverticulum of wistar rats and that the main mechanism of neuronal death is induction of apoptosis.(AU)

Existe vasta literatura sobre a desnervação intrínseca de segmentos do tubo digestório através da aplicação de CB na serosa da víscera. Entretanto, essa técnica tem a desvantagem de causar peritonite, formação de bridas e alta mortalidade, não sendo factível para eventuais utilizações em humanos. O objetivo do presente estudo foi avaliar a viabilidade do Cloreto de benzalcônio (CB) induzir desnervação química intrínseca, por meio de aplicações intramurais em íleo de ratos wistar, além de aprofundar o conhecimento sobre a evolução da lesão neuronal causada neste processo. Foram utilizados 40 ratos, distribuídos em dois grupos (controle- GC e benzalcônio- GB) de 20 animais cada, subdivididos em quatro subgrupos de acordo com o tempo de avaliação pós-operatória de 24, 48 horas, 30 e 90 dias. Os animais foram submetidos à microinjeções intramurais de solução salina estéril 0,9% (GC) ou de cloreto de benzalcônio (GB) em porção ileal, e posterior análise histopatológica e imuno-histoquímica, para avaliação da lesão neuronal. Houve diminuição significativa (p<0,05) na contagem neuronal mientérica ao longo do tempo nos grupos GB2, GB3 e GB4. A imunomarcação específica positiva para H2AX e Caspase-3 confirmou os resultados obtidos na avaliação histopatológica, denotando início da lesão celular irreversível em 24 horas, evoluindo para apoptose neuronal em 48 horas após a aplicação do CB 0,3%. Nas condições em que este trabalho foi conduzido, é possível concluir que a aplicação de CB 0,3% por meio de microinjeções intramurais na parede ileal é capaz de induzir desnervação química intrínseca da porção ileal de ratos wistar e que o principal mecanismo de morte neuronal é a indução de apoptose.(AU)

The role of ischemic preconditioning in the expression of apoptosis-related genes in a rat model of intestinal ischemia-reperfusion injury

Purpose: To analyze the effects of ischemic preconditioning (IPC) in the expression of apoptosis-related genes in rat small intestine subjected to ischemia and reperfusion.Methods: Thirty anesthetized rats underwent laparotomy and were drive into five groups: control (CG); ischemia (IG); ischemia and reperfusion (IRG); IPC and ischemia (IG+IPC); IPC and ischemia and reperfusion (I/RG+IPC). Intestinal ischemia was performed by clamping the superior mesenteric artery for 60 minutes, whereas reperfusion lasted for 120 minutes. IPC was carried out by one cycle of 5 minutes of ischemia followed by 10 minutes of reperfusion prior to the prolonged 60-minutes-ischemia and 120-minutes-reperfusion. Thereafter, the rats were euthanized and samples of small intestine were processed for histology and gene expression. Results: Histology of myenteric plexus showed a higher presence of neurons presenting pyknotic nuclei and condensed chromatin in the IG and IRG. IG+IPC and I/RG+IPC groups exhibited neurons with preserved volume and nuclei, along with significant up-regulation of the anti-apoptotic protein Bcl2l1 and down-regulation of pro-apoptotic genes. Moreover, Bax/Bcl2 ratio was lower in the groups subjected to IPC, indicating a protective effect of IPC against apoptosis. Conclusion: Ischemic preconditioning protect rat small intestine against ischemia/reperfusion injury, reducing morphologic lesions and apoptosis.(AU)

Different inoculum loads of Toxoplasma gondii induce reduction of myenteric neurons of the rat colon / Diferentes inóculos de Toxoplasma gondii induzem a redução de neurônios mioentéricos no cólon de ratos

Toxoplasmosis, a disease caused by Toxoplasma gondii, is an important health problem, especially in immunocompromised hosts. T. gondii uses the gut wall as an infection gateway, with tropism for muscular and nervous tissues causing intestinal alterations, including some in the enteric nervous system. This study aims at investigating the colon of rats infected by T. gondii in order to understand how the amount of oocysts influences in myenteric neuronal changes. Sixty Wistar rats (Rattus norvegicus) were divided into six groups. One group remained as a control and the others received inocula of 10, 50, 100, 500 or 5,000 oocysts of T. gondii. The animals were euthanized after 30 days of infection. The total neuronal population and the nitrergic subpopulation in the colon myenteric plexus of each animal was counted. The data were statistically analyzed showing less weight gain in rats with 10, 500 and 5,000 oocysts. A decrease in the number of total neurons with 50, 100 or 5,000 oocysts and an increase in the nitrergic population with 10, 100, 500 or 5,000 oocysts were verified. These results show that neuronal alterations are more significant when the infection is induced by larger inocula and reinforces the suspicion that neuronal loss is directed at cholinergic neurons.(AU)

A toxoplasmose, doença causada pelo Toxoplasma gondii, é um importante problema de saúde, principalmente em imunocomprometidos. T. gondii utiliza a parede do intestino como porta de entrada no hospedeiro e tem tropismo pelos tecidos muscular e nervoso provocando alterações intestinais, inclusive no sistema nervoso entérico. Este estudo buscou analisar o cólon de ratos infectados por T. gondii para entender como a quantidade de oocistos influencia nas alterações neuronais mientéricas. Foram utilizados 60 ratos Wistar (Rattus norvegicus) em seis grupos. Um dos grupos permaneceu como controle e os demais receberam inóculos de 10, 50, 100, 500 ou 5.000 oocistos de T. gondii. Os animais foram submetidos a eutanásia após 30 dias de infecção. No plexo mientérico do cólon dos animais foram quantificadas a população neuronal total e a subpopulação nitrérgica. Os dados foram analisados estatisticamente demonstrando inferior ganho de peso nos ratos com 10, 500 e 5.000 oocistos. Verificamos diminuição no número de neurônios totais com inóculos de 50, 100 ou 5.000 oocistos e aumento da população nitrérgica com 10, 100, 500 ou 5000 oocistos. Estes resultados mostram que alterações neuronais são mais significativas quando a infecção é induzida por inóculos maiores e reforça a suspeita de perda neuronal direcionada a neurônios colinérgicos.(AU)

CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS DO TUBO DIGESTÓRIO DE MORCEGOS INSETÍVOROS DA ESPÉCIE Molossus rufus DA REGIÃO NOROESTE DO ESTADO DO PARANÁ, BRASIL

Estudos em diversas áreas relacionadas a biologia das espécies de morcegos, até o presente momento, são escassos sobre a morfologia do tubo digestório da espécie Molossus rufus. O presente trabalho objetivou avaliar alguns aspectos morfológicos da parede do tubo digestório da cavidade abdominal de morcegos da espécie Molossus rufus oriundos da região noroeste do estado do Paraná. Para isso foram capturados cinco exemplares machos, da espécie Molossus rufus, autorizada pelo Instituto Chico Mendes da Biodiversidade (ICMBio - SisBio No 60061-1), mediante aprovação do Comitê de Ética (protocolo n. 34563/2018) da Universidade Paranaense. As coletas foram realizadas em uma área situada na região noroeste do estado do Paraná, Brasil. Após a captura os animais foram identificados utilizando chave dicotômica, acondicionados e transportados em saco de algodão até o laboratório, onde os animais foram pesados e seguiram para eutanásia com supra dose de isoflurano. Em seguida os animais foram laparatomizados e os segmentos do tubo digestório foram avaliados quanto as características macroscópicas e então foram coletados e fixados em formol neutro a 10%. Após a fixação por 48horas os segmentos seguiram para o processamento histológico de rotina de emblocamento, corte e coloração. Um fragmento foi destinado as técnicas de coloração básica Giemsa, e a histoquímica da NADPH-diaforase, que permitiu avaliar o arranjo ganglionado do plexo mioentérico. Todos os segmentos foram fotografados. A localização do plexo mioentérico encontrava-se entre os estratos circular e longitudinal, na túnica muscular e os neurônios apresentavam-se em gânglios envoltos por fibras colágenas. O peso médio dos animais foi de 39,33g, o estômago com tamanho médio de 1cm e o intestino 15cm. As características macroscópicas do tubo digestório permitiram identificar o segmento esofágico na cavidade abdominal, o estômago do tipo sacular em forma de J, e o intestino delgado sendo dividido em duodeno, jejuno-íleo e íleo terminal. Quanto ao intestino grosso este foi identificado como uma dilação do órgão a partir do segmento final do intestino delgado, com trajeto único no sentido oral-aboral terminando no ânus, o qual foi denominado cólon descendente. As características morfológicas da parede de todos os segmentos podem ser comparadas aquelas descrições existentes para mamíferos, contudo, algumas peculiaridades foram observadas como a ausência de glândulas esofágicas, glândulas de Brunner do intestino, do ceco, e de apêndices. O intestino grosso não é subdivido, mas sim formado por um único segmento o cólon descendente. A localização e o arranjo do plexo mioentérico é similar a outros mamíferos. A disposição anatômica dos segmentos correspondente ao tubo digestório, bem como, o padrão tissular destes segmentos em Molossus rufus, são similares aqueles encontrados em outras espécies de morcegos insetívoras. Porém, algumas destas características chamam atenção para possíveis adaptações do tubo digestório ao hábito alimentar das espécies insetívoras, que podem ser impactadas com as ações humanas nos ambientes de forrageio, alterando as populações de insetos que naturalmente são encontradas nestes locais, podendo impactar fortemente na sobrevivência destas espécies de morcegos que são parceiras no controle biológico de insetos.

Studies in several areas related to the biology of bat species, so far, are scarce on the morphology of the digestive tube of the species Molossus rufus. This study aimed to evaluate some morphological aspects of the digestive tube wall of the abdominal cavity of Molossus rufus bats from the northwest region of the state of Paraná. For this purpose, five male specimens of the species Molossus rufus were captured, authorized by the Chico Mendes Institute of Biodiversity (ICMBio - SisBio No 60061-1), with the approval of the Ethics Committee (protocol no. 34563/2018) of the Universidade Paranaense. The collections were carried out in an area located in the northwest region of the state of Paraná, Brazil. After capture, the animals were identified using a dichotomous key, packed and transported in a cotton bag to the laboratory, where the animals were weighed and then euthanized with a supradose of isoflurane. Afterwards, the animals were laparatomized and the segments of the digestive tube were evaluated for macroscopic characteristics and then they were collected and fixed in 10% neutral formalin. After fixation for 48 hours, the segments were followed for routine histological processing of blocking, cutting and staining. A fragment was destined to Giemsa basic staining techniques, and NADPH-diaphorase histochemistry, which allowed evaluating the ganglionic arrangement of the myenteric plexus. All segments were photographed. The location of the myenteric plexus was found between the circular and longitudinal strata, in the tunica muscularis, and the neurons were in ganglia surrounded by collagen fibers. The average weight of the animals was 39.33g, the average size of the stomach was 1cm and the intestine was 15cm. The macroscopic characteristics of the digestive tube allowed the identification of the esophageal segment in the abdominal cavity, the J-shaped saccular stomach, and the small intestine being divided into duodenum, jejunum-ileum and terminal ileum. As for the large intestine, this was identified as a dilation of the organ from the final segment of the small intestine, with a single path in the oral-aboral direction, ending in the anus, which was called descending colon. The morphological characteristics of the wall of all segments can be compared to those existing descriptions for mammals, however, some peculiarities were observed as the absence of esophageal glands, Brunner's glands of intestine, cecum, and appendages. The large intestine is not subdivided, but formed by a single segment, the descending colon. The location and arrangement of the myenteric plexus is similar to other mammals. The anatomical disposition of the segments corresponding to the digestive tube, as well as the tissue pattern of these segments in Molossus rufus, are similar to those found in other species of insectivorous bats. However, some of these characteristics draw attention to possible adaptations of the digestive tube to the feeding habits of insectivorous species, which can be impacted by anthropic actions in foraging environments, changing the insect populations that are naturally found in these places, which can strongly impact survival of these bat species that are partners in the biological control of insects.

DETECÇÃO DE NEURÔNIOS DO PLEXO MIOENTÉRICO, PERFIL GLICÊMICO E LIPÍDICO, EM RATOS EXPOSTOS AOS FATORES DE RISCO DIABETES, TABAGISMO E DISLIPIDEMIA TRATADOS COM CARQUEJA

A hiperglicemia gerada pelo diabetes mellitus promove alterações fisiológicas em todo o organismo, sendo recorrente o aparecimento de distúrbios gastrintestinais nos portadores desta doença, devido ao dano ao plexo mioentérico. Além do diabetes, sabe-se que há uma relação entre o uso do tabaco e dislipidemia no sistema digestório, porém, ainda há uma lacuna no conhecimento sobre possíveis alterações nos neurônios entéricos. Algumas plantas medicinais são apontadas como terapias complementares no tratamento de doenças gastrointestinais, dentre elas, a Baccharis trimera, que possui em sua composição antioxidantes, que podem exercer efeito neuroprotetor nos neurônios do plexo mioentérico. O objetivo do presente estudo foi avaliar o possível efeito protetor da B. trimera, popularmente conhecida como carqueja, sobre os neurônios mioentéricos, perfil lipídico e glicêmico de ratos expostos ao modelo experimental com a indução do diabetes mellitus, dislipidemia e o tabagismo. Ratos machos, Wistar, com 90 dias, foram divididos em cinco grupos (n=5), (C-) animais normoglicêmicos, não dislipidêmicos e não tabagistas tratados com veículo (água filtrada), (C+) diabético, dislipidêmico e tabagista tratados com veículo (água filtrada) e animais diabéticos, dislipidêmicos e tabagistas tratados com diferentes doses de carqueja (BT30mg/kg, BT100mg/kg e BT300mg/kg). A indução do diabetes foi realizada via intraperitoneal, com 60mg/kg de estreptozotocina, a dislipidemia, pela adição de 0,5% de colesterol em ração comercial e posteriormente, expostos a inalação de fumaça de nove cigarros comerciais, uma vez por dia, cinco dias por semana, durante quatro semanas. Após 2 semanas, iniciou-se o tratamento com diferentes doses da fração solúvel em etanol de carqueja, via oral por gavagem, uma vez ao dia, por duas semanas em diferentes doses. Foi coletado sangue do plexo ocular dos animais para posteriormente verificar os níveis plasmáticos de colesterol e triglicerídeos. No intuito de quantificar a população de neurônios mioentéricos, foram realizadas as técnicas de coloração básica Giemsa, a fim de marcar a população total e a histoquímica da NADPH-diaforase, que permitiu quantificar os neurônios da subpopulação inibitória. Os animais dos grupos tratados com as diferentes doses de carqueja e C+ apresentaram redução de peso significativa. Na dose de 30mg/kg os níveis plasmáticos de colesterol e triglicerídeos foram reduzidos, porém, não houve redução da glicemia nos ratos tratados com B. trimera. Não foi observada redução neuronal significativa entre os neurônios nitrérgicos, identificados pela técnica NADPH-diaforase, contudo, pelo método de Giemsa, foi observada redução do número de neurônios, dos grupos controle positivo (C+) e os grupos tratados com carqueja (BT30, BT100 e BT300), em relação ao grupo controle negativo (C-), o que pode ter sido agravado pela inclusão do tabagismo ou da dieta hipercolesterolêmica. Assim pode-se concluir que na dose de 30mg/kg de carqueja houve redução significativa nos níveis plasmáticos de colesterol e triglicerídeos, contudo, não foi encontrada redução glicêmica em nenhum dos tratamentos. Quanto aos neurônios mioentéricos a carqueja não apresentou efeitos protetores com redução significativa na quantificação da população total, e a manutenção da subpopulação nitrérgica em todos os grupos, nos permite sugerir que estes neurônios são mais resistentes aos efeitos deletérios do diabetes, tabagismo e dieta hipercolesterolêmica.

The hyperglycemia generated by diabetes mellitus promotes physiological changes throughout the body, with the appearance of gastrointestinal disorders in patients with this disease recurring, due to damage to the myenteric plexus. In addition to diabetes, it is known that there is a relationship between tobacco use and dyslipidemia in the digestive system, however, there is still a gap in knowledge about possible changes in enteric neurons. Some medicinal plants are considered as complementary therapies in the treatment of gastrointestinal diseases, among them, Baccharis trimera, which has antioxidants in its composition, which can exert a neuroprotective effect on neurons in the myenteric plexus. The aim of the present study was to evaluate the possible protective effect of B. trimera, popularly known as gorse, on the myenteric neurons, lipid and glycemic profile of rats exposed to the experimental model with the induction of diabetes mellitus, dyslipidemia and smoking. Male, 90-day-old Wistar rats were divided into five groups (n=5), (C-) normoglycemic, non-dyslipidemic and non-smoking animals treated with vehicle (filtered water), (C+) diabetic, dyslipidemic and smoking treated with vehicle (filtered water) and diabetic, dyslipidemic animals and smokers treated with different doses of gorse (BT30mg/ kg, BT100mg/kg and BT300mg/kg). Diabetes induction was performed intraperitoneally, with 60mg/kg of streptozotocin, dyslipidemia, by the addition of 0.5% cholesterol in commercial ration and later, exposed to smoke inhalation of nine commercial cigarettes, once a day, five days a week for four weeks. After 2 weeks, treatment with different doses of the fraction soluble in gorse ethanol was started, orally by gavage, once a day, for two weeks in different doses. Blood was collected from the animals' ocular plexus to later check plasma levels of cholesterol and triglycerides. In order to quantify the population of myenteric neurons, basic Giemsa staining techniques were performed in order to mark the total population and the histochemistry of NADPH-diaphorase, which allowed quantifying the neurons of the inhibitory subpopulation. The animals in the groups treated with different doses of carqueja and C + showed significant weight reduction. At a dose of 30mg / kg, plasma levels of cholesterol and triglycerides were reduced, however, there was no reduction in blood glucose in rats treated with B. trimera. No significant neuronal reduction was observed between nitrergic neurons, identified by the NADPH-diaphorase technique, however, using the Giemsa method, a reduction in the number of neurons was observed in the positive control groups (C+) and the groups treated with gorse (BT30, BT100 and BT300), in relation to the negative control group (C-), which may have been aggravated by the inclusion of smoking or the hypercholesterolemic diet. Thus, it can be concluded that at the dose of 30mg/kg of gorse there was a significant reduction in plasma cholesterol and triglyceride levels, however, no glycemic reduction was found in any of the treatments. As for myenteric neurons, gorse did not present protective effects with significant reduction in the quantification of the total population, and the maintenance of the nitrergic subpopulation in all groups, allows us to suggest that these neurons are more resistant to the deleterious effects of diabetes, smoking and a hypercholesterolemic diet.

QUANTIFICAÇÃO DOS NEURÔNIOS DO PLEXO MIENTÉRICO DE MORCEGOS DA ESPÉCIE Molossus rufus

Morcegos da espécie Molossus rufus tem hábito alimentar insetívoro o que lhe confere um importante papel na dinâmica biológica do controle de insetos. Características do tubo digestório são marcadas pelo hábito alimentar, elucidando, além das características já conhecidas, diferenças anatomorfohistológicas, podendo inclusive exercer efeitos sobre Sistema Nervoso Entérico (SNE). O SNE está presente ao longo de todo o tubo digestório, estando os neurônios dispostos em plexos, destacando-se dentre eles o plexo mientérico, que atua no controle da motricidade, exercendo assim, influência na absorção dos nutrientes. A organização e densidade dos neurônios mientéricos podem variar de acordo com a espécie animal bem como do segmento do tubo digestório considerado. O óxido nítrico (NO) é um dos principais neurotransmissores presentes nos neurônios mientéricos, atuando como mediador no relaxamento do músculo liso gastrointestinal, de modo que estes neurônios são evidenciados igualmente pela imunohistoquímica da óxido nítrico-sintase (NOS) ou pela histoquímica da NADPH-diaforase. Neste sentido, objetivou-se caracterizar quantitativamente a população neuronal total e subpopulação NADPH-d+ do plexo mientérico de M. rufus, visto que não há relatos sobre o SNE e dos seus plexos em morcegos. Foram coletados cinco espécimes de M. rufus em residência rural na microrregião de Cianorte-PR, região que configura-se como área de amortecimento da Reserva Biológica das Perobas, constituindo corredor ecológico para diversas espécies. Os animais foram transportados individualmente em sacos de algodão, visando minimizar o estresse. A eutanásia foi realizada em câmara saturada com isoflurano e, após confirmada a morte dos animais, foram coletados segmentos de intestino delgado, correspondentes ao jejuno, de igual tamanho, destinados à duas técnicas para marcação neuronal, Giemsa e NADPH-diaforase e, um terceiro fragmento foi destinado às técnicas histológicas de hematoxilina-eosina e tricômio de masson. Todos os procedimentos realizados foram aprovados pelo Comitê de Ética no Uso de Animais da Unipar (CEUA - protocolo n. 34347/2017) e pelo Instituto Chico Mendes de Conservação da Biodiversidade (ICMBio - protocolo n. 60061-1). A partir da análise dos cortes histológicos, evidenciou-se a localização do plexo mientérico entre os estratos longitudinal e circular da túnica muscular. Neurônios Giemsa+ apresentaram uma média de 279,23 neurônios/mm2, já os neurônios nitrérgicos apresentaram em média à 20,40% da população neuronal mientérica total, sendo quantificados uma média de 58,14 neurônios NADPH-d+/mm2. Não há relatos sobre as características do SNE e do plexo mientérico de morcegos, o que impõe uma limitação quanto ao conhecimento completo da sua biologia, conferindo lacunas quanto à compreensão dos morcegos como indivíduos integrantes de um todo complexo, bem como limita possíveis inferências intraespecíficas e interespecíficas sobre os efeitos ambientais da atividade antrópica na sobrevivência destes animais. Os dados coletados mostram-se condizente com estudos anteriores em outras espécies de mamíferos quanto à localização do plexo mientérico bem como a proporção neuronal mientérica NADPH-d+ comparada com a população de neurônios Giemsa+.

Bats of the species Molossus rufus have an insectivorous feeding habit which gives it an important role in the biological dynamics of insect control. Characteristics from digestive tract are marked by the alimentary habit, elucidating, in addition to the known characteristics, anatomorphohistological differences, and may even exert effects on the Enteric Nervous System (ENS). The ENS is present throughout the entire digestive tract, with the neurons disposed in plexus, standing out among them the myenteric plexus, which acts on the motor control, exerting an influence on the absorption of nutrients. The organization and density of the myenteric neurons may vary according to the animal species as well as the segment of the digestive tube under consideration. Nitric oxide (NO) is one of the main neurotransmitters present in the myenteric neurons, acting as mediator in the relaxation of gastrointestinal smooth muscle, so that these neurons are also evidenced by the immunohistochemistry of nitric oxide synthase (NOS) or the histochemistry of NADPH-diaphorase. In this sense, we aimed to quantitatively characterize the total neuronal population and NADPH-d+ subpopulation of the myenteric plexus of M. rufus, since there are no reports on the ENS and its plexus in bats. Five specimens of M. rufus were collected in a rural residence in the Cianorte-PR microregion, a region that is a buffer zone of the Reserva Biológica das Perobas, constituting an ecological corridor for several species. The animals were individually transported in cotton bags in order to minimize stress. Euthanasia was performed in a chamber saturated with isoflurane, confirmed the death of the animals, small intestine segments of jejunum of equal size were collected for two techniques for neural marking, Giemsa and NADPH-diaphorase, and a third fragment was destined to the hematoxylin-eosin and masson trichrome histological techniques. All the procedures performed were approved by the Comitê de Ética no Uso de Animais da Unipar (CEUA - protocol n. 34347/2017) and by the Instituto Chico Mendes de Conservação da Biodiversidade (ICMBio - protocol n. 60061-1). From the analysis of the histological sections, the location of the myenteric plexus between the longitudinal and circular layers from muscular tunica was evidenced. Giemsa+ neurons presented a mean of 279.23 neurons/mm2, whereas the nitrergic neurons presented on average to 20.40% of the total neuronal myenteric population, being quantified a mean of 58.14 neurons NADPH-d+/mm2. There are no reports on the characteristics of the ENS and the myenteric plexus of bats, which imposes a limitation on the complete knowledge of their biology, conferring gaps in the understanding of the bats as individuals integrating a complex whole as well as limiting intraspecific and interspecific inferences, on the environmental effects of anthropic activity on the survival of these animals. The data collected are consistent with previous studies in other mammals on the location of the myenteric plexus as well as the NADPH-d+ myenteric neuronal ratio compared to the population of Giemsa+ neurons.

Investigação dos efeitos do ácido 2, 4 diclorofenoxiacético sobre diferentes populações de neurônios mioentéricos do duodeno de ratos / Investigation of 2, 4 dichlorophenoxyacetic acid effects in different population of rat duodenum myenteric neurons / Investigación de los efectos del ácido 2, 4 diclorofenoxiacético sobre diferentes poblaciones de neuronas mioentéricas del duodeno de ratones

O herbicida mais usado, tanto em pequenas como em grandes propriedades, por isso mais amplamente estudado é o 2,4-D. Os estudos de toxicidade têm se concentrado sobre as alterações do sistema nervoso central, e por isto pouco se conhece sobre seus efeitos no sistema nervoso entérico. Com o objetivo de avaliar os efeitos do 2,4-D sobre os neurônios mioentéricos do duodeno de ratos foi fornecido durante 60 dias doses de 2,4-D na concentração de 5mg/kg de peso de corpóreo para ratosWistarde dois grupos experimentais (n=5). Os animais dos grupos controle permaneceram o mesmo período sem receber 2,4-D. Ao final do período experimental os animais foram mortos, os duodenos foram coletados e processados por meio das técnicas histoquímicas de NADH-diaforase e NADPH-diaforase. Os neurônios foram quantificados e os resultados foram analisados estatisticamente. A densidade dos neurônios NADHd diferiu estatisticamente (P?0,05) entre os grupos experimental e controle, sendo maior no grupo controle. Já os neurônios NADPHd foram encontrados em maior quantidade no grupo experimental. Estes resultados sugerem que o 2,4-D possui ação neurotóxica sobre os neurônios do plexo mioentérico, interferindo na densidade neuronal mioentérica, quando se compara diferentes populações destes neurônios.(AU)

The 2,4-D herbicide is the most widely used, both in small and in large properties. Therefore, it is also the one that is most broadly studied. Toxicity studies have been focused on changes in the central nervous system, and for this reason, little is known about its effect in the enteric nervous system. With the objective of measuring the effects of 2,4-D on the myenteric neurons in the duodenum of rats, doses of 2,4-D were supplied for 60 days at a concentration of 5mg/kg of body weight to Wistar rats divided into two different experimental groups (n=5). The animals in the control groups remained without 2,4-D doses for the same period. At the end of the experimental period, the animals were euthanized and their duodenum were collected and processed through NADH-diaphorase and NADPH-diaphorase histochemical techniques. The neurons were quantified and the results were statistically analyzed. The density of NADHd neurons differed statistically (P< 0,05) between the experimental and control groups, being higher in the control group. However, NADPHd neurons were found in a greater quantity in the experimental group. These results suggest that the 2,4-D has a neurotoxic action in the neurons from the myenteric plexus, interfering in the myenteric neuronal density, when different population of these neurons are compared.(AU)

El herbicida más utilizado, tanto en pequeñas como en grandes propiedades es el 2,4-D, por eso lo más estudiado. Los estudios de toxicidad se han centrado sobre las alteraciones del sistema nervioso central, y por lo tanto, poco se sabe sobre sus efectos en el sistema nervioso entérico. Con el objetivo de evaluar los efectos del 2,4-D sobre las neuronas mioentéricas del duodeno de ratas se ha administrado durante 60 días dosis de 2,4-D en la concentración de 5mg/kg de peso corporal para ratones Wistarde, dos grupos experimentales (n = 5). Los animales de los grupos control permanecieron el mismo período sin recibir el 2,4-D. Al final del periodo experimental los animales fueron sacrificados, los duodenos fueron recogidos y procesados a través de las técnicas de histoquímicas de NADH-diaforasa y NADPH-diaforasa. Las neuronas fueron cuantificadas y los resultados analizados estadísticamente. La densidad de las neuronas NADHd difirió estadísticamente (P?0,05) entre los grupos experimental y control, siendo mayor en el grupo control. Ya las neuronas NADPHd se encontraron en mayor cantidad en el grupo experimental. Estos resultados sugieren que el 2,4-D tiene una acción neurotóxica sobre las neuronas del plexo mioentérico, lo que interfiere en la densidad neuronal mioentérica al comparar diferentes poblaciones de estas neuronas. (AU)

Topical and intraluminal Carolina Rinse Solution in p44/42 and p38 MAP Kinase activation profile in rabbit jejunum after ischemia and reperfusion / Uso tópico e intraluminal da Solução de Carolina Rinse no perfil de ativação das MAP quinases p44/42 e p38 no jejuno de coelhos após isquemia e reperfusão

The effects of topical and intraluminal Carolina Rinse Solution (CRS) in p44/42 (ERK 1/2) and p38 MAPK activation profile, in rabbit jejunum after ischemia and reperfusion (I/R), were investigated in this study. Fifteen New Zealand rabbits were allocated in three groups: Sham-operated (A), Ischemia and reperfusion (B) and CRS (C). Groups B and C were subjected to one hour of ischemia and two hours of reperfusion. In group C, ten minutes prior to reperfusion, the bowel lumen was filled with CRS, and the segment was immersed in CRS until reperfusion onset. Ischemia and reperfusion stimulated the phosphorylation of the p44/42 MAPK and p38 MAPK pathways in some layers of jejunum. Progressive activation of p44/42 MAPK was chiefly localized in the crypts of Lieberkühn, circular and longitudinal muscle layers, whereas p38 MAPK was prominently activated in myenteric plexus and both muscle layers. The results of this research indicate that the chosen model of topical and intraluminal CRS does not interfere in p44/42 and p38 MAPK activation profile in rabbit jejunum subjected to I/R.(AU)

Os efeitos do uso tópico e intraluminal da Solução de Carolina Rinse (CRS), no perfil de ativação das MAP quinases p44/42 (ERK 1/2) e p38, no jejuno de coelhos após isquemia e reperfusão (I/R), foram investigados neste estudo. Quinze coelhos da raça Nova Zelândia foram alocados em três grupos: Instrumentado (A), Isquemia e Reperfusão (B) e CRS (C). Os grupos B e C foram submetidos a uma hora de isquemia e duas horas de reperfusão. No grupo C, dez minutos antes da reperfusão, o lúmen do segmento isolado foi preenchido com CRS e o segmento foi imerso em CRS até o início da reperfusão. A isquemia e reperfusão resultou em estímulo da fosforilação das MAP quinases p44/42 e p38 em algumas camadas do jejuno. A ativação progressiva de p44/42 ocorreu principalmente nas criptas de Lieberkühn e camadas musculares longitudinal e circular, enquanto p38 foi ativada principalmente no plexo mioentérico e em ambas as camadas musculares. Os resultados deste trabalho indicam que o modelo escolhido de uso tópico e intraluminal de CRS não interfere no perfil de ativação das MAP quinases p44/42 e p38 no jejuno de coelhos submetidos à I/R.(AU)

Morphology and immunohistochemistry of the myenteric plexus of valves constructed in the colon of rats submitted to abdominoperineal amputation and perineal colostomy

PURPOSE: To investigate immunohistochemical aspects of the myenteric plexus of valves constructed in the colon of rats to verify whether any denervation occurs both at the operative site and in those areas adjacent to the third valve. METHODS: Thirty six male Wistar rats divided into the following three groups were used: Control Group (CG); Amputated Group (AG); Amputated Group with Valves (AGWV). In AG was held in the rectum amputation and the colon was sutured to the skin elaborating the perineal colostomy. In AGWV was held in the rectum amputation. A laparotomy was performed for the manufacture of valves (seromyotomy) in the colon. After this step, the colon was sutured to the skin elaborating the perineal colostomy. The density of the neural elements in the muscular wall as marked specifically using Protein Gene Product (PGP) 9.5 and utilising the proper tools of the KS300 software for measuring the area. From these measurements, a relation and three proportions were drawn and analysed according to the mean of the averages obtained from the measured images. RESULTS: Immunoexpression of PGP 9.5 demonstrated a total absence of neural elements and myenteric plexus at the valve site. The density of the neural elements in the circular muscular layer at sites adjacent to the 3rd valve was lesser, however, was not significantly different. CONCLUSION: The immunohistochemical study of valves constructed in the colon of rats submitted to abdominoperineal amputation and perineal colostomy revealed denervation at the seromyotomy site.(AU)

Atrophy of myenteric neurons in the ileum of rats submitted to severe protein deficiency - doi: 10.4025/actascibiolsci.v34i2.6793 / Atrofia de neurônios do plexo mientérico do íleo de ratos submetidos à intensa carência de proteínas - doi: 10.4025/actascibiolsci.v34i2.6793

The effects of a 4%-protein diet in adult rats with respect to the morphometric aspects of the myenteric plexus in the ileum were assessed. Twenty animals were randomly divided into two groups: Control Group (n = 10), which received 26%-protein chow, and Experimental Group (n = 10), which received 4%-protein chow for 90 days. Neurons in the myenteric plexus in the ileum in whole mount were evidenced through Giemsa and NADH-diaphorase techniques. The overall neuronal population as well as the subpopulation positive for NADH diaphorase presented atrophy, with a reduction of the perikaryon, nucleus and cytoplasm.

Objetivou-se avaliar os efeitos da oferta de uma dieta contendo 4% de proteínas para ratos adultos, quanto aos aspectos morfométricos do plexo mientérico do íleo. Vinte animais foram distribuídos aleatoriamente em dois grupos: Controle (n = 10) que receberam ração comercial com 26% de proteína e Experimental (n = 10) alimentados com ração com teor proteico reduzido para 4%, durante 90 dias. Neurônios do plexo mientérico do íleo presentes em preparados totais foram evidenciados por intermédio da técnica de Giemsa e da NADH-diaforase. Tanto a população neuronal total, assim como a subpopulação NADH-diaforase positiva sofreram atrofia com redução da área do pericário, do núcleo e do citoplasma.

Atrofia de neurônios do plexo mientérico do íleo de ratos submetidos à intensa carência de proteínas / Atrophy of myenteric neurons in the ileum of rats submitted to severe protein deficiency

Objetivou-se avaliar os efeitos da oferta de uma dieta contendo 4% de proteínas para ratos adultos, quanto aos aspectos morfométricos do plexo mientérico do íleo. Vinte animais foram distribuídos aleatoriamente em dois grupos: Controle (n = 10) que receberam ração comercial com 26% de proteína e Experimental (n = 10) alimentados com ração com teor proteico reduzido para 4%, durante 90 dias. Neurônios do plexo mientérico do íleo presentes em preparados totais foram evidenciados por intermédio da técnica de Giemsa e da NADH-diaforase. Tanto a população neuronal total, assim como a subpopulação NADH-diaforase positiva sofreram atrofia com redução da área do pericário, do núcleo e do citoplasma.

The effects of a 4%-protein diet in adult rats with respect to the morphometric aspects of the myenteric plexus in the ileum were assessed. Twenty animals were randomly divided into two groups: Control Group (n = 10), which received 26%-protein chow, and Experimental Group (n = 10), which received 4%-protein chow for 90 days. Neurons in the myenteric plexus in the ileum in whole mount were evidenced through Giemsa and NADH-diaphorase techniques. The overall neuronal population as well as the subpopulation positive for NADH diaphorase presented atrophy, with a reduction of the perikaryon, nucleus and cytoplasm.

Abnormalities of digestive tract innervation in rat fetus treated with ethylenethiourea / Anomalias da inervação do trato digestório de fetos de ratas expostas à etilenotioureia

PURPOSE: The pathophysiology of abnormalities associated with myenteric plexus lesions remains imperfectly understood. Such abnormalities have been correlated with subocclusive intestinal conditions in children with Hirschsprung's disease, cases of chronic constipation and, postoperatively, in cases of anorectal anomalies. This study evaluated abnormalities of the myenteric plexus in fetus from female rats that received ethylenethiourea. METHODS: Female rats were exposed to ethylenethiourea on the 11th day of pregnancy (experimental group) or to 0.9 percent physiological solution (control group). Abnormalities were only found in the experimental group. The digestive tract muscle layer was analyzed morphometrically and changes to the frequencies of nerve plexus cells and interstitial cells of Cajal were evaluated, using hematoxylin-eosin, S-100 protein, neuron-specific enolase and C-Kit, respectively. RESULTS: Muscle and skeletal abnormalities were observed in 100 percent, anorectal anomalies in 86 percent, absent tail in 71 percent, short tail in 29 percent, duodenal atresia in 5 percent, esophageal atresia in 5 percent and persistent omphalomesenteric duct in 5 percent. Histopathological analysis showed a thinner muscle layer associated with lower frequencies of ganglion cells and interstitial cells of Cajal, in all gastrointestinal tract. CONCLUSION: Severe nerve plexus abnormalities associated with muscle layer atrophy were observed throughout the gastrointestinal tract in newborn rats exposed to ethylenethiourea.(AU)

OBJETIVO: As anomalias associadas a lesões dos plexos mioentéricos permanecem sem plena compreensão da sua fisiopatologia. Alterações nos plexos nervosos têm sido correlacionadas com quadros suboclusivos intestinais em crianças portadoras de doença de Hirschsprung, em constipação crônica e no pós-operatório de anomalias anorretais. Este estudo avaliou as anomalias do plexo mioentérico em fetos de ratos fêmea que ingeriram etilenotioureia (ETU). MÉTODOS: Ratos fêmea foram expostos no 11º dia de gestação a ETU 1 por cento no Grupo Experimento e a solução fisiológica 0,9 por cento no Grupo Controle. Foram observadas anomalias apenas no Grupo experimento, sendo realizada morfometria da camada muscular e avaliadas alterações da frequência celular nos gânglios do plexo mioentérico e nas células intersticiais de Cajal (CIC) utilizando hematoxilina-eosina, P S-100, Enolase Neurônio Específica e C-KIT. RESULTADOS: Foram observadas anomalias musculoesqueléticas (100 por cento), anorretais (86 por cento), ausência de cauda (71 por cento), cauda curta (29 por cento), atresia duodenal (5 por cento), atresia esofágica (5 por cento) e conduto onfalomesentérico persistente (5 por cento). A análise histopatológica mostrou adelgaçamento da camada muscular associada às alterações da frequência das células ganglionares e das CIC em todos os segmentos do trato gastrointestinal. CONCLUSÃO: Foram observadas alterações graves nos plexos nervosos associadas ao adelgaçamento da camada muscular de todo o trato gastrointestinal nos fetos expostos a ETU.(AU)