Location, distribution, and quantification of myenteric plexus neurons of the jejunum of quails fed with different levels of commercial Macleaya cordata extract / Localização, distribuição e quantificação dos neurônios do plexo mioentérico do jejuno de codornas de postura alimentadas com diferentes inclusões do extrato comercial de Macleaya cordata

ABSTRACT: Coturniculture has been promising, progressing from a subsistence to a technical activity due to its quick production, low breeding investment, and rapid economic return. After the restriction of antimicrobials as growth promoters, some studies aimed to evaluate alternative products that would make the farming of healthy birds viable without impacting their performance, with commercial Macleaya cordata extract being one of these substitutes. The functions of the gastrointestinal tract are coordinated mainly by the enteric nervous system, and the myenteric plexus is responsible for the reflex control of contractile activities of the external muscles. Thus, this study located and demonstrated the distribution of the myenteric plexus, quantifing the total population of myenteric neurons (Giemsa+) and the subpopulation of myenteric nitrergic neurons (NADPH-d+), and evaluated the effects of commercial Macleaya cordata extract on these populations of quail jejunum neurons. A total of 240 one-day-old female laying quails were distributed into four treatments, with four repetitions of 15 birds each. The test groups (T1, T2, and T3) were treated with commercial Macleaya cordata extract throughout the experimental period using the following doses: T1 - test group, basal diet added with 150 ppm of the extract in the feed; T2- test group, basal diet added with100 ppm of the extract in the feed; T3 - test group, basal diet added with 50 ppm of the extract in the feed; and T4 - control group, basal diet with no added extract. The study included histological analysis, Giemsa+, and NADPH-d+ myenteric neuron staining. The results showed that the myenteric plexus is located between longitudinal layer fibers and in the transition region between the longitudinal and circular layers of the muscular tunic, with the myenteric population organized into ganglia and isolated in the region of neuronal fiber bundles. The commercial Macleaya cordata extract showed no quantitative changes in the myenteric Giemsa+ population and myenteric NADPH-d+ subpopulation, however, the groups that consumed the extract showed greater NADPH-d+ neuron activity compared to the control group, implying that the food remained longer in the intestinal lumen, therefore, enabling greater nutrient use and resulting in increased productive performance.

RESUMO: A coturnicultura tem apresentado características promissoras, deixando de ser uma atividade de subsistência e ocupando patamares tecnificados devido a sua precocidade produtiva, baixo investimento de criação e rápido retorno econômico. A partir da restrição da utilização de antimicrobianos como promotores de crescimento, estudos foram direcionados com o objetivo de se avaliar produtos alternativos que viabilizassem a criação de aves saudáveis, sem comprometer seu desempenho, sendo o extrato comercial da Macleaya cordata um destes substitutos. As funções do trato gastrintestinal são coordenadas principalmente pelo sistema nervoso entérico, sendo o plexo mioentérico responsável pelo controle reflexo das atividades contráteis da musculatura externa. Desta forma, o presente trabalho teve como objetivo localizar e demonstrar a distribuição do plexo mioentérico, quantificar a população total de neurônios mioentéricos (Giemsa+), e a subpopulação de neurônios mioentéricos nitrérgicos (NADPH-d+), além de avaliar os efeitos do extrato comercial da Macleaya cordata sobre estas populações de neurônios do jejuno de codornas. Foram alojadas 240 codornas de postura, fêmeas, com um dia de idade, distribuídas aleatoriamente em quatro tratamentos, com quatro repetições de 15 aves cada. Os grupos testes (T1, T2 e T3) foram tratados com extrato comercial de Macleaya cordata durante todo o período experimental conforme as doses indicadas, sendo: T1 - grupo teste, com dieta basal adicionada de 150 ppm do extrato na ração; T2 - grupo teste, com dieta basal adicionada de 100 ppm do extrato na ração; T3 - grupo teste, com dieta basal adicionada de 50 ppm do extrato na ração, e T4 - grupo controle, com dieta basal isenta do extrato. Foram realizadas análise histológica e a marcação dos neurônios mioentéricos Giemsa+ e NADPH-d+. Os resultados demonstraram que o plexo mioentérico está localizado entre as fibras do estrato longitudinal, e na região de transição entre os estratos longitudinal e circular da túnica muscular, estando a população mioentérica organizada em gânglios, e também isoladamente na região dos feixes das fibras neuronais. O extrato comercial da Macleaya cordata não alterou quantitativamente os neurônios da população mioentérica Giemsa+ e da subpopulação mioentérica NADPH-d+, mas os grupos que consumiram o extrato apresentaram maior atividade dos neurônios NADPH-d+ em relação ao grupo controle, permitindo inferir que o alimento permaneceu maior tempo no lúmen intestinal e, portanto, possibilitou um maior aproveitamento dos nutrientes, podendo refletir em melhor desempenho produtivo.

Location, distribution, and quantification of myenteric plexus neurons of the jejunum of quails fed with different levels of commercial Macleaya cordata extract / Localização, distribuição e quantificação dos neurônios do plexo mioentérico do jejuno de codornas de postura alimentadas com diferentes inclusões do extrato comercial de Macleaya cordata

Coturniculture has been promising, progressing from a subsistence to a technical activity due to its quick production, low breeding investment, and rapid economic return. After the restriction of antimicrobials as growth promoters, some studies aimed to evaluate alternative products that would make the farming of healthy birds viable without impacting their performance, with commercial Macleaya cordata extract being one of these substitutes. The functions of the gastrointestinal tract are coordinated mainly by the enteric nervous system, and the myenteric plexus is responsible for the reflex control of contractile activities of the external muscles. Thus, this study located and demonstrated the distribution of the myenteric plexus, quantifing the total population of myenteric neurons (Giemsa+) and the subpopulation of myenteric nitrergic neurons (NADPH-d+), and evaluated the effects of commercial Macleaya cordata extract on these populations of quail jejunum neurons. A total of 240 one-day-old female laying quails were distributed into four treatments, with four repetitions of 15 birds each. The test groups (T1, T2, and T3) were treated with commercial Macleaya cordata extract throughout the experimental period using the following doses: T1 - test group, basal diet added with 150 ppm of the extract in the feed; T2- test group, basal diet added with100 ppm of the extract in the feed; T3 - test group, basal diet added with 50 ppm of the extract in the feed; and T4 - control group, basal diet with no added extract. The study included histological analysis, Giemsa+, and NADPH-d+ myenteric neuron staining. The results showed that the myenteric plexus is located between longitudinal layer fibers and in the transition region between the longitudinal and circular layers of the muscular tunic, with the myenteric population organized into ganglia and [...].

A coturnicultura tem apresentado características promissoras, deixando de ser uma atividade de subsistência e ocupando patamares tecnificados devido a sua precocidade produtiva, baixo investimento de criação e rápido retorno econômico. A partir da restrição da utilização de antimicrobianos como promotores de crescimento, estudos foram direcionados com o objetivo de se avaliar produtos alternativos que viabilizassem a criação de aves saudáveis, sem comprometer seu desempenho, sendo o extrato comercial da Macleaya cordata um destes substitutos. As funções do trato gastrintestinal são coordenadas principalmente pelo sistema nervoso entérico, sendo o plexo mioentérico responsável pelo controle reflexo das atividades contráteis da musculatura externa. Desta forma, o presente trabalho teve como objetivo localizar e demonstrar a distribuição do plexo mioentérico, quantificar a população total de neurônios mioentéricos (Giemsa+), e a subpopulação de neurônios mioentéricos nitrérgicos (NADPH-d+), além de avaliar os efeitos do extrato comercial da Macleaya cordata sobre estas populações de neurônios do jejuno de codornas. Foram alojadas 240 codornas de postura, fêmeas, com um dia de idade, distribuídas aleatoriamente em quatro tratamentos, com quatro repetições de 15 aves cada. Os grupos testes (T1, T2 e T3) foram tratados com extrato comercial de Macleaya cordata durante todo o período experimental conforme as doses indicadas, sendo: T1 - grupo teste, com dieta basal adicionada de 150 ppm do extrato na ração; T2 - grupo teste, com dieta basal adicionada de 100 ppm do extrato na ração; T3 - grupo teste, com dieta basal adicionada de 50 ppm do extrato na ração, e T4 - grupo controle, com dieta basal isenta do extrato. Foram realizadas análise histológica e a marcação dos neurônios mioentéricos Giemsa+ e NADPH-d+. Os resultados demonstraram que o plexo mioentérico está localizado entre as fibras do [...].

Location, distribution, and quantification of myenteric plexus neurons of the jejunum of quails fed with different levels of commercial Macleaya cordata extract / Localização, distribuição e quantificação dos neurônios do plexo mioentérico do jejuno de codornas de postura alimentadas com diferentes inclusões do extrato comercial de Macleaya cordata

Coturniculture has been promising, progressing from a subsistence to a technical activity due to its quick production, low breeding investment, and rapid economic return. After the restriction of antimicrobials as growth promoters, some studies aimed to evaluate alternative products that would make the farming of healthy birds viable without impacting their performance, with commercial Macleaya cordata extract being one of these substitutes. The functions of the gastrointestinal tract are coordinated mainly by the enteric nervous system, and the myenteric plexus is responsible for the reflex control of contractile activities of the external muscles. Thus, this study located and demonstrated the distribution of the myenteric plexus, quantifing the total population of myenteric neurons (Giemsa+) and the subpopulation of myenteric nitrergic neurons (NADPH-d+), and evaluated the effects of commercial Macleaya cordata extract on these populations of quail jejunum neurons. A total of 240 one-day-old female laying quails were distributed into four treatments, with four repetitions of 15 birds each. The test groups (T1, T2, and T3) were treated with commercial Macleaya cordata extract throughout the experimental period using the following doses: T1 - test group, basal diet added with 150 ppm of the extract in the feed; T2- test group, basal diet added with100 ppm of the extract in the feed; T3 - test group, basal diet added with 50 ppm of the extract in the feed; and T4 - control group, basal diet with no added extract. The study included histological analysis, Giemsa+, and NADPH-d+ myenteric neuron staining. The results showed that the myenteric plexus is located between longitudinal layer fibers and in the transition region between the longitudinal and circular layers of the muscular tunic, with the myenteric population organized into ganglia and [...].(AU)

A coturnicultura tem apresentado características promissoras, deixando de ser uma atividade de subsistência e ocupando patamares tecnificados devido a sua precocidade produtiva, baixo investimento de criação e rápido retorno econômico. A partir da restrição da utilização de antimicrobianos como promotores de crescimento, estudos foram direcionados com o objetivo de se avaliar produtos alternativos que viabilizassem a criação de aves saudáveis, sem comprometer seu desempenho, sendo o extrato comercial da Macleaya cordata um destes substitutos. As funções do trato gastrintestinal são coordenadas principalmente pelo sistema nervoso entérico, sendo o plexo mioentérico responsável pelo controle reflexo das atividades contráteis da musculatura externa. Desta forma, o presente trabalho teve como objetivo localizar e demonstrar a distribuição do plexo mioentérico, quantificar a população total de neurônios mioentéricos (Giemsa+), e a subpopulação de neurônios mioentéricos nitrérgicos (NADPH-d+), além de avaliar os efeitos do extrato comercial da Macleaya cordata sobre estas populações de neurônios do jejuno de codornas. Foram alojadas 240 codornas de postura, fêmeas, com um dia de idade, distribuídas aleatoriamente em quatro tratamentos, com quatro repetições de 15 aves cada. Os grupos testes (T1, T2 e T3) foram tratados com extrato comercial de Macleaya cordata durante todo o período experimental conforme as doses indicadas, sendo: T1 - grupo teste, com dieta basal adicionada de 150 ppm do extrato na ração; T2 - grupo teste, com dieta basal adicionada de 100 ppm do extrato na ração; T3 - grupo teste, com dieta basal adicionada de 50 ppm do extrato na ração, e T4 - grupo controle, com dieta basal isenta do extrato. Foram realizadas análise histológica e a marcação dos neurônios mioentéricos Giemsa+ e NADPH-d+. Os resultados demonstraram que o plexo mioentérico está localizado entre as fibras do [...].(AU)

Quantification of the neurons of myenteric plexus of the bat molossus rufus / Quantificação dos neurônios do plexo mientérico de morcegos da espécie Molossus rufus

There are no studies that characterize the enteric nervous system (ENS) bats. The organization and density of myenteric neurons may vary according to the animal species, as well as the segment of the digestive tube considered. The nitric oxide is one of the key neurotransmitters present in the myenteric neurons, acting as a mediator in the smooth muscle relaxation. These neurons are evidenced by immunohistochemistry of nitric oxide synthase (NOS) or by NADPH-diaphorase histochemistry. In this sense, this study aimed to characterize the total neuronal population and subpopulation NADPH-d+ of the myenteric plexus present in the jejunum of the insectivore species Molossus rufus quantitatively. Five specimens were collected of M. rufus in a buffer area of the "Reserva Biológica das Perobas" in the microregion of Cianorte/PR. After the euthanasia, in a chamber saturated with isoflurane, segments were collected from the small intestine corresponding to the jejunum intended for two techniques for neuronal marking, Giemsa and NADPH-diaphorase, and a fragment to the histological technique of hematoxylin-eosin and Masson's trichrome. All the procedures were approved by the "Comitê de Ética no Uso de Animais Unipar" (CEUA - protocol No. 34347/2017) and the "Instituto Chico Mendes de Conservação da Biodiversidade" (ICMBio - protocol No. 60061-1) The histological sections allowed to highlight the location of the myenteric plexus between the longitudinal and circular layers of the muscular tunic. The myenteric plexus had an average of total neuronal population (neurons Giemsa+) of 279.23 neurons/mm2, being the nitrergic neurons (neurons NADPH-d+) represented 20.4% of this total population, with an average of 58.14 neuron/mm2. Therefore, the collected data are consistent with previous studies in other mammalian species concerning the location of the myenteric plexus, as well as the neural myenteric proportion NADPH-d+ compared with the population of neurons Giemsa+. The gaps in the knowledge of ENS of bats limits comparative intraspecific and interspecific studies.(AU)

Não há estudos que caracterizem o sistema nervoso entérico (SNE) destes animais, configurando uma lacuna no conhecimento quanto à biologia destes indivíduos. A organização e densidade dos neurônios mientéricos podem variar de acordo com a espécie animal bem como o segmento do tubo digestório considerado. O óxido nítrico é um dos principais neurotransmissores presentes nos neurônios mientéricos, atuando como mediador no relaxamento do músculo liso gastrointestinal, de modo que estes neurônios são evidenciados igualmente pela imunohistoquímica da óxido nítrico-sintase (NOS) ou pela histoquímica da NADPH-diaforase. Neste sentido, objetivou-se caracterizar quantitativamente a população neuronal total e subpopulação NADPH-d+ do plexo mientérico presente no jejuno da espécie Molossus rufus de hábito alimentar insetívoro. Foram coletados cinco espécimes de M. rufus em área de amortecimento da Reserva Biológica das Perobas na microrregião de Cianorte/PR. Após a eutanásia, em câmara saturada com isoflurano, foram coletados segmentos do intestino delgado correspondentes ao jejuno destinados a duas técnicas para marcação neuronal, Giemsa e NADPH-diaforase e, um fragmento para a técnica histológica de hematoxilina-eosina e tricômio de Masson. Todos os procedimentos realizados foram aprovados pelo Comitê de Ética no Uso de Animais da Unipar (CEUA - protocolo nº 34347/2017) e pelo Instituto Chico Mendes de Conservação da Biodiversidade (ICMBio - protocolo nº 60061-1) Os cortes histológicos possibilitaram evidenciar a localização do plexo mientérico entre os estratos longitudinal e circular da túnica muscular. Neurônios Giemsa+ apresentaram uma média de 279,23 neurônios/mm2, já os neurônios nitrérgicos apresentaram em média 20,4% da população neuronal mientérica total, sendo evidenciados 58,14 neurônios NADPH-d+/mm2. Portanto, os dados coletados mostram-se condizentes com estudos anteriores em outras espécies de mamíferos quanto à localização do plexo mientérico, bem como, a proporção neuronal mientérica NADPH-d+ comparada com a população de neurônios Giemsa+. As lacunas existentes quanto ao conhecimento do SNE de morcegos limita possíveis inferências em comparativo intraespecífico e interespecífico.(AU)

Quantification of the neurons of myenteric plexus of the bat molossus rufus / Quantificação dos neurônios do plexo mientérico de morcegos da espécie Molossus rufus

There are no studies that characterize the enteric nervous system (ENS) bats. The organization and density of myenteric neurons may vary according to the animal species, as well as the segment of the digestive tube considered. The nitric oxide is one of the key neurotransmitters present in the myenteric neurons, acting as a mediator in the smooth muscle relaxation. These neurons are evidenced by immunohistochemistry of nitric oxide synthase (NOS) or by NADPH-diaphorase histochemistry. In this sense, this study aimed to characterize the total neuronal population and subpopulation NADPH-d+ of the myenteric plexus present in the jejunum of the insectivore species Molossus rufus quantitatively. Five specimens were collected of M. rufus in a buffer area of the "Reserva Biológica das Perobas" in the microregion of Cianorte/PR. After the euthanasia, in a chamber saturated with isoflurane, segments were collected from the small intestine corresponding to the jejunum intended for two techniques for neuronal marking, Giemsa and NADPH-diaphorase, and a fragment to the histological technique of hematoxylin-eosin and Masson's trichrome. All the procedures were approved by the "Comitê de Ética no Uso de Animais Unipar" (CEUA - protocol No. 34347/2017) and the "Instituto Chico Mendes de Conservação da Biodiversidade" (ICMBio - protocol No. 60061-1) The histological sections allowed to highlight the location of the myenteric plexus between the longitudinal and circular layers of the muscular tunic. The myenteric plexus had an average of total neuronal population (neurons Giemsa+) of 279.23 neurons/mm2, being the nitrergic neurons (neurons NADPH-d+) represented 20.4% of this total population, with an average of 58.14 neuron/mm2. Therefore, the collected data are consistent with previous studies in other mammalian species concerning the location of the myenteric plexus, as well as the neural myenteric proportion NADPH-d+ compared with the population of neurons Giemsa+. The gaps in the knowledge of ENS of bats limits comparative intraspecific and interspecific studies.(AU)

Não há estudos que caracterizem o sistema nervoso entérico (SNE) destes animais, configurando uma lacuna no conhecimento quanto à biologia destes indivíduos. A organização e densidade dos neurônios mientéricos podem variar de acordo com a espécie animal bem como o segmento do tubo digestório considerado. O óxido nítrico é um dos principais neurotransmissores presentes nos neurônios mientéricos, atuando como mediador no relaxamento do músculo liso gastrointestinal, de modo que estes neurônios são evidenciados igualmente pela imunohistoquímica da óxido nítrico-sintase (NOS) ou pela histoquímica da NADPH-diaforase. Neste sentido, objetivou-se caracterizar quantitativamente a população neuronal total e subpopulação NADPH-d+ do plexo mientérico presente no jejuno da espécie Molossus rufus de hábito alimentar insetívoro. Foram coletados cinco espécimes de M. rufus em área de amortecimento da Reserva Biológica das Perobas na microrregião de Cianorte/PR. Após a eutanásia, em câmara saturada com isoflurano, foram coletados segmentos do intestino delgado correspondentes ao jejuno destinados a duas técnicas para marcação neuronal, Giemsa e NADPH-diaforase e, um fragmento para a técnica histológica de hematoxilina-eosina e tricômio de Masson. Todos os procedimentos realizados foram aprovados pelo Comitê de Ética no Uso de Animais da Unipar (CEUA - protocolo nº 34347/2017) e pelo Instituto Chico Mendes de Conservação da Biodiversidade (ICMBio - protocolo nº 60061-1) Os cortes histológicos possibilitaram evidenciar a localização do plexo mientérico entre os estratos longitudinal e circular da túnica muscular. Neurônios Giemsa+ apresentaram uma média de 279,23 neurônios/mm2, já os neurônios nitrérgicos apresentaram em média 20,4% da população neuronal mientérica total, sendo evidenciados 58,14 neurônios NADPH-d+/mm2. Portanto, os dados coletados mostram-se condizentes com estudos anteriores em outras espécies de mamíferos quanto à localização do plexo mientérico, bem como, a proporção neuronal mientérica NADPH-d+ comparada com a população de neurônios Giemsa+. As lacunas existentes quanto ao conhecimento do SNE de morcegos limita possíveis inferências em comparativo intraespecífico e interespecífico.(AU)

Different inoculum loads of Toxoplasma gondii induce reduction of myenteric neurons of the rat colon / Diferentes inóculos de Toxoplasma gondii induzem a redução de neurônios mioentéricos no cólon de ratos

Toxoplasmosis, a disease caused by Toxoplasma gondii, is an important health problem, especially in immunocompromised hosts. T. gondii uses the gut wall as an infection gateway, with tropism for muscular and nervous tissues causing intestinal alterations, including some in the enteric nervous system. This study aims at investigating the colon of rats infected by T. gondii in order to understand how the amount of oocysts influences in myenteric neuronal changes. Sixty Wistar rats (Rattus norvegicus) were divided into six groups. One group remained as a control and the others received inocula of 10, 50, 100, 500 or 5,000 oocysts of T. gondii. The animals were euthanized after 30 days of infection. The total neuronal population and the nitrergic subpopulation in the colon myenteric plexus of each animal was counted. The data were statistically analyzed showing less weight gain in rats with 10, 500 and 5,000 oocysts. A decrease in the number of total neurons with 50, 100 or 5,000 oocysts and an increase in the nitrergic population with 10, 100, 500 or 5,000 oocysts were verified. These results show that neuronal alterations are more significant when the infection is induced by larger inocula and reinforces the suspicion that neuronal loss is directed at cholinergic neurons.(AU)

A toxoplasmose, doença causada pelo Toxoplasma gondii, é um importante problema de saúde, principalmente em imunocomprometidos. T. gondii utiliza a parede do intestino como porta de entrada no hospedeiro e tem tropismo pelos tecidos muscular e nervoso provocando alterações intestinais, inclusive no sistema nervoso entérico. Este estudo buscou analisar o cólon de ratos infectados por T. gondii para entender como a quantidade de oocistos influencia nas alterações neuronais mientéricas. Foram utilizados 60 ratos Wistar (Rattus norvegicus) em seis grupos. Um dos grupos permaneceu como controle e os demais receberam inóculos de 10, 50, 100, 500 ou 5.000 oocistos de T. gondii. Os animais foram submetidos a eutanásia após 30 dias de infecção. No plexo mientérico do cólon dos animais foram quantificadas a população neuronal total e a subpopulação nitrérgica. Os dados foram analisados estatisticamente demonstrando inferior ganho de peso nos ratos com 10, 500 e 5.000 oocistos. Verificamos diminuição no número de neurônios totais com inóculos de 50, 100 ou 5.000 oocistos e aumento da população nitrérgica com 10, 100, 500 ou 5000 oocistos. Estes resultados mostram que alterações neuronais são mais significativas quando a infecção é induzida por inóculos maiores e reforça a suspeita de perda neuronal direcionada a neurônios colinérgicos.(AU)

Efeito da atividade física moderada sobre neurônios mioentéricos nitrérgicos do íleo de ratos de meia idade / The effect of moderate physical activity on myoenteric nitrergic neurons in the ileum of middle-aged rats / Efecto de la actividad física moderada en neuronas mientéricas nitrérgicas del íleon de ratas de mediana edad

Poucos são os relatos a respeito do efeito da atividade física sobre o plexo mioentérico ao longo do envelhecimento. Portanto, analisaram-se os neurônios mioentéricos NADPH-diaforase positivos do íleo em ratos que envelheceram praticando atividade física a partir dos seis meses de vida. Dez ratos Wistar foram distribuídos em dois grupos (n = 5/grupo): S (ratos sedentários controles com 12 meses de idade) e T (ratos treinados com 12 meses de idade). Os animais do grupo T realizaram, dos seis aos 12 meses de idade, atividade física regulada conforme resultados obtidos em teste de esforço máximo. Ao final do período experimental, o íleo obtido de cada animal foi processado para a técnica de NADPH-diaforase para evidenciar neurônios mioentéricos em preparados de membrana e quantificar e mensurar a área do pericário desses neurônios. A área do pericário não diferiu (P> 0,05) entre o grupo S (218,49 µm2) e o grupo T (210,59 µm2). A média de neurônios presente em 60 campos microscópicos de preparados de membranas no grupo S (126 neurônios) foi superior (P<0,05) a média encontrada no grupo T (93 neurônios), sugerindo que a atividade física pode inibir ou diminuir a expressão dos neurônios nitrérgicos em ratos de 12 meses de idade que praticaram atividade física desde os seis meses de vida. Os resultados quantitativos sugerem que a falta de atividade física regular propicia aumento na atividade dos neurônios nitrérgicos, contribuindo para o surgimento dos distúrbios da motricidade gastrointestinal que podem ocorrer ao longo do envelhecimento.(AU)

There are only a few reports on the effect of physical activity in the myoenteric plexus throughout the aging process. For such, the positive myoenteric NADPH-diaphoresis neurons in the ileum of those rats that aged practicing physical activity from the sixth month were analyzed. Ten Wistar rats were distributed into two groups (n= 5/group): S (12 months-old control sedentary rats) and T (12 months-old trained rats). The animals from the T group practiced controlled physical activity from the age of 6 months to 12 months, according to the maximum effort test results. At the end of the experimental period, the ileum obtained from each animal was processed in the NADPH-diaphoresis technique to highlight myoenteric neurons in membrane preparations, and quantify and measure the perikaryon area from those neurons. The Perikaryon area did not differ (P>0.05) among the S group (218.49 µm2) and the T group (210.59 µm2). The average of neurons in 60 membrane preparations in the S group (126 neurons) was higher (P<0.05) than the average finding in the T group (93 neurons), indicating that the physical activity can inhibit or decrease the nitrergic expression in 12 month-old rats that have practiced physical activity from the age of 6 months. The quantitative results suggest that the lack of regular physical activity provides the elevation of nitrergic neurons, concurring to the emergence of gastrointestinal motility disorders that can occur during the aging process.(AU)

Hay pocos informes sobre el efecto de la actividad física sobre el plexo mientérico a lo largo del envejecimiento. Por lo tanto, se analizaron las neuronas mientéricas NADPH-diaforasa positivas del íleon en ratas que envejecieron practicando actividad física a partir de seis meses de vida. Diez ratas Wistar se dividieron en dos grupos (n = 5 / grupo): S (ratas sedentarias de control con 12 meses de edad) y T (ratas entrenadas con 12 meses de edad). Los animales del grupo T realizaron, de los seis a los doce meses de edad, actividad física regulada conforme resultados obtenidos en prueba de esfuerzo máximo. Al final del período experimental, el íleon obtenido de cada animal se procesó por la técnica de NADPH-diaforasa para mostrar las neuronas mientéricas en preparados de membrana, cuantificar y medir el área del pericario de esas neuronas. El área del pericario no difirió (P> 0.05) entre el grupo S (218.49 µm2) y el grupo T (210.59 µm2). El número medio de neuronas presentes en 60 campos microscópicos de preparados de membranas en el grupo S (126 neuronas) fue mayor (P <0,05), promedio encontrado en el grupo T (93 neuronas), lo que sugiere que la actividad física puede inhibir o disminuir la expresión de las neuronas nitrérgicas en ratas de 12 meses de edad que practicaron actividad física desde los seis meses de edad. Los resultados cuantitativos sugieren que la falta de actividad física regular promueve aumento en la actividad de las neuronas nitrérgicas, contribuyendo a la aparición de disturbios de la motricidad gastrointestinal que pueden ocurrir a lo largo del envejecimiento.(AU)

DETECÇÃO DE NEURÔNIOS DO PLEXO MIOENTÉRICO, PERFIL GLICÊMICO E LIPÍDICO, EM RATOS EXPOSTOS AOS FATORES DE RISCO DIABETES, TABAGISMO E DISLIPIDEMIA TRATADOS COM CARQUEJA

A hiperglicemia gerada pelo diabetes mellitus promove alterações fisiológicas em todo o organismo, sendo recorrente o aparecimento de distúrbios gastrintestinais nos portadores desta doença, devido ao dano ao plexo mioentérico. Além do diabetes, sabe-se que há uma relação entre o uso do tabaco e dislipidemia no sistema digestório, porém, ainda há uma lacuna no conhecimento sobre possíveis alterações nos neurônios entéricos. Algumas plantas medicinais são apontadas como terapias complementares no tratamento de doenças gastrointestinais, dentre elas, a Baccharis trimera, que possui em sua composição antioxidantes, que podem exercer efeito neuroprotetor nos neurônios do plexo mioentérico. O objetivo do presente estudo foi avaliar o possível efeito protetor da B. trimera, popularmente conhecida como carqueja, sobre os neurônios mioentéricos, perfil lipídico e glicêmico de ratos expostos ao modelo experimental com a indução do diabetes mellitus, dislipidemia e o tabagismo. Ratos machos, Wistar, com 90 dias, foram divididos em cinco grupos (n=5), (C-) animais normoglicêmicos, não dislipidêmicos e não tabagistas tratados com veículo (água filtrada), (C+) diabético, dislipidêmico e tabagista tratados com veículo (água filtrada) e animais diabéticos, dislipidêmicos e tabagistas tratados com diferentes doses de carqueja (BT30mg/kg, BT100mg/kg e BT300mg/kg). A indução do diabetes foi realizada via intraperitoneal, com 60mg/kg de estreptozotocina, a dislipidemia, pela adição de 0,5% de colesterol em ração comercial e posteriormente, expostos a inalação de fumaça de nove cigarros comerciais, uma vez por dia, cinco dias por semana, durante quatro semanas. Após 2 semanas, iniciou-se o tratamento com diferentes doses da fração solúvel em etanol de carqueja, via oral por gavagem, uma vez ao dia, por duas semanas em diferentes doses. Foi coletado sangue do plexo ocular dos animais para posteriormente verificar os níveis plasmáticos de colesterol e triglicerídeos. No intuito de quantificar a população de neurônios mioentéricos, foram realizadas as técnicas de coloração básica Giemsa, a fim de marcar a população total e a histoquímica da NADPH-diaforase, que permitiu quantificar os neurônios da subpopulação inibitória. Os animais dos grupos tratados com as diferentes doses de carqueja e C+ apresentaram redução de peso significativa. Na dose de 30mg/kg os níveis plasmáticos de colesterol e triglicerídeos foram reduzidos, porém, não houve redução da glicemia nos ratos tratados com B. trimera. Não foi observada redução neuronal significativa entre os neurônios nitrérgicos, identificados pela técnica NADPH-diaforase, contudo, pelo método de Giemsa, foi observada redução do número de neurônios, dos grupos controle positivo (C+) e os grupos tratados com carqueja (BT30, BT100 e BT300), em relação ao grupo controle negativo (C-), o que pode ter sido agravado pela inclusão do tabagismo ou da dieta hipercolesterolêmica. Assim pode-se concluir que na dose de 30mg/kg de carqueja houve redução significativa nos níveis plasmáticos de colesterol e triglicerídeos, contudo, não foi encontrada redução glicêmica em nenhum dos tratamentos. Quanto aos neurônios mioentéricos a carqueja não apresentou efeitos protetores com redução significativa na quantificação da população total, e a manutenção da subpopulação nitrérgica em todos os grupos, nos permite sugerir que estes neurônios são mais resistentes aos efeitos deletérios do diabetes, tabagismo e dieta hipercolesterolêmica.

The hyperglycemia generated by diabetes mellitus promotes physiological changes throughout the body, with the appearance of gastrointestinal disorders in patients with this disease recurring, due to damage to the myenteric plexus. In addition to diabetes, it is known that there is a relationship between tobacco use and dyslipidemia in the digestive system, however, there is still a gap in knowledge about possible changes in enteric neurons. Some medicinal plants are considered as complementary therapies in the treatment of gastrointestinal diseases, among them, Baccharis trimera, which has antioxidants in its composition, which can exert a neuroprotective effect on neurons in the myenteric plexus. The aim of the present study was to evaluate the possible protective effect of B. trimera, popularly known as gorse, on the myenteric neurons, lipid and glycemic profile of rats exposed to the experimental model with the induction of diabetes mellitus, dyslipidemia and smoking. Male, 90-day-old Wistar rats were divided into five groups (n=5), (C-) normoglycemic, non-dyslipidemic and non-smoking animals treated with vehicle (filtered water), (C+) diabetic, dyslipidemic and smoking treated with vehicle (filtered water) and diabetic, dyslipidemic animals and smokers treated with different doses of gorse (BT30mg/ kg, BT100mg/kg and BT300mg/kg). Diabetes induction was performed intraperitoneally, with 60mg/kg of streptozotocin, dyslipidemia, by the addition of 0.5% cholesterol in commercial ration and later, exposed to smoke inhalation of nine commercial cigarettes, once a day, five days a week for four weeks. After 2 weeks, treatment with different doses of the fraction soluble in gorse ethanol was started, orally by gavage, once a day, for two weeks in different doses. Blood was collected from the animals' ocular plexus to later check plasma levels of cholesterol and triglycerides. In order to quantify the population of myenteric neurons, basic Giemsa staining techniques were performed in order to mark the total population and the histochemistry of NADPH-diaphorase, which allowed quantifying the neurons of the inhibitory subpopulation. The animals in the groups treated with different doses of carqueja and C + showed significant weight reduction. At a dose of 30mg / kg, plasma levels of cholesterol and triglycerides were reduced, however, there was no reduction in blood glucose in rats treated with B. trimera. No significant neuronal reduction was observed between nitrergic neurons, identified by the NADPH-diaphorase technique, however, using the Giemsa method, a reduction in the number of neurons was observed in the positive control groups (C+) and the groups treated with gorse (BT30, BT100 and BT300), in relation to the negative control group (C-), which may have been aggravated by the inclusion of smoking or the hypercholesterolemic diet. Thus, it can be concluded that at the dose of 30mg/kg of gorse there was a significant reduction in plasma cholesterol and triglyceride levels, however, no glycemic reduction was found in any of the treatments. As for myenteric neurons, gorse did not present protective effects with significant reduction in the quantification of the total population, and the maintenance of the nitrergic subpopulation in all groups, allows us to suggest that these neurons are more resistant to the deleterious effects of diabetes, smoking and a hypercholesterolemic diet.

QUANTIFICAÇÃO DOS NEURÔNIOS DO PLEXO MIENTÉRICO DE MORCEGOS DA ESPÉCIE Molossus rufus

Morcegos da espécie Molossus rufus tem hábito alimentar insetívoro o que lhe confere um importante papel na dinâmica biológica do controle de insetos. Características do tubo digestório são marcadas pelo hábito alimentar, elucidando, além das características já conhecidas, diferenças anatomorfohistológicas, podendo inclusive exercer efeitos sobre Sistema Nervoso Entérico (SNE). O SNE está presente ao longo de todo o tubo digestório, estando os neurônios dispostos em plexos, destacando-se dentre eles o plexo mientérico, que atua no controle da motricidade, exercendo assim, influência na absorção dos nutrientes. A organização e densidade dos neurônios mientéricos podem variar de acordo com a espécie animal bem como do segmento do tubo digestório considerado. O óxido nítrico (NO) é um dos principais neurotransmissores presentes nos neurônios mientéricos, atuando como mediador no relaxamento do músculo liso gastrointestinal, de modo que estes neurônios são evidenciados igualmente pela imunohistoquímica da óxido nítrico-sintase (NOS) ou pela histoquímica da NADPH-diaforase. Neste sentido, objetivou-se caracterizar quantitativamente a população neuronal total e subpopulação NADPH-d+ do plexo mientérico de M. rufus, visto que não há relatos sobre o SNE e dos seus plexos em morcegos. Foram coletados cinco espécimes de M. rufus em residência rural na microrregião de Cianorte-PR, região que configura-se como área de amortecimento da Reserva Biológica das Perobas, constituindo corredor ecológico para diversas espécies. Os animais foram transportados individualmente em sacos de algodão, visando minimizar o estresse. A eutanásia foi realizada em câmara saturada com isoflurano e, após confirmada a morte dos animais, foram coletados segmentos de intestino delgado, correspondentes ao jejuno, de igual tamanho, destinados à duas técnicas para marcação neuronal, Giemsa e NADPH-diaforase e, um terceiro fragmento foi destinado às técnicas histológicas de hematoxilina-eosina e tricômio de masson. Todos os procedimentos realizados foram aprovados pelo Comitê de Ética no Uso de Animais da Unipar (CEUA - protocolo n. 34347/2017) e pelo Instituto Chico Mendes de Conservação da Biodiversidade (ICMBio - protocolo n. 60061-1). A partir da análise dos cortes histológicos, evidenciou-se a localização do plexo mientérico entre os estratos longitudinal e circular da túnica muscular. Neurônios Giemsa+ apresentaram uma média de 279,23 neurônios/mm2, já os neurônios nitrérgicos apresentaram em média à 20,40% da população neuronal mientérica total, sendo quantificados uma média de 58,14 neurônios NADPH-d+/mm2. Não há relatos sobre as características do SNE e do plexo mientérico de morcegos, o que impõe uma limitação quanto ao conhecimento completo da sua biologia, conferindo lacunas quanto à compreensão dos morcegos como indivíduos integrantes de um todo complexo, bem como limita possíveis inferências intraespecíficas e interespecíficas sobre os efeitos ambientais da atividade antrópica na sobrevivência destes animais. Os dados coletados mostram-se condizente com estudos anteriores em outras espécies de mamíferos quanto à localização do plexo mientérico bem como a proporção neuronal mientérica NADPH-d+ comparada com a população de neurônios Giemsa+.

Bats of the species Molossus rufus have an insectivorous feeding habit which gives it an important role in the biological dynamics of insect control. Characteristics from digestive tract are marked by the alimentary habit, elucidating, in addition to the known characteristics, anatomorphohistological differences, and may even exert effects on the Enteric Nervous System (ENS). The ENS is present throughout the entire digestive tract, with the neurons disposed in plexus, standing out among them the myenteric plexus, which acts on the motor control, exerting an influence on the absorption of nutrients. The organization and density of the myenteric neurons may vary according to the animal species as well as the segment of the digestive tube under consideration. Nitric oxide (NO) is one of the main neurotransmitters present in the myenteric neurons, acting as mediator in the relaxation of gastrointestinal smooth muscle, so that these neurons are also evidenced by the immunohistochemistry of nitric oxide synthase (NOS) or the histochemistry of NADPH-diaphorase. In this sense, we aimed to quantitatively characterize the total neuronal population and NADPH-d+ subpopulation of the myenteric plexus of M. rufus, since there are no reports on the ENS and its plexus in bats. Five specimens of M. rufus were collected in a rural residence in the Cianorte-PR microregion, a region that is a buffer zone of the Reserva Biológica das Perobas, constituting an ecological corridor for several species. The animals were individually transported in cotton bags in order to minimize stress. Euthanasia was performed in a chamber saturated with isoflurane, confirmed the death of the animals, small intestine segments of jejunum of equal size were collected for two techniques for neural marking, Giemsa and NADPH-diaphorase, and a third fragment was destined to the hematoxylin-eosin and masson trichrome histological techniques. All the procedures performed were approved by the Comitê de Ética no Uso de Animais da Unipar (CEUA - protocol n. 34347/2017) and by the Instituto Chico Mendes de Conservação da Biodiversidade (ICMBio - protocol n. 60061-1). From the analysis of the histological sections, the location of the myenteric plexus between the longitudinal and circular layers from muscular tunica was evidenced. Giemsa+ neurons presented a mean of 279.23 neurons/mm2, whereas the nitrergic neurons presented on average to 20.40% of the total neuronal myenteric population, being quantified a mean of 58.14 neurons NADPH-d+/mm2. There are no reports on the characteristics of the ENS and the myenteric plexus of bats, which imposes a limitation on the complete knowledge of their biology, conferring gaps in the understanding of the bats as individuals integrating a complex whole as well as limiting intraspecific and interspecific inferences, on the environmental effects of anthropic activity on the survival of these animals. The data collected are consistent with previous studies in other mammals on the location of the myenteric plexus as well as the NADPH-d+ myenteric neuronal ratio compared to the population of Giemsa+ neurons.

Aspectos histoquímicos e quantitativos da renutrição precoce e tardia no córtex cerebral de ratos Wistar / Histochemical and quantitative aspects of early and late re-nourishment in the cerebral cortex of Wistar rats

O objetivo desta pesquisa foi avaliar qualitativa e quantitativamente, através de técnicas histológicas e histoquímicas, o córtex cerebral de ratos submetidos a uma subnutrição protéica e posterior recuperação precoce e tardia. Foram utilizados ratos Wistar submetidos às seguintes dietas nutricionais: dieta padrão - normoprotéica - /"AIN-93G/", contendo 20% de proteína (caseína) e dieta hipoprotéica - /"AIN-93G/", contendo 5% desta mesma proteína, durante os períodos experimentais de 42 e 60 dias. [...] Os grupos renutridos, independentemente se precoce (Rp42) ou tardio (Rt60) conseguem alguma recuperação em alguns parâmetros avaliados como peso encefálico, dimensões encefálicas e espessura cortical; porém outros como o peso corporal, e a área neuronal foram gravemente afetados. Todavia quando se observa a razão peso encefálico/peso corporal, os animais dos grupos subnutridos relativamente aos animais controles nutridos, apesar do peso corporal menor apresentam uma razão maior do que os respectivos controles, sugerindo ser o encéfalo menos afetado pela subnutrição do que o peso corporal. A subnutrição promoveu acentuada diminuição na área dos neurônios corticais e nitrérgicos, não recuperada com a renutrição, independentemente se precoce ou tardia. Portanto, conforme o proposto e com a metodologia utilizada no presente estudo pesquisa, os resultados permitem concluir que frente às condições de subnutrição, o organismo pode sofrer alterações irreparáveis dependendo do momento da vida em que ocorre, e que a renutrição pode promover recuperação ou mesmo adaptações em alguns parâmetros, preferencialmente se ocorrer em fases mais precoces

The objective of this study was to evaluate qualitative and quantitatively, through histological and histochemical techniques, the cerebral cortex of rats subjected to protein undernutrition subsequent to early and late recovery. Were used Wistar rats fed with standard (normal) diet-/"AIN-93G/" containing 20% of protein (casein), and hypoproteic diet- /"AIN-93G/" containing 5% of casein during experimental periods of 42 and 60 days. [...] Were observed that re-nourished groups either early (Rp42) or late (Rt60) have recovered in some parameters evaluated such as brain weight, brain measures and cortical thickness; however other parameters like body mass, and neuronal area was highly affected. Relatively to the proportion brain weight/body mass, animals from undernourished group although exhibit low body mass, shown higher proportion than respective control nourished, thus suggesting that brain is less affected by undernutrition than body mass. The undernutrition promoted great decreasing of cortical and nitrergic neurons area; the area was not recovered by early and/or late re-nourishment. In the view of the objectives and methodology used in the present study, we can be conclude that in under-nutrition conditions the body can go through irreversible changes depending on period of occurrence; additionally, re-nourishment can promote recovery or adaptations in some parameters preferentially if occur in early phases

Aspectos histoquímicos e quantitativos da renutrição precoce e tardia no córtex cerebral de ratos Wistar / Histochemical and quantitative aspects of early and late re-nourishment in the cerebral cortex of Wistar rats

O objetivo desta pesquisa foi avaliar qualitativa e quantitativamente, através de técnicas histológicas e histoquímicas, o córtex cerebral de ratos submetidos a uma subnutrição protéica e posterior recuperação precoce e tardia. Foram utilizados ratos Wistar submetidos às seguintes dietas nutricionais: dieta padrão - normoprotéica - \"AIN-93G\", contendo 20% de proteína (caseína) e dieta hipoprotéica - \"AIN-93G\", contendo 5% desta mesma proteína, durante os períodos experimentais de 42 e 60 dias. [...] Os grupos renutridos, independentemente se precoce (Rp42) ou tardio (Rt60) conseguem alguma recuperação em alguns parâmetros avaliados como peso encefálico, dimensões encefálicas e espessura cortical; porém outros como o peso corporal, e a área neuronal foram gravemente afetados. Todavia quando se observa a razão peso encefálico/peso corporal, os animais dos grupos subnutridos relativamente aos animais controles nutridos, apesar do peso corporal menor apresentam uma razão maior do que os respectivos controles, sugerindo ser o encéfalo menos afetado pela subnutrição do que o peso corporal. A subnutrição promoveu acentuada diminuição na área dos neurônios corticais e nitrérgicos, não recuperada com a renutrição, independentemente se precoce ou tardia. Portanto, conforme o proposto e com a metodologia utilizada no presente estudo pesquisa, os resultados permitem concluir que frente às condições de subnutrição, o organismo pode sofrer alterações irreparáveis dependendo do momento da vida em que ocorre, e que a renutrição pode promover recuperação ou mesmo adaptações em alguns parâmetros, preferencialmente se ocorrer em fases mais precoces (AU)

The objective of this study was to evaluate qualitative and quantitatively, through histological and histochemical techniques, the cerebral cortex of rats subjected to protein undernutrition subsequent to early and late recovery. Were used Wistar rats fed with standard (normal) diet-\"AIN-93G\" containing 20% of protein (casein), and hypoproteic diet- \"AIN-93G\" containing 5% of casein during experimental periods of 42 and 60 days. [...] Were observed that re-nourished groups either early (Rp42) or late (Rt60) have recovered in some parameters evaluated such as brain weight, brain measures and cortical thickness; however other parameters like body mass, and neuronal area was highly affected. Relatively to the proportion brain weight/body mass, animals from undernourished group although exhibit low body mass, shown higher proportion than respective control nourished, thus suggesting that brain is less affected by undernutrition than body mass. The undernutrition promoted great decreasing of cortical and nitrergic neurons area; the area was not recovered by early and/or late re-nourishment. In the view of the objectives and methodology used in the present study, we can be conclude that in under-nutrition conditions the body can go through irreversible changes depending on period of occurrence; additionally, re-nourishment can promote recovery or adaptations in some parameters preferentially if occur in early phases (AU)

Caraterização morfoquantitativa do plexo mioentérico do esôfago no modelo de distrofia muscular camundongo MDX / Morphoquantitative features of myenteric plexus of the oesophagus in MDX mice

A Distrofia Muscular de Duchenne (DMD) [...]. Além dos graves distúrbios cardiorrespiratórios e da motricidade, o paciente apresenta disfunções do sistema digestório, caracterizadas pelas desordens da motilidade. Entretanto, sabe-se que tais disfunções não ocorrem no camundongo MDX. O objetivo deste estudo foi estimar a densidade numérica por área da população total de neurônios (QA[T]) e dos neurônios nitrérgicos (QA[N]); assim como a área de secção transversal média do corpo celular destes neurônios (A[T] e A[N]) do plexo mioentérico esofágico e a largura média das fibras estriadas (L) das camadas musculares. Foram utilizados 40 camundongos machos da linhagem C57BL/10 nas idades de 4 e 10 semanas, distribuídos entre grupos experimentais (MDX4 e MDX10), e controles (C4 e C10). As estimativas foram analisadas em preparados de membrana dos esôfagos, e técnicas histoquímicas de NADH-diaforase (NADH-d) e NADPH-diaforase (NADPH-d) foram utilizadas para evidenciar toda a população de neurônios e os neurônios nitrérgicos, respectivamente. Os resultados mostraram que a QA[T] foi significativamente maior no grupo MDX10 em relação ao C10 (p<0.05); enquanto a QA[N] foi menor no grupo MDX4 em relação ao C4 (p<0.05). A A[T] foi menor no grupo MDX10 em relação ao MDX4 e ao C10 (p<0.05); enquanto que para a A[N] não houve diferença significativa entre os grupos controle e experimental, e tampouco entre os grupos de 4 e de 10 semanas. A variável L foi maior nos grupos MDX4 e MDX10 em relação aos seus respectivos controles de mesma idade (p<0.05). Concluímos que no plexo mioentérico esofágico de camundongos MDX existe uma redução dos neurônios mediadores do relaxamento, especialmente em animais jovens (MDX4), provavelmente porque o organismo tenta manter íntegra a função peristáltica do órgão. Esse fato pode explicar a adaptação e ausência de disfunções esofágicas durante quase toda a vida desses animais

Duchenne Muscular Dystrophy (DMD) [...]. DMD is degenerative, progressive and a genetic X-linked disease. Besides the cardiomyopathy and the movement disorders, the patients have serious disfunctions in the alimentary system, characterized by motility disorders. However, it is known that such changes do not exist in MDX mice. The aim of this study was to estimate the neuronal numerical density/area of total (QA[T]) and nitregic neurons (QA[N]), the average cross-sectional area of total (A[T]) and nitregic (A[N]) neurons in myenteric plexus of the oesophagus and the average width of striped muscle of muscular layer (L). Forty C57BL/10 male mice were studied from four to ten weeks of age, divided into four groups: MDX mice formed the experimental groups (MDX4 and MDX10) and C57BL/10 male mice without the mutation formed the control groups (C4 and MDX10). Whole mounts preparations were obtained from the samples and histochemistry for NADH-diaphorase (NADH-d) and NADPH-diaphorase (NADPH-d) were used for morphometric evaluation. The results showed a significant increase of the QA[T] in the MDX10 than C10 (p<0.05), and a decrease of the QA[N] in MDX4 comparing to C4 (p<0.05). The A[T] decreased significantly in MDX10 comparing to both MDX4 and C10 (p<0.05), while no significant differences were observed among all the groups regarding the A[N]. The groups MDX4 and MDX10 showed a significant increase in L when compared to its controls at the same age (p<0.05). We conclude that in the myenteric plexus of the oesophagus in MDX mice there is a reduction of the inhibitory neurons, manly in the young animals (MDX4), probably to keep normal the peristaltic functions. Thus, it may explain the adaptation and the absence of oesophageal disfunction during almost the whole life in this animal model

Caraterização morfoquantitativa do plexo mioentérico do esôfago no modelo de distrofia muscular camundongo MDX / Morphoquantitative features of myenteric plexus of the oesophagus in MDX mice

A Distrofia Muscular de Duchenne (DMD) [...]. Além dos graves distúrbios cardiorrespiratórios e da motricidade, o paciente apresenta disfunções do sistema digestório, caracterizadas pelas desordens da motilidade. Entretanto, sabe-se que tais disfunções não ocorrem no camundongo MDX. O objetivo deste estudo foi estimar a densidade numérica por área da população total de neurônios (QA[T]) e dos neurônios nitrérgicos (QA[N]); assim como a área de secção transversal média do corpo celular destes neurônios (A[T] e A[N]) do plexo mioentérico esofágico e a largura média das fibras estriadas (L) das camadas musculares. Foram utilizados 40 camundongos machos da linhagem C57BL/10 nas idades de 4 e 10 semanas, distribuídos entre grupos experimentais (MDX4 e MDX10), e controles (C4 e C10). As estimativas foram analisadas em preparados de membrana dos esôfagos, e técnicas histoquímicas de NADH-diaforase (NADH-d) e NADPH-diaforase (NADPH-d) foram utilizadas para evidenciar toda a população de neurônios e os neurônios nitrérgicos, respectivamente. Os resultados mostraram que a QA[T] foi significativamente maior no grupo MDX10 em relação ao C10 (p<0.05); enquanto a QA[N] foi menor no grupo MDX4 em relação ao C4 (p<0.05). A A[T] foi menor no grupo MDX10 em relação ao MDX4 e ao C10 (p<0.05); enquanto que para a A[N] não houve diferença significativa entre os grupos controle e experimental, e tampouco entre os grupos de 4 e de 10 semanas. A variável L foi maior nos grupos MDX4 e MDX10 em relação aos seus respectivos controles de mesma idade (p<0.05). Concluímos que no plexo mioentérico esofágico de camundongos MDX existe uma redução dos neurônios mediadores do relaxamento, especialmente em animais jovens (MDX4), provavelmente porque o organismo tenta manter íntegra a função peristáltica do órgão. Esse fato pode explicar a adaptação e ausência de disfunções esofágicas durante quase toda a vida desses animais (AU)

Duchenne Muscular Dystrophy (DMD) [...]. DMD is degenerative, progressive and a genetic X-linked disease. Besides the cardiomyopathy and the movement disorders, the patients have serious disfunctions in the alimentary system, characterized by motility disorders. However, it is known that such changes do not exist in MDX mice. The aim of this study was to estimate the neuronal numerical density/area of total (QA[T]) and nitregic neurons (QA[N]), the average cross-sectional area of total (A[T]) and nitregic (A[N]) neurons in myenteric plexus of the oesophagus and the average width of striped muscle of muscular layer (L). Forty C57BL/10 male mice were studied from four to ten weeks of age, divided into four groups: MDX mice formed the experimental groups (MDX4 and MDX10) and C57BL/10 male mice without the mutation formed the control groups (C4 and MDX10). Whole mounts preparations were obtained from the samples and histochemistry for NADH-diaphorase (NADH-d) and NADPH-diaphorase (NADPH-d) were used for morphometric evaluation. The results showed a significant increase of the QA[T] in the MDX10 than C10 (p<0.05), and a decrease of the QA[N] in MDX4 comparing to C4 (p<0.05). The A[T] decreased significantly in MDX10 comparing to both MDX4 and C10 (p<0.05), while no significant differences were observed among all the groups regarding the A[N]. The groups MDX4 and MDX10 showed a significant increase in L when compared to its controls at the same age (p<0.05). We conclude that in the myenteric plexus of the oesophagus in MDX mice there is a reduction of the inhibitory neurons, manly in the young animals (MDX4), probably to keep normal the peristaltic functions. Thus, it may explain the adaptation and the absence of oesophageal disfunction during almost the whole life in this animal model (AU)

Análise morfométrica e quantitativa dos neurônios do plexo mientérico do ceco de ratos submetidos a intensa carência de proteína / Análisis morfométrica y cuantitativa de las neuronas del plexo mientérico del ceco de ratas sometidos a una intensa carencia de proteína / Quantitative and morphometric analysis of myenteric neuron from the cecum of rats submitted to intensive protein deficiency

Avaliaram-se os efeitos crônicos de uma dieta severamente hipoprotéica, sobre aspectos quantitativos e morfométricos de neurônios mientéricos, NADPH-diaforase positivos do ceco de ratos jovens. Oito ratos foram divididos em dois grupos, sendo que para um dos grupos foi oferecida ração com teor protéico de 26% (controle) e, para o outro, ração com o teor protéico de 4%, mantendo-se o balanço vitamínico e mineral durante 12 semanas. Após eutanásia, o ceco de cada animal foi coletado e dissecado para confecção de preparados de membrana, os quais foram submetidos à técnica da NADPH-diaforase. Para contagem e mensuração destes neurônios, o ceco foi dividido em quatro regiões: apical mesentérica; apical antimesentérica; basal antimesentérica; próxima à ampola cecal. Não se observou alteração significativa para o peso dos animais, área do ceco e densidade populacional dos neurônios mientéricos no final do experimento. Por outro lado, em algumas regiões do ceco, os neurônios tiveram redução da área nuclear, com conseqüente redução da área do pericário(AU)

The chronicle effects of a severe hypoproteic diet on quantitative and morphometric aspects of NADPHdiaphorase-positive myenteric neurons from the cecum of young rats were assessed. Eight rats were divided into two groups. One group (control) was fed with 26%-protein chow and the other with 4%-protein chow during 12 weeks. The vitamin and mineral balance was kept. After euthanasia, the cecum of each animal was collected and dissected for the whole-mount preparation, which were submitted to NAPDH-diaphorase. The cecum was divided into four regions for counting and measurement of neurons: apical mesenteric, antimesenteric apical, basal antimesenteric, and next to the cecal ampulla. Significant alterations were not noted with respect to the weight of the animals, cecum area, and population density of myenteric neurons at the end of the experiment. On the other hand, in some regions of the cecum, the neurons presented a reduction of the nuclear area with resulting reduction of the soma area(AU)

Se evaluaron los efectos crónicos de una dieta severamente hipoprotéica, sobre aspectos cuantitativos y morfométricos de neuronas mientéricos, NADPH-diaforase positivos del ceco de ratas jóvenes. Ocho ratas fueron divididas en dos grupos, siendo que para uno de los grupos fue ofrecida ración con tenor proteico de 26% (control) y, para el otro, ración con el tenor proteico de 4%, manteniéndose el balance vitamínico y mineral durante 12 semanas. Tras eutanasia, El ceco de cada animal fue recolectado y disecado para confección de preparados de membrana, los cuales fueron sometidos a la técnica de la NADPH-diaforase. Para recuento y mensuración de estas neuronas, el ceco fue dividido en cuatro regiones: apical mesentérica, apical antimesentérica, basal antimesentérica y próxima a la ampolla cecal. No se observó alteración significativa en el peso de los animales, área del ceco y densidad poblacional de las neuronas mientéricas al final Del experimento. Por otro lado, en algunas regiones del ceco las neuronas tuvieron reducción del área nuclear, con consecuente reducción del área del pericario(AU)

Estudo morfométrico e estereológico do gânglio celíaco em cães sadios / Morphometric and stereological study of the celiac ganglia in healthy dogs

Nesta pesquisa o aspecto macroestrutural, microestrutural e histoquímico foram investigados em 6 cães clinicamente saudáveis para identificar a possível alteração na estrutura, morfométrica e parâmetros quantitativos de neurônios do complexo ganglionar celíaco. Nossa observação revela que o gânglio celíaco foi originado da origem da artéria celíaca e mostra um aspecto irregular sendo caracterizado como um complexo. Histoquimicamente, neurônios NADPH diaforase reativos foram identificados. Esta reação positiva, em animais saudáveis, permite-nos concluir que estes neurônios eram potencialmente nitrergicos, contudo, para confirmar o aspecto nitrergico para estes neurônios ele é necessário combinar métodos imunohistoquimicos.(AU)

In this research, the macrostructural, microstructural and histochemical aspects were Investigated in 6 clinacally health dogs to identify the possible alterations on the structure, morphometric and qualitative parameteres of neurons of the celiac ganglionar complex. Our observations revealed that the celiac ganglion was originated dose to the origin of the celiac artery and showed a irregular aspect, being caractherized as a complex. Histochemical/y, neurons NADPH diaphorase reactives were identified. This positive reaction, on health animais, led us to conclude this neurons were potentially nitrergic, besides, to confirm the nitrergic aspect for this neurons it isnecessary to combine immunohistochemical method.(AU)

Caracterização morfoquantitativa do plexo mioentérico do intestino delgado de camundongos mdx : um modelo de distrofia muscular de Duchenne / Morphoquantitative features of myenteric plexus of small intestine of mdx mice: a model for Duchenne muscular dystrophy

O plexo mioentérico é uma vasta rede de nervos e gânglios localizado entre as camadas longitudinal e circular da túnica muscular externa de todo o trato gastrintestinal (TGI). A distrofia muscular de Duchenne (DMD) é uma miopatia ligada ao cromossomo X causada pela ausência da distrofina que, além dos evidentes efeitos degenerativos no músculo esquelético, causa severas alterações do TGI. No entanto as causas dessas alterações não são claras. Pesquisadores demonstraram que a distrofina é expressa nas fibras musculares lisas e também nos neurônios do plexo mioentérico, todavia não existe um consenso sobre o papel desta nessas estruturas. Desta forma pretende-se estudar os componentes do plexo mioentérico do intestino delgado de camundongos mdx (o modelo animal da DMD) nas idades de 4 e 10 semanas e de seus respectivos controles, camundongos C57BL/10. Os animais de ambos os grupos tiveram o intestino delgado retirado e seccionado em segmentos oral, médio e aboral para posterior avaliação através das técnicas histoquímicas de evidenciação neuronal: NADH-d, NADPH-d e AChE. Além disso, a musculatura lisa e os neurônios do plexo mioentérico foram analisados por MET. A análise quantitativa mostrou que o grupo MDX4 apresentou uma área total do intestino delgado significativamente maior que o C4 (p<0,05). Para as técnicas da NADH-d e NADPH-d foi observado um gradiente crescente de densidade numérica neuronal, no sentido oral-aboral, para todos os grupos estudados. O grupo MDX4 apresentou uma densidade neuronal significativamente menor que o C4 (p<0,05), todavia MDX10 e C10 foram iguais. Além disso, a densidade neuronal dos grupos de 10 semanas foi significativamente menor que dos de 4 semanas para ambas as técnicas (p<0,05). Em relação à estimativa do número total de neurônios, MDX10 e C10 apresentaram uma significativa redução de neurônios NADH-d positivos, quando comparada à dos grupos MDX4 e C4 (p<0,05), porém, para os neurônios NADPH-d positivos, a estimativa dos grupos de 10 semanas foi estatisticamente superior que à dos de 4 semanas (p<0,05). O grupo MDX4 apresentou uma área do perfil de neurônios nitrérgicos significativamente maior que o C4 (p<0,05). Na técnica da NADH-d, não foi detectada diferença significativa relativa à esse aspecto. Comparativamente ao grupo C4, os neurônios do grupo MDX4 não apresentaram intensa reatividade a AChE, mas foram iguais em 10 semanas. Referente à ultra-estrutura dos neurônios, esta apresentou-se preservada em todos os grupos, no entanto as fibras musculares lisas do grupo MDX apresentaram alterações morfológicas

The myenteric plexus is an extensive network of nerve strands and ganglia located between the outer longitudinal and inner circular muscle layers of the external muscle coat of the gastrointestinal tract (GI). Duchenne muscular dystrophy (DMD) is a X-linked degenerative muscular myopathy caused by the absence of dystrophin which, apart from the obvious degenerative effects in skeletal muscle, causes severe alterations of gastrointestinal (GI) tract. However the causes of these changes remain unclear. Researchers have shown that dystrophin is expressed in both smooth muscle fibers and myenteric plexus neurons, however there is no consensus on the role of it in these structures. Thus, we intend to study the components of the myenteric plexus of the small intestine of mdx mice (an animal model for DMD) at the ages of 4 and 10 weeks and their respective controls, C57BL/10 mice. The animals of both groups had the small intestine removed and sectioned into oral, middle and aboral segments for further evaluation by histochemical techniques of neuronal evidencing: NADH-d, NADPH-d and AChE. In addition, smooth muscle and myenteric plexus neurons were analyzed by TEM. The quantitative analysis showed that the MDX4 group had a significantly higher small intestine total area than the C4 (p <0.05). For the techniques of NADH-d and NADPH-d was observed an increasing gradient of neuronal numerical density, in the oral-aboral direction, for all groups. The MDX4 group showed a significantly lower neuronal density than C4 (p<0.05), however MDX10 and C10 were the same. In addition, the neuronal density of 10 weeks groups was significantly lower than those of 4 weeks for both techniques (p <0.05). Considering the total estimative number of neurons, MDX10 and C10 showed a significant reduction of NADH-d positive neurons, compared to groups MDX4 and C4 (p <0.05), but for the NADPH-d positive neurons, the estimative of 10 weeks groups was statistically higher than that of 4 weeks (p <0.05). The MDX4 group showed an nitrergic neurons profile area significantly higher than the C4 (p <0.05). In the technique of the NADH-d, no significant difference was detected on this aspect. Compared to the C4 group, neurons of MDX4 group did not show intense AChE reactivity, but they were equal in 10 weeks. Concerning the neurons ultrastructure, it was preserved in all groups, however the smooth muscle fibers of MDX group showed morphological changes

Avaliação histoquímica, imuno-histoquímica e morfométrica do plexo mioentérico do jejuno e do colo de ratos Wistar durante o desenvolvimento pós-natal / Histochemical, immunohistochemical and morphometric evaluation of the myenteric plexus of jejunum and colon in Wistar rats during postnatal development

O objetivo desta pesquisa foi quantificar os neurônios mioentéricos do jejuno e do colo durante o desenvolvimento pós-natal de ratos Wistar utilizando morfometria com enfoque estereológico e analisar as mudanças na área ocupada por neurônios e axônios mediante Sistemas de Informação Geográfica (SIG). Foram usadas 20 fêmeas de ratos da linhagem Wistar, divididas em grupos de acordo com a idade pós-natal em dias (G0, G7, G21 e G60). A análise morfométrica foi realizada em preparados totais de membrana usando azul cuprolínico, histoquímica para acetilcolinesterase (AChE) e NADPH-diaforase (NADPH-d), e imuno-histoquímicas para VIP e substância P. Foram estimadas a densidade numérica neuronal/área de superfície serosa, o número total de neurônios por segmento e a área neuronal média. A análise da área ocupada por neurônios e axônios foi realizada a partir de imagens de NADPH-d e AChE. Ocorreu uma diminuição significativa na densidade neuronal/área, nos neurônios totais e nos neurônios nitrérgicos a partir de G7 no jejuno e de G0 no colo, e nos neurônios colinérgicos entre G0 e G7 no jejuno e G0 e G21 no colo. O número total de neurônios corados com azul cuprolínico aumentou significativamente no colo a partir de G7; houve aumento dos neurônios nitrérgicos entre G7 e G21 e nos neurônios colinérgicos entre G21 e G60. No jejuno somente houve aumento do número total de neurônios nitrérgicos entre G0 e G7. Também foi percebido um aumento significativo na área dos neurônios nitrérgicos a partir de G7 no jejuno e de G0 no colo, e dos neurônios colinérgicos entre G7 e G21 no jejuno e G0 e G21 no colo. A área ocupada pelos axônios aumentou entre os grupos G0 e G7, diminuiu entre G7 e G21 e aumentou de novo entre G21 e G60. Estes resultados demonstraram que os neurônios e os axônios sofrem mudanças morfológicas e químicas durante o desenvolvimento pós-natal do sistema nervoso entérico, provavelmente devido a fatores microambientais como os fatores de crescimento e de replicação, a alimentação e o próprio crescimento do intestino. É possível que a completa maturidade do intestino somente seja completada quando este finaliza o seu processo de crescimento

The aim of this study was to quantify jejunum and colon myenteric neurons during postnatal development in Wistar rats using morphometry and to analyse the changes in the area occupied by neurons and axons using Geographic Information Sistem (GIS). Twenty female Wistar rats divided in groups according to the age in days (G0, G7, G21 e G60) were used. Whole mount preparations using cuprolinic blue (CB), histochemistry for acetyl-cholinesterase (AChE) and NADPH-diaphorase (NADPH-d) and immunohistochemistry for VIP and substance P were used for morphometric evaluation. Neuronal numerical density/area of serosal surface, total number of neurons for segment and mean neuronal area were estimated. Analyses of the area ocuppied by neurons and axons were performed using images of NADPH-d and AChE. This study showed a significant decrease in the neuronal numerical density/area in total and nitrergic neurons from G7 in jejunum and G0 in colon, and in cholinergic neurons from G0 and G7 in jejunum and G0 and G21 in colon. In colon, total number of neurons increased significantly in cuprolinic blue stain from G7, in NADPH-d between G7 and G21 and in AChE between G21 and G60. In jejunum, there was a significant increase in the same parameter between G0 and G7 in NADPH-d. There was also a significant increase in the mean area of nitrergic neurons from G7 in jejunum and from G0 in colon, and in cholinergic neurons between G7 and G21 in jejunum and between G0 and G21 in colon. The area occupied by axons increased between G0 and G7, between G7 and G21 decreased and increased again between G21 and G60. This results showed that neurons and axons suffer morphologic and chemical changes during postnatal development in the enteric nervous system, probably due to micro-environmental factors as growth and replication factors, nutrition and growing of the intestine. It is possible that complete maturity of the intestine is achieved when it finishes its growing process

Evaluation of the population of NADPH-diaphorase positive myenteric neurons from the body of the stomach of diabetic rats induced by streptozotocin - DOI: 10.4025/actascibiolsci.v26i1.1667 / Avaliação da população de neurônios mioentéricos NADPH-diaforase positivos do corpo do estômago de ratos com diabetes crônico induzido pela estreptozootocina - DOI: 10.4025/actascibiolsci.v26i1.1667

The aim of this study was to analyze the morphoquantitative features of the nitrergic myenteric neurons from the body of the stomach of diabetic rats. The body of the stomach of five normoglicemic rats and of five diabetic rats were prepared as whole-mounts stained by the histochemical technique of NADPH-diaphorase. Decreased body weight and increased daily ingestion of water, fast glicemia and glycated hemoglobin were verified in diabetic animals. According to the data obtained, significant difference in the density of nitrergic neurons was not observed between the two groups, but the areas of the neuronal cell body profiles in the diabetic rats were significantly larger. Results showed that the streptozotocin that induced diabetes does not accelerate the death of the nitrergic neurons, but increases the expression of these cells

O presente estudo teve por objetivo analisar as características morfoquantitativas de neurônios mioentéricos nitrérgicos do corpo do estômago de ratos diabéticos. O corpo do estômago de 5 ratos normoglicêmicos e de 5 ratos diabéticos foi submetido a preparados de membrana corados pela técnica histoquímica da NADPH-diaforase. Verificaram-se, nos animais diabéticos, diminuição do peso corporal, aumento do consumo diário de água, da glicemia em jejum e da hemoglobina glicada. Com os dados obtidos, não foi observada diferença significativa na densidade de neurônios nitrérgicos entre os dois grupos, porém as áreas dos perfis celulares neuronais dos ratos diabéticos foram significativamente maiores. Constatou-se, portanto, que o diabetes induzido por estreptozootocina não acelera a morte dos neurônios nitrérgicos, contudo aumenta a expressão desses neurônios

Evaluation of the population of NADPH-diaphorase positive myenteric neurons from the body of the stomach of diabetic rats induced by streptozotocin - DOI: 10.4025/actascibiolsci.v26i1.1667 / Avaliação da população de neurônios mioentéricos NADPH-diaforase positivos do corpo do estômago de ratos com diabetes crônico induzido pela estreptozootocina - DOI: 10.4025/actascibiolsci.v26i1.1667

The aim of this study was to analyze the morphoquantitative features of the nitrergic myenteric neurons from the body of the stomach of diabetic rats. The body of the stomach of five normoglicemic rats and of five diabetic rats were prepared as whole-mounts stained by the histochemical technique of NADPH-diaphorase. Decreased body weight and increased daily ingestion of water, fast glicemia and glycated hemoglobin were verified in diabetic animals. According to the data obtained, significant difference in the density of nitrergic neurons was not observed between the two groups, but the areas of the neuronal cell body profiles in the diabetic rats were significantly larger. Results showed that the streptozotocin that induced diabetes does not accelerate the death of the nitrergic neurons, but increases the expression of these cells

O presente estudo teve por objetivo analisar as características morfoquantitativas de neurônios mioentéricos nitrérgicos do corpo do estômago de ratos diabéticos. O corpo do estômago de 5 ratos normoglicêmicos e de 5 ratos diabéticos foi submetido a preparados de membrana corados pela técnica histoquímica da NADPH-diaforase. Verificaram-se, nos animais diabéticos, diminuição do peso corporal, aumento do consumo diário de água, da glicemia em jejum e da hemoglobina glicada. Com os dados obtidos, não foi observada diferença significativa na densidade de neurônios nitrérgicos entre os dois grupos, porém as áreas dos perfis celulares neuronais dos ratos diabéticos foram significativamente maiores. Constatou-se, portanto, que o diabetes induzido por estreptozootocina não acelera a morte dos neurônios nitrérgicos, contudo aumenta a expressão desses neurônios

Estudo morfométrico e estereológico do gânglio celíaco em cães sadios e acometidos pelo Diabetes mellitus / Morphometric and estereologic study of the celiac ganglion on health dogs and on Diabetes mellitus

Nesta pesquisa, os aspectos macroestruturais, microestruturas e histoquímicos do complexo ganglionar celíaco foram investigados em 6 cães domésticos saudáveis e 6 cães domésticos acometidos pela diabetes mellitus, com o objetivo de identificar possíveis diferenças estruturais, morfométricas e quantitativas nos neurônios ganglionares celíacos. desta forma, observamos o gânglio celíaco esquerdo originou-se junto à origem da artéria celíaca esquerda e apresentava um formato irregular, seu aspecto era nodular, caracterizando um complexo ganglionar. Em relação a histoquímica, foram encontrados neurônios NADPH-diaphorase positivos, apresentando reação visível. A positividade da reação permitiu-nos concluir que há neurônios potencialmente nitrérgicos no gânglio celíaco de animais sadios e diabéticos. No entanto, não podemos afirmar se estes neurônios são efetivamente nitrérgicos, porque exige a combinação de outras reações imunohistoquímicas. O tamanho do corpo celular do neurônio do gânglio celíaco, representado pela sua área seccional, aumentou significativamente nos animais do grupo diabético quando comparado aos do grupo controle, tendo um fator de aumento de 1,3x. O aumento na área seccional do núcleo no grupo diabético foi de 1,39x maior que no grupo controle, sendo este aumento significativo. Em termos práticos isto significa que nos animais diabéticos, o núcleo e o corpo celular neuronal aumentam em proporções muito próximas

In this research, the macrostructural, microstructural and histochemical aspects were investigated in 6 clinacally health dogs and 6 diabetic dogs aiming to identify the possible alterations on the strucutre, morphometric and qualitative parameteres of neurons of the celiac ganglionar complex. Our observations revealed that the celiac ganglion was originated close to the origin of the celiac artery and showed a irregular aspect, being caractherized as a complex. Histochemically, neurons NADPH-diaphorase reactives were identified. This positive reaction, on both health and diabetic animals, led us to conclude this neurons were potentially nitrergic, besides, to confirm the nitrergic aspect for this neurons it is necessary to combine immunohistochemical method. Neurons celular body size of the celiac ganglion, represented by its sectional area, increased significantly, at 1.3x rate, on the diabetic animals when compared to the health animals. The increase on the nuclear sectional area of the diabetic animals were significant, at 1.39x rate larger than the other group. These results mean that on the diabetic animals, nuclear and neuronal body celular raise rate increases proportionally