A utilização de ozônio na prevenção e terapêutica de mastite em vacas leiteiras

A mastite é uma doença que causa diversos problemas na produção e consumo de leite e seus derivados. Essa doença também compromete o bem-estar animal devido ao desconforto causado na vaca e gera prejuízos econômicos ao produtor. A pesquisa teve como objetivo avaliar o uso do ozônio na prevenção e tratamento da mastite em vacas leiteiras, buscando verificar o seu potencial contra a resistência microbiana que vem se consolidando nas últimas décadas. Para a realização dessa pesquisa foi realizada uma revisão da literatura objetivando-se o estudo atual sobre o uso do ozônio no enfrentamento da mastite em vacas leiteiras. Também foi realizada uma prospecção tecnológica com o objetivo de se ter um quadro mais claro da área da pesquisa e os investimentos necessários para assim definir diretrizes baseadas em tecnologias mais atualizadas e de uso mais comum. Com toda esta base do conhecimento estabelecida, foi realizado um experimento visando ao estudo da eficiência do ozônio na prevenção e tratamento da mastite clínica e subclinica em vacas leiteiras. Desse experimento, um relato do caso foi apresentado mostrando o efeito do tratamento controle (antibiótico) comparado com o tratamento de solução ozonizada (5mL de soro ozonizado + 5mL de óleo de girassol ozonizado). Para o projeto de pesquisa, analisou-se o efeito de um tratamento controle (antibiótico) comparado com três tratamentos com ozônio, sendo os grupos a)solução fisiológica ozonizada na concentração de 12,5 g / ml e duas concentrações diferentes de gás, b) uma a 20 g /ml e c) outro a 40mg / ml. Ao final dos estudos, foram obtidos resultados favoráveis para os tratamentos com ozônio, recomendando-se que mais estudos que aprofundem e ampliem o conhecimento a respeito do uso do ozônio para o tratamento da mastite em vacas leiteiras.

Mastitis is a disease that causes several problems in the production and consumption of milk and its derivatives. This disease also compromises animal welfare due to the discomfort caused to the cow and generates economic losses for the producer. The research aimed to evaluate the use of ozone in the prevention and treatment of mastitis in dairy cows, seeking to verify its potential against microbial resistance that has been consolidating in recent decades. To carry out this research, a literature review was carried out aiming at the current study on the use of ozone in the fight against mastitis in dairy cows. A technological prospection was also carried out in order to have a clearer picture of the research area and the necessary investments to define guidelines based on more up-to-date and more commonly used technologies. With all this knowledge base established, an experiment was carried out to study the efficiency of ozone in the prevention and treatment of clinical and subclinical mastitis in dairy cows. From this experiment, a case report was presented showing the effect of the control treatment (antibiotic) compared to the ozonized solution treatment (5mL of ozonized serum + 5mL of ozonized sunflower oil). For the research project, the effect of a control treatment (antibiotic) was analyzed compared to three treatments with ozone, being the groups a) ozonized saline solution at a concentration of 12.5 g / ml and two different concentrations of gas, b ) one at 20 g /ml and c) the other at 40 mg / ml. At the end of the studies, favorable results were obtained for treatments with ozone, and it is recommended that further studies that deepen and broaden the knowledge about the use of ozone for the treatment of mastitis in dairy cows.

EFEITO DO ÓLEO OZONIZADO NA REPARAÇÃO DE RETALHO CUTÂNEO EM RATOS

A necrose é complicação frequente em cirurgias reconstrutivas, sendo assim, terapias adjuvantes são utilizadas com intuito de minimizar essas complicações. A ozonioterapia é utilizada para intervir no processo de reparo de feridas, inclusive as pouco vascularizadas como úlceras de pé diabético. Tem potencial antimicrobiano, antioxidante e ativa a proliferação de fibroblastos, todavia pouco se sabe sobre o comportamento em cirurgias reconstrutivas. A proposição dessa pesquisa foi avaliar o efeito do óleo ozonizado tópico na viabilidade do retalho cutâneo em ratos. Foi realizado estudo com 18 ratos da linhagem Wistar, distribuídos em 2 grupos com 9 animais cada, correspondentes aos grupos óleo de girassol (GG) e óleo de girassol ozonizado (GO). Os retalhos cutâneos foram delimitados no dorso de cada animal, medindo 10x3 cm com limites anatômicos: ângulo inferior das escápulas, as cristas ilíacas, centralizado sobre a coluna vertebral, cuja base do retalho é o limite cranial. Foi aplicado 1mL de óleo de girassol ou 1 mL óleo de girassol ozonizado, nos respectivos grupos GG e GO, antes da síntese do retalho no leito receptor e após, por via tópica na dose de 1 mL, sendo reaplicado a cada 12 horas, por 7 dias consecutivos. As variáveis macroscópicas como edema, exudato, necrose, coloração e aspecto cosmético foram analisadas no 3°, 7° e 14° dia pós-operatório. No dia 14 foi realizado planimetria digital para avaliação da área total do retalho, área necrosada e porcentagem de necrose dos retalhos. A avaliação histológica foi realizada mediante biopsia de pele para avaliar os processos de reparo e angiogênese do retalho. A planimetria digital revelou que não houve diferença estatística da viabilidade do retalho entre os grupos, contudo a média da área total do retalho cutâneo foi maior em GO. A variável macroscópica aspecto cosmético foi melhor em GO. Na avaliação histológica o grupo óleo de girassol ozonizado apresentou maior número de vasos em relação ao grupo óleo de girassol, houve maior expressão do colágeno tipo I nos dois grupos, mas não houve diferença estatística entre grupos. Conclui-se que a utilização do óleo de girassol ozonizado não alterou a viabilidade do retalho cutâneo, porém induziu menor contração cutânea e maior neovascularização.

Necrosis are frequent complications in reconstructive surgery. Adjuvant therapies are used to minimize them. Ozone therapy is used to intervene in the wound repair process, including those with reduced vascularization such as ulcers diabetic foot. It has antimicrobial, antioxidant potential, and activates the proliferation of fibroblasts. However much remains unknown about its behavior in reconstructive surgery. The purpose of this research is to evaluate the effect of topical ozonated oil on the viability of the skin flap in rats. The study was carried out with 18 rats of the Wistar lineage, distributed in 2 groups with 9 animals each, corresponding to the sunflower oil group (GG) and ozonized sunflower oil group (GO). The retalhos cutâneos were delimited on the back of each animal, measuring 10x3 cm with anatomical limits: lower angle of the scapulae, the iliac crests centered on the spine, whose base of the flap is the cranial limit. Sunflower oil (1ml) or ozonated sunflower oil (1ml) was applied in the respective GG and GO groups, before the flap synthesis in the receiving place, and after, being reapplied every 12 hours for 7 consecutive days, topically (1 ml). Macroscopic variables such asedema, exudate, necrosis, color, and cosmetic appearance were analyzed on the 3rd, 7th and 14th postoperative days. On day 14, digital planimetry was performed to assess the total skin flap area, necrotic area and percentage of flap necrosis. Histological evaluation was performed by skin biopsy to assess the repair and angiogenesis processes of the flap. The digital planimetry revealed that there was no statistical difference in the viability of the skin flap between the groups. However, the average of the total area of the largest skin flap was greater in GO. The macroscopic variable cosmetic aspect was better in GO. In the histological evaluation, the ozonized sunflower oil group had a higher number of vessels than the sunflower oil group. Larger expressions of type I collagen were observed in both groups but without any statistical difference between them. It follows that the use of ozonated sunflower oil does not alter the viability of the skin flap, however it induces less skin contraction and greater neovascularization.

EFEITOS DA ÁGUA E DO ÓLEO OZONIZADOS NO REPARO TECIDUAL DE FERIDAS CUTÂNEAS EXPERIMENTALMENTE INDUZIDAS EM RATOS

A relevância das feridas cutâneas na rotina da clínica médica veterinária denota a importância da ampliação das técnicas terapêuticas economicamente viáveis voltadas ao seu tratamento. A aplicação de soluções ozonizadas, sobretudo a água e o óleo ozonizados, constam como técnicas que podem auxiliar no processo de reparo tecidual. Dessa forma, este estudo teve por objetivo avaliar e comparar os efeitos da água e do óleo ozonizados sobre o reparo tecidual de feridas cutâneas experimentalmente induzidas em ratos. Para isso, foram utilizados 48 ratos albinos, da linhagem Wistar, fêmeas, com peso corporal entre 250 a 300 gramas. Foram confeccionadas feridas de 9 mm de diâmetro no dorso dos animais, entre as escápulas, as quais foram tratadas uma vez ao dia, nos diferentes grupos experimentais, sendo 12 ratos tratados com água ozonizada (GA), 12 com óleo ozonizado (GO), 12 com creme de alantoína a 0,2% (GAL) e 12 com cloreto de sódio a 0,9% (GCL). As feridas foram submetidas a morfometria imunomarcação para fator de crescimento vascular endotelial (VEGF). À avaliação macroscópica a ferida dos animais do grupo GA apresentou maior porcentagem de retração em relação àquela dos ratos dos demais grupos aos dias três, oito e 15 após a indução, sendo a retração da ferida dos animais do GA estatisticamente maior do que aquela dos ratos dos grupos GO e GAL nos dias três e oito (p<0,05). Em relação ao tipo de matriz extracelular (MEC) nas feridas, não houve diferença estatística entre os grupos estudados. No entanto, a coloração de picrosirius red mostrou que os grupos GA e GO apresentaram maior deposição de colágeno total aos 15 e aos 22 dias de tratamento, respectivamente. Além disso, nesses momentos de avaliação, esses grupos apresentaram maior porcentagem de fibras colágenas do tipo I em relação a outros grupos (p<0,05). Ainda, a variável neovascularização foi maior na ferida dos ratos do GO em todos os dias avaliados, sendo estatisticamente maior aos três e oito dias em relação ao grupo GCL, aos 15 dias em relação ao GCL e ao GAL. Já aos 22 dias, o grupo GA apresentou uma quantidade significativamente menor de vasos em relação aos outros grupos, o que indica que este grupo entrou mais rapidamente em remodelamento da cicatriz. Esses achados foram corroborados pela marcação imunoistoquímica do VEGF, que se apresentou maior no grupo GO em todos os momentos, o que gerou imunomarcação significativamente maior na ferida dos animais deste grupo aos oito dias em relação ao grupo GCL, aos 15 dias em relação ao grupo GA, e aos 22 dias em relação aos grupos GA e GCL. Conclui-se que a água e o óleo ozonizados nas concentrações testadas contribuem com o processo de reparo tecidual em feridas cutâneas experimentalmente induzidas em ratos. A água ozonizada potencializa a retração da ferida, bem como promove melhor organização do epitélio e acelera a entrada da cicatrização na fase de maturação e remodelamento, levando em consideração a maior deposição de colágeno do tipo I aos 15 dias e menor vascularização aos 22 dias; enquanto o óleo ozonizado à concentração de 418,48 mEq/kg de peróxidos promove maior neovascularização durante o reparo tecidual, além de maior deposição de colágeno do tipo I a partir da terceira semana de tratamento.

The relevance of cutaneous wounds in the veterinary routine indicates the importance of the expansion of economically viable therapeutic techniques aimed at its treatment. The application of ozonized solutions, especially ozonated water and oil, are presented as techniques that may contribute in the tissue repair process. This study aimed to evaluate and compare the effects of ozonated water and oil on the tissue repair of experimentally induced wounds in rats. Forty-eight female Wistar albino rats weighing between 250 and 300 grams were used. Single 9 mm in diameter wounds were performed on the dorsum of the animals, between the scapulae. The wounds were treated daily in the different experimental groups, with 12 mice treated with ozonated water (GA), 12 mice with ozonated oil (GO), 12 mice with 0,2% allantoin cream (GAL) and 12 rats treated with 0,9% sodium chloride (GCL). The wounds were submitted to macroscopic morphometry and microscopic evaluation with HE, picrosirius red and immunostaining for vascular endothelial growth factor (VEGF). At the macroscopic evaluation, the GA group animals presented a higher percentage of retraction than the rats of the other groups at days three, eight and 15 after induction, and the GA retraction was statistically larger than that of the rats of the GO and GAL groups on days three and eight (p<0,05).Regarding the type of extracellular matrix (ECM) in the wounds, there was no statistical difference between the studied group. However, picrosirius red staining showed that the GA and GO groups showed higher total collagen deposition at 15 and 22 days of treatment, respectively. Moreover, at these times of evaluation, these groups presented a higher percentage of type I collagen fibers compared to other groups (p <0.05). Moreover, the neovascularization variable was higher in the GO rats wound on all evaluated days, being statistically higher at three and eight days compared to the GCL group, at 15 days compared to the GCL and GAL. At 22 days, the GA group had a significantly smaller number of vessels compared to the other groups, indicating that this group went into scar remodeling more quickly. These findings were corroborated by VEGF immunohistochemistry marking, which was immunostaining in the animal's wounds at 8 days compared to the GCL group, at 15 days compared to the group GA, and at 22 days for the GA and GCL groups. It is concluded that ozone water and oil at the tested concentrations contribute to the tissue repair process in experimentally induced skin wounds in rats. Ozonized water enhances wound retraction as well as promotes better epithelial organization and accelerates the onset of healing in the maturation and remodeling phase, taking into account the greater deposition of type I collagen at 15 days and less vascularization at 22 days; while ozonized oil at 418,48 mEq/kg of peroxides promotes greater neovascularization during tissue repair, as well as greater deposition of type I collagen from the third week of treatment.

Óleo de girassol ozonizado: atividade anti-Pythium insidiosum / Ozonated sunflower seed oil: anti-Pythium insidiosum activity / Aceite de girasol ozonizado: actividad anti-Pythium incidiosum

Pythium insidiosum é um oomiceto aquático e agente etiológico da pitiose, uma doença de prognóstico desfavorável que acomete mamíferos. Apesar dos avanços nas pesquisas em protocolos terapêuticos, a pitiose continua sendo uma enfermidade de difícil tratamento. Neste trabalho verificou-se a atividade antimicrobiana in vitro do óleo de girassol ozonizado (OGO) frente a P.insidiosum, bem como foi avaliada a inibição do crescimento do oomiceto a partir de kunkers submetidos ao tratamento com OGO. O inóculo utilizado no teste de suscetibilidade in vitro foi preparado a partir de cultura micelial de P.insidiosum (n=30) e os ensaios foram realizados de acordo com o protocolo M38-A2 (CLSI). O OGO foi obtido comercialmente e as concentrações testadas variaram de 56.000 119/mL a 0,05119/mL. A leitura foi realizada em 48h de incubação e a presença ou ausência de hifas foi levada em consideração. Os resultados dos testes de suscetibilidade demonstraram que a CIM50 e CIM90 foram de 3500 119/mL e 28000 119/mL, respectivamente. Nos ensaios de inibição do crescimento de P. insidiosum a partir de kunkers observou-se que o OGO inibiu completamente o crescimento do oomiceto. Os resultados obtidos permitem inferir que o OGO apresenta relevante atividade anti-P. insidiosum podendo ser um potente aliado nos protocolos terapêuticos da pitiose.

Pythium insidiosum is an aquatic oomycete and etiologic agent of pythiosis. This disease has an unfavorable prognosis and affecting mammals. Despite advances in treatment, pythiosis remains a difficult disease to treat. In this work, the in vitro ozonated sunflower seed oil (OGO) antimicrobial activity was verified against P.insidiosum isolates. Additionally, we evaluated the oomycete growth inhibition from kunkers submitted to OGO treatment. The inoculum was prepared from P. insidiosum mycelial culture (n=30) and susceptibility tests were performed according to CLSIM38-A2 protocol. OGO was obtained commercially and the concentrations tested ranged from 56,000 119/mL to 0.05119/mL. The reading of results was done at 48h of incubation, and the visual presence or absence of hyphae was taken into consideration. The susceptibility test results showed that the MIC50 and MIC90were 3,500 119/mL and 28,000 119/mL, respectively. In the growth inhibition assays from kunkers it was observed that OGO completely inhibited the oomycete growth. The results allow us to infer that OGO has relevant anti-P. insidiosum activity and may be a potent assistant in the therapeutic protocols of pythiosis.

Pythium insidiosum es un oomiceto acuático y agente etiológico de la pitiosis, una enfermedad con un pronóstico desfavorable que afecta a los mamíferos. Apesar de los avances en la investigación en tratamientos, la pitiosis sigue una enfermedad difícil de tratar. En este trabajo, se verificó la actividad antimicrobiana in vitro del aceite de girasol ozonizado (OGO) contra P.insidiosum, y se evaluó la inhibición del crecimiento del oomiceto en kunkers sometidos al tratamiento con OGO. El inóculo utilizado en la prueba de susceptibilidad se preparó a partir del cultivo micelial de P.insidiosum (n=30) y los ensayos se realizaron de acuerdo con el protocolo M38-A2 (CLSI). El OGO se obtuvo comercialmente y las concentraciones variaron de 56.000 119/mL a 0,05119/mL. La lectura se realizó a las 48h de incubación y se tuvo en cuenta la presencia o ausencia de hifas. Los resultados de los ensayos de susceptibilidad mostraron que CIM50 y CIM90 fueron 3.500 119/mL y 28.000 119/mL, respectivamente. En los ensayos de inhibición del crecimiento de P. insidiosum de los kunkers se observó que OGO inhibía completamente el crecimiento del oomiceto. Los resultados nos permiten inferir que OGO tiene una relevante actividad anti-P. insidiosum y puede ser un poderoso aliado de los protocolos terapéuticos en la pitiosis.

Óleo de girassol ozonizado: atividade anti-Pythium insidiosum / Ozonated sunflower seed oil: anti-Pythium insidiosum activity / Aceite de girasol ozonizado: actividad anti-Pythium incidiosum

Pythium insidiosum é um oomiceto aquático e agente etiológico da pitiose, uma doença de prognóstico desfavorável que acomete mamíferos. Apesar dos avanços nas pesquisas em protocolos terapêuticos, a pitiose continua sendo uma enfermidade de difícil tratamento. Neste trabalho verificou-se a atividade antimicrobiana in vitro do óleo de girassol ozonizado (OGO) frente a P.insidiosum, bem como foi avaliada a inibição do crescimento do oomiceto a partir de kunkers submetidos ao tratamento com OGO. O inóculo utilizado no teste de suscetibilidade in vitro foi preparado a partir de cultura micelial de P.insidiosum (n=30) e os ensaios foram realizados de acordo com o protocolo M38-A2 (CLSI). O OGO foi obtido comercialmente e as concentrações testadas variaram de 56.000 119/mL a 0,05119/mL. A leitura foi realizada em 48h de incubação e a presença ou ausência de hifas foi levada em consideração. Os resultados dos testes de suscetibilidade demonstraram que a CIM50 e CIM90 foram de 3500 119/mL e 28000 119/mL, respectivamente. Nos ensaios de inibição do crescimento de P. insidiosum a partir de kunkers observou-se que o OGO inibiu completamente o crescimento do oomiceto. Os resultados obtidos permitem inferir que o OGO apresenta relevante atividade anti-P. insidiosum podendo ser um potente aliado nos protocolos terapêuticos da pitiose.(AU)

Pythium insidiosum is an aquatic oomycete and etiologic agent of pythiosis. This disease has an unfavorable prognosis and affecting mammals. Despite advances in treatment, pythiosis remains a difficult disease to treat. In this work, the in vitro ozonated sunflower seed oil (OGO) antimicrobial activity was verified against P.insidiosum isolates. Additionally, we evaluated the oomycete growth inhibition from kunkers submitted to OGO treatment. The inoculum was prepared from P. insidiosum mycelial culture (n=30) and susceptibility tests were performed according to CLSIM38-A2 protocol. OGO was obtained commercially and the concentrations tested ranged from 56,000 119/mL to 0.05119/mL. The reading of results was done at 48h of incubation, and the visual presence or absence of hyphae was taken into consideration. The susceptibility test results showed that the MIC50 and MIC90were 3,500 119/mL and 28,000 119/mL, respectively. In the growth inhibition assays from kunkers it was observed that OGO completely inhibited the oomycete growth. The results allow us to infer that OGO has relevant anti-P. insidiosum activity and may be a potent assistant in the therapeutic protocols of pythiosis.(AU)

Pythium insidiosum es un oomiceto acuático y agente etiológico de la pitiosis, una enfermedad con un pronóstico desfavorable que afecta a los mamíferos. Apesar de los avances en la investigación en tratamientos, la pitiosis sigue una enfermedad difícil de tratar. En este trabajo, se verificó la actividad antimicrobiana in vitro del aceite de girasol ozonizado (OGO) contra P.insidiosum, y se evaluó la inhibición del crecimiento del oomiceto en kunkers sometidos al tratamiento con OGO. El inóculo utilizado en la prueba de susceptibilidad se preparó a partir del cultivo micelial de P.insidiosum (n=30) y los ensayos se realizaron de acuerdo con el protocolo M38-A2 (CLSI). El OGO se obtuvo comercialmente y las concentraciones variaron de 56.000 119/mL a 0,05119/mL. La lectura se realizó a las 48h de incubación y se tuvo en cuenta la presencia o ausencia de hifas. Los resultados de los ensayos de susceptibilidad mostraron que CIM50 y CIM90 fueron 3.500 119/mL y 28.000 119/mL, respectivamente. En los ensayos de inhibición del crecimiento de P. insidiosum de los kunkers se observó que OGO inhibía completamente el crecimiento del oomiceto. Los resultados nos permiten inferir que OGO tiene una relevante actividad anti-P. insidiosum y puede ser un poderoso aliado de los protocolos terapéuticos en la pitiosis.(AU)