Adição de colesterol carregado com ciclodextrina ao sêmen ovino na criopreservação / Addition of cholesterol loaded with cyclodextrin to sheep semen in cryopreservation

Objetivou-se avaliar o efeito da adição de diferentes concentrações do colesterol carregado por ciclodextrina (CCC) sobre os espermatozoides congelados de ovinos. Foram coletados dois ejaculados de 10 carneiros (n=20) e diluídos em Tris-Gema de ovo até a concentração final de 200 x106 sptz/mL e mantidos em banho maria a 32 °C. O CCC foi adicionado: controle (0,0mg), 1,5mg, 3,0mg e 6,0mg de CCC/120 x106 sptz/mL. Após adição, o sêmen foi resfriado a 5 °C por duas horas, após esse período, envasado em palhetas de 0,5mL e então acondicionado sob vapor de nitrogênio líquido (N2L), a 8 cm da lâmina líquida/15 minutos e depois imersos no N2L. As amostras foram analisadas quanto à motilidade espermática, integridade da membrana plasmática e da membrana acrossomal, atividade mitocondrial e teste de ligação. As variáveis foram submetidas à análise de variância e médias comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. O maior percentual de integridade da membrana plasmática, acrossomal e a maior atividade mitocondrial foram obtidos utilizando 6,0mg de CCC. A adição de3,0mg de CCC manteve o percentual de motilidade espermática após a criopreservação, quando comparado aos demais tratamentos e controle. A adição de 1,5 e 3,0mg de CCC mantiveram o percentual de viabilidade espermática após a criopreservação acima de 65%. O número de espermatozoides com capacidade de ligação a membrana perivitelina da gema de ovo foi maior (p<0,05) no tratamento com 3,0mg de CCC. Concluiu se que a adição de CCC ao sêmen diluído, nas concentrações avaliadas, melhora a qualidade espermática após descongelação.

The objective was to evaluate the effect of adding different concentrations of cholesterol carried by cyclodextrin (CCC) on frozen ovine sperm. Two ejaculates were collected from 10 rams (n=20) and diluted in Tris-Yolk until the final concentration of 200 x 106 sptz/mL was reached and kept in a water bath at 32 °C. The CCC was added: control (0,0mg), 1.5mg, 3.0mg, and 6.0mg of CCC/120 x 106 sptz/mL. After the addition, the semen was cooled at 5 °C for two hours, after that period, filled in 0.5 mL straws, and then conditioned under liquid nitrogen vapor (N2L), at 8 cm of the liquid/15 minutes, and then immersed in N2L. The samples were analyzed for sperm motility, plasma membrane and acrosomal membrane integrity, mitochondrial activity, and binding test. The variables were subjected to analysis of variance and means compared by Tukey's test at 5% probability. The highest percentage of plasma membrane integrity and the highest mitochondrial activity were obtained using 6.0mg of CCC. The addition of 3.0mg of CCC maintained the percentage of sperm motility after cryopreservation, when compared to other treatments and control. The addition of 1.5 and 3.0mg of CCC maintained the percentage of sperm viability after cryopreservation, above 65%. The count of sperm with ability to bind to the egg yolk perivitelline membrane was higher (p<0.05) with 3.0mg of CCC. It is concluded that the addition of CCC to the diluted semen, in the evaluated concentrations, improves the sperm quality after thawing.

Adição de colesterol carregado com ciclodextrina ao sêmen ovino na criopreservação / Addition of cholesterol loaded with cyclodextrin to sheep semen in cryopreservation

Objetivou-se avaliar o efeito da adição de diferentes concentrações do colesterol carregado por ciclodextrina (CCC) sobre os espermatozoides congelados de ovinos. Foram coletados dois ejaculados de 10 carneiros (n=20) e diluídos em Tris-Gema de ovo até a concentração final de 200 x106 sptz/mL e mantidos em banho maria a 32 °C. O CCC foi adicionado: controle (0,0mg), 1,5mg, 3,0mg e 6,0mg de CCC/120 x106 sptz/mL. Após adição, o sêmen foi resfriado a 5 °C por duas horas, após esse período, envasado em palhetas de 0,5mL e então acondicionado sob vapor de nitrogênio líquido (N2L), a 8 cm da lâmina líquida/15 minutos e depois imersos no N2L. As amostras foram analisadas quanto à motilidade espermática, integridade da membrana plasmática e da membrana acrossomal, atividade mitocondrial e teste de ligação. As variáveis foram submetidas à análise de variância e médias comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. O maior percentual de integridade da membrana plasmática, acrossomal e a maior atividade mitocondrial foram obtidos utilizando 6,0mg de CCC. A adição de3,0mg de CCC manteve o percentual de motilidade espermática após a criopreservação, quando comparado aos demais tratamentos e controle. A adição de 1,5 e 3,0mg de CCC mantiveram o percentual de viabilidade espermática após a criopreservação acima de 65%. O número de espermatozoides com capacidade de ligação a membrana perivitelina da gema de ovo foi maior (p<0,05) no tratamento com 3,0mg de CCC. Concluiu se que a adição de CCC ao sêmen diluído, nas concentrações avaliadas, melhora a qualidade espermática após descongelação.(AU)

The objective was to evaluate the effect of adding different concentrations of cholesterol carried by cyclodextrin (CCC) on frozen ovine sperm. Two ejaculates were collected from 10 rams (n=20) and diluted in Tris-Yolk until the final concentration of 200 x 106 sptz/mL was reached and kept in a water bath at 32 °C. The CCC was added: control (0,0mg), 1.5mg, 3.0mg, and 6.0mg of CCC/120 x 106 sptz/mL. After the addition, the semen was cooled at 5 °C for two hours, after that period, filled in 0.5 mL straws, and then conditioned under liquid nitrogen vapor (N2L), at 8 cm of the liquid/15 minutes, and then immersed in N2L. The samples were analyzed for sperm motility, plasma membrane and acrosomal membrane integrity, mitochondrial activity, and binding test. The variables were subjected to analysis of variance and means compared by Tukey's test at 5% probability. The highest percentage of plasma membrane integrity and the highest mitochondrial activity were obtained using 6.0mg of CCC. The addition of 3.0mg of CCC maintained the percentage of sperm motility after cryopreservation, when compared to other treatments and control. The addition of 1.5 and 3.0mg of CCC maintained the percentage of sperm viability after cryopreservation, above 65%. The count of sperm with ability to bind to the egg yolk perivitelline membrane was higher (p<0.05) with 3.0mg of CCC. It is concluded that the addition of CCC to the diluted semen, in the evaluated concentrations, improves the sperm quality after thawing.(AU)

Conservação da capacidade ligante de espermatozoides caninos refrigerados em diluente tris-gema / Conservation of the binding ability of chilled canine sperm in Tris-egg yolk extender

The aim was to evaluate the efficiency of the Tris-egg yolk extender in conserving the binding capability of canine sperm chilled for up to 48 h. The semen of four dogs was collected by digital manipulation and evaluated. The sperm fractions were diluted in Tris-egg yolk and stored at 4 °C. The sperm parameters of motility, vigor, morphology and osmotic response were evaluated in fresh semen, immediately after dilution (0h), at 24h and at48h. The sperm binding test using the chicken egg's perivitelline membrane was performed on fresh and 48 h-chilled samples. As a result, fresh semen showed motility of 99.2+/-0.8%, vigor 5+/-0,1 with 84.2+/-1.8% morphologically normal sperm, 95.0+/-0.8% osmotic response and 302.3+/-27.0 membrane-bound sperm. After refrigeration for 48 h, a significant reduction (p<0.05) in the sperm parameters was observed however, values were within the ideal range for the use of semen, such as 90.8+/-1.5% mobile sperm, with vigor 4.3+/-0.2, normal morphology of 71.5+/-1.9%, osmotic response of 77.0+/-4.1%, and 205.5+/-27.7 bound sperm. In conclusion, the hen egg perivitelline membrane binding test proved the efficiency of the Tris-egg yolk extender in conserving the binding capability of canine sperm chilled for 48h.

Conservação da capacidade ligante de espermatozoides caninos refrigerados em diluente tris-gema / Conservation of the binding ability of chilled canine sperm in Tris-egg yolk extender

The aim was to evaluate the efficiency of the Tris-egg yolk extender in conserving the binding capability of canine sperm chilled for up to 48 h. The semen of four dogs was collected by digital manipulation and evaluated. The sperm fractions were diluted in Tris-egg yolk and stored at 4 °C. The sperm parameters of motility, vigor, morphology and osmotic response were evaluated in fresh semen, immediately after dilution (0h), at 24h and at48h. The sperm binding test using the chicken egg's perivitelline membrane was performed on fresh and 48 h-chilled samples. As a result, fresh semen showed motility of 99.2+/-0.8%, vigor 5+/-0,1 with 84.2+/-1.8% morphologically normal sperm, 95.0+/-0.8% osmotic response and 302.3+/-27.0 membrane-bound sperm. After refrigeration for 48 h, a significant reduction (p<0.05) in the sperm parameters was observed however, values were within the ideal range for the use of semen, such as 90.8+/-1.5% mobile sperm, with vigor 4.3+/-0.2, normal morphology of 71.5+/-1.9%, osmotic response of 77.0+/-4.1%, and 205.5+/-27.7 bound sperm. In conclusion, the hen egg perivitelline membrane binding test proved the efficiency of the Tris-egg yolk extender in conserving the binding capability of canine sperm chilled for 48h.(AU)

Addition of synthetic amino acids in sheep semen improves its quality after cryopreservation / Adição de aminoácidos sintéticos no sêmen ovino melhora a qualidade espermática após a criopreservação do sêmen

Some amino acids can protect mammalian sperm cells against oxidation during thermal stress caused by freezing/thawing. Thus, the objective was to evaluate the protective action of the association of the amino acids L-proline (Pro) and L-glutamine (Glu) against the cryoinjury caused to sheep sperm after cryopreservation. Eight ejaculates were collected from four sheep (n=32) and diluted in Tris-Egg Yolk-Glycerol until the final concentration of 200 x106 sptz/mL and kept in a water bath at 32 °C. The amino acids were added as follows: control (without adding amino acids), Pro+Glu 1 (100 µM Pro + 500 µM Glu), Pro+Glu 2 (300 µMPro + 1000 µM Glu), Pro+Glu 3 (500 µM Pro + 1500 µM Glu) and Pro+Glu 4 (700 µM Pro + 2000 µM Glu). Afterwards, the semen was cooled to 5 °C for 2 h, after that period, filled in 0.5 mL straws and then placed under liquid nitrogen vapor (N2L), 8 cm from the liquid sheet for 15min, and then immersed on the N2L. The samples were analyzed for sperm motility, plasma membrane and acrosomal membrane integrity, mitochondrial activity and binding test. The variables were subjected to the normality tests (Lilliefors test) and homoscedasticity tests (Cochran and Bartlett test), afterwards the variables of normal distribution were subjected to analysis of variance and the means compared by the Tukey test with a significance level of 5%. The Pro+Glu 3 group exhibited sperm with a greater (P<0.05) motility after thawing. In addition, the highest percentage of plasma and acrosomal membrane integrity were obtained using Pro+Glu 1, Pro+Glu 2 and Pro+Glu 3; and Pro+Glu 2 and Pro+Glu 3, respectively. Amino acids also kept mitochondrial activity high compared to the control, with Pro+Glu 3 resulting in greater activity (P<0.05). Sperm viability was higher (P<0.05) with the use of Pro+Glu 2 and Pro+Glu 3 than in the control. The number of sperm that showed the ability to bind to the egg yolk perivitelline membrane was higher (P<0.05) in semen treated with amino acids. It is concluded that the addition of synthetic amino acids in the semen of sheep before cryopreservation improves sperm quality and fertilization potential and can thus be added in cryopreservation protocols.

Alguns aminoácidos podem proteger as células espermáticas de mamíferos contra a oxidação durante o estresse térmico causado na congelação/descongelação. Dessa forma, objetivou-se avaliar a ação protetora da associação dos aminoácidos L-prolina (Pro) e L-glutamina (Glu) contra as crioinjúrias causadas aos espermatozoides de ovino após a criopreservação. Foram coletados oito ejaculados de quatro carneiros (n=32) e diluídos em Tris-Gema de ovo-Glicerol até a concentração final de 200 x106 sptz/mL e, mantidos em banho maria a 32 °C. Os aminoácidos foram adicionados da seguinte forma: controle (sem adição de aminoácidos), Pro+Glu 1 (100 µM Pro + 500 µM Glu), Pro+Glu 2 (300 µM Pro + 1000 µM Glu), Pro+Glu 3 (500 µM Pro + 1500 µM Glu) e Pro+Glu 4 (700 µM Pro + 2000 µM Glu). Depois, o sêmen foi resfriado a 5 °C por 2 h, após esse período, envasado em palhetas de 0,5 mL e então acondicionado sob vapor de nitrogênio líquido (N2L), a 8 cm da lâmina líquida por 15 min, e depois imersos no N2L. As amostras foram analisadas quanto à motilidade espermática, integridade da membrana plasmática e da membrana acrossomal, atividade mitocondrial e teste de ligação. As variáveis foram submetidas aos testes de normalidade (Teste de Lilliefors) e homocedacidade (Teste de Cochran e Bartlett), posteriormente as variáveis de distribuição normal foram submetidas à análise de variância e as médias comparadas pelo teste de Tukey com nível de significância de 5%. O grupo Pro+Glu 3 exibiu espermatozoides com uma maior (P<0,05) motilidade após o descongelamento. Além disso o maior percentual de integridade da membrana plasmatica e acrossomal foram obtidos utilizando Pro+Glu 1, Pro+Glu 2 e Pro+Glu 3; e Pro+Glu 2 e Pro+Glu 3, respectivamente. Os aminoácidos também mantiveram alta a atividade mitocondrial em comparação com o controle, com Pro+Glu 3 resultando numa maior atividade (P<0,05). A viabilidade dos espermatozoides foi maior (P<0,05) com o uso de Pro+Glu 2 e Pro+Glu 3 do que no controle. O número de espermatozoides que apresentaram à capacidade de ligação a membrana perivitelina da gema de ovo foi maior (P<0,05) no sêmen tratado com aminoácidos. Conclui-se que, a adição dos aminoácidos sintéticos no sêmen de ovinos antes da criopreservação melhora a qualidade espermática e o potencial fecundante, podendo assim serem adicionados em protocolos de criopreservação.

Effect of antioxidant supplementation in diets of roosters during the post-peak phase on reproduction and production characteristics of offspring / Efeito da suplementação de antioxidantes na dieta de reprodutores de frangos de corte na fase pós-pico sobre características reprodutivas e produtivas da progênie

This study aimed to evaluate the effects of antioxidant supplementation in diets of breeding roosters during the post-peak phase on reproduction characteristics and muscle performance of offspring in two similar breeder houses from a local company. Treatments consisted of a control diet and a diet supplemented with antioxidants (8 ppm canthaxanthin + 40 ppm lycopene + 150 ppm vitamin C). During the 66th week of age, eggs were incubated, and offspring were housed. Dietary supplementation of the blend of antioxidant resulted in higher (p0.05) of supplementation of the antioxidant blend on weight gain and breast weight and count and diameter of muscle fibers of offspring at 7 days of age. Feed conversion and weight gain from 14 to 35 days were better (p<0.05) in offspring from supplemented roosters. The supplementation of an antioxidant blend in roosters improved reproductive characteristics assessed and feed conversion and weight gain of offspring.

O objetivo foi avaliar o efeito da suplementação de antioxidantes em dietas para reprodutores machos de frangos de corte na fase pós-pico sobre características reprodutivas e muscular da progênie. O experimento foi conduzido no matrizeiro de uma agroindústria local. Os tratamentos consistiram em uma dieta controle e uma dieta suplementada com blend de antioxidantes (8 ppm de cantaxantina + 40 ppm de licopeno + 150 ppm de vitamina C). Na 66ª semana de idade, os ovos foram incubados e a progênie foi alojada. A suplementação de antioxidantes na dieta resultou em maior (p0,05) dos antioxidantes na dieta dos reprodutores sobre o ganho de peso e o peso de peito e a contagem e diâmetro da fibra muscular da progênie aos 7 dias de idade. A conversão alimentar e ganho de peso na fase de 14 a 35 dias foram melhores (p<0,05) para a progênie dos reprodutores suplementados. A suplementação de antioxidantes na dieta dos reprodutores melhorou as características reprodutivas avaliadas e o ganho de peso e a conversão alimentar da progênie.

Effect of antioxidant supplementation in diets of roosters during the post-peak phase on reproduction and production characteristics of offspring / Efeito da suplementação de antioxidantes na dieta de reprodutores de frangos de corte na fase pós-pico sobre características reprodutivas e produtivas da progênie

This study aimed to evaluate the effects of antioxidant supplementation in diets of breeding roosters during the post-peak phase on reproduction characteristics and muscle performance of offspring in two similar breeder houses from a local company. Treatments consisted of a control diet and a diet supplemented with antioxidants (8 ppm canthaxanthin + 40 ppm lycopene + 150 ppm vitamin C). During the 66th week of age, eggs were incubated, and offspring were housed. Dietary supplementation of the blend of antioxidant resulted in higher (p<0.05) weights of testicles, crests, dewlaps, dewlap thickness, and number of perforations (53.35 x 25.30) in relation to non-supplemented roosters. There was no significant effect (p>0.05) of supplementation of the antioxidant blend on weight gain and breast weight and count and diameter of muscle fibers of offspring at 7 days of age. Feed conversion and weight gain from 14 to 35 days were better (p<0.05) in offspring from supplemented roosters. The supplementation of an antioxidant blend in roosters improved reproductive characteristics assessed and feed conversion and weight gain of offspring.(AU)

O objetivo foi avaliar o efeito da suplementação de antioxidantes em dietas para reprodutores machos de frangos de corte na fase pós-pico sobre características reprodutivas e muscular da progênie. O experimento foi conduzido no matrizeiro de uma agroindústria local. Os tratamentos consistiram em uma dieta controle e uma dieta suplementada com blend de antioxidantes (8 ppm de cantaxantina + 40 ppm de licopeno + 150 ppm de vitamina C). Na 66ª semana de idade, os ovos foram incubados e a progênie foi alojada. A suplementação de antioxidantes na dieta resultou em maior (p<0,05) peso de testículos, cristas, peso e espessura de barbelas e maior número de perfurações (53,35 x 25,30) em relação aos não suplementados. Não houve efeito significativo (p>0,05) dos antioxidantes na dieta dos reprodutores sobre o ganho de peso e o peso de peito e a contagem e diâmetro da fibra muscular da progênie aos 7 dias de idade. A conversão alimentar e ganho de peso na fase de 14 a 35 dias foram melhores (p<0,05) para a progênie dos reprodutores suplementados. A suplementação de antioxidantes na dieta dos reprodutores melhorou as características reprodutivas avaliadas e o ganho de peso e a conversão alimentar da progênie.(AU)

Sperm-binding to the perivitelline membrane of chicken egg yolk as a functional test for sperm evaluation in dogs / Teste de ligação espermática à membrana perivitelínica da gema de ovo de galinha como avaliação funcional do sêmen de cães

During fertilization, spermatozoa interact with the zona pellucida (ZP) through the binding between the acrosome and proteins 2 and 3 (ZP2 and ZP3). The perivitelline membrane of chicken egg yolk is homologous to the mammalian ZP3, which allows the binding of sperm of several species. The aim of this study was to standardize and evaluate the efficiency of sperm-binding to the perivitelline membrane of chicken eggs as a functional method for canine semen evaluation. For this purpose, nine post-thaw sperm samples were used, which were divided into two aliquots: the first was kept in water bath at 37ºC (live sample) and the second was submitted to cold shock to induce cellular damage (dead sample). The two aliquots were mixed on five proportions, corresponding to 0%, 25%, 50%, 75%, and 100% of viable cells, and the binding test was performed by analyzing the number of spermatozoa bonded to the perivitelline membrane by means of computerized assessment of sperm motility (CASA) or conventional microscopy. Additionally, samples were submitted to sperm motility analysis, evaluation of plasmatic and acrosomal membrane integrity, and sperm mitochondrial activity. The sperm-binding test to the perivitelline membrane of chicken egg yolk was considered a feasible sperm analysis test for both fertilizing capacity and overall sperm attributes evaluation, mainly when the analysis is performed by a conventional microscope, which expands its practicality to the majority of canine reproduction laboratories.(AU)

Durante a fecundação, os espermatozoides interagem com a zona pelúcida (ZP) por meio da ligação entre o acrossomo e as proteínas 2 e 3 (ZP2 e ZP3). A membrana perivitelínica da gema de ovo de galinhas é homóloga à ZP3 de mamíferos, possibilitando a ligação espermática de diversas espécies. Este trabalho padronizou e avaliou a eficiência do teste de ligação espermática à membrana perivitelínica da gema de ovo de galinhas como avaliação funcional do sêmen de cães. Para tal, foram utilizadas nove amostras seminais previamente criopreservadas. Cada amostra foi dividida em duas alíquotas: a primeira foi mantida em banho-maria à 37ºC (vivos) e a segunda submetida a choque térmico com o intuito de induzir dano celular (mortos). As duas alíquotas foram misturadas, correspondendo a 0, 25, 50, 75 e 100% de células viáveis. As amostras foram avaliadas quanto ao número de espermatozoides ligados à membrana perivitelínica por meio da análise computadorizada da motilidade (CASA) ou microscopia convencional. Ademais, as amostras foram avaliadas quanto à motilidade espermática, integridade das membranas acrossomal e plasmática e atividade mitocondrial espermática. O teste de ligação espermática à membrana perivitelínica de ovos de galinha foi considerado um teste de análise seminal exequível tanto para avaliar a capacidade fecundante dos espermatozoides como atributos seminais gerais, especialmente quando realizado em microscopia convencional, expandindo sua praticidade para a maioria dos laboratórios de análise de sêmen canino.(AU)

Sperm-binding to the perivitelline membrane of chicken egg yolk as a functional test for sperm evaluation in dogs / Teste de ligação espermática à membrana perivitelínica da gema de ovo de galinha como avaliação funcional do sêmen de cães

During fertilization, spermatozoa interact with the zona pellucida (ZP) through the binding between the acrosome and proteins 2 and 3 (ZP2 and ZP3). The perivitelline membrane of chicken egg yolk is homologous to the mammalian ZP3, which allows the binding of sperm of several species. The aim of this study was to standardize and evaluate the efficiency of sperm-binding to the perivitelline membrane of chicken eggs as a functional method for canine semen evaluation. For this purpose, nine post-thaw sperm samples were used, which were divided into two aliquots: the first was kept in water bath at 37ºC (live sample) and the second was submitted to cold shock to induce cellular damage (dead sample). The two aliquots were mixed on five proportions, corresponding to 0%, 25%, 50%, 75%, and 100% of viable cells, and the binding test was performed by analyzing the number of spermatozoa bonded to the perivitelline membrane by means of computerized assessment of sperm motility (CASA) or conventional microscopy. Additionally, samples were submitted to sperm motility analysis, evaluation of plasmatic and acrosomal membrane integrity, and sperm mitochondrial activity. The sperm-binding test to the perivitelline membrane of chicken egg yolk was considered a feasible sperm analysis test for both fertilizing capacity and overall sperm attributes evaluation, mainly when the analysis is performed by a conventional microscope, which expands its practicality to the majority of canine reproduction laboratories.(AU)

Durante a fecundação, os espermatozoides interagem com a zona pelúcida (ZP) por meio da ligação entre o acrossomo e as proteínas 2 e 3 (ZP2 e ZP3). A membrana perivitelínica da gema de ovo de galinhas é homóloga à ZP3 de mamíferos, possibilitando a ligação espermática de diversas espécies. Este trabalho padronizou e avaliou a eficiência do teste de ligação espermática à membrana perivitelínica da gema de ovo de galinhas como avaliação funcional do sêmen de cães. Para tal, foram utilizadas nove amostras seminais previamente criopreservadas. Cada amostra foi dividida em duas alíquotas: a primeira foi mantida em banho-maria à 37ºC (vivos) e a segunda submetida a choque térmico com o intuito de induzir dano celular (mortos). As duas alíquotas foram misturadas, correspondendo a 0, 25, 50, 75 e 100% de células viáveis. As amostras foram avaliadas quanto ao número de espermatozoides ligados à membrana perivitelínica por meio da análise computadorizada da motilidade (CASA) ou microscopia convencional. Ademais, as amostras foram avaliadas quanto à motilidade espermática, integridade das membranas acrossomal e plasmática e atividade mitocondrial espermática. O teste de ligação espermática à membrana perivitelínica de ovos de galinha foi considerado um teste de análise seminal exequível tanto para avaliar a capacidade fecundante dos espermatozoides como atributos seminais gerais, especialmente quando realizado em microscopia convencional, expandindo sua praticidade para a maioria dos laboratórios de análise de sêmen canino.(AU)

Adição de antioxidantes ao sêmen de carneiros e seus efeitos após a descongelação / Addition of antioxidants in ram semen and the effects after thawing

Aimed to evaluate the effect of adding antioxidants as ascorbic acid, melatonin and Trolox C to diluted semen of ram with oxidative stress to potenciate fertilization after cryopreservation. Ten samples collected were diluted in Tris-egg yolk to a final concentration of 200x106 sperm/mL and kept in a water bath at 32°C. Antioxidants were added as follows: 100μM melatonin (MEL) +.05% ascorbic acid (AA); 100μM of MEL + 90μL of Trolox C (TRO); 90μL of TRO + 0.05% AA; and 100μM of MEL0.05% AA + 90μL of TRO. Semen was cooled in a cold chamber at 5°C for two hours and packaged, sealed in 0.5mL straws, packaged under liquid nitrogen vapor (N2L), 8cm of water depth for 15 minutes, and then immersed in N2L. Samples were assayed for motility, integrity of the plasma membrane and acrosomal membrane, mitochondrial activity, binding assay and oxidative stress spermatozoa. The variables were analyzed by ANOVA and means compared by Tukey test (P<0.05). Percentage of total and progressive motility was higher for sperm treated with MEL+AA+TRO (67% and 49.89%), MEL+AA (64.37% and 45.61%) and MEL+TRO (61.65% and 41.15%) compared with the other treatments (P<0.05). The integrity of the plasma membrane and acrosome was higher for all semen treated with antioxidant associations compared with control (P<0.05). Mitochondrial activity was higher in sperm treated with MEL+AA+TRO compared all treatments (P<0.05). The number of sperm binding to perivitelline membrane was higher for semen treated with antioxidant associations compared with control; also sperm treated with MEL+AA+TRO demonstrated higher effect of all (P<0.05). No difference was observed between the treatments by oxidative stress sperm (P>0.05). The addition of melatonin, ascorbic acid and Trolox C in diluted semen of ram improves sperm quality after thawing.(AU)

Objetivou-se avaliar o efeito da adição dos antioxidantes ácido ascórbico, melatonina e Trolox C, associados ao sêmen diluído de carneiros sobre o estresse oxidativo e o potencial fecundante após criopreservação. Foram coletados 10 ejaculados de 3 carneiros (n=30) e diluídos em Tris-Gema de ovo até a concentração final de 200x106sptz/mL e, mantidos em banho maria a 32°C. Os antioxidantes foram adicionados da seguinte forma: controle (sem adição de antioxidantes); 100μM de melatonina (MEL) + 0,05% de ácido ascórbico (AA); 100μM de MEL + 90μL de Trolox C (TRO); 90μL de TRO + 0,05% de AA; e 100μM de MEL + 0,05%AA + 90μL de TRO. Depois, o sêmen foi resfriado em câmara fria a 5°C por duas horas, após esse período, envasado e lacrado em palhetas de 0,5mL, e então acondicionado sob vapor de nitrogênio liquido (N2L), a 8cm da lâmina líquida por 15 minutos, e depois imersos no N2L. As amostras foram analisadas quanto à motilidade espermática, integridade da membrana plasmática e da membrana acrossomal, atividade mitocondrial, teste de ligação e a quantificação do estresse oxidativo. As variáveis foram submetidas à análise de variância e medias comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. A motilidade (total e progressiva) foi maior (P<0,05) quando adicionado à associação MEL+AA+TRO (67% e 49,89%), MEL+AA (64,37% e 45,61%) e MEL+TRO (61,65% e 41,15%) comparado ao tratamento controle (55,52% e 36,54%) e TRO+AA (57,07% e 38,40%). A adição de MEL+AA+TRO ao sêmen diluído manteve (P<0,05) a integridade da membrana plasmática (30,75%) e acrossomal (84,53%) dos espermatozoides quando comparado ao tratamento controle (15,60 e 68,16%, respectivamente), além de ter promovido maior (P<0,05) atividade mitocondrial (96,43%) quando comparado aos demais tratamentos...(AU)

Adição de antioxidantes ao sêmen de carneiros e seus efeitos após a descongelação / Addition of antioxidants in ram semen and the effects after thawing

Objetivou-se avaliar o efeito da adição dos antioxidantes ácido ascórbico, melatonina e Trolox C, associados ao sêmen diluído de carneiros sobre o estresse oxidativo e o potencial fecundante após criopreservação. Foram coletados 10 ejaculados de 3 carneiros (n=30) e diluídos em Tris-Gema de ovo até a concentração final de 200x106 sptz/mL e, mantidos em banho maria a 32°C. Os antioxidantes foram adicionados da seguinte forma: controle (sem adição de antioxidantes); 100µM de melatonina (MEL) + 0,05% de ácido ascórbico (AA); 100µM de MEL + 90µL de Trolox C (TRO); 90µL de TRO + 0,05% de AA; e 100µM de MEL + 0,05%AA + 90µL de TRO. Depois, o sêmen foi resfriado em câmara fria a 5°C por duas horas, após esse período, envasado e lacrado em palhetas de 0,5mL, e então acondicionado sob vapor de nitrogênio liquido (N2L), a 8cm da lâmina líquida por 15 minutos, e depois imersos no N2L. As amostras foram analisadas quanto à motilidade espermática, integridade da membrana plasmática e da membrana acrossomal, atividade mitocondrial, teste de ligação e a quantificação do estresse oxidativo. As variáveis foram submetidas à análise de variância e medias comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. A motilidade (total e progressiva) foi maior (P<0,05) quando adicionado à associação MEL+AA+TRO (67% e 49,89%), MEL+AA (64,37% e 45,61%) e MEL+TRO (61,65% e 41,15%) comparado ao tratamento controle (55,52% e 36,54%) e TRO+AA (57,07% e 38,40%). A adição de MEL+AA+TRO ao sêmen diluído manteve (P<0,05) a integridade da membrana plasmática (30,75%) e acrossomal (84,53%) dos espermatozoides quando comparado ao tratamento controle (15,60 e 68,16%, respectivamente), além de ter promovido maior (P<0,05) atividade mitocondrial (96,43%) quando comparado aos demais tratamentos. O número de espermatozoides que apresentaram à capacidade de ligação a membrana perivitelina da gema de ovo foi maior (P<0,05) no sêmen tratado com as diferentes associações de antioxidante quando comparado ao controle, sendo a associação MEL+AA+TRO (178,36%) superior (P<0,05) aos demais tratamentos. Não houve diferença (P>0,05) entre os tratamentos quanto a quantidade de espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico produzidos. Conclui-se que a adição de MEL+AA+TRO ao sêmen diluído de carneiros, nas doses avaliadas, melhora a qualidade espermática após descongelação.(AU)

Aimed to evaluate the effect of adding antioxidants as ascorbic acid, melatonin and Trolox C to diluted semen of ram with oxidative stress to potenciate fertilization after cryopreservation. Ten samples collected were diluted in Tris-egg yolk to a final concentration of 200x106 sperm/mL and kept in a water bath at 32°C. Antioxidants were added as follows: 100µM melatonin (MEL) +.05% ascorbic acid (AA); 100µM of MEL + 90µL of Trolox C (TRO); 90µL of TRO + 0.05% AA; and 100µM of MEL0.05% AA + 90µL of TRO. Semen was cooled in a cold chamber at 5°C for two hours and packaged, sealed in 0.5mL straws, packaged under liquid nitrogen vapor (N2L), 8cm of water depth for 15 minutes, and then immersed in N2L. Samples were assayed for motility, integrity of the plasma membrane and acrosomal membrane, mitochondrial activity, binding assay and oxidative stress spermatozoa. The variables were analyzed by ANOVA and means compared by Tukey test (P<0.05). Percentage of total and progressive motility was higher for sperm treated with MEL+AA+TRO (67% and 49.89%), MEL+AA (64.37% and 45.61%) and MEL+TRO (61.65% and 41.15%) compared with the other treatments (P<0.05). The integrity of the plasma membrane and acrosome was higher for all semen treated with antioxidant associations compared with control (P<0.05). Mitochondrial activity was higher in sperm treated with MEL+AA+TRO compared all treatments (P<0.05). The number of sperm binding to perivitelline membrane was higher for semen treated with antioxidant associations compared with control; also sperm treated with MEL+AA+TRO demonstrated higher effect of all (P<0.05). No difference was observed between the treatments by oxidative stress sperm (P>0.05). The addition of melatonin, ascorbic acid and Trolox C in diluted semen of ram improves sperm quality after thawing.(AU)

Extrato floral de Tajetes erecta e vitamina E em dietas para reprodutores(as) de codornas: perfil oxidativo, produção, reprodução, incubação e progênie

Objetivou-se avaliar os efeitos da suplementação de extrato floral de Tagetes erecta (TFE) e de vitamina E (VE) na dieta de reprodutores machos e fêmeas de codornas japonesas sobre o desempenho produtivo, reprodutivo e de incubação e o perfil oxidativo de reprodutores, embriões e de pintinhos recém-eclodidos. No primeiro experimento (I), objetivou-se avaliar os efeitos de TFE associada ou não a níveis crescentes de VE sobre o desempenho produtivo e o estado oxidativo dos reprodutores de codornas japonesas. As aves foram distribuídas em delineamento inteiramente ao acaso, com 5 dietas (controle com 25 mg/kg VE e 4 doses de VE associadas a TFE: 25, 100, 175 e 250 mg/kg VE + 3 g/kg TFE) e 12 repetições de 8 aves (6 machos e 2 fêmeas). No segundo experimento (II) foi avaliado a expressão gênica de enzimas antioxidantes na mucosa da vagina de fêmeas e o desempenho de incubação dos ovos oriundos do lote de aves descrito no primeiro trabalho. A duração da fertilidade dos ovos em dias após a cópula e a interação espermatozoide-ovo, foram analisados em casais 10 casais/tratamento. No terceiro experimento, foram avaliados os efeitos das dietas experimentais fornecidas aos reprodutores (as) sobre o status antioxidante da gema, vitelo e de fígado de embriões (11 e 15 dias de incubação) e de pintainhos (1 e 3 dias) e sobre o desempenho da progênie (1 a 28 dias). Os dados de todos os experimentos foram submetidos a análise estatística e consideradas diferenças significativas quando P<0,05. No experimento I, a inclusão de TFE isolada melhorou a conversão alimentar e aumentou a coloração da gema dos ovos, melhorou o estado oxidativo no soro de machos e fêmeas e reduziu a peroxidação lipídica no fígado dos reprodutores machos. Doses crescentes de VE associado a TFE melhoraram o estado oxidativo e reduziram a peroxidação lipídica hepática e no soro de machos e fêmeas. No experimento II, não foram observados efeitos das dietas sobre a eclosão, a mortalidade embrionária e a qualidade da progênie, mas os níveis de VE+TFE aumentaram a fertilidade. A duração da fertilidade e o número de pontos de hidrólise na membrana perivitelínica (PHMP) causados pelos espermatozoides foram avaliadas em 10 casais/dieta e em 12 dias de ovos consecutivos, após a cópula. Os ovos dos casais com VE+TFE foram férteis por mais dias e tiveram mais buracos quando comparados ao controle e os níveis mais altos de VE reduziram o número de PHMP, em geral. Quando apenas as fêmeas receberam as dietas, a quantidade de PHMP foi maior, demonstrando maior sobrevivência dos espermatozoides e, portanto, um forte efeito no oviduto em geral. No entanto, a expressão relativa dos genes das enzimas do sistema antioxidante SOD1 e GPX7 na mucosa da vagina não foi influenciada pela dieta. O aumento na fertilidade e no número de PHMP dos ovos, em função do VE+TFE se devem, provavelmente a maior concentração ou qualidade espermática ou maior sobrevivência dos espermatozoides no trato genital feminino. No experimento III, a suplementação de VE na dieta elevou a concentração de -tocoferol na gema e no fígado de pintainhos recém-eclodidos e a TFE aumentou a concentração de carotenoides totais na gema. Doses crescentes de VE + 3 g/kg TFE reduziram a peroxidação lipídica e aumentaram a atividade antioxidante na gema, no vitelo e no fígado de embriões e pintinhos. A TFE teve efeito isolado reduzindo a peroxidação lipídica e melhorando o estado antioxidante na gema. A atividade da enzima SOD no fígado de pintainhos recém-eclodidos aumentou linearmente com os níveis de VE, não sendo alterada por TFE. As dietas experimentais não influenciaram a expressão relativa dos genes das enzimas SOD1 e GPX7 no fígado de pintainhos, bem como o desempenho produtivo da progênie. De modo geral, conclui-se que suplementação de doses crescentes de VE associadas a 3 g de TFE melhorou a fertilidade e o estado antioxidante de reprodutores, de embriões e de pintainhos recém-eclodidos de codornas, sendo recomendada para produção de ovos férteis em reprodutores de codornas japonesas.

This study aimed to assess the effects of dietary supplementation with Tagetes erecta flower extract (TFE) and vitamin E (VE) on the productive, reproductive, and incubation performance and oxidative profile of male and female Japanese quail breeders, embryos, and newly hatched chicks. Experiment I was designed to investigate the effects of TFE alone and in combination with increasing levels of VE on the productive performance and oxidative status of Japanese quail breeders. Birds were distributed in a completely randomized design, with five diets (a control diet containing 25 mg/kg VE and four diets supplemented with 3 g/kg TFE + 25, 100, 175, or 250 mg/kg VE) and 12 replications of 8 birds each (6 males and 2 females). Experiment II examined gene expression levels of antioxidant enzymes in the vaginal mucosa of birds and the incubation performance of eggs from Experiment I. Fertility duration (measured in days after mating) and the number of points of hydrolysis in the perivitelline membrane (PHPM) produced by spermatozoa were determined in 10 couples per treatment during 12 consecutive egglaying days after mating. A third experiment was conducted to determine the parental effects of experimental diets on the antioxidant status of the yolk, yolk sac, and liver of embryos (at 11 and 15 days of incubation) and chicks (at 1 and 3 days after hatching) and on progeny performance (from 1 to 28 days of age). Data from all experiments were subjected to statistical analysis, and the level of significance was set at P < 0.05. In Experiment I, the TFE-supplemented diet containing control levels of VE improved feed conversion and serum oxidative status in male and female birds, enhanced yolk color, and reduced lipid peroxidation in the liver of male quail. Increasing doses of VE associated with TFE improved oxidative status and reduced lipid peroxidation in the liver and serum of male and female birds. In Experiment II, there were no effects of experimental diets on hatchability, embryo mortality, or progeny quality, but TFE + VE diets significantly increased fertility. Eggs from quail fed TFE + VE diets remained fertile for longer periods and had higher PHPM numbers compared with control eggs; however, in general, high VE levels led to reduced PHPM numbers. PHPM number was higher when only hens were fed supplemented diets, suggesting enhanced sperm survival and, therefore, a strong effect on the female oviduct. However, the relative expression of antioxidant enzyme genes (SOD1 and GPX7) in the vaginal mucous membrane was not influenced by diet. These results suggest that the increase in egg fertility and PHPM number promoted by TFE + VE supplementation is probably due to increased sperm concentration or quality or enhanced sperm survival in the female genital tract. In Experiment III, dietary VE supplementation increased -tocopherol content in the yolk and liver of newly hatched chicks and TFE supplementation increased total carotenoid content in yolk. Diets containing 3 g/kg TFE + increasing VE levels reduced lipid peroxidation and increased antioxidant activity in the yolk, yolk sac, and liver of embryos and chicks. TFE supplementation independently decreased lipid peroxidation and improved yolk antioxidant status. Superoxide dismutase activity in the liver of newly hatched chicks increased linearly with VE level without being affected by TFE. Experimental diets did not influence offspring performance or SOD1 or GPX7 relative expression in the liver of chicks. It was concluded that dietary supplementation with VE + 3 g/kg TFE improved the fertility and antioxidant status of quail, embryos, and newly hatched chicks and may be recommended to improve the production of fertile eggs in Japanese quail breeders

Efeito de diferentes concentrações de melatonina em espermatozoides de carneiros sobre estresse oxidativo após criopreservação / Effect of different concentrations of melatonin to ram spermatozoa on oxidative stress after cryopreservation

Objetivou-se avaliar o efeito da adição de diferentes concentrações de melatonina no sêmen diluído de carneiros após criopreservação. Foram coletados 10 ejaculados de três carneiros adultos (n=30), por meio de vagina artificial para ovinos. Os ejaculados coletados foram diluídos em Tris-Gema de ovo, para a concentração final de 200x106 sptz/mL, mantidos em banho maria a 32°C, e a melatonina adicionada conforme os tratamentos: Controle; 100pM; 100nM; 100μM e 1mM de melatonina. Então, as amostras foram resfriadas em câmara fria a 5°C por duas horas, envasadas em palhetas de 0,5 mL e lacradas. Logo após, foram acondicionadas sob vapores do nitrogênio liquido, por 15 minutos, a 8cm da lâmina líquida e congeladas com nitrogênio líquido. As amostras foram analisadas quanto à motilidade espermática, integridade da membrana plasmática, membrana acrossomal, atividade mitocondrial, quantificação do estresse oxidativo e a capacidade de ligação. As variáveis foram submetidas à análise de variância e as médias foram comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. A motilidade total e progressiva dos espermatozoides descongelados foi maior nas amostras tratadas com 100pM de melatonina (62,99 e 45,07% respectivamente; P<0,05) quando comparado aos demais tratamentos. A adição das diferentes concentrações de melatonina no sêmen diluído, com exceção da concentração de 1 mM, apresentou maior percentual de células com membrana plasmática íntegra, quando comparadas com o controle (P<0,05). O percentual de espermatozoides com integridade da membrana do acrossoma foi maior no sêmen tratado com 100 pM de melatonina (P<0,05) do que nos demais tratamentos. A alta atividade mitocondrial foi maior nos espermatozoides tratados com 100 pM de melatonina (69,30%; P<0,05). A adição de 100 nM de melatonina reduziu a quantidade de TBARS após a criopreservação (2,84; P<0,05) quando comparado aos demais tratamentos. Após o descongelamento, o número de espermatozoides que se [...](AU)

The aim was to evaluate the effect of adding different concentrations of melatonin in ram semen diluted after cryopreservation. Ten ejaculates were collected0 from three adult ram (n=30) by means of artificial vagina for sheep. The collected samples were diluted in Tris-egg yolk, to a final concentration 200x106 sptz/mL kept in water bath at 32°C, and melatonin added as treatments: control; 100pM; 100nM; 100μM and 1mM melatonin. Then, the samples were cooled in a cold chamber at 5°C for two hours, in straws of 0.5mL and sealed. They were stored under the liquid nitrogen vapor for 15 minutes to 8cm of liquid blade and frozen with liquid nitrogen. Samples were analyzed for sperm motility, membrane integrity, acrosomal membrane, mitochondrial activity, oxidative stress and quantification of the binding capacity. The variables were subjected to analysis of variance and the means were compared by Tukey test at 5% probability. The total and progressive motility of thawed sperm were higher in samples treated with 100pM melatonin (62.99 and 45.07%, respectively; P<0.05) when compared to other treatments. The addition of different concentrations of melatonin in semen diluted with the exception of 1mM concentration, a higher percentage of cells with intact plasma membrane, as compared with the control (P<0.05). The percentage of sperm with acrosome membrane integrity was higher in the semen with 100pM melatonin (P<0.05) than the other treatments. The high mitochondrial activity was higher in spermatozoa treated with 100pM melatonin (69.30%; P<0.05). Addition of 100nM melatonin reduced the amount of TBARS after cryopreservation (2.84, P<0.05) when compared with the other treatments. After thawing, the number of sperm which bind to the perivitelline membrane was higher in the melatonin treated with 100pM (155,73; P<0.05) [...](AU)

Efeito de diferentes concentrações de melatonina em espermatozoides de carneiros sobre estresse oxidativo após criopreservação / Effect of different concentrations of melatonin to ram spermatozoa on oxidative stress after cryopreservation

Objetivou-se avaliar o efeito da adição de diferentes concentrações de melatonina no sêmen diluído de carneiros após criopreservação. Foram coletados 10 ejaculados de três carneiros adultos (n=30), por meio de vagina artificial para ovinos. Os ejaculados coletados foram diluídos em Tris-Gema de ovo, para a concentração final de 200x106 sptz/mL, mantidos em banho maria a 32°C, e a melatonina adicionada conforme os tratamentos: Controle; 100pM; 100nM; 100µM e 1mM de melatonina. Então, as amostras foram resfriadas em câmara fria a 5°C por duas horas, envasadas em palhetas de 0,5 mL e lacradas. Logo após, foram acondicionadas sob vapores do nitrogênio liquido, por 15 minutos, a 8cm da lâmina líquida e congeladas com nitrogênio líquido. As amostras foram analisadas quanto à motilidade espermática, integridade da membrana plasmática, membrana acrossomal, atividade mitocondrial, quantificação do estresse oxidativo e a capacidade de ligação. As variáveis foram submetidas à análise de variância e as médias foram comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. A motilidade total e progressiva dos espermatozoides descongelados foi maior nas amostras tratadas com 100pM de melatonina (62,99 e 45,07% respectivamente; P<0,05) quando comparado aos demais tratamentos. A adição das diferentes concentrações de melatonina no sêmen diluído, com exceção da concentração de 1 mM, apresentou maior percentual de células com membrana plasmática íntegra, quando comparadas com o controle (P<0,05). O percentual de espermatozoides com integridade da membrana do acrossoma foi maior no sêmen tratado com 100 pM de melatonina (P<0,05) do que nos demais tratamentos. A alta atividade mitocondrial foi maior nos espermatozoides tratados com 100 pM de melatonina (69,30%; P<0,05). A adição de 100 nM de melatonina reduziu a quantidade de TBARS após a criopreservação (2,84; P<0,05) quando comparado aos demais tratamentos. Após o descongelamento, o número de espermatozoides que se ligaram à membrana perivitelina foi maior nos tratados com 100 pM de melatonina (155,73; P<0,05). Portanto, a adição de melatonina no sêmen diluído pode ser útil para aperfeiçoar a criopreservação do sêmen de ovinos, melhorando as taxas de fertilização por meio da inseminação artificial.(AU)

The aim was to evaluate the effect of adding different concentrations of melatonin in ram semen diluted after cryopreservation. Ten ejaculates were collected0 from three adult ram (n=30) by means of artificial vagina for sheep. The collected samples were diluted in Tris-egg yolk, to a final concentration 200x106 sptz/mL kept in water bath at 32°C, and melatonin added as treatments: control; 100pM; 100nM; 100µM and 1mM melatonin. Then, the samples were cooled in a cold chamber at 5°C for two hours, in straws of 0.5mL and sealed. They were stored under the liquid nitrogen vapor for 15 minutes to 8cm of liquid blade and frozen with liquid nitrogen. Samples were analyzed for sperm motility, membrane integrity, acrosomal membrane, mitochondrial activity, oxidative stress and quantification of the binding capacity. The variables were subjected to analysis of variance and the means were compared by Tukey test at 5% probability. The total and progressive motility of thawed sperm were higher in samples treated with 100pM melatonin (62.99 and 45.07%, respectively; P<0.05) when compared to other treatments. The addition of different concentrations of melatonin in semen diluted with the exception of 1mM concentration, a higher percentage of cells with intact plasma membrane, as compared with the control (P<0.05). The percentage of sperm with acrosome membrane integrity was higher in the semen with 100pM melatonin (P<0.05) than the other treatments. The high mitochondrial activity was higher in spermatozoa treated with 100pM melatonin (69.30%; P<0.05). Addition of 100nM melatonin reduced the amount of TBARS after cryopreservation (2.84, P<0.05) when compared with the other treatments. After thawing, the number of sperm which bind to the perivitelline membrane was higher in the melatonin treated with 100pM (155,73; P<0.05). Therefore, melatonin addition the semen diluted can be useful to enhance the cryopreservation of sheep semen, improving fertilization rates through artificial insemination.(AU)

Características do sêmen a fresco e descongelado de garanhões da raça Nordestina / Sperm characteristics in fresh and cryopreserved semen of Nordestino stallions breed

Este estudo descreveu as características seminais, da membrana plasmática e do acrossoma de espermatozoide congelado/descongelado de 19 ejaculados de garanhões da raça Nordestina. Os aspectos analisados incluíram os parâmetros físicos do sêmen fresco; a motilidade e a longevidade do sêmen diluído e descongelado; a morfologia espermática, integridade funcional e estrutural da membrana plasmática do espermatozoide e a habilidade de ligação do espermatozoide à membrana perivitelina da gema do ovo de galinha do sêmen descongelado. As variáveis foram avaliadas pela ANOVA com post hoc teste de Student Newman-Keuls (P<0,05). A MT e a MP foram maiores (P<0,05) no sêmen diluído do que no descongelado. A percentagem média de defeitos maiores, menores e totais foi muito inferior ao limite recomendado pelo CBRA. A porcentagem de reativos ao HOST foi de 14,21±1,12% e a porcentagem média de membranas íntegras detectadas pelo teste supravital de 62,22±9,06% e pela sonda SYBR-14 de 81,47±26,90. O número médio de espermatozoides ligados à MPV após a descongelação do sêmen foi de 230,39±57,09. A MT e MP no tempo 0 min do TTR foi superior (P<0,05) em relação a 150 min, não diferindo nos tempos 10 min e 30 min. Os resultados demonstram que a utilização dos testes laboratoriais adicionais ajudam no processo de avaliação das amostras, possibilitando a obtenção de informações mais confiáveis e precisas. Embora a criopreservação tenha provocado queda na motilidade seminal, o uso de diluidor contendo amidas minimizou os danos osmóticos nas células espermáticas e manteve a integridade morfológica, funcional e estrutural da membrana plasmática do espermatozoide. Estes resultados são um referencial em estudos futuros uma vez que, inexistem dados comparativos nesta raça.(AU)

This paper describes the seminal characteristics of the plasma membrane of frozen-thawed sperm. Nineteen ejaculates of Nordestino horse breed. The aspects analyzed in the physical parameters of fresh semen were total and progressive motility and your longevity after dilution or thawed; sperm morphology, functional and structural integrity of the plasma membrane of the sperm and the sperm-binding ability to the perivitelline membrane of the yolk (MPV) after thawed. The variables were assessed by ANOVA with post hoc test of Student Newman-Keuls test (P<0.05). The total and progressive motility were higher in diluted semen than thawed (P<0.05). The average percentage of the major, minor and total defects was lower than the limit recommended by the CBRA. The percentage of reactive to hypo-osmotic swelling test was 14.21±1.12%, the intact membrane detected by supravitally test was 62.22±9.06% and the SYBR-14 was 81.47±26.9. The ability of sperm to bind to the MPV after thawing semen was 230.39±57.09. The total and progressive motility at time 0 min of termo resistance test was higher than to 150 minutes (P<0.05), and no difference was observed in the times 10 and 30 minutes. The results demonstrate that the use of additional laboratory tests help in the process of evaluation of samples, making possible to obtain more reliable and accurate information. Although cryopreservation has caused decrease in sperm motility and was used diluents with amides to diluted and cryopreservation protocol and this minimized the osmotic damage to sperm cells and maintained the morphological, functional and structural integrity of the plasma membrane of the sperm. These results are a reference for future studies since there are no comparative data on this breed.(AU)

CARACTERIZAÇÃO E CRIOPRESERVAÇÃO DE SÊMEN DE ONÇA-PINTADA (Panthera onca)

Um dos principais pontos da biotecnologia reprodutiva é a criopreservação de sêmen, que possibilita a criação de um banco genético de fácil acesso, bem como permite maximizar a utilização dos gametas masculinos. Portanto, objetivou-se primeiramente descrever as características morfológicas e ultraestruturais do sêmen fresco de onça-pintada e, posteriormente, comparar a qualidade do sêmen pós-descongelação, utilizando-se os diluidores à base de TRIS ou água de coco em pó (ACP-117c). Para tanto, foram utilizados cinco machos de onça-pintada que foram submetidos a duas coletas seminais por eletroejaculação. O sêmen foi avaliado quanto à motilidade total, vigor, funcionalidade da membrana espermática, atividade mitocondrial por meio do 3,3-diaminobenzidina (DAB) e morfologia dos espermatozoides, além das avaliações ultraestruturais por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e transmissão (MET), como também a análise morfométrica por meio do software Image J. Em seguida, foi realizado o processamento das amostras para criopreservação. Após o término das coletas, as amostras foram descongeladas e, realizadas as mesmas análises feitas nas amostras frescas, exceto a morfometria, além da avaliação computadorizada do sêmen (CASA), como também análise da integridade das membranas celulares por meio de análise de fluorescência e o teste de interação com membrana perivitelínea de ovo de galinha. Os resultados estão expressos na forma de média ± erro médio padrão. Os principais resultados do sêmen fresco foram: motilidade; vigor. As principais alterações morfológicas encontradas foram: na cabeça dos espermatozoides (9,0 ± 1,7%) e defeitos de cauda (12,5 ± 3,3%). A largura e o comprimento da cabeça foram 3,60 ± 0,03 m e 4,9 ± 0,02 m, respectivamente, peça intermediária 9,7 ± 0,3 m, cauda 54,5 ± 4,4 m, e o comprimento total do espermatozoide foi de 59,5 ± 0,1 m. Regiões electronlucentes foram encontradas na região do núcleo e aproximadamente 54 espirais mitocondriais na peça intermediária foram identificadas usando microscopia eletrônica. As maiores porcentagens de células foram classificadas como DAB I (46,6 ± 4,9%) e DAB II (38,0 ± 4,4%). No tocante à criopreservação, as amostras preservadas no TRIS apresentaram melhor resultado do que as preservadas no ACP-117c: maior motilidade pós-descongelação (46,0 ± 7,7% vs 20,9 ± 5,4% de espermatozoides móveis; p=), melhor funcionalidade da membrana (60,5 ± 4,2% vs 47,1 ± 2,5% de membrana funcional; p=) e maior atividade mitocondrial (21,5 ± 3,7% vs 11,8 ± 1,7%; p=). Em relação às avaliações ultraestruturais, a MEV mostrou que ambos os diluidores foram capazes de preservar o plasmalema espermático, mas a MET revelou a ocorrência de pontos electronlucentes, especialmente em amostras preservadas em ACP-117c. Além disso, um maior número de espermatozoides ligados à membrana perivitelina foi observado com as amostras diluídas em TRIS em comparação com o ACP-117c (29,5 ± 3,3% vs 18,6 ± 1,5%; p=). Em conclusão, o diluidor TRIS apresentou melhores resultados do que o diluidor ACP-117c, para a criopreservação de sêmen de onça-pintada.

One of the main points of reproductive biotechnology is semen cryopreservation, which allows the creation of an easily accessible genetic bank, as well as maximizing the use of male gametes. Therefore, the objective was first to describe the morphological and ultrastructural characteristics of jaguar fresh semen, and then to compare the quality of the post-thawed semen using TRIS or powdered coconut water (ACP-117c) extender. For this, five male jaguars were submitted to two seminal collections by electroejaculation. Semen was evaluated for total motility, vigor, sperm membrane functionality, mitochondrial activity by 3,3'-diaminobenzidine (DAB) and sperm morphology, plus ultrastructural evaluation by scanning electron microscopy (SEM) and transmission (TEM), as well as morphometric analysis using a software (Image J). Then, the samples were cryopreserved. After the end of all collections, the samples were thawed and first performed the same analyzes made on fresh samples, except for morphometry, as well as computerized semen evaluation (CASA), as well as analysis of cell membrane integrity by fluorescence, and the interaction test with perivitelline chicken egg membrane. The main results of fresh semen were morphological abnormalities in sperm head (9 ± 1.7%) and tail defects (12.5 ± 3.3%). Head width and length were 3.6 ± 0.03 m and 4.9 ± 0.02 m, respectively, middle piece 9.7 ± 0.3 m, tail 54.5 ± 4.4 m, and the total sperm length was 59.5 ± 0.1 m. Electronlucent regions were found in the nucleus region and approximately 54 mitochondrial spirals in the middle piece were identified using TEM. The highest cell percentages were classified as DAB I (46.6 ± 4.9%) and DAB II (38 ± 4.4%). Regarding cryopreservation, samples preserved in TRIS showed better post-thaw motility (46.0 ± 7.7%) and membrane functionality (60.5 ± 4.2%) and greater mitochondrial activity (21.5 ± 3.7, respectively) than those preserved in ACP-117c (20.9 ± 5.4% mobile sperm; 47.1 ± 2.5% functional membrane; 11.8 ± 1.7% mitochondrial activity). Regarding ultrastructural evaluations, SEM showed that both extenders were able to preserve sperm membrane, but MET revealed electronlucent points, especially in samples preserved in ACP-117c. In addition, a higher number of perivitelline membrane-bound sperm (29.5 ± 3.3%) was observed with samples diluted in TRIS compared with ACP-117c (18.6 ± 1.5%). In conclusion, we suggest the TRIS extender for jaguar semen cryopreservation.

Teste de ligação do espermatozoide à membrana perivitelina da gema de ovo após a a adição de Ringer Lactato, Citrato de Sódio 2,92% e solução TRIS no sêmen caprino congelado / Sperm-perivitelline membrane egg binding assay after addition of Ringer Lactate, Sodium Citrate 2.92% and TRIS Solution in thawed goat semen

Com o presente estudo se verificou através do Teste de Ligação dos Espermatozoides à Membrana Perivitelina da Gema de Ovo a capacidade fecundante dessas células após o descongelamento e adição das soluções Ringer com Lactato, Citrato de Sódio 2,92% e TRIS. O sêmen dos animais foi coletado e realizado os procedimentos padrões de análise e criopreservação seminal. Após o descongelamento foi adicionado os diluentes Ringer com Lactato, Citrato de Sódio 2,92 % e Solução TRIS, os quais continham substâncias protetoras aos espermatozoides. Logo após, foram realizados os Testes de Ligação do Espermatozoide à Membrana Perivitelina da Gema de Ovo e Morfológico. Os parâmetros seminais do sêmen fresco ficaram de acordo com preconizado pela legislação vigente (CBRA,1998). A capacidade de ligação dos espermatozoides à membrana perivitelina da gema do ovo foi semelhante entre os tratamentos (P>0,05), mas foi observada correlação positiva entre a motilidade espermática e a capacidade de ligação (P<0,05). A diluição do sêmen criopreservado com soluções isoosmóticas após o descongelamento pode ser útil na manutenção da qualidade espermática e no aumento do volume existente a fim de otimizar a realização de testes e biotecnologias reprodutivas in vitro.

The present study was verified by testing for binding of sperm to the perivitelline membrane of the egg yolk fertilizing capacity of these cells after thawing and addition of Ringer Lactate, Sodium Citrate 2.92% and TRIS Solution. The semen of animals was collected and performed the standard procedures of analysis and cryopreservation seminal. After thawing was added the solutions Ringer Lactate, Sodium Citrate 2.92% and TRIS, which contained protective substances to sperm and performed the tests in vitro Sperm-Perivitelline Membrane egg Binding and Morphology. The seminal parameters of fresh semen were recommended according to current legislation. The binding capacity of the sperm membrane perivitelline egg yolk was similar between treatments(P>0,05), but there was a positive correlation between sperm motility and binding capacity (P<0,05). Thus, the dilution of semen cryopreserved with solutions isoosmóticas after thawing can be useful in maintaining the quality of sperm and increase existing volume to optimize the testing and reproductive biotechnologies in vitro.

Teste de ligação do espermatozoide à membrana perivitelina da gema de ovo após a a adição de Ringer Lactato, Citrato de Sódio 2,92% e solução TRIS no sêmen caprino congelado / Sperm-perivitelline membrane egg binding assay after addition of Ringer Lactate, Sodium Citrate 2.92% and TRIS Solution in thawed goat semen

Com o presente estudo se verificou através do Teste de Ligação dos Espermatozoides à Membrana Perivitelina da Gema de Ovo a capacidade fecundante dessas células após o descongelamento e adição das soluções Ringer com Lactato, Citrato de Sódio 2,92% e TRIS. O sêmen dos animais foi coletado e realizado os procedimentos padrões de análise e criopreservação seminal. Após o descongelamento foi adicionado os diluentes Ringer com Lactato, Citrato de Sódio 2,92 % e Solução TRIS, os quais continham substâncias protetoras aos espermatozoides. Logo após, foram realizados os Testes de Ligação do Espermatozoide à Membrana Perivitelina da Gema de Ovo e Morfológico. Os parâmetros seminais do sêmen fresco ficaram de acordo com preconizado pela legislação vigente (CBRA,1998). A capacidade de ligação dos espermatozoides à membrana perivitelina da gema do ovo foi semelhante entre os tratamentos (P>0,05), mas foi observada correlação positiva entre a motilidade espermática e a capacidade de ligação (P<0,05). A diluição do sêmen criopreservado com soluções isoosmóticas após o descongelamento pode ser útil na manutenção da qualidade espermática e no aumento do volume existente a fim de otimizar a realização de testes e biotecnologias reprodutivas in vitro.(AU)

The present study was verified by testing for binding of sperm to the perivitelline membrane of the egg yolk fertilizing capacity of these cells after thawing and addition of Ringer Lactate, Sodium Citrate 2.92% and TRIS Solution. The semen of animals was collected and performed the standard procedures of analysis and cryopreservation seminal. After thawing was added the solutions Ringer Lactate, Sodium Citrate 2.92% and TRIS, which contained protective substances to sperm and performed the tests in vitro Sperm-Perivitelline Membrane egg Binding and Morphology. The seminal parameters of fresh semen were recommended according to current legislation. The binding capacity of the sperm membrane perivitelline egg yolk was similar between treatments(P>0,05), but there was a positive correlation between sperm motility and binding capacity (P<0,05). Thus, the dilution of semen cryopreserved with solutions isoosmóticas after thawing can be useful in maintaining the quality of sperm and increase existing volume to optimize the testing and reproductive biotechnologies in vitro.(AU)

Efeito da eficiência alimentar na qualidade espermática, parâmetros fisiológicos e características da pele de ovinos dorper sob estresse calórico

Para avaliar a influência do consumo alimentar residual (CAR) e do ambiente térmico (a pleno sol e sombra) em ovinos Dorper, foram realizadas duas fases experimentais, divididas em 3 capítulos, em que objetivou-se: Capítulo 1 - avaliar a influência do CAR e do ambiente térmico sobre os parâmetros hematológicos, parasitológicos e fisiológicos em ovinos Dorper. Capítulo 2 - avaliar a influência do consumo alimentar residual sobre o potencial fecundante do sêmen fresco e congelado-descongelado de carneiros Dorper e Capítulo 3 - avaliar o efeito do consumo alimentar residual (CAR) e ambiente de confinamento sobre as características histológicas e físico-mecânicas da pele de ovinos Dorper. Na primeira fase foram utilizados 64 ovinos da raça Dorper em esquema fatorial 2x2, sendo dois grupos de CAR (alto e baixo) e dois ambientes de confinamento (a pleno sol e sombreado), em delineamento em blocos casualizado, com quinze repetições. Na segunda etapa, após 1 ano do período experimental, foram utilizados 6 animais (3 CAR positivo, 3 CAR negativo), que apresentem melhor desempenho seminal ao fim da primeira fase. No Capítulo 1, após a colheita do sêmen, avaliou-se a motilidade espermática, integridade das membranas plasmática e acrossomal, atividade mitocondrial e teste de ligação à membrana perivitelina da gema de ovo, no sêmen fresco e congelado-descongelado. No capítulo 2, realizou-se a coleta de sangue para avaliação hematológica e características bioquímicas do soro. Realizou-se a coleta de fezes para análise de OPG e por fim foram coletados dados referente a temperatura retal, frequência respiratória e calculado índice de tolerância ao calor (ITC) dos animais experimentais. No Capítulo 3, foram coletados fragmentos da pele, após abate, para análises histológicas e realizado o curtimento de parte da pele para avaliação das características físico-mecânicas. Os resultados mostraram que: animais de CAR negativo apresentam melhor motilidade espermática e alta integridade da membrana plasmática e atividade mitocondrial no sêmen fresco, além de apresentar maior potencial fecundante após o descongelamento do sêmen (capítulo 1); Além disso, o CAR negativo associasse a uma menor frequência respiratória em animais sob estresse térmico, sendo que o ambiente a pleno sol, promove alterações nos parâmetros hematológicos, como diminuição dos níveis de eritrócitos e hemoglobina, além de aumento na frequência respiratória e temperatura retal dos animais (capítulo 2) e animais expostos ao sol e de CAR positivo, apresentam melhor qualidade da pele após o curtimento (capítulo 3).

To evaluate the influence of the residual feed intake (RFI) and the thermal environment (in full sun and shade) in Dorper sheep were two experimental phases, divided into 3 sections, which are aimed at: Chapter 1 - to evaluate the influence of the RFI and the thermal environment on the hematological, parasitological and physiological parameters in Dorper sheep. Chapter 2 - to evaluate the influence of residual food consumption on the fertilizing potential of fresh and frozen-thawed semen of Dorper sheep and Chapter 3 - evaluate the effect of residual feed intake (RFI) and containment environment on the histological and physical-mechanical characteristics of the skin of Dorper sheep. In the first phase, 64 Dorper sheep were used in a 2x2 factorial scheme, two groups of RFI (high and low) and two environments of confinement (full sun and shade), in a randomized block design, with fifteen replications. In the second stage, after 1 year of the experimental period, 6 animals (3 RFI positive, 3 negative RFI) were used, which presented better seminal performance at the end of the first phase. In Chapter 1, after collection of the semen, evaluated the sperm motility, and acrosomal integrity of the plasma membrane, mitochondrial activity and the binding assay perivitelline membrane egg yolk, fresh and frozen-thawed semen. In Chapter 2, the blood was collected for hematological evaluation and biochemical characteristics of the serum. Stool samples were collected for OPG analysis and data were collected on the rectal temperature, respiratory rate and calculated heat tolerance index (ITC) of the experimental animals. In Chapter 3, fragments of the skin were collected, after slaughter, for histological analysis and the tanning of part of the skin was performed to evaluate the physical-mechanical characteristics. The results showed that negative CAR animals presented better sperm motility and high plasma membrane integrity and mitochondrial activity in fresh semen, besides showing higher fertilization potential after semen thawing (Chapter 1); In addition, the negative CAR associated with a lower respiratory rate in animals under thermal stress, and the environment in full sun, promotes changes in hematological parameters, such as decreased levels of erythrocytes and hemoglobin, as well as increased respiratory rate and rectal temperature of animals (Chapter 2) and animals exposed to the sun and positive CAR, have better skin quality after tanning (Chapter 3).

Teste de ligação de espermatozoides de suínos da raça Piau à membrana perivitelina da gema do ovo / Sperm-binding assay in Piau swine breeds to the hens egg perivitelline membrane

O objetivo deste trabalho foi avaliar a utilização do teste de ligação de espermatozoides à membrana perivitelina da gema do ovo de galinha como uma alternativa de predizer a qualidade espermática pós-descongelamento em suínos da raça Piau. Foram utilizadas cinco partidas de sêmen congelado de um varrão, as quais foram subdivididas em quatro tratamentos, de acordo com o meio (BTS ou B-TALP) e as concentrações espermáticas utilizadas (20 ou 40 x 106 espermatozoides/mL). Além disso, utilizaram-se 25 partidas de sêmen congelado de cinco varrões (cinco partidas de cada animal), sendo que 10 μL de sêmen na concentração de 20 x 106 espermatozoides/mL foram incubados em meio BTS ou B-TALP. No experimento 1, o número médio de espermatozoides aderidos/mm2 variou de 157,0 ± 81,3 a 249,4 ± 119,3 (P > 0,05). No experimento 2, o número médio de espermatozoides ligados/mm2 foi de 339,3 ± 255,5 e 275,4 ± 164,0, respectivamente, para os meios BTS e B-TALP, sem diferença entre eles (P > 0,05). Concluiu-se que a concentração espermática, assim como os meios de incubação utilizados, não interferiu na capacidade de adesão de espermatozoides à membrana perivitelina da gema do ovo em animais da raça Piau. (AU)

The objective of this study was to verify the use of sperm-binding assay in Piau swine breeds to the hens egg perivitelline membrane as an alternative to predict semen post-thawing fertilizing capability. It were used five matches of frozen semen from a boar, and the matches divided into four treatments, according to media (BTS or B-TALP) or sperm concentration (20 or 40 x 106 sperm/ml). Moreover, Twenty five frozen semen samples were used from five males (five semen samples from each male), using 10 μL of sperm with the concentration of 20 x 106 spermatozoa/mL and incubated BTS or B-TALP. In experiment 1, the average number of sperm-binding/mm2 varied from 157.0 ± 81.3 to 249.4 ± 119.3 (P > 0.05). In experiment two, The average number of sperm-binding/mm2 was 339.3 ± 255.5 and 275.4 ± 164.0, respectively for BTS and B-TALP media, with no difference between themselves (P > 0.05). It was concluded that sperm concentration, as well as the incubation media used did not affect the sperm adhesion to hens egg perivitelline membrane in Piau breed animals. (AU)