Effect of plasma separation techniques and sperm selection on sperm recovery and viability of cooled pony stallion semen for 48h at 5°C / [Efeito das técnicas de separação de plasma e de seleção de esperma na recuperação e viabilidade do sêmen de garanhão pônei resfriado por 48h a 5°C]

Separation techniques of seminal plasma [centrifugation (SC) and Sperm Filter® (SF)] and sperm selection [Androcoll-E (SCA) and filtration glass wool (GW)] were used in 24 ejaculates from 6 stallions. In experiment 1, the ejaculates were allocated into control (no spin), centrifugation at 600 g x 10min, SF and GW. In experiment 2, semen was submitted to SC, SGA and filtered through GW. Following the treatments in both experiments, samples were kept chilled at 5°C to 50 x 106 sperm/ml for 48h. The variables measured on fresh and cooling semen were pH, motility, membrane viability function by 6-carboxyfluorescein diacetate and propidium iodide (CFDA / PI), viability or vitality (eosin / nigrosine) and mitochondrial activity. In experiment 1, centrifugation to remove seminal plasma resulted in greater damage to sperm than separation by sperm filter, and selection by glass wool was more efficient in separating viable cells and maintaining viability during cooling. In experiment 2 Androcoll-E and glass wool treatments resulted in higher (P <0.0001) motility, membrane function, mitochondrial activity, and viability than centrifuged semen. Both selection by Androcoll- E and glass wool improved the quality of semen pony stallions for preservation for up to 48h to 5ºC.(AU)

As técnicas de separação do plasma seminal (centrifugação, SpermFilter) e de seleção espermática (Androcoll-E e filtração por lã de vidro) foram aplicadas em 24 ejaculados de seis garanhões da raça Pônei Brasileiro. Após coleta e separação da fração gel, os ejaculados foram diluídos 1:1 com diluente à base de leite em pó. No experimento 1, os ejaculados foram distribuídos em controle (sem centrifugação), centrifugação a 600g x 10min, SpermFilter e filtração por lã de vidro. No experimento 2, o sêmen foi submetido aos procedimentos: centrifugado (SC), centrifugado com Androcoll-E e filtrado por lã de vidro. Após os procedimentos de ambos os experimentos, as amostras foram mantidas refrigeradas a 5ºC, com 50 x 106 espermatozoides/mL, por 48h. As variáveis mensuradas a fresco, 24h e 48h foram: pH, motilidade, funcionalidade de membrana, viabilidade por diacetato de carboxifluoresceína e iodeto de propídio (CFDA/PI, vitalidade (eosina/nigrosina) e atividade mitocondrial. Já osmolaridade e morfologia espermática foram avaliadas somente imediatamente após a coleta. No experimento 1, a centrifugação para retirada do plasma seminal resultou em maiores danos aos espermatozoides do que a separação por SpermFilter. A filtração por lã de vidro mostrou-se mais eficiente em separar células viáveis e manter a viabilidade durante o resfriamento. No experimento 2, os tratamentos com Androcoll-E e filtrado por lã de vidro foram superiores (P<0,0001) ao sêmen centrifugado quanto à motilidade, à funcionalidade de membrana, à atividade mitocondrial e à viabilidade, tanto nas amostras de sêmen fresco como de sêmen refrigerado. O Androcoll-E e a lã de vidro permitiram manter por 48h, a 5ºC, o sêmen de garanhões pôneis utilizando-se diluente à base de leite.(AU)

Padronização da técnica de plasmaférese automatizada em equinos / Standardization of automated plasmapheresis in horses

O presente artigo objetivou estudar a viabilidade da técnica de plasmaférese automatizada e padronizá-la em cinco equinos hígidos, bem como apresentar as complicações durante o procedimento, as adequações em relação aos procedimentos em humanos e avaliar a recuperação de volume globular e proteínas plasmáticas totais nos doadores. Os procedimentos foram realizados com o equipamento Fresenius AS104, com duração média de 1h46min, processamento de 5758mL de sangue total e colheita média de 3133mL de plasma. Não foram observadas alterações significativas do volume globular após a plasmaférese automatizada. A recuperação dos níveis plasmáticos de proteínas foi de 91,4% em 96 horas após o procedimento. A plasmaférese automatizada apresentou-se viável para a espécie equina, diminuindo o tempo de recuperação hematimétrica nos doadores.(AU)

This paper aimed to study feasibility and standardize the automated plasmapheresis in five healthy horses, showing the complications during the procedure, adjustments in relation to the procedures in humans and assessing the recovery of globular volume and plasma total proteins in donors. The procedures were performed with the Fresenius AS104 equipment, with an average duration of one hour and forty six minutes, processing 5758mL of whole blood and harvest average of 3133mL of plasma. There were no significant variations in globular volume after the automated plasmapheresis. The recovery of plasma total proteins was 91.4% at 96 hours after the procedure. The automated plasmapheresis appeared viable for the equine species, decreasing the time of hematimetric level recovery in donors.(AU)

Plasmaférese automatizada em equinos: relato de dois casos / Automated plasmapheresis in horses: report of two cases

A plasmaférese é um procedimento que consiste na retirada do sangue total de um doador e em seguida, separação do plasma com reinfusão dos elementos remanescentes. Este procedimento pode ser realizado de forma manual ou automatizada, com poucos relatos da técnica automatizada na espécie equina. Este artigo busca relatar a plasmaférese automatizada em dois equinos, para obtenção de plasma hiperimune, avaliando-se as complicações inerentes à técnica; e a variação e recuperação do volume globular e níveis séricos de proteínas totais nos animais doadores. Para os relatos foi utilizado o equipamento Fresenius AS 104, objetivando-se retirada de 20% do plasma total circulante com a proporção inicial de citrato de sódio de 1:12 no sistema extracorpóreo. Durante o procedimento observou-se obstrução por coagulação sanguínea no cateter de reinfusão e flebites jugulares nos doadores. A recuperação do volume globular e níveis séricos de proteínas totais ocorreu em 96 horas. Apesar da satisfatória recuperação hematimétrica nos dois animais, há a necessidade de novas pesquisas para a adequação da plasmaférese automatizada em equinos, na tentativa de diminuir as complicações inerentes à técnica.

Plasmapheresis is a procedure that consists of removing the blood from a donor, followed by subsequent plasma separation and reinfusion of the remaining elements. This procedure can be manual or automated, with a few reports of automated plasmapheresis in the equine specie. This article reports two cases of automated plasmapheresis in horses that were conducted to obtain hyperimmune plasma, while evaluating the complications inherent to the technique; as well as variation and recuperation of hematocrit and serum total proteins in the donors. The equipment Fresenius AS 104 was used to remove 20 % of total plasma with the initial sodium citrate ratio of 1:12 in the extracorporeal system. During the procedure, the reinfusion catheter was obstructed by blood clots and jugular vein phlebitis was observed in the donors. The recovery of hematocrit and total protein serum levels occurred in 96 hours. Despite the satisfactory recovery of hematimetric levels in the two animals, further research is needed into the suitability of automated plasmapheresis in horses, in an attempt to reduce the complications inherent to the technique.

Plasmaférese automatizada em equinos: relato de dois casos / Automated plasmapheresis in horses: report of two cases

A plasmaférese é um procedimento que consiste na retirada do sangue total de um doador e em seguida, separação do plasma com reinfusão dos elementos remanescentes. Este procedimento pode ser realizado de forma manual ou automatizada, com poucos relatos da técnica automatizada na espécie equina. Este artigo busca relatar a plasmaférese automatizada em dois equinos, para obtenção de plasma hiperimune, avaliando-se as complicações inerentes à técnica; e a variação e recuperação do volume globular e níveis séricos de proteínas totais nos animais doadores. Para os relatos foi utilizado o equipamento Fresenius AS 104, objetivando-se retirada de 20% do plasma total circulante com a proporção inicial de citrato de sódio de 1:12 no sistema extracorpóreo. Durante o procedimento observou-se obstrução por coagulação sanguínea no cateter de reinfusão e flebites jugulares nos doadores. A recuperação do volume globular e níveis séricos de proteínas totais ocorreu em 96 horas. Apesar da satisfatória recuperação hematimétrica nos dois animais, há a necessidade de novas pesquisas para a adequação da plasmaférese automatizada em equinos, na tentativa de diminuir as complicações inerentes à técnica.(AU)

Plasmapheresis is a procedure that consists of removing the blood from a donor, followed by subsequent plasma separation and reinfusion of the remaining elements. This procedure can be manual or automated, with a few reports of automated plasmapheresis in the equine specie. This article reports two cases of automated plasmapheresis in horses that were conducted to obtain hyperimmune plasma, while evaluating the complications inherent to the technique; as well as variation and recuperation of hematocrit and serum total proteins in the donors. The equipment Fresenius AS 104 was used to remove 20 % of total plasma with the initial sodium citrate ratio of 1:12 in the extracorporeal system. During the procedure, the reinfusion catheter was obstructed by blood clots and jugular vein phlebitis was observed in the donors. The recovery of hematocrit and total protein serum levels occurred in 96 hours. Despite the satisfactory recovery of hematimetric levels in the two animals, further research is needed into the suitability of automated plasmapheresis in horses, in an attempt to reduce the complications inherent to the technique.(AU)

AUTOMATED PLASMAPHERESIS IN HORSES: REPORT OF TWO CASES / Plasmaférese automatizada em equinos: Relato de dois casos

A plasmaférese é um procedimento que consiste na retirada do sangue total de um doador e em seguida, separação do plasma com reinfusão dos elementos remanescentes. Este procedimento pode ser realizado de forma manual ou automatizada, com poucos relatos da técnica automatizada na espécie equina. Este artigo busca relatar a plasmaférese automatizada em dois equinos, para obtenção de plasma hiperimune, avaliando-se as complicações inerentes à técnica; e a variação e recuperação do volume globular e níveis séricos de proteínas totais nos animais doadores. Para os relatos foi utilizado o equipamento Fresenius AS 104, objetivando-se retirada de 20% do plasma total circulante com a proporção inicial de citrato de sódio de 1:12 no sistema extracorpóreo. Durante o procedimento observou-se obstrução por coagulação sanguínea no cateter de reinfusão e flebites jugulares nos doadores. A recuperação do volume globular e níveis séricos de proteínas totais ocorreu em 96 horas. Apesar da satisfat&oacut

Influência do uso da plasmaferese sobre o tempo de recuperação de caprinos doadores de sangue ou plasma / Influence of the plasmapheresis uses in the recovery time of blood or plasma donor goats

O objetivo desta pesquisa foi determinar a influência do uso da plasmaferese sobre o tempo de recuperação clínica e hematológica de caprinos doadores de sangue total ou plasma. Para tanto, foram utilizados 20 caprinos adultos e clinicamente sadios, distribuídos por dois grupos de dez animais cada, a saber: grupo controle (de animais doadores de sangue total não tratados) e grupo experimental (de animais doadores que foram tratados com a plasmaferese). Os caprinos foram selecionados e monitorados por meio de exames físicos (funções vitais) e complementares (hemograma, proteínas totais, albumina, globulinas, relação A:G, ureia, creatinina e hemoglobina livre no plasma) realizados nos seguintes momentos: imediatamente antes e após a doação de sangue: 12, 24, 72, 120, 240, 360, 480 e 720 horas após os procedimentos. Os resultados foram analisados com comparações dentro e entre os dois grupos nos diferentes momentos do estudo. As observações clínicas efetuadas durante o período de até 30 dias após a doação de 20% do volume sanguíneo total, com ou sem a realização da plasmaferese nos animais dos grupos estudados, não sofreram variações influenciadas por esses procedimentos. Observou-se significativa variação dos componentes do eritrograma, tendo o grupo experimental apresentado as melhores taxas de recuperação em função do tempo. Com base nos resultados obtidos, a aplicação da técnica da plasmaferese em caprinos mostrou-se eficiente como recurso para a otimização do tempo de recuperação dos valores do hemograma de animais doadores de plasma, não determinando hemólise durante o seu procedimento. (AU)

The objective of this study was to determine the influence of plasmapheresis on clinical and haematological recovery time of whole blood or plasma donor goats. For this, 20 clinically healthy adult goats were divided into two groups of ten animals each: control group (not-treated whole blood donor animals), and experimental group (donor animals which were treated with plasmapheresis). Goats were selected and evaluated through physical examination (vital functions) and complementary tests (complete blood counts, total proteins, albumin, globulin, albumin:globulin ratio, urea nitrogen, creatinine, and plasma free haemoglobin) were carried out at the following moments: immediately before and after blood donation, 12, 24, 72, 120, 240, 360, 480, and 720 hours after the procedures. Results were analysed comparing animals in and between both groups (at differents moments of the study). The clinical observations made during the period of 30 days after donation of 20% of total blood volume, with or without plasmapheresis in the animals of studied groups, were not influenced by these procedures. The results revealed significant variation of eritrogram components, showing the experimental group to have better recovery rates according to time. Based on the results obtained in the present study, plasmapheresis technique application in goats showed to be efficient as a resource to optimize recovery time of blood cell values of plasma donor animals, and did not cause hemolisis during its procedure. (AU)

Haematology changes during the immunization and after the bleeding and phasmaferese in horses used for hyperimune anti-crotalic serum production / Alterações hematológicas durante a imunização e após a sangria e plasmaferese em equinos de produção de soro hiperimune anticrotálico

Twenty animals were used to assess the blood profile of horses during immunization for anticrotalic hyperimmune serum production and after the bleedings and the plasmapherese, according to the protocol schedule of Instituto Butantan in order to evaluate efficacy of plasmapheresis. The samples were obtained before the antigen inoculations (crotalic venon), before and after the bleedings, right after the plasmapherese and 15, 30 and 45 days after the last one, making a total of 340 collections in 17 moments. Samples were submitted to hemogram. Significant variations were observed on the blood profile of the horses throughout the immunization, showing normocytic, normochromic anemia, without significant alterations on leukogram. During the bleedings phases, evident variations were observed on the blood profile showing normocytic normochromic anemia after bleeding without changing the leukogram values. During rest periods, the efficacy of plasmapheresis was evident with a rapid, partial recovery of hemogram, making easier the fast return to hematologic normality, making them capable to a new hyperimmune serum production.KEY WORDS: Anticrotalic, equine, hematology, immunization, plasmapherese.

Para o estabelecimento do quadro sanguíneo de equinos durante a imunização para produção de soro hiperimune anticrotálico e após as sangrias de produção e a plasmaferese, realizou-se avaliação hematológica para determinar a eficácia da plasmaferese na recuperação do quadro hematimétrico dos animais. Foram utilizados vinte animais, submetidos às normas do protocolo de imunização do Instituto Butantan, sendo  colhidas amostras antes das inoculações do antígeno (veneno crotálico), antes e depois das sangrias de produção, após as plasmafereses e quinze, trinta e quarenta e cinco dias após a última sangria, totalizando 340 colheitas, realizadas em dezessete momentos, para realização do hemograma. Significativas variações no quadro hematológico dos equinos foram observadas na fase de imunização, caracterizando anemia normocítica normocrômica, sem alterações significativas do leucograma. Nas fases de sangrias, observaram-se evidentes variações no quadro hematológico, demonstrando uma anemia normocítica normocrômica pós-sangrias, sem variações nos valores do leucograma. No período de repouso, foi evidente a eficácia da plasmaferese, com pronta, mas parcial, recuperação do hemograma, facilitando o rápido retorno para normalidade hematológica, tornando-os aptos à nova produção de soro hiperimune.PALAVRAS-CHAVES: Anticrotálico, equinos, hematologia, imunização, plasmaferese.

HAEMATOLOGY CHANGES DURING THE IMMUNIZATION AND AFTER THE BLEEDING AND PHASMAFERESE IN HORSES USED FOR HYPERIMUNE ANTI-CROTALIC SERUM PRODUCTION / ALTERAÇÕES HEMATOLÓGICAS DURANTE A IMUNIZAÇÃO E APÓS A SANGRIA E PLASMAFERESE EM EQUINOS DE PRODUÇÃO DE SORO HIPERIMUNE ANTICROTÁLICO

Twenty animals were used to assess the blood profile of horses during immunization for anticrotalic hyperimmune serum production and after the bleedings and the plasmapherese, according to the protocol schedule of Instituto Butantan in order to evaluate efficacy of plasmapheresis. The samples were obtained before the antigen inoculations (crotalic venon), before and after the bleedings, right after the plasmapherese and 15, 30 and 45 days after the last one, making a total of 340 collections in 17 moments. Samples were submitted to hemogram. Significant variations were observed on the blood profile of the horses throughout the immunization, showing normocytic, normochromic anemia, without significant alterations on leukogram. During the bleedings phases, evident variations were observed on the blood profile showing normocytic normochromic anemia after bleeding without changing the leukogram values. During rest periods, the efficacy of plasmapheresis was evident with a rapid, partial recovery of hemogram, making easier the fast return to hematologic normality, making them capable to a new hyperimmune serum production.KEY WORDS: Anticrotalic, equine, hematology, immunization, plasmapherese.

Para o estabelecimento do quadro sanguíneo de equinos durante a imunização para produção de soro hiperimune anticrotálico e após as sangrias de produção e a plasmaferese, realizou-se avaliação hematológica para determinar a eficácia da plasmaferese na recuperação do quadro hematimétrico dos animais. Foram utilizados vinte animais, submetidos às normas do protocolo de imunização do Instituto Butantan, sendo  colhidas amostras antes das inoculações do antígeno (veneno crotálico), antes e depois das sangrias de produção, após as plasmafereses e quinze, trinta e quarenta e cinco dias após a última sangria, totalizando 340 colheitas, realizadas em dezessete momentos, para realização do hemograma. Significativas variações no quadro hematológico dos equinos foram observadas na fase de imunização, caracterizando anemia normocítica normocrômica, sem alterações significativas do leucograma. Nas fases de sangrias, observaram-se evidentes variações no quadro hematológico, demonstrando uma anemia normocítica normocrômica pós-sangrias, sem variações nos valores do leucograma. No período de repouso, foi evidente a eficácia da plasmaferese, com pronta, mas parcial, recuperação do hemograma, facilitando o rápido retorno para normalidade hematológica, tornando-os aptos à nova produção de soro hiperimune.PALAVRAS-CHAVES: Anticrotálico, equinos, hematologia, imunização, plasmaferese.

AUTOMATED PLASMAPHERESIS IN HORSES: REPORT OF TWO CASES / Plasmaférese automatizada em equinos: Relato de dois casos.

A plasmaférese é um procedimento que consiste na retirada do sangue total de um doador e em seguida, separação do plasma com reinfusão dos elementos remanescentes. Este procedimento pode ser realizado de forma manual ou automatizada, com poucos relatos da técnica automatizada na espécie equina. Este artigo busca relatar a plasmaférese automatizada em dois equinos, para obtenção de plasma hiperimune, avaliando-se as complicações inerentes à técnica; e a variação e recuperação do volume globular e níveis séricos de proteínas totais nos animais doadores. Para os relatos foi utilizado o equipamento Fresenius AS 104, objetivando-se retirada de 20% do plasma total circulante com a proporção inicial de citrato de sódio de 1:12 no sistema extracorpóreo. Durante o procedimento observou-se obstrução por coagulação sanguínea no cateter de reinfusão e flebites jugulares nos doadores. A recuperação do volume globular e níveis séricos de proteínas totais ocorreu em 96 horas. Apesar da satisfat&oacut

Influência do uso da plasmaferese sobre o tempo de recuperação de caprinos doadores de sangue ou plasma / Influence of the plasmapheresis uses in the recovery time of blood or plasma donor goats

O objetivo desta pesquisa foi determinar a influência do uso da plasmaferese sobre o tempo de recuperação clínica e hematológica de caprinos doadores de sangue total ou plasma. Para tanto, foram utilizados 20 caprinos adultos e clinicamente sadios, distribuídos por dois grupos de 10 animais cada, a saber: grupo controle (de animais doadores de sangue total não tratados) e grupo experimental (de animais doadores que foram tratados através da plasmaferese). Os caprinos foram selecionados e monitorados através de exames físicos (funções vitais) e complementares (hemograma, proteínas totais, albumina, globulinas, relação A:G, uréia, creatinina e hemoglobina livre no plasma) realizados nos seguintes momentos: imediatamente antes e após a doação de sangue: 12 h, 24h, 72h, 120h, 360h, 480h, e 720 horas após os procedimentos. Os resultados foram analisados com comparações dentro e entre os dois grupos nos diferentes momentos do estudo. As observações clínicas efetuadas durante o período de até trinta dias após a doação de 20% do volume sangüíneo total, com ou sem a realização da plasmaferese nos animais dos grupos estudados não sofreram variações influenciadas por esses procedimentos. Observou-se significativa variação dos componentes do eritrograma, tendo o grupo experimental apresentado as melhores taxas de recuperação em função do tempo. Com base nos resultados obtidos, a aplicação da técnica da plasmaferese em caprinos mostrou-se eficiente como recurso para a otimização do tempo de recuperação dos valores do hemograma de animais doadores de plasma, não determinando hemólise durante o seu procedimento

The objective of this study was to determine the influence of plasmapheresis on clinical and haematological recovery time of whole blood or plasma donor goats. For this, 20 clinically healthy adult goats were divided into two groups of ten animals each: control group (not-treated whole blood donor animals), and experimental group (donor animals which were treated with plasmapheresis). Goats were selected and evaluated through physical examination (vital functions) and complementary tests (haemogram, total proteins, albumin, globulin, albumin:globulin ratio, urea nitrogen, creatinine, and plasma free haemoglobin), carried out at the following moments: immediately before and after blood donation, 12, 24, 72, 120, 360, 480, and 720 hours after the procedures. Results were analysed comparing animals in and between both groups (at differents moments of the study). The clinical observations made during the period of thirty days after donation of 20% of total blood volume, with or without plasmapheresis in the animals of studied groups, were not influenced by these procedures. The results revealed significant variation of eritrogram components, showing the experimental group to have better recovery rates according to time. Based on the results obtained in the present study, plasmapheresis technique application in goats showed to be efficient as a resource to optimize recovery time of haemogram values of plasma donor animals, and did not cause hemolisis during its procedure