Enzymatic activity of the fungus Pochonia chlamydosporia (Sordariomycetes: Hypocreales) and its ovicidal potential on eggs of Toxocara canis (Nematoda: Ascaridida)

Biological control is considered one of the most used alternative measures to combat helminths of relevance in veterinary medicine and public health. Among these parasites, Toxocara canis stands out for its high prevalence and worldwide distribution, in addition to being the main cause of visceral larva migrans in man. The present work aimed the fungus Pochonia chlamydosporia (isolate Pc-10) on eggs of T. canis. In order to do this, fertile nematode eggs were obtained by dissection of adult females fertilized specimens. After obtaining the eggs, they were inserted into 24 well plates previously À lled with different concentrations of enzymatic extract of the fungus (100, 200, 400 and 500 µL). In addition, the behavior of P. chlamydosporia hyphae on Toxocara canis eggs was also observed in 2% wateragar medium (2% WA+ fungal isolate) when compared to the control group (2% WA + water). It was veriÀ ed ovicidal activity with the enzymatic extract of P. chlamydosporia at concentrations of 400 and 500 µL. At the same time, after 12 days of exposure of the T. canis eggs to P. chlamydosporia mycelia it was possible to observe the fungus action on eggshells, including penetration of the hyphae and colonization of the egg inside. The results conÀ rm the ovicidal potential of the fungus and suggest its applicability in toxocariasis control programs.(AU)

Phosphate-solubilizing fungi co-inoculated with Bradyrhizobium promote cowpea growth under varying N and P fertilization conditions

We evaluated the compatibility between two nitrogen-fixing Bradyrhizobium inoculant strains and phosphate-solubilizing fungal strains and the effect of co-inoculation of these bacterial and fungal strains on cowpea growth under different N and P conditions. First, the compatibility between Bradyrhizobium strains UFLA03-84 and INPA03-11B and fungi Haematonectria ipomoeae FSA381, Eleutherascus lectardii FSA257a, Pochonia chlamydosporia var. catenulata FSA109, and Acremonium polychromum FSA115 was tested in both solid and liquid media. Cowpea growth and nodulation promotion under two mineral N doses and two P conditions (a low dose of soluble P plus a high dose of Ca3(PO4)2 and another condition with a high dose of soluble P) were tested with two N2 fixing Bradyrhizobium strains co-inoculated with each of the P-solubilizing fungal strains FSA109, FSA115, and FSA381. There was compatibility between each fungal strain and the two Bradyrhizobium strains, except for FSA257a with either of the bacterial strains in liquid medium. When both mineral N and P were limiting, plants were able to grow and accumulate N and P based on biological N2 fixation and solubilization of calcium phosphate in the same amount as the mineral N and soluble phosphate. Even when both nutrients were fully available, the type of co-inoculation promoted plant growth and nutrient accumulation. The responses varied in accordance with the co-inoculated strains, the N source, and the P source, reflecting the enormous complexity of the biological interactions between plants and microorganisms, and the nutrient conditions provided by the environment.

Staining fungal structures with artificial dyes used in the industry of juices

ABSTRACT: The objective of this research was to evaluate the efficiency of artificial dyes, sunset yellow and red bordeaux S, and the use of glycerol in different concentrations to consistently stain fungal structures in slides containing spores of Oidium sp., Albugo ipomoeae-panduratae, Pochonia chlamydosporia and hyphae of Phytopythium helicoides. Commercial product mixtures of the artificial dyes at 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 3.0 and 5.0% (w/v) added with glycerol at 0.25, 0.5 and 1.0% were evaluated. To stain chlamydospores, the suspension was placed in the staining solution or heated at 80ºC for 5 minutes. The slides were prepared by the wet mount slide method. Fungal spores were consistently stained starting at a concentration of 2% of the staining solution. The addition of glycerol to the staining solution improved the contrast of the sporangia, hyphae and chlamydospores. Higher intensity and uniformity of chlamydospores staining was verified using 3% dye solution and 1% heated glycerol, when compared to the unheated and blue-cotton solution.

RESUMO: Neste trabalho, objetivou-se avaliar a eficiência dos corantes artificiais, amarelo crepúsculo e vermelho bordeaux S, e o uso do glicerol em diferentes concentrações, na montagem de lâminas com esporos de Oidium sp., Albugo ipomoeae-panduratae, Pochonia chlamydosporia e hifas de Phytopythium helicoides. Foram avaliadas as concentrações de 0,5, 1,0, 1,5, 2,0, 3,0 e 5,0% (p/v) do produto comercial da mistura dos corantes artificiais e adição de glicerol nas concentrações de 0,25, 0,5 e 1,0%. Para coloração de clamidósporos, a suspensão foi colocada na solução corante ou aquecida a 80ºC por 5 minutos e as lâminas preparadas com líquido de montagem. A partir da concentração de 2% da mistura dos corantes houve maior coloração dos esporos. A adição de glicerol na solução corante melhorou o contraste dos esporângios, hifas e clamidósporos. Maior intensidade e uniformidade de coloração de clamidósporos ocorreram na solução corante 3% e glicerol 1% aquecida, em comparação com a solução sem aquecimento e azul-de-algodão.

Staining fungal structures with artificial dyes used in the industry of juices / Coloração de estruturas de fungos com corantes artificiais usados na fabricação de sucos

The objective of this research was to evaluate the efficiency of artificial dyes, sunset yellow and red bordeaux S, and the use of glycerol in different concentrations to consistently stain fungal structures in slides containing spores of Oidium sp., Albugo ipomoeae-panduratae, Pochonia chlamydosporia and hyphae of Phytopythium helicoides. Commercial product mixtures of the artificial dyes at 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 3.0 and 5.0% (w/v) added with glycerol at 0.25, 0.5 and 1.0% were evaluated. To stain chlamydospores, the suspension was placed in the staining solution or heated at 80ºC for 5 minutes. The slides were prepared by the wet mount slide method. Fungal spores were consistently stained starting at a concentration of 2% of the staining solution. The addition of glycerol to the staining solution improved the contrast of the sporangia, hyphae and chlamydospores. Higher intensity and uniformity of chlamydospores staining was verified using 3% dye solution and 1% heated glycerol, when compared to the unheated and blue-cotton solution.(AU)

Neste trabalho, objetivou-se avaliar a eficiência dos corantes artificiais, amarelo crepúsculo e vermelho bordeaux S, e o uso do glicerol em diferentes concentrações, na montagem de lâminas com esporos de Oidium sp., Albugo ipomoeae-panduratae, Pochonia chlamydosporia e hifas de Phytopythium helicoides. Foram avaliadas as concentrações de 0,5, 1,0, 1,5, 2,0, 3,0 e 5,0% (p/v) do produto comercial da mistura dos corantes artificiais e adição de glicerol nas concentrações de 0,25, 0,5 e 1,0%. Para coloração de clamidósporos, a suspensão foi colocada na solução corante ou aquecida a 80ºC por 5 minutos e as lâminas preparadas com líquido de montagem. A partir da concentração de 2% da mistura dos corantes houve maior coloração dos esporos. A adição de glicerol na solução corante melhorou o contraste dos esporângios, hifas e clamidósporos. Maior intensidade e uniformidade de coloração de clamidósporos ocorreram na solução corante 3% e glicerol 1% aquecida, em comparação com a solução sem aquecimento e azul-de-algodão.(AU)

Biocontrol agents in the management of Meloidogyne incognita in tomato / Agentes de biocontrole no manejo de Meloidogyne incognita em tomateiro

Recognized as prominent among the principal pests of tomato crop, the root-knot nematode (Meloidogyne incognita) has generated much study with regards to control methods. This study aimed to assess the efficiency of biological products in decreasing the M. incognita population in tomato. Four experiments were conducted under greenhouse conditions. Two of these experiments had the purpose to determine the efficiency of NemOut (Bacillus subtilis + B. licheniformis + Trichoderma longibrachiatum), and the other two to assess the efficiency of other different biological products in M. incognita management. Tomato plants of the cultivar Santa Cruz Kada Giant were inoculated using 2000 eggs and J2 of M. incognita. In the first two experiments doses corresponding to 0, 4, 6, 8 and 10kg ha-1 of NemOut were applied after inoculation. In the second study, the treatments consisted of the use of biological products containing different other biocontrol agents. Assessments were made at 45 and 65 days after inoculation (DAI) to evaluate plant height, fresh shoot and fresh root weigh, gall index and egg mass index, population density and reproduction factor (RF). The NemOut doses reduced the M. incognita population density and RF at 45 DAI. The agent Pochonia chlamydosporia showed greater efficiency in controlling M. incognita on tomato. Biological products and the different doses of NemOut had no influence on the tomato plant development.

O nematoide das galhas (Meloidogyne incognita) é relatado como uma das principais pragas da cultura do tomate, sendo importante o estudo de alternativas para o seu manejo. O presente estudo objetivou avaliar a eficiência de produtos biológicos na redução da população de M. incognita em tomate. Foram conduzidos quatro experimentos em casa de vegetação, dois visando avaliar a eficiência de doses de NemOut (Bacillus subtilis + B. licheniformis + Trichoderma longibrachiatum), e outros dois para avaliar a eficiência de diferentes produtos biológicos no controle de M. incognita. Plantas de tomate Santa Cruz Kada Gigante foram inoculadas com 2000 ovos e J2 de M. incognita. No primeiro estudo foram utilizadas doses equivalentes a 0, 4, 6, 8 e 10kg ha-1 de NemOut, aplicadas após a inoculação. No segundo estudo os tratamentos constituíram de produtos biológicos com diferentes agentes de biocontrole. As avaliações foram realizadas 45 e 65 dias após a inoculação (DAI), determinando-se altura de plantas, massa fresca da parte aérea e da raiz, índice de galhas e de massas de ovos, densidade populacional e fator de reprodução (FR). Doses crescentes de NemOut reduziram a densidade populacional e o FR de M. incognita, aos 45 DAI. O agente Pochonia chlamydosporia mostrou-se mais eficiente no controle de M. incognita no tomateiro. Os produtos biológicos e as diferentes doses de NemOut não afetaram o desenvolvimento das plantas de tomate.

Biocontrol agents in the management of Meloidogyne incognita in tomato / Agentes de biocontrole no manejo de Meloidogyne incognita em tomateiro

Recognized as prominent among the principal pests of tomato crop, the root-knot nematode (Meloidogyne incognita) has generated much study with regards to control methods. This study aimed to assess the efficiency of biological products in decreasing the M. incognita population in tomato. Four experiments were conducted under greenhouse conditions. Two of these experiments had the purpose to determine the efficiency of NemOut (Bacillus subtilis + B. licheniformis + Trichoderma longibrachiatum), and the other two to assess the efficiency of other different biological products in M. incognita management. Tomato plants of the cultivar Santa Cruz Kada Giant were inoculated using 2000 eggs and J2 of M. incognita. In the first two experiments doses corresponding to 0, 4, 6, 8 and 10kg ha-1 of NemOut were applied after inoculation. In the second study, the treatments consisted of the use of biological products containing different other biocontrol agents. Assessments were made at 45 and 65 days after inoculation (DAI) to evaluate plant height, fresh shoot and fresh root weigh, gall index and egg mass index, population density and reproduction factor (RF). The NemOut doses reduced the M. incognita population density and RF at 45 DAI. The agent Pochonia chlamydosporia showed greater efficiency in controlling M. incognita on tomato. Biological products and the different doses of NemOut had no influence on the tomato plant development.(AU)

O nematoide das galhas (Meloidogyne incognita) é relatado como uma das principais pragas da cultura do tomate, sendo importante o estudo de alternativas para o seu manejo. O presente estudo objetivou avaliar a eficiência de produtos biológicos na redução da população de M. incognita em tomate. Foram conduzidos quatro experimentos em casa de vegetação, dois visando avaliar a eficiência de doses de NemOut (Bacillus subtilis + B. licheniformis + Trichoderma longibrachiatum), e outros dois para avaliar a eficiência de diferentes produtos biológicos no controle de M. incognita. Plantas de tomate Santa Cruz Kada Gigante foram inoculadas com 2000 ovos e J2 de M. incognita. No primeiro estudo foram utilizadas doses equivalentes a 0, 4, 6, 8 e 10kg ha-1 de NemOut, aplicadas após a inoculação. No segundo estudo os tratamentos constituíram de produtos biológicos com diferentes agentes de biocontrole. As avaliações foram realizadas 45 e 65 dias após a inoculação (DAI), determinando-se altura de plantas, massa fresca da parte aérea e da raiz, índice de galhas e de massas de ovos, densidade populacional e fator de reprodução (FR). Doses crescentes de NemOut reduziram a densidade populacional e o FR de M. incognita, aos 45 DAI. O agente Pochonia chlamydosporia mostrou-se mais eficiente no controle de M. incognita no tomateiro. Os produtos biológicos e as diferentes doses de NemOut não afetaram o desenvolvimento das plantas de tomate.(AU)

Associação dos fungos Monacrosporium sinense e Pochonia chlamydosporia no controle biológico de nematoides gastrintestinais de bovinos

As infecções por nematoides são uma importante restrição à produção eficiente de ruminantes criados em pastagem no Brasil e no mundo. O presente estudo descreve sobre os fungos Monacrosporium sinense (SF53) e Pochonia chlamydosporia (VC4) e seu uso associado no controle de nematoides gastrintestinais de bovinos. As etapas dos estudos in vitro envolveram observação dos índices de velocidade de crescimento micelial (IVCM) de cada fungo em três meios de cultura, seis temperaturas e sete variações de pH; a compatibilidade entre estes isolados e suas atividades nematicidas conjuntas e isoladas sobre larvas infectantes (L3) de bovinos. A etapa do estudo in vivo avaliou os efeitos da administração oral de péletes contendo a combinação fúngica no controle biológico de L3 de nematoides parasitas gastrintestinais de bovinos criados em pastagens. Foi possível identificar que a temperatura de 40°C foi prejudicial para o crescimento dos fungos. M. sinense apresentou maior IVCM a 30°C nos três meios de cultura utilizados e na variação de pH 7 a 9 em meio BDA. P. chlamydosporia apresentou maior IVCM em meio ágar água a 20°C e em pH 7 em meio BDA. A compatibilidade entre os isolados SF53 e VC4 foi confirmada pelos testes de confrontação direta, antibiose e compostos voláteis. Além disso, a avaliação nematicida in vitro mostrou que a melhor eficácia foi quando os dois isolados foram usados em conjunto, com redução de 98,90% no número de L3 de nematoides de bovinos. Na avaliação a campo, a recuperação de L3 da pastagem do grupo tratado com a combinação fúngica foi 91,7% e 86,4% menor do que na pastagem do grupo controle, respectivamente para amostras coletadas a 20 cm e 40 cm das fezes. Os valores de ovos por grama de fezes (OPG) nos meses de maio de 2019 e janeiro de 2020 foram menores (p0.05) no grupo tratado. Portanto, os fungos M. sinense e P. chlamydosporia são promissores no controle de larvas infectantes de nematoides gastrintestinais de bovinos.

Nematode infections are an important restriction to the efficient production of pasture-raised ruminants in Brazil and worldwide. This study describes about fungi Monacrosporium sinense (SF53) and Pochonia chlamydosporia (VC4) and their associated use in the control of gastrointestinal nematodes (GIN) from cattle. The in vitro studies involved mycelial growth rate indices (MGRI) observations of each fungus in three culture media, six temperatures and seven pH variations; compatibility between these isolates and their joint nematicidal activities and isolated activities on cattle nematodes infective larvae (L3). The in vivo study evaluated the effects of oral administration of pellets containing fungal combination in the biological control of gastrointestinal parasitic nematodes in cattle and on pastures. It was possible to identify that the temperature of 40°C was harmful to fungi growth. M. sinense showed higher MGRI at 30°C in the three culture media used and in the pH range from 7 to 9 in PDA medium. P. chlamydosporia showed higher MGRI in water agar medium at 20°C and at pH 7 in PDA medium. The compatibility between SF53 and VC4 isolates was confirmed by direct confrontation, antibiosis and volatile compounds tests. Furthermore, the in vitro nematicidal evaluation showed that the best efficacy was when the two isolates were together used, with a 98.90% reduction in L3 number. In field evaluation, the L3 recovery in pasture of the group treated with the fungal combination was 91.7% and 86.4% lower than in pasture of the control group, respectively for samples collected at 20 cm and 40 cm from the feces. The eggs per gram of feces (OPG) values in the months of May 2019 and January 2020 were lower (p0.05) in the treated group. Therefore, the fungi M. sinense and P. chlamydosporia are promising in the control of bovine gastrointestinal nematodes

Arthrobotrys cladodes var macroides E Pochonia chlamydosporia COMO CONTROLADORES BIOLÓGICOS DE NEMATÓIDES PARASITOS GASTRINTESTINAIS DE EQUINOS

Os nematóides parasitas gastrintestinais são responsáveis por gerar perdas econômicas significativas para a equideocultura mundial. O surgimento de resistência aos anti-helmínticos tem se tornado frequente e o controle biológico através do uso de fungos nematófagos torna-se uma alternativa para auxiliar na profilaxia das helmintoses gastrintestinais de equinos. Neste trabalho foi avaliada a eficácia do fungo nematófago Arthrobotrys cladodes var. macroides (isolado CG719) em predar larvas infectantes (L3) de ciatostomíneos in vitro, bem como sua atividade predatória após a passagem pelo trato gastrointestinal de equinos (TGI). Os testes in vitro e após passagem pelo TGI apresentaram reduções (p <0,05) de 56,6% e 31,42% respectivamente de L3, confirmando a capacidade de A. cladodes em controlar L3 de ciatostomíneos e suportar a passagem pelo TGI. Esses resultados incentivaram a avaliação da eficácia do fungo A. cladodes em testes com equinos a campo. Nesse ensaio, o fungo foi utilizado em formulações à base de alginato de sódio fornecidas duas vezes por semana, durante 9 meses. Embora os resultados tenham mostrado redução na contagem de ovos por grama de fezes, bem como de larvas recuperadas de coproculturas e de pastagem, não foram observadas diferenças estatisticamente significantes entre o grupo controle e tratado. Isso demonstra que fatores externos, como pluviosidade, temperatura e umidade relativa podem ter afetado sua eficácia a campo. Nesse trabalho, também foi avaliada a eficácia do nematicida biológico Rizotec® formulado com clamidósporos do fungo nematófago Pochonia chlamydosporia (isolado Pc 10). Foram utilizadas diferentes doses de Rizotec® equivalentes a (1x105 , 2,5x105 , 5x105 , 7,5x105 e 1x106 ) clamidósporos. Após 7, 14 e 21 dias de interação, os ovos foram classificados quanto aos efeitos ovicidas tipos 1, 2 e 3. Somente as doses de 14,25 mg e 19,0 mg de Rizotec® apresentaram diferenças (p<0,05) com relação ao efeito lítico tipo 3 com 21 dias de interação em relação ao grupo controle. Foi observada uma tendência de aumento nas percentagens (17,0%, 26,33%, 28,33%, 47,83% e 65,66%) de ovos com esse efeito ao se elevar a dose do produto. As curvas de regressão para as doses testadas mostraram uma tendência de aumento do efeito lítico tipo 3 com o aumento do tempo de interação. Os resultados apresentados neste trabalho confirmam a eficácia dos fungos Arthrobotrys cladodes var. macroides (isolado CG719) e Pochonia chlamydosporia (isolado Pc 10) no controle de formas infectantes e ovos de nematóides gastrintestinais de equinos in vitro.

Gastrointestinal parasitic nematodes are responsible for generating significant economic losses for the world equideoculture. The emergence of resistance to anthelmintics has become frequent and biological control through the use of nematophagous fungi has become a promising alternative to assist in the prophylaxis of gastrointestinal helminths in horses. In this work, the efficacy of the nematophagous fungus Arthrobotrys cladodes var. macroides (CG 719) in predating infective larvae (L3) of cyathostomins in vitro, as well as their predatory activity after passing through the equine gastrointestinal tract (GIT). Tests in vitro and after passing through the GIT showed reductions (p <0.05) of 56.6% and 31.42%, respectively, of L3, confirming the ability of A. cladodes to control cyathostomin L3 and support the passage through the GIT. These results encouraged the evaluation of the effectiveness of the fungus A. cladodes in tests with horses in the field. In this test, the fungus was used in formulations based on sodium alginate supplied twice weekly, for 10 months. Although the results showed a reduction in the egg count per gram of feces, as well as in larvae recovered from coprocultures and pasture, no significant differences were observed between the control and treated groups. This demonstrates that external factors such as rainfall, temperature and relative humidity can affect its effectiveness in the field. In this work, the effectiveness of the biological nematicide Rizotec® (1.9 mg, 4.75 mg, 9.5 mg, 14.25 mg and 19.0 mg) formulated with chlamydospores of the nematophagous fungus Pochonia chlamydosporia (isolated Pc 10) was also evaluated, in destroying Parascaris equorum eggs in vitro. The eggs were classified according to the ovicidal effects (types 1, 2 and 3) caused by the fungus in 7, 14 and 21 days of interaction. Only the doses of 14.25 mg and 19.0 mg of Rizotec® showed differences (p <0.05) in relation to the type 3 lytic effect with 21 days of interaction in relation to the control group. There was a tendency to increase the percentages (17,0%, 26,33%, 28,33%, 47,83% and 65,66%) of eggs with this effect when increasing the product dose. The regression curves for the tested doses showed a tendency to increase the type 3 lytic effect with increasing interaction time. The results presented in this work confirm the efficacy of the fungi A. cladodes and P. chlamydosporia (isolated Pc10) in the control of infectious forms and eggs of gastrointestinal nematodes in horses in vitro

Fungos nematófagos no controle biológico de nematoides parasitas gastrintestinais de bovinos

Nematoides parasitas gastrintestinais são responsáveis por perdas significativas nos processos produtivos de ruminantes, principalmente em sistemas extensivos de produção de bovinos. A resistência dos helmintos a anti-helmínticos tem se tornado frequente e o controle biológico pela utilização de fungos nematófagos é uma promissora alternativa na profilaxia das helmintoses gastrintestinais de bovinos. Fungos nematófagos ovicidas e predadores possuem mecanismos de ação distintos, assim, quando utilizados em combinação, podem apresentar ação complementar e sinérgica no controle biológico de helmintos. Os objetivos do presente trabalho foram: avaliar os fungos Arthrobotrys cladodes (isolado CG719), Duddingtonia flagrans (isolado AC001) e Pochonia chlamydosporia (isolado VC4) em diversas condições de temperatura, quanto ao crescimento micelial, à produção de clamidósporos e à atividade nematicida sobre larvas infectantes (L3) de helmintos parasitas de bovinos; avaliar a compatibilidade de crescimento conjunto entre o fungo predador A. cladodes e o fungo ovicida P. chlamydosporia; avaliar a viabilidade e a atividade nematicida de A. cladodes e de P chlamydosporia, isoladamente e associados em matriz de alginato de sódio, após passagem pelo trato gastrintestinal de bovinos; e avaliar a ação conjunta e isolada de A. cladodes e P chlamydosporia na redução da carga parasitária de bovinos criados em pastagens. A. cladodes, D. flagrans e P. chlamydosporia apresentaram níveis variados de crescimento micelial, atividade nematicida e produção de clamidósporos nas temperaturas de 15, 20, 25, 30 e 35 º C. Os testes de antagonismo em confrontação direta, de antibiose e do efeito de metabólitos voláteis entre P. chlamydosporia e A. cladodes indicaram a viabilidade de crescimento em conjunto destes fungos. As formulações peletizadas de alginato de sódio contendo P. chlamydosporia e A. cladodes resistiram à passagem pelo trato gastrintestinal de bovinos e os fungos mantiveram a viabilidade de crescimento e predação de helmintos. O uso combinado de A. cladodes e P. chlamydosporia mostrou-se eficaz no controle biológico de helmintos parasitas gastrintestinais de bovinos e apresentou maior atividade nematicida que os mesmos fungos utilizados isoladamente. A carga parasitária foi menor e o ganho de peso foi maior (p 0,05) nos grupos de bovinos tratados com fungos nematófagos. Portanto, a utilização de A. cladodes e P. chlamydosporia mostrou-se promissora no controle de helmintoses em bovinos criados em pastagens.

Gastrointestinal parasitic nematodes are responsible for significant losses in ruminant production processes, especially in extensive cattle production systems. Helminth resistance to anthelmintics has become frequent and biological control by the use of nematophagous fungi is a promising alternative in the prophylaxis of bovine gastrointestinal helminthiasis. Ovicidal and predatory nematophagous fungi have distinct mechanisms of action, so when used in combination they may have complementary and synergistic action in the biological control of helminths. The objectives of the present work were: to evaluate the fungi Arthrobotrys cladodes (CG719 isolate), Duddingtonia flagrans (AC001 isolate) and Pochonia chlamydosporia (VC4 isolate) under different temperature conditions, for mycelial growth, chlamydospore production and nematicidal activity against bovine helminth infective larvae; to evaluate the compatibility of joint growth between the predatory fungus A. cladodes and the ovicidal fungus P. chlamydosporia; to evaluate the viability and nematicidal activity of A. cladodes and P. chlamydosporia, alone and associated in sodium alginate matrix, after passage through the gastrointestinal tract of cattle; and evaluate the joint and isolated action of A. cladodes and P. chlamydosporia in reducing the parasitic load of grazing cattle. A. cladodes, D. flagrans and P. chlamydosporia presented varying levels of mycelial growth, nematicidal activity and chlamydospore production at temperatures of 15, 20, 25, 30 and 35 º C. Tests of direct confrontation antagonism, antibiosis and the effect of volatile metabolites between P. chlamydosporia and A. cladodes indicated the viability of these fungi to grow together. Pelletized sodium alginate formulations containing P. chlamydosporia and A. cladodes resisted passage through the bovine gastrointestinal tract and the fungi maintained the viability of growth and predation of helminths. The combined use of A. cladodes and P. chlamydosporia was effective in the biological control of bovine gastrointestinal parasitic helminths and showed higher nematicidal activity than the same fungi used alone. The parasite load was lower and the weight gain was higher (p 0.05) in the groups of cattle treated with nematophagous fungi. Therefore, the use of A. cladodes and P. chlamydosporia was promising to control helminthiasis in grazing cattle.

Incorporação ao solo de substrato contendo micélio e conídios de Pochonia chlamydosporia para o manejo de Meloidogyne javanica / Soil amendment with substrate containing mycelium and conidia of Pochonia chlamydosporia for the management of Meloidogyne javanica

Os clamidósporos são os principais propágulos utilizados como fonte de inóculo de Pochonia chlamydosporia em experimentos envolvendo o biocontrole do nematoide das galhas. O presente trabalho teve por objetivo avaliar o controle de Meloidogyne javanica em tomateiro por meio da aplicação ao solo de grãos de arroz colonizados pelo fungo contendo apenas micélio e conídio, sem a presença de clamidósporos. O isolado de P. chlamydosporia Pc-10 foi cultivado por 15 dias a 26°C em arroz previamente esterilizado em forno microondas. Dois experimentos foram conduzidos simultaneamente em casa de vegetação. No experimento 1, vasos de 2L de capacidade foram preenchidos com mistura solo:areia (1:1, v:v), contendo 3g kg-1 de solo de grãos de arroz colonizados pelo antagonista. No experimento 2, o fungo foi adicionado ao solo de vasos de 0,5L nas doses de 1, 5, 10, 15, 20, 25 ou 30g kg-1 de solo. Em seguida, o substrato de cada vaso foi infestado com 4.000 ovos de M. javanica e, após 15 dias, uma plântula de tomate foi transplantada. No experimento 1, a aplicação do fungo ao solo reduziu o número de galhas e de ovos do nematoide em 40% e 72,83%, respectivamente. No experimento 2, houve redução do número de ovos a partir de doses de 5g kg 1 de solo e no número de galhas, principalmente, nas doses de 25 e 30g kg-1 de solo. Conclui-se que P. chlamydosporia Pc-10 controlou M. javanica em tomateiro, mesmo quando aplicado ao solo na forma de grãos de arroz colonizados e sem a presença de clamidósporos.(AU)

Chlamydospores are the main propagules used as source of inoculum of Pochonia chlamydosporia in biocontrol experiments of root-knot nematodes. The objective of this study was to evaluate the control of Meloidogyne javanica on tomato plants by the soil application of rice grains colonized by Pochonia chlamydosporia containing just mycelium and conidia, without chlamydospores. The fungus (isolate Pc-10) was grown for 15 days at 26°C on grains of rice, previously sterilized in microwave oven. Two experiments were simultaneously carried out under greenhouse conditions. In the experiment 1, 2-L pots were filled with a soil:sand mixture (1:1, v:v) containing 3g kg-1 of soil of rice grains colonized by the antagonist. In the experiment 2, the fungus was added into the soil of 0.5L pots at the doses of 5, 10, 15, 20, 25 or 30g kg-1 of soil. The soil of each pot was infested with 4,000 eggs of M. javanica and one tomato seedling was transplanted in each pot after fifteen days. In the experiment 1, the application of the fungus into the soil reduced the number of galls and eggs of the nematode by 40% and 72.83%, respectively. In the experiment 2, it was observed the reduction of the number of eggs from the dose of 5 g kg-1 of soil and of the number of galls, particularly at the doses of 25 and 30g kg-1 of soil. As a conclusion, P. chlamydosporia controlled M. javanica on tomato plants even when applied into the soil as colonized-rice grains and without chlamydospores.(AU)

Predatory activity of chlamydospores of the fungusPochonia chlamydosporia on Toxocara caniseggs under laboratory conditions

The objective of this study was to use chlamydospores of the fungusPochonia chlamydosporia (isolates VC1 and VC4) against Toxocara canis eggs in a 15-day in vitro assay. One thousand T. canis eggs were placed in Petri dishes containing 2% water agar medium with different concentrations of chlamydospores (1,000, 10,000 or 100,000) of each fungal isolate of P. chlamydosporia (treated groups) and 1,000 eggs in Petri dishes without fungus (control group). Egg counts were performed to determine the ovicidal activity, which was classified as three effect levels: type 1, type 2 and type 3. Significant differences (P 0.01) in egg destruction were found in comparison with the control group. The highest percentage of egg destruction was found in plates containing 100,000 chlamydospores (68.5% for VC1 and 70.5% for VC4). Chlamydospores of P. chlamydosporiawere effective in destroying T. canis eggs and may contribute in the future towards combating the eggs of this parasite.

O objetivo do trabalho foi utilizar clamidósporos do fungoPochonia chlamydosporia (isolados VC1 e VC4) na destruição de ovos de Toxocara canis, num ensaioin vitro, realizado no intervalo de 15 dias. Em cada placa de Petri com ágar-água 2% foram vertidos 1.000 ovos deT. canis em 1.000, 10.000 ou 100.000 clamidósporos de cada isolado do fungo (grupos tratados). Foram realizadas as contagens para verificar a atividade ovicida, classificada em três níveis de efeito: tipo 1, tipo 2 e tipo 3. Os resultados demonstraram que houve diferença significativa (P 0,01) na destruição dos ovos em relação aos ovos observados nas placas do grupo controle. O maior percentual de ovos destruídos foi observado nas placas contendo 100.000 clamidósporos (68,5% para VC1 e 70,5% para VC4). Clamidósporos do fungo P. chlamydosporia foram efetivos na destruição dos ovos de T. canis podendo contribuir no futuro para o combate aos ovos deste parasito.

Predatory activity of chlamydospores of the fungus Pochonia chlamydosporia on Toxocara canis eggs under laboratory conditions / Atividade predatória de clamidósporos do fungo Pochonia chlamydosporia sobre ovos de Toxocara canis em condições laboratoriais

The objective of this study was to use chlamydospores of the fungus Pochonia chlamydosporia (isolates VC1 and VC4) against Toxocara canis eggs in a 15-day in vitro assay. One thousand T. canis eggs were placed in Petri dishes containing 2% water agar medium with different concentrations of chlamydospores (1,000, 10,000 or 100,000) of each fungal isolate of P. chlamydosporia (treated groups) and 1,000 eggs in Petri dishes without fungus (control group). Egg counts were performed to determine the ovicidal activity, which was classified as three effect levels: type 1, type 2 and type 3. Significant differences (P < 0.01) in egg destruction were found in comparison with the control group. The highest percentage of egg destruction was found in plates containing 100,000 chlamydospores (68.5% for VC1 and 70.5% for VC4). Chlamydospores of P. chlamydosporia were effective in destroying T. canis eggs and may contribute in the future towards combating the eggs of this parasite.

O objetivo do trabalho foi utilizar clamidósporos do fungo Pochonia chlamydosporia (isolados VC1 e VC4) na destruição de ovos de Toxocara canis, num ensaio in vitro, realizado no intervalo de 15 dias. Em cada placa de Petri com ágar-água 2% foram vertidos 1.000 ovos de T. canis em 1.000, 10.000 ou 100.000 clamidósporos de cada isolado do fungo (grupos tratados). Foram realizadas as contagens para verificar a atividade ovicida, classificada em três níveis de efeito: tipo 1, tipo 2 e tipo 3. Os resultados demonstraram que houve diferença significativa (P < 0,01) na destruição dos ovos em relação aos ovos observados nas placas do grupo controle. O maior percentual de ovos destruídos foi observado nas placas contendo 100.000 clamidósporos (68,5% para VC1 e 70,5% para VC4). Clamidósporos do fungo P. chlamydosporia foram efetivos na destruição dos ovos de T. canis podendo contribuir no futuro para o combate aos ovos deste parasito.

Helmintos parasitos gastrintestinais de Gallus gallus domesticus Linnaeus, 1758 criados em sistema caipira - identificação morfológica e molecular e controle biológico de nematódeos.

Os sistemas extensivos têm conquistado maior visibilidade com produtos diferenciados no mercado, devido à maior demanda do consumidor por produtos que aliem sustentabilidade e bem-estar animal. Todavia, tais criações expõem os animais a helmintos, aumentando o desafio e afetando a resposta imunológica das aves, causando óbitos nos animais e prejuízo econômico aos produtores. Os objetivos deste estudo são avaliar a ocorrência de helmintos parasitos gastrintestinais em aves criadas em sistemas extensivo no município de Viçosa, Minas Gerais, Brasil; verificar o potencial ovicida do fungo helmintófago Pochonia chlamydosporia como controlador biológico de nematódeos e por fim; identificar sequências moleculares e caracterizar a posição filogenética do trematódeo Postharmostomum commutatum. Cento e noventa e um intestinos delgado e grosso e 38 proventrículos aves abatidas por produtores da microrregião de Viçosa, foram doados ao trabalho. Os helmintos encontrados foram separados e identificados seguindo chaves taxonômicas. De 160 aves positivas (83,8%), 118 apresentavam infecção por mais de um helminto. Um total de 6031 helmintos foram classificados em 13 espécies distintas, sendo 469 exemplares do nematódeo Tetrameres sp. encontrados parasitando os proventrículos. Os percentuais encontrados foram divididos entre nematódeos (73,3%), cestódeos (45,5%), e trematódeos (3,66%). Comparando os grupos de helmintos recuperados nos intestinos delgado e grosso, observou-se maior ocorrência (62,3%) e maior média de helmintos recuperados do nematódeo Heterakis gallinarum (22,7 helmintos/ave). Dentre os cestódeos, a espécie de maior ocorrência foi Raillietina echinobothrida (37,7%) e dentre os trematódeos, P. commutatum obteve maior percentual (3,1%). Afim de testar a resistência à passagem pelo trato gastrintestinal e capacidade ovicida de P. chlamydosporia sobre ovos de nematódeos, comparou-se o percentual de interação entre o isolado mantido em laboratório e recuperado após passagem pelo trato gastrintestinal de G. domesticus com ovos de Ascaridia galli e H. gallinarum. Para tanto, foram utilizadas 22 aves criadas em sistema extensivo e separadas em dois grupos (controle e tratado), sendo fornecida dose única do isolado fúngico crescido em substrato de milho triturado, com total de 3,3 x 106 clamidósporos para o grupo tratado. Após a visualização de estruturas fúngicas compatíveis com P. chlamydosporia, foram feitos novos repiques para outras placas de Petri contendo ágar-água 2% (5 placas por horário). Sendo mantidas condições idênticas para ambos os grupos, as placas foram incubadas por 10 dias a 25ºC no escuro e após este período, 200 ovos de cada nematódeo foram transferidos para cada placa. O percentual de interação foi avaliado por meio de leituras ao microscópio de luz realizadas a cada 24 horas, por um período total de 144h. Nos tempos de interação 24 e 72h, P. chlamydosporia mantido em laboratório demonstrou percentual de interação igual a 35,0 e 81,1%, respectivamente, sobre ovos de A. galli e, 25,5 e 83,8% em 24 e 72h sobre ovos de H. gallinarum. Após passagem pelo trato gastrintestinal das aves, o isolado apresentou nas primeiras 24h, 6,4% de interação com ovos de A. galli e 2,0% com ovos de H. gallinarum. Em 72h de interação, apresentou 34,3% de interação com ovos de A. galli e 18,8% com ovos de H. gallinarum. Os maiores percentuais de interação foram observados no tempo de 144h de interação entre fungo-ovos em ambos os helmintos testados. Posteriormente, caracterizou-se o processo de interação entre o fungo e os ovos de A. galli, H. gallinarum e Tetrameres sp. por microscopia eletrônica de varredura. Por fim, devido ao ciclo biológico complexo e importância médica veterinária potencial, as sequências moleculares dos genes 28S, ITS-2 e cox-1 do trematódeo P. commutatum foram avaliadas, afim de obter informações sobre a taxonomia deste parasito, uma vez que foram encontrados 50 espécimes adultos parasitando o cecos das aves doadas a este estudo (3,1%).Levantamentos parasitológicos devem ser específicos para cada região e este é o primeiro estudo que estima a fauna helmíntica gastrintestinal de G. domesticus criado em sistema extensivo no município de Viçosa, Minas Gerais, Brasil. O fungo helmintófago P. chlamydosporia demonstrou possibilidade de uso como controlador biológico, uma vez que é capaz de diminuir a contaminação ambiental, interagindo com ovos de nematódeos parasitos gastrintestinais de aves. A espécie P. commutatum (considerada sinônimo de P. gallinum Witenberg, 1923) forma uma linhagem isolada de outros membros da superfamília Brachylaimoidea, quando comparadas as sequências moleculares das espécies, suportando o status distinto do gênero. Espera-se que os resultados obtidos neste estudo contribuam para inquéritos epidemiológicos de parasitos de aves domésticas na região possam favorecer medidas profiláticas e de controle desses parasitos.

Extensive systems have gained greater visibility with differentiated products in the market, due to the greater consumer demand for products that combine sustainability and animal welfare. However, such creations expose the animals to helminths, increasing the challenge and affecting the immune response of the birds, causing deaths in the animals and economic damage to the producers. The objectives of this study are to evaluate the occurrence of gastrointestinal helminth parasites in birds raised in extensive systems in the city of Vicosa, Minas Gerais, Brazil; to verify the ovicidal potential of the helmintophagous fungus Pochonia chlamydosporia as biological control of nematodes and finally; to identify molecular sequences and characterize the phylogenetic position of the trematode Postharmostomum commutatum. One hundred and ninety-one small and large intestines and 38 proventricules of birds slaughtered by producers of the microregion of Vicosa, were donated to work. The helminths were separated and identified following taxonomic keys. Of 160 positive birds (83.8%), 118 had infection with more than one helminth. A total of 6031 helminths were classified in 13 distinct species, being 469 specimens of the nematode Tetrameres sp. found parasitizing the proventricles. The percentages found were divided among nematodes (73.3%), cestodes (45.5%), and trematodes (3.66%). Comparing the groups of helminths recovered in the small and large intestines, we observed a higher occurrence (62.3%) and a higher average of helminths recovered from the nematode Heterakis gallinarum (22.7 helminths / bird). Among the cestodes, the species with the highest occurrence was Raillietina echinobothrida (37.7%) and among the trematodes, P. commutatum obtained a higher percentage (3.1%). In order to test the resistance to passage through the gastrointestinal tract and ovicidal capacity of P. chlamydosporia on eggs of nematodes, the percentage of interaction between the isolate kept in the laboratory and recovered after passage through the gastrointestinal tract of G. domesticus with eggs of Ascaridia galli and H. gallinarum. For this, 22 birds were raised in an extensive system and separated into two groups (control and treated). A single dose of the fungal isolate grown on crushed corn substrate was used, with a total of 3.3 x 106 chlamydospores for the treated group. After visualization of fungal structures compatible with P. chlamydosporia, new repiques were made for other petri dishes containing 2% water-agar (5 plates per hour). With identical conditions being maintained for both groups, the plates were incubated for 10 days at 25 ° C in the dark and after this period, 200 eggs from each nematode were transferred to each plate. The percentage of interaction was evaluated by means of light microscope readings performed every 24 hours, for a total period of 144h. At the interaction times 24 and 72h, P. chlamydosporia kept in the laboratory showed a percentage of interaction equal to 35.0 and 81.1%, respectively, on A. galli eggs and, 25.5 and 83.8% in 24 and 72 hours on H. gallinarum eggs. After passage through the gastrointestinal tract of the birds, the isolate presented in the first 24h, 6.4% interaction with A. galli eggs and 2.0% with H. gallinarum eggs. In 72h of interaction, it presented 34.3% interaction with A. galli eggs and 18.8% with H. gallinarum eggs. The highest percentages of interaction were observed in the 144h time of interaction between fungus-eggs in both helminths tested. Subsequently, the interaction process between the fungus and the eggs of A. galli, H. gallinarum and Tetrameres sp. by scanning electron microscopy. Finally, due to the complex biological cycle and potential veterinary medical importance, the molecular sequences of the 28S, ITS-2 and cox-1 genes of the trematode P. commutatum were evaluated in order to obtain information on the taxonomy of this parasite, since they were found 50 adult specimens parasitizing the ceca of birds donated to this study (3.1%). Parasitological surveys should be specific for each region and this is the first study to estimate the gastrointestinal helminth fauna of G. domesticus created in an extensive system in the municipality of Vicosa, Minas Gerais, Brazil. The helminthophagous fungus P. chlamydosporia showed the possibility of using it as a biological controller, since it is able to reduce environmental contamination by interacting with nematode eggs of gastrointestinal parasites of birds. The species P. commutatum (considered synonymous with P. gallinum Witenberg, 1923) forms an isolated lineage of other members of the superfamily Brachylaimoidea, when comparing the molecular sequences of the species, supporting the distinct status of the genus. It is hoped that the results obtained in this study contribute to epidemiological surveys of poultry parasites in the region that may favor prophylactic and control measures of these parasites.

POTENCIAL OVICIDA DE Pochonia chlamydosporia Pc-10 (ASCOMYCOTA: SORDARIOMYCETES) SOBRE MASSAS OVÍGERAS DE Pseudosuccinea columella (MOLLUSCA: GASTROPODA) E OVOS DE Fasciola hepatica (TREMATODA: FASCIOLIDAE) COMO ALTERNATIVA DE CONTROLE BIOLÓGICO

Moluscos pertencentes à espécie Pseudosuccinea columella apresentam comportamento aquático e habitam coleções hídricas dulcícolas situadas especialmente em regiões neotropicais. São caramujos hermafroditas, possuindo alta capacidade reprodutiva e com massas ovígeras postas em substratos submersos nas margens dos criadouros expostas ao ressecamento e a patógenos como fungos. Trematódeos do gênero Fasciola são parasitos dos ductos biliares e causam grandes perdas econômicas. Os caramujos, são os primeiros hospedeiros intermediários do espécime Fasciola hepatica e seu controle é umas das ferramentas para o controle da fasciolose. Praticamente nada é sabido sobre a susceptibilidade de massas ovígeras a fungos. Pela primeira vez, a susceptibilidade de massas ovígeras de P. columella ao fungo Pochonia chlamydosporia (isolado Pc10) foi demonstrada sob condições laboratoriais. Para isto, dois grupos experimentais foram edificados: o grupo controle, na qual não verificou a exposição ao fungo, e o grupo tratado, caracterizado pela exposição das massas ovígeras ao isolado fúngico (Pc-10) durante 25 dias. Todo o experimento foi conduzido em duplicata constando de cinco réplicas para cada repetição, utilizando um total de quarenta massas ovígeras. Semanalmente, ao longo de todo o experimento, as massas ovígeras de ambos os grupos experimentais (controle e tratado) foram analisadas sob auxílio de microscópio estereoscópico para a contabilização de moluscos eclodidos. Em paralelo a este estudo, avaliou-se o potencial ovicida do extrato fúngico de P. chlamydosporia da cepa (Pc-10) em 900 ovos de F. hepatica. Para isto, os ovos foram previamente embrionados em B.O.D e posteriormente para estimular a eclosão miracidial, foram expostos à luz artificial e temperatura controlada, do qual foi inoculado no meio contendo os ovos e o extrato do fungo em 8 diferentes concentrações. Os resultados revelaram que o processo de embriogênese foi inibido pelo ascomiceto em questão, sugerindo sua aplicabilidade em programas de controle biológico deste limneídeo. Em adição, a ultraestrutura revelou ocorrência de diferentes tipos de interações estabelecidas entre as massas ovígeras do molusco com os micélios de P. chlamydosporia, as quais resultaram em importantes modificações estruturais nestas, comprometendo, por conseguinte, a viabilidade dos ovos. Em relação ao extrato fúngico enzimático, ambos interferiram signitivamente na viabilidade dos ovos, sendo o micélio dependente de dias para crescimento e estabelecimento do fungo em massas ovígeras e o extrato sendo eficiente avaliado em um período de 60 minutos, sobre concentrações nas quais, as menores dosagens, houve colabamento do ovo e em maiores, o desintegramento parcial da estrutura externa e rompimento.

Molluscs belonging to the species Pseudosuccinea columella show aquatic behavior and inhabit sweet water collections located especially in neotropical regions. They are hermaphrodite snails, having high reproductive capacity and with ovigerous masses placed in substrates submerged in the borders of the breeding places exposed to the dryness and pathogens like fungi. Trematodes of the genus Fasciola are parasites of the bile ducts and cause great economic losses. Snails, are the first intermediate hosts of the specimen Fasciola hepatica and its control is one of the tools for the control of fasciolose. Virtually nothing is known about the susceptibility of ovigerous masses to fungi. For the first time, the susceptibility of P. columella ovigerous masses to the fungus Pochonia chlamydosporia (Pc-10 isolate) was demonstrated under laboratory conditions. For this, two experimental groups were constructed: the control group, in which it did not verify the exposure to the fungus, and the treated group, characterized by the exposure of the ovigerous masses to the fungal isolate (Pc-10) during 25 days. The entire experiment was conducted in duplicate consisting of five replicates for each replicate, using a total of forty ovigerous masses. Weekly, throughout the experiment, the ovigerous masses of both experimental groups (control and treated) were analyzed under the aid of a stereoscopic microscope for the accounting of hatched molluscs. In parallel to this study, the ovicidal potential of the P. chlamydosporia fungal extract of the strain (Pc10) in 900 eggs of F. hepatica was evaluated. For this, the eggs were previously embryonated in B.O.D and later to stimulate the miracidial hatching, were exposed to artificial light and controlled temperature, from which it was inoculated in the medium containing the eggs and the fungus extract in different concentrations. The results revealed that the embryogenesis process was inhibited by the ascomycete in question, suggesting its applicability in biological control programs of this limneid. In 10 addition, the ultrastructure revealed the occurrence of different types of interactions established between the ovigerous masses of the mollusc with the mycelia of P. chlamydosporia, which resulted in important structural modifications in these, compromising, therefore, the viability of the eggs. In relation to the enzymatic fungal extract, both interfered significantly in the viability of the eggs, the mycelium being dependent on days for growth and establishment of the fungus in ovigerous masses and the extract being efficient evaluated in a period of 60 minutes, on concentrations in which the smaller dosages, there was egg collabiation and in larger, partial disintegration of the external structure and rupture.

AÇÃO DE FUNGOS NEMATÓFAGOS NO CONTROLE BIOLÓGICO IN VITRO DE CARRAPATOS DE ANIMAIS DOMÉSTICOS

Rhipicephalus (Boophilus) microplus é um carrapato que parasita principalmente bovinos, servindo de vetor para doenças como a babesiose e a anaplasmose que são transmitidas através da hematofagia, levando a perdas econômicas tanto pelo adoecimento dos animais quanto pela diminuição da produção. O aumento da resistência de carrapatos ao controle químico, juntamente com o risco de contaminação ambiental e alimentar, tem aumentado o interesse do uso de controle biológico para esses parasitos. Teleóginas de R. microplus foram coletadas de animais naturalmente infectados e divididas três grupos tratamento, sendo banhadas em cada grupo com 5000, 10000 e 15000 clamidósporos, e um grupo controle. O presente estudo teve como objetivo avaliar a ação in vitro do fungo nematófago Pochonia chlamydosporia (VC4) em teleóginas de R. microplus. Foi observado que a VC4 é capaz de infectar o R. microplus nas concentrações de 5000,10000 e 15000 clamidósporos, havendo diferença estatística entre todos os grupos tratados quando comparados com o controle, mas não quando comparados entre si. Esses resultados demonstram a possibilidade da VC4 ser usada como controle biológico desses carrapatos.

Rhipicephalus (Boophilus) microplus is a tick that parasites mainly cattle and serve as vector to many diseases including babesiosis and anaplasmosis that are transmitted during hematophagous feeding, bringing economic losses due to animal sickness and decrease in production. The arising of resistance to substances used for chemical control, along with the risk of environmental and food contamination by these chemicals, has raised interest in biological control for ticks. Engorged females of R. microplus were collected from naturally infested animals and divided into three treatment groups, which were bathed in solutions containing 5000, 10000 and 15000 chlamydospores, and one treatment group. The present study aimed to evaluate the in vitro effect of the nematophagous fungus Pochonia chlamydosporia on R. microplus engorged females. It was observed that P. chlamydosporia (VC4) was able to infect R. microplus ticks at concentrations of 5000, 10000 and 15000 chlamydospores, having statistical difference (p<0.05) between all treatment groups when compared to the control group but not when compared among themselves. These results suggest the possibility of VC4 to be used as a biological control for R. microplus ticks.