Biofilm formation by Prototheca zopfii isolated from clinical and subclinical bovine mastitis in distinct growth conditions under different dyes / Formação de biofilme por Prototheca zopfii isolados de mastite bovina clínica e subclínica em distintas condições de crescimento sob diferentes corantes

Prototheca spp. have been reported as an emergent environmental mastitis pathogen in several countries. Biofilm formation is a significant factor associated with different degrees of virulence developed by many microorganisms, including Prototheca spp. The present study aimed to compare two growth conditions and two staining dyes to determine which combination was more appropriate to evaluate qualitatively and quantitatively the production of biofilm by P. zopfii. Biofilm formation was evaluated in polystyrene microplates under static and dynamic growth conditions and staining with crystal violet or cotton blue dye. All P. zopfii isolates from cows with mastitis were classified as biofilm-producers in all growth conditions and staining. The cotton blue dye proved to be more appropriate method to classify the intensity of P. zopfii biofilm production.(AU)

Prototheca spp. tem sido relatado como um patógeno ambiental causador de mastite bovina em vários países. A formação de biofilme é um fator associado a diferentes graus de virulência desenvolvidos por muitos microrganismos, incluindo Prototheca zopfii. O presente estudo teve como objetivo comparar duas condições de crescimento e dois corantes para determinar a combinação mais adequada para avaliar qualitativa e quantitativamente a produção de biofilme por P. zopfii. A formação de biofilme foi avaliada em microplacas de poliestireno sob condições estáticas e dinâmicas de crescimento e coloração com cristal violeta ou azul de algodão. Todos os isolados de P. zopfii de vacas com mastite foram caracterizados como produtores de biofilme, independentemente das condições de crescimento e coloração. O corante azul de algodão demonstrou ser o método mais adequado para classificar a intensidade de produção de biofilme de P. zopfii.(AU)

Tipagem por MALDI-TOF MS e sensibilidade aos antimicrobianos de Prototheca spp. isolados de mastite bovina

FIDELIS, C. E. Tipagem por MALDI-TOF MS e sensibilidade aos antimicrobianos de Prototheca spp. isolados de mastite bovina. [Typing by MALDI-TOF MS and sensivity to antimicrobials of Prototheca spp. isolated from bovine mastitis]. 2021 77f. Dissertação de Mestrado (Mestrado em Ciências) Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, São Paulo, 2021. Prototheca spp. é uma microalga unicelular que pode causar infecções oportunistas em humanos e animais. Este patógeno apresenta elevada resistência a antimicrobianos convencionais e os atuais métodos de identificação de Prototheca spp. são demorados e com elevado custo. Diante disso, os objetivos do presente estudo foram avaliar: (a) o uso da técnica de MALDI-TOF MS para identificação em nível de espécie de isolados de Prototheca spp. causadores de mastite bovina; (b) a capacidade de produção de biofilme e (c) a sensibilidade in vitro de Prototheca spp. frente à polihexametileno biguanida (PHMB) e desinfetantes utilizados pré e após ordenha. Um total de 87 isolados de Prototheca spp. foram submetidos a extração de proteínas ribossomais por beads de zircônia, e posteriormente identificados por MALDI-TOF MS pelo software Biotyper suplementado com espectros de referência. Para determinação do perfil de sensibilidade in vitro, os isolados de Prototheca spp. foram submetidos a avaliação de concentração inibitória mínima (CIM) e concentração algicída mínima (CAM) pelo método de microdiluição em caldo. A capacidade de formação de biofilme foi avaliada pelo método de incubação em microplacas de fundo chato, e posteriormente, os isolados foram classificados como forte, moderado, fraco e não formador de biofilme. A MALDI-TOF MS permitiu a identificação de 73 (73/85) isolados de P. bovis e 2 (2/2) isolados de P. blaschkeae em nível de espécie. Já 12 (12/85) isolados de P. bovis foram identificados em nível de gênero. Do total dos isolados de P. bovis, 63,5% (n = 54) foram classificados como fortes, 28,2% (n = 24) moderados, e 8,2% (n = 7) fracos produtores de biofilme. Por outro lado, um isolado de P. blaschkeae foi classificado como fraco e o outro como moderado produtor de biofilme. A PHMB (CIM90: 2 µg/ml e CAM90: 4 µg/ml) e o gluconato de clorexidina (CIM90 e CAM90: 2 µg/ml), apresentaram os menores valores de CIM e CAM, seguido de dicloroisocianurato de sódio (CIM90 e CAM90: 1.400 µg/ml), hipoclorito de sódio (CIM90 e CAM90: 2.800 µg/ml), e iodo-polivinilpirrolidona (CIM90 e CAM90: 3.200 µg/ml). Concluímos que o uso da MALDI-TOF MS permite a rápida identificação de isolados de Prototheca spp. em nível de espécie. A maioria dos isolados de P. bovis apresentaram elevada capacidade de formação de biofilme. Dentre os desinfetantes, PHMB e o gluconato de clorexidina apresentaram os menores valores para inibição e inativação dos isolados de Prototheca spp.

FIDELIS, C. E. Typing by MALDI-TOF MS and sensivity to antimicrobials of Prototheca spp. isolated from bovine mastitis [Tipagem por MALDI-TOF MS e sensibilidade aos antimicrobianos de Prototheca spp. isolados de mastite bovina]. 2021 77p. Dissertação de Mestrado (Mestrado em Ciências) Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, São Paulo, 2021. Prototheca spp. is a unicellular microalga that can cause opportunistic infections in humans and animals. This pathogen has high resistance to conventional antimicrobials and the current methods of Prototheca spp. identification. are time consuming and present a high cost. Due this, the objectives of the present study were to evaluate: (a) the use of MALDI-TOF MS for identification at the species level of mastitis-causing Prototheca spp.; (b) the biofilm production capacity of Prototheca spp. isolates and (c) in vitro Prototheca spp. sensibility to polyhexamethylene biguanide (PHMB) and disinfectants used in pre and post milking. A total of 87 isolates of Prototheca spp. were submitted to ribosomal proteins extraction by zirconia beads, them, identified by MALDI-TOF MS with a Biotyper software supplemented with reference spectra. To determine the in vitro sensivity, Prototheca spp. isolates were submitted to Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimal Algicidal Concentration (MAC) using microdilution broth method. The biofilm production capacity was evaluated by microplates method, and the isolates were classified as strong, moderate, weak and non-biofilm producer. The MALDI-TOF MS allowed the identification of 73 (73/85) isolates has Prototheca bovis and 2 (2/2) isolates has Prototheca blaschkeae at species level. Although, 12 (12/85) isolates of Prototheca bovis were identified at genus level. In relation of P. bovis, 63.5% (n = 54) were classified as strong, 28.2% (n = 24) moderate, and 8.2% (n = 7) classified as weak biofilm producers. On the other hand, an isolate of P. blaschkeae was classified as weak and the other as classified has moderate biofilm producer. The PHMB (MIC90: 2 g/ml and MAC90: 4 g/ml) and chlorhexidine gluconate (MIC90 and MAC90: 2 g / ml), presented the lowest MIC and MAC values, followed by sodium dichloroisocyanurate (MIC90 and MAC90: 1.400 g / ml), sodium hypochlorite (MIC90 and MAC90: 2.800 g / ml), and iodo-polyvinylpyrrolidone (MIC90 and MAC90: 3.200 g / ml). We conclude that the use of MALDI-TOF MS allows the rapid identification of Prototheca spp. isolates at the species level. Most isolates of P. bovis presented high biofilm production capacity. Among the disinfectants, PHMB and chlorhexidine gluconate presented the lowest values for inhibition and inactivation of Prototheca spp. isolates.

Formação de biofilme e avaliação de uma molécula de polipirrol para tratamento de mastite por Prototheca bovis

Há um acréscimo considerável nos registros de casos de mastite ocasionados por agentes eucariontes, como os fungos e as algas. As algas do gênero Prototheca são organismos unicelulares, microscópicas, aclorofiladas e de ocorrência livre na natureza, tendo preferência por locais úmidos e com presença de matéria orgânica. Algas do gênero Prototheca estão presentes em todo o mundo, principalmente em áreas tropicais e temperadas. Prototheca spp. foram amplamente isoladas de bovinos em casos de mastite clínica e subclínica. Além disso, infecções pelo agente foram relatadas em cães envolvendo múltiplos tecidos, especialmente na forma gastrintestinal, oftálmica, urinária ou, ainda, neurológica. Ainda, em humanos também há um aumento nos relatos de infecções, principalmente relacionadas aos pacientes imunocomprometidos A mastite é uma enfermidade importante, no ponto de vista higiênico-sanitário bem como econômico e, dependendo do agente etiológico envolvido, a gravidade da infecção pode ser aumentada nos rebanhos leiteiros. Quando Prototheca (P.) bovis (P. zopfii genótipo 2) ou P. blaschkeae são os agentes causadores da enfermidade, as vacas leiteiras de alta produção são os principais animais acometidos, gerando prejuízos econômicos e sanitários nesses rebanhos, incluindo a diminuição na qualidade e quantidade do leite produzido, resultando no descarte dos animais infectados. O tratamento dos animais acometidos normalmente não é efetivo, devido à resistência aos antibacterianos e antifúngicos geralmente empregados em Medicina Veterinária. Adicionalmente, a capacidade de formação de biofilme por Prototheca spp. facilita sua transmissão entre os animais e dificulta a sua eliminação dos ambientes e das lesões. Devido à dificuldade de tratamento e a ausência de fármacos efetivos no tratamento das prototecoses, os estudos que compõem esta tese objetivaram demonstrar a formação de biofilme por 32 isolados de Prototheca spp. comparando diferentes condições de crescimento e de coloração, a fim de demonstrar o protocolo mais adequado para avaliar qualitativa e quantitativamente a produção de biofilme nestas algas. Adicionalmente, pesquisou-se novas alternativas para o tratamento destes agentes infecciosos, avaliando o potencial antimicrobiano e a toxicidade celular de uma molécula altamente solúvel de polipirrol através de testes in vitro e in vivo. Além disso, almejou-se desenvolver um protocolo terapêutico para tratamento de mastites causada por P. bovis (P. zopfii genótipo 2), em um protocolo experimental de infecção intramamária, em cabras, e empregando como tratamento uma molécula altamente solúvel de polipirrol (Ppy). A partir destes estudos, foi comprovada a capacidade de formar biofilme por isolados de Prototheca spp. oriundos de mastite bovina e foi demonstrado que condições de crescimento estático, incubação a 37°C/24 horas e coloração com azul algodão 0,05% foram mais adequadas para avaliar a formação e classificar os isolados quanto à capacidade de produzir biofilmes. Em adição, foi demonstrada a atividade algicida do Ppy frente a Prototheca spp. tanto in vitro como in vivo, bem como foi demonstrada a utilização de cabras como modelo experimental para a infecção intramamária por P. bovis. Os resultados obtidos reforçam Prototheca sp. como potente formador de biofilme e destacam o polipirrol como uma molécula promissora para o desenvolvimento de fármacos com a finalidade de tratamento da prototecose.

There is a considerable increase in the records of cases of mastitis caused by eukaryotic agents, such as fungi and algae. Algae of the genus Prototheca are unicellular, microscopic, achlorophyllous organisms that occur freely in nature, preferring moist places and with the presence of organic matter. Algae of the Prototheca genus are present all over the world, mainly in tropical and temperate areas. Prototheca spp. have been widely isolated from cattle in cases of clinical and subclinical mastitis. Furthermore, infections by the agent have been reported in dogs involving multiple tissues, especially in the gastrointestinal, ophthalmic, urinary or neurological form. Furthermore, in humans there is also an increase in the reports of infections, mainly related to immunocompromised patients. Mastitis is an important disease, from a hygienic-sanitary as well as an economic point of view and, depending on the etiological agent involved, the severity of the infection can be increased in dairy herds. When Prototheca (P.) bovis (P. zopfii genotype 2) or P. blaschkeae are the causative agents of the disease, high-production dairy cows are the main animals affected, causing economic and health losses in these herds, including a decrease in quality and quantity of milk produced, resulting in the disposal of infected animals. The treatment of affected animals is usually not effective, due to resistance to antibacterial and antifungal agents commonly used in Veterinary Medicine. Additionally, the biofilm-forming ability of Prototheca spp. facilitates its transmission between animals and hinders its elimination from environments and injuries. Due to the difficulty of treatment and the absence of effective drugs in the treatment of protothecoses, the studies that make up this thesis aimed to demonstrate the formation of biofilms by 32 isolates of Prototheca spp. comparing different growth and staining conditions in order to demonstrate the most appropriate protocol to qualitatively and quantitatively assess biofilm production in these algae. Additionally, new alternatives for the treatment of these infectious agents were researched, evaluating the antimicrobial potential and cellular toxicity of a highly soluble polypyrrole molecule through in vitro and in vivo tests. Furthermore, the aim was to develop a therapeutic protocol for the treatment of mastitis caused by P. bovis (P. zopfii genotype 2), in an experimental protocol of intramammary infection in goats, and using a highly soluble polypyrrole molecule (Ppy) as a treatment. From these studies, the ability to form biofilms by isolates of Prototheca spp. from bovine mastitis and it was demonstrated that conditions of static growth, incubation at 37°C/24 hours and staining with 0.05% cotton blue were more adequate to evaluate the formation and classify the isolates in terms of their ability to produce biofilms. In addition, the algaecide activity of Ppy against Prototheca spp. both in vitro and in vivo, as well as the use of goats as an experimental model for intramammary infection by P. bovis has been demonstrated. The results obtained reinforce Prototheca sp. as a potent biofilm former and highlight polypyrrole as a promising molecule for the development of drugs for the treatment of protothecosis.

Avaliação de meios de cultura cromogênicos para identificação rápida de microrganismos causadores de mastite bovina

Este estudo objetivou avaliar o desempenho diagnóstico (especificidade, Sp; sensibilidade, Se; acurácia, Ac; valor preditivo positivo, VPP; valor preditivo negativo, VPN; e coeficiente de concordância kappa de Cohen, k) de meios de cultura cromogênicos para identificação rápida de microrganismos causadores de mastite clínica (MC) e subclínica (MSC). Para tanto, dois experimentos foram realizados: 1) Avaliação de biplaca de meios de cultura cromogênicos para identificação rápida de microrganismos causadores de mastite; 2) Avaliação de triplaca de meios de cultura cromogênicos para identificação rápida de microrganismos causadores de mastite. Em ambos estudos (1 e 2), a identificação de microrganismos com o uso de meios cromogênicos baseou-se na leitura visual da coloração das colônias microbianas após 18 a 24 h de incubação. Para avaliação da Ac, Se, Sp, VPP, VPN e k dos meios cromogênicos a identificação dos microrganismos por espectrometria de massas (MALDI-TOF) foi considerada a metodologia padrão. No experimento 1, foram avaliadas 514 amostras de leite coletadas de vacas com MC e 667 de MSC, as quais foram inoculadas em dois meios de cultura cromogênicos seletivos para bactérias Gram-positivas e outro para Gram-negativas (CHROMagar, França). No experimento 2 foram avaliadas 500 amostras de leite de vacas com MC e 500 de vacas com MSC, as quais foram inoculadas em três meios de cultura cromogênicos, seletivos para Streptococcus, Staphylococcus e bactérias Gram-negativas (CHROMagar, França). No experimento 1, do total de amostras de MC, houve crescimento de microrganismos em pelo menos um dos meios de cultura, sendo 33,5% (175/514) no meio GP e 27,2% (140/514) no GN. O uso de biplacas com os meios de cultura GP/GN apresentou Ac que variou de 93% (Strep. agalactiae/dysgalactiae; Strep. uberis) a 96% (Prototheca spp./levedura). Com relação às amostras de MSC, houve crescimento de microrganismos em pelo menos um dos meios de cultura, sendo 31,8% (212/667) no meio GP e 4,3% (29/667) no GN. No experimento 2, do total de amostras de MC, houve crescimento de microrganismos em 5% (25/500) no meio seletivo para Streptococcus, 21,4% (107/500) no meio seletivo para Staphylococcus e 23% (115/500) para o meio GN. O uso da triplaca em amostras de MC com os meios cromogênicos apresentou Ac que variou de 94% (Strep. agalactiae/dysgalactiae) a 100% (Pseudomonas spp.; Prototheca spp./levedura). Para as amostras de MSC, houve crescimento de microrganismos em 32,6% (163/500) no meio seletivo para Streptococcus, 45% (225/500) no meio seletivo para Staphylococcus e 34,5% (17/500) para o meio GN. O uso da triplaca com os meios de cultura cromogênicos em amostras de MSC, apresentou Ac que variou de 87% (Staphylococcus não-aureus) a 100% (Escherichia coli; Pseudomonas spp.). O uso da dos métodos de biplaca e da triplaca de meios de cultura cromogênicos apresentaram alta acurácia (Ac >85%) para os diagnósticos dos principais microrganismos causadores de mastite, o que indica que podem ser utilizados em sistemas de cultura na fazenda, com base na visualização de coloração de colônias dos principais patógenos causadores de mastite.

This study aimed to evaluate the diagnostic performance (specificity, Sp; sensitivity; Se; accuracy, Ac; positive predictive value, PPV; negative predictive value, VPN; and Cohen's kappa coefficient of agreement, k) for chromogenic culture media for rapid identification of microorganisms that cause clinical (MC) and subclinical (MSC) mastitis. For this, two experiments were carried out: 1) Evaluation of biplate of chromogenic culture media for rapid identification of mastitis-causing microorganisms; 2) Evaluation of tri-plate of chromogenic culture media for rapid identification of mastitis-causing microorganisms. In both studies (1 and 2), the identification of microorganisms using chromogenic media was based on the visual reading of the color of the microbial colonies after 18 to 24 h of incubation. For evaluation of Ac, Se, Sp, VPP, VPN and k of chromogenic media, the identification of microorganisms by mass spectrometry (MALDI-TOF) was considered the standard methodology. In experiment 1, 514 milk samples collected from cows with MC and 667 from MSC were inoculated in two culture media selective for Gram-positive bacteria and another for Gram-negative (CHROMagar, France). In experiment 2, 500 milk samples from cows with MC and 500 from cows with MSC were inoculated in three chromogenic culture media, selective for Streptococcus, Staphylococcus and Gram-negative bacteria (CHROMagar, France). In experiment 1, of the total of MC samples, there was growth of microorganisms in at least one of the culture medium in 33.5% (175/514) in the GP medium and 27.2% (140/514) in GN. The use of biplates with GP / GN media showed Ac that ranged from 93% (Strep. agalactiae/dysgalactiae; Strep. uberis) to 96% (Prototheca spp./yeast). Regarding the MSC samples, there was growth of microorganisms in at least one of the culture media in 31.8% (212/667) in the GP medium and 4.3% (29/667) in GN. In experiment 2, of the total of MC samples, there was growth of microorganisms in 5% (25/500) in the selective medium for Streptococcus, 21.4% (107/500) in the selective medium for Staphylococcus and 23% (115 / 500) for the GN medium. When used for CM samples tri-plates with chromogenic media showed Ac raging from 94% (Strep. agalactiae/dysgalactiae) to 100% (Pseudomonas spp.; Prototheca spp./ yeast). For the MSC samples, there was growth of microorganisms in 32.6% (163/500) in the selective medium for Streptococcus, 45% (225/500) in the selective medium for Staphylococcus and 34.5% (17/500) for the GN medium. The use of the tri-plate with the chromogenic media in samples of MSC, showed Ab that varied from 87% (Staphylococcus non-aureus) to 100% (Escherichia coli; Pseudomonas spp.). The use of the bi-plate and tri-plate methods of chromogenic culture media showed high accuracy (Ac> 85%) for the diagnosis of the main mastitis causing microorganisms, which indicates that they can be used in farm culture systems, based on the visualization of colony staining of the main pathogens causing mastitis.

Etiology, antimicrobial susceptibility profile of Staphylococcus spp. and risk factors associated with bovine mastitis in the states of Bahia and Pernambuco / Etiologia, perfil de sensibilidade dos Staphylococcus spp. aos antimicrobianos e fatores de risco associados à mastite bovina nos estados da Bahia e Pernambuco

The purpose of this paper was to study the etiology of mastitis, determine the antimicrobial susceptibility profile of Staphylococcus spp. and to identify the risk factors associated with infection in dairy cows in the states of Bahia and Pernambuco, Brazil. From the 2,064 milk samples analyzed, 2.6% were associated with cases of clinical mastitis and 28.2% with subclinical mastitis. In the microbiological culture, Staphylococcus spp. (49.1%) and Corynebacterium spp. (35.3%) were the main agents found, followed by Prototheca spp. (4.6%) and Gram negative bacilli (3.6%). In the antimicrobial susceptibility testing, all 218 Staphylococcus spp. were susceptible to rifampicin and the least effective drug was amoxicillin (32.6%). Multidrug resistance to three or more drugs was observed in 65.6% of Staphylococcus spp. The risk factors identified for mastitis were the extensive production system, not providing feed supplements, teat drying process, not disinfecting the teats before and after milking, and inadequate hygiene habits of the milking workers. The presence of multiresistant isolates in bovine milk demonstrates the importance of the choice and appropriate use of antimicrobial agents. Prophylactic and control measures, including teat antisepsis and best practices for achieving hygienic milking should be established in order to prevent new cases of the disease in herds.(AU)

Objetivou-se estudar a etiologia da mastite, determinar o perfil de sensibilidade dos Staphylococcus spp. aos antimicrobianos e identificar os fatores de risco associados à infecção em vacas leiteiras nos estados da Bahia e Pernambuco. Das 2.064 amostras de leite analisadas, 2,6% estavam associadas a casos de mastite clínica e 28,2% à mastite subclínica. No exame microbiológico, Staphylococcus spp. (49,1%) e Corynebacterium spp. (35,3%) foram os principais agentes isolados, seguidos de Prototheca spp. (4,6%) e bacilos Gram negativos (3,6%). No teste de sensibilidade aos antimicrobianos, todos os 218 Staphylococcus spp. apresentaram-se sensíveis à rifampicina e a droga menos eficaz foi a amoxicilina (32,6%). A resistência simultânea a três ou mais drogas foi observada em 65,6% dos Staphylococcus spp. Os fatores de risco identificados para a mastite foram o sistema de criação extensivo, não realização de suplementação alimentar, processo de secagem dos tetos, não realização de desinfecção dos tetos antes e após a ordenha e hábitos higiênicos inadequados dos ordenhadores. A presença de isolados multirresistentes no leite bovino demonstra a importância da escolha e da utilização adequada de antimicrobianos. Medidas de controle e profilaxia, incluindo a antissepsia dos tetos e boas práticas para a obtenção de ordenha higiênica devem ser estabelecidas, com o intuito de prevenir novos casos da doença nos rebanhos.(AU)

Perfil etiológico e molecular de patógenos causadores de mastite clínica, e uso de antimicrobianos em rebanhos leiteiros

Os objetivos gerais desta tese foram: (i) determinar o perfil etiológico e molecular da mastite clínica (MC) em 20 rebanhos leiteiros do Sudeste do Brasil; e, (ii) quantificar os antimicrobianos usados para tratamento da MC na população estudada. Para alcançar esses objetivos, quatro estudos foram realizados. No Estudo 1, foi caracterizada a frequência de patógenos causadores de MC e a gravidade das infecções nos rebanhos leiteiros. Além disso, foi determinada a taxa de incidência de mastite clínica (TIMC) e sua associação com as seguintes variáveis em nível de rebanho: contagem de células somáticas em leite de tanque (CCSLT), contagem bacteriana total em leite de tanque (CBTLT), tamanho (número de vacas em lactação), produção de leite, sistema de alojamento e estação do ano. A associação entre as variáveis em nível de rebanho e a TIMC foi determinada por dois grupos de modelos de regressão logística multivariada: um baseado na TIMC geral, e cinco baseados nos seguintes grupos específicos de patógenos: contagiosos, outros Gram-positivos, Gram-negativos, outros patógenos (composto de leveduras e Prototheca spp.), e cultura negativa. Um total de 5.957 casos de MC em nível de quarto mamário foi registrado e os patógenos mais prevalentes foram Escherichia coli (6,6% de todas as culturas), Streptococcus uberis (6,1%), e Streptococcus agalactiae (5,9%). A maioria dos casos de MC foi de gravidade leve (60,3%), enquanto 34,1% dos casos foram moderados e 5,6% foram graves. A TIMC geral foi de 9,7 casos por 10.000 quartos-dia em risco (QDR), e o único parâmetro em nível de rebanho associado com a TIMC geral foi a CCSLT, em que a TIMC mais alta foi observada em rebanhos com CCSLT >600.000 × 10 3 células/mL. Nos modelos que avaliaram os grupos específicos de patógenos, a TIMC de patógenos contagiosos foi associada com a CCSLT, produção de leite e sistema de alojamento. Na avaliação de outros patógenos Gram-positivos, a TIMC foi maior na estação chuvosa de 2015 em comparação com as outras categorias referentes à estação do ano. Adicionalmente, para o modelo avaliando o grupo de patógenos Gram-negativos, a TIMC foi mais alta em rebanhos com CBTLT >30.000 × 10 3 ufc/mL. O Estudo 2 teve como objetivo caracterizar o perfil de tratamento e o consumo de antimicrobianos em rebanhos leiteiros; e determinar a associação de uso de antimicrobianos (UAM) e as mesmas variáveis em nível de rebanho descritas no Estudo 1. Dados sobre as práticas terapêuticas e UAM foram obtidos de 19 rebanhos leiteiros durante um período de 12 meses por rebanho. A frequência de UAM para tratamento da MC foi quantificada mensalmente em unidades de doses definidas diárias (DDD) e expressa como incidência de tratamento antimicrobiano (ITA: número de DDD por 1.000 vacas em lactação-dia). A média de ITA mensal foi de 17,7 DDD por 1.000 vacas em lactação- dia (15,4 para compostos intramamários, e 2,2 para compostos sistêmicos). Entre os produtos intramamários, os aminoglicosídeos tiveram a ITA mais alta (11,7 DDD por 1.000 vacas em lactação-dia), enquanto que para os compostos administrados pela via sistêmica, as fluoroquinolonas (4,2 DDD por 1.000 vacas em lactação-dia) foram os antimicrobianos mais frequentemente usados. O tamanho do rebanho e CCSLT foram positivamente associados com a ITA. Além disso, a ITA foi mais alta em rebanhos com freestall do que em rebanhos com sistema tipo compost barn. No Estudo 3, determinou-se a filogenia de cepas de E. coli isoladas de casos de MC em vacas leiteiras, e a associação dos filogrupos mais frequentes com a susceptibilidade aos antimicrobianos. Um total de 100 isolados de E. coli identificados nos casos de MC descritos no Estudo 1 foram categorizados de acordo com os grupos filogenéticos por meio de um método de PCR quadruplex; o perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos também foi avaliado. A maioria dos isolados pertenceram ao grupo A (52%), seguido dos grupos B1 (38%), B2 (2%), C (4%), D (3%), e E (1%). Foram encontrados isolados resistentes para todos os antimicrobianos avaliados. De forma geral, mais de 96% dos isolados de E. coli foram resistentes a ampicilina, e mais de 23% foram resistentes a cefalotina, sulfadimetoxina ou tetraciclina. Altos níveis de resistência (>70%) foram encontrados também para eritromicina, oxacilina, penicilina e penicilina associada a novobiocina. Ao contrário, foi observado alta susceptibilidade ao ceftiofur (96.8%) entre os isolados de E. coli. Diferenças na susceptibilidade entre os grupos filogenéticos foi observada apenas para a cefalotina, em que os isolados de E. coli pertencentes ao filogrupo A foram inibidos em concentrações de antimicrobianas mais baixas que isolados pertencentes ao filogrupo B1. No Estudo 4, avaliou- se a diversidade genotípica entre isolados de Strep. agalactiae e Strep. uberis identificados em casos de MC em vacas leiteiras; adicionalmente, o estudo avaliou a associação dos genótipos agrupados de acordo com a similaridade genética com o perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos. Os isolados foram genotipados por meio do método de amplificação randômica de DNA polimórfico (RAPD). Grande diversidade genotípica foi observada tanto para o Strep. agalactiae (45 subtipos de 89 isolados) quanto para Strep. uberis (56 subtipos de 89 isolados). Para a avaliação de susceptibilidade aos antimicrobianos, os subtipos de Strep. agalactiae foram agrupados em três clusters (Ia, Ib e II), enquanto que os subtipos de Strep. uberis foram agrupados em dois clusters (I e II) de acordo com a similaridade genética. De forma geral, os isolados de Strep. agalactiae apresentaram alta susceptibilidade à maioria dos antimicrobianos, exceto para tetraciclina e eritromicina. Diferenças na susceptibilidade aos antimicrobianos entre os clusters de Strep. agalactiae foram observadas para ampicilina, ceftiofur, eritromicina, pirlimicina, sulfadimetoxina e tetraciclina. Por outro lado, os isolados de Strep. uberis foram resistentes à maioria dos antimicrobianos, exceto para cefalotina e penicilina + novobiocina. Não foram encontradas diferenças entre os clusters para todos os antimicrobianos na análise de Strep. uberis. Em conclusão, os resultados desta tese indicaram alta TIMC nos rebanhos avaliados, e apesar de os patógenos ambientais serem a causa mais comum de MC nestes rebanhos, patógenos contagiosos como Strep. agalactiae e Staph. aureus, ainda são uma preocupação em alguns rebanhos do Brasil. Além disso, observaram-se altas frequências de UAM e de terapias não recomendadas em bula entre os rebanhos avaliados. O uso não judicioso de antimicrobianos pode se tornar um fator de risco para o desenvolvimento da resistência bacteriana aos antimicrobianos, o que foi inclusive observado para isolados pertencentes as três espécies bacterianas mais prevalentes nos casos de MC no nosso estudo (E. coli, Strep. agalactiae e Strep. uberis). Finalmente, pelo fato de algumas variáveis em nível de rebanho terem sido associadas com a TIMC e com o UAM em nosso estudo, é possível que hajam oportunidades para implementação de estratégias de manejo com o objetivo de melhorar o controle da MC em rebanhos leiteiros do sudeste do Brasil.

The general objectives of this thesis were: (i) to determine the etiological and molecular profile of clinical mastitis (CM) in 20 dairy herds of Southeast, Brazil; and (ii) to quantify antimicrobial used for treatment of CM in the study population. To achieve this goals, four studies were performed. In the Study 1, we characterized the pathogen frequency and severity of CM in dairy herds. In addition, we determined the incidence rate of clinical mastitis (IRCM) and its association with the following herd-level descriptors: bulk milk somatic cell count (BMSCC), bulk milk total bacterial count (BMTBC), herd size (number of lactating cows), milk yield, housing system and season. The association between herd-level descriptors and IRCM were determined by two groups of mixed regression models: one based on the overall IRCM, and five based on the following specific-pathogen groups: contagious, other Gram-positive, Gram- negative, other (composed of yeast and Prototheca spp), and negative culture. A total of 5,957 quarter-cases of CM were recorded and the most frequently isolated pathogens were Escherichia coli (6.6% of total cultures), Streptococcus uberis (6.1%), and Streptococcus agalactiae (5.9%). The majority of CM cases were mild (60.3%), while 34.1% were moderate and 5.6% severe. Overall, the IRCM was 9.7 quarter-cases per 10,000 quarter-days at risk (QDAR), and the only herd-level parameter associated with overall IRCM was BMSCC, in which the highest IRCM was observed for herds with BMSCC >600.000 × 10 3 cells/mL. In the models evaluating the specific-pathogen groups, IRCM with isolation of major contagious pathogens was associated with BMSCC, milk yield and housing system. For the evaluation of other Gram-positive pathogens, the IRCM was higher in the rainy season of 2015 in comparison with the other seasonal categories. In addition, for the model evaluating the Gram-negative group, the IRCM was highest in herds with BMTBC >30 × 10 3 cfu/mL. The Study 2 aimed to characterize the treatment profile and quantify the antimicrobial consumption for treatment of CM in dairy herds; and to determine the association of antimicrobial use (AMU) and the same herd-level descriptors as described in the Study 1. Data on treatment practices and AMU were obtained from 19 dairy herds for a period of 12 months per herd. The AMU for treatment of CM was quantified monthly in units of defined daily dose (DDD) and expressed as antimicrobial treatment incidence (ATI; number of DDD per 1,000 lactating cows-day). The overall monthly mean ATI was 17.7 DDD per 1,000 lactating cow-days (15.4 for intramammary compounds, and 2.2 for systemically administered antimicrobials). Among intramammary drugs, aminoglycosides had the highest ATI (11.7 DDD per 1,000 lactating cow-days), while for systemically administrated antimicrobials, fluoroquinolones (4.2 DDD per 1,000 lactating cow-days) were the most frequently used antimicrobials. Herd size and BMSCC were positively associated with ATI. In addition, herd-level ATI was higher in freestall herds than in compost bedded-pack barns. In the Study 3, we determined the phylogeny of E. coli strains isolated from CM in dairy cows and the association of most frequent phylogroups with antimicrobial susceptibility. A total of 100 E. coli isolates recovered from CM cases described in the Study 1 were categorized according to their phylogenetic group using a quadruplex PCR method; antimicrobial susceptibility pattern was also evaluated. Most isolates were assigned to phylogenetic group A (52%), followed by B1 (38%), B2 (2%), C (4%), D (3%), and E (1%). Resistant isolates were observed for all evaluated antimicrobials. Overall, more than 96% of E. coli isolates were resistant to ampicillin, and more than 23% were resistant to cephalothin, sulphadimethoxine or tetracycline. High levels of resistance (>70%) were also found to erythromycin, oxacillin, penicillin, penicillin associated with novobiocin, and pirlimycin. In contrary, high susceptibility was observed to ceftiofur (96.8%) among E. coli isolates. Difference in the antimicrobial susceptibility among phylogenetic groups was observed only for cephalothin, in which E. coli strains belonging to the phylogroup A were inhibited at lower antimicrobial concentrations than strains assigned to the phylogroup B1. In Study 4, we evaluated the genotypic diversity among Strep. agalactiae and Strep. uberis isolates recovered from CM in dairy cows; in addition, the study evaluated the association of genotypes clustered by genetic similarity with antimicrobial susceptibility pattern. Isolates were subtyped using randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) analysis. A great genotypic diversity was found for both Strep. agalactiae (45 subtypes out of 89 isolates) and Strep. uberis (56 subtypes out of 88 isolates). For evaluation of antimicrobial susceptibility, subtypes of Strep. agalactiae were clustered into three groups (Ia, Ib and II), while Strep. uberis subtypes were clustered into two groups (I and II) according to their genetic similarity. Overall, Strep. agalactiae isolates showed high susceptibility to most antimicrobials, except to tetracycline and erythromycin. Differences in the antimicrobial susceptibility among clusters of Strep. agalactiae were observed for ampicillin, ceftiofur, erythromycin, pirlimycin, sulphadimethoxine and tetracycline. In contrary, Strep. uberis isolates were categorized as resistant to most antimicrobials, except to cephalothin and penicillin+novobiocin. No differences were observed among clusters for all antimicrobials in the analysis of Strep. uberis. In conclusion, the results of this thesis indicated a high IRCM in the evaluated herds, and although environmental pathogens were the most common cause of CM in these herds, contagious pathogens such as Strep. agalactiae and Staph. aureus, are still a concern in some dairy herds of Brazil. Furthermore, high frequencies of AMU and off-label protocols were observed among the evaluated herds. The non-judicious use of antimicrobials can become a risk factor for the development of antimicrobial resistance, which was even observed for isolates belonging to the three most prevalent bacterial species identified from CM cases in our study (E. coli, Strep. agalactiae and Strep. uberis). Finally, because there were some herd-level descriptors associated with the IRCM and AMU in our study, there may be opportunity for management strategies aiming to improve the control of CM in dairy herds of southeastern Brazil.

Prototecose: uma doença emergente / Protothecosis: an emergent disease

Prototecose, causada por Prototheca zopfii ou P. wickerhamii, é uma doença emergente em animais e humanos. Em bovinos, P. zopfii é uma importante causa de mastite ambiental. Em cães e gatos, a prototecose é causada principalmente por P. zopfii. Em cães, causa infecção cutânea ou uma forma sistêmica envolvendo diversos órgãos. Em gatos, predominam as lesões tegumentares na região da face e plano nasal. No homem, a prototecose, causada principalmente por P. wickerhamii, manifesta-se sob três formas: cutânea, articular com bursite do olécrano e sistêmica. Pode ocorrer em indivíduos imunocompetentes, os quais podem apresentar bursite e/ou infecções cutâneas localizadas, ou em indivíduos imunossuprimidos, nos quais a enfermidade pode ser disseminada e/ou com envolvimento visceral. A prototecose causada por P. wickerhamii foi descrita recentemente em caprinos como causa de rinite afetando o vestíbulo nasal, união mucocutânea, pele da face e orelha. Nesta revisão são abordadas as características microbiologias e susceptibilidade a antimicrobianos do agente, e a epidemiologia, sinais clínicos, patologia, diagnóstico, tratamento e controle da prototecose em animais domésticos e no homem.(AU)

Protothecosis, caused by Prototheca zopfii or P. wickerhamii, is an emergent disease of human and animals. In cattle, P. zopfii is an important cause of environmental mastitis. In dogs and cats protothecosis is caused mainly by P. zopfii, causing cutaneous infections or a systemic form affecting many organs in dogs, and cutaneous infection affecting mainly the skin of the face and nose in cats. In humans, protothecosis, caused mainly by P. wickerhamii, occurs in three forms: cutaneous; olecran bursitis; and disseminated. The lesion is usually localized in the site of inoculation in immunocompetent individuals; however, in immunocompromised patients, it can become widespread. Protothecosis caused by P. wickerhamii was recently reported in goats causing rhinitis and dermatitis of the face and pinna. This paper reviews microbiologic characteristics and susceptibility to antimicrobials of Prototheca spp., and the epidemiology, clinical signs, pathology, diagnosis, treatment and control of protothecosis.(AU)

Systemic canine protothecosis

Protothecosis is a rare disease caused by achlorophyllic algae of the genus Prototheca. This case involved a 5 year-old intact female Cocker Spaniel, with a history of mild and persistent diarrhea that was not responsive to treatment. Clinical signs progressed to watery and bloody diarrhea followed by development of ocular signs, including complete and bilateral retinal displacement, glaucoma, synechia, and blindness. At necropsy, lesions observed consisted of necro-hemorrhagic enteritis, and multiple white nodular lesions in the heart, pancreas, kidneys, and thyroid gland. Microscopically, the nodular lesions were characterized by a chronic histiocytic inflammatory infiltrate associated with a severe accumulation of organisms with morphology and histochemical features compatible with Prototheca sp.

Fatores de risco associados à mastite bovina causada por Prototheca zopfii / Risk factors associated with bovine mastitis caused by Prototheca zopfii

Este trabalho teve como objetivo o estudo de fatores de risco associados à mastite bovina causada por Prototheca zopfii. Foram analisadas 13 propriedades leiteiras dos Estados do Paraná e de São Paulo, segundo os seguintes critérios de seleção: confirmação prévia de casos de mastite por Prototheca spp., triagem pela pesquisa de Prototheca spp. em tanques de expansão e latões e rebanhos com contagem de células somáticas acima de 5x105cel mL-1. As amostras coletadas consistiram de: leite, água, solo, fezes e swab de teteiras. Prototheca spp. foi isolada de amostras de leite dos quartos mamários com mastite clínica ou subclínica em uma propriedade e de amostras de leite e do ambiente em quatro propriedades, nas quais foi isolada em amostras de: água de bebedouro, abastecimento, esgoto, empoçada no piso de estábulo e sala de ordenha, solo de piquete e pasto, teteiras, fezes de bezerros e suínos. Do total de 383 vacas examinadas, Prototheca spp. foi isolada em 20 (5,2 por cento) vacas, sendo caracterizada como P. zopfii em 18. Os fatores de risco associados à mastite causada por P. zopfii foram: criação das vacas a pasto, alimentação dos animais com pasto e silagem, realização de ordenha mecânica em estábulo, permanência das vacas após ordenha em piquete sem alimento, criação de suínos próxima às instalações dos bovinos, existência de cães, gatos e roedores, falta de higienização dos tetos com água, pré-imersão dos tetos em aplicador com retorno e sem a troca do anti-séptico, alimentação dos bezerros com leite de vacas com mastite clínica e serem as vacas da raça holandesa.(AU)

This research had as objective the study of risk factors associated with bovine mastitis caused by Prototheca zopfii. Thirteen dairy herds in Paraná and São Paulo states were analyzed and selected according to the following criteria: previous confirmation of Prototheca spp. mastitis cases, screening of Prototheca spp. in bulk tanks and milk cans, and herds with somatic cells count over 5x105cel mL-1. The samples collected consisted of: milk, water, soil, manure and swabs of teat cup rubbers. Prototheca spp. was isolated from mammary quarters with clinical and subclinical mastitis of milk samples in one herd and from the environment and cows in four herds. Out of 383 cows examined, Prototheca spp. was isolated in 20 (5.2 percent) cows with mastitis, and 18 of them were characterized as P. zopfii. In four herds when Prototheca spp. was identified from mammary quarters and environment the agent was isolated from the following samples: water in the waterers, puddled water in the stalls and the milking parlour, supply, sewage, cow pen and pasture soil, teat cup rubbers and manure from calves and swines. The risk factors associated with P. zopfii mastitis consisted of: pasture system, pasture and silage feeding, use of milking machine in stalls, cow pen without fresh feed after milking, raising of swines near bovine housing, existence of dogs, cats and rodents, absence of teats hygienization with water, use of pre-immersion devices with return and without change of antiseptic, calves fed with milk of clinical mastitis cases and the Holstein breed.(AU)

The use of successive milking as a procedure for the elimination of infection on due to Prototheca spp in cases of bovine clinical mastitis. (A case report) / Utilização de ordenhas sucessivas como procedimento para eliminação de infecção por prototheca spp de casos de mastite clínica bovina (relato de caso)

This work relates the case of two animals (Black and White Holstein) from a bovine milking herd, from north of Paraná State, in which mastitis due Prototheca spp was diagnosed. As a procedure for the infection elimination, it was opted for the use of successive milking performed six times daily, during eight days. The animals were followed up through mycological cultures from milk Samples after 15, 30 and 60 days from the beginning of the procedure. The clinical signs regressed after three days and the mycologicai cultures were negative after the 15th day.  

O presente trabalho relata um caso de dois animais HPB de um rebanho bovino leiteiro, da região norte do Estado do Paraná, dos quais diagnosticou-se mastite clínica por Prototheca spp. Como procedimento para eliminação da infecção optou-se peta utilização de ordenhas sucessivas praticadas seis vezes diariamente durante oito dias. Os animais foram acompanhados através de culturas micológicas das amostras de leite após 15, 30 e 60 dias do inicio do procedimento. Os sinais clínicos regrediram após três dias, e a partir do 15 dia as culturas foram negativas.  

Isolation of Prototheca spp. from cows with mastitis, bulk tanks milk and in the environment of the animals / Isolamento de Prototheca spp. de vacas com mastite, de leite de tanques de expansão e do ambiente dos animais

The dairy cattle mammary gland infections cause serious economic losses to dairy farmers due to the decrease in milk production, therapeutic procedures and culling of chronic infected animals. High incidence of mastitis in herds also alters both the composition and the quality of the milk. Mastitis pathogens can also cause infections and poisoning in humans. In the last years, emphasis has been given to intramammary infections caused by the genus Prototheca which, besides their zoonotic characteristics, are considered mastitis pathogens of persistent infection and are refractory to traditional therapeutic procedures. The objective of this work was the isolation and identification of Prototheca spp. from milk samples collected from bulk tanks and milk cans, cows presenting mastitis and the dairy herd environment. Milk samples were collected from 81 bulk tanks and milk cans of 81 dairy herds. Prototheca zopfii was identified in milk samples in 10 dairy herds. From these, eight dairy herds were studied regarding Prototheca spp. mastitis and environmental occurrence as well as the main mastitis bacterial agents. Bacteria, algae and yeasts were isolated from 324 milk samples from 197 cows. P. zopfii was isolated in three dairy herds from eleven milk samples from five cows with clinical and subclinical mastitis. In these dairy herds with positive isolation of P. zopfii the agent was

As infecções da glândula mamária de vacas leiteiras acarretam sérios prejuízos ao produtor pela diminuição da produção leiteira, tratamento e descarte de animais com infecções crônicas. Elevada incidência de mastite no rebanho também altera a composição e qualidade do leite. Agentes de mastite podem causar infecções ou intoxicações no homem. Nos últimos anos tem-se dado ênfase às infecções intramamárias por algas do gênero Prototheca, agentes de infecções persistentes e refratárias à terapêutica tradicional além do caráter zoonótico. Este trabalho teve como objetivo o isolamento e identificação de Prototheca spp. De amostras de leite coletadas em tanques de expansão e latões, de vacas com mastite e do ambiente dos animais. Foram coletadas 81 amostras de leite de tanques e latões de 81 propriedades. Prototheca zopfii foi identificada em amostras de tanques de 10 propriedades. Dessas propriedades foram estudadas oito quanto à ocorrência de Prototheca spp. no ambiente do rebanho e em casos de mastite, além da identificação dos principais agentes bacterianos causadores de mastite. Foram isoladas bactérias, algas e leveduras em 324 amostras de leite provenientes de 197 vacas. Em três propriedades foi isolada P. zopfii de onze amostras de leite obtidas de cinco vacas com mastite clínica e subclínica. Nestas propriedades o agente foi isolado do meio ambiente das vacas, fezes de bezerr

Systemic canine protothecosis

Protothecosis is a rare disease caused by achlorophyllic algae of the genus Prototheca. This case involved a 5 year-old intact female Cocker Spaniel, with a history of mild and persistent diarrhea that was not responsive to treatment. Clinical signs progressed to watery and bloody diarrhea followed by development of ocular signs, including complete and bilateral retinal displacement, glaucoma, synechia, and blindness. At necropsy, lesions observed consisted of necro-hemorrhagic enteritis, and multiple white nodular lesions in the heart, pancreas, kidneys, and thyroid gland. Microscopically, the nodular lesions were characterized by a chronic histiocytic inflammatory infiltrate associated with a severe accumulation of organisms with morphology and histochemical features compatible with Prototheca sp.

The use of successive milking as a procedure for the elimination of infection on due to Prototheca spp in cases of bovine clinical mastitis. (A case report) / Utilização de ordenhas sucessivas como procedimento para eliminação de infecção por prototheca spp de casos de mastite clínica bovina (relato de caso)

This work relates the case of two animals (Black and White Holstein) from a bovine milking herd, from north of Paraná State, in which mastitis due Prototheca spp was diagnosed. As a procedure for the infection elimination, it was opted for the use of successive milking performed six times daily, during eight days. The animals were followed up through mycological cultures from milk Samples after 15, 30 and 60 days from the beginning of the procedure. The clinical signs regressed after three days and the mycologicai cultures were negative after the 15th day.

O presente trabalho relata um caso de dois animais HPB de um rebanho bovino leiteiro, da região norte do Estado do Paraná, dos quais diagnosticou-se mastite clínica por Prototheca spp. Como procedimento para eliminação da infecção optou-se peta utilização de ordenhas sucessivas praticadas seis vezes diariamente durante oito dias. Os animais foram acompanhados através de culturas micológicas das amostras de leite após 15, 30 e 60 dias do inicio do procedimento. Os sinais clínicos regrediram após três dias, e a partir do 15° dia as culturas foram negativas.

QUALIDADE MICROBIOLÓGICA DA ÁGUA DE PISCINAS DE CLUBE ESPORTIVO DE BOTUCATU- SP, BRASIL

O objetivo deste estudo foi determinar a qualidade microbiológica da água de piscinas, aquecida e sem aquecimento, de clube esportivo localizado na cidade de Botucatu, incluindo-se a pesquisa de Prototheca spp e Mycobacterium spp. Foram colhidas 26 amostras de água, sendo 13 de piscinas aquecidas e 13 de sem aquecimento, de clube esportivo de Botucatu. Para a determinação do número mais provável de coliformes totais e fecais realizou-se a técnica de fermentação em tubos múltiplos. O isolamento de microrganismos foi obtido em meios de cultura específicos. 100% das amostras provenientes de piscina aquecida e 38,5% das não-aquecidas estavam contaminadas por coliformes totais, enquanto que para coliformes fecais verificou-se positividade em 54% e 15,4 amostras, respectivamente. No cultivo microbiológico, foram isoladas algumas enterobactérias, além de Staphylococcus spp e Streptococcus spp. Não se isolou Prototheca spp nem Mycobacterium spp. Evidenciando-se a importância da temperatura da água como fator de proliferação das enterobactérias, conclui-se pela necessidade de um constante monitoramento sanitário de águas recreacionais, a fim de se controlar os níveis de contaminação, reduzindo-se os riscos à saúde pública.

QUALIDADE MICROBIOLÓGICA DA ÁGUA DE PISCINAS DE CLUBE ESPORTIVO DE BOTUCATU- SP, BRASIL

O objetivo deste estudo foi determinar a qualidade microbiológica da água de piscinas, aquecida e sem aquecimento, de clube esportivo localizado na cidade de Botucatu, incluindo-se a pesquisa de Prototheca spp e Mycobacterium spp. Foram colhidas 26 amostras de água, sendo 13 de piscinas aquecidas e 13 de sem aquecimento, de clube esportivo de Botucatu. Para a determinação do número mais provável de coliformes totais e fecais realizou-se a técnica de fermentação em tubos múltiplos. O isolamento de microrganismos foi obtido em meios de cultura específicos. 100% das amostras provenientes de piscina aquecida e 38,5% das não-aquecidas estavam contaminadas por coliformes totais, enquanto que para coliformes fecais verificou-se positividade em 54% e 15,4 amostras, respectivamente. No cultivo microbiológico, foram isoladas algumas enterobactérias, além de Staphylococcus spp e Streptococcus spp. Não se isolou Prototheca spp nem Mycobacterium spp. Evidenciando-se a importância da temperatura da água como fator de proliferação das enterobactérias, conclui-se pela necessidade de um constante monitoramento sanitário de águas recreacionais, a fim de se controlar os níveis de contaminação, reduzindo-se os riscos à saúde pública.

PROTOTECOSE MAMÁRIA. UM PROBLEMA NOS REBANHOS LEITEIROS.

A mastite bovina é um grande entrave para a pecuária leiteira, pois ocasiona prejuízos sanitários, econômicos e também à saúde pública. Determina perdas na produção de leite, custos com mão-de-obra, honorários profissionais e medicamentos; além de morte ou descarte de animais; possibilidade de veiculação de patógenos causadores de toxi-infecções alimentares; e ainda redução do rendimento industrial para a fabricação de derivados lácteos. Quanto às causas infecciosas de mastites há que se considerar os micro-organismos contagiosos e ambientais, sendo que os primeiros normalmente são transmitidos para os animais durante o processo de ordenha; já os patógenos ambientais infectam os animais predominantemente após a ordenha, quando o esfíncter do teto permanece aberto. Inúmeros micro-organismos podem estar envolvidos na etiologia das mastites, como bactérias, fungos, leveduras e algas. Dentre as algas, destaca-se o gênero Prototheca spp., que determina mastite subclínica ou clínica, sob a forma de surtos, geralmente de curso crônico, que transcorre com elevação da contagem de células somáticas, alterações físico-químicas do leite, e acentuada diminuição da produção leiteira, podendo cessar abruptamente. A presente revisão tem por objetivo apresentar aspectos relacionados às mastites ocasionadas por algas aclorofiladas do gênero Prototheca, sua importância como patógeno envolvido nas

Prototecose mamária. um problema nos rebanhos leiteiros

A mastite bovina é um grande entrave para a pecuária leiteira, pois ocasiona prejuízos sanitários, econômicos e também à saúde pública. Determina perdas na produção de leite, custos com mão-de-obra, honorários profissionais e medicamentos; além de morte ou descarte de animais; possibilidade de veiculação de patógenos causadores de toxi-infecções alimentares; e ainda redução do rendimento industrial para a fabricação de derivados lácteos. Quanto às causas infecciosas de mastites há que se considerar os micro-organismos contagiosos e ambientais, sendo que os primeiros normalmente são transmitidos para os animais durante o processo de ordenha; já os patógenos ambientais infectam os animais predominantemente após a ordenha, quando o esfíncter do teto permanece aberto. Inúmeros micro-organismos podem estar envolvidos na etiologia das mastites, como bactérias, fungos, leveduras e algas. Dentre as algas, destaca-se o gênero Prototheca spp., que determina mastite subclínica ou clínica, sob a forma de surtos, geralmente de curso crônico, que transcorre com elevação da contagem de células somáticas, alterações físico-químicas do leite, e acentuada diminuição da produção leiteira, podendo cessar abruptamente. A presente revisão tem por objetivo apresentar aspectos relacionados às mastites ocasionadas por algas aclorofiladas do gênero Prototheca, sua importância como patógeno envolvido nas

Comparação entre a quantidade de unidades formadoras de colônias de microrganismos e a contagem de células somáticas em amostras de leite provenientes de glândulas mamárias de bovinos com infecção intramamária / Comparison between the colonies forming units and somatic cell counts in milk samples from bovine infected mammary glands

Os processos inflamatórios na glândula mamária são especialmente freqüentes e importantes em bovinos leiteiros, sendo responsáveis por grandes prejuízos à pecuária leiteira. A mastite infecciosa é a mais importante doença sob o ponto de vista econômico e de saúde pública. A contagem de unidades formadoras de colônias por mililitro (UFC/mL) de leite proveniente diretamente de uma glândula mamária permitiria avaliar o comportamento de cada um dos agentes etiológicos da mastite infecciosa. A comparação desta informação com a contagem de células somáticas (CCS/mL) na amostra de leite permitiria uma avaliação mais acurada do processo infeccioso e inflamatório na glândula mamária. O presente trabalho teve como objetivos: avaliar o \"status\" microbiológico de amostras de leite de vacas em lactação que apresentaram mastite e comparar a quantidade de UFC/mL de colônias dos diferentes microrganismos com as respectivas CCS/mL, levando em consideração a diferenciação de células polimorfonucleares (PMN/mL) e mononucleares (MN/mL) nas amostras. Quinhentas e seis amostras de 15 propriedades de exploração leiteira do Estado de São Paulo, Brasil, foram submetidas aos testes de Tamis e California Mastitis Test (CMT), e realizados os exames microbiológicos, contagem de UFC/mL e CCS/mL. Destas, 112 não apresentaram crescimento de microrganismos, e das amostras com crescimento foram isolados: 94 Corynebacterium spp., 104 Staphylococcus spp., 73 Streptococcus spp., 36 Prototheca zopfii, 08 Candida spp., 02 Nocardia spp. e 77 associações entre os microrganismos. Houve correlação entre o número de UFC/mL com a CCS/mL, assim como entre PMN/mL e entre MN/mL. Concluiu-se que existe um aumento da CCS/mL, PMN/mL e MN/mL no leite quando há um aumento das contagens de UFC/mL. As quantidades de UFC/mL no leite com isolamento de Streptococcus spp. foram maiores estatisticamente (P < 0,05) que as quantidades de UFC/mL com isolamento de Corynebacterium spp. e Staphylococcus spp. Concluiu-se também que, em havendo necessidade de tratamento de mastite clínica e subclínica no rebanho devido às altas contagens de UFC/mL, deve-se tratar inicialmente os quartos nos quais foram isolados Streptococcus spp. e deixar para uma segunda etapa ou para o processo de secagem o tratamento das mastites associadas à Staphylococcus coagulase-positivo, Staphylococcus coagulase-negativo e Corynebacterium spp. nessa mesma ordem

Mastitis is a complex pathologic condition which may have different etiology and consequences. Mastitis usually starts with the penetration of microorganisms through the teat canal towards mammary parenchyma and secretory cells, and an inflammatory response occurs due to the products of the microbial growth. The aim of this work was to evaluate the microbial status of milk samples collected from lactating cows with mastitis and comparing the colonies forming units (CFU)/mL and the somatic cell counts (SCC)/mL, taking into consideration the differentiation of polymorphonuclear (PMN/mL) and mononuclear (MN/mL) cells. From primiparous and pluriparous dairy cows, 506 milk samples were collected from 15 dairy farms located in the State of São Paulo, Southeastern Brazil. Samples were submitted to strip cup test and California Mastitis Test (CMT) and evaluated for CFU and SCC procedures. For microbial examinations, 112 (22.13%) samples were found negative and from the other 394, the following microorganisms were isolated: 94 (18.58%) Corynebacterium spp., 104 (20.55%) Staphylococcus spp., 73 (14.42%) Streptococcus spp., 36 (7.11%) Prototheca zopfii, 8 (1.60%) Candida spp., 2 (0.39%) Nocardia spp., and 77 (15.21%) associations among distinct microorganisms. Significant correlations were found between the CFU/mL and SCC/mL, and also with the PMN and MN cell countings. With the increased CFU/mL countings, it was observed the increase in SCC, PMN, and MN countings. The CFU/mL counts in samples with Streptococcus spp were statistically higher (P < 0.05) than the ones positive for Staphylococcus spp. and Corynebacterium spp. In case of treatments of mastitis, target must be primarily oriented to treat the mammarial glands showing clinical or subclinical mastitis with Streptococcus spp. showing high CFU/mL, and at the second stage, in case of treatment or drying the cows, therapy must be directed against coagulase-positive Staphylococcus, coagulase-negative Staphylococcus and Corynebacterium spp

MASTITE BOVINA CAUSADA POR Prototheca zopfii

A mastite bovina causada por Prototheca zopfii tem importância econômica, social e em saúde pública, por causar infecção persistente, refratária à terapêutica tradicional, reduzir significativamente a produção leiteira, além de ser considerada zoonose. Esta pesquisa teve por objetivo o isolamento de Prototheca spp. em leite de tanques de expansão, vacas com mastite e ambiente das vacas, assim como determinar os fatores predisponentes à mastite. Prototheca spp. foi isolada em 10/81 amostras compostas de tanque. Os fatores predisponentes foram à Prototheca spp. foram analisados em 13 propriedades leiteiras dos estados do Paraná e São Paulo. Foram examinadas 383 vacas da raça Holstein e mestiças, e coletadas amostras de água, solo, cama de confinamento, swabs dos insufladores, fezes de vacas, bezerros e de suínos. Prototheca spp. foi isolada em Meio de Enriquecimento para Prototheca spp. e agar Sabouraud. A identificação de P. zopfii baseou-se nos aspectos culturais, morfológicos e bioquímicos. Das 13 propriedades estudas foram isoladas Prototheca spp. em 10. Em oito o agente foi isolado em amostras de leite dos tanques de expansão, mas somente em três foi confirmada em vacas e no ambiente. Do total de 383 vacas examinadas Prototheca spp. foi isolada em 20 (5,2%) vacas com mastite, sendo 18 caracterizadas como P. zopfii. Em quatro propriedades. Prototheca spp. foi isolada da água de bebedouro, abastecimento, servida e empoçada em estábulo e em sala de ordenha, de amostra de solo de piquete e pasto, em amostras de teteiras, e amostras de fezes de bezerros e suínos. P. zopfii foi identificada em amostras de solo de piquete, teteiras e fezes de bezerros e de suínos. Pela análise uni-variada os fatores predisponentes associados à mastite por P. zopfii foram: criação a pasto, alimentação com pasto e silagem, ordenha mecânica em estábulo, permanência das vacas após a ordenha em mangueira sem alimento, criação de suínos próxima às instalações dos bovinos, presença de cães, gatos e roedores, armazenamento do leite em tanque de expansão e sanificação do equipamento com água quente, utilização de detergente alcalino e ácido, falta de higienização dos tetos com água, pré-imersão dos tetos em copinho com refluxo do anti-séptico, diagnóstico laboratorial e antibiograma, utilização de vacina contra mastite de origem bacteriana, bezerros alimentados com leite de vacas com mastite e a raça Holstein