Cloning, expression and antifungal effect of the recombinant chitinase from Streptomyces sampsonii KJ40 / Clonagem, expressão e efeito antifúngico da quitinase recombinante de Streptomyces sampsonii KJ40

ABSTRACT: Streptomyces sampsonii is a kind of biocontrol bacterium with antifungal effects, and chitinase is one of the main antifungal substances. To improve and further study the structure and function of the chitinase gene of S. sampsonii, we amplified the target fragment by PCR, ligated the fragment to the expression vector pET-32a, introduced the resulting plasmid into Escherichia coli BL21 (DE3) and induced expression of the chitinase. Then, the recombinant chitinase was purified by is-labelled protein micro purification kit. A chitinase gene, Sschi61, was cloned from the genome and expressed in a prokaryote. The antifungal effect of the recombinant protein was also studied. Finally, the chitinase gene Sschi61 with a length of 1755 bp was obtained, and the expression of the 82 kDa recombinant chitinase was induced in E. coli by IPTG. The recombinant chitinase could inhibit the black spot pathogen of Eucommia ulmoides (Pestalotiopsis trachicarpicola). After the hyphae of the pathogen of black spot of Eucommia ulmoides (Pestalotiopsis trachicarpicola) were soaked with recombinant chitinase, the hyphae cells expanded, broke, and dissolved.

RESUMO: Streptomyces sampsonii é uma espécie de bactéria de biocontrole com efeitos antifúngicos, sendo a quitinase uma das principais substâncias desse tipo. Para melhorar e estudar mais a estrutura e função do gene da quitinase de S. sampsonii, amplificamos o fragmento alvo por PCR, ligamos o fragmento ao vetor de expressão pET-32a, introduzimos o plasmídeo resultante em Escherichia coli BL21 (DE3) e induzimos expressão da quitinase. Em seguida, a quitinase recombinante foi purificada pelo kit de micropurificação de proteína marcada. Um gene da quitinase, Sschi61, foi clonado do genoma e expresso em um procarioto. O efeito antifúngico da proteína recombinante também foi estudado. Finalmente, o gene da quitinase Sschi61 foi obtido, contando comprimento de 1755 pb, e a expressão da quitinase recombinante de 82 kDa foi induzida em E. coli por IPTG. A quitinase recombinante pode inibir o patógeno da mancha preta de Eucommia ulmoides (Pestalotiopsis trachicarpicola). Após as hifas do patógeno da mancha preta de Eucommia ulmoides (Pestalotiopsis trachicarpicola) serem embebidas com quitinase recombinante, as células das hifas se expandiram, quebraram e se dissolveram.

Cloning, expression and antifungal effect of the recombinant chitinase from Streptomyces sampsonii KJ4 / Clonagem, expressão e efeito antifúngico da quitinase recombinante de Streptomyces sampsonii KJ40

Streptomyces sampsonii is a kind of biocontrol bacterium with antifungal effects, and chitinase is one of the main antifungal substances. To improve and further study the structure and function of the chitinase gene of S. sampsonii, we amplified the target fragment by PCR, ligated the fragment to the expression vector pET-32a, introduced the resulting plasmid into Escherichia coli BL21 (DE3) and induced expression of the chitinase. Then, the recombinant chitinase was purified by is-labelled protein micro purification kit. A chitinase gene, Sschi61, was cloned from the genome and expressed in a prokaryote. The antifungal effect of the recombinant protein was also studied. Finally, the chitinase gene Sschi61 with a length of 1755 bp was obtained, and the expression of the 82 kDa recombinant chitinase was induced in E. coli by IPTG. The recombinant chitinase could inhibit the black spot pathogen of Eucommia ulmoides (Pestalotiopsis trachicarpicola). After the hyphae of the pathogen of black spot of Eucommia ulmoides (Pestalotiopsis trachicarpicola) were soaked with recombinant chitinase, the hyphae cells expanded, broke, and dissolved.

Streptomyces sampsonii é uma espécie de bactéria de biocontrole com efeitos antifúngicos, sendo a quitinase uma das principais substâncias desse tipo. Para melhorar e estudar mais a estrutura e função do gene da quitinase de S. sampsonii, amplificamos o fragmento alvo por PCR, ligamos o fragmento ao vetor de expressão pET-32a, introduzimos o plasmídeo resultante em Escherichia coli BL21 (DE3) e induzimos expressão da quitinase. Em seguida, a quitinase recombinante foi purificada pelo kit de micropurificação de proteína marcada. Um gene da quitinase, Sschi61, foi clonado do genoma e expresso em um procarioto. O efeito antifúngico da proteína recombinante também foi estudado. Finalmente, o gene da quitinase Sschi61 foi obtido, contando comprimento de 1755 pb, e a expressão da quitinase recombinante de 82 kDa foi induzida em E. coli por IPTG. A quitinase recombinante pode inibir o patógeno da mancha preta de Eucommia ulmoides (Pestalotiopsis trachicarpicola). Após as hifas do patógeno da mancha preta de Eucommia ulmoides (Pestalotiopsis trachicarpicola) serem embebidas com quitinase recombinante, as células das hifas se expandiram, quebraram e se dissolveram.

Extraction of chitin from edible crab shells of Callinectes sapidus and comparison with market purchased chitin / Extração de quitina de cascas de caranguejo comestíveis de Callinectes sapidus e comparação com quitina adquirida no mercado

Chitin and its derived products have immense economic value due to their vital role in various biological activities as well as biomedical and industrial application. Insects, microorganism and crustaceans are the main supply of chitin but the crustaceans shell like shrimp, krill, lobsters and crabs are the main commercial sources. Chitin content of an individual varies depending on the structures possessing the polymer and the species. In this study edible crabs’ shells (Callinectes sapidus) were demineralized and deproteinized resulting in 13.8% (dry weight) chitin recovery from chitin wastes. FTIR and XRD analyses of the experimental crude as well as purified chitins revealed that both were much comparable to the commercially purchased controls. The acid pretreatment ceded 54g of colloidal chitin that resulted in 1080% of the crude chitin. The colloidal chitin was exploited for isolation of eighty five chitinolytic bacterial isolates from different sources. Zone of clearance was displayed by the thirty five isolates (41.17%) succeeding their growth at pH 7 on colloidal chitin agar medium. Maximum chitinolytic activity i.e. 301.55 U/ml was exhibited by isolate JF70 when cultivated in extracted chitin containing both carbon and nitrogen. The study showed wastes of blue crabs can be utilized for extraction of chitin and isolation of chitinolytic bacteria that can be used to degrade chitin waste, resolve environmental pollution as well as industrial purpose.

A quitina e seus produtos derivados têm imenso valor econômico devido ao seu papel vital em várias atividades biológicas, bem como em aplicações biomédicas e industriais. Insetos, microrganismos e crustáceos são o principal suprimento de quitina, mas a casca dos crustáceos como camarão, krill, lagosta e caranguejo são as principais fontes comerciais. O conteúdo de quitina de um indivíduo varia dependendo das estruturas que possuem o polímero e da espécie. Neste estudo, as cascas de caranguejos comestíveis (Callinectes sapidus) foram desmineralizadas e desproteinizadas, resultando em 13,8% (peso seco) de recuperação de quitina a partir de resíduos de quitina. As análises de FTIR e XRD do bruto experimental, bem como das quitinas purificadas, revelaram que ambas eram muito comparáveis aos controles adquiridos comercialmente. O pré-tratamento com ácido cedeu 54 g de quitina coloidal que resultou em 1.080% da quitina bruta. A quitina coloidal foi analisada para isolamento de 85 isolados bacterianos quitinolíticos de diferentes fontes. A zona de eliminação foi exibida pelos 35 isolados (41,17%) que sucederam seu crescimento a pH 7 em meio de ágar de quitina coloidal. A atividade quitinolítica máxima, ou seja, 301,55 U / ml, foi exibida pelo isolado JF70 quando cultivado em quitina extraída contendo carbono e nitrogênio. O estudo mostrou que resíduos de caranguejos azuis podem ser utilizados para extração de quitina e isolamento de bactérias quitinolíticas que podem ser usadas para degradar resíduos de quitina, resolver a poluição ambiental e também para fins industriais.

Extraction of chitin from edible crab shells of Callinectes sapidus and comparison with market purchased chitin / Extração de quitina de cascas de caranguejo comestíveis de Callinectes sapidus e comparação com quitina adquirida no mercado

Chitin and its derived products have immense economic value due to their vital role in various biological activities as well as biomedical and industrial application. Insects, microorganism and crustaceans are the main supply of chitin but the crustaceans shell like shrimp, krill, lobsters and crabs are the main commercial sources. Chitin content of an individual varies depending on the structures possessing the polymer and the species. In this study edible crabs shells (Callinectes sapidus) were demineralized and deproteinized resulting in 13.8% (dry weight) chitin recovery from chitin wastes. FTIR and XRD analyses of the experimental crude as well as purified chitins revealed that both were much comparable to the commercially purchased controls. The acid pretreatment ceded 54g of colloidal chitin that resulted in 1080% of the crude chitin. The colloidal chitin was exploited for isolation of eighty five chitinolytic bacterial isolates from different sources. Zone of clearance was displayed by the thirty five isolates (41.17%) succeeding their growth at pH 7 on colloidal chitin agar medium. Maximum chitinolytic activity i.e. 301.55 U/ml was exhibited by isolate JF70 when cultivated in extracted chitin containing both carbon and nitrogen. The study showed wastes of blue crabs can be utilized for extraction of chitin and isolation of chitinolytic bacteria that can be used to degrade chitin waste, resolve environmental pollution as well as industrial purpose.(AU)

A quitina e seus produtos derivados têm imenso valor econômico devido ao seu papel vital em várias atividades biológicas, bem como em aplicações biomédicas e industriais. Insetos, microrganismos e crustáceos são o principal suprimento de quitina, mas a casca dos crustáceos como camarão, krill, lagosta e caranguejo são as principais fontes comerciais. O conteúdo de quitina de um indivíduo varia dependendo das estruturas que possuem o polímero e da espécie. Neste estudo, as cascas de caranguejos comestíveis (Callinectes sapidus) foram desmineralizadas e desproteinizadas, resultando em 13,8% (peso seco) de recuperação de quitina a partir de resíduos de quitina. As análises de FTIR e XRD do bruto experimental, bem como das quitinas purificadas, revelaram que ambas eram muito comparáveis aos controles adquiridos comercialmente. O pré-tratamento com ácido cedeu 54 g de quitina coloidal que resultou em 1.080% da quitina bruta. A quitina coloidal foi analisada para isolamento de 85 isolados bacterianos quitinolíticos de diferentes fontes. A zona de eliminação foi exibida pelos 35 isolados (41,17%) que sucederam seu crescimento a pH 7 em meio de ágar de quitina coloidal. A atividade quitinolítica máxima, ou seja, 301,55 U / ml, foi exibida pelo isolado JF70 quando cultivado em quitina extraída contendo carbono e nitrogênio. O estudo mostrou que resíduos de caranguejos azuis podem ser utilizados para extração de quitina e isolamento de bactérias quitinolíticas que podem ser usadas para degradar resíduos de quitina, resolver a poluição ambiental e também para fins industriais.(AU)

Characterization of the antagonism of the mycorrhizal fungus Waitea circinata against Magnaporthe oryzae, Cochliobolus miyabeanus, Monographella albescens and Sarocladium oryzaerice pathogens / Caracterização do antagonismo do fungo micorrízico Waitea circinata contra os patógenos do arroz Magnaporthe oryzae, Cochliobolus miyabeanus, Monographella albescens e Sarocladium oryzae

Rice production is affected by important pathogens such as Magnaporthe oryzae, Cochliobolus miyabeanus, Monographella albescens and Sarocladium oryzae, and orchid mycorrhizal fungi can contribute to the biocontrol of these diseases. The aim of this study was to characterize the antagonism mechanisms of W. circinata against rice pathogens. The indoleacetic acid (IAA) and lytic enzymes of W. circinata were quantified. The effectiveness of the bioagent and its metabolites was assessed in vitro. Antagonism in vivo against rice blast was also investigated. Waitea circinata produced IAA (2.3 µg ml¹), cellulase and polyphenol oxidase in a qualitative test. Glucanase, chitinase and protease were also produced in culture with cell walls and in co-culture with pathogens to explain antibiosis. W. circinata acts on direct antagonism by antibiosis and volatile metabolites. Mycelial suspension reduced M. oryzae conidial germination, appressorium formation, and rice blast by 61, 82 and 84%, respectively. W. circinata, a unique bioagent, controls four rice pathogens from mechanisms of parasitism and antibiosis. The results could contribute to new formulations containing this fungus, enzymes as well as its volatile metabolites.

A produção de arroz é afetada por patógenos importantes como Magnaporthe oryzae, Cochliobolus miyabeanus, Monographella albescens e Sarocladium oryzae, e fungos micorrízicos de orquídeas podem contribuir para o biocontrole dessas doenças. O objetivo deste estudo foi caracterizar os mecanismos de antagonismo de W. circinata contra patógenos do arroz. O ácido indolacético (AIA) e as enzimas líticas de W. circinata foram quantificadas. A eficácia do bioagente e seus metabólitos foi avaliada in vitro. O antagonismo in vivo contra a brusone do arroz também foi investigado. Waitea circinata produziu AIA (2,3 µg ml¹), celulase e polifenol oxidase em teste qualitativo. Glucanase, quitinase e protease também foram produzidas em cultura com paredes celulares e em co-cultura com patógenos para explicar a antibiose. W. circinata atua no antagonismo direto por antibiose e metabólitos voláteis. A suspensão micelial reduziu a germinação de conídios de M. oryzae, a formação de apressórios e a brusone do arroz em 61, 82 e 84%, respectivamente. W. circinata, um bioagente único, controla quatro patógenos do arroz a partir de mecanismos de parasitismo e antibiose. Os resultados podem contribuir para novas formulações contendo este fungo, enzimas, bem como seus metabólitos voláteis.

Acetoine and chitinase productionby native rizobacteria from western Paraná / Produção de acetoína e quitinase por rizobactérias nativas do oeste do Paraná

The objective of this study was to investigate28 strains of native rhizobacteria from the west region of Paraná, evaluating the acetoin and chitinase production capacity, because of their role in biocontrol. The bacteria isolates were submitted to the modified Voges-Proskauer (VP) assayin Clark & Lubs liquid medium for glucose fermentation. Metabolite production was evaluated in a spectrophotometer ,and it showed a wide variation in concentrations (0,476to1,865) for different isolates. Strains 241, 320, 326, and 273showedhighervaluesthan the others tested. According to positive results in the qualitative test of VP, 11 isolates were chosen for the tests in minimal medium containing chitin as the only source of carbon. Isolates that presented the degradation halo formation were considered as chitinolytic bacteria, evidencing chitinase activity. Among these strains, two belonged to the genus Bacillus spp. (56 and 121) and two to the genus Enterobacter spp. (292 and 151). Therefore, the present work was able to identify native strains with potential for biocontrol studies allowing toc ontinue investigations of other metabolites produced by those bacteria in this collection regarding plant protection.

O objetivo deste estudo foi investigar 28 cepas de rizobactérias nativas da região oeste do Paraná, avaliando a capacidade de produção de acetoína e quitinase, devido ao seu papel no biocontrole. Os isolados de bactérias foram submetidos ao ensaio Voges-Proskauer (VP) modificado em meio líquido Clark & Lubs para fermentação de glicose. A produção de metabólitos foi avaliada em espectrofotômetro e apresentou grande variação nas concentrações (0,476 a 1,865) para os diferentes isolados. As estirpes 241, 320,326 e 273 apresentaram valores superiores aos das demais testadas. De acordo com os resultados positivos no teste qualitativo de VP, 11 isolados foram escolhidos para os testes em meio mínimo contendo quitina como única fonte de carbono. Isolados que apresentaram formação de halo de degradação foram consideradas bactérias quitinolíticas, evidenciando atividade quitinase. Dentre essas cepas, duas pertenciam ao gênero Bacillus spp. (56 e 121) e dois para o gênero Enterobacter spp. (292 e 151). Portanto, o presente trabalho foi capaz de identificar cepas nativas com potencial para estudos de biocontrole permitindo continuar as investigações de outros metabólitos produzidos por essas bactérias nesta coleção no que diz respeito à proteção de plantas.

Acetoine and chitinase productionby native rizobacteria from western Paraná / Produção de acetoína e quitinase por rizobactérias nativas do oeste do Paraná

The objective of this study was to investigate28 strains of native rhizobacteria from the west region of Paraná, evaluating the acetoin and chitinase production capacity, because of their role in biocontrol. The bacteria isolates were submitted to the modified Voges-Proskauer (VP) assayin Clark & Lubs liquid medium for glucose fermentation. Metabolite production was evaluated in a spectrophotometer ,and it showed a wide variation in concentrations (0,476to1,865) for different isolates. Strains 241, 320, 326, and 273showedhighervaluesthan the others tested. According to positive results in the qualitative test of VP, 11 isolates were chosen for the tests in minimal medium containing chitin as the only source of carbon. Isolates that presented the degradation halo formation were considered as chitinolytic bacteria, evidencing chitinase activity. Among these strains, two belonged to the genus Bacillus spp. (56 and 121) and two to the genus Enterobacter spp. (292 and 151). Therefore, the present work was able to identify native strains with potential for biocontrol studies allowing toc ontinue investigations of other metabolites produced by those bacteria in this collection regarding plant protection.(AU)

O objetivo deste estudo foi investigar 28 cepas de rizobactérias nativas da região oeste do Paraná, avaliando a capacidade de produção de acetoína e quitinase, devido ao seu papel no biocontrole. Os isolados de bactérias foram submetidos ao ensaio Voges-Proskauer (VP) modificado em meio líquido Clark & Lubs para fermentação de glicose. A produção de metabólitos foi avaliada em espectrofotômetro e apresentou grande variação nas concentrações (0,476 a 1,865) para os diferentes isolados. As estirpes 241, 320,326 e 273 apresentaram valores superiores aos das demais testadas. De acordo com os resultados positivos no teste qualitativo de VP, 11 isolados foram escolhidos para os testes em meio mínimo contendo quitina como única fonte de carbono. Isolados que apresentaram formação de halo de degradação foram consideradas bactérias quitinolíticas, evidenciando atividade quitinase. Dentre essas cepas, duas pertenciam ao gênero Bacillus spp. (56 e 121) e dois para o gênero Enterobacter spp. (292 e 151). Portanto, o presente trabalho foi capaz de identificar cepas nativas com potencial para estudos de biocontrole permitindo continuar as investigações de outros metabólitos produzidos por essas bactérias nesta coleção no que diz respeito à proteção de plantas.(AU)

Role of Synadenium grantii latex proteases in nematicidal activity on Meloidogyne incognita and Panagrellus redivivus / Papel das proteases do látex de Synadenium grantii na atividade nematicida sobre Meloidogyne incognita e Panagrellus redivivus

Synadenium grantii is a Euphorbiaceae plant commonly found in Brazil, known as Janaúba or Leitosinha, whose latex is traditionally used for several purposes. However, it is not known whether the nematicidal action of this plant latex occurs due to the action of proteases. The present work aims to evaluate the nematicidal activity of proteases from Synadenium grantii latex on Meloidogyne incognita and Panagrellus redivivus. S. grantii latex used in the present study was collected from specimens found in Universidade Federal de Viçosa, Viçosa, Minas Gerais, Brazil. The drained latex was collected in Eppendorf microtubes and immediately stored on ice at 4 °C. After this extraction, the latex was frozen (-20 °C) during 2 hours, thawed at room temperature (25 °C) and centrifuged at 10,000 g at 4 °C for 30 minutes to remove larger particles and concentrate the proteases. After the centrifugation, assays of enzymatic activity were performed in order to know in which of the phases the enzymes were found. S. grantii latex presented protease, but no chitinase activity. The results show that there was a significant difference (p 0.01) between the treated and control groups, with 100% mortality of Meloidogyne incognita and 72% average mortality of Panagrellus redivivus. In addition, it was demonstrated that the nematicidal action occurred due to the action of the proteases, since the control was only differentiated from the treatment by the presence of the enzymes with biological activity.(AU)

Synadenium grantii é uma planta Euphorbiaceae comumente encontrada no Brasil, conhecida como Janaúba ou Leitosinha, e tem seu látex usado tradicionalmente para diferentes propósitos. Entretanto, não se conhece se a atividade nematicida da planta ocorre devido à ação de proteases. O presente trabalho tem como objetivo avaliar a atividade nematicida das proteases do látex de Synadenium grantii sobre Meloidogyne incognita e Panagrellus redivivus. O látex de S. grantii utilizado no presente trabalho foi coletado a partir de espécimes encontradas na Universidade Federal de Viçosa, Viçosa, Minas Gerais, Brazil. O látex foi coletado em microtubos Eppendorf e imediatamente armazenado em gelo a 4 °C. Após esta extração, o látex foi congelado (-20 °C) durante 2 horas, descongelado à temperatura ambiente (25 °C) e centrifugado a 10000 g a 4 °C durante 30 minutos para a remoção de partículas e concentração das proteases. Após a centrifugação, foram realizados ensaios de atividade enzimática para saber em qual das fases as enzimas foram encontradas. O látex de S. grantii apresentou atividade de protease, mas nenhuma atividade de quitinase. Os resultados mostram que houve diferença significativa (p 0,01) entre os grupos tratados e controle, com 100% de mortalidade de Meloidogyne incognita e 72% de mortalidade média de Panagrellus redivivus. Além disso, foi demonstrado que a ação nematicida ocorreu devido à ação das proteases, uma vez que o grupo controle só foi diferenciado do tratamento pela presença das enzimas com atividade biológica.(AU)

The potential of plant and fungal proteins in the control of gastrointestinal nematodes from animals / Potencial de proteínas de plantas e fungos no controle de nematoides gastrintestinais de animais

Gastrointestinal nematode infection is an important cause of high economic losses in livestock production. Nematode control based on a synthetic chemical approach is considered unsustainable due to the increasing incidence of anthelmintic resistance. Control alternatives such as the use of natural products are therefore becoming relevant from an environmental and economic point of view. Proteins are macromolecules with various properties that can be obtained from a wide range of organisms, including plants and fungi. Proteins belonging to different classes have shown great potential for the control of nematodes. The action of proteins can occur at specific stages of the nematode life cycle, depending on the composition of the external layers of the nematode body and the active site of the protein. Advances in biotechnology have resulted in the emergence of numerous protein and peptide therapeutics; however, few have been discussed with a focus on the control of animal nematodes. Here, we discuss the use of exogenous proteins and peptides in the control of gastrointestinal.(AU)

A infecção por nematoides gastrintestinais é uma importante causa de grandes perdas econômicas na pecuária. O controle de nematoides com compostos químicos sintéticos é considerado insustentável devido ao aumento da resistência anti-helmíntica. Alternativas de controle, como o uso de produtos naturais, estão se tornando relevantes do ponto de vista ambiental e econômico. As proteínas são macromoléculas com várias propriedades que podem ser obtidas de uma ampla gama de organismos, incluindo plantas e fungos. Proteínas pertencentes a diferentes classes têm mostrado grande potencial para o controle de nematoides. A ação das proteínas pode ocorrer em estágios específicos do ciclo de vida do nematoide, dependendo da composição das camadas externas do parasito e do sítio ativo da proteína. Avanços na biotecnologia resultaram no surgimento de numerosas terapias de proteínas e peptídeos; no entanto, pouco foi discutido com foco no controle de nematoides parasitos de animais. Na presente revisão foi discutido o uso de proteínas exógenas e peptídeos no controle de nematoides gastrintestinais, os mecanismos sugeridos de ação, e os desafios e perspectivas para o uso dessas biomoléculas como uma classe de anti-helmínticos.(AU)

Role of Synadenium grantii latex proteases in nematicidal activity on Meloidogyne incognita and Panagrellus redivivus

Abstract Synadenium grantii is a Euphorbiaceae plant commonly found in Brazil, known as Janaúba or Leitosinha, whose latex is traditionally used for several purposes. However, it is not known whether the nematicidal action of this plant latex occurs due to the action of proteases. The present work aims to evaluate the nematicidal activity of proteases from Synadenium grantii latex on Meloidogyne incognita and Panagrellus redivivus. S. grantii latex used in the present study was collected from specimens found in Universidade Federal de Viçosa, Viçosa, Minas Gerais, Brazil. The drained latex was collected in Eppendorf microtubes and immediately stored on ice at 4 °C. After this extraction, the latex was frozen (-20 °C) during 2 hours, thawed at room temperature (25 °C) and centrifuged at 10,000 g at 4 °C for 30 minutes to remove larger particles and concentrate the proteases. After the centrifugation, assays of enzymatic activity were performed in order to know in which of the phases the enzymes were found. S. grantii latex presented protease, but no chitinase activity. The results show that there was a significant difference (p 0.01) between the treated and control groups, with 100% mortality of Meloidogyne incognita and 72% average mortality of Panagrellus redivivus. In addition, it was demonstrated that the nematicidal action occurred due to the action of the proteases, since the control was only differentiated from the treatment by the presence of the enzymes with biological activity.

Resumo Synadenium grantii é uma planta Euphorbiaceae comumente encontrada no Brasil, conhecida como Janaúba ou Leitosinha, e tem seu látex usado tradicionalmente para diferentes propósitos. Entretanto, não se conhece se a atividade nematicida da planta ocorre devido à ação de proteases. O presente trabalho tem como objetivo avaliar a atividade nematicida das proteases do látex de Synadenium grantii sobre Meloidogyne incognita e Panagrellus redivivus. O látex de S. grantii utilizado no presente trabalho foi coletado a partir de espécimes encontradas na Universidade Federal de Viçosa, Viçosa, Minas Gerais, Brazil. O látex foi coletado em microtubos Eppendorf e imediatamente armazenado em gelo a 4 °C. Após esta extração, o látex foi congelado (-20 °C) durante 2 horas, descongelado à temperatura ambiente (25 °C) e centrifugado a 10000 g a 4 °C durante 30 minutos para a remoção de partículas e concentração das proteases. Após a centrifugação, foram realizados ensaios de atividade enzimática para saber em qual das fases as enzimas foram encontradas. O látex de S. grantii apresentou atividade de protease, mas nenhuma atividade de quitinase. Os resultados mostram que houve diferença significativa (p 0,01) entre os grupos tratados e controle, com 100% de mortalidade de Meloidogyne incognita e 72% de mortalidade média de Panagrellus redivivus. Além disso, foi demonstrado que a ação nematicida ocorreu devido à ação das proteases, uma vez que o grupo controle só foi diferenciado do tratamento pela presença das enzimas com atividade biológica.

Role of Synadenium grantii latex proteases in nematicidal activity on Meloidogyne incognita and Panagrellus redivivus

Abstract Synadenium grantii is a Euphorbiaceae plant commonly found in Brazil, known as Janaúba or Leitosinha, whose latex is traditionally used for several purposes. However, it is not known whether the nematicidal action of this plant latex occurs due to the action of proteases. The present work aims to evaluate the nematicidal activity of proteases from Synadenium grantii latex on Meloidogyne incognita and Panagrellus redivivus. S. grantii latex used in the present study was collected from specimens found in Universidade Federal de Viçosa, Viçosa, Minas Gerais, Brazil. The drained latex was collected in Eppendorf microtubes and immediately stored on ice at 4 °C. After this extraction, the latex was frozen (-20 °C) during 2 hours, thawed at room temperature (25 °C) and centrifuged at 10,000 g at 4 °C for 30 minutes to remove larger particles and concentrate the proteases. After the centrifugation, assays of enzymatic activity were performed in order to know in which of the phases the enzymes were found. S. grantii latex presented protease, but no chitinase activity. The results show that there was a significant difference (p 0.01) between the treated and control groups, with 100% mortality of Meloidogyne incognita and 72% average mortality of Panagrellus redivivus. In addition, it was demonstrated that the nematicidal action occurred due to the action of the proteases, since the control was only differentiated from the treatment by the presence of the enzymes with biological activity.

Resumo Synadenium grantii é uma planta Euphorbiaceae comumente encontrada no Brasil, conhecida como Janaúba ou Leitosinha, e tem seu látex usado tradicionalmente para diferentes propósitos. Entretanto, não se conhece se a atividade nematicida da planta ocorre devido à ação de proteases. O presente trabalho tem como objetivo avaliar a atividade nematicida das proteases do látex de Synadenium grantii sobre Meloidogyne incognita e Panagrellus redivivus. O látex de S. grantii utilizado no presente trabalho foi coletado a partir de espécimes encontradas na Universidade Federal de Viçosa, Viçosa, Minas Gerais, Brazil. O látex foi coletado em microtubos Eppendorf e imediatamente armazenado em gelo a 4 °C. Após esta extração, o látex foi congelado (-20 °C) durante 2 horas, descongelado à temperatura ambiente (25 °C) e centrifugado a 10000 g a 4 °C durante 30 minutos para a remoção de partículas e concentração das proteases. Após a centrifugação, foram realizados ensaios de atividade enzimática para saber em qual das fases as enzimas foram encontradas. O látex de S. grantii apresentou atividade de protease, mas nenhuma atividade de quitinase. Os resultados mostram que houve diferença significativa (p 0,01) entre os grupos tratados e controle, com 100% de mortalidade de Meloidogyne incognita e 72% de mortalidade média de Panagrellus redivivus. Além disso, foi demonstrado que a ação nematicida ocorreu devido à ação das proteases, uma vez que o grupo controle só foi diferenciado do tratamento pela presença das enzimas com atividade biológica.

Enzymatic comparison and mortality of Beauveria bassiana against cabbage caterpillar Pieris brassicae LINN

Beauveria bassiana, an entomopathogenic fungus, is the alternative biocontrol agent exploited against major economic crop pests. Pieris brassicae L. is an emerging pest of the Brassicaceae family. Therefore, in the present study, fungal isolates of Beauveria bassiana, viz. MTCC 2028, MTCC 4495, MTCC 6291, and NBAII-11, were evaluated for their virulence against third instar larvae of P. brassicae. Among all these fungal isolates, maximum mortality (86.66%) was recorded in B. bassiana MTCC 4495 at higher concentration of spores (109 conidia/ml), and the minimum mortality (30.00%) was recorded in B. bassiana MTCC 6291 at a lower concentration (107 conidia/ml) after ten days of treatment. The extracellular cuticle-degrading enzyme activities of fungal isolates were measured. Variability was observed both in the pattern of enzyme secretion and the level of enzyme activities among various fungal isolates. B. bassiana MTCC 4495 recorded the maximum mean chitinase (0.51 U/ml), protease (1.12 U/ml), and lipase activities (1.36 U/ml). The minimum mean chitinase and protease activities (0.37 and 0.91 U/ml, respectively) were recorded in B. bassiana MTCC 6291. The minimum mean lipase activity (1.04 U/ml) was recorded in B. bassiana NBAII-11. Our studies revealed B. bassiana MTCC 4495 as the most pathogenic isolate against P. brassicae, which also recorded maximum extracellular enzyme activities, suggesting the possible roles of extracellular enzymes in the pathogenicity of B. bassiana against P. brassicae.(AU)

INSECT MEAL INCLUSION AND NUTRITIONAL PROGRAMMING AFFECT THE DIGESTIVE PROCESS AND GROWTH PERFORMANCE OF NILE TILAPIA (Oreochromis niloticus)

A presente tese trata de questões com alta demanda de conhecimento em quatro manuscritos. No primeiro manuscrito, dois ensaios avaliaram os efeitos da alimentação de alevinos de tilápia com farinha de Zophobas morio (ZM) sobre (i) a sobrevivência dos alevinos, desempenho produtivo, utilização do alimento e composição da carcaça e, (ii) desempenho produtivo, utilização do alimento, composição da carcaça e filé, nos juvenis alimentados com dietas contendo crescentes inclusões de ZM. Alimentar alevinos com ZM aumentou a sobrevivência, ganho de peso, eficiência na utilização do alimento além do conteúdo de proteína, energia e lipídios na carcaça. Juvenis alimentados com ZM durante a fase de alevinos tiveram melhor consumo de ração, taxa de conversão alimentar e peso de carcaça quando alimentados com a dieta contendo 300g/kg de ZM. No segundo manuscrito, três ensaios avaliaram a influencia da programação nutricional na capacidade de juvenis de tilápia em utilizar dietas contendo crescente concentração de farinha de Z. morio. Foram avaliados a atividade das enzimas digestivas e quitinase, histomorfologia do intestino e digestibilidade aparente das dietas. Os níveis crescentes de ZM afetam positivamente a atividade da quitinase. A introdução de ZM durante a fase de alevinos melhorou as atividades de tripsina e quimiotripsina, além da digestibilidade da matéria seca de juvenis alimentados com a dieta contendo 300 g/kg de ZM. Alimentar os peixes continuamente, de alevinos a juvenis, com farinha de Z. morio, em altos níveis de inclusão, melhora a capacidade de digestiva dos peixes e a utilização da farinha de insetos, permitindo inclusões de até 300g/kg. O terceiro estudo trata-se da adequação do protocolo de determinação da atividade de quitinase para a tilápia do Nilo. Após uma série de avaliações, uma metodologia foi proposta de forma a obter adequados valores de atividade de quitinase com redução dos custos, do tempo e com maior aplicabilidade. O quarto manuscrito discute sobre o procedimento de amostragem ideal para capturar a atividade das enzimas digestivas: amilase, lipase, tripsina e quimiotripsina. Glicose plasmática, colesterol e triglicerídeos também foram avaliados. No geral, amostrar a porção anterior do intestino no intervalo entre 10 e 12 horas pós-prandias é um procedimento adequado para ser usado em ensaios enzimáticos digestivos para tilápia do Nilo.

The present thesis concerns issues with a high demand for knowledge, in four manuscripts. In the first manuscript, two trials evaluated the effects of feeding tilapia fry with Z. morio meal on (i) fry survival, growth performance, feed utilization, and carcass composition; and on juveniles (ii) growth performance, feed utilization, carcass and fillet composition, after fed increasing Z. morio meal (ZM) diets. Feeding fry with ZM increased survival, weight gain, feed utilization and carcass protein, energy and lipids. Juveniles fed with ZM during fry stage had better feed intake, feed conversion ratio and carcass weight when fed with a diet containing 300g/kg of ZM. In the second manuscript, three trials evaluated the influence of nutritional programming on the ability of tilapia juveniles to use diets containing an increasing concentration of Z. morio meal. The activity of digestive enzymes and chitinase, histomorphology of the intestine and apparent digestibility of the diets were evaluated. Increasing levels of ZM positively affect chitinase activity. The introduction of ZM during the fry phase improved the activities of trypsin and chymotrypsin, in addition to the digestibility of dry matter of juveniles fed with a diet containing 300 g/kg of ZM. Feeding fish continuously, from fry to juveniles, with Z. morio meal at high levels of inclusion improves the digestive capacity of fish and the use of insect meal, allowing inclusions of up to 300g/kg. The third study deals with the adequacy of the chitinase activity determination protocol for Nile tilapia. After a series of evaluations, a methodology was proposed to obtain adequate chitinase activity values for tilapia with reduced costs, time and with greater applicability. The fourth study discussed the ideal sampling procedure to capture the activity of the digestive enzymes: amylase, lipase, trypsin, and chymotrypsin at their best. Plasmatic glucose, cholesterol, and triglycerides were also evaluated. Overall, to sample the anterior portion of the intestine into the interval between 10- and 12-hours post-feeding is an adequate sampling procedure to be used in digestive enzymatic assays for Nile tilapia.

Cultural conditions on the production of extracellular enzymes by Trichoderma isolates from tobacco rhizosphere

Twelve isolates of Trichoderma spp. isolated from tobacco rhizosphere were evaluated for their ability to produce chitinase and -1,3-glucanase extracellular hydrolytic enzymes. Isolates ThJt1 and TvHt2, out of 12 isolates, produced maximum activities of chitinase and -1,3-glucanase, respectively. In vitro production of chitinase and -1,3-glucanase by isolates ThJt1 and TvHt2 was tested under different cultural conditions. The enzyme activities were significantly influenced by acidic pH and the optimum temperature was 30 °C. The chitin and cell walls of Sclerotium rolfsii, as carbon sources, supported the maximum and significantly higher chitinase activity by both isolates. The chitinase activity of isolate ThJt1 was suppressed significantly by fructose (80.28%), followed by glucose (77.42%), whereas the -1,3-glucanase activity of ThJt1 and both enzymes of isolate TvHt2 were significantly suppressed by fructose, followed by sucrose. Ammonium nitrate as nitrogen source supported the maximum activity of chitinase in both isolates, whereas urea was a poor nitrogen source. Production of both enzymes by the isolates was significantly influenced by the cultural conditions. Thus, the isolates ThJt1 and TvHt2 showed higher levels of chitinase and -1,3-glucanase activities and were capable of hydrolyzing the mycelium of S. rolfsii infecting tobacco. These organisms can be used therefore for assessment of their synergism in biomass production and biocontrol efficacy and for their field biocontrol ability against S. rolfsii and Pythium aphanidermatum infecting tobacco. (AU)

Thermostable chitinase from Cohnella sp. A01: isolation and product optimization

Twelve bacterial strains isolated from shrimp farming ponds were screened for their growth activity on chitin as the sole carbon source. The highly chitinolytic bacterial strain was detected by qualitative cup plate assay and tentatively identified to be Cohnella sp. A01 based on 16S rDNA sequencing and by matching the key morphological, physiological, and biochemical characteristics. The cultivation of Cohnella sp. A01 in the suitable liquid medium resulted in the production of high levels of enzyme. The colloidal chitin, peptone, and K2HPO4 represented the best carbon, nitrogen, and phosphorus sources, respectively. Enzyme production by Cohnella sp. A01 was optimized by the Taguchi method. Our results demonstrated that inoculation amount and temperature of incubation were the most significant factors influencing chitinase production. From the tested values, the best pH/temperature was obtained at pH 5 and 70 °C, with Km and V max values of chitinase to be 5.6 mg/mL and 0.87 µmol/min, respectively. Ag+, Co2+, iodoacetamide, and iodoacetic acid inhibited the enzyme activity, whereas Mn2+, Cu2+, Tweens (20 and 80), Triton X-100, and EDTA increased the same. In addition, the study of the morphological alteration of chitin treated by enzyme by SEM revealed cracks and pores on the chitin surface, indicating a potential application of this enzyme in several industries.(AU)

Salicylic acid in the induction of resistance to beet seedling damping-off and antifungal activity against Fusarium sp., in vitro / Ácido salicílico na indução de resistência ao tombamento de plântulas de beterraba e atividade antifúngica contra Fusarium sp., in vitro

The damping off is the main disease that affects the beet crop during the seedling production. The aim of this study was to evaluate different salicylic acid (SA) concentrations for resistance induction against damping-off in beet seedling and its antifungal activity against Fusarium sp., in vitro condition. Treatment of beet seed was with SA solution by immersion during 5 minutes in the 0.5, 1.0, 1.5 and 2.0 mM concentrations and control (distilled water). It was used four replications with 20 cells by experimental unit. The experiment was carried out for 14 days in cultivate chamber with temperature (23 oC ± 2C), lighting (12 hours photoperiod) and humidity (70% ± 10%) controlled. After this time, the germination, damping off incidence, seedling length and fresh mass matter weight were evaluated. It was evaluated also in the seedling tissue the phenylalanine ammonia-lyase (PAL), β-1.3 glucanase and chitinase level enzymes. In the in vitro the SA was putted in PDA (potato-dextrose-agar) medium, where the Fusarium sp. mycelial growth was evaluated. The SA applied for seeds treatment didnt had effect significant on damping off of beet seedlings, but it induced the activity of β-1.3 glucanase enzyme, it being this higher in nine times when compared the treatment control. The SA acted in the Fusarium sp. in vitro control with fungitoxic action, suppressed mycelial growth in 28% if compared to control.(AU)

O tombamento de plântulas é a principal doença que afeta a cultura da beterraba no processo de produção de mudas. Objetivou-se neste trabalho avaliar diferentes concentrações de ácido salicílico (AS) na indução de resistência ao tombamento de plântulas de beterraba e a atividade antifúngica contra Fusarium sp., in vitro. O tratamento das sementes de beterraba foi realizado com imersão em solução de AS nas concentrações de 0,5; 1,0; 1,5 e 2,0 mM e a testemunha (água destilada). Em seguida foram semeadas em substrato previamente esterilizado e inoculado com Fusarium sp. O experimento foi conduzido por 14 dias em câmara de cultivo com controle de temperatura (23 oC ±2 C), luminosidade (fotoperíodo de 12 h) e umidade (70% ± 10%). Após esse período foram avaliados a germinação das sementes, incidência de tombamento, comprimento de plântula e massa da matéria fresca. Foi também avaliada nos tecidos das plântulas a atividade das enzimas fenilalanina amônia-liase (FAL), β-1,3- glucanase e quitinase. No experimento in vitro o AS foi incorporado ao meio BDA (batata-dextrose e ágar) e avaliado o crescimento micelial de Fusarium sp. A aplicação de AS em tratamento de sementes não atuou significativamente sobre o tombamento de plântulas de beterraba, mas induziu a atividade da enzima β-1,3-glucanase, sendo esta aumentada em nove vezes em relação à testemunha. O AS atuou no controle de Fusarium sp, in vitro com ação fungitóxica, com supressão do crescimento micelial em 28% se comparado à testemunha.(AU)

Determination of lytic enzyme activities of indigenous Trichoderma isolates from Pakistan

Abstract This study investigated lytic enzyme activities in three indigenous Trichoderma strains namely, Trichoderma asperellum, Trichoderma harzianum and Trichoderma sp. Native Trichoderma strains and a virulent strain of Rhizoctonia solani isolated from infected bean plants were also included in the study. Enzyme activities were determined by measuring sugar reduction by dinitrosalicylic acid (DNS) method using suitable substrates. The antagonists were cultured in minimal salt medium with the following modifications: medium A (1 g of glucose), medium B (0.5 g of glucose + 0.5 g of deactivated R. solani mycelia), medium C (1.0 g of deactivated respective antagonist mycelium) and medium D (1 g of deactivated R. solani mycelia). T asperellum showed presence of higher amounts of chitinases, β-1, 3-glucanases and xylanases in extracellular protein extracts from medium D as compared to medium A. While, the higher activities of glucosidases and endoglucanses were shown in medium D extracts by T. harzianum. β-glucosidase activities were lower compared with other enzymes; however, activities of the extracts of medium D were significantly different. T. asperellum exhibited maximum inhibition (97.7%). On the other hand, Trichoderma sp. did not show any effect on mycelia growth of R. solani on crude extract.(AU)

Anthelmintic activity of Leucaena leucocephala protein extracts on Haemonchus contortus / Atividade anti-helmíntica de extratos proteicos de Leucaena leucocephala sobre Haemonchus contortus

The objective of this study was to evaluate the effects of protein extracts obtained from the plant Leucaena leucocephala on the nematode parasite Haemonchus contortus. The seeds, shell and cotyledon of L. leucocephala were separated and their proteins extracted using a sodium phosphate buffer, and named as TE (total seed extract), SE (shell extract) and CE (cotyledon extract). Soluble protein content, protease, protease inhibitory and chitinase activity assays were performed. Exsheathment inhibition of H. contortus larvae were performed at concentrations of 0.6 mg mL–1, and egg hatch assays were conducted at protein concentrations of 0.8, 0.4, 0.2, 0.1 and 0.05 mg mL–1. The effective concentration for 50% hatching inhibition (EC50) was estimated by probit. Different proportions of soluble proteins, protease and chitinase were found in TE and CE. Protease inhibitory activity was detected in all extracts. The EC50 of the CE and TE extracts were 0.48 and 0.33 mg mL–1, respectively. No ovicidal effects on H. contortus were detected in SE extracts, and none of the protein extracts demonstrated larvicidal effects on H. contortus. We therefore conclude that protein extracts of L. leucocephala had a detrimental effect on nematode eggs, which can be correlated with the high protease and chitinase activity of these extracts.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade anti-helmíntica de extratos proteicos de leucena (Leucaena leucocephala) sobre Haemonchus contortus. As sementes, as cascas e os cotilédones foram moídos separadamente e as proteínas extraídas com tampão fosfato de sódio e denominados: TE (extrato total), SE (extrato casca) e CE (extrato cotilédone). O teor de proteínas, atividade proteolítica, inibitória de protease e quitinolítica dos extratos foram verificados, além da ação sobre a eclosão de ovos e desembainhamento larvar de H. contortus. A concentração efetiva para inibição de 50% da eclosão dos ovos (EC50) foi calculada através do probit. Foi demonstrado que TE e CE possuem, em diferentes proporções, proteínas solúveis, protease e quitinase. Atividade inibitória de protease foi encontrada em todos os extratos. A EC50 dos extratos CE e TE foram 0,48 e 0,33 mg de proteína mL–1, respectivamente. O extrato SE não apresentou atividade sobre a eclosão dos ovos. Os extratos proteicos não apresentaram efeito larvicida sobre H. contortus. Conclui-se que a ação de extratos proteicos de L. leucocephala afetam negativamente a eclodibilidade dos ovos, correlacionando-se com a alta atividade de protease e quitinase dos extratos testados.(AU)

Explosão oxidativa e atividade de enzimas relacionadas à defesa em interações compatíveis e incompatíveis de tomateiro-Alternaria solani / Oxidative burst and the activity of defense-related enzymes in compatible and incompatible tomato-Alternaria solani interactions

A produção de espécies reativas de oxigênio (EROs), a resposta de hipersensibilidade (HR) e a atividade das enzimas peroxidase de guaiacol, catalase, polifenoloxidase, B-1,3-glucanase e quitinase foram estudados em folhas de tomateiro resistente [CNPH 1287 (Solanum habrochaites syn. Lycopersicon hirsutum)] e suscetível [Santa Cruz Kada (S. lycopersicum syn. L. esculentum)] inoculadas com Alternaria solani. Essas folhas foram coletadas no momento da inoculação e às 4, 8, 12, 24, 48, 72, 96 e 120 h pós-inoculação. Os conídios germinaram igualmente na superfície foliar de ambos os genótipos sem orientação definida no crescimento dos tubos germinativos. A frequência de lesões causadas por A. solani foi menor no genótipo CNPH 1287 como consequência do menor número de apressórios formados nesse genótipo. O acúmulo de EROs foi observado em baixa frequência tanto no genótipo suscetível quanto no resistente. A HR foi observada nas células epidérmicas onde ocorreu penetração em ambos os genótipos. Os resultados deste trabalho indicam. Aumentos significativos na atividade de peroxidase de guaiacol, polifenoloxidase, B-1,3-glucanase e quitinase foram registrados no genótipo resistente. Estes resultados sugerem que, enquanto EROs e HR não parecem contribuir com a resistência de S. habrochaites frente a A. solani, as enzimas relacionadas à defesa cumprem um papel importante nas respostas de defesa deste genótipo.(AU)

The production of reactive oxygen species (ROS), hypersensitive response (HR), and the activity of the enzymes guaiacol peroxidase, catalase, polyphenol oxidase, B-1,3-glucanase and chitinase, were studied in leaves of resistant [CNPH 1287 (Solanum habrochaites syn. Lycopersicon hirsutum)] and susceptible [Santa Cruz Kada (S. lycopersicum syn. L. esculentum)] tomato genotypes inoculated with Alternaria solani. Leaves were collected at the time of inoculation and at 4, 8, 12, 24, 48, 72, 96 and 120 hours post inoculation. Conidia germination occurred equally onto the leaf surface in both genotypes and germination tubes grew without apparent orientation. Lesion frequency was lower in CNPH 1287, and it was the consequence of a lower number of appressoria formed in that genotype. ROS were observed in low frequency in both genotypes. HR was observed in penetrated epidermal host cells also in both genotypes. It seems that ROS and HR would not contribute to the resistance of S. habrochaites to A. solani in this study. The activity of guaiacol peroxidase, polyphenol oxidase, B-1,3-glucanase and chitinase was significantly increased in the resistant genotype. These results suggest that defense-related enzymes but no oxidative burst play a role in the defense response of S. habrochaites to A. solani.(AU)

AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE NEMATICIDA DE NANOPARTÍCULAS DE FUNGOS NEMATÓFAGOS NO CONTROLE IN VITRO DE LARVAS INFECTANTES DE NEMATÓIDES

A biossíntese de nanopartículas a partir de fungos nematófagos vem sendo estudada mundialmente e é uma área promissora da nanobiotecnologia. Neste estudo, realizamos a biossíntese de nanopartículas de prata (AgNPs) utilizando o fungo nematófago Duddingtonia flagrans. Foi estudado o melhor método para liofilização e ressuspensão das nanopartículas, sendo a melhor forma para liofilizá-las na rotação 12.000 rpm por 20 minutos e o melhor meio para ressuspensão foi em água ultrapura. O ensaio do MTT revelou que o IC50 da AgNP biossintetizada foi de 43,4 g/mL. Foram obtidas imagens por MET das AgNPs mostrando sua forma esférica,tamanho e monodispersão. O método de Bradford e técnicas espectroscópicas (UV-Vis, FTIR, DRX) foram utilizadas para indicar quais moléculas estão envolvidas na formação das nanopartículas, como a quitinase, explicando a ação penetrante das AgNPs biossintetizadas nos nematoides. Foi realizado o teste de atividade nematicida das AgNPs comparando-as com outras substâncias. As AgNPs obtiveram eficácia em sua ação nematicida, sendo as únicas capazes de penetrar a cutícula das larvas causando alterações tegumentares levando o parasita à morte. Dessa forma, as nanopartículas biossintetizadas são promissoras para aplicações terapêuticas de verminoses em animais e humanos.

Nanoparticle biosynthesis from nematophagous fungi has been studied worldwide and is a promising area for nanobiotechnology. In this study, we performed silver nanoparticle biosynthesis (AgNP's) using the nematophagous fungus Duddingtonia flagrans. The best method for lyophilization and resuspension of the nanoparticles was the best way to freeze dry them at 12,000 rpm for 20 minutes and the best medium for resuspension was in ultrapure water. The MTT assay revealed that the biosynthesized AgNP IC50 was 43.4 g/mL. MET images of the AgNPs were obtained showing their spherical shape, size and monodispersion. The Bradford method and spectroscopic techniques (UV-Vis, FTIR, DRX) were used to indicate which molecules are involved in the formation of nanoparticles, such as chitinase, explaining the penetrating action of biosynthesized AgNPs in the nematodes. The nematicidal activity test of the AgNPs was performed comparing them with other substances. The AgNPs obtained efficacy in their nematicidal action, being the only ones able to penetrate the cuticle of the larvae causing tegumentary changes leading the parasite to death. Thus, biosynthesized nanoparticles are promising for therapeutic applications of verminoses in animals and humans.